CN101518190A - 一种铅绿褶菇子实体的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种铅绿褶菇子实体的生产方法，其特征是将野生或人工栽培的铅绿褶菇(Chlorophyllum molybdites(Meyer.：Fr.)Massee)子实体接种至斜面综合PDA培养基分离培养，然后将扩大培养获得的斜面母种在液体培养基上培养，再将得到的液体菌种在麦粒培养基上培养得到生产用的麦粒菌种，最后将其播种到生产用培养基料里培养，待菌丝长到培养基料面的2/3时覆土，20～25℃温度下培养菌丝长至覆土层的2/3，再调节温度至25～30℃，直至长出子实体，待子实体完全开伞，菌褶呈铅绿色时采收，烘干得到产物。本发明铅绿褶菇子实体的生物效率可达20～50％，即每1kg生产用培养料可得到200～500g新鲜的铅绿褶菇子实体，可以满足科学研究的需要。
Description
技术领域
本发明涉及一种草腐生菌的人工培养方法，具体来说是一种铅绿褶菇子实体的生产方法。
背景技术
铅绿褶菇(Chlorophyllum molybdites(Meyer.：Fr.)Massee)又称大青褶伞或铅环柄菇，在分类上隶属于担子菌亚门(Basidiomycotina)层菌纲(Hymenomycetes)伞菌目(Agaricales)蘑菇科(Agaricaceae)。铅绿褶菇是一种草腐生菌，在广东省、台湾地区等热带省份均有分布，这种毒菇雨后长在草坪、蕉林地上，易与食用菌高大环柄菇(Macrolepiotaprocera(Scop.)Singer)等菌类混淆，误食了铅绿褶菇会引起胃肠型中毒症状，食量大时还会致命。然而这些毒蘑菇的毒素通常都具有研究价值，例如鹅膏菌(Amanita)的肽类毒素就可用作科研实验的生化试剂。据研究，铅绿褶菇的毒素主要是水溶性的生物碱。蘑菇毒素研究的最佳生物材料是其子实体。但是铅绿褶菇的野生子实体资源十分有限，并且受季节气候的制约。而用发酵培养得到的菌丝体不一定含有毒素或者毒素含量太低，根本不能满足科学研究的需要。
发明内容
本发明的目的在于开发出一种高效的铅绿褶菇子实体的生产方法。
通过将野生或人工培养的铅绿褶菇子实体在PDA斜面培养基上培养得到斜面母种，然后接种到液体培养基中培养得到液体菌种，再经过麦粒培养基培养得到白色生产种，将生产种播种到生产用培养基，然后再进行覆土，每1kg生产用培养料可得到300～800g新鲜的铅绿褶菇子实体，从而实现了本发明的目的。
本发明的铅绿褶菇子实体的生产方法，其特征包括以下的步骤：
(1)将铅绿褶菇(Chlorophyllum molybdites(Meyer.：Fr.)Massee)子实体组织分离或多孢分离，然后接种至斜面综合PDA培养基，23～30℃下培养，至菌丝长满斜面，再以此作菌种按50～150g/L接种量扩大培养，得到能用于生产的铅绿褶菇母种；所述的综合PDA培养基的pH是6～7，其原料组成按质量份计，为已去皮去芽眼的马铃薯75～85份，葡萄糖6～10份，琼脂6～10份，磷酸二氢钾0.2～1.5份，硫酸镁0.2～1.5份和VB1 0.002～0.006份，并通过下述方法制得：原料按所述组成分别称重后，先将马铃薯切成小条放入锅中，加入原料组成总质量3.5～4.5倍的水，煮沸20～30分钟至马铃薯熟而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补至原加水量后，加入琼脂熔化，再加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和VB1搅拌均匀，趁热装于试管灭菌后，冷却到45～50℃倒成斜面作接种用；
(2)将步骤(1)得到的铅绿褶菇母种按50～150g/L的接种量接种至液体培养基里，于温度为22～30℃、摇速为110～150转/分钟、培养时间为7～12天，得到的菌液褐色，菌球黄豆大小，即为液体菌种，所述的液体培养基的pH为6～8，其原料组成按质量份计，为已去皮去芽眼的马铃薯88～91份，葡萄糖8.2～9.0份，KH2PO4 1.2～1.5份，MgSO4 0.6～0.75份和VB1 0.004～0.006份，并通过下述方法制得：原料按所述组成分别称重后，先将马铃薯切成小条放入锅中，加入原料组成总质量4.3～4.5倍的水，煮沸20～30分钟左右至马铃薯熟而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补水至原加水量后，加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和VB1，搅拌均匀，趁热灭菌，冷却后作接种用；
(3)将步骤(2)得到的液体菌种按50～180mL/kg的接种量接种至麦粒培养基里，20～30℃培养30～45天，菌丝长满培养基，正常菌丝呈白色，即得到生产用的麦粒菌种，所述的麦粒培养基为pH 11～12，按其原料组成总质量分数100％计，为小麦30％～50％，棉子壳30％～50％，麸皮10％～20％，碳酸钙0.5％～1.2％，石膏0.5％～1.2％，磷酸二氢钾0.3％～1％和石灰0.5～1.2％，并由下述方法得到：原料按所述组成分别称重后，先把小麦浸泡20～30小时，再用自来水冲洗干净，用锅煮熟20～38分钟，过滤滴干拌入其它组份混合拌均，此时含水量为50％～60％，装入培养瓶里灭菌，冷却后作接种用；
(4)将步骤(3)得到的生产用的麦粒菌种按培养基质量5％～18％的播种量播种到经过堆料发酵得到的生产用培养基里，于温度20～30℃，空气相对湿度50％～70％，暗培养至菌丝白色粗壮长满到培养料的2/3时，则进行覆土(覆土层的厚度1～1.5cm)，于温度20～25℃、光照200～500Lx下培养至菌丝长至覆土层的2/3，再调节培养温度至25～30℃，湿度70％～90％，从播种起计算培养时间为50～100天可长出原基，所述的生产用培养基其原料按总质量分数100％计，由培养基料30％～50％和水50％～70％组成，所述的培养基料按总质量分数100％计，由稻草88％～90％，花生麸3％～5％，尿素0.5％～1％，硫酸铵0.5％～1％，磷肥1％～2％，石膏0.5％～1％，石灰1％～2％和多菌灵0.5％～1％组成；
(5)步骤(4)长出原基继续培养1～3天，子实体长高至完全开伞，菌褶呈铅绿色时采收，烘干得到产物。
步骤(1)所述的铅绿褶菇子实体可以是野生的或人工栽培的新鲜子实体，接种量为50～150g/L，最好100g/L，最好的培养温度为24～26℃，培养16～25天，所得的斜面铅绿褶菇母种如不立即使用可于15～25℃保藏备用；所述的综合PDA培养基的pH最好是6.5～6.8，其原料组成按质量份计，最好是去皮去芽眼马铃薯78～83份，葡萄糖7～9份，琼脂7～9份，磷酸二氢钾0.5～1份，硫酸镁0.5～1份和VB1 0.003～0.005份，加入原料组成总质量4.42倍的水。
步骤(2)所述的接种量最好为100g/L，培养温度最好为24～26℃、转速最好为120～130转/分钟，培养时间最好为9～10天，菌液褐色，菌球黄豆大小，所述的液体培养基最好pH为7，其原料组成按质量份计，为已去皮去芽眼的马铃薯89.083份，葡萄糖8.908份，KH2PO41.336份，MgSO4 0.668份和VB1 0.005份，加入原料组成总质量4.454倍的水。
步骤(3)所述的液体菌种的接种量最好是100～120mL/kg，所述的培养温度最好是24～26℃，培养时间最好是35～40天，所述的菌丝如老化变成褐色则不可用，所述麦粒培养基pH最好为12，按其原料组成总质量分数100％计，为小麦40％～41％，棉子壳40％～41％，麸皮15％～17％，碳酸钙0.9％～1％，石膏0.9％～1％，磷酸二氢钾0.4％～0.5％和石灰0.9％～1％，所述小麦浸泡时间最好20～24小时，煮熟时间最好为25～30分钟，过滤滴干拌入其它组份混合拌匀含水量为55％。
步骤(4)所述的生产用的麦粒菌种的播种量最好是培养基质量8％～10％；从播种至长出原基的培养时间最好是60～65天；所述的生产用培养基的堆料发酵方法最好是先将稻草切成3～4段，每段15cm，然后用水浸泡24小时，建堆时将稻草铺约15～45cm厚，均匀地撒上已预湿好的花生麸，尿素和磷肥，堆料温度40～45℃，堆料5天进行第一次翻堆，并加入80％～90％的石灰，保持40～45℃继续发酵，10天后进行第二次翻堆，并加入硫酸铵，15天后第三次翻堆，20天后第四次翻堆时加入多菌灵和剩余的石灰，调节pH至7～7.5，次日拆堆，翻匀，然后可以用于播种；所述的播种最好采用分层撒混播，先把2/3的生产用的麦粒菌种均匀撒在生产用培养基料面上，抓料抖动，使生产用的麦粒菌种均匀地分布在培养基2/3料层中，稍为平整培养基面，再把剩余的的生产用的麦粒菌种均匀混播在培养基上面1/3的料层里，不要让菌种外露，每天通气1～2次，每次0.5～1小时；所述的覆土最好先把晒干的菜园土用质量分数2％的石灰水和质量分数0.1～0.2％的多菌灵调至含水量为质量分数50％～70％，拌匀后用塑料膜盖上2～4天，然后晒干，覆土时用质量分数2％～3％的石灰水吸土2～5分钟，滴干后才覆上，覆土后盖上塑料膜。
步骤(5)所述的烘干温度最好是45～55℃。
本发明的铅绿褶菇子实体的生物效率可达20％～50％，即每1kg生产用培养料可得到200～500g新鲜的铅绿褶菇子实体，完全可以满足科学研究的需要。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，但本发明不限于以下实施例。
实施例1：
(1)将铅绿褶菇(Chlorophyllum molybdites(Meyer.：Fr.)Massee)子实体组织分离或多孢分离，然后取50g接种至装有斜面综合PDA培养基1000mL的试管里(每管10mL)，23℃下培养，至菌丝长满斜面，再以此作菌种按50g/L接种量，同上述条件下扩大培养，即得到能用于生产用的铅绿褶菇母种；所述的综合PDA培养基的pH是6，其原料组成为马铃薯(去皮去芽眼)150g，葡萄糖20g，琼脂20g，磷酸二氢钾0.4g，硫酸镁3g和VB1 0.012g，并通过下述方法制得：原料按所述组成分别称重后，先将马铃薯切成小条放入锅中，加入700mL的水，煮沸20分钟至马铃薯熟而不烂时，用7层纱布过滤，取滤汁于锅中，补水至700mL后，加入琼脂熔化，再加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和VB1搅拌均匀，趁热按5～10ml/管的量分装于18mm×180mm或20mm×200mm试管里，塞上棉塞，包上油纸，于121℃，15磅蒸汽压，20分钟常规灭菌，冷却到45～50℃倒成斜面即可作接种用；
(2)将(1)获得的能用于生产用的铅绿褶菇母种5支按50g/L的接种量接种至1000mL液体培养基(规格：500mL三角瓶盛100mL培养基)，于22℃、110转/分钟，培养7天，菌球黄豆大小，菌液褐色，即得到液体菌种；液体培养基的pH为6，其制备方法：分别称取已去皮去芽眼的马铃薯176g，葡萄糖18g，KH2PO4 2.4g，MgSO4 1.2g，VB1 0.012g，然后将马铃薯切成小条放入锅中，加入850mL的水，煮沸20～30分钟左右至马铃薯熟而不烂时，用8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补水至850mL后，加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和VB1，搅拌均匀，趁热按每瓶100mL的量分装于500mL规格的三角瓶里，塞上棉塞，包上油纸，于121℃，15磅蒸汽压，保持20分钟灭菌冷却后即可作接种用；
(3)将(2)获得液体菌种取约50mL的液体菌种接种至1000g的麦粒培养基(麦粒培养基的pH12，由小麦500g，棉子壳300g，麸皮182g，碳酸钙5g，石膏5g，磷酸二氢钾3g，石灰5g组成，先把小麦按上述量称重、浸泡20小时后，用自来水冲洗干净，用锅煮20分钟至熟，过滤滴干，然后再拌入其它组份混合拌均，此时含水量为50％(用手握培养料放开后料不散为度)，装入培养瓶里，塞上棉塞，包上油纸，于温度126℃，蒸汽压20磅，保持1小时灭菌冷却后即可作接种用)，20℃培养45天，待菌丝长满培养基，菌丝呈白色，得到生产用的麦粒菌种。
(4)将(3)获得的约1000g生产用的麦粒菌种(下称生产种)接种到20000g生产用培养基(生产用培养基其原料按质量分数计，由培养基料50％和水50％组成，其中培养基料按其组成为稻草88％，花生麸5％，尿素1％，硫酸铵1％，磷肥2％，石膏1％，石灰1％和多菌灵1％；分别称取稻草8800g、花生麸500g，尿素100g，硫酸铵100g，磷肥200g，石膏100g，石灰100g和多菌灵100g，先将稻草切成3～4段，每段15cm，用10000g水浸泡24小时，铺成约45cm厚，均匀地撒上已预湿好的花生麸、尿素和磷肥，堆料温度40℃，堆料5天进行第一次翻堆，并加入80％石灰，保持40℃继续发酵，5天后进行第二次翻堆，并加入硫酸铵，10天后第三次翻堆，15天后第四次翻堆时加入多菌灵和剩余的石灰，调节pH至7.5，次日拆堆，翻匀，然后可以用于播种)，播种时先把2/3的生产种均匀撒在生产用培养基面上，抓料抖动，使生产种均匀地分布在培养基2/3料层中，稍为平整培养基面，再把剩余的的生产种均匀混播在培养基上面1/3的料层里，不要让菌种外露；在温度20℃，空气相对湿度50％，暗培养，每天通气1次，每次0.5小时，待菌丝长到培养基料面的2/3，菌丝白色粗壮，然后进行覆土，将晒干的菜园土用质量分数2％的石灰水和质量分数0.1％的多菌灵调至含水量质量分数50％，拌匀后用塑料膜盖上2天，然后晒干，覆土时用质量分数3％的石灰水吸土2分钟，滴干后才覆上，覆土层的厚度1.5cm，覆土后盖上塑料膜，置25℃、光照强度200Lx下培养23天，菌丝长至覆土层的2/3，开始早晚各喷一次水，将培养温度调节至30℃，早晚各喷一次水，湿度70％左右，从播种起计算90～100天后长出子实体。
(5)子实体出现后，培养温度不变，可停止喷水，1天后完全开伞，菌褶呈铅绿色时开始采收。采收后，于50℃烘干，得到子实体，生物效率为20％。
实施例2：
(1)将铅绿褶菇(Chlorophyllum molybdites(Meyer.：Fr.)Massee)子实体组织分离或多孢分离，然后取150g接种至装有斜面综合PDA培养基1000mL的试管里(每管10mL)，30℃下培养，至菌丝长满斜面，再以此作菌种按150g/L接种量，同上述条件下扩大培养，扩大培养，即得到能用于生产用的铅绿褶菇母种；所述的综合PDA培养基的pH是7，其原料组成为马铃薯(去皮去芽眼)170g，葡萄糖12g，琼脂12g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁0.4g和VB10.004g，并通过下述方法制得：原料按所述组成分别称重后，先将马铃薯切成小条放入锅中，加入885mL的水，煮沸30分钟左右至马铃薯软而不烂时，用8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补水至885mL，加入琼脂熔化，再加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和VB1搅拌均匀，趁热5～10ml/管的量分装于18mm×180mm或20mm×200mm试管里，塞上棉塞，包上油纸，于121℃，15磅蒸汽压，30分钟常规火菌，冷却到45～50℃倒成斜面即可作接种用；
(2)将能用于生产用的铅绿褶菇母种10支按100g/L的接种量接种至1000mL液体培养基(规格：500mL三角瓶盛100mL培养基)，于25℃、120转/分钟，培养9天，菌球黄豆大小，菌液褐色，即得到液体菌种；液体培养基的pH为7，其制备方法：分别称取已去皮去芽眼的马铃薯182g，葡萄糖16.4g，KH2PO4 3g，MgSO4 1.5g，VB1 0.008g，然后将马铃薯切成小条放入锅中，加入910mL的水，煮沸30分钟左右至马铃薯熟而不烂时，用8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补水至910mL后，加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和VB1，搅拌均匀，趁热按每瓶100mL的量分装于500mL规格的三角瓶里，塞上棉塞，包上油纸，于121℃，15磅蒸汽压，保持30分钟灭菌冷却后即可作接种用；
(3)将(2)获得的液体菌种取100mL液体菌种按接种至1000g麦粒培养基(麦粒培养基的pH11，由小麦354g，棉子壳500g，麸皮100g，碳酸钙12g，石膏12g，磷酸二氢钾10g，石灰12g组成，先把小麦按所述量称重、浸泡30小时后，用自来水冲洗干净，用锅煮38分钟至熟，过滤滴干，然后再拌入其它组份混合拌均，此时含水量为60％(用手握培养料放开后料不散为度)，装入培养瓶里，塞上棉塞，包上油纸，于温度126℃，蒸汽压20磅，保持2小时灭菌冷却后即可作接种用)，25℃培养培养35天，待菌丝长满培养基，菌丝呈白色，得到生产用的麦粒菌种。
(4)将(3)获得的2000g生产用的麦粒菌种(下称生产种)接种到20000g生产用培养基上(生产用培养基其原料按质量分数计，由培养基料40％和水60％组成，其中培养基料按其质量分数计，由稻草90％，花生麸5％，尿素0.5％，硫酸铵0.5％，磷肥1％，石膏0.5％，石灰2％，多菌灵0.5％组成，先将稻草切成3～4段，每段15cm，用水浸泡24小时，铺成约15cm厚，均匀地撒上已预湿好的花生麸，尿素，磷肥，堆料温度45℃，堆料5天进行第一次翻堆，并加入90％石灰，保持45℃继续发酵，5天后进行第二次翻堆，并加入硫酸铵，10天后第三次翻堆，15天后第四次翻堆时加入多菌灵和剩余的石灰，调节pH至7.5，次日拆堆，翻匀，然后可以用于播种，播种时先把2/3的生产种均匀撒在生产用培养基面上，抓料抖动，使生产种均匀地分布在培养基2/3料层中，稍为平整培养基面，再把剩余的的生产种均匀混播在培养基上面1/3的料层里，不要让菌种外露，温度25℃，空气相对湿度50％，暗培养，每天通气1次，每次1小时，待菌丝长到培养基料面的2/3，菌丝白色粗壮，然后进行覆土，将晒干的菜园土用质量分数2％的石灰水和质量分数0.1％的多菌灵调至含水量质量分数50％，拌匀后用塑料膜盖上2天，然后晒干，覆土时用质量分数2％的石灰水吸土5分钟，滴干后才覆上，覆土层的厚度1cm，覆土后盖上塑料膜，置25℃、光照强度500Lx下培养13天，菌丝长至覆土层的2/3，开始早晚各喷一次水，将培养温度调节至28℃，早晚各喷一次水，从播种起计60-70天后长出子实体。
(5)子实体出现后，培养温度不变，可停止喷水，2天后完全开伞，菌褶呈铅绿色时开始采收。采收后，于50℃烘干，得到子实体，生物效率50％。
实施例3：
(1)将铅绿褶菇(Chlorophyllum molybdites(Meyer.：Fr.)Massee)子实体组织分离或多孢分离，然后然后取100g接种至装有斜面综合PDA培养基1000mL的试管里(每管10mL)，27℃下培养，至菌丝长满斜面，再以此作菌种按100g/L接种量，同上述条件下扩大培养，扩大培养，即得到能用于生产用的铅绿褶菇母种；所述的综合PDA培养基的pH是6.5，其原料组成为马铃薯(去皮去芽眼)160g，葡萄糖16g，琼脂16g，磷酸二氢钾.2g，硫酸镁.2g，VB10.01g，并通过下述方法制得：原料按所述组成分别称重后，先将马铃薯切成小条放入锅中，加入866mL的水，煮沸25分钟左右至马铃薯熟而不烂时，用6层纱布过滤，取滤汁于锅中，补水至866mL后，加入琼脂熔化，再加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和VB1搅拌均匀，趁热5～10ml/管的量分装于18mm×180mm或20mm×200mm试管里，塞上棉塞，包上油纸，于121℃，15磅蒸汽压，25分钟常规灭菌，冷却到45～50℃倒成斜面即可作接种用；
(2)将(1)获得的能用于生产用的铅绿褶菇母种15支按150g/L的接种量接种至1000mL液体培养基(规格：500mL三角瓶盛100mL培养基)，26℃左右、130转/分钟，培养11天，菌球黄豆大小，菌液褐色，即得液体菌种，液体培养培养基的pH8，其制备方法：分别称取已去皮去芽眼的马铃薯178g，葡萄糖17.8g，KH2PO4 2.7g，MgSO4 1.3g，VB1 0.010g，然后将马铃薯切成小条放入锅中，加入890mL的水，煮沸25分钟左右至马铃薯熟而不烂时，用6层纱布过滤，取滤汁于锅中，补水至890mL后，加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和VB1，搅拌均匀后按20％～30％的比例分装于三角瓶里常规灭菌冷却备用；
(3)将(2)获得的液体菌种取180m接种至1000g麦粒培养基(麦粒培养基的pH12，由小麦300g、棉子壳458g、麸皮200g、碳酸钙12g、石膏12g、磷酸二氢钾6g、石灰12g组成，先把小麦按所述量称重、浸泡24小时后，用自来水冲洗干净，用锅煮30分钟，过滤滴干，然后再拌入其它组份混合拌均，此时含水量为55％(用手握培养料放开后料不散为度)，装入培养瓶里，塞上棉塞，包上油纸，于温度126℃，蒸汽压20磅，保持1.5小时灭菌冷却后即可作接种用)，25℃培养50天，待菌丝长满培养基，菌丝呈白色，得到生产用的麦粒种。
(4)将(3)获得的3600g生产用的麦粒种接种到20000g生产用培养基上(生产用培养基其原料按质量分数计，由培养基料30％和水70％组成；其中培养基料按其质量分数计，由稻草89％，花生麸3％，尿素1％，硫酸铵1％，磷肥2％，石膏1％，石灰2％，多菌灵1％组成，将稻草先切成3～4段，每段15cm，用水浸泡24小时，铺成约15cm厚，均匀地撒上已预湿好的花生麸，尿素，磷肥，堆料温度43℃，堆料5天进行第一次翻堆，并加入85％的石灰，保持43℃继续发酵，5天后进行第二次翻堆，并加入硫酸铵，10天后第三次翻堆，15天后第四次翻堆时加入多菌灵和剩余的石灰，调节pH至7，次日拆堆，翻匀，然后可以用于播种，播种时先把2/3的生产种均匀撒在生产用培养基面上，抓料抖动，使生产种均匀地分布在培养基2/3料层中，稍为平整培养基面，再把剩余的的生产种均匀混播在培养基上面1/3的料层里，不要让菌种外露，温度30℃，空气相对湿度70％，暗培养，每天通气2次，每次1小时，待菌丝长到培养基料面的2/3，菌丝白色粗壮，然后进行覆土，将晒干的菜园土用质量分数2％的石灰水和质量分数0.2％的多菌灵调至含水量质量分数70％，拌匀后用塑料膜盖上4天，然后晒干，覆土时用质量分数2％的石灰水吸土2分钟，滴干后才覆上，覆土层的厚度1cm，覆土后盖上塑料膜，置20℃、光照强度500Lx下培养18天，菌丝长至覆土层的2/3，开始早晚各喷一次水，将培养温度调节至25℃，早晚各喷一次水，从播种起计算50-60天后长出子实体。
(5)子实体出现后，培养温度不变，可停止喷水，3天后完全开伞，菌褶呈铅绿色时开始采收。采收后，于60℃烘干，得到子实体，生物效率35％。
Claims (2)
1.一种铅绿褶菇子实体的生产方法，其特征包括以下的步骤：
(1)将铅绿褶菇(Chlorophyllum molybdites(Meyer.：Fr.)Massee)子实体组织分离或多孢分离，然后接种至斜面综合PDA培养基，23～30℃下培养，至菌丝长满斜面，再以此作菌种按50～150g/L接种量扩大培养，得到能用于生产的铅绿褶菇母种；所述的综合PDA培养基的pH是6～7，其原料组成按质量份计，为已去皮去芽眼的马铃薯75～85份，葡萄糖6～10份，琼脂6～10份，磷酸二氢钾0.2～1.5份，硫酸镁0.2～1.5份和VB1 0.002～0.006份，并通过下述方法制得：原料按所述组成分别称重后，先将马铃薯切成小条放入锅中，加入原料组成总质量3.5～4.5倍的水，煮沸20～30分钟至马铃薯熟而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补至原加水量后，加入琼脂熔化，再加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和VB1搅拌均匀，趁热装于试管灭菌后，冷却到45～50℃倒成斜面作接种用；
(2)将步骤(1)得到的铅绿褶菇母种按50～150g/L的接种量接种至液体培养基里，于温度为22～30℃、摇速为110～150转/分钟、培养时间为7～12天，得到的菌液褐色，菌球黄豆大小，即为液体菌种，所述的液体培养基的pH为6～8，其原料组成按质量份计，为已去皮去芽眼的马铃薯88～91份，葡萄糖8.2～9.0份，KH2PO4 1.2～1.5份，MgSO4 0.6～0.75份和VB1 0.004～0.006份，并通过下述方法制得：原料按所述组成分别称重后，先将马铃薯切成小条放入锅中，加入原料组成总质量4.3～4.5倍的水，煮沸20～30分钟左右至马铃薯熟而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补水至原加水量后，加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和VB1，搅拌均匀，趁热灭菌，冷却后作接种用；
(3)将步骤(2)得到的液体菌种按50～180mL/kg的接种量接种至麦粒培养基里，20～30℃培养30～45天，菌丝长满培养基，正常菌丝呈白色，即得到生产用的麦粒菌种，所述的麦粒培养基为pH 11～12，按其原料组成总质量分数100％计，为小麦30％～50％，棉子壳30％～50％，麸皮10％～20％，碳酸钙0.5％～1.2％，石膏0.5％～1.2％，磷酸二氢钾0.3％～1％和石灰0.5～1.2％，并由下述方法得到：原料按所述组成分别称重后，先把小麦浸泡20～30小时，再用自来水冲洗干净，用锅煮熟20～38分钟，过滤滴干拌入其它组份混合拌均，此时含水量为50％～60％，装入培养瓶里灭菌，冷却后作接种用；
(4)将步骤(3)得到的生产用的麦粒菌种按培养基质量5％～18％的播种量播种到经过堆料发酵得到的生产用培养基里，于温度20～30℃，空气相对湿度50％～70％，暗培养至菌丝白色粗壮长满到培养料的2/3时，则进行覆土，覆土层的厚度1～1.5cm，于温度20～25℃、光照200～500Lx下培养至菌丝长至覆土层的2/3，再调节培养温度至25～30℃，湿度70％～90％，从播种起计算培养时间为50～100天可长出原基，所述的生产用培养基其原料按总质量分数100％计，由培养基料30％～50％和水50％～70％组成，所述的培养基料按总质量分数100％计，由稻草88％～90％，花生麸3％～5％，尿素0.5％～1％，硫酸铵0.5％～1％，磷肥1％～2％，石膏0.5％～1％，石灰1％～2％和多菌灵0.5％～1％组成；
(5)步骤(4)长出原基继续培养1～3天，子实体长高至完全开伞，菌褶呈铅绿色时采收，烘干得到产物。
2.根据权利要求1所述的一种铅绿褶菇子实体的生产方法，其特征是步骤(1)中所述的接种量为50～150g/L，培养温度24～26℃，培养时间16～25天，至菌丝长满斜面，所述的综合PDA培养基的pH是6.5～6.8，其原料组成按质量份计，是去皮去芽眼马铃薯78～83份，葡萄糖7～9份，琼脂7～9份，磷酸二氢钾0.5～1份，硫酸镁0.5～1份和VB1 0.003～0.005份，加入原料组成总质量4.42倍的水；步骤(2)中所述的接种量是100g/L，所述培养温度为24～26℃，转速120～130转/分钟，培养时间9～10天，所述的液体培养基为pH 7，其原料组成按质量份计，为已去皮去芽眼的马铃薯89.083份，葡萄糖8.908份，KH2PO4 1.336份，MgSO4 0.668份和VB1 0.005份，加入原料组成总质量4.454倍的水；步骤(3)所述的接种量为100～120mL/kg，培养温度是24℃～26℃，培养时间是35～40天，所述的麦粒培养基pH12，按其原料组成总质量分数100％计，为小麦40％～41％，棉子壳40％～41％，麸皮15％～17％，碳酸钙0.9％～1％，石膏0.9％～1％，磷酸二氢钾0.4％～0.5％和石灰0.9％～1％，所述小麦浸泡时间20～24小时，煮熟时间为25～30分钟，小麦过滤滴干拌入其它组份混合拌匀含水量为55％；步骤(4)中所述的播种量是培养基质量8％～10％，从播种至长出原基的培养时间为60～65天，所述的生产用培养基的堆料发酵方法是先将稻草切成3～4段，每段15cm，然后用水浸泡24小时，建堆时将稻草铺约15～45cm厚，均匀地撒上已预湿好的花生麸，尿素和磷肥，堆料温度40～45℃，堆料5天进行第一次翻堆，并加入80％～90％的石灰，保持40～45℃继续发酵，10天后进行第二次翻堆，并加入硫酸铵，15天后第三次翻堆，20天后第四次翻堆时加入多菌灵和剩余的石灰，调节pH至7～7.5，次日拆堆，翻匀，然后用于播种；所述的播种采用分层撒混播，先把2/3的生产用的麦粒菌种均匀撒在生产用培养基料面上，抓料抖动，使生产用的麦粒菌种均匀地分布在培养基2/3料层中，稍为平整培养基面，再把剩余的的生产用的麦粒菌种均匀混播在培养基上面1/3的料层里，不要让菌种外露，每天通气1～2次，每次0.5～1小时；所述的覆土是先把晒干的菜园土用质量分数2％的石灰水和质量分数0.1～0.2％的多菌灵调至含水量为质量分数50％～70％，拌匀后用塑料膜盖上2～4天，然后晒干，覆土时用质量分数2％～3％的石灰水吸土2～5分钟，滴干后才覆上，覆土后盖上塑料膜；步骤(5)中所述的烘干温度是45～55℃。
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20101027 |
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