CN102227427B - 环丁基嘌呤衍生物、血管新生促进剂、管腔形成促进剂、神经细胞生长促进剂及药品 - Google Patents

环丁基嘌呤衍生物、血管新生促进剂、管腔形成促进剂、神经细胞生长促进剂及药品 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种化合物，其具有细胞增殖促进活性、血管新生促进活性、管腔形成促进活性、细胞迁移促进活性及神经细胞生长促进活性中的至少一种活性，是化学性质稳定的低分子物质，由于分子量低，所以吸收性高，能够廉价地稳定地供给。本发明的环丁基嘌呤衍生物、其互变异构体或立体异构体、或它们的盐、溶剂化物或水合物是下述通式(1)所示的环丁基嘌呤衍生物、其互变异构体或立体异构体、或它们的盐、溶剂化物或水合物。

Description

环丁基嘌呤衍生物、血管新生促进剂、管腔形成促进剂、神经细胞生长促进剂及药品
技术领域
本发明涉及环丁基嘌呤衍生物、血管新生促进剂、管腔形成促进剂、神经细胞生长促进剂及药品。 
背景技术
以往，已知在四元环上结合了核酸的某些衍生物具有抗病毒作用。作为前述衍生物，可列举出例如环丁基嘌呤衍生物(例如参照专利文献1～3)、在氧杂环丁烷环上结合了核酸的氧环烷菌素衍生物(例如专利文献4)等。 
另一方面，作为促进血管新生、神经细胞生长等的物质，已知有作为生物来源的生长因子的成纤维细胞生长因子(FGF)、血小板源生长因子(PD-ECGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)等。因此，在这些生长因子中，也存在被用作创伤治愈药、生发剂等的有效成分的物质。 
现有技术文献 
专利文献 
专利文献1：日本专利第2694999号公报 
专利文献2：日本专利第2577640号公报 
专利文献3：日本专利第2962494号公报 
专利文献4：日本特开平5-32691号公报 
发明内容
发明要解决的问题
然而，前述生长因子由于均为分子量15000～30000的高分子蛋白质，所以低吸收性和稳定性成为课题。因此，本发明的目的在于提供一种化合物，其具有血管新生促进活性、管腔形成促进活性及神经细胞生长促进活性中的至少一种活性，是化学性质稳定的低分子物质，由于分子量低，所以吸收性高，能够廉价地稳定地供给。 
用于解决问题的方案
本发明为下述通式(1)所示的环丁基嘌呤衍生物、其互变异构体或立体异构体、或它们的盐、溶剂化物或水合物。 
Figure BDA0000064477590000021
前述通式(1)中， 
X1为卤代基、烷基、烷硫基、硫基(硫醇基)、氨基、羟基、烷氧基、炔基或氰基， 
X2为卤代基、氨基、羟基、烷氧基、硫基(硫醇基)或烷硫基， 
X3为氢原子、卤代基或烷氧基， 
R1及R2相同或不同，分别为氢原子、卤代基、羧基、烷基、酰基、氨基甲酰基、酰氧基、羟烷基、酰氧基烷基、烷氧基烷基、卤代烷基或膦酰氧基烷基， 
X1为氨基的情况下， 
X2及X3均为卤代基，或 
X2及X3均为烷氧基，或、 
X2为羟基，X3为卤代基，并且，R1及R2均为酰氧基烷基， 
前述X1、X2、X3、R1及R2中，前述烷基、前述烷硫基、前述硫基(硫醇基)、前述羟基、前述烷氧基、前述炔基、前述氨基、前述羧基、前述酰基、前述氨基甲酰基、前述酰氧基、前述羟烷基、前述酰氧基烷基、前述烷氧基烷基及前述膦酰氧基烷基的各自的一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。 
发明的效果
为了达成前述目的，本发明人等重复进行了一系列的研究，结果发现了具有血管新生促进活性、管腔形成促进活性及神经细胞生长促进活性中的至少一种活性的、前述通式(1)所示的新型环丁基嘌呤衍生物，从而完成了本发明。本发明的环丁基嘌呤衍生物为化学性质稳定的低分子物质，由于分子量低，所以吸收性高，能够廉价地稳定地供给。并且，本发明的环丁基嘌呤衍生物能够应用于利用了血管新生促进活性、管腔形成促进活性及神经细胞生长促进活性中的至少一种活性的各种药品、准药品(quasi drug)等。 
附图说明
图1是表示实施例1及比较例1～8中的管腔形成测定结果的图表。 
图2是表示实施例1、比较例7及比较例8中的细胞增殖测定结果的图表。 
图3(A)～(F)是表示实施例1、比较例7及比较例8中的管腔形成测定结果的照片。 
图4(A)～(H)是表示实施例1、比较例7～10中的细胞迁移性测定结果的照片。 
图5(A)～(H)是表示实施例1、比较例7～10中的细胞迁移性测定结果的照片。 
图6是表示实施例1、比较例7～10中的细胞迁移性测定结果的图表。 
图7(A)是表示实施例3中的、经时性的pERK及ERK量的免疫印迹照片，图7(B)是pERK相对值的图表。 
图8是表示实施例3中的、经时性的pAkt、Akt、pJNK及pp38量的免疫印迹照片。 
图9(A)是表示本发明的实施例4中的、2-Cl-OCT.A添加浓度对pERK量的影响的免疫印迹照片，图9(B)是pERK相对值的图表。 
图10(A)是表示实施例5中的、经时性的pMEK及MEK量的免疫印迹照片，图10(B)是pMEK相对值的图表。 
图11(A)是表示实施例6中的、PD98059所导致的ERK活化抑制的免疫印迹照片，图11(B)是pERK相对值的图表。 
图12是表示本发明的实施例7中的、PD98059所导致的管腔形成抑制的管腔面积相对值的图表。 
图13(A)是表示实施例8中的、SU5416所导致的ERK活化抑制的免疫印迹照片，图13(B)是pERK相对值的图表。 
图14是表示本发明的实施例9中的、SU5416所导致的管腔形成抑制的管腔面积相对值的图表。 
图15是实施例10中的PC12细胞的显微镜照片。图15(A)是添加了PBS的PC12细胞的显微镜照片，图15(B)是添加了NGF的PC12细胞的显微镜照片，图15(C)是添加了2-Cl-C.OXT-A 50μmol/L的PC12细胞的显微镜照片，图15(D)是添加了2-Cl-C.OXT-A 100μmol/L的PC12细胞的显微镜照片。 
图16是表示实施例10中的AChE活性的测定结果的图表。 
图17是表示实施例11中的、基于兔角膜法的血管新生试验结果的照片。图17(A)是表示投与生理盐水后的结果的照片，图17(B)是表示投与2-Cl-C.OCT-A后的结果的照片。 
具体实施方式
本发明的环丁基嘌呤衍生物、其互变异构体或立体异构体、或它们的盐、溶剂化物或水合物优选的是，在前述通式(1)中，例如前述X1为氯基。 
本发明的环丁基嘌呤衍生物、其互变异构体或立体异构体、或它们的盐、溶剂化物或水合物优选的是，在前述通式(1)中，例如前述X2为氨基。 
本发明的环丁基嘌呤衍生物、其互变异构体或立体异构体、或它们的盐、溶剂化物或水合物优选的是，在前述通式(1)中，例如前述R1及R2为羟甲基。 
本发明的环丁基嘌呤衍生物、其互变异构体或立体异构体、或它们的盐、溶剂化物或水合物也可以是，在前述通式(1)中，例如前述X1为氯基，前述X2为氨基，前述R1及R2为羟甲基。 
本发明的环丁基嘌呤衍生物、其互变异构体或立体异构体、或它们的盐、溶剂化物或水合物也可以是例如6-氨基-2-氯-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤或6-氨基-2-硫代甲氧基-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤、其互变异构体或立体异构体、或它们的盐、溶剂化物或水合物。 
本发明的促进剂是包含下述通式(1′)所示的环丁基嘌呤衍生物、其互变异构体或立体异构体、或它们的盐、溶剂化物或水合物，且具有选自由血管新生促进功能、管腔形成促进功能及神经细胞生长促进功能组成的组中的至少一种功能的促进剂。 
Figure BDA0000064477590000061
前述通式(1′)中， 
X1′为卤代基、烷基、烷硫基、硫基(硫醇基)、氨基、羟基、烷氧基、炔基或氰基， 
X2′为卤代基、氨基、羟基、烷氧基、硫基(硫醇基)或烷硫基， 
X3′为氢原子、卤代基、烷基、烷硫基、氨基、羟基、烷氧基、羟苯基或氨基甲酰基， 
R1′及R2′相同或不同，分别为氢原子、卤代基、羧基、烷基、酰基、氨基甲酰基、酰氧基、羟烷基、酰氧基烷基、烷氧基烷基、卤代烷基或膦酰氧基烷基， 
X1′为氨基且X3′为氢原子的情况下，R1′及R2′为除羟烷基以外的原子或取代基， 
前述X1′、X2′、X3′、R1′及R2′中，前述烷基、前述烷硫基、前述硫基(硫醇基)、前述羟基、前述烷氧基、前述炔基、前述氨基、前述羟苯基、前述氨基甲酰基、前述羧基、前述酰基、前述酰氧基、前述羟烷基、前述酰氧基烷基、前述烷氧基烷基及前述膦酰氧基烷基的各自的一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。 
本发明的促进剂也可以是，在前述通式(1′)中，例如前述X1′为氯基。 
本发明的促进剂也可以是，在前述通式(1′)中，例如前 述X2′为氨基。 
本发明的促进剂也可以是，在前述通式(1′)中，例如前述R1′及R2′为羟甲基。 
本发明的促进剂也可以是，在前述通式(1′)中，例如前述X1′为氯基或硫代甲氧基，前述X2′为氨基，前述X3′为氢原子，前述R1′及R2′为羟甲基。 
本发明的促进剂也可以包含例如6-氨基-2-氯-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤或6-氨基-2-硫代甲氧基-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤、其互变异构体或立体异构体、或它们的盐、溶剂化物或水合物。 
本发明的药品包含选自由本发明的环丁基嘌呤衍生物、其互变异构体及立体异构体、及它们的盐、溶剂化物及水合物、以及本发明的促进剂组成的组中的至少一种物质，且具有选自由血管新生促进用、管腔形成促进用及神经细胞生长促进用组成的组中的至少一种用途。 
本发明的药品也可以是例如选自由创伤治愈药、阿尔茨海默氏病治疗药、阿尔茨海默氏病预防药、梗塞性疾病治疗药、梗塞性疾病预防药及生发剂组成的组中的至少一种。 
接着，对本发明进一步详细说明。 
本发明中，卤代基没有特别限定，例如可列举出氟基(氟原子)、氯基(氯原子)、溴基(溴原子)及碘基(碘原子)等。另外，前述卤代基是指作为取代基的卤素原子的名称。 
本发明中，作为烷基，没有特别限定，例如可列举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、叔戊基等，在烷氨基、烷氧基等结构中包含烷基的基团中也同样适用以上说明。本发明中，前述烷基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为 前述烷基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出羟基、卤代基、酰基、酰氧基、烷氧基、氨基甲酰基等。 
本发明中，作为烷硫基，没有特别限制，例如可列举出甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基等。本发明中，前述烷硫基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述烷硫基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出羟基、卤代基、酰基、酰氧基、烷氧基等。 
本发明中，硫基(硫醇基)的例如氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述硫基(硫醇基)中的取代基，没有特别限制，例如可列举出甲基、叔丁基、苄基、对甲氧基苄基、甲氧基甲基、乙酰基、特戊酰基、苯甲酰基、二甲氧基三苯甲基、单甲氧基三苯甲基、9-(9-苯基)咕吨基(pixyl group)等。 
本发明中，羟基例如也可以异构化而以氧代基(＝O)的形式存在，氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述羟基中的取代基，包括能够以酸进行脱保护的基团，没有特别限制，例如可列举出甲基、叔丁基、苄基、对甲氧基苄基、甲氧基甲基、乙酰基、特戊酰基、苯甲酰基、二甲氧基三苯甲基、单甲氧基三苯甲基、9-(9-苯基)咕吨基等。 
本发明中，作为烷氧基，没有特别限制，例如可列举出甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。本发明中，前述烷氧基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述烷氧基中的取代基，也没有特别限制，例如可列举出羟基、卤代基、酰基、酰氧基、烷氧基、氨基甲酰基等。 
本发明中，作为炔基，没有特别限制，例如可列举出下述通式(2)所示的取代基(式中的R为氢原子或者直链或支链烷基)等，具体而言，例如可列举出乙炔基、炔丙基等。本发明中，前述炔基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取 代。作为前述炔基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出羟基、卤代基、酰基、酰氧基、烷氧基等。 
R-C≡C-            (2) 
本发明中，氨基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述氨基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出甲基、乙基等烷基；乙酰基、乙基羰基等碳原子数为1～6的烷基羰基；碳原子数为1～6的烷基磺酰基；甲氧基羰基、乙氧基羰基等碳原子数为1～6的烷氧基羰基；苯基羰基、萘基羰基等芳基羰基；苯基磺酰基、萘基磺酰基等芳基磺酰基；苄基羰基等碳原子数为7～10的芳烷羰基；苄基、二苯基甲基、三苯甲基等芳烷基；氧基羰基；叔丁氧基羰基；苄氧基羰基；烯丙氧基羰基；芴基甲氧基羰基；三氟乙酰基；甲酰基等。这些取代基可以被1～3个卤代基、硝基等取代。作为其具体例，例如可列举出对硝基苄氧基羰基、对氯苄氧基羰基、间氯苄氧基羰基、对甲氧基苄氧基羰基等。 
本发明中，羧基的例如氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述羧基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出甲基、叔丁基、苄基、对甲氧基苄基、甲氧基甲基、乙酰基、特戊酰基、苯甲酰基、二甲氧基三苯甲基、单甲氧基三苯甲基、9-(9-苯基)咕吨基等。 
本发明中，作为酰基，没有特别限定，例如可列举出甲酰基、乙酰基、丙酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基、特戊酰基、己酰基、环己酰基、苯甲酰基、乙氧基羰基等，在结构中包含酰基的基团(酰氧基、链烷酰氧基等)中也同样适用以上说明。此外，本发明中，酰基的碳原子数中包含羰基碳，例如碳原子数为1的酰基是指甲酰基。本发明中，前述酰基的例如一 个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述酰基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出羟基、卤代基、酰基、酰氧基、烷氧基、氨基甲酰基等。 
本发明中，氨基甲酰基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述氨基甲酰基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出甲基、乙基等烷基；乙酰基、乙基羰基等碳原子数为1～6的烷基羰基；碳原子数为1～6的烷基磺酰基；甲氧基羰基、乙氧基羰基等碳原子数为1～6的烷氧基羰基；苯基羰基、萘基羰基等芳基羰基；苯基磺酰基、萘基磺酰基等芳基磺酰基；苄基羰基等碳原子数为7～10的芳烷羰基；苄基、二苯基甲基、三苯甲基等芳烷基；氧基羰基；叔丁氧基羰基；苄氧基羰基；烯丙氧基羰基；芴基甲氧基羰基；三氟乙酰基；甲酰基等。这些取代基可以被1～3个卤代基、硝基等取代。作为其具体例，例如可列举出对硝基苄氧基羰基、对氯苄氧基羰基、间氯苄氧基羰基、对甲氧基苄氧基羰基等。 
本发明中，作为酰氧基，没有特别限定，例如可列举出乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、3-氯丁酰氧基等。本发明中，前述酰氧基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述酰氧基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出羟基、卤代基、酰基、酰氧基、烷氧基、氨基甲酰基。 
本发明中，作为羟烷基，没有特别限定，例如可列举出羟甲基、羟乙基、羟丙基等。本发明中，前述羟烷基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述羟烷基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出羟基、卤代基、酰基、酰氧基、烷氧基、氨基甲酰基等。 
本发明中，作为酰氧基烷基，没有特别限定，例如可列举出被前述酰氧基取代的前述烷基等。作为前述酰氧基烷基，例 如可列举出乙酰氧基乙基、丙酰氧基乙基、丁酰氧基乙基、3-氯丁酰氧基乙基等。本发明中，前述酰氧基烷基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述酰氧基烷基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出羟基、卤代基、酰基、酰氧基、烷氧基、氨基甲酰基等。 
本发明中，作为烷氧基烷基，没有特别限定，例如可列举出甲氧基甲基、乙氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、丙氧基乙基等。本发明中，前述烷氧基烷基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述烷氧基烷基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出羟基、卤代基、酰基、酰氧基、烷氧基、氨基甲酰基等。 
本发明中，作为卤代烷基，没有特别限定，例如可列举出被前述卤代基取代的前述烷基等。作为前述卤代烷基，具体而言，例如可列举出氯代甲基、氯代乙基、氯代丁基、二氯代甲基、三氟代甲基、溴代甲基、溴代乙基、氟代甲基、三氟代乙基等。 
本发明中，作为膦酰氧基烷基，没有特别限定，例如可列举出膦酰氧基甲基、膦酰氧基乙基、膦酰氧基丙基等。本发明中，前述膦酰氧基烷基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述膦酰氧基烷基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出羟基、卤代基、酰基、酰氧基、烷氧基、氨基甲酰基等。 
本发明中，羟苯基的例如羟基也可以异构化而以氧代基(＝O)的形式存在，氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述羟苯基中的取代基，包括能够以酸进行脱保护的基团，没有特别限制，例如可列举出甲基、叔丁基、苄基、对甲氧基苄基、甲氧基甲基、乙酰基、特戊酰基、苯甲酰基、二甲氧基三苯甲 基、单甲氧基三苯甲基、9-(9-苯基)咕吨基等。 
<环丁基嘌呤衍生物> 
本发明中，前述通式(1)中的前述X1为卤代基、烷基、烷硫基、硫基(硫醇基)、氨基、羟基、烷氧基、炔基或氰基，优选为卤代基。 
前述X1为前述卤代基的情况下，作为前述卤代基，没有特别限制，例如可列举出氟基(氟原子)、氯基(氯原子)、溴基(溴原子)、碘基(碘原子)等，优选为氯基(氯原子)。 
并且，前述X1为前述烷基的情况下，作为前述烷基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链烷基等。作为前述烷基，具体而言，例如可列举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、叔戊基等，优选为甲基。前述烷基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述烷基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的烷基中的取代基等。 
此外，前述X1为前述烷硫基的情况下，作为前述烷硫基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链烷硫基等。作为前述烷硫基，具体而言，例如可列举出甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基等，优选为甲硫基。前述烷硫基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述烷硫基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的烷硫基中的取代基等。 
前述X1为前述硫基(硫醇基)的情况下，前述硫基(硫醇基)的例如氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述硫基(硫醇基)中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的硫基(硫醇基)中的取代基等。 
前述X1为前述氨基的情况下，前述氨基的例如一个以上的 氢原子可以被别的取代基取代。作为氨基中的前述取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的氨基中的取代基等。 
前述X1为氨基的情况下，X2及X3均为卤代基，或X2及X3均为烷氧基，或者X2为羟基，X3为卤代基，并且，R1及R2均为酰氧基烷基。 
前述X1为前述羟基的情况下，前述羟基例如也可以异构化而以氧代基(＝O)的形式存在，氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述羟基中的前述取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的羟基中的取代基等。 
前述X1为前述烷氧基的情况下，作为前述烷氧基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链烷氧基等。作为前述烷氧基，具体而言，例如可列举出甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。前述烷氧基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述烷氧基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的烷氧基中的取代基等。前述X1为前述炔基的情况下，作为前述炔基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链炔基等。作为前述炔基，具体而言，例如可列举出乙炔基、炔丙基等。前述炔基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述炔基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的炔基中的取代基等。 
本发明中，前述通式(1)中的前述X2为卤代基、氨基、羟基、烷氧基、硫基(硫醇基)或烷硫基，优选为氨基。 
前述X2为前述卤代基的情况下，作为前述卤代基，没有特别限制，例如可列举出氟基(氟原子)、氯基(氯原子)、溴基(溴原子)、碘基(碘原子)等，优选为氯基(氯原子)。 
前述X2为前述氨基的情况下，前述氨基的例如一个以上的氢原子可以被别的取代基取代。作为氨基中的前述取代基，没 有特别限制，例如可列举出前述的氨基中的取代基等。 
此外，前述X2为前述羟基的情况下，前述羟基例如也可以异构化而以氧代基(＝O)的形式存在，氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述羟基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的羟基中的取代基等。 
前述X2为前述烷氧基的情况下，作为前述烷氧基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链烷氧基等。作为前述烷氧基，具体而言，例如可列举出甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。前述烷氧基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述烷氧基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的烷氧基中的取代基等。 
前述X2为前述硫基(硫醇基)的情况下，前述硫基(硫醇基)的例如氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述硫基(硫醇基)中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的硫基(硫醇基)中的取代基等。 
前述X2为前述烷硫基的情况下，作为前述烷硫基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链烷硫基等。作为前述烷硫基，具体而言，例如可列举出甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基等，优选为甲硫基。前述烷硫基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述烷硫基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的烷硫基中的取代基等。 
本发明中，前述通式(1)中的前述X3为氢原子、卤代基或烷氧基。 
前述X3为前述卤代基的情况下，作为前述卤代基，没有特别限制，例如可列举出氟基(氟原子)、氯基(氯原子)、溴基(溴原子)、碘基(碘原子)等，优选为氯基(氯原子)。 
前述X3为前述烷氧基的情况下，作为前述烷氧基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链烷氧基等。作为前述烷氧基，具体而言，例如可列举出甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。前述烷氧基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述烷氧基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的烷氧基中的取代基等。 
本发明中，前述通式(1)中的前述R1及R2相同或不同，分别为氢原子、卤代基、羧基、烷基、酰基、氨基甲酰基、酰氧基、羟烷基、酰氧基烷基、烷氧基烷基、卤代烷基或膦酰氧基烷基，优选为羟烷基。 
前述R1及R2的至少一者为前述羟烷基的情况下，作为前述羟烷基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链羟烷基等。作为前述羟烷基，具体而言，例如可列举出羟甲基、羟乙基、羟丙基、膦酰氧基烷基等，优选为羟甲基。此外，前述羟烷基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述羟烷基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的羟烷基中的取代基等。 
前述R1及R2的至少一者为前述卤代基的情况下，作为前述卤代基，没有特别限制，例如可列举出氟基(氟原子)、氯基(氯原子)、溴基(溴原子)、碘基(碘原子)等。 
前述R1及R2的至少一者为前述羧基的情况下，前述羧基的例如氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述羧基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的羧基中的取代基等。 
前述R1及R2的至少一者为前述烷基的情况下，作为前述烷基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链烷基等。作为前述烷基，具体而言，例如可列举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正 戊基、异戊基、新戊基、叔戊基等。此外，前述烷基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为烷基中的前述取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的烷基中的取代基等。 
前述R1及R2的至少一者为前述酰基的情况下，作为前述酰基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链酰基等。作为前述酰基，具体而言，例如可列举出甲酰基、乙酰基、丙酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基、特戊酰基、己酰基、环己酰基、苯甲酰基、乙氧基羰基等。此外，前述酰基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为酰基中的前述取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的酰基中的取代基等。 
前述R1及R2的至少一者为前述氨基甲酰基的情况下，前述氨基甲酰基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述氨基甲酰基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的氨基甲酰基中的取代基等。作为前述氢原子被取代基取代的氨基甲酰基，具体而言，例如可列举出前述的取代氨基甲酰基等。 
前述R1及R2的至少一者为前述酰氧基的情况下，作为前述酰氧基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链酰氧基等。作为前述酰氧基，具体而言，例如可列举出乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、3-氯丁酰氧基等。此外，前述酰氧基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述酰氧基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的酰氧基中的取代基等。 
前述R1及R2的至少一者为前述酰氧基烷基的情况下，作为前述酰氧基烷基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为2～ 8的直链或支链酰氧基烷基等。作为前述酰氧基烷基，例如可列举出被前述酰氧基取代的前述烷基等。作为前述酰氧基烷基，具体而言，例如可列举出乙酰氧基乙基、丙酰氧基乙基、丁酰氧基乙基、3-氯丁酰氧基乙基等。此外，前述酰氧基烷基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述酰氧基烷基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的酰氧基烷基中的取代基等。 
前述R1及R2的至少一者为前述烷氧基烷基的情况下，作为前述烷氧基烷基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为2～8的直链或支链烷氧基烷基等。作为前述烷氧基烷基，具体而言，例如可列举出甲氧基甲基、乙氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、丙氧基乙基等被烷氧基取代的前述烷基等。此外，前述烷氧基烷基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述烷氧基烷基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的烷氧基烷基中的取代基等。 
前述R1及R2的至少一者为前述卤代烷基的情况下，作为前述卤代烷基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链卤代烷基等。作为前述卤代烷基，具体而言，例如可列举出氯代甲基、氯代乙基、氯代丁基、二氯代甲基、三氟代甲基、溴代甲基、溴代乙基、氟代甲基、三氟代乙基等被前述卤代基取代的烷基等。 
前述R1及R2的至少一者为前述膦酰氧基烷基的情况下，作为前述膦酰氧基烷基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链膦酰氧基烷基等。作为前述膦酰氧基烷基，具体而言，例如可列举出膦酰氧基甲基、膦酰氧基乙基、膦酰氧基丙基等。此外，前述膦酰氧基烷基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述膦酰氧基烷基中的取代 基，没有特别限制，例如可列举出前述的膦酰氧基烷基中的取代基等。 
本发明的环丁基嘌呤衍生物、其互变异构体或立体异构体、或它们的盐、溶剂化物或水合物也可以是，在前述通式(1)中，例如前述X1为氯基，前述X2为氨基，前述R1及R2为羟甲基。作为这样的环丁基嘌呤衍生物，例如可列举出6-氨基-2-氯-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤或6-氨基-2-硫代甲氧基-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤等。 
本发明中，前述通式(1)所示的环丁基嘌呤衍生物的理论上可能的全部互变异构体或立体异构体均在本发明的范围内。以下，本说明书中，有时也将通式(1)所示的环丁基嘌呤衍生物、其全部互变异构体及立体异构体简单统称为通式(1)所示的环丁基嘌呤衍生物。 
本发明中，作为前述通式(1)所示的环丁基嘌呤衍生物的盐，没有特别限制，例如可列举出钠盐、钾盐等碱金属盐；钙盐、镁盐等碱土金属盐；铵盐；三甲基胺盐、三乙基胺盐、环己胺盐、乙醇胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐、普鲁卡因盐等脂肪族胺盐、N，N-二苄基乙二胺等芳烷基胺盐；吡啶盐、甲基吡啶盐、喹啉盐、异喹啉盐等杂环芳香族胺盐；四甲基铵盐、四乙基铵盐、苄基三甲基铵盐、苄基三丁基铵盐、甲基三辛基铵盐、四丁基铵盐等季铵盐；精氨酸盐、赖氨酸盐、天门冬氨酸盐、谷氨酸盐等氨基酸盐；盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、高氯酸盐等无机酸盐；醋酸盐、丙酸盐、乳酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、抗坏血酸盐等有机酸盐；甲磺酸盐、羟乙基磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐等磺酸盐等。此外，本发明中，前述通式(1)所示的环丁基嘌呤衍生物的溶剂化物或水合物也在本 发明的范围内。 
前述通式(1)所示的本发明的环丁基嘌呤衍生物的制造方法没有特别限定，例如如下所述。 
<制造例1> 
X1为卤代基的情况下，前述通式(1)所示的环丁基嘌呤衍生物的制造方法没有特别限定，例如可列举出包括下述(a)及(b)工序的制造方法等。 
(a)首先，通过Basacchi等的方法(G.S.Basacchi，A.Braitman，C.W.Cianci，J.M.Clark，A.K.Field，M.E.Hagen，D.R.Hockstein，M.F.Malley，T.Mitt，W.A.Slusarchyk，J.E.Sundeen，B.J.Terry，A.V.Tuomari，E.R.Weaver，M.G.Young and R.Zahler，J.Med.Chem.，1991，34，1415)等，合成下述通式(3)所示的环丁醇衍生物。 
(b)接着，使前述环丁醇衍生物与下述通式(4)所示的嘌呤衍生物(Halo为卤代基)反应，并进行与X2的取代基相应的取代反应，得到下述通式(5)所示的X1为卤代基的化合物(Halo为卤代基)。作为用于前述嘌呤衍生物的反应的溶剂，没有特别限定，例如可列举出四氢呋喃(THF)、二乙醚、1，4-二噁烷、甲苯、二氯甲烷等，优选为THF。并且，作为前述嘌呤衍生物的反应温度，没有特别限制，例如可列举出30～100℃的范围，优选为45～55℃的范围。此外，作为前述嘌呤衍生物的反应时间，没有特别限制，例如为5～50小时的范围，优选为12～18小时的范围。作为与X2的取代基相应的取代反应中的前述取代基，只要是前述的X2的取代基，则没有特别限制。此外，与X2的取代基相应的取代反应中的溶剂、反应温度及反应时间可以根据前述取代基而适当设定，没有特别限制。例如在前述X2的取代基为氨基的情况下，可以在前述嘌呤衍生物的反应后与 用氨饱和了的甲醇反应。另外，也可以在这些反应之前，例如对官能团R1及R2适当进行保护反应，在反应后，适当进行脱保护反应、脱水反应等反应。 
下述工序反应式1中示出了前述(b)工序的路线。 
(工序反应式1) 
Figure BDA0000064477590000201
作为通过本制造例而制造的环丁基嘌呤衍生物，没有特别限定，例如可列举出下述化学式(6)所示的6-氨基-2-氯-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤(C11H14ClN5O2)等。 
Figure BDA0000064477590000202
<制造例2> 
在本发明的环丁基嘌呤衍生物的制造方法中，X1可以像前述制造例1那样从最初引入，但例如在前述制造例1那样的方法较困难的情况等，也可以在偶联反应后将与目标X1不同的取代基转换成X1。例如在X1为烷硫基的情况下，前述通式(1)所示的环丁基嘌呤衍生物的制造方法没有特别限定，例如可列举出包括以下工序的制造方法等。下述工序反应式2中示出了本制造例的路线。另外，下述工序反应式2中，Halo为卤代基，R3 为烷基。 
(工序反应式2) 
Figure BDA0000064477590000211
首先，使用制造例1的制造方法，得到X1为卤代基的前述通式(7)所示的化合物。然后，在溶剂的存在下，使前述化合物与硫代烷基化剂反应，得到前述通式(8)所示的化合物(R3为烷基)。作为前述硫代烷基化剂，没有特别限制，例如可列举出甲硫醇钠、乙硫醇钠、苯硫酚钠等，优选为甲硫醇钠。作为前述溶剂，没有特别限定，例如可列举出N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、1，4-二噁烷等，优选为DMF。并且，作为前述反应温度，没有特别限制，例如可列举出10～80℃的范围，优选为15～25℃的范围。此外，作为前述反应时间，没有特别限制，例如为10～48小时的范围，优选为12～18小时的范围。另外，也可以在前述反应之前，例如对官能团R1及R2适当进行保护反应，在前述反应后，适当进行脱保护反应、脱水反应等反应。 
作为通过本制造例而制造的环丁基嘌呤衍生物，没有特别限定，例如可列举出下述化学式(9)所示的6-氨基-2-硫代甲氧基-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤(C12H17N5O2S)等。 
Figure BDA0000064477590000221
本发明的环丁基嘌呤衍生物的制造方法，例如除了前述制造例的工序以外，还可以包括各工序中得到的反应产物的分离工序、纯化工序等其它工序。作为前述分离工序及前述纯化工序，没有特别限制，例如可以适当使用柱色谱法、凝胶渗透色谱法等以往公知的方法。这样，本发明的环丁基嘌呤衍生物由于能够在工业上生产，并且为低分子，所以能够廉价地稳定地供给。 
本发明中，作为前述通式(1)所示的环丁基嘌呤衍生物的盐、溶剂化物或水合物的制造方法，没有特别限制，可以使用通过前述的制造方法例等而得到的环丁基嘌呤衍生物等并适当使用以往公知的方法来制造。 
<促进剂> 
如上所述，本发明的促进剂是包含前述通式(1′)所示的环丁基嘌呤衍生物、其互变异构体或立体异构体、或它们的盐、溶剂化物或水合物，且具有选自由血管新生促进功能、管腔形成促进功能及神经细胞生长促进功能组成的组中的至少一种功能的促进剂。 
本发明中，前述通式(1′)中的X1′为卤代基、烷基、烷硫基、硫基(硫醇基)、氨基、羟基、烷氧基、炔基或氰基。 
前述X1′为前述卤代基的情况下，作为前述卤代基，没有特别限制，例如可列举出氟基(氟原子)、氯基(氯原子)、溴基 (溴原子)及碘基(碘原子)等，优选为氯基(氯原子)。 
前述X1′为前述烷基的情况下，作为前述烷基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链烷基等。作为前述烷基，具体而言，例如可列举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、叔戊基等，优选为甲基。此外，前述烷基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为烷基中的前述取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的烷基中的取代基等。 
前述X1′为前述烷硫基的情况下，作为前述烷硫基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链烷硫基等。作为前述烷硫基，具体而言，例如可列举出甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基等，优选为甲硫基。前述烷硫基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述烷硫基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的烷硫基中的取代基等。 
前述X1′为前述硫基(硫醇基)的情况下，前述硫基(硫醇基)的例如氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述硫基(硫醇基)中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的硫基(硫醇基)中的取代基等。 
前述X1′为前述氨基的情况下，前述氨基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代，没有特别限制。作为氨基中的前述取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的氨基中的取代基等。 
前述X1′为前述羟基的情况下，前述羟基例如也可以异构化而以氧代基(＝O)的形式存在，氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述羟基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的羟基中的取代基等。 
前述X1′为前述烷氧基的情况下，作为前述烷氧基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链烷氧基等。作为前述烷氧基，具体而言，例如可列举出甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。前述烷氧基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述烷氧基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的烷氧基中的取代基等。 
前述X1′为前述炔基的情况下，作为前述炔基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链炔基等。作为前述炔基，具体而言，例如可列举出乙炔基、炔丙基等。前述炔基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述炔基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的炔基中的取代基等。 
前述通式(1′)中的X2′为卤代基、氨基、羟基、烷氧基、硫基(硫醇基)或烷硫基。 
前述X2′为前述卤代基的情况下，作为前述卤代基，没有特别限制，例如可列举出氟基(氟原子)、氯基(氯原子)、溴基(溴原子)及碘基(碘原子)等，优选为氯基(氯原子)。 
前述X2′为前述氨基的情况下，前述氨基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代，没有特别限制。作为氨基中的前述取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的氨基中的取代基等。 
前述X2′为前述羟基的情况下，前述羟基例如也可以异构化而以氧代基(＝O)的形式存在，氢原子可以被任意的取代基取代。作为羟基中的前述取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的羟基中的取代基等。 
前述X2′为前述烷氧基的情况下，作为前述烷氧基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链烷氧基等。 作为前述烷氧基，具体而言，例如可列举出甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。前述烷氧基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述烷氧基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的烷氧基中的取代基等。 
前述X2′为前述硫基(硫醇基)的情况下，前述硫基(硫醇基)的例如氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述硫基(硫醇基)中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的硫基(硫醇基)中的取代基等。 
前述X2′为前述烷硫基的情况下，作为前述烷硫基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链烷硫基等。作为前述烷硫基，具体而言，例如可列举出甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基等，优选为甲硫基。前述烷硫基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述烷硫基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的烷硫基中的取代基等。 
本发明中，前述通式(1′)中的X3′为氢原子、卤代基、烷基、烷硫基、氨基、羟基、烷氧基、羟苯基或氨基甲酰基。 
前述X3′为前述卤代基的情况下，作为前述卤代基，没有特别限制，例如可列举出氟基(氟原子)、氯基(氯原子)、溴基(溴原子)及碘基(碘原子)等。 
前述X3′为前述烷基的情况下，作为前述烷基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链烷基等。作为前述烷基，具体而言，例如可列举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、叔戊基等，优选为甲基。此外，前述烷基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为烷基中的前述取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的烷基中的取代基等。 
前述X3′为前述烷硫基的情况下，作为前述烷硫基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链烷硫基等。作为前述烷硫基，具体而言，例如可列举出甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基等。前述烷硫基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述烷硫基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的烷硫基中的取代基等。 
前述X3′为前述氨基的情况下，前述氨基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为氨基中的前述取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的氨基中的取代基等。 
前述X3′为前述羟基的情况下，前述羟基例如也可以异构化而以氧代基(＝O)的形式存在，氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述羟基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的羟基中的取代基等。 
前述X3′为前述烷氧基的情况下，作为前述烷氧基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链烷氧基等。作为前述烷氧基，具体而言，例如可列举出甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。前述烷氧基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述烷氧基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的烷氧基中的取代基等。 
前述X3′为前述羟苯基的情况下，前述羟苯基内的羟基例如也可以异构化而以氧代基(＝O)的形式存在，氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述羟苯基中的取代基，包括能够以酸进行脱保护的基团，没有特别限制，例如可列举出前述的羟苯基中的取代基等。 
前述X3′为前述氨基甲酰基的情况下，前述氨基甲酰基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述氨基甲酰基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的氨基 甲酰基中的取代基等。作为前述氢原子被取代基取代的氨基甲酰基，具体而言，例如可列举出前述的取代氨基甲酰基等。 
前述通式(1′)中的R1′及R2′相同或不同，分别为氢原子、卤代基、羧基、烷基、酰基、氨基甲酰基、酰氧基、羟烷基、酰氧基烷基、烷氧基烷基、卤代烷基或膦酰氧基烷基。 
前述R1′及R2′的至少一者为前述卤代基的情况下，作为前述卤代基，没有特别限制，例如可列举出氟基(氟原子)、氯基(氯原子)、溴基(溴原子)及碘基(碘原子)等。 
前述R1′及R2′的至少一者为前述羧基的情况下，前述羧基的例如氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述羧基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的羧基中的取代基等。 
前述R1′及R2′的至少一者为前述烷基的情况下，作为前述烷基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链烷基等。作为前述烷基，具体而言，例如可列举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、叔戊基等，优选为甲基。此外，前述烷基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为烷基中的前述取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的烷基中的取代基等。 
前述R1′及R2′的至少一者为前述酰基的情况下，作为前述酰基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链酰基等。作为前述酰基，具体而言，例如可列举出甲酰基、乙酰基、丙酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基、特戊酰基、己酰基、环己酰基、苯甲酰基、乙氧基羰基等。此外，前述酰基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为酰基中的前述取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的酰基中的取代基等。 
前述R1′及R2′的至少一者为前述氨基甲酰基的情况下，前述氨基甲酰基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述氨基甲酰基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的氨基甲酰基中的取代基等。作为前述氢原子被取代基取代的氨基甲酰基，具体而言，例如可列举出前述的取代氨基甲酰基等。 
前述R1′及R2′的至少一者为前述酰氧基的情况下，作为前述酰氧基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链酰氧基等。作为前述酰氧基，具体而言，例如可列举出乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、3-氯丁酰氧基等。此外，前述酰氧基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述酰氧基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的酰氧基中的取代基等。 
前述R1′及R2′的至少一者为前述羟烷基的情况下，作为前述羟烷基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链羟烷基等。作为前述羟烷基，具体而言，例如可列举出羟甲基、羟乙基、羟丙基等，优选为羟甲基。此外，前述羟烷基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为羟烷基中的前述取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的羟烷基中的取代基等。 
前述R1′及R2′的至少一者为前述酰氧基烷基的情况下，作为前述酰氧基烷基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为2～8的直链或支链酰氧基烷基等。作为前述酰氧基烷基，例如可列举出被前述酰氧基取代的前述烷基等。作为前述酰氧基烷基，具体而言，例如可列举出乙酰氧基乙基、丙酰氧基乙基、丁酰氧基乙基、3-氯丁酰氧基乙基等。此外，前述酰氧基烷基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述酰氧 基烷基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的酰氧基烷基中的取代基等。 
前述R1′及R2′的至少一者为前述烷氧基烷基的情况下，作为前述烷氧基烷基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为2～8的直链或支链烷氧基烷基等。作为前述烷氧基烷基，具体而言，例如可列举出甲氧基甲基、乙氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、丙氧基乙基等被烷氧基取代的前述烷基等。此外，前述烷氧基烷基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述烷氧基烷基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的烷氧基烷基中的取代基等。 
前述R1′及R2′的至少一者为前述卤代烷基的情况下，作为前述卤代烷基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链卤代烷基等。作为前述卤代烷基，具体而言，例如可列举出氯代甲基、氯代乙基、氯代丁基、二氯代甲基、三氟代甲基、溴代甲基、溴代乙基、氟代甲基、三氟代乙基等被前述卤代基取代的烷基等。 
前述R1′及R2′的至少一者为前述膦酰氧基烷基的情况下，作为前述膦酰氧基烷基，没有特别限制，例如可列举出碳原子数为1～8的直链或支链膦酰氧基烷基等。作为前述膦酰氧基烷基，具体而言，例如可列举出膦酰氧基甲基、膦酰氧基乙基、膦酰氧基丙基等。此外，前述膦酰氧基烷基的例如一个以上的氢原子可以被任意的取代基取代。作为前述膦酰氧基烷基中的取代基，没有特别限制，例如可列举出前述的膦酰氧基烷基中的取代基等。 
另外，X1′为氨基且X3′为氢原子的情况下，R1′及R2′为除羟烷基以外的原子或取代基。 
本发明的促进剂也可以是，在前述通式(1′)中，例如前 述X1′为氯基，前述X2′为氨基，前述R1′及R2′为羟甲基。作为这样的促进剂，例如可列举出包含6-氨基-2-氯-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤或6-氨基-2-硫代甲氧基-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤、它们的互变异构体或立体异构体、或它们的盐、溶剂化物或水合物，且具有选自由血管新生促进功能、管腔形成促进功能及神经细胞生长促进功能组成的组中的至少一种功能的促进剂等。 
本发明中，包含前述通式(1′)所示的环丁基嘌呤衍生物的理论上可能的全部互变异构体或立体异构体，且具有选自由血管新生促进功能、管腔形成促进功能及神经细胞生长促进功能组成的组中的至少一种功能的促进剂在本发明的范围内。以下，本说明书中，有时也将通式(1′)所示的环丁基嘌呤衍生物、其全部互变异构体及立体异构体简单统称为通式(1′)所示的环丁基嘌呤衍生物。 
本发明中，作为前述通式(1′)所示的环丁基嘌呤衍生物的盐，没有特别限制，例如可列举出前述的、前述通式(1)所示的环丁基嘌呤衍生物的盐等。此外，本发明中，包含前述通式(1′)所示的环丁基嘌呤衍生物的盐、溶剂化物或水合物，且具有选自由血管新生促进功能、管腔形成促进功能及神经细胞生长促进功能组成的组中的至少一种功能的促进剂也在本发明的范围内。 
前述通式(1′)所示的本发明的环丁基嘌呤衍生物的制造方法没有特别限制，例如可列举出与前述的、前述通式(1)所示的环丁基嘌呤衍生物同样的制造方法等。本发明中，前述通式(1′)所示的环丁基嘌呤衍生物的盐、溶剂化物或水合物的制造方法也没有特别限制，可以使用通过前述通式(1)所示的环丁基嘌呤衍生物的制造方法等而得到的环丁基嘌呤衍生物等 并适当使用以往公知的方法来制造。 
如上所述，本发明的促进剂是具有选自由血管新生促进功能、管腔形成促进功能及神经细胞生长促进功能组成的组中的至少一种功能的促进剂。作为前述促进剂，具体而言，例如可列举出血管新生促进剂、管腔形成促进剂、神经细胞生长促进剂等。前述血管新生促进剂具有促进血管新生的功能，例如可以具有血管内皮细胞的细胞增殖促进功能、血管内皮细胞的细胞迁移促进功能等。作为前述管腔形成促进剂，没有特别限制，例如可列举出基于血管内皮细胞的管腔形成促进剂、基于消化管来源细胞的管腔形成促进剂、基于肝脏来源细胞的管腔形成促进剂、淋巴管形成促进剂等，优选为基于血管内皮细胞的管腔形成促进剂。作为前述神经细胞生长促进剂，没有特别限制，例如可列举出神经细胞增殖促进剂、神经细胞分化促进剂等，优选为神经细胞增殖促进剂。另外，本发明的促进剂具有选自由前述血管新生促进功能、管腔形成促进功能及神经细胞生长促进功能组成的组中的至少一种功能，但也可以同时具有除前述血管新生促进功能、管腔形成促进功能及神经细胞生长促进功能以外的其它功能。作为本发明的促进剂所具有的前述其它功能，没有特别限制。 
<药品> 
如上所述，本发明的药品包含选自由本发明的环丁基嘌呤衍生物、其互变异构体及立体异构体、及其盐、溶剂化物及水合物、以及本发明的促进剂组成的组中的至少一种物质，且具有选自由血管新生促进用、管腔形成促进用及神经细胞生长促进用组成的组中的至少一种用途。另外，本发明中，药品包含药品、准药品。作为本发明的药品，没有特别限制，例如可列举出外伤治疗药、烧伤治疗药、创疤治疗药、褥疮治疗药等创 伤治愈药、阿尔茨海默氏病治疗药、阿尔茨海默氏病预防药、梗塞性疾病治疗药、梗塞性疾病预防药、生发剂等。 
本发明的药品能够经口或非经口投与。经口投与时，作为本发明的药品的剂型，没有特别限定，例如可列举出散剂、细粒剂、颗粒剂、片剂、包衣片剂、胶囊剂、糖锭剂、液剂等。非经口投与时，作为本发明的药品的剂型，没有特别限定，例如可列举出注射剂、滴鼻剂、软膏剂、贴剂、巴布剂、洗剂、栓剂等。此外，前述药品的组成没有特别限制，除前述促进剂以外，例如可以包含赋形剂、粘结剂、润滑剂、崩解剂、吸收促进剂、乳化剂、稳定化剂、防腐剂等各种添加剂等。此外，前述药品可以通过通常所用的制剂化技术等来制造。 
本发明的药品中，本发明的环丁基嘌呤衍生物的投与量可以根据剂型、投与方法、对象疾病、投与的患者等适当设定，没有特别限制。 
实施例 
接着，对本发明的实施例进行说明。但是，本发明并不受下述的实施例的限定及限制。 
(实施例1) 
本例中，调查了前述化学式(6)所示的6-氨基-2-氯-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤(C11H14ClN5O2，以下称为“2-Cl-C.OXT-A”。)对血管内皮细胞的细胞增殖、管腔形成及细胞迁移性带来的影响。 
<2-Cl-C.OXT.A的合成> 
前述2-Cl-C.OXT.A通过以下的工序1～3来合成。另外，本例中，1H-NMR及13C-NMR光谱使用UltrashieldTM 400 Plus FTNMR System(BRUKER公司制)进行测定。化学位移用δ表示，偶合常数(J)用Hz表示。熔点通过微量熔点测定装置MP-500D (ヤナコ机器开发研究所制)进行测定。元素分析使用2400Series II CHNS/O(Perkin Elmer公司制)进行测定。高分辨质谱分析使用APEX IV质谱仪(BRUKER公司制)，通过电喷雾电离质谱(ESI-MS)法进行测定。 
(工序1：顺式-反式-2，3-双(苯甲酰氧基甲基)-1-环丁醇的合成) 
本例中，顺式-反式-2，3-双(苯甲酰氧基甲基)-1-环丁醇根据Basacchi等的方法(G.S.Basacchi，A.Braitman，C.W.Cianci，J.M.Clark，A.K.Field，M.E.Hagen，D.R.Hockstein，M.F.Malley，T.Mitt，W.A.Slusarchyk，J.E.Sundeen，B.J.Terry，A.V.Tuomari，E.R.Weaver，M.G.Young and R.Zahler，J.Med.Chem.，1991，34，1415)如下所述来合成。首先，将反式-2，3-双(苯甲酰氧基甲基)-1-环丁酮14.00g(41.40mmol)溶解到干燥THF 350mL中，在氮气流下冷却至-78℃。冷却后，边搅拌，边将1mmol/L的LS-Selectride THF溶液42mL滴加到前述溶液中，2小时后，进一步滴加醋酸6mL。将该溶液静置至恢复到室温后，浓缩成20mL。向前述浓缩液中加入甲苯250mL及水100mL，在分液漏斗中进行振荡。将得到的有机层用水100mL洗涤后，用硫酸镁进行干燥。干燥后，通过过滤除去固形物，将滤液浓缩成20mL。通过使用了硅胶柱的色谱法来分离该浓缩液(残渣液)，得到饴糖状的顺式-反式-2，3-双(苯甲酰氧基甲基)-1-环丁醇(10.15g、产率72％)。 
(工序2：2，6-二氯-9-[反式-反式-2，3-双(苯甲酰氧基甲基)环丁基]嘌呤的合成) 
接着，将前述顺式-反式-2，3-双(苯甲酰氧基甲基)-1-环丁醇(5.20g、15.28mmol)及2，6-二氯嘌呤(4.33g、22.9mmol)溶解到THF 100mL中，在冰冷下，添加三苯基膦(7.87g、 30mmol)。添加后，进一步加入偶氮二羧酸二异丙酯(5.9mL、30mmol)，在50℃保持一夜。浓缩该溶液后，通过使用了硅胶柱的色谱法来分离残渣液，得到下述化学式(10)所示的2，6-二氯-9-[反式-反式-2，3-双(苯甲酰氧基甲基)环丁基]嘌呤的白色晶体(4.44g、产率57％)。 
Figure BDA0000064477590000341
以下示出该化合物的物性值。 
Mp 146.8-147.4℃，MS m/z＝510、512、514(M+).HR-MS.calcd.for C25H20Cl2N4O4：510.0862.Found：510.0846.Anal.calcd.for C25H20Cl2N4O4·0.3H2O，C：58.11，H：4.02，N：10.84.Found.C：57.79，H：3.94，N：10.87. 
(工序3：6-氨基-2-氯-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤的合成) 
将前述2，6-二氯-9-[反式-反式-2，3-双(苯甲酰氧基甲基)环丁基]嘌呤(3.73g、7.29mmol)悬浮到MeOH 50mL中，用氨使其饱和。将该溶液在200mL的钢铁制封闭管内在100℃加热一夜。加热结束后，用冰冷却溶液，用蒸发仪在减压下蒸馏除去溶剂。向得到的残渣中加入水50mL，用CHCl3 30mL洗涤2次。洗涤后，采集水层，浓缩成10mL，得到前述化学式(6)所示的6-氨基-2-氯-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤 (2-Cl-C.OXT-A)的白色晶体(1.49g、72％)。以下示出该化合物的物性值。 
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.25(1H，s)，7.68(2H，br s)，4.63(1H，dd，J 5.2 and 4.6)，4.53-4.60(2H，m)，3.46-3.56(4H，m)，2.72-2.82(1H，m)，2.38-2.46(1H，m)，2.14(1H，dd，J 19.2 and 9.6)，2.03-2.12(1H，m)；13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)：δ156.7，152.6，150.4，140.2，118.0，63.5，61.4，47.6，47.3，33.0，29.4.Mp 172-173.5℃.Anal.calcd.forC11H14ClN5O2·0.2H2O.C：45.98，H：5.05，N：24.37.Found.C：45.83，H：5.01，N：24.23. 
<细胞增殖测定> 
将前述2-Cl-C.OXT-A溶解到生理盐水中并使其达到规定浓度(0.5、1、5、10、50、100mmol/L)，从而调制了试样液。然后，将前述规定浓度的试样液分别以10v/v％的浓度加入到添加有2v/v％灭活胎牛血清(FBS)的HuMedia-EB2培养基(KURABO INDUSTRIES LTD.制)中，从而调制了细胞增殖用培养基。另外，前述细胞增殖用培养基中的2-Cl-C.OXT-A的最终浓度为50μmol/L、100μmol/L、500μmol/L、1mmol/L、5mmol/L及10mmol/L。 
向明胶包被的96孔板的各孔中分别接种3×103个悬浮在HuMedia-EG2培养基(KURABO INDUSTRIES LTD.制)中的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，培养24小时。培养开始24小时后，除去培养基，向各孔中加入前述细胞增殖用培养基100μL，进一步培养48小时。培养结束后，用Cell Counting Kit-8(同仁化学研究所公司制)进行呈色反应，反应开始2小时后，用酶标仪测定了450nm下的吸光度。另外，代替前述细胞增殖用培养基而用添加有2v/v％灭活胎牛血清(FBS)的HuMedia-EB2培养基 (KURABO INDUSTRIES LTD.制)进行培养，与前述同样地进行呈色反应，测定吸光度，作为对照。然后，使用下述式(I)，分别算出使用了添加有前述各浓度的2-Cl-C.OXT-A的细胞增殖用培养基的培养中的相对吸光度。 
[数学式1] 
Figure BDA0000064477590000361
<管腔形成测定> 
使用由人脐静脉内皮细胞(HUVEC)及正常人皮肤成纤维细胞构成的市售的血管新生试剂盒(KURABO INDUSTRIESLTD.制)，如下所述进行了管腔形成测定。首先，将2-Cl-C.OXT-A溶解到生理盐水中，使其达到规定浓度(1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L、500μmol/L、1mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、50mmol/L)，从而调制了试样液。然后，将前述规定浓度的试样液添加到前述试剂盒附带的培养基中，分别达到10v/v％浓度，从而调制了管腔形成用培养基。另外，前述管腔形成用培养基中的2-Cl-C.OXT-A的最终浓度为0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、500μmol/L、1mmol/L及5mmol/L。 
使用前述管腔形成用培养基，将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)及正常人皮肤成纤维细胞培养10天。培养后，使用管腔染色试剂盒(CD31染色用、KURABO INDUSTRIES LTD.制)，进行人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的免疫染色。然后，使用NIH image(图像处理分析软件)，测定了利用前述免疫染色得到的染色部分的面积(管腔面积)。另外，代替前述管腔形成用培养基而使用前述试剂盒附带的培养基进行培养，与前述 同样地进行免疫染色并测定了管腔面积，作为对照。然后，使用下述式(II)，分别算出使用了添加有前述各浓度的2-Cl-C.OXT-A的管腔形成用培养基的培养中的管腔面积相对值。 
[数学式2] 
Figure BDA0000064477590000371
<细胞迁移性测定> 
使用CytoSelect 24-well Cell Migration Assay(CBA-100、Cell Biolabs公司制)试剂盒，如下所述进行了细胞迁移性测定。首先，将2-Cl-C.OXT-A溶解到生理盐水中，使其达到规定浓度(0.1、0.5、1mmol/L)，从而调制了试样液。然后，将前述规定浓度的试样液分别以10v/v％的浓度加入到添加有2v/v％灭活胎牛血清(FBS)的HuMedia-EB2培养基(KURABOINDUSTRIES LTD.制)中，从而调制了细胞迁移用培养基。另外，前述细胞迁移用培养基中的2-Cl-C.OXT-A的最终浓度为10、50、100μmol/L。 
在添加有2v/v％灭活胎牛血清(FBS)的HuMedia-EB2培养基(KURABO INDUSTRIES LTD.制)中，以0.5×106细胞/mL的密度悬浮人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，从而调制了细胞悬浮液。在前述试剂盒附带的聚碳酸酯膜培养板的上室(插入皿内)中加入前述细胞悬浮液300μL，在前述板的下室(孔内)中加入前述细胞迁移用培养基500μL，在37℃下培养24小时。培养结束后，用棉棒擦拭前述插入皿内部底面的膜上，除去膜上的细胞。然后，用试剂盒附带的染色液对迁移到前述膜的背侧(插入皿外部底面的膜上)的细胞进行染色，从插入皿下方拍摄照片。拍摄后，用试剂盒附带的萃取液萃取色素，用酶标仪测定 了560nm下的吸光度。另外，代替前述细胞迁移用培养基而使用添加有2v/v％灭活胎牛血清(FBS)的HuMedia-EB2培养基(KURABO INDUSTRIES LTD.制)进行培养，与前述同样地进行染色并测定了吸光度，作为对照。然后，使用前述式(I)，分别算出使用了添加有前述各浓度的2-Cl-C.OXT-A的细胞迁移用培养基的培养中的相对吸光度。 
(比较例1) 
本例中，调查了下述化学式(11)所示的6-氨基-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤(以下称为“C.OXT-A”。)对血管内皮细胞的管腔形成带来的影响。前述管腔形成的测定中，代替前述2-Cl-C.OXT-A而使用C.OXT-A，将前述管腔形成用培养基中的C.OXT-A的最终浓度设定为1、5、10、50及100μmol/L，除此以外与实施例1同样地进行。 
Figure BDA0000064477590000381
(比较例2) 
本例中，调查了下述化学式(12)所示的2-氨基-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]-3H-嘌呤-6-酮(以下称为“C.OXT-G”。)对血管内皮细胞的管腔形成带来的影响。前述管腔形成的测定中，代替前述2-Cl-C.OXT-A而使用C.OXT-G，将前述管腔形成用培养基中的C.OXT-G的最终浓度设定为1、5、10、50及100μmol/L，除此以外与实施例1同样地进行。 
Figure BDA0000064477590000391
(比较例3) 
本例中，调查了下述化学式(13)所示的2-氯-6-氨基-9-[3，4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基]嘌呤(以下称为“2-Cl-ADN”。)对血管内皮细胞的管腔形成带来的影响。前述管腔形成的测定中，代替前述2-Cl-C.OXT-A而使用2-Cl-ADN，将前述管腔形成用培养基中的2-Cl-ADN的最终浓度设定为500nmol/L、1μmol/L、5μmol/L及10μmol/L，除此以外与实施例1同样地进行。 
Figure BDA0000064477590000392
(比较例4) 
本例中，调查了下述化学式(14)所示的2-氯-6-氨基-9-[4-羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基]嘌呤(以下称为“2-Cl-DAD”。)对血管内皮细胞的管腔形成带来的影响。前述管腔形成的测定中，代替前述2-Cl-C.OXT-A而使用2-Cl-DAD，将前述管腔形成用培养基中的2-Cl-DAD的最终浓度设定为500nmol/L、1μmol/L、5μmol/L及10μmol/L，除此以外与实施例1同样地进行。 
(比较例5) 
本例中，调查了腺苷对血管内皮细胞的管腔形成带来的影响。前述管腔形成的测定中，代替前述2-Cl-C.OXT-A而使用腺苷，将前述管腔形成用培养基中的腺苷的最终浓度设定为100μmol/L、1mmol/L、2.5mmol/L及5mmol/L，除此以外与实施例1同样地进行。 
(比较例6) 
本例中，调查了脱氧腺苷对血管内皮细胞的管腔形成带来的影响。前述管腔形成的测定中，代替前述2-Cl-C.OXT-A而使用脱氧腺苷，将前述管腔形成用培养基中的脱氧腺苷的最终浓度设定为100μmol/L、500μmol/L、1mmol/L及2.5mmol/L，除此以外与实施例1同样地进行。 
(比较例7) 
本例中，代替前述2-Cl-C.OXT-A而使用VEGF作为阳性对照，将前述细胞增殖用培养基、前述管腔形成用培养基及前述迁移性测定用培养基中的VEGF的最终浓度设定为10ng/mL，除此以外与实施例1同样地调查了对血管内皮细胞的细胞增殖、管腔形成及细胞迁移性的影响。 
(比较例8) 
本例中，代替前述试样液而将生理盐水添加到前述细胞增殖用培养基、前述管腔形成用培养基及前述迁移性测定用培养 基中，除此以外与实施例1同样地调查了对血管内皮细胞的细胞增殖、管腔形成及细胞迁移性的影响。 
(比较例9) 
本例中，代替前述试样液而将胎牛血清(FBS)添加到前述迁移性测定用培养基中，将前述培养基中的FBS的最终浓度设定为5v/v％，除此以外与实施例1同样地调查了对血管内皮细胞的细胞迁移性的影响。 
(比较例10) 
本例中，代替前述试样液而将胎牛血清(FBS)添加到前述迁移性测定用培养基中，将前述培养基中的FBS的最终浓度设定为10v/v％，除此以外与实施例1同样地调查了对血管内皮细胞的细胞迁移性的影响。 
<细胞增殖的测定结果> 
图2中示出了比较细胞增殖测定中的前述相对吸光度的图表。该图的图表中，纵轴为前述相对吸光度，各棒从左依次为比较例8(生理盐水)、比较例7(VEGF)、实施例1(2-Cl-C.OXT-A)的结果。另外，横轴下记载的各浓度表示实施例1中的细胞增殖用培养基中的试样的最终浓度。 
如图2的图表所示那样，在实施例1中，2-Cl-C.OXT-A的最终浓度在50μmol/L～1mmol/L的范围内时，相对吸光度基本大于1，2-Cl-C.OXT-A使得增殖稍微得到促进，在5mmol/L以上的高浓度范围内时，增殖受到浓度依赖性的抑制。 
<管腔形成的测定结果> 
图3(A)～(F)中示出了管腔形成测定中的免疫染色的照片。图3(A)为比较例8(生理盐水)的照片，图3(B)为比较例7(VEGF)的照片，图3(C)为实施例1(2-Cl-C.OXT-A1μmol/L)的照片，图3(D)为实施例1(2-Cl-C.OXT-A 10μmol/L) 的照片，图3(E)为实施例1(2-Cl-C.OXT-A 100μmol/L)的照片，图3(F)为实施例1(2-Cl-C.OXT-A 1mmol/L)的照片。该图中，各照片的宽度为1.6mm。该图的各照片中，黑色的线状物为经免疫染色的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，黑色部分的面积越大，表示管腔形成越受到促进。 
如图3(D)～(F)的照片所示那样，前述管腔形成用培养基中的2-Cl-C.OXT-A的最终浓度在10μmol/L～1mmol/L的范围内时，被染色的面积大于对照，确认到由2-Cl-C.OXT-A带来的管腔形成的促进活性。并且，如该图(D)及(E)所示那样，前述最终浓度为10及100μmol/L时，显示出比添加了VEGF的比较例7还高的管腔形成促进活性。 
图1中示出了比较管腔面积相对值的图表。该图的图表中，纵轴为前述管腔面积相对值，各棒从左依次为比较例8(生理盐水)、比较例7(VEGF)、实施例1(2-Cl-C.OXT-A)、比较例1(C.OXT-A)、比较例2(C.OXT-G)、比较例3(2-Cl-ADN)、比较例4(2-Cl-DAD)、比较例5(腺苷)、比较例6(脱氧腺苷)的结果。另外，横轴下记载的各浓度表示各例中的管腔形成培养用培养基中的试样的最终浓度。 
如图1的图表所示那样，2-Cl-C.OXT-A的前述最终浓度在100nmol/L～1mmol/L的范围内时，管腔面积相对值高于对照，确认到由2-Cl-C.OXT-A带来的管腔形成的促进活性。并且，前述最终浓度在10～500μmol/L的范围内时，显示出比添加了VEGF的比较例7还高的管腔形成促进活性。特别是前述最终浓度为100μmol/L时，前述管腔面积相对值变成3.8，显示出最高的管腔形成促进活性。 
<细胞迁移性的测定结果> 
图4(A)～(H)及图5(A)～(H)中示出了细胞迁移 测定中的染色照片。图4(A)及图5(A)为对照的照片，图4(B)及图5(B)为比较例8(生理盐水)的照片，图4(C)及图5(C)为比较例9(5v/v％FBS)的照片，图4(D)及图5(D)为比较例10(10v/v％FBS)的照片，图4(E)及图5(E)为比较例7(VEGF)的照片，图4(F)及图5(F)为实施例1(2-Cl-C.OXT-A 10μmol/L)的照片，图4(G)及图5(G)为实施例1(2-Cl-C.OXT-A 50μmol/L)的照片，图4(H)及图5(H)为实施例1(2-Cl-C.OXT-A 100μmol/L)的照片。两图中，各照片的宽度为1.6mm。两图的各照片中，黑色染色部分为迁移的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，黑色部分的面积越大，表示细胞迁移越受到促进。 
如图4(F)～(H)及图5(F)～(H)的照片所示那样，培养液中的2-Cl-C.OXT-A的最终浓度在10μmol/L～100μmol/L的范围内时，被染色的面积大于对照，确认到由2-Cl-C.OXT-A带来的细胞迁移的促进活性。 
图6中示出了比较细胞迁移性测定中的相对吸光度的图表。该图的图表中，纵轴为前述相对吸光度，各棒从左依次为对照(细胞迁移用培养基)、比较例8(生理盐水)、比较例9(5v/v％FBS)、比较例10(10v/v％FBS)、比较例7(VEGF)及实施例1(2-CI-C.OXT-A)的结果。另外，在表示实施例1的结果的棒中，横轴下记载的各浓度表示细胞迁移用培养基中的2-Cl-C.OXT-A的最终浓度。 
如图6的图表所示那样，2-Cl-C.OXT-A的前述最终浓度在10～100μmol/L的范围内时，相对吸光度高于对照，确认到由2-Cl-C.OXT-A带来的细胞迁移性的促进活性。并且，在前述最终浓度为50及100μmol/L的情况下，与添加了生理盐水的比较例8相比，显示出显著高的细胞迁移促进活性(p＜0.02)。特别是 前述最终浓度为50μmol/L时，前述相对吸光度变成2.1，显示出比添加了VEGF的比较例7还高的细胞迁移促进活性。 
(实施例2) 
本例中，合成了前述化学式(9)所示的6-氨基-2-硫代甲氧基-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤(C12H17N5O2S、以下称为“2-SMe-C.OXT-A”。)。另外，前述化学式(9)中，SMe为甲硫基。 
<2-SMe-C.OXT-A的合成> 
本例中，与实施例1同样地进行前述工序1～3，合成了6-氨基-2-氯-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤(2-Cl-C.OXT-A)。然后，使用前述2-Cl-C.OXT-A，进一步实施下述工序4～6，合成了前述2-SMe-C.OXT.A。另外，本例中，与实施例1同样地测定了各化合物。 
(工序4：6-氨基-2-氯-9-[反式-反式-2，3-双(三苯基甲氧基甲基)环丁基]嘌呤的合成) 
将前述6-氨基-2-氯-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤(170.4mg、0.60mmol)溶液、三苯甲基氯(501.8mg、1.80mmol)、三乙胺(0.4mL)及4-二甲基氨基吡啶(11.6mg、0.06mmol)溶解到DMF 2.0mL中，在室温下搅拌一夜。搅拌开始12小时后，将得到的黄浊液加入到冰水中，用醋酸乙酯萃取。用饱和氯化铵溶液及水洗涤该有机萃取物，用硫酸钠使其干燥。蒸馏除去溶剂后，通过硅胶柱色谱法纯化残渣，得到下述化学式(15)所示的6-氨基-2-氯-9-[反式-反式-2，3-双(三苯基甲氧基甲基)环丁基]嘌呤的白色晶体(273.9mg、产率59％)。另外，下述化学式(15)中，Tr为三苯甲基。 
Figure DEST_PATH_GDA0000136582610000011
以下示出该化合物的物性值。 
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.91(1H，s)，7.15-7.41(30H，m)，5.70(2H，br s)，4.73(1H，dd，J 17.2and 9.2)，3.70(1H，dd，J 10.0 and 4.8)，3.18-3.30(4H，m)，2.87-2.90(1H，m)，2.53-2.67(1H，m)，2.20-2.33(2H，m). 
(工序5：6-氨基-2-硫代甲氧基-9-[反式-反式-2，3-双(三苯基甲氧基甲基)环丁基]嘌呤的合成) 
将前述6-氨基-2-氯-9-[反式-反式-2，3-双(三苯基甲氧基甲基)环丁基]嘌呤(92.2mg、0.12mmol)及甲硫醇钠(84.1mg、1.20mmol)溶解到3.1mL DMF中，在110℃下加热3.5小时。加热结束后，在减压下蒸馏除去溶剂，用醋酸乙酯萃取得到的残渣。用水及饱和氯化钠溶液洗涤得到的有机萃取物，用硫酸钠进行干燥后，在减压下蒸馏除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(醋酸乙酯∶己烷＝1∶1)纯化得到的残渣，得到下述化学式(16)所示的6-氨基-2-硫代甲氧基-9-[反式-反式-2，3-双(三苯基甲氧基甲基)环丁基]嘌呤的带黄色的晶体(66.3mg、产率71％)。另外，下述化学式(16)中，SMe为甲硫基，Tr为三苯甲基。 
以下示出该化合物的物性值。 
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.68(1H，s)，7.14-7.41(30H，m)，5.43(2H，br s)，4.74(1H，dd，J 17.6 and 8.8)，3.18-3.33(4H，m)，2.90-3.03(1H，m)，2.53-2.65(1H，m)，2.33-2.48(2H，m)，2.29(3H，s). 
(工序6：2-SMe-C.OXT-A的合成) 
将前述6-氨基-2-硫代甲氧基-9-[反式-反式-2，3-双(三苯基甲氧基甲基)环丁基]嘌呤(65.0mg、0.08mmol)溶解到甲酸1.7mL及二乙醚1.7mL的混合液中，在室温下搅拌15分钟。搅拌结束后，将该混合液溶解到醋酸乙酯中，进行萃取。用饱和碳酸氢钠溶液及饱和氯化钠溶液洗涤得到的有机萃取物，用硫酸钠使其干燥。蒸馏除去有机溶剂后，通过薄层色谱(二氯甲烷∶乙醇＝5∶1)纯化残渣，得到前述化学式(9)所示的2-SMe-C.OXT-A(6-氨基-2-硫代甲氧基-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤)的带黄色的晶体(9.4mg、产率38％)。以下示出该化合物的物性值。 
1H-NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ8.04(1H，s)，4.64(1H，dd，J 17.6 and 8.8)，3.62-3.87(4H，m)，2.85-3.00(1H，m)，2.54(1H，s)，2.42-2.61(2H，m)，2.18-2.24(1H，m)；13C-NMR(100MHz，MeOH-d4)：δ167.5，165.5，155.2，138.9，118.2，64.1，62.2，48.6，33.5，29.3，28.2，13.1.Mp 209.4-211.0℃.HRMS(ESI)Calcd for C12H17N5NaO2S[M+Na]+：318.0995.Found 318.1052. 
对于本例的2-SMe-C.OXT-A，与实施例1同样地调查了对血管内皮细胞的细胞增殖、管腔形成及细胞迁移性的影响。其结果是，2-SMe-C.OXT-A显示出血管内皮细胞的细胞增殖促进活性、管腔形成促进活性及细胞迁移性促进活性。 
(实施例3) 
本例中，调查了实施例1中使用的2-Cl-C.OXT-A对ERK、Akt、JNK及p38的酶的活化(磷酸化)带来的影响。另外，这些蛋白质中，前述ERK是内皮细胞中的最具代表性的血管新生促进系蛋白磷酸化酶之一。前述Akt是与ERK通路并列的、内皮细胞中的最具代表性的血管新生促进系蛋白磷酸化酶之一。此外，JNK及p38是除ERK通路以外的、具代表性的MAP激酶蛋白磷酸化酶。 
首先，在添加有2v/v％灭活胎牛血清(FBS)的HuMedia-EB2培养基(KURABO INDUSTRIES LTD.制)中添加2-Cl-C.OXT-A，使其达到100μmol/L，从而调制了培养基。使用前述培养基，将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养规定的时间(0、10、20、30、45及60分钟)。 
培养后，回收细胞，添加Cell lysis buffer(SDS-lysis buffer)并使其溶解，在95℃下热变性5分钟。利用10％SD S-聚丙烯酰胺凝胶对热变性后的相当于细胞溶解液的5v/v％的分量的可溶性蛋白进行电泳，转移到硝酸纤维素膜(Amersham Biosciences公司制)上。向下述组成的TBS-T 20ml中添加脱脂牛奶(WakoCo.，Ltd.制)使其达到5％，从而调制了封闭液。将得到的硝酸纤维素膜浸渍到前述封闭液中，在室温下振荡1小时。 
(TBS-T的组成) 
10mmol/L          Tris 
0.15mol/L         NaCl 
0.1％             Tween(注册商标)-20 
将下述所示的第一抗体(primary antibody)添加到含有5％牛血清白蛋白(Sigma公司制)的TBS-T中并稀释1000倍，从而调制了第一抗体液。将封闭后的硝酸纤维素膜浸渍到前述第一抗体液中，在室温下振荡1小时。将得到的硝酸纤维素膜浸渍到前述TBS-T中，振荡10分钟进行洗涤。总计进行3次该洗涤操作。 
(第一抗体) 
抗phospho ERK多克隆抗体(目录编号9101、Cell Signaling Technology公司制) 
抗phospho Akt多克隆抗体(目录编号9271、CellSignaling Technology公司制) 
抗phospho p38多克隆抗体(目录编号9211、CellSignaling Technology公司制) 
抗phospho JNK多克隆抗体(目录编号9251、CellSignaling Technology公司制) 
抗总ERK单克隆抗体(目录编号610408、BD Transduction Laboratory公司制) 
抗总Akt多克隆抗体(目录编号9272、Cell Signaling Technology公司制) 
将下述所示的第二抗体(second antibody)添加到TBS-T中并稀释20000倍，从而调制了第二抗体液。将第一抗体反应后的硝酸纤维素膜浸渍到前述第二抗体液中，在室温下振荡1小时。将得到的硝酸纤维素膜浸渍到前述TBS-T中，振荡10分钟进行洗涤。总计进行3次该洗涤操作。 
(第二抗体) 
ERK： 
羊HRP标记抗小鼠IgG抗体(Pierce公司制) 
pERK、Akt、pAkt、pJNK及pp38： 
羊HRP标记抗兔IgG抗体(Pierce公司制) 
通过SuperSignal(注册商标)West Pico化学发光底物(Pierce公司制)进行显影，对RX-U X射线膜(富士胶片公司制)进行曝光从而检测。根据检测到的带，使用NIH图像分析软件，分别定量各磷酸化型酶和总酶。此外，将磷酸化型酶的测定值代入到下述式(III)中，算出磷酸化型酶相对值(倍)。 
磷酸化型酶相对值(倍)＝(B/D)/(A/C)...(III) 
A＝添加前的各磷酸化型酶的测定值 
B＝添加后各时间的各磷酸化型酶的测定值 
C＝添加前的各总酶的测定值 
D＝添加后各时间的各总酶的测定值 
图7及图8中示出经时测定ERK、Akt、JNK及p38的磷酸化型酶量的结果。图7(A)中，从上依次为磷酸化ERK(pERK)、ERK的免疫印迹的照片，从左依次为添加2-Cl-C.OXT-A 0、10、20、30、45及60分钟后的测定结果。图7(B)是表示图7(A)所示的pERK的定量结果的图表。图7(B)中，横轴为添加2-Cl-C.OXT-A后的培养时间(分钟)，纵轴为pERK相对值(倍)。此外，图8中，从上依次为磷酸化Akt(pAkt)、Akt、磷酸化JNK(pJNK)及磷酸化p38(pp38)的免疫印迹的照片，从左依次为添加2-Cl-C.OXT-A 0、10、20、30、45及60分钟后的测定结果。 
如图7所示那样，pERK随着培养时间而增加，在添加2-Cl-C.OXT-A 20分钟后增加至约11倍。与此相对，如图8所示那样，pAkt、pJNK及pp38没有由于2-Cl-C.OXT-A的添加而发生 变化。这样，通过2-Cl-C.OXT-A，促进了血管新生的信号传导物质即ERK的活化(磷酸化)。 
(实施例4) 
本例中，调查了实施例1的2-Cl-C.OXT-A及比较例2的C.OXT-G对ERK活化(磷酸化)带来的影响。本例中，使用以规定浓度(0、10及100μmol/L)添加了2-Cl-C.OXT-A的培养基和添加了100μmol/L C.OXT-G的培养基，将添加后的培养时间设定为20分钟，作为第一抗体，仅使用抗phospho ERK多克隆抗体(目录编号9101、Cell Signaling Technology公司制)及抗总ERK单克隆抗体(目录编号610408、BD Transduction Laboratory公司制)，作为ERK的第二抗体，使用羊HRP标记抗小鼠IgG抗体(Pierce公司制)，作为pERK的第二抗体，使用羊HRP标记抗兔IgG抗体(Pierce公司制)，除此以外与实施例3同样地测定各酶量，算出磷酸化型酶相对值(倍)。 
图9中示出了各添加浓度的磷酸化ERK的测定结果。图9(A)中，上段为磷酸化ERK(pERK)的免疫印迹的照片，下段为ERK的免疫印迹的照片，从左依次为2-Cl-C.OXT-A 0、10及100μmmol/L以及C.OC T-G的结果。图9(B)是表示图9(A)所示的pERK的定量结果的图表。图9(B)中，纵轴为pERK相对值(倍)，从左依次为2-Cl-C.OXT-A 0、10及100μmmol/L以及C.OCT-G的结果。 
如图9所示那样，pERK依赖于2-Cl-C.OXT-A的添加浓度而增加，在以100μmol/L浓度添加时，增加至约10倍。与此相对，pERK量没有由于前述C.OCT-G的添加而增加。这样，通过10μmmol/L或100μmmol/L浓度的2-Cl-C.OXT-A的添加，活化了血管新生的信号传导物质即ERK。 
(实施例5) 
本例中，调查了实施例1中使用的2-Cl-C.OXT-A对MEK的磷酸化带来的影响。另外，前述MEK是位于实施例3中测定的ERK的上游侧的、血管新生的信号传导通路的蛋白磷酸化酶，具有促进血管新生的作用。本例中，将添加2-Cl-C.OXT-A后的培养时间设定为规定时间(0、5、10、15及20分钟)，作为第一抗体，使用抗phospho MEK多克隆抗体(目录编号9121、CellSignaling Technology公司制)及抗总MEK多克隆抗体(目录编号9122、Cell Signaling Technology公司制)，作为第二抗体，使用羊HRP标记抗兔IgG抗体(Pierce公司制)，除此以外与实施例3同样地测定各酶量，算出磷酸化型酶相对值(倍)。 
图10(A)中，上段为pMEK(磷酸化MEK)的免疫印迹的照片，下段为MEK的免疫印迹的照片，从左依次为添加2-Cl-C.OXT-A 0、5、10、15及20分钟后的测定结果。图10(B)是表示图10(A)所示的pMEK的定量结果的图表。图10(B)中，横轴为添加2-Cl-C.OXT-A后的培养时间(分钟)，纵轴为pMEK相对值(倍)。如图10所示那样，pMEK随着培养时间而增加，在添加2-Cl-C.OXT-A 15分钟后，增加至约3.5倍。这样，通过2-Cl-C.OXT-A，促进了血管新生的信号传导物质即MEK的活化(磷酸化)。 
(实施例6) 
本例中，调查了MEK抑制剂PD98059对基于实施例1中使用的2-Cl-C.OXT-A的ERK活化(磷酸化)带来的影响。本例中，使用在添加有2v/v％灭活胎牛血清(FBS)的HuMedia-EB2培养基(KURABO INDUSTRIES LTD.制)中以下述表1所示的浓度添加有2-Cl-C.OXT-A及PD98059的培养基No.1～4，除此以外与实施例4同样地测定各酶量，算出磷酸化型酶相对值(倍)。 
(表1) 
Figure BDA0000064477590000521
图11中示出PD98059带来的抑制ERK活化(磷酸化)的效果的测定结果。图11(A)中，上段为pERK(磷酸化ERK)的免疫印迹的照片，下段为ERK整体的免疫印迹的照片，从左依次为培养基No.1、No.2、No.3及No.4的测定结果。图11(B)是表示图11(A)所示的pERK的定量结果的图表。图11(B)中，纵轴为pERK(pERK1及pERK2)相对值(倍)，从左依次为培养基No.1、No.2、No.3及No.4的测定结果。 
如图11所示那样，在添加了2-Cl-C.OXT-A的No.2中，pERK增加，但在PD95059共存的No.4中，未见到pERK的增加。此外，在未添加2-Cl-C.OXT-A的No.1及仅添加了PD95059的No.3中，也未见到pERK的增加。这样，通过PD95059，抑制了基于2-Cl-C.OXT-A的ERK活化。由此暗示了，基于2-Cl-C.OXT-A的ERK活化是介由MEK介导的特异性MAP激酶通路的。 
(实施例7) 
本例中，调查了MEK抑制剂PD98059对基于实施例1中使用的2-Cl-C.OXT-A的管腔形成带来的影响。 
本例中，对使用了在前述血管新生试剂盒(KURAB OINDUSTRIES LTD.制)附带的培养基中以下述表2所示的浓度添加了2-Cl-C.OXT-A及PD98059的培养基No.5～8的4组进行测定，除此以外与实施例1的管腔形成测定同样地算出管腔面积相 对值。此外，在No.7组中，培养第1～3天使用No.7进行培养，培养第4～10天使用No.5进行培养，在No.8组中，培养第1～3天使用No.8进行培养，培养第4～10天使用No.6进行培养。 
(表2) 
Figure BDA0000064477590000531
图12中示出比较管腔面积相对值的图表。图12中，纵轴为管腔面积相对值，从左依次为培养基No.5、No.6、No.7及No.8组的测定结果。在仅添加了2-Cl-C.OXT-A的No.6组中，管腔面积相对值达到No.5组(对照)的约3倍，但通过前述PD98059的并用，被抑制到约1倍。这样显示了，基于2-Cl-C.OXT-A的管腔形成促进与前述的ERK的活化同样地受到PD95059的抑制。 
(实施例8) 
本例中，调查了VEGFR抑制剂SU5416对基于实施例1中使用的2-Cl-C.OXT-A的ERK活化(磷酸化)带来的影响。本例中，使用在添加了2v/v％灭活胎牛血清(FBS)的HuMedia-EB2培养基(KURABO INDUSTRIES LTD.制)中以下述表3所示的浓度添加有2-Cl-C.OXT-A及PD98059的培养基No.9～14，除此以外与实施例4同样地测定各酶量，算出磷酸化型酶相对值(倍)。 
(表3) 
Figure BDA0000064477590000541
图13中示出SU5416带来的抑制ERK活化(磷酸化)的效果的测定结果。图13(A)为pERK(磷酸化ERK)的免疫印迹的照片，从左依次为培养基No.9、No.10、No.11、No.12、No.13及No.14的测定结果。图13(B)是表示图13(A)所示的pERK(pERK1及pERK2)的定量结果的图表。图13(B)中，纵轴为pERK(pERK1及pERK2)相对值(倍)，从左依次为培养基No.9、No.10、No.11、No.12、No.13及No.14的测定结果。 
如图13所示那样，pERK在添加了2-Cl-C.OXT-A的No.11中增加，在SU5416共存的No.12中也增加。此外，在未添加2-Cl-C.OXT-A的No.9及仅添加了SU5416的No.10中，pERK并未增加。另一方面，pERK在添加了阳性对照VEGF的No.13中增加，但在SU5416共存的No.14中增加受到抑制。这样，基于2-Cl-C.OXT-A的ERK活化未受到SU5416的抑制。由此显示了，基于2-Cl-C.OXT-A的ERK活化机制与阳性对照VEGF不同，不依赖于VEGF受体的活性。 
(实施例9) 
本例中，调查了VEGFR抑制剂SU5416对基于实施例1中使用的2-Cl-C.OXT-A的管腔形成带来的影响。 
本例中，对使用了在前述血管新生试剂盒(KURABOINDUSTRIES LTD.制)附带的培养基中以下述表4所示的浓度添加了2-Cl-C.OXT-A、VEGF(阳性对照)及SU5416的培养基No.15～20的6组进行测定，除此以外与实施例1的管腔形成测定 同样地算出管腔面积相对值。此外，在No.16组中，培养第1～3天使用No.16进行培养，培养第4～10天使用No.15进行培养；在No.18组中，培养第1～3天使用No.18进行培养，培养第4～10天使用No.17进行培养；在No.20组中，培养第1～3天使用No.20进行培养，培养第4～10天使用No.19进行培养。 
(表4) 
Figure BDA0000064477590000551
图14中示出比较管腔面积相对值的图表。图14中，纵轴为管腔面积相对值，从左依次为培养基No.15、No.16、No.17、No.18、No.19及No.20组的测定结果。如图14所示那样，在添加了VEGF的No.19中，管腔面积增加，但在并用了VEGF和SU5416的No.20中，管腔面积减少。与此相对，在添加了2-Cl-C.OXT-A的No.17中，管腔面积显著增加，在并用了2-Cl-C.OXT-A和SU5416的No.18中，管腔面积增加，但与前述No.17相比增加率较低。这样，基于2-Cl-C.OXT-A的管腔形成促进未受到SU5416的抑制。另外，仅添加了SU5416的No.16的管腔形成与未添加SU5416的No.15(对照)相比减少。可以认为其原因在于，基于该评价体系中使用的成纤维细胞来源的VEGF的管腔形成促进由于SU5416的添加而受到抑制。因此推测，No.18中的增加抑制是由于基于成纤维细胞来源的VEGF的管腔形成受到抑 制。这样显示了，基于2-Cl-C.OXT-A的管腔形成促进机制与ERK的活化促进机制同样地不依赖于VEGF受体的活性。 
(实施例10) 
本例中，使用从理化学研究所生物资源中心获得的神经细胞模型细胞即大鼠肾上腺髓质来源细胞系PC 12，调查了实施例1的2-Cl-C.OXT-A对PC12细胞的分化带来的影响。 
向PB S中添加下述表5所示的添加物，使其达到规定浓度，从而调制了3种样品。向DMEM(无血清)中添加各样品或PBS，使其达到10v/v％，从而调制了评价用培养基。此外，作为对照用培养基，调制了仅DMEM(无血清)的培养基。将前述PC12细胞悬浮到添加有5v/v％牛血清及10v/v％马血清的DMEM中，使其达到5×104细胞/mL，调制了细胞悬浮液。将前述细胞悬浮液3mL接种到6cm培养皿中，在培养第2天，更换成前述评价用培养基，培养4天。在培养第6天，在显微镜下对细胞拍摄照片，使用Ellman法(Ellman，G.L.，et a1.、Biochem.Pharmacol.、7、88-95、(1961))，测定AChE活性。具体而言，前述AChE活性如下所述进行测定。培养后，用细胞刮棒(cell scraper)剥离PC 12细胞，并回收。将回收的细胞轻微离心分离(1200rpm、15分钟)，除去上清，然后添加0.1w/v％Triton(注册商标)X-100水溶液150μL，调制了试样溶液。向75μL吸光度测定用的比色杯中加入前述试样溶液、10mmol/L DTNB 75μL、0.1mol/L磷酸缓冲液(pH 8.0)3.0mL，最后添加100mmol/L乙酰硫代胆碱50μL使其反应，从刚添加后起测定412nm下的前述反应液的吸光度5分钟。由前述吸光度求出每分钟的吸光度的增加量(C)。此外，使用PIERCE(注册商标)BCA Protein Assay Kit(ThermoFisher Scientific公司制)，测定前述试样溶液的蛋白质浓度(D)。将前述吸光度增加量(C)及蛋白质浓度(D)代入到下述式(IV) 中，算出AChE活性。另外，1U是每分钟产生1μmol的反应产物的酶量(μmol/分钟)。并且，将AChE的测定值代入到下述式(V)中，算出AChE活性相对值(倍)。 
AChE活性(U/mg)＝3.14×(C/D)...(IV) 
AChE相对值(倍)＝F/E        ...(V) 
E＝对照用培养基中的AChE的测定值 
F＝含有各添加物的培养基中的AChE的测定值 
(表5) 
Figure BDA0000064477590000571
<形态变化> 
图15(A)～(D)中示出PC12细胞的显微镜照片。图15(A)为添加PBS而培养得到的细胞的照片，图15(B)为添加NGF(神经生长因子、阳性对照)而培养得到的细胞的照片，图15(C)为添加2-Cl-C.OXT-A 50μmol/L而培养得到的细胞的照片，图15(D)为添加2-Cl-C.OXT-A 100μmol/L而培养得到的细胞的照片。图15(A)所示的棒的长度为100μm。图15中，线状的轴突伸长的细胞是PC 12细胞分化成的神经元样细胞。如图15(A)所示那样，对照中，基本未观察到线状的轴突伸长的细胞。与此相对，如图15(C)及(D)所示那样，与图15(B)的NGF同样地，通过2-Cl-C.OXT-A的添加，观察到线状的轴突伸长的细胞。 
<AChE活性> 
图16中示出AChE(乙酰胆碱酯酶)活性的测定结果。AChE活性是PC 12细胞分化的标记。图16中，纵轴为AChE活性相对 值，各棒从左依次为PBS、NGF(阳性对照)、2-Cl-C.OXT-A50μmol/L及2-Cl-C.OXT-A 100μmol/L的结果。如图16所示那样，通过2-Cl-C.OXT-A，与NGF同样地，AChE酶活性增加。这样，显示了基于2-Cl-C.OXT-A的向神经元样细胞分化的促进活性，确认到神经细胞生长促进活性。 
(实施例11) 
本例中，利用兔角膜法调查了实施例1的2-Cl-C.OXT-A对血管新生带来的影响。 
向30μL的生理盐水中添加2-Cl-C.OXT-A，使其达到16mmol/L，从而调制了试样。在七氟烷麻醉下，向日本白色家兔(雄、2.8kg)的角膜内注射前述试样，7天后进行观察。 
图17中示出了兔眼球的观察结果。图17(A)是表示生理盐水的投与结果的照片，图17(B)是表示2-Cl-C.OXT-A的投与结果的照片。如图17(A)所示那样，通过投与生理盐水，未确认到血管新生。与此相对，如图17(B)所示那样，通过投与2-Cl-C.OXT-A，在角膜内确认到很多血管新生。这样，在利用兔角膜法的体内(in vivo)试验中，确认到2-Cl-C.OXT-A带来的血管新生促进活性。 
由以上的实施例1～11及比较例1～10表明的那样，确认到本发明的环丁基嘌呤衍生物带来的细胞增殖促进活性、血管新生促进活性、管腔形成促进活性、细胞迁移促进活性及神经细胞生长促进活性。 
(实施例12) 
对于下述化学式(17)所示的9-[反式-反式-2，3-双(乙酰氧基甲基)环丁基]鸟嘌呤，与实施例1同样地调查了对血管内皮细胞的细胞增殖、管腔形成及细胞迁移性的影响。其结果是，下述化学式(17)的化合物显示出血管内皮细胞的细胞增殖促 进活性、管腔形成促进活性及细胞迁移性促进活性。 
Figure BDA0000064477590000591
另外，前述化学式(17)所示的9-[反式-反式-2，3-双(乙酰氧基甲基)环丁基]鸟嘌呤可以通过公知的方法适当合成。具体而言，例如在乙腈溶剂中，在三乙胺及4-二甲基氨基吡啶的存在下，用醋酸酐进行乙酰化，能够得到前述化学式(12)所示的C.OXT-G(2-氨基-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]-3H-嘌呤-6-酮、即9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]鸟嘌呤)。该合成方法例如在日本特开平03-047169号公报、美国专利第5153352号公报(US5153352A)、及欧州专利申请公开第0366059号说明书(EP0366059A2)中有记载。此外，前述化学式(12)的C.OXT-G(2-氨基-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]-3H-嘌呤-6-酮、即9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]鸟嘌呤)也可以通过公知的方法来适当合成，例如在前述日本特开平03-047169号公报、美国专利第5153352号公报(US5153352A)、及欧州专利申请公开第0366059号说明书(EP0366059A2)中记载了合成法。 
(实施例13) 
本例中，合成了下述化学式(18)所示的8-溴-9-[反式-反式-2，3-双(乙酰氧基甲基)环丁基]鸟嘌呤。 
Figure BDA0000064477590000601
首先，将前述化学式(17)所示的9-[反式-反式-2，3-双(乙酰氧基甲基)环丁基]鸟嘌呤175mg(0.5mmol)溶解到醋酸3.5mL中，进-步加入醋酸钠175mg使其溶解。将该溶液作为A液。另一方面，将N-溴琥珀酰亚胺110mg(0.62mmol)溶解到2mL的醋酸中。将该溶液作为B液。边搅拌边向前述A液中滴加B液。将该混合溶液在室温下放置30分钟，进一步在4℃下放置一夜。然后，在减压下蒸馏除去溶剂，将残渣溶解到醋酸乙酯20mL与水10mL的混合液中。从该混合液分离水层，浓缩有机层时，析出晶体。此外，从分离的水层中也析出晶体。分别通过过滤采集从前述有机层及水相析出的晶体，使其干燥，以收量154mg(0.40mmol、产率80％)得到目标物8-溴-9-[反式-反式-2，3-双(乙酰氧基甲基)环丁基]鸟嘌呤(18)。以下示出该化合物的物性值。 
FT-MS m/z＝450、452(M++Na)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.76(1H，br s)，6.48(2H，br s)，4.58(1H，m)，4.21(3H，d，J＝7.2Hz)，4.07(3H，d，J＝6.0Hz)，3.42(1H，m)，2.81(1H，m)，2.35(1H，m)，2.22(1H，m)，2.02(3H，s)，1.92(3H，s) 
对于该8-溴-9-[反式-反式-2，3-双(乙酰氧基甲基)环丁基]鸟嘌呤(化学式(18))，与实施例1同样地调查了对血管内皮细胞的细胞增殖、管腔形成及细胞迁移性的影响。其结果是，该 化合物显示出血管内皮细胞的细胞增殖促进活性、管腔形成促进活性及细胞迁移性促进活性。 
(实施例14) 
合成了下述化学式(19)所示的8-溴-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]鸟嘌呤。 
Figure BDA0000064477590000611
将前述化学式(18)所示的8-溴-9-[反式-反式-2，3-双(乙酰氧基甲基)环丁基]鸟嘌呤39mg(0.091mmol)溶解到5mL的2M氨甲醇溶液中，在25℃下放置1天。浓缩该溶液时，得到目标物8-溴-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]鸟嘌呤(19)的略带黄色的晶体。产量为21mg(0.061mmol，产率67％)。以下示出该化合物的物性值。 
FT-MS m/z＝366、368(M++Na)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.52(1H，br s)，6.47(2H，br s)，4.60(2H，m)，4.50(1H，t，J＝5.2Hz)，3.59(2H，t，J＝5.6Hz)，3.43(2H，t，J＝4.8Hz)，3.25(1H，m)，2.57(1H，q，J＝10.0Hz)，2.26(1H，m)，2.02(1H，m). 
对于该8-溴-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]鸟嘌呤(化学式(19))，与实施例1同样地调查了对血管内皮细胞的细胞增殖、管腔形成及细胞迁移性的影响。其结果是，该化合物 显示出血管内皮细胞的细胞增殖促进活性、管腔形成促进活性及细胞迁移性促进活性。 
(实施例15) 
合成了下述化学式(20)所示的2-氨基-6，8-二氯-9-[反式-反式-2，3-双(乙酰氧基甲基)环丁基]嘌呤。 
Figure BDA0000064477590000621
首先，将前述化学式(18)所示的8-溴-9-[反式-反式-2，3-双(乙酰氧基甲基)环丁基]鸟嘌呤154mg(0.4mmol)及四乙基氯化铵150mg溶解到5mL的乙腈中。向该溶液进一步加入N，N-二甲基苯胺0.16mL(1.3mmol)及磷酰氯0.7mL(7.7mmol)，在室温下放置30分钟后，在100℃下加热回流30分钟进行反应。然后，将前述反应溶液滴加到冰水中，搅拌15分钟后，用氯仿萃取目标物。用5％碳酸氢钠水、及水洗涤前述氯仿层后，浓缩，通过硅胶柱色谱法(己烷∶醋酸乙酯＝2∶1)进行分离，得到目标物2-氨基-6，8-二氯-9-[反式-反式-2，3-双(乙酰氧基甲基)环丁基]嘌呤(20)的白色晶体。产量为86mg(0.21mmol、产率53％)。以下示出该化合物的物性值。 
FT-MS m/z＝424，426，428(M++Na)；1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.16(2H，br s)，4.70(1H，m)，4.35(2H，d，J＝6.4Hz)， 4.17(2H，m)，3.62(1H，m)，2.89(1H，m)，2.52(1H，m)，2.33(1H，m)，2.10(3H，s)，2.02(3H，s). 
对于该2-氨基-6，8-二氯-9-[反式-反式-2，3-双(乙酰氧基甲基)环丁基]嘌呤(化学式(20))，与实施例1同样地调查了对血管内皮细胞的细胞增殖、管腔形成及细胞迁移性的影响。其结果是，该化合物显示出血管内皮细胞的细胞增殖促进活性、管腔形成促进活性及细胞迁移性促进活性。 
(实施例16) 
合成了下述化学式(21)所示的2-氨基-6，8-二甲氧基-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤。 
Figure BDA0000064477590000631
首先，将前述化学式(20)所示的2-氨基-6，8-二氯-9-[反式-反式-2，3-双(乙酰氧基甲基)环丁基]嘌呤75mg(0.186mmol)悬浮到6mL的甲醇中。向该悬浮液中进一步加入23％甲醇钠0.5mL并进行搅拌，将前述原料化合物(20)溶解到甲醇中。将该溶液在60℃下加热一夜，使其反应。反应后，用醋酸中和前述溶液，浓缩后，用硅胶柱(醋酸乙酯∶甲醇＝12∶1)进行分离，蒸馏除去溶剂。使得到的残渣从醋酸乙酯中结晶化(重结晶)，得到目标物2-氨基-6，8-二甲氧基-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤(21)的白色晶体。产量为34.4mg(0.111mmol、产率60％)。以下示出该化合物(21)的物性值。 
FT-MS m/z＝310(M++H)；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ4.44-4.55(3H，m)，3.99(3H，s)，3.88(3H，s)，3.52(2H，t，J＝6.0Hz)，3.40(2H，t，J＝5.2Hz)，3.01(1H，m)，2.31(1H，m)，2.20(1H，m)，1.98(1H，m). 
对于该2-氨基-6，8-二甲氧基-9-[反式-反式-2，3-双(羟甲基)环丁基]嘌呤(化学式(21))，与实施例1同样地调查了对血管内皮细胞的细胞增殖、管腔形成及细胞迁移性的影响。其结果是，该化合物显示了血管内皮细胞的细胞增殖促进活性、管腔形成促进活性及细胞迁移性促进活性。 
产业上的可利用性
本发明的环丁基嘌呤衍生物、其互变异构体或立体异构体、或它们的盐、溶剂化物或水合物是化学性质稳定的低分子物质，由于分子量低，所以吸收性高。此外，本发明的环丁基嘌呤衍生物、其互变异构体或立体异构体、或它们的盐、溶剂化物或水合物由于能够在工业上生产，所以能够廉价地稳定地供给。并且，本发明的环丁基嘌呤衍生物、其互变异构体或立体异构体、或它们的盐、溶剂化物或水合物能够应用于利用了细胞增殖促进活性、血管新生促进活性、管腔形成促进活性、细胞迁移促进活性及神经细胞生长促进活性中的至少一种活性的各种药品、准药品等，适用领域广，不受限制。 

Claims (15)

1.下述通式（1）所示的环丁基嘌呤衍生物或其互变异构体、或它们的盐或水合物，
前述通式（1）中，
X1为卤代基、碳原子数为1～8的直链或支链的烷硫基或氨基，
X2为卤代基、氨基、氧代基或碳原子数为1～8的直链或支链的烷氧基，
X3为氢原子、卤代基或碳原子数为1～8的直链或支链的烷氧基，
R1及R2相同，为CH2OH或CH2OAc，
X1为氨基的情况下，
X2及X3均为卤代基，或
X2及X3均为碳原子数为1～8的直链或支链的烷氧基，或、
X2为羟基，X3为卤代基，并且，R1及R2均为碳原子数为2～8的直链或支链的酰氧基烷基。
2.根据权利要求1所述的环丁基嘌呤衍生物或其互变异构体、或它们的盐或水合物，其中，前述通式（1）中，前述X1为氯基或硫代甲氧基。
3.根据权利要求1或2所述的环丁基嘌呤衍生物或其互变异构体、或它们的盐或水合物，其中，前述通式（1）中，前述X2为氨基。
4.根据权利要求1所述的环丁基嘌呤衍生物或其互变异构体、或它们的盐或水合物，其中，前述通式（1）中，前述R1及R2为羟甲基。
5.根据权利要求1所述的环丁基嘌呤衍生物或其互变异构体、或它们的盐或水合物，其中，前述通式（1）中，前述X1为氯基或硫代甲氧基，前述X2为氨基，前述R1及R2为羟甲基。
6.根据权利要求1所述的环丁基嘌呤衍生物或其互变异构体、或它们的盐或水合物，其为6-氨基-2-氯-9-[反式-反式-2,3-双（羟甲基）环丁基]嘌呤或6-氨基-2-硫代甲氧基-9-[反式-反式-2,3-双（羟甲基）环丁基]嘌呤或其互变异构体、或它们的盐或水合物。
7.根据权利要求1所述的环丁基嘌呤衍生物或其互变异构体、或它们的盐或水合物，其为2-氨基-6,8-二甲氧基-9-[反式-反式-2,3-双（羟甲基）环丁基]嘌呤、8-溴-9-[反式-反式-2,3-双（乙酰氧基甲基）环丁基]鸟嘌呤或2-氨基-6,8-二氯-9-[反式-反式-2,3-双（乙酰氧基甲基）环丁基]嘌呤。
8.一种促进剂，其具有选自由血管新生促进功能、管腔形成促进功能及神经细胞生长促进功能组成的组中的至少一种功能，该促进剂包含权利要求1所述的环丁基嘌呤衍生物或其互变异构体、或它们的盐或水合物所组成的组中的至少一种。
9.一种促进剂，其具有选自由血管新生促进功能、管腔形成促进功能及神经细胞生长促进功能组成的组中的至少一种功能，该促进剂包含下述通式（1′）所示的环丁基嘌呤衍生物或其互变异构体、或它们的盐或水合物，
Figure FDA0000396891780000031
前述通式（1′）中，
X1′为卤代基、碳原子数为1～8的直链或支链的烷硫基或氨基，
X2′为卤代基、氨基、氧代基、或碳原子数为1～8的直链或支链的烷氧基，
X3′为氢原子、卤代基或碳原子数为1～8的直链或支链的烷氧基，
R1′及R2′相同，为CH2OH或CH2OAc，
X1′为氨基且X3′为氢原子的情况下，R1′及R2′为除羟烷基以外的原子或取代基。
10.根据权利要求9所述的促进剂，其中，前述通式（1′）中，前述X1′为氯基或硫代甲氧基。
11.根据权利要求9或10所述的促进剂，其中，前述通式（1′）中，前述X2′为氨基。
12.根据权利要求9或10所述的促进剂，其中，前述通式（1′）中，前述R1′及R2′为羟甲基。
13.根据权利要求9所述的促进剂，其中，前述通式（1′）中，前述X1′为氯基或硫代甲氧基，前述X2′为氨基，前述X3′为氢原子，前述R1′及R2′为羟甲基。
14.一种药品，其具有选自由血管新生促进用、管腔形成促进用及神经细胞生长促进用组成的组中的至少一种用途，该促进剂包含选自由权利要求8或9所述的促进剂组成的组中的至少一种。
15.根据权利要求14所述的药品，其为选自由创伤治愈药、阿尔茨海默氏病治疗药、阿尔茨海默氏病预防药、梗塞性疾病治疗药、梗塞性疾病预防药及生发剂组成的组中的至少一种。
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