CN102188469A

CN102188469A - 具有保肝护肝作用的杭白菊提取物及其提取方法和应用

Info

Publication number: CN102188469A
Application number: CN 201110139621
Authority: CN
Inventors: 康文艺; 魏金凤; 王金梅; 黄嬛; 廉婷婷
Original assignee: Henan University
Current assignee: Henan University
Priority date: 2011-05-27
Filing date: 2011-05-27
Publication date: 2011-09-21

Abstract

本发明属于制药领域，涉及具有保肝护肝作用的杭白菊提取物，该提取物选自杭白菊水提醇沉后的液相产物或沉淀物。以上提取物可通过下述方法获得：过滤杭白菊水煎液，对滤液进行至少两次醇沉：首次醇沉时调整酒精度至60~65%，静置，固液分离后沉淀备用，液相调整酒精度至65~70%以进行二次醇沉；静置，固液分离后将液相浓缩干燥即得液相产物。另外合并两次沉淀，干燥，得沉淀物。同时，本发明还涉及杭白菊提取物的应用，即，将所述杭白菊提取物用于制备保肝护肝药物。实验证实，杭白菊的乙醇提取物能够显著降低急性肝损伤小鼠血清中的GPT、GOT的含量以及小鼠肝组织中的MDA含量，升高SOD；杭白菊多糖能够显著降低急性肝损伤小鼠血清中的GOT含量，提高肝组织SOD。

Description

具有保肝护肝作用的杭白菊提取物及其提取方法和应用

技术领域

本发明属于制药领域，涉及一种杭白菊提取物及其提取方法，同时还涉及该提取物的应用。

背景技术

肝损伤是由多种病因引起且有多种因素参与的复杂过程。肝损伤引发的肝脏疾病已成为常见病、多发病，更为严重的是其引发的肝功能衰竭和肝性脑病等，发病率和死亡率高，极大地威胁着人类健康。很多因素可引起肝损伤。体内模型特别是化学性肝损伤模型在形态学、病理生理学的某些方面与人慢性肝病较为相似。CCl₄引起肝损伤的机制是CCl₄在肝微粒体细胞色素P450激活下生成自由基CCI₃·及Cl·，这些自由基可与肝细胞内大分子发生共价结合，也可攻击膜下不饱和脂质，引起脂质过氧化，从而使肝细胞损伤，细胞质内GPT、GOT渗入血液，表现为血清中GPT、GOT活性升高。SOD活性及MDA含量常可反映体内脂质过氧化反应程度，间接反映机体组织、细胞损伤的程度。通过检测小鼠肝匀浆中的SOD活性及MDA含量可反映出药物对肝细胞的保护作用。因此，以血清GPT、GOT、肝组织SOD活性及MDA含量作为指标来探讨药物对肝脏的保护作用是非常有意义的。

目前，肝损伤的治疗方法有很多，且均有一定疗效，但也存在着明显的不足。首先，西药具有较大的毒副作用，且疗效并不确切。而另一方面，实验和临床研究证实，中药在抗菌抗病毒、改善肝功能、抗氧化、改善微循环、调节免疫功能以及抗肝纤维化等方面显示出良好的疗效，安全、可靠、有效，进一步显示出中医辨证论治的合理性，突显了中药在治疗肝损伤，尤其是内毒素性急性肝损伤方面的良好前景。

杭白菊[Dendranthema morifolium (Ramat) Tzvel, DM] 为菊科菊属植物，产于浙江桐乡，为浙八味之一，是驰名中外的药材，也是菊花茶中最好的一个品种。杭白菊中含有菊甘、氨基酸、维生素等多种成分，具有解暑降温、清肝明目、提神、利尿的作用，以菊汤沐浴，有去痒爽身、护肤美容的功能。

关于杭白菊的药理作用，国内已有较多研究，已发现杭白菊具有抗菌、抗氧化、清除生物体内自由基、降血脂、抗心血管疾病等功能，但尚不明确杭白菊提取物是否具有保肝护肝作用。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种杭白菊提取物，同时还提供了相应的提取方法。进一步的，本发明还提供了杭白菊提取物在保护肝脏方面的应用。

基于上述目的，本发明采取了如下技术方案：

具有保肝护肝作用的杭白菊提取物，选自杭白菊水提醇沉后的液相产物或沉淀物。

所述杭白菊提取物的提取方法，其步骤包括：过滤杭白菊水煎液，对滤液进行至少两次醇沉：首次醇沉时调整酒精度至60~65%，静置，固液分离后沉淀备用，液相调整酒精度至65~70%以进行二次醇沉；静置，固液分离后将液相浓缩干燥即得液相产物（乙醇提取物）。

另外，合并两次沉淀，干燥，得沉淀物（多糖）。

所述杭白菊提取物的应用在于将所述杭白菊提取物用于制备保肝护肝药物。

本发明提供的杭白菊提取物选自杭白菊水提醇沉后的液相产物（乙醇提取物）或沉淀物（多糖）。为证实上述提取的保肝护肝作用，本发明以联苯双酯为阳性对照，分别考察了杭白菊多糖及乙醇提取物对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠的治疗作用。实验结果表明，杭白菊多糖能够显著降低急性肝损伤小鼠血清中的GOT含量，并能显著提高肝组织SOD。而杭白菊乙醇提取物不仅能够显著降低急性肝损伤小鼠血清中的GPT、GOT的含量以及小鼠肝组织中的MDA含量，升高SOD的作用也非常明显。这表明，本发明的杭白菊乙醇提取物对急性肝损伤具有很好的保护作用。

从上述实验结果中还可以看出，多糖与乙醇提取物在保肝护肝方面的效能存在一定差异，其中以乙醇提取物较优。多糖是广泛存在于动物和植物中的一类高分子，具有多种生理活性，如免疫、抗病毒和降血糖等，但多糖类成分存在吸水性强、生物利用度不高和对某些细胞穿透能力不强等缺陷，这些缺陷可能会对乙醇提取物的吸收产生一定的干扰。但在常规的煎服方式中，这种干扰则无法免除。除此之外，常规煎服中乙醇提取物和多糖的比例固定，即使联用，也无法根据其效能差异而调整用量比例。相反，分别提取则具有可以灵活调整的优势。

在本发明所提供的提取方法中，杭白菊水煎液可通过以下方法获得：杭白菊加水煎煮2-3次，每次0.5-1.5h，合并煎液；而在醇沉时，每次可静置4-6h。

具体实施方式

实施例1：

具有保肝护肝作用的杭白菊提取物，选自杭白菊水提醇沉后的液相产物（乙醇提取物）或沉淀物（多糖），由以下方法提取获得：取干燥的杭白菊，用水煎煮2次，每次1h，滤过，滤液调整酒精度65%，静置6 h，离心分离后所得沉淀备用，上清液（即离心所得液相）调整酒精度至70%进行二次醇沉；静置4h后再次离心，分离出的液相浓缩后用微波真空干燥，得到乙醇提取物；合并两次离心所得沉淀并用微波真空干燥，得到杭白菊多糖。

不同提取物的得率为：A：多糖：22.4%；B：乙醇提取物：1.04%。

将上述杭白菊提取物用于制备保肝护肝药物：

1）菊花泡腾片（杭白菊多糖）：片重设定为0.4g，杭白菊多糖：0.14g；柠檬酸：0.11 g；碳酸氢钠：0.09 g；PEG6000：0.01 g；90%食用乙醇适量。制备方法：将杭白菊多糖分为两份，一份与柠檬酸混合均匀，一份与碳酸氢钠混合均匀，然后分别加90%的食用乙醇制成酸粒和碱粒，分别用14-16目尼龙筛整粒后于50±3℃下鼓风干燥至含水量≤3%。取上述干燥的酸粒和碱粒与PEG混合均匀，压片即得菊花泡腾片。

2）乙醇提取物胶囊：取杭白菊乙醇提取物436.84g，分铺烘盘上，放入烘箱中于40-50℃下干燥至含水量在3%以下，然后将烘干所得块状物研成粉末并过8目筛，按照0.4g粉末/粒的规格直接装入胶囊，制成1000粒胶囊剂，包装。

实施例2：效果试验

（一）实验动物：成年昆明小鼠，雄性，体重20 ± 2 g。

（二）主要试剂与仪器：谷草转氨酶（GOP），谷丙转氨酶（GPT），超氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA）测定试剂盒 (南京建成生物工程研究所)；四氯化碳（分析纯，天津市红岩化学试剂厂，批号：20091208）；精制大豆油（市售金龙鱼大豆油）；联苯双酯（浙江万邦药业有限公司，批号：100311）。

0.3 %四氯化碳油溶液：取四氯化碳分散到精制大豆油中，用磁力搅拌器强力搅拌2 h；现用现配。

UV 2000型紫外可见分光光度计 (尤尼可上海仪器有限公司)；Multiskan MK3酶标仪 (Thermo Electron)；LRH-150恒温培养箱 (上海一恒科技有限公司)。

（三）实验方法：将90只健康昆明小鼠随机分为9组，分别为空白组、模型组、阳性对照组、杭白菊多糖高中低三个剂量组（A3、A2、A1）、乙醇提取物高中低三个剂量组（B3、B2、B1）。正常对照组和模型组每天灌胃等剂量的CMC-Na（300 mg/kg )，其余各组每天灌胃如表1所列相应药物，连续8 d，最后一次给药后2 h开始造模（按照0.1 mL/10 g体重腹腔注射（ip）0.3 %四氯化碳油溶液）；禁食不禁水16 h后，摘眼球取血，分离血清，0-3℃保存，测GPT和GOT，结果列于表1。快速分离肝脏，制备10%和1%的匀浆液，离心取上清液，0-3℃保存，测MDA和SOD（结果见表2），并用考马斯亮蓝法测定10%和1%组织匀浆液的蛋白含量。

（四）实验结果：

表1杭白菊提取物对急性肝损伤小鼠GPT和GOT的影响

Table1 Effect of Dendranthema morifolium on serum GPT and GOT inmice of liver injury

与空白组比较△△△P<0.001

与模型组比较*P<0.05**P<0.01***P<0.001

表2杭白菊提取物对急性肝损伤小鼠MDA和SOD的影响

Table 2 Effect of Dendranthema morifolium on MDA and SOD in mice of liver injur

与空白组比较^△△△P<0.001

与模型组比较比较*P<0.05 **P<0.01 ***P<0.001

（1）从表1可以看出，模型组与正常对照组相比，血清中GPT和GOT含量升高，且具有极显著性差异 (P<0.001)，说明造模成功。杭白菊的乙醇提取物(B)能够显著的降低急性肝损伤小鼠血清中GPT和GOT的含量(p<0.01, p<0.001)。杭白菊多糖(A）能显著降低GOT含量(p<0.001)。表明杭白菊高剂量对化学性肝损伤有保护作用。

（2）表2显示，模型组小鼠SOD明显低于正常对照 (P<0.001)，MDA明显高于正常对照组 (P<0.001)，证明造模成功。与模型组对比，乙醇提取物(B)高剂量能明显降低四氯化碳致急性肝损伤小鼠肝组织中MDA的含量（p<0.05），杭白菊多糖和乙醇提取物均能显著升高SOD的作用，具有统计学意义。

Claims

1.具有保肝护肝作用的杭白菊提取物，选自杭白菊水提醇沉后的液相产物或沉淀物。

2.权利要求1所述杭白菊提取物的提取方法，其特征在于，步骤包括：过滤杭白菊水煎液，对滤液进行至少两次醇沉：首次醇沉时调整酒精度至60~65%，静置，固液分离后沉淀备用，液相调整酒精度至65~70%以进行二次醇沉；静置，固液分离后将液相浓缩干燥即得液相产物。

3.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于，合并两次沉淀，干燥，得沉淀物。

4.权利要求1所述杭白菊提取物的应用，其特征在于，将所述杭白菊提取物用于制备保肝护肝药物。