CN102140434B - Bhk21细胞专用高速高密度一体式细胞培养基及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明揭示了一种BHK₂₁细胞专用高速高密度一体式细胞培养基，用于BHK₂₁细胞的培养，包含了欧式平衡盐、已知化学成分水解乳蛋白、DMEM细胞培养基，且所述培养基中的组分及组分含量均为已知；本发明还揭示了一种BHK₂₁细胞专用高速高密度一体式细胞培养基的制备方法，包括，步骤一：将各原料称重并分组，并对各组原料分别按序进行混磨；步骤二：将完成了混磨的各组按序进行混磨。本发明的成分稳定，质量易于控制；保质期较长，且易于贮藏；制备工艺简单。本发明能够广泛地应用于细胞培养中。

Description

BHK21细胞专用高速高密度一体式细胞培养基及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种细胞培养基，尤其涉及一种BHK₂₁细胞专用高速高密度一体式细胞培养基及其制备方法，属于生物技术领域。

背景技术

现今，BHK₂₁细胞是用于疫苗生产的主要细胞株，其广泛地应用于口蹄疫等疫苗的生产。用于BHK₂₁细胞培养的培养基一般采用三合一的方法制备，具体是以欧式平衡盐调配水解乳蛋白后与DMEM等细胞培养基合并使用。然而，培养基中所使用的水解乳蛋白一般为动物来源，没有商品化的全化学合成产品，而动物的水解乳蛋白的化学成分并不固定，因此，培养基的质量不能得到保证，从而使得BHK₂₁细胞所合成的疫苗的质量得不到保证；而且，动物来源的水解乳蛋白的保质期一般较短，需要严格控制储存的环境，否则易于变质；同时，该培养基所采用的三合一的制备方法的工艺较为繁琐，生产效率较低。

发明内容

鉴于上述现有技术存在的缺陷，本发明的主要目的是提出一种BHK₂₁细胞专用高速高密度一体式细胞培养基；本发明的另一个目的是提出一种BHK₂₁细胞专用高速高密度一体式细胞培养基的制备方法。

本发明的主要目的目的，将通过以下技术方案得以实现：

一种BHK₂₁细胞专用高速高密度一体式细胞培养基，包括如下组分，

本发明的另一个目的，将通过以下技术方案得以实现：

一种BHK21细胞专用高速高密度一体式细胞培养基的制备方法，包括如下步骤，

步骤一：称重；

步骤二：将所述各组分分成5组，各组分别包括，

A)氯化钠、L-精氨酸盐酸盐、L-胱氨酸盐酸盐、L-半胱氨酸盐酸盐、L-谷氨酰胺、甘氨酸、L-组氨酸盐酸盐、L-异亮氨酸，

B)氯化钠、半乳糖、醋酸、丁二酸、丙酮酸钠、D-泛酸钙、氯化胆碱、叶酸、i-肌醇、烟酰胺、盐酸吡哆辛、核黄素、盐酸硫胺、硫酸腺嘌呤、维生素C、胆固醇，

C)氯化钠、L-亮氨酸、L-赖氨酸盐酸盐、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、酪氨酸二钠盐、L-缬氨酸，

D)葡萄糖、无水氯化钙、九水硝酸铁、氯化钾、无水硫酸镁、氯化钠、无水磷酸二氢钠，

E)氯化钠、酚红钠盐；

步骤三：在常温、湿度为65％以下的洁净环境中，使用316L球磨设备将步骤二中所述各组中的各组分按序依次混磨，整个混磨过程持续4小时，从而完成第一次加工，从而形成5组混磨原料组；

步骤四：使用316L球磨设备将完成了所述步骤三加工的各组混磨原料组按组序为E、A、B、C、D的顺序依次进行混磨，整个混磨过程持续4小时，完成后即为成品。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：成分稳定，质量易于控制；保质期较长，且易于贮藏；制备工艺简单。

以下便结合具体实施例对本发明的实施方式作进一步的详述，以使本发明的技术方案更易于理解、掌握。

具体实施方式

本发明揭示了一种BHK₂₁细胞专用高速高密度一体式细胞培养基，包括如下组分：

本发明BHK₂₁细胞专用高速高密度一体式细胞培养基的具体制备方法包括如下步骤：

步骤一：称重；例如，需要制造1L的本发明培养基，则称0.5-1mg的胆固醇；

步骤二：将所述各组分分成5组，各组分别包括，

A)氯化钠、L-精氨酸盐酸盐、L-胱氨酸盐酸盐、L-半胱氨酸盐酸盐、L-谷氨酰胺、甘氨酸、L-组氨酸盐酸盐、L-异亮氨酸，

B)氯化钠、半乳糖、醋酸、丁二酸、丙酮酸钠、D-泛酸钙、氯化胆碱、叶酸、i-肌醇、烟酰胺、盐酸吡哆辛、核黄素、盐酸硫胺、硫酸腺嘌呤、维生素C、胆固醇，

C)氯化钠、L-亮氨酸、L-赖氨酸盐酸盐、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、酪氨酸二钠盐、L-缬氨酸，

D)葡萄糖、无水氯化钙、九水硝酸铁、氯化钾、无水硫酸镁、氯化钠、无水磷酸二氢钠，

E)氯化钠、酚红钠盐；

步骤三：在常温、湿度为65％以下的洁净环境中，使用316L球磨设备将步骤二中所述各组中的各组分按序依次混磨，整个混磨过程持续4小时，从而完成第一次加工，从而形成5组混磨原料组；例如将A组组份依次放入316L球磨设备中研磨，整个研磨时间为4小时，这样就形成混磨原料A组。同样的时间和方式形成其他的混磨原料组。

步骤四：使用316L球磨设备将完成了所述步骤三加工的各组混磨原料组按组序为E、A、B、C、D的顺序依次进行混磨，整个混磨过程持续4小时，完成后即为成品。

下面简单介绍一下利用本发明BHK₂₁细胞专用高速高密度一体式细胞培养基培养BHK₂₁细胞的具体过程。

培养BHK₂₁细胞所使用的器材及试剂有：1.5L滚瓶机；1.5L滚瓶；二氧化碳培养箱；70ml小方瓶；BHK₂₁细胞株；倒置显微镜；37℃培养房；新生牛血清；及本发明BHK₂₁细胞专用高速高密度一体式细胞培养基。

培养液制备的具体过程为：首先，准确称取本发明BHK₂₁细胞专用高速高密度一体式细胞培养基的成品12g，溶于1000ml的三蒸水中，再加入10％的新生牛血清及5万单位双抗；然后，加入适量的碳酸氢钠，调pH至7.2，制成细胞培养液；最后，进行除菌过滤操作，并将配制好的培养液存于4℃的冰箱中备用。

BHK₂₁细胞的具体培养过程为：首先，将BHK₂₁细胞接种至所述培养液中，用70ml小方瓶扩展3代；然后，用1.5L滚瓶培养，且每24小时观察一次，保持1∶6的分种率，传至15代，具体的观察结果如表1所示。

表1：BHK₂₁细胞的培养情况

F38-10	1∶6	1.99	基本长满，形态良好	长满单层，折光性好
					F38-11	1∶6	1.93	基本长满，形态良好	长满单层，折光性好
F38-12	1∶6	1.91	基本长满，形态良好	长满单层，折光性好
					F38-13	1∶6	1.86	基本长满，形态良好	长满单层，折光性好
F38-14	1∶6	1.90	基本长满，形态良好	长满单层，折光性好
					F38-15	1∶6	1.88	基本长满，形态良好	长满单层，折光性好
F38-16	1∶6	1.84	基本长满，形态良好	长满单层，折光性好
					F38-17	1∶6	1.82	基本长满，形态良好	长满单层，折光性好
F38-18	1∶6	1.87	基本长满，形态良好	长满单层，折光性好

由表1所示的内容可知：由本发明BHK₂₁细胞专用高速高密度一体式细胞培养基所培养的每代BHK₂₁细胞单层致密，折光性好，且形态优良，符合高速、高密度生长的要求。

本发明尚有多种实施方式，凡采用等同变换或者等效变换而型成的所有技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种BHK₂₁细胞专用高速高密度一体式细胞培养基，其特征在于：包括如下组分，

。

2.一种如权利要求1所述的BHK₂₁细胞专用高速高密度一体式细胞培养基的制备方法，其特征在于：包括如下步骤，

步骤一：称重；

步骤二：将所述各组份分成5组，各组分别包括，

A)氯化钠、L-精氨酸盐酸盐、L-胱氨酸盐酸盐、L-半胱氨酸盐酸盐、L-谷氨酰胺、甘氨酸、L-组氨酸盐酸盐、L-异亮氨酸，

B)氯化钠、半乳糖、醋酸、丁二酸、丙酮酸钠、D-泛酸钙、氯化胆碱、叶酸、i-肌醇、烟酰胺、盐酸吡哆辛、核黄素、盐酸硫胺、硫酸腺嘌呤、维生素C、胆固醇，

C)氯化钠、L-亮氨酸、L-赖氨酸盐酸盐、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、酪氨酸二钠盐、L-缬氨酸，

D)葡萄糖、无水氯化钙、九水合硝酸铁、氯化钾、无水硫酸镁、氯化钠、无水磷酸二氢钠，

E)氯化钠、酚红钠盐；

步骤三：在常温、湿度为65％以下的洁净环境中，使用316L球磨设备将步骤二中所述各组中的各组分按序依次混磨，整个混磨过程持续4小时，从而 完成第一次加工，从而形成5组混磨原料组；

步骤四：使用316L球磨设备将完成了所述步骤三加工的各组混磨原料组按组序为E、A、B、C、D的顺序依次进行混磨，整个混磨过程持续4小时，完成后即为成品。