CN102147378A - 用核磁共振技术分析中药二甲基亚砜提取液的方法 - Google Patents

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Abstract

一种用核磁共振技术分析中药二甲基亚砜提取液的方法，其特征在于：制备供试品溶液，按规定称取中药材或中药制剂，并进行前处理，按同一项下规定的萃取剂量用二甲基亚砜替代原萃取剂，在18.45℃～189℃的温度下，用中药常用的提取方法提取，滤过，为供试品溶液，采用常用核磁共振仪器系统，根据核磁共振仪器系统和中药特性选择各系统参数，对供试品溶液定性定量测定其所含成分，从而得到包含了中药所有成分在内的核磁共振谱图、分子结构和物理特性。本发明用二甲基亚砜作为萃取剂对中药材和制剂进行提取分析，能在高于18.45℃的室温用超声法一次性快速将水溶、油溶、挥发等中药的所有成分完全提取，并能避免活性成分挥发、水解、氧化、变性，最大限度保存了它们的生物活性。且操作简便安全、提取时间短。

Description

用核磁共振技术分析中药二甲基亚砜提取液的方法
技术领域
本发明涉及一种方法，特别是一种用核磁共振技术分析中药二甲基亚砜提取液的方法。
背景技术
核磁共振技术是一种用来研究物质分子结构及物理特性的光谱学方法，尤其是近年脉冲傅里叶变换核磁共振以及超导核磁共振的引用，二维、三维、固体高分辨核磁共振谱图的出现，提高了核磁共振谱仪的灵敏度和信息量，成为了现代中药研究不可或缺的结构分析工具。
目前使用核磁共振技术测定中药的氢谱、碳谱等操作时，都是用水、甲醇、乙醚、丙酮、正丁醇等萃取剂分别提取中药的水溶成分和油溶成分，挥干萃取剂后再将提取物溶解于重水、氘代二甲基亚砜等内标物然后进行测定。在这里，氘代二甲基亚砜仅作为内标物而非萃取剂，其他萃取剂提取的水溶成分或油溶成分只是中药的部分成分，其中的热敏、易氧化、易水解、易变性的成分在萃取过程中有可能被破坏，挥发成分也可能随萃取剂挥干而散失，由此得到的核磁共振谱图可能是不完整和失真的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种直接用二甲基亚砜作为萃取剂对中药材和制剂进行提取分析，能一次性将水溶、油溶、挥发等中药的所有成分完全提取的用核磁共振技术分析中药二甲基亚砜提取液的方法。
本发明的目的可以通过以下措施来达到：一种用核磁共振技术分析中药二甲基亚砜提取液的方法，其特征在于：制备供试品溶液，按规定称取中药材或中药制剂，并进行前处理，按同一项下规定的萃取剂量用二甲基亚砜替代原萃取剂，在18.45℃～189℃的温度下，用中药常用的提取方法提取，滤过，为供试品溶液，采用常用核磁共振仪器系统，根据核磁共振仪器系统和中药特性选择各系统参数，对供试品溶液定性定量测定其所含成分，从而得到包含了中药所有成分在内的核磁共振谱图、分子结构和物理特性。
本发明的目的还可以通过以下措施来达到：如果用常用方法提取的提取液粘度大，可采用离心分离，取上清液为供试品溶液，替代滤过。所述的各系统参数包括工作频率、谱宽、温度、累加次数。所述的中药常用提取方法包括超声法提取，采用超声处理15～120分钟提取，滤过。所述的中药常用萃取方法还包括渗漉法、浸渍法、煎煮法、回流法、蒸馏法、升华法、旋流法、逆流法、压榨法、微波法。所述的常用核磁共振仪器系统包括连续波核磁共振谱仪、脉冲傅里叶核磁共振谱仪和超导核磁共振谱仪。本方法适用于氢谱、碳谱、氧谱、磷谱、硅谱常规一维测试，COSY、HMQC、HMBC、MOESY谱二维测试，以及各种多维NMR谱测试。提取温度可采用25℃。所述的二甲基亚砜还可与0.5％～70％水混合，作为萃取剂。二甲基亚砜与水的混合液对中药的提取温度为-20℃～100℃。
本发明相比现有技术具有如下优点：
1、用二甲基亚砜作为萃取剂对中药材和制剂进行提取分析，能在高于18.45℃的室温用超声法一次性快速将水溶、油溶、挥发等中药的所有成分完全提取，并能避免活性成分挥发、水解、氧化、变性，最大限度保存了它们的生物活性。且操作简便安全、提取时间短。
2、用核磁共振技术分析中药的二甲基亚砜提取液，定性定量测定其所含成分；分析其所含成分的分子结构和物理特性；测定其所含成分经细胞、细菌、动物等吸收、转化、分布、排除、代谢后的变化，了解活性成分、毒性成分以及各种成分相互之间的作用机理，并为化学合成筛选先导化合物。
3、二甲基亚砜还可与水以任意比例混合，平衡无机盐等水溶成分的溶解率，并能在0℃以下的低温进行中药提取。
具体实施方式
本发明下面将结合实施例作进一步详述：
实施例一
制备供试品溶液，按《中国药典》的规定称取中药材或中药制剂，并进行前处理，按同一项下规定的萃取剂量用二甲基亚砜替代原萃取剂，在25℃的温度下，超声处理30分钟提取，滤过，如果提取液粘度大，可采用离心分离，取上清液为供试品溶液。如果供试品含生物酶、蛋白质等易氧化、易变性、热敏成分，应采用渗漉法或浸渍法制备供试品溶液。
本方法适用于常规一维测试：包括氢谱、碳谱(含DEPT)、氧谱、磷谱、硅谱等；各种二维谱测试：如COSY、HMQC、HMBC、MOESY谱等；各种多维NMR谱测试。其方法与现有技术相同。
以氢谱测定为例：选用JEOL-FX60Q型核磁共振谱仪，工作频率为60兆赫，谱宽为1000赫兹，δTMS＝δDMSO+2.50，25℃室温测定，平均累加次数为100次。结果是供试品溶液所有成分的1HNMR谱图。
药理分析：由于二甲基亚砜具有诱导干细胞成熟为肌肉细胞的重要功能，是其他常用的中药萃取剂无法比拟的，将中药的二甲基亚砜提取液透过细胞层次ADME/Tox研究系统(例如Caco-2、MDCK细胞单层吸收模型)或与细胞、细菌共育和动物实验，通过它们吸收、转化、分布、排除、代谢，取样用核磁共振技术分析，比对中药成分前后发生的变化，将活性成分、毒性成分和各种成分之间相互作用的机理用现代技术手段加以分析，使传统中医药理论体系与现代医学模式接轨，并为化学合成筛选先导化合物。
以细胞层次上的实验为例，在ADME/Tox研究系统中，将Caco-2或MDCK细胞接种在专用于药物转运实验的Transwell池中，经细胞汇合、分化达到细胞单层完整时，将中药的二甲基亚砜提取液注入池子的顶端，然后在不同的时间从池子的底端抽取经细胞扩散吸收、代谢后的产物和池子顶端的中药二甲基亚砜提取液，用核磁共振技术进行分析，比对各种成分前后发生的变化，了解它们的作用机理。也可将中药的二甲基亚砜提取液加入细胞培养基(液)中进行细胞培养一段时间(如温育两天)，取样用核磁共振技术分析，比对各种成分前后发生的变化。特别是其中胞浆酶活性的大小直接对应死亡细胞的数量，是研究中药毒副作用的方法之一。
通过细胞、细菌和动物模型实验，从中药的活性成分中筛选出适合于化学合成的先导化合物，为新药的研发提供一条便捷的途径。
实施例二
制备供试品溶液，按规定称取中药材或中药制剂，并进行前处理，按同一项下规定的萃取剂量用二甲基亚砜替代原萃取剂，在18.45℃的温度下，超声处理15分钟提取，滤过，如果提取液粘度大，可采用离心分离，取上清液为供试品溶液。其它步骤及原理与实施例一相同。
实施例三
制备供试品溶液，按规定称取中药材或中药制剂，并进行前处理，按同一项下规定的萃取剂量用二甲基亚砜替代原萃取剂，在189℃的温度下，超声处理120分钟提取，滤过，为供试品溶液。其它步骤及原理与实施例一相同，本操作适用于石决明等中药。
实施例四
制备供试品溶液，按规定称取中药材或中药制剂，并进行前处理，按同一项下规定的萃取剂量用二甲基亚砜替与0.5％水混合，代替原萃取剂，在-20℃的温度下，浸渍48小时，压榨提取，滤过，为供试品溶液。其它步骤及原理与实施例一相同，本操作适用于中药鲜品的提取。
实施例五
制备供试品溶液，按规定称取中药材或中药制剂，并进行前处理，按同一项下规定的萃取剂量用二甲基亚砜替与70％水混合，代替原萃取剂，在100℃的温度下，煎煮2小时提取，滤过，为供试品溶液。其它步骤及原理与实施例一相同。
实施例六
制备供试品溶液，按规定称取中药材或中药制剂，并进行前处理，按同一项下规定的萃取剂量用二甲基亚砜与35％水混合，代替原萃取剂，在45℃的温度下，超声处理30分钟提取，滤过，如果提取液粘度大，可采用离心分离，取上清液为供试品溶液。其它步骤及原理与实施例一相同，本操作能平衡提取液中的无机盐含量。

Claims (10)

1.一种用核磁共振技术分析中药二甲基亚砜提取液的方法，其特征在于：制备供试品溶液，按规定称取中药材或中药制剂，并进行前处理，按同一项下规定的萃取剂量用二甲基亚砜替代原萃取剂，在18.45℃～189℃的温度下，用中药常用的提取方法提取，滤过，为供试品溶液，采用常用核磁共振仪器系统，根据核磁共振仪器系统和中药特性选择各系统参数，对供试品溶液定性定量测定其所含成分，从而得到包含了中药所有成分在内的核磁共振谱图、分子结构和物理特性。
2.根据权利要求1所述的用核磁共振技术分析中药二甲基亚砜提取液的方法，其特征在于：如果用常用方法提取的提取液粘度大，可采用离心分离，取上清液为供试品溶液，替代滤过。
3.根据权利要求1所述的用核磁共振技术分析中药二甲基亚砜提取液的方法，其特征在于：所述的各系统参数包括工作频率、谱宽、温度、累加次数。
4.根据权利要求1所述的用核磁共振技术分析中药二甲基亚砜提取液的方法，其特征在于：所述的中药常用提取方法包括超声法提取，采用超声处理15～120分钟提取，滤过。
5.根据权利要求1所述的用核磁共振技术分析中药二甲基亚砜提取液的方法，其特征在于：所述的中药常用萃取方法还包括渗漉法、浸渍法、煎煮法、回流法、蒸馏法、升华法、旋流法、逆流法、压榨法、微波法。
6.根据权利要求1所述的用核磁共振技术分析中药二甲基亚砜提取液的方法，其特征在于：所述的常用核磁共振仪器系统包括连续波核磁共振谱仪、脉冲傅里叶核磁共振谱仪和超导核磁共振谱仪。
7.根据权利要求1所述的用核磁共振技术分析中药二甲基亚砜提取液的方法，其特征在于：本方法适用于氢谱、碳谱、氧谱、磷谱、硅谱常规一维测试，COSY、HMQC、HMBC、MOESY谱二维测试，以及各种多维NMR谱测试。
8.根据权利要求1所述的用核磁共振技术分析中药二甲基亚砜提取液的方法，其特征在于：提取温度可采用25℃。
9.根据权利要求1所述的用核磁共振技术分析中药二甲基亚砜提取液的方法，其特征在于：所述的二甲基亚砜还可与0.5％～70％水混合，作为萃取剂。
10.根据权利要求9所述的用核磁共振技术分析中药二甲基亚砜提取液的方法，其特征在于：二甲基亚砜与水的混合液对中药的提取温度为-20℃～100℃。
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