CN102172173A - 一种杂色竹荪子实体的栽培生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种杂色竹荪(Dictyophora multicolor Berk.& Broome(1882))子实体的栽培生产方法，其特征是先将野生的杂色竹荪新鲜子实体进行组织分离，接至综合PDA斜面培养基或松针浸汁培养基培养至菌丝长满斜面得到斜面母种，把斜面母种接种至麦粒培养基培养至菌丝长满培养基，选取菌丝呈白色、粗壮的菌种作为原种，将原种分层播种到生产用培养基里并覆土，培养至菌丝长出覆土表面，然后使菌丝形成大量菌索，菌索末端膨大形成幼原基和菌蕾，继续培养至菌裙达到最大开张度，便可采收杂色竹荪新鲜子实体。本发明的栽培生产方法可以使杂色竹荪子实体生物效率达到1.5～2.5kg/m2，这些杂色竹荪子实体可用作药物原料或研究材料使用。
Description
技术领域
本发明涉及一种杂色竹荪的生产方法，具体来说涉及一种杂色竹荪(Dictyophora multicolor Berk.& Broome)子实体的栽培生产方法。
背景技术
杂色竹荪(Dictyophora multicolor Berk.& Broome)又称黄裙竹荪，在分类上隶属于真菌界(Fungi)、担子菌门(Basidiomycota)、伞菌纲(Agaricomycetes)、鬼笔亚纲(Phallomycetidae)、鬼笔目(Phallales)、鬼笔科(Phallaceae)，是一种夏季多在竹林、阔叶林地上散生的腐生菌，在江苏、安徽、福建、台湾、湖南、广东、广西、海南、贵州、云南等热带亚热带省份均有分布。杂色竹荪有微毒，不宜采食，但可供药用。据研究，将其子实体浸泡于浓度为70％的酒精中，作为外涂药用，可治疗脚癣、脚气，增强免疫力，抑菌，抗衰老。但野生杂色竹荪子实体的资源极其有限，且受季节气候的制约，因此，杂色竹荪子实体的人工栽培研究是十分必要的。
发明内容
本发明的目的在于开发出一种杂色竹荪子实体的人工栽培生产方法。
我们通过将野生的杂色竹荪新鲜子实体经过母种制作，原种制作，栽培种制作，培菌，出菇，采收等步骤，得到了人工栽培的杂色竹荪子实体，从而实现了本发明的目的。
本发明的杂色竹荪子实体的栽培生产方法，其特征包括以下的步骤：
(1)将野生的杂色竹荪(Dictyophora multicolor Berk.& Broome)新鲜子实体进行组织分离，接入综合PDA斜面培养基或松针浸汁培养基，10～32℃，湿度50％～90％，培养20～50天，菌丝长满斜面即得到斜面母种，所述的综合PDA斜面培养基pH 5.0～7.0，其原料组成为每1000mL水中加入马铃薯150～250g，葡萄糖15～25g，磷酸二氢钾1～2g，硫酸镁0.3～0.8g，VB15～15mg和琼脂17～20g，其制备方法是原料按所述组成分别称重后，先将马铃薯洗净去皮切碎，按上述量加水煮沸25～30min，纱布过滤，取滤汁再加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、VB1和琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管灭菌后取出试管摆斜面，冷却贮存备用，所述的松针浸汁培养基pH 5.0～7.0，其原料组成为每1000mL水中加入松针50～150g，马铃薯150～250g，蔗糖15～25g，琼脂15～25g，其制备方法是原料按所述组成分别称重后，将马铃薯洗净去皮切碎，和松针一起按上述量加水煮沸25～30min，纱布过滤，取滤汁再加入蔗糖和琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，取滤汁分装试管灭菌后取出试管摆斜面，冷却贮存备用；
(2)将步骤(1)得到的斜面母种按培养基质量2％～3％的接种量接入麦粒培养基，置10～32℃培养，湿度60％～70％，培养25～70d后，菌丝长满麦粒培养基，选取菌丝呈白色、粗壮的菌种作为原种，所述的麦粒培养基pH 5.0～7.0，其原料组成按质量分数100％计，由小麦75％～85％，棉子壳或竹枝丫粉或杂木屑或草粉10％～20％，蔗糖1％～3％，过磷酸钙1％～2％，石膏粉0.5％～1.5％和石灰0.3％～0.8％组成，所述的麦粒培养基的制备方法是先把小麦用水浸泡20～30h，再用自来水冲洗干净，用锅煮熟20～38min，过滤滴干备用，棉子壳或竹枝丫粉或杂木屑或草粉用热水浸泡2～3h后堆沤发酵4～5d备用，将所有组份混合拌匀，此时含水量为50％～60％，用手握培养料放开后料不散，将培养料装入培养瓶里灭菌冷却后即可作接种用；
(3)将步骤(2)得到的原种按培养基质量3％～6％的接种量分层播种到生产用培养基里并覆土，于温度10～32℃，空气相对湿度50％～90％，培养25～70d菌丝长出覆土表面，所述的生产用培养基pH 5.0～7.0，其干料组成按质量份数计为竹片8～12份，木片20～30份，过磷酸钙0.2～0.3份，石膏0.2～0.3份和竹叶0.2～0.3份，所述的生产用培养基的制备方法是将上述干料中的竹片、木片和竹叶切成碎片，再与过磷酸钙和石膏混合堆积成堆，不断用清水或0.2％尿素液浇淋，使其充分吸水，每平方米的堆用干料15～20kg，以经过2％～3％的石灰水浸泡23～25h或煮沸15～25min后用流水冲洗的木屑或玉米秆粉作填充料，然后堆沤发酵4～5d至料面呈白色，得到生产用培养基；
(4)将步骤(3)得到的菌丝于温度10～32℃，空气相对湿度70％～95％，光照强度在100～300lx，每天通气1次，每次0.5～1h，培养20～55d则形成大量菌索，至菌索末端膨大形成幼原基和菌蕾后以相对湿度70％～95％，10C～32℃，光照强度在100～300lx，每天通气1～2次，每次0.5～1h，20～35d至菌裙达到最大开张度，即可采收杂色竹荪子实体。
步骤(1)所述的野生的杂色竹荪新鲜子实体进行组织分离，接至综合PDA斜面培养基或松针浸汁培养基最好是温度23～26℃，湿度60％～65％，培养25～35d；最好的综合PDA斜面培养基其原料组成为每1000mL水中加入马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾1.5g，硫酸镁0.5g，VB110mg和琼脂17g～20g，最好的松针浸汁培养基其原料组成为每1000mL水中加入松针100g，马铃薯200g，蔗糖20g，琼脂20g；
步骤(2)所述的斜面母种接种至麦粒培养基最好的培养温度是23～26℃，最好的培养时间是23～40d；最好的麦粒培养基其原料组成按质量分数100％计，由小麦80％，棉子壳或竹枝丫粉或杂木屑或草粉15％，蔗糖2％，过磷酸钙1.5％，石膏粉1％和石灰0.5％组成；
步骤(3)所述的生产用培养基的培养温度最好是23～26℃，湿度60％～80％，培养时间30～45d；所述最好的生产用培养基其干料组成按质量份数计为竹片10份，木片25份，过磷酸钙0.25份，石膏0.25份和竹叶0.25份；所述的分层播种是先将三分之二的菌种均匀撒在料面上，抓料抖动，把撒上的菌种均匀地分布在三分之二的料层中，稍为平整料面，再把三分之一的菌种均匀混播在上面三分之一的料层里，不要让菌种外露，然后覆土并用薄膜覆盖调温；
步骤(4)所述的菌丝的培养温度最好是22～27℃，培养时间35～55d，所述的形成幼原基和菌蕾后的培养温度最好是20～26℃，湿度75％～90％，杂色竹荪子实体采收后立即去掉菌帽和菌托，以免污染洁白的菌裙，将菌裙在日光下晒干或炭火烤干或于40～60℃烘箱烘干，放置20min，使菌裙回潮变软，方可包装或于室温保藏或用于研究等用途。
本发明的栽培生产方法可以使杂色竹荪子实体生物效率达到1.5～2.5kg/m2，即每平方米生产用培养料可得1.5～2.5kg新鲜的杂色竹荪子实体，这些杂色竹荪子实体可用作药物原料或研究材料使用。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
综合PDA斜面培养基原料组成为马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾1.5g，硫酸镁0.5g，VB110mg，琼脂17g与1000mL水，pH 6.0，制备方法是称取马铃薯200g，洗净去皮切碎，加水1000mL煮沸30min，纱布过滤，取滤汁再加葡萄糖20g、磷酸二氢钾1.5g、硫酸镁0.5、VB110mg、琼脂17g，充分溶解后趁热纱布过滤，取滤汁分装试管，视试管大小而定每试管约8mL，15磅蒸气121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却贮存备用；
将野生的杂色竹荪(Dictyophora multicolor Berk.& Broome)新鲜子实体进行组织分离，按约0.5cm×0.5cm大小的量接至综合PDA斜面培养基，24℃，湿度50％，培养30d，菌丝长满斜面即得到斜面母种。
称取小麦80kg(用水浸泡20h，再用自来水冲洗干净，用锅煮熟20min，过滤滴干)，棉子壳15kg(用热水浸泡2h后堆沤发酵4天)，蔗糖2kg，过磷酸钙1.5kg，石膏粉1kg和石灰0.5kg混合拌匀，调整pH至6.0，此时含水量为50％～60％，用手握培养料放开后料不散，将培养料装入培养瓶里，塞上棉塞，包上油纸，于温度126℃，蒸汽压20磅，保持2h灭菌冷却后，得到麦粒培养基。
将斜面母种按培养基质量的2％接种至麦粒培养基，置26℃培养，湿度60％，培养25d后，菌丝长满麦粒培养基，选取菌丝呈白色、粗壮的菌种作为原种。
取竹片10kg，木片25kg，过磷酸钙0.25kg，石膏0.25kg和竹叶0.25kg堆积成堆，其中竹片、木片和竹叶切成约20mm×300mm的碎片，不断用清水浇淋堆，使其充分吸水，每平方米的堆用干料15kg，用经过2％的石灰水浸泡24h后流水冲洗的木屑作填充料，然堆沤发酵4d，料面呈白色，就得到生产用培养基。
原种按培养基质量3％的接种量并先将三分之二的均匀撒在生产用培养基上，抓料抖动，把撒上的菌种均匀的分布在三分之二的生产用培养基中，稍为平整料面，再把三分之一的菌种均匀混播在上面三分之一的生产用培养基里，不要让菌种外露，然后覆土并用薄膜覆盖调温。在温度26℃，空气相对湿度60％的条件下，培养70d后菌丝长出覆土表面。
将菌丝于温度10～20℃，空气相对湿度50％～70％，光照强度在300lx，每天通气1次，每次0.5h，培养55d则形成大量菌索，至菌索末端膨大形成幼原基和菌蕾后以相对湿度70％，10℃，光照强度在300lx，每天通气1次，每次0.5h，35d至菌裙达到最大开张度，即可采收杂色竹荪子实体。采收后立即去掉菌帽和菌托，将菌裙在日光下晒干，放置20min，使菌裙回潮变软，室温保藏。
此次栽培的杂色竹荪子实体生物效率达到2.5kg/m2，即每平方米生产用培养料可得2.5Kg新鲜的杂色竹荪子实体，这些杂色竹荪子实体可用作药物原料或研究材料使用。
实施例2：
将野生的杂色竹荪(Dictyophora multicolor Berk.& Broome)新鲜子实体进行组织分离，按约0.5cm×0.5cm大小的量接至综合PDA斜面培养基，10℃，湿度50％，培养20d，菌丝长满斜面即得到斜面母种，所述的综合PDA斜面培养基pH 7.0，其原料组成为每1000mL水中加入马铃薯150g，葡萄糖25g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.8g，VB115mg，琼脂20g，其制备方法同实施例1。
把75kg小麦(用水浸泡30h，再用自来水冲洗干净，用锅煮熟38min，过滤滴干)，竹枝丫粉20kg(用热水浸泡3h后堆沤发酵5d)，蔗糖1kg，过磷酸钙2kg，石膏粉1.5kg，石灰0.5kg混合拌匀，pH为7.0，此时含水量为50％～60％，用手握培养料放开后料不散，将培养料装入培养瓶里，塞上棉塞，包上油纸，于温度126℃，蒸汽压20磅，保持2h灭菌冷却后，得到麦粒培养基。
将斜面母种按培养基质量3％的接种量接种至麦粒培养基，置10℃培养，湿度60％，培养70d后，菌丝长满麦粒培养基，选取菌丝呈白色、粗壮的菌种作为原种。
取竹片8kg，木片30kg，过磷酸钙0.2kg，石膏0.2kg和竹叶0.2kg堆积成堆，其中竹片、木片和竹叶切成约20mm×300mm的碎片，不断用清水浇淋堆，使其充分吸水，每平方米的堆用干料20kg，用经过3％的石灰水煮沸20min后流水冲洗的玉米秆粉作填充料，然后堆沤发酵5d，料面呈白色，就得到生产用培养基，pH7.0。
原种按培养基质量6％的接种量并先将三分之二的原种均匀撒在生产用培养基上，抓料抖动，把撒上的菌种均匀的分布在三分之二的生产用培养基中，稍为平整料面，再把三分之一的菌种均匀混播在上面三分之一的生产用培养基里，不要让菌种外露，然后覆土并用薄膜覆盖调温。在温度32℃，空气相对湿度90％的条件下，培养25d后菌丝长出覆土表面。
将菌丝于温度32℃，空气相对湿度95％，光照强度在100lx，每天通气1次，每次1h，培养20d则形成大量菌索，至菌索末端膨大形成幼原基和菌蕾后以相对湿度95％，32℃，光照强度在200lx，每天通气2次，每次1h，20d至菌裙达到最大开张度，即可采收杂色竹荪子实体；采收后立即去掉菌帽和菌托，将菌裙用炭火烤干，放置20min，使菌裙回潮变软，进行包装。
此次栽培的杂色竹荪子实体生物效率达到1.5kg/m2，即每平方米生产用培养料可得1.5Kg新鲜的杂色竹荪子实体，这些杂色竹荪子实体可用作药物原料或研究材料使用。
实施例3：
除综合PDA斜面培养基原料组成为马铃薯250g，葡萄糖15g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.3g，VB15mg，琼脂17g与1000mL水，pH 5.0，以及制备方法中马铃薯洗净去皮切碎，加水煮沸25min外，其它步骤和条件同实施例1。
此次栽培的杂色竹荪子实体生物效率达到1.8kg/m2，即每平方米生产用培养料可得1.8Kg新鲜的杂色竹荪子实体，这些杂色竹荪子实体可用作药物原料或研究材料使用。
实施例4：
将野生的杂色竹荪(Dictyophora multicolor Berk.& Broome)新鲜子实体进行组织分离，按约0.5cm×0.5cm大小的量接至松针浸汁培养基，10℃，湿度50％～60％，培养50d，菌丝长满斜面即得到斜面母种，所述的松针浸汁培养基pH 5.0，其原料组成为每1000mL水中加入松针50g，马铃薯250g，蔗糖15g，琼脂25g，其制备方法是称取马铃薯250g，洗净去皮切碎，和松针50g一起加水1000mL煮沸半个小时，纱布过滤，再称取蔗糖、琼脂充分溶解于滤汁后趁热纱布过滤，取滤汁分装试管，视试管大小而定每试管约10mL，15磅蒸气121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却贮存备用；
按照实施例1的方法制备麦粒培养基，其原料组成按质量分数100％计，由小麦85％，杂木屑10％，蔗糖3％，过磷酸钙1％，石膏粉0.7％和石灰0.3％组成，pH 5.0。
得到的斜面母种按培养基质量2％的接种量接种至麦粒培养基，置23℃培养，湿度60％，培养40d后，菌丝长满麦粒培养基，选取菌丝呈白色、粗壮的菌种作为原种。
按照实施例1的方法制备生产用培养基，其干料组成按质量份数计为竹片12份，木片20份，过磷酸钙0.3份，石膏0.3份和竹叶0.3份。
原种按培养基质量的3％的接种量并先将三分之二的原种均匀撒在生产用培养基上，抓料抖动，把撒上的菌种均匀的分布在三分之二的生产用培养基中，稍为平整料面，再把三分之一的菌种均匀混播在上面三分之一的生产用培养基里，不要让菌种外露，然后覆土并用薄膜覆盖调温。在温度23℃，空气相对湿度60％的条件下，培养45d后菌丝长出覆土表面。
将菌丝于温度22℃，空气相对湿度80％，光照强度在100lx，每天通气1次，每次0.5h时，培养55d则形成大量菌索，至菌索末端膨大形成幼原基和菌蕾后以相对湿度75％，20℃，光照强度在200-300lx，每天通气1次，每次0.5h，35d至菌裙达到最大开张度，即可采收杂色竹荪子实体。采收后立即去掉菌帽和菌托，将菌裙在40℃烘箱烘干，放置20min，使菌裙回潮变软，室温保藏。
此次栽培的杂色竹荪子实体生物效率达到2kg/m2，即每平方米生产用培养料可得2Kg新鲜的杂色竹荪子实体，这些杂色竹荪子实体可用作药物原料或研究材料使用。
实施例5：
将野生的杂色竹荪(Dictyophora multicolor Berk.& Broome)新鲜子实体进行组织分离，按约0.5em×0.5em大小的量接至松针浸汁培养基，26℃，湿度65％，培养25d，菌丝长满斜面即得到斜面母种，所述的松针浸汁培养基pH 7.0，其原料组成为每1000mL水中加入松针150g，马铃薯150g，蔗糖25g，琼脂15g，其制备方法是同实例4；
按照实施例2的方法制备麦粒培养基，其原料组成按质量分数100％计，由小麦84％，草粉10％，蔗糖3％，过磷酸钙1.7％，石膏粉0.5％和石灰0.8％组成。
得到的斜面母种按培养基质量2％的接种量接种至麦粒培养基，置26℃培养，湿度70％，培养23d后，菌丝长满麦粒培养基，选取菌丝呈白色、粗壮的菌种作为原种。
按照实施例2的方法制备生产用培养基。
原种按培养基质量5％的接种量并先将三分之二的原种均匀撒在生产用培养基上，抓料抖动，把撒上的菌种均匀的分布在三分之二的生产用培养基中，稍为平整料面，再把三分之一的菌种均匀混播在上面三分之一的生产用培养基里，不要让菌种外露，然后覆土并用薄膜覆盖调温。在温度26℃，空气相对湿度80％的条件下，培养30d后菌丝长出覆土表面。
将菌丝于温度23℃，空气相对湿度70％～90％，光照强度在100lx，每天通气1次，每次1h，培养35d则形成大量菌索，至菌索末端膨大形成幼原基和菌蕾后以相对湿度90％，26℃，光照强度在200lx，每天通气2次，每次1h，20d至菌裙达到最大开张度，即可采收杂色竹荪子实体。采收后立即去掉菌帽和菌托，将菌裙用60℃烘箱烘干，放置20min，使菌裙回潮变软，进行包装。
此次栽培的杂色竹荪子实体生物效率达到2.3kg/m2，即每平方米生产用培养料可得2.3Kg新鲜的杂色竹荪子实体，这些杂色竹荪子实体可用作药物原料或研究材料使用。
Claims (2)
1.一种杂色竹荪子实体的栽培生产方法，其特征包括以下的步骤：
(1)将野生的杂色竹荪Dictyophora multicolor Berk.& Broome新鲜子实体进行组织分离，接至综合PDA斜面培养基或松针浸汁培养基，温度10～32℃，湿度50％～90％，培养20～50天，菌丝长满斜面即得到斜面母种，所述的综合PDA斜面培养基pH 5.0～7.0，其原料组成为每1000mL水中加入马铃薯150～250g，葡萄糖15～25g，磷酸二氢钾1～2g，硫酸镁0.3～0.8g，VB15～15mg和琼脂17～20g，其制备方法是原料按所述组成分别称重后，先将马铃薯洗净去皮切碎，按上述量加水煮沸25～30min，纱布过滤，取滤汁再加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、VB1和琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管灭菌后取出试管摆斜面，冷却贮存备用，所述的松针浸汁培养基pH 5.0～7.0，其原料组成为每1000mL水中加入松针50～150g，马铃薯150～250g，蔗糖15～25g，琼脂15～25g，其制备方法是原料按所述组成分别称重后，将马铃薯洗净去皮切碎，和松针一起按上述量加水煮沸25～30min，纱布过滤，取滤汁再加入蔗糖和琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，取滤汁分装试管灭菌后取出试管摆斜面，冷却贮存备用；
(2)将步骤(1)得到的斜面母种按培养基质量2％～3％的接种量接入麦粒培养基，置温度10～32℃，湿度60％～70％，培养25～70d后，菌丝长满麦粒培养基，选取菌丝呈白色、粗壮的菌种作为原种，所述的麦粒培养基pH 5.0～7.0，其原料组成按质量分数100％计，由小麦75％～85％，棉子壳或竹枝丫粉或杂木屑或草粉10％～20％，蔗糖1％～3％，过磷酸钙1％～2％，石膏粉0.5％～1.5％和石灰0.3％～0.8％组成，所述的麦粒培养基的制备方法是先把小麦用水浸泡20～30h，再用自来水冲洗干净，用锅煮熟20～38min，过滤滴干备用，棉子壳或竹枝丫粉或杂木屑或草粉用热水浸泡2～3h后堆沤发酵4～5d备用，将所有组份混合拌匀，此时含水量为50％～60％，用手握培养料放开后料不散，将培养料装入培养瓶里灭菌冷却后即可作接种用；
(3)将步骤(2)得到的原种按培养基质量3％～6％的接种量分层播种到生产用培养基里并覆土，于温度10～32℃，空气相对湿度50％～90％，培养25～70d菌丝长出覆土表面，所述的生产用培养基pH 5.0～7.0，其干料组成按质量份数计为竹片8～12份，木片20～30份，过磷酸钙0.2～0.3份，石膏0.2～0.3份和竹叶0.2～0.3份，所述的生产用培养基的制备方法是将上述干料中的竹片、木片和竹叶切成碎片，再与过磷酸钙和石膏混合堆积成堆，不断用清水或0.2％尿素液浇淋，使其充分吸水，每平方米的堆用干料15～20kg，以经过2％～3％的石灰水浸泡23～25h或煮沸15～25min后用流水冲洗的木屑或玉米秆粉作填充料，然后堆沤发酵4～5d至料面呈白色，得到生产用培养基；
(4)将步骤(3)得到的菌丝于温度10～32℃，空气相对湿度70％～95％，光照强度在100～300lx，每天通气1次，每次0.5～1h，培养20～55d则形成大量菌索，至菌索末端膨大形成幼原基和菌蕾后以相对湿度70％～95％，10C～32℃，光照强度在100～300lx，每天通气1～2次，每次0.5～1h，培养20～35d至菌裙达到最大开张度，即可采收杂色竹荪子实体。
2.根据权利要求1所述的一种杂色竹荪子实体的栽培生产方法，其特征是步骤(1)所述的野生的杂色竹荪新鲜子实体进行组织分离，接至综合PDA斜面培养基或松针浸汁培养基，温度23～26℃，湿度60％～65％，培养25～35d，所述的综合PDA斜面培养基的原料组成为每1000mL水中加入马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾1.5g，硫酸镁0.5g，VB110mg和琼脂17g～20g，所述的松针浸汁培养基的原料组成为每1000mL水中加入松针100g，马铃薯200g，蔗糖20g，琼脂20g；步骤(2)所述温度23～26℃，培养23～40d，所述的麦粒培养基其原料组成按质量分数100％计，由小麦80％，棉子壳或竹枝丫粉或杂木屑或草粉15％，蔗糖2％，过磷酸钙1.5％，石膏粉1％和石灰0.5％组成，步骤(3)所述的生产用培养基其干料组成按质量份数计为竹片10份，木片25份，过磷酸钙0.25份，石膏0.25份和竹叶0.25份，所述的温度23～26℃，所述的湿度60％～80％，培养30～45d，所述的分层播种是先将三分之二的菌种均匀撒在料面上，抓料抖动，把撒上的菌种均匀的分布在三分之二的料层中，稍为平整料面，再把三分之一的菌种均匀混播在上面三分之一的料层里，不要让菌种外露，步骤(4)所述的菌丝的培养温度22～27℃，培养35～55d，所述的形成幼原基和菌蕾后的培养温度20～26℃，湿度75％～90％。
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