CN102133245A

CN102133245A - 降低蛋白质含量的鸦胆子油及其药物组合物以及它们的制备方法

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Publication number: CN102133245A
Application number: CN201110062615.3A
Authority: CN
Inventors: 张海茹; 徐勇猛; 薛秀生; 潘旭; 李薇
Original assignee: Shenyang Yaoda Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Shenyang Yaoda Leiyunshang Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2011-03-16
Filing date: 2011-03-16
Publication date: 2011-07-27
Anticipated expiration: 2031-03-16
Also published as: CN102133245B

Abstract

本发明涉及一种鸦胆子油及其药物组合物，以及它们的制备方法，其中本发明的鸦胆子油是通过除蛋白质工艺从鸦胆子脂肪油中降低蛋白质的含量获得的，获得的鸦胆子油稳定性好，无过敏反应等副作用，其临床用药安全有效。本发明还涉及以上述鸦胆子油为主要成分、安全有效的脂肪油乳剂及其制备方法。

Description

降低蛋白质含量的鸦胆子油及其药物组合物以及它们的制备方法

技术领域

本发明涉及一种蛋白质含量比较低的鸦胆子油、含该鸦胆子油的药物组合物，以及它们的制备方法，所述的鸦胆子油中蛋白质的含量控制在0.1%以下。

背景技术

鸦胆子为苦木科鸦胆子属植物鸦胆子Brucea javanica(L.)Merr的干燥成熟果实。秋季果实成熟时采收，除去杂质，晒干。鸦胆子始载于清代赵学敏所著的《本草纲目拾遗》。中华人民共和国药典中收载的功效为清热解毒，截疟，止痢，腐蚀赘疣。用于痢疾，疟疾；外治赘疣，鸡眼。

鸦胆子主要含水溶性成份及植物油两部分，其毒性成分存在于水溶性苦味成分中；而油溶性成分，即鸦胆子油无毒性且治疗效果较好，目前被广泛的应用于临床中，其中主要含有三油酸甘油酯、油酸、亚油酸、亚麻酸等成分，此外硬脂酸、棕榈酸、豆蔻酸、廿碳烯酸、山萮酸、花生烯酸也是鸦胆子油中常见的成分。一般而言提取鸦胆子有效成分的方法是本领域比较常规的提取中草药有效成分的操作方法，目前比较普遍的鸦胆子油（或称鸦胆子总脂肪油）为石油醚提取物，也可以经过简单的精制（例如脱色处理、水洗处理、白土除杂质处理），提取物用于制备药物制剂，比较普遍使用的制剂是鸦胆子油乳剂（例如鸦胆子油乳注射液、鸦胆子口服乳液）。

发明内容

虽然含鸦胆子油的药物已被广泛应用，但是乳剂稳定性略差，长期放置过程中出现破乳分层、絮凝沉降等现象；此外注射用乳剂在临床上还偶有发现会引起刺激血管、恶心呕吐、心律增快、发热、呼吸困难、下肢疼痛、过敏、溶血等不良反应。因此，改善制剂的稳定性和安全性，提供一种稳定性好、使用安全的鸦胆子油及其制剂是十分有意义的。

本发明的目的正是提供一种改善现有技术中的鸦胆子油稳定性和安全性的方法，相对于已有的鸦胆子油或制剂，提供一种减少毒性成分或不良成分，临床用药安全有效的含鸦胆子油的药物组合物。

通过大量研究，令人惊奇的发现，在鸦胆子油中的成分之一蛋白质的存在使鸦胆子油乳注射液具有诱发过敏的风险，还可能导致乳剂的稳定性下降。除去蛋白质将使鸦胆子油乳注射液的安全性大为提高，乳剂的稳定性也有明显提高。

在研究中首次发现，从鸦胆子中提取的有效成分鸦胆子油中普遍含有一定量的蛋白质，通常含量在0.5%左右，随着药材的不同来源其含量可能还会更高。经研究发现蛋白质是造成鸦胆子油乳注射液不稳定、不安全的重要因素，其中被分离出的蛋白质具有植物蛋白的一般特征，这些蛋白质具有蛋白质的常规特性，其分子量往往较大，一般分子量在10000以上，可与福林酚试液作用显出特征颜色反应。

本发明的核心在于通过实验研究，确定了鸦胆子油中的蛋白质对鸦胆子油的不利影响，为了改善药物的性能，本领域技术人员可以根据实际需要降低鸦胆子油中的蛋白质含量。如果低于一定的含量时，即使仍含有微量的蛋白质对鸦胆子油的稳定性和安全性也没有明显影响，当然如果完全除去这些蛋白质是最理想的，但这对后续的处理工艺有很高的要求，因此本领域技术人员可以根据实际工艺的需要控制蛋白质的含量。发现蛋白质对鸦胆子油或含鸦胆子油的药物的不利影响是本发明的一个核心问题。

针对上述发现，本发明的第一个目的是提供一种鸦胆子油，所述鸦胆子油的蛋白质含量低于0.1%。

本发明的第二个目的是提供一种制备上述鸦胆子油的方法。如何在保证鸦胆子提取物有效性的前提下，去除其中的蛋白质是本发明要解决的关键性问题。

本发明的第三个目的是提供一种无毒性、临床使用安全有效的鸦胆子油药物组合物，特别是鸦胆子油乳剂，以及组合物的制备方法。

本发明是以如下技术方案实现的：

本发明提供了一种鸦胆子油，其中蛋白质的含量控制在0.1%以下，优选含量控制在0.05%以下，更优选0.03%以下，更优选0.025%以下，最优选0.013%以下。

本发明的主要产品为鸦胆子油（或也可称为鸦胆子总脂肪油），是指鸦胆子药材经提取得到提取物（提取物可以经精制、纯化等步骤进行预处理）并降低其中蛋白质含量后制成的以鸦胆子的脂肪油为主要成分的中药有效部位提取物。鸦胆子油提取物中脂肪油类成分占总成分的50%以上，通常在90%以上，比较纯的产品达到96%以上。通常鸦胆子油主要包括：三油酸甘油酯、油酸、亚油酸、亚麻酸；一般也会含有硬脂酸、棕榈酸、豆蔻酸、廿碳烯酸、山萮酸、花生烯酸。当然根据药材的不同还会含有其他一些成分。

现有技术中制备鸦胆子油的方法很多，而本发明与现有技术中各种方法加工出的鸦胆子油的本质区别在于：本发明所述的鸦胆子油是在现有技术制备出的鸦胆子油的基础上进一步降低鸦胆子油中所含蛋白质的脂肪油类成分为主体的有效部位。

为了得到本发明所述的鸦胆子油，可以通过本领域除蛋白质的一般方法对鸦胆子油进行除蛋白质工艺获得。也可以利用本发明的除蛋白质的方法来提高鸦胆子油或含鸦胆子油的药物组合物的稳定性或减少其过敏性。

除蛋白质工艺优选采用分子蒸馏法或超滤法。

分子蒸馏法

分子蒸馏法包括以下步骤：将鸦胆子油原料置于分子蒸馏仪中进行蒸馏，收集蒸馏出的轻组分即得。或者，可进一步将蒸馏后的重组分进行萃取或冷却后过滤，将上述萃取后的油层或过滤后的滤液与蒸馏后的轻组分混合即得。其中优选的制备方法包括以下步骤：

1）将鸦胆子油原料置于分子蒸馏仪中进行预处理，预处理的条件如下：压力90～110Pa，温度80～90℃，预处理的时间为轻组分不再明显增加时为止，将其中轻组分弃去，得到进入一级分子蒸馏的重组分；

2）一级分子蒸馏：在压力15～25Pa、温度120～130℃的条件下，将进入一级分子蒸馏的重组分蒸馏至轻组分不再有明显增加时为止，将此步得到的轻重组分分别留存，其中的重组分进入下一步操作；

3）二级分子蒸馏：在压力3～5Pa、温度130～150℃的条件下，将进入二级分子蒸馏的重组分蒸馏至轻组分不再有明显增加时为止，将此步得到的轻组分留存，得到重组分；

任选在进行上述二级分子蒸馏工序后，将得到的重组分作为原料按照上述步骤3）的方法进行两次以上重复操作，将几次二级分子蒸馏得到的轻组分合并，并得到重组分；

4）三级分子蒸馏：在压力0.13～0.2Pa、温度180～230℃的条件下，将上一步骤得到的重组分蒸馏至轻组分不再有明显增加时为止，将此步得到的轻组分留存；

任选在进行上述三级分子蒸馏工序后，将得到的重组分作为原料按照上述步骤4）的方法进行两次以上重复操作，将几次三级分子蒸馏得到的轻组分合并；

5）将一级、二级、三级分子蒸馏所得到的轻组分混合均匀，并加热到100℃左右，充分搅拌，冷却即得到除去蛋白质杂质后的鸦胆子油。

对上述制备方法中两个任选步骤进一步解释说明的是：上述步骤3）进行第一次的二级分子蒸馏后，任选进行重复操作。若在第一次二级分子蒸馏后，认为轻重组分分离不完全，可以将得到的重组分再进行一次二级分子蒸馏；如果需要还可以将得到重组分再进行二级分子蒸馏。重复的次数可根据需要进行选择。例如，在一级分子蒸馏后，将重组分在压力3～5Pa、温度130～150℃的条件下，进行分子蒸馏至轻组分不再有明显增加时为止；如果此时希望将轻重组分进一步分离完全，则可以将得到的重组分在压力3～5Pa、温度130～150℃的条件下再进行一次分子蒸馏，并分别得到轻重组分；根据需要可以进一步将得到的重组分在压力3～5Pa、温度130～150℃的条件下，重复进行分子蒸馏至轻组分不再有明显增加时为止。本领域技术人员可根据需要多次重复上述工序。然后几次操作得到的轻组分合并，得到的重组分进行下一步操作。同理，上述步骤4）之后包括了任选步骤，其表示的含义与步骤3）之后的任选步骤类似：若在第一次三级分子蒸馏后，认为轻重组分分离不完全，可将得到的重组分再进行一次三级分子蒸馏；如果需要还可以将得到重组分再进行三级分子蒸馏。重复的次数可根据需要进行选择。

上述制备方法中，分子蒸馏后得到的重组分可进一步进行萃取或冷却过滤。萃取时，可采用乙醇或其它适宜溶剂进行萃取，优选95％乙醇进行萃取。

在上述制备方法中还可包括以下步骤：将第三级分子蒸馏后得到的重组分产物进行萃取或冷却后过滤，将上述萃取后的油层或过滤后的滤液与一级、二级、三级分子蒸馏所得到的轻组分混合均匀，并加热到100℃左右，充分搅拌，冷却即得到除去蛋白质杂质后的鸦胆子油。

超滤法

将鸦胆子油原料通过超滤装置，优选使用无机陶瓷膜，截留相对分子量为1万以上的物质，得到的超滤透过液即为去除蛋白质的鸦胆子油。优选在40～50℃、超滤压力为0.15～0.3MPa下超滤浓缩。

上述制备方法中，其中鸦胆子油原料可以为任何途径获得的鸦胆子油，例如直接购买的鸦胆子油原料，或鸦胆子油原料为将鸦胆子采用石油醚提取得到的鸦胆子粗油，或鸦胆子油原料是通过将鸦胆子采用石油醚提取得到的鸦胆子粗油经活性炭脱色制得，或直接使用鸦胆子药材根据常规提取方法进行提取得到鸦胆子油原料。

如从药材的提取开始制备本发明的鸦胆子油，可按以下步骤进行：

1）将鸦胆子药材破碎，用石油醚提取，提取液回收石油醚得鸦胆子粗油；

2）任选所述粗油经活性炭脱色步骤；

3）之后，除蛋白质得到本发明的鸦胆子油。

优选按以下步骤进行：

1）破碎：将鸦胆子药材用粉碎机粉碎，备用；

2）石油醚提取：将已破碎的药材用石油醚在提取罐中浸泡、浸泡液放入蒸馏罐，蒸馏石油醚，石油醚冷凝，回到提取罐，浸泡药材，反复提取；

3）回收：将蒸馏罐中的石油醚提取液先加热回收，再减压蒸馏回收，至无馏出液时，石油醚回收完毕，蒸馏罐中余下的油状液体，即为鸦胆子粗油；

4）任选进行脱色处理：将鸦胆子粗油加热后，加入活性炭，吸附脱色，过滤即得；

5）除蛋白质：取步骤3）或步骤4）所得的鸦胆子油经分子蒸馏或经超滤，蛋白质存在于馏出后的残留物中或超滤截留物中，馏出物或超滤滤液即为除去蛋白质的鸦胆子油有效部位。

本发明还提供了含有上述鸦胆子油的药物组合物，优选鸦胆子油乳剂。

所述鸦胆子油乳剂包括本发明提供的鸦胆子油、乳化剂、等张调节剂，以及任选的稳定剂和pH调节剂。优选在100ml鸦胆子油乳剂中各组分用量为：鸦胆子油5～50ml、乳化剂0.1～50g、等张调节剂0.01～20g、稳定剂0～50g、pH调节剂0～10g。其中乳化剂可选自大豆磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、泊洛沙姆、乙酸单甘油酯、聚山梨酯、聚氧乙烯蓖麻油，或两种以上物质的任意组合；等张调节剂可选自甘油、丙二醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨醇、甘露醇、木糖醇，或两种以上物质的任意组合；稳定剂可选自维生素E、抗坏血酸、油酸、油酸钠、胆酸、脱氧胆酸、脱氧胆酸钠，或两种以上物质的任意组合；pH调节剂可选自盐酸、氢氧化钠、磷酸及其盐类、碳酸及其盐类、乳酸、柠檬酸、醋酸，或两种以上物质的任意组合。

上述鸦胆子油乳剂的制备方法是：将乳化剂加热分散后，再加入预热的本发明的鸦胆子油乳化，得到鸦胆子油与乳化剂的混合物。具体的可采用另取等张剂与注射用水混合，加热，加入至鸦胆子油与乳化剂的混合物中，继续乳化成初乳，用匀质机乳化，过滤。任选在制备过程加入稳定剂和/或pH调节剂。

具体步骤如下：

（1）将乳化剂放入高剪切乳化罐中，加入约3～20倍量的注射用水（40℃～90℃）剪切分散10～120分钟。

（2）将鸦胆子油加热至50℃～100℃。

（3）用注射用水或将等张剂与注射用水按1：0.5～5的比例混合，搅拌均匀，加热至50℃～100℃。

（4）将预热至50℃～100℃后的鸦胆子油缓慢加入到乳化剂溶液中剪切乳化10～120分钟。然后加入步骤（3）的溶液继续乳化10～120分钟制成初乳。

（5）向初乳中加入稳定剂、pH调节剂，调整pH值至4.0～6.0。逐渐加入70℃以上注射用水至全量，剪切乳化10～120分钟。

（6）将全量药液用匀质机乳化2～6次，压力控制在20.0～90.0MPa，得到均匀乳化液，经5μm孔径滤芯过滤。

（7）检测合格后，灌封、灭菌即得。

所述步骤（1）中加入注射用水的量为5～20倍，优选8～10倍；注射用水的温度为40～90℃，优选50℃；剪切乳化时间为10～120分钟，优选20分钟。

所述步骤（2）中鸦胆子油加热至50～100℃，优选80℃。

所述步骤（3）中等张剂与注射用水按1：0.5～5的比例混合，优选1：1的比例混合；加热至50～100℃，优选80℃。

所述步骤（4）中剪切乳化的时间为10～120分钟，优选20分钟；加入步骤（3）的溶液继续乳化时间为10～120分钟，优选30分钟。

所述步骤（5）中剪切乳化时间为10～120分钟，优选30分钟。

所述步骤（6）中用匀质机乳化2～6次，优选3次；压力控制在20.0～90.0MPa，优选40.0MPa。

本发明的有益效果是：

1、本发明中的鸦胆子油含有的水溶性成分、蛋白质等杂质的量较低。通过本发明的分子蒸馏法或超滤法降低了鸦胆子油中蛋白质含量，避免了这类物质的存在带来的药物安全隐患，并且产品所包含单体成分均可以定性鉴别和定量测定，物质基础非常明确，符合中药现代化的国际要求，保证了临床用药的安全有效性。

2、采用本发明鸦胆子油制备的鸦胆子油乳注射液的过敏试验结果表明：未去除蛋白质的鸦胆子油乳注射液有轻度致敏性，去除蛋白质的鸦胆子油乳注射液均无致敏性。

3、本发明制备的鸦胆子油乳剂稳定性良好，鸦胆子油乳注射液和鸦胆子油口服乳液的三批样品加速试验、长期室温留样试验的结果显示：均未出现破乳、分层现象，pH值、总酸量等检查均符合质量标准的规定，证明本发明制备的鸦胆子油乳剂在有效期内质量稳定，可以保证临床的用药安全。

4、经研究发现鸦胆子油中的蛋白质的存在会导致鸦胆子制剂稳定性下降、产品质量下降、容易变质，更严重的是给患者带来安全性隐患，去除了蛋白质，减少了有害的成分，避免了乳滴静注人体后，带来的患者机体的过敏反应，变态反应，和减少了导致患者死亡的因素。

具体实施方式：

对比例1：制备未去除蛋白质的鸦胆子油(样品1)

按如下步骤制备：

（1）拣选：将检查合格的鸦胆子药材150.9kg，拣选鸦胆子中的杂物后，经粉碎机破碎，再次称重为150.2kg。

（2）石油醚提取：将破碎后的鸦胆子，装入袋内，扎紧袋口，放入提取罐中，关上罐盖，用真空抽入260kg石油醚，对鸦胆子进行浸泡48小时。将浸泡液放入蒸馏罐中，加热至65℃，蒸馏出的石油醚经冷凝进入提取罐中，若提取罐中的鸦胆子已暴露于石油醚溶剂之上，则补加一定量的石油醚，再浸泡30分钟。如此循环提取七次，补加石油醚的量为60kg，收集提取液量为298kg，将提取液放入蒸馏罐中。

（3）回收：将蒸馏罐中的石油醚提取液先常压加热回收，温度65℃。当馏出液量明显减少时，再减压蒸馏。减压蒸馏初、中阶段温度不能超过60℃，当无馏出液时，再逐渐升温到90℃减压蒸馏，至无馏出液时，石油醚回收完毕。蒸馏罐中余下的油状液体，为鸦胆子粗油，收集鸦胆子粗油，称重为31.2kg。

（4）脱色：取鸦胆子粗油加入0.45kg活性炭，加热至110℃，脱色吸附30分钟。将其降温至80℃，保温过滤，得鸦胆子油30.1kg。

实施例1：制备去除蛋白质的鸦胆子油（样品2）

（1）预处理：取一部分对比例1所制备的鸦胆子油置于分子蒸馏仪中进行预处理，

预处理的条件如下：压力90～110Pa，温度80～90℃，预处理的时间一般视轻组分不再明显增加时为止，蒸出的轻组分弃去，重组分进入一级分子蒸馏；

（2）一级分子蒸馏：预处理后，将重组分进行一级分子蒸馏，其条件如下：压力15～25Pa，温度120～130℃，蒸馏至轻组分不再有明显增加时为止。将此步得到的轻组分留存，重组分进入下阶段进行二级分子蒸馏。

（3）二级分子蒸馏：将一级分子蒸馏后的重组分进行二级分子蒸馏，其条件为：压力3～5Pa，温度130～150℃，蒸馏至轻组分不再有明显增加时为止。将此步得到的轻组分留存，重组分进入下阶段进行三级分子蒸馏。

（4）三级分子蒸馏：将二级分子蒸馏后的重组分进行三级分子蒸馏，其条件为：压力0.13～0.2Pa，温度180～230℃，蒸馏至轻组分不再有明显增加时为止。将此步得到的轻组分留存，即三级分子蒸馏所得到的轻组分。

（5）将一级、二级、三级分子蒸馏所得到的轻组分混合均匀并加热到100℃左右，充分搅拌，冷却即得。

实施例2：制备去除蛋白质的鸦胆子油（样品3）

取一部分对比例1所制备的鸦胆子油进行以下步骤：步骤（1）～（4）同实施例1的步骤（1）～（4）。

（5）对三级分子蒸馏后得到的重组分产物进行萃取，采用与重组分产物等体积的95%乙醇进行萃取，弃去乙醇层，萃取5～6次，将萃取后的油层，与一级、二级、三级分子蒸馏所得到的轻组分混合均匀，加热到100℃左右，充分搅拌，冷却即得。

实施例3：制备去除蛋白质的鸦胆子油（样品4）

（5）将三级分子蒸馏后得到的重组分产物置于冷冻设备中，将其逐步冷却至0～2℃后，静置12小时，保持在此温度下过滤，过滤即可除去蛋白质。将滤液与一级、二级、三级分子蒸馏所得到的轻组分混合均匀并加热到100℃左右，充分搅拌，冷却即得。

实施例4：制备去除蛋白质的鸦胆子油（样品5）

取一部分对比实施例1制备的鸦胆子油1kg倒入陶瓷膜超滤装置中，用截留相对分子量为1万的无机陶瓷膜, 在40～50℃、超滤压力为0.15～0.3MPa下超滤浓缩，超滤后得到880g超滤透过液和110g超滤截留液。所得到的超滤透过液即为去除蛋白质的鸦胆子油。

实施例5：凯氏定氮法测定样品1-5中蛋白质含量

量取鸦胆子油约0.1ml，精密称定重量，置干燥的30ml凯氏烧瓶中，按照氮测定法（中国药典2010年版二部附录Ⅶ D 第二法）测定。馏出液用硫酸滴定液（0.5mmol/l）滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml硫酸滴定液（0.5mmol/l）相当于0.01401mg的氮。

按下列公式计算：蛋白质的含量（%）=含氮量/16%，结果见表1。

表1 不同样品的蛋白质含量

批号	样品1	样品2	样品3	样品4	样品5
						蛋白质含量	0.44%	<0.013%	0.025%	0.031%	<0.013%

实施例6-8：鸦胆子油乳剂的制备

取样品3制备鸦胆子油乳剂样品，按如下步骤制备：

（1）将甘油加入至水相罐中，配成50%甘油水溶液搅拌均匀，加热至80℃，备用。

（2）将精制豆磷脂放入高剪切乳化罐中，加入8～10倍的注射用水（50℃）剪切乳化20分钟，将预热80℃后的鸦胆子油缓慢加入，剪切乳化20分钟。然后加入步骤（1）的溶液继续乳化30分钟制成初乳。

（3）向初乳中逐渐加入70℃以上注射用水至全量，剪切乳化30分钟。

（4）用高压匀质机乳化数次，严格控制压力，得到均匀乳化液，过滤。

（5）检测合格后，灌封、灭菌，即得。

注：鸦胆子油乳剂指鸦胆子油乳注射液和鸦胆子油口服乳液，2者的处方工艺完全相同，区别在于生产环境要求不同。

试验数据如表2所示：

表2 鸦胆子油乳剂配方

试验条件	实施例6	实施例7	实施例8
				鸦胆子油用量（样品3）	1000ml	1000ml	1000ml
豆磷脂用量	150g	100g	200g
				甘油用量	250g	200g	300g
乳化次数	3	2	6
				乳化压力	40MPa	80MPa	20MPa

实施例9：过敏试验

以下各组分别采用不同样品按照实施例6的配比和制备方式制备鸦胆子油乳注射液，进行测试。

分组：受试组Ⅰ：采用样品1制备的鸦胆子油乳注射液

受试组Ⅱ：采用样品2制备的鸦胆子油乳注射液

受试组Ⅲ：采用样品3制备的鸦胆子油乳注射液

受试组Ⅳ：采用样品4制备的鸦胆子油乳注射液

受试组Ⅴ：采用样品5制备的鸦胆子油乳注射液

阴性对照液：0.9%氯化钠注射液

阳性对照液：鸦胆子油抗原

实验动物：家兔，日本大耳白兔，体重2.3kg。

豚鼠，体重300～400g，雌雄兼用。

试验方法与结果：

抗血清的制备：将样品1用95%乙醇萃取后，旋转蒸发除去溶剂后得到鸦胆子油抗原。以鸦胆子油抗原免疫家兔6周后使其产生抗体，剥离颈动脉取血分离血清得到抗血清。

豚鼠被动皮肤过敏实验：取检疫合格的豚鼠，背部脱毛暴露皮肤；取抗血清，用生理盐水稀释成1:2、1:8、1:32的稀释液，每只豚鼠在离脊椎约2cm处皮内注射0.1mL；24h后静脉攻击含0.5%伊文思蓝（Evans）染料的受试药液，以鸦胆子抗原为阳性对照；30min后麻醉处死各组动物，剪取背部皮肤，测量皮肤内层的蓝色斑点大小，直径大于5mm者为阳性。结果如表3：

表3 皮肤被动过敏试验结果

结论：受试组Ⅰ有轻度致敏性，其余受试组无致敏性。

实施例10：稳定性试验

1、鸦胆子油乳注射液的稳定性

分别将采用样品1制备的鸦胆子油乳注射液（第一组）、实施例6的鸦胆子油乳注射液（第二组）进行稳定性试验比较，包括加速试验和长期室温留样试验。检验方法按鸦胆子油乳注射液部颁标准WS₃-B-2793-97。加速试验是将样品在温度40℃±2℃，湿度75%±5%的条件下放置6个月，分别于第1、2、3、6个月末取样检测，与0月的检测结果做比较；室温留样试验是将样品在温度25℃±2℃、湿度60%±10%的条件下放置，分别于第3、6、9、12个月取样检测，与0月的检测结果做比较，结果见表2-3。

表2 加速试验结果

表3 长期室温留样试验结果

2、鸦胆子油口服乳液的稳定性

分别将采用样品1制备的鸦胆子油口服乳液（第一组）、实施例6的鸦胆子油口服乳液（第二组）进行稳定性试验比较，包括加速试验和长期室温留样试验。检验方法按鸦胆子油口服乳液部颁标准WS₃-B-3646-98。试验方法同上，结果见表4-5。

表4 加速试验结果

表5 长期室温留样试验结果

Claims

1.一种鸦胆子油，其特征在于，蛋白质的含量在0.1%以下，优选含量在0.05%以下，更优选0.03%以下，更优选0.025%以下，最优选在0.013%以下。

2.根据权利要求1所述的鸦胆子油，其特征在于所述鸦胆子油含有三油酸甘油酯，油酸，亚油酸，亚麻酸，优选所述鸦胆子油还含有三油酸甘油酯，油酸，亚油酸，亚麻酸，硬脂酸，棕榈酸，豆蔻酸，廿碳烯酸，山萮酸，花生烯酸。

3.一种制备权利要求1-2所述鸦胆子油的方法，其特征在于所述方法包括将鸦胆子油原料进行除蛋白质步骤，优选所述除蛋白质步骤采用分子蒸馏法或超滤法。

4.一种提高鸦胆子油或含鸦胆子油药物组合物的稳定性或减少其过敏性的方法，其特征在于所述方法包括将鸦胆子油原料进行除蛋白质步骤，优选所述除蛋白质步骤采用分子蒸馏法或超滤法。

5.根据权利要求3或4所述方法，其中所述分子蒸馏法包括以下步骤：将鸦胆子油原料置于分子蒸馏仪中进行蒸馏，收集蒸馏出的轻组分即得。

6.根据权利要求5所述鸦胆子油的制备方法，收集轻组分后，将蒸馏后的重组分进行萃取或冷却后过滤，将上述萃取后的油层或过滤后的滤液与蒸馏后的轻组分混合即得。

7.根据权利要求5或6所述的鸦胆子油的制备方法，其中鸦胆子油原料进行分子蒸馏的步骤包括以下步骤：

步骤1）将鸦胆子油原料置于分子蒸馏仪中进行预处理，预处理的条件如下：压力90～110Pa，温度80～90℃，预处理的时间为轻组分不再明显增加时为止，将其中轻组分弃去，得到进入一级分子蒸馏的重组分；

步骤2）一级分子蒸馏：在压力15～25Pa、温度120～130℃的条件下，将进入一级分子蒸馏的重组分蒸馏至轻组分不再有明显增加时为止，将此步得到的轻组分留存，得到进行二级分子蒸馏的重组分；

步骤3）二级分子蒸馏：在压力3～5Pa、温度130～150℃的条件下，将进入二级分子蒸馏的重组分蒸馏至轻组分不再有明显增加时为止，将此步得到的轻组分留存，得到重组分；

步骤4）三级分子蒸馏：在压力0.13～0.2Pa、温度180～230℃的条件下，将上一步骤得到的重组分蒸馏至轻组分不再有明显增加时为止，将此步得到的轻组分留存，并得到重组分；

步骤5）将一级、二级、三级分子蒸馏所得到的轻组分混合均匀，并加热到100℃左右，充分搅拌，冷却即得到除去蛋白质杂质后的鸦胆子油。

8.根据权利要求7所述的鸦胆子油的制备方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：将第三级分子蒸馏后得到的重组分产物进行萃取或冷却后过滤，将上述萃取后的油层或过滤后的滤液与一级、二级、三级分子蒸馏所得到的轻组分混合均匀，并加热到100℃左右，充分搅拌，冷却即得；优选萃取时采用乙醇，特别优选95％乙醇进行萃取。

9.根据权利要求3或4所述的鸦胆子油的制备方法，其特征在于，其中所述超滤法包括以下步骤：使用无机陶瓷膜，截留相对分子量为1万以上的物质，得到的超滤透过液即为去除蛋白质的鸦胆子油，优选在40～50℃、超滤压力为0.15～0.3MPa下超滤浓缩。

10.根据权利要求3、5-9任意一项权利要求所述制备方法制备得到的鸦胆子油。

11.一种药物组合物，其特征在于包含权利要求1-2，10中任一项权利要求所述的鸦胆子油，优选所述药物组合物为鸦胆子油乳注射液或鸦胆子油口服乳液。

12.根据权利要求11所述的药物组合物，其中所述鸦胆子油乳注射液或鸦胆子油口服乳液包括鸦胆子油、乳化剂，任选含有等张调节剂、稳定剂和pH调节剂。

13.根据权利要求12所述药物组合物，其中在100ml鸦胆子油乳注射液或鸦胆子油口服乳液中含以下用量配比的组分：鸦胆子油5～50ml、乳化剂0.1～50g、等张调节剂0.01～20g、稳定剂0～50g、pH调节剂0～10g。

14.根据权利要求12或13所述药物组合物，其中乳化剂可选自大豆磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、泊洛沙姆、乙酸单甘油酯、聚山梨酯、聚氧乙烯蓖麻油，或两种以上物质的任意组合；和/或所述等张调节剂可选自甘油、丙二醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨醇、甘露醇、木糖醇，或两种以上物质的任意组合。

15.一种制备权利要求11-14所述药物组合物的制备方法，其特征在于所述制备方法包括以下步骤：将乳化剂加热分散后，再加入预热的鸦胆子油乳化，得到鸦胆子油与乳化剂的混合物。

16.根据权利要求15所述的制备方法还包括以下步骤：取水或含等张剂的水溶液加热，加入至鸦胆子油与乳化剂的混合物中，乳化成初乳，用匀质机乳化，过滤，任选在制备过程加入稳定剂和/或pH调节剂。

17.根据权利要求16所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

（1）将乳化剂放入高剪切乳化罐中，加入约3～20倍量的水（40℃～90℃）剪切分散10～120分钟；

（2）将鸦胆子油加热至50℃～100℃；

（3）取注射用水或按1：0.5～5的比例混合搅拌均匀的等张剂与注射用水，加热至50℃～100℃；

（4）将预热至50℃～100℃后的鸦胆子油缓慢加入到乳化剂溶液中剪切乳化10～120分钟，然后加入步骤（3）的溶液继续乳化10～120分钟制成初乳；

（5）向初乳中加入稳定剂、pH调节剂，调整pH值至4.0～6.0，逐渐加入70℃以上注射用水至全量，剪切乳化10～120分钟；

18.根据权利要求17所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

步骤（1）加入注射用水的量为8～10倍，注射用水的温度为50℃，剪切乳化时间为20分钟；

步骤（2）中鸦胆子油加热至80℃；

步骤（3）中等张剂与注射用水按1：1的比例混合，加热至80℃；

步骤（4）中剪切乳化的时间为10～120分钟，优选20分钟；加入步骤（3）的溶液继续乳化时间为30分钟;

步骤（5）中剪切乳化时间为30分钟

步骤（6）中用匀质机乳化3次；压力控制在40MPa。