一种治疗胼胝的化妆品
技术领域
本发明涉及化妆品领域,特别是涉及一种治疗胼胝的化妆品。
背景技术
胼胝是由于皮肤长期受压迫、摩擦发生的硬而平滑的角质增厚,为一局限性的角质板。呈蜡黄色角质斑片,境界不清,触之较硬。表面皮纹清晰可见,局部汗液分泌减少,感觉迟钝。发病较缓,多无自觉症状,严重者有压痛。
目前,胼胝的治疗方法主要为物理性治疗(如手术刀削、垫以软质的鞋垫等)和药物治疗,物理治疗法因其见效慢或价格昂贵,胼胝患者通常更倾向于药物治疗法。然而,胼胝患处皮肤因其角质层表现为异常增生变厚,故其对治疗药物有效成分的吸收更为困难,导致许多市面上用于治疗胼胝的药物治疗效果不尽人意。
皮肤分表皮、真皮、及皮下组织三部分,其中,表皮由外向内又可以分为角质层、透明层、颗粒层、棘层、和基底层五层。角质层是表皮的最外面一层,由4-8层己经死亡的,扁平层状无核细胞组成。角质层可保护皮肤,防止体内组织液外渗,限制水、脂质或化妆品成分等物质通过,保持皮肤柔润,是皮肤健美的决定层。研究表明,药物或化妆品中添加的有效成分,只要不被皮肤吸收,都是一种负担,导致皮肤感染。因此,促透剂在医药领域及化妆品行业中已得到了广泛的应用。尽管如此,促透剂的使用仍然存在着许多问题,如一些化学促透剂对皮肤具有刺激性,容易引起皮肤红肿,或具有恶臭味或促渗效果相对不明显等。
为此,实有必要开发一种具有安全、无刺激、易吸收的产品,解决胼胝患处皮肤吸收困难的问题。
发明内容
基于此,本发明的目的是提供一种用于治疗胼胝的化妆品。
解决上述技术问题的具体技术方案如下:
一种治疗胼胝的化妆品,所述化妆品中治疗胼胝的活性成分由中药组合物组成,所述中药组合物由下述重量份的原料提取制得:
夏枯草15~45份、桂花13~34份、三棱13~34份、八月札13~34份、甘松13~34份、蜂胶10~28份、五倍子8~22份。
在其中一些实施例中,所述化妆品中治疗胼胝的活性成分由中药组合物组成,所述中药组合物由下述重量份的原料提取制得:
夏枯草28~32份、桂花18~22份、三棱18~22份、八月札18~22份、甘松18~22份、蜂胶13~17份、五倍子8~12份。
在其中一些实施例中,上述中药组合物由以下制备方法制得:
(1)先将五倍子洗净,去除杂质,在135℃~155℃下炒15~25分钟;
(2)将三棱、八月札、甘松洗净,去除杂质后置于煮锅内,加入三棱、八月札、甘松三者总重量10~12倍量的水煮沸,水沸后持续煎煮25~35分钟,再加入三棱、八月札、甘松三者总重量4~7倍量的食醋煎煮15~20分钟,停止加热,留在锅内闷6~8小时,晾干;
(3)将洗净、干燥的夏枯草、桂花和蜂胶以及经步骤(1)和步骤(2)处理好的五倍子、三棱、八月札、甘松分别粉碎、混合,得混合物,将混合物置于超声提取装置中,加入70%~85%的乙醇,在60℃~70℃超声波提取30~40分钟,趁热抽滤,得滤液Ⅰ和滤渣Ⅰ,乙醇与混合物的料液比为1:8~12,所述超声波功率为150W;
(4)将滤渣Ⅰ加入与步骤(3)中相同浓度和体积的乙醇,置于超声提取装置中,于60℃~70℃下超声波提取20~30分钟,趁热抽滤,得滤液Ⅱ和滤渣Ⅱ,所述超声波功率为150W;
(5)将滤液Ⅰ和滤液Ⅱ合并,浓缩干燥至原体积的3/10~1/2倍即得所述中药组合物。
在一些实施例中,所述中药组合物在化妆品中的重量份配比为5~15。
在一些实施例中,所述的化妆品为膏霜或软化水。
本发明的另一目的在于提供一种膏霜,所述膏霜由下述重量份配比的组分组成:
本发明化妆品中所含的中药组合物:5~15,
乳化剂:3~7.5,
乳化增稠剂:0.1~1,
润肤剂:9.1~23,
抗氧化剂:0.01~1,
保湿剂:8~24,
增稠剂:0.15~0.55,
肤感调节剂:0.1~1,
PH调节剂:0.04~0.25,
抗炎、抗敏剂:0.1~0.8,
调理剂:0.1~1,
防腐剂:0.1~0.47,
去离子水:20~76。
在一些实施例中,上述膏霜中所述乳化剂为山梨坦硬脂酸酯、聚山梨醇酯-60、甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、硬脂醇聚醚-2中的至少一种;所述乳化增稠剂为聚丙烯酰胺、C13-14异链烷烃、月桂醇聚醚-7;所述润肤剂为鲸蜡硬脂醇、肉豆蔻酸异丙酯、矿油、聚二甲基硅氧烷中的至少一种;所述抗氧化剂为丁羟甲苯;所述保湿剂为甘油、山梨糖醇、尿素中的至少一种;所述增稠剂为黄原胶、丙烯酸酯类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物或卡波姆中的至少一种;所述肤感调节剂为硅石;所述PH调节剂为柠檬酸或氢氧化钾中的至少一种;所述抗炎、抗敏剂为红没药醇;所述调理剂为维生素A棕榈酸酯;所述防腐剂为羟苯甲酯、羟苯丙酯或甲基异噻唑啉酮中的至少一种。
在一些实施例中,上述膏霜由下述重量份配比的组分组成:
本发明化妆品中所含的中药组合物:5~15,
山梨坦硬脂酸酯:1~2,
聚山梨醇酯-60:1~2.5,
甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯:1~3,
鲸蜡硬脂醇:0.1~1,
肉豆蔻酸异丙酯:3~6,
矿油:5~13,
聚二甲基硅氧烷:1~3,
丁羟甲苯:0.01~1,
羟苯甲酯:0.05~0.2,
羟苯丙酯:0.02~0.15,
甘油:2~4,
山梨糖醇:5~12,
黄原胶:0.05~0.2,
丙烯酸酯类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物:0.1~0.35,
硅石:0.1~1,
柠檬酸:0.01~1,
去离子水:20~76,
聚丙烯酰胺、C13~14异链烷烃、月桂醇聚醚-7:0.1~1,
红没药醇:0.1~0.8,
氢氧化钾:0.03~0.15,
维生素A棕榈酸酯:0.1~1,
尿素:1~8,
甲基异噻唑啉酮:0.03~0.12。
本发明的另一目的在于提供一种软化水,所述软化水由下述重量份配比的组分组成:
本发明化妆品中所含的中药组合物:5~15,
保湿剂:2.2~15.75,
抗炎、抗敏剂:0.06~0.25,
防腐剂:0.08~0.3,
去离子水:79~93;
所述软化水的PH为2.5~3.0。
在一些实施例中,上述软化水配方中所述保湿剂为甘油、乳酸或乳酸钠中的至少一种;所述抗炎、抗敏剂为丁二醇、水、牡丹根提取物;所述防腐剂为双羟甲基咪唑烷基脲、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯或1,2-己二醇/辛甘醇中的至少一种。
在一些实施例中,上述软化水包括下述重量份配比的组分:
本发明化妆品中所含的中药组合物:5~15,
甘油:1~9,
去离子水:79~93,
乳酸:1~6,
丁二醇、水、牡丹根提取物:0.06~0.25,
双羟甲基咪唑烷基脲、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯:0.08~0.3,
乳酸钠:0.2~0.75;
所述软化水的PH为2.5~3.0。
以上化妆品组分中所述的名称均为国际化妆品原料命名(Internt ionl Nomenclture Cosmet ic Ingredient,INCI)所规定的名称,如:甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、丙烯酸酯类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、聚丙烯酰胺、C13-14异链烷烃、月桂醇聚醚-7、丁二醇、水、牡丹根提取物、双羟甲基咪唑烷基脲、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、1,2-己二醇/辛甘醇。
本发明用于治疗胼胝的化妆品,其作用原理如下:
胼胝是因患处长期受压或摩擦,局部气血运行阻滞,加上皮肤失营而发生皮肤角质增生变厚而形成的,当机体免疫力低下无法进行正常的新陈代谢时,借助具有活血理气功效的外用制剂帮助其恢复正常的新陈代谢功能,并且补充所需的相应的营养物质可控制病情的恶化或使其恢复至正常状态。
夏枯草提取物不仅具有消肿、软坚散结功效,还具有良好的抗菌、抗病毒和免疫抑制作用,其对某些由于免疫过程引起的病理损伤具有治疗的作用。
桂花提取物不仅具有散寒破结之功效,还具有抗菌消炎作用,其与夏枯草合用不仅可增强两者的功效,还可以促进夏枯草有效成分的吸收。
三棱破血行气、消积止痛,重在散血结,其提取物具有加快血液循环及抗炎作用,甘松、八月札利气、活血、理气止痛,重在散气结,甘松提取物可防止因挤压而导致的皮肤既能障碍,其通过抗菌消炎、舒张平滑肌、扩张毛细血管、改善微循环以促使溃疡愈合。八月札提取物具有良好的抗炎功效。甘松、八月札合用在协同发挥其药理作用的同时,可促进皮肤对该中药组合物有效成分的吸收。
蜂胶不仅具有软化角化组织、止痛之功效,其提取物中还含有丰富的多种维生素、氨基酸、人体必需的微量元素,其用于本发明化妆品中不仅可为足部受损皮肤补充充足的营养,还可以促进有效成分的吸收。
五倍子具有敛汗止血、收湿敛疮、解毒功效,是治疗皮肤湿烂、痈肿疮毒的良药,其提取物具有广谱的抗菌作用,其用于本发明化妆品组方中可增强受损皮肤愈合功效。
本发明所述的一种治疗胼胝的化妆品及其制备方法具有以下优点和有益效果:
本发明经发明人大量的实验和研究,得出一种治疗胼胝的化妆品,确定了所述化妆品有效成分的最佳组分及其配比,即夏枯草、桂花、三棱、八月札、甘松、蜂胶、五倍子以特定比例配合使用,可协同产生显著的治疗胼胝功效;且本发明治疗胼胝的化妆品安全、无刺激,可提高皮肤透皮吸收率,起到显著的治疗胼胝的效果。
具体实施方式
以下将结合具体实施例对本发明做进一步说明。
下述实施例中所述的“甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯”是指甘油硬脂酸酯和PEG-100硬脂酸酯的混合物,购自购自Croda Singapore Pte Ltd;“聚丙烯酰胺、C13-14异链烷烃、月桂醇聚醚-7”是指聚丙烯酰胺、C13-14异链烷烃、月桂醇聚醚-7的混合物,购自广州百好博有限公司;“丁二醇、水、牡丹根提取物”是指丁二醇、水和牡丹根提取物的混合物,购自Bio-Nest Biochemical Technology;“双羟甲基咪唑烷基脲、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯”是指双羟甲基咪唑烷基脲和碘丙炔醇丁基氨甲酸酯的混合物,购自ISP Chemicals LLC;其他均为市售产品。
实施例1中药组合物的制备
夏枯草30g、桂花20g、三棱20g、八月札20g、甘松20g、蜂胶15g、五倍子10g。
上述中药组合物的制备方法如下:
(1)先将上述重量的五倍子洗净,去除杂质,在145℃下炒20分钟;
(2)将上述重量的三棱、八月札、甘松洗净,去除杂质后置于煮锅内,加入660g的水煮沸,水沸后持续煎煮30分钟,再加入300g的食醋煎煮18分钟,停止加热,留在锅内闷7小时,晾干;
(3)将洗净、干燥的上述重量的夏枯草、桂花和蜂胶以及经步骤(1)和步骤(2)处理好的五倍子、三棱、八月札、甘松分别粉碎、混合,得混合物,将混合物置于超声提取装置中,加入80%的乙醇,在65℃超声波(功率为150W)提取35分钟,趁热抽滤,得滤液Ⅰ和滤渣Ⅰ,乙醇与混合物的料液比为1:10;
(4)将滤渣Ⅰ加入与步骤(3)中相同浓度和体积的乙醇,置于超声提取装置中,于65℃下超声波(功率为150W)提取25分钟,趁热抽滤,得滤液Ⅱ和滤渣Ⅱ;
(5)将滤液Ⅰ和滤液Ⅱ合并,浓缩干燥至原体积的2/5,即得所述中药组合物a1。
实施例2中药组合物的制备
夏枯草15g、桂花13g、三棱13g、八月札13g、甘松13g、蜂胶10g、五倍子8g。
上述中药组合物的制备方法如下:
(1)先将上述重量的五倍子洗净,去除杂质,在135℃下炒25分钟;
(2)将上述重量的三棱、八月札、甘松洗净,去除杂质后置于煮锅内,加入390g的水煮沸,水沸后持续煎煮25分钟,再加入156g的食醋煎煮15分钟,停止加热,留在锅内闷6小时,晾干;
(3)将洗净、干燥的上述重量的夏枯草、桂花和蜂胶以及经步骤(1)和步骤(2)处理好的五倍子、三棱、八月札、甘松分别粉碎、混合,得混合物,将混合物置于超声提取装置中,加入70%的乙醇,在60℃超声波(功率为150W)提取30分钟,趁热抽滤,得滤液Ⅰ和滤渣Ⅰ,乙醇与混合物的料液比为1:8;
(4)将滤渣Ⅰ加入与步骤(3)中相同浓度和体积的乙醇,置于超声提取装置中,于60℃下超声波(功率为150W)提取20分钟,趁热抽滤,得滤液Ⅱ和滤渣Ⅱ;
(5)将滤液Ⅰ和滤液Ⅱ合并,浓缩干燥至原体积的1/2,即得所述中药组合物b1。
实施例3中药组合物的制备
夏枯草28g、桂花18g、三棱18g、八月札18g、甘松18g、蜂胶13g、五倍子8g。
上述中药组合物的制备方法如下:
(1)先将上述重量的五倍子洗净,去除杂质,在155℃下炒15分钟;
(2)将上述重量的三棱、八月札、甘松洗净,去除杂质后置于煮锅内,加入561g的水煮沸,水沸后持续煎煮30分钟,再加入255g的食醋煎煮16分钟,停止加热,留在锅内闷7小时,晾干;
(3)将洗净、干燥的上述重量的夏枯草、桂花和蜂胶以及经步骤(1)和步骤(2)处理好的五倍子、三棱、八月札、甘松分别粉碎、混合,得混合物,将混合物置于超声提取装置中,加入75%的乙醇,在65℃超声波(功率为150W)提取35分钟,趁热抽滤,得滤液Ⅰ和滤渣Ⅰ,乙醇与混合物的料液比为1:10;
(4)将滤渣Ⅰ加入与步骤(3)中相同浓度和体积的乙醇,置于超声提取装置中,于65℃下超声波(功率为150W)提取25分钟,趁热抽滤,得滤液Ⅱ和滤渣Ⅱ;
(5)将滤液Ⅰ和滤液Ⅱ合并,浓缩干燥至原体积的3/10,即得所述中药组合物c1。
实施例4中药组合物的制备
夏枯草32g、桂花22g、三棱22g、八月札22g、甘松22g、蜂胶17g、五倍子12g。
上述中药组合物的制备方法如下:
(1)先将上述重量的五倍子洗净,去除杂质,在140℃下炒20分钟;
(2)将上述重量的三棱、八月札、甘松洗净,去除杂质后置于煮锅内,加入792g的水煮沸,水沸后持续煎煮30分钟,再加入432g的食醋煎煮18分钟,停止加热,留在锅内闷7小时,晾干;
(3)将洗净、干燥的上述重量的夏枯草、桂花和蜂胶以及经步骤(1)和步骤(2)处理好的五倍子、三棱、八月札、甘松分别粉碎、混合,得混合物,将混合物置于超声提取装置中,加入80%的乙醇,在65℃超声波(功率为150W)提取35分钟,趁热抽滤,得滤液Ⅰ和滤渣Ⅰ,乙醇与混合物的料液比为1:10;
(4)将滤渣Ⅰ加入与步骤(3)中相同浓度和体积的乙醇,置于超声提取装置中,于65℃下超声波(功率为150W)提取25分钟,趁热抽滤,得滤液Ⅱ和滤渣Ⅱ;
(5)将滤液Ⅰ和滤液Ⅱ合并,浓缩干燥至原体积的1/2,即得所述中药组合物d1。
实施例5中药组合物的制备
本实施例一种用于治疗胼胝的中药组合物,其活性成分包括下述重量的原料:
夏枯草45g、桂花34g、三棱34g、八月札34g、甘松34g、蜂胶28g、五倍子22g。
上述中药组合物的制备方法如下:
(1)先将上述重量的五倍子洗净,去除杂质,在155℃下炒20分钟;
(2)将上述重量的三棱、八月札、甘松洗净,去除杂质后置于煮锅内,加入1224g的水煮沸,水沸后持续煎煮35分钟,再加入714g的食醋煎煮20分钟,停止加热,留在锅内闷8小时,晾干;
(3)将洗净、干燥的上述重量的夏枯草、桂花和蜂胶以及经步骤(1)和步骤(2)处理好的五倍子、三棱、八月札、甘松分别粉碎、混合,得混合物,将混合物置于超声提取装置中,加入85%的乙醇,在70℃超声波(功率为150W)提取40分钟,趁热抽滤,得滤液Ⅰ和滤渣Ⅰ,乙醇与混合物的料液比为1:12;
(4)将滤渣Ⅰ加入与步骤(3)中相同浓度和体积的乙醇,置于超声提取装置中,于70℃下超声波(功率为150W)提取30分钟,趁热抽滤,得滤液Ⅱ和滤渣Ⅱ;
(5)将滤液Ⅰ和滤液Ⅱ合并,浓缩干燥至原体积的2/5,即得所述中药组合物e1。
对比例1
夏枯草11g、桂花10g、三棱10g、八月札10g、甘松10g、蜂胶7g、五倍子4g。
上述中药组合物的制备方法如下:
(1)先将上述重量的五倍子洗净,去除杂质,在135℃下炒25分钟;
(2)将上述重量的三棱、八月札、甘松洗净,去除杂质后置于煮锅内,加入300g的水煮沸,水沸后持续煎煮25分钟,再加入120g的食醋煎煮15分钟,停止加热,留在锅内闷6小时,晾干;
(3)将洗净、干燥的上述重量的夏枯草、桂花和蜂胶以及经步骤(1)和步骤(2)处理好的五倍子、三棱、八月札、甘松分别粉碎、混合,得混合物,将混合物置于超声提取装置中,加入70%的乙醇,在60℃超声波(功率为150W)提取30分钟,趁热抽滤,得滤液Ⅰ和滤渣Ⅰ,乙醇与混合物的料液比为1:8;
(4)将滤渣Ⅰ加入与步骤(3)中相同浓度和体积的乙醇,置于超声提取装置中,于60℃下超声波(功率为150W)提取20分钟,趁热抽滤,得滤液Ⅱ和滤渣Ⅱ;
(5)将滤液Ⅰ和滤液Ⅱ合并,浓缩干燥至原体积的1/2,即得所述中药组合物b2。
对比例2
夏枯草50g、桂花40g、三棱34g、八月札44g、甘松38g、蜂胶27g、五倍子22g。
上述中药组合物的制备方法如下:
(1)先将上述重量的五倍子洗净,去除杂质,在155℃下炒20分钟;
(2)将上述重量的三棱、八月札、甘松洗净,去除杂质后置于煮锅内,加入1392g的水煮沸,水沸后持续煎煮35分钟,再加入812g的食醋煎煮20分钟,停止加热,留在锅内闷8小时,晾干;
(3)将洗净、干燥的上述重量的夏枯草、桂花和蜂胶以及经步骤(1)和步骤(2)处理好的五倍子、三棱、八月札、甘松分别粉碎、混合,得混合物,将混合物置于超声提取装置中,加入85%的乙醇,在70℃超声波(功率为200W)提取40分钟,趁热抽滤,得滤液Ⅰ和滤渣Ⅰ,乙醇与混合物的料液比为1:12;
(4)将滤渣Ⅰ加入与步骤(3)中相同浓度和体积的乙醇,置于超声提取装置中,于70℃下超声波(功率为200W)提取30分钟,趁热抽滤,得滤液Ⅱ和滤渣Ⅱ;
(5)将滤液Ⅰ和滤液Ⅱ合并,浓缩干燥至原体积的2/5,即得所述中药组合物e2。
实施例6软化水的制备
将实施例1、实施例2、实施例5、对比例1和对比例2制得的中药组合物a1、b1、e1、b2、e2制成软化水,并对应编号为A1、B1、E1、B2、E2,A0为空白对照组。
表1软化水的组成及其重量百分比
根据表1对应的配方组分及其重量百分比按照如下步骤制备:
将A相加热到90℃,保温15分钟,温度降至45℃以下加入B相,搅拌均匀。再加入C相搅拌,加入D相调PH至2.6,搅拌均匀即可。
实施例7膏霜的制备
将实施例1、实施例3、实施例4、对比例1和对比例2制得的中药组合物a1、c1、d1、b2、e2制成膏霜,并对应编号为A2、C1、D1、C2、D2,A3为空白对照组。
表2膏霜的组成及其重量百分比
根据表2对应的配方组分及其重量百分比按照如下步骤制备:
(1)A相加入油锅加热到80度,溶解完全备用;
(2)B相黄原胶、丙烯酸酯类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物先用甘油分散好,加入乳化锅,然后加入B相其余各项,搅拌加热至80度;
(3)将油锅A相抽到乳化锅,均质5分钟后保温搅拌15分钟;降温至70℃加入C相,均质3分钟后加入溶解好的D相,搅拌均匀后继续降温,降温至40℃加入E相以及溶解好的F相,搅拌均匀,检测合格后出料即可。
实施例8安全性评价
一、实验目的
通过对比分析评价实施例所制得的中药组合物的安全性。
二、实验方法——红细胞溶血实验
实验方法参照ECVAM-DB-ALM:INVITTOX protocol:Red Blood Cell Test SystemINVITTOX n037。RBC Test System的基本原理:如果原料对血红细胞细胞膜有刺激,会使血红细胞细胞膜破裂,产生一定程度的溶血现象。因此,在530nm下测量吸光度,吸光度越大,说明细胞溶血率越高,原料的刺激性越强。
1、实验样品:实施例1制得的中药组合物a1、水溶性氮酮(购自广州市和明贸易有限公司);
2、实验试剂:Na2HPO4、KH2PO4、NaCl、葡萄糖、柠檬酸三钠、柠檬酸、十二烷基硫酸钠(SDS)、鸡血,以上试剂均购自购自广州化学试剂公司,鸡血为市售产品;
3、试剂配制
磷酸盐缓冲液(PBS):精密称取Na2HPO415.902g,KH2PO41.524g,NaCl 14.426g,C6H2O6·H203.963g,置于2L的容量瓶中,加超纯水溶解,定容至刻度线,得PBS·溶液。磷酸盐缓冲液(PBS)pH=7.4,在4℃下储存,一周内用完;
柠檬酸:按照柠檬酸三钠:柠檬酸=66:44mmo1/L的比例,精密称取柠檬酸三钠9.7053g,柠檬酸4.6231g,置于500mL的容量瓶中,加超纯水溶解,定容至刻度线,在每次屠宰场取血前配制;
标准表面活性剂溶液:精密称取十二烷基硫酸钠(SDS)0.5g,置于500mL的容量瓶中,加PBS缓冲液溶解,定容至刻度线,浓度为1g/L,配制成0.1%浓度的SDS·溶液,用于测试SDS溶血标准曲线;
所测试样品:在pH控制下,精密称取原料0.05g,置于50mL的容量瓶中,加PBS溶解,定容至刻度线,配制成浓度为0.1%的测试原料样品,即1g/L;
血红细胞(RBC)的准备和储存:屠宰场取新鲜三黄鸡血10mL,盛装于聚乙烯塑料容器中,与5mL柠檬酸缓冲液混匀。立即将混匀血样保温于保温箱中,温度为21-22℃。30分钟内运于实验室,若血样没有受到污染,时间可延长至1小时。
RBC的分离:
①用10mL聚乙烯无菌离心管分装采集的血液样本,室温下,以1500rpm离心15分钟。
②用一次性注射器小心吸取上清液,弃之。用等量PBS缓冲液混洗离心管中的RBC(该过程能去除大量的白细胞、血浆和黄色的碎片)。
③将离心管中的RBC添加适量葡萄糖,使葡萄糖终浓度为10mmol/L,密封保存。4℃储存。实验前,提前30分钟将RBC从4℃取出放置,使其温度稳定于室温。
4、实验步骤
为便于测定吸光值,测试体系在2mlEP管中进行,在记录实验室按1ml记录。将样品(0.1%PBS溶液)按照表3中剂量添加(样品添加量为高浓度经验值),每次采用三组平行,结果取平均值。阳性参照物选用水溶性氮酮。
表3样品溶血实验添加量表
样品量(μL/mL) |
PBS量(μL/mL) |
RBS量(μL/mL) |
640 |
335 |
25 |
①在EP管中分别按照表3中样品的量加入样品(实际操作时以表中两倍的量加入),然后加入PBS补齐到975μL(实际操作时以表中两倍的量加入)。
②在各管中快速加入25μL RBC(实际操作时以表中两倍的量加入,使用显微镜观察红细胞浓度)。
③将各管置于摇床,150r.p.m,370C孵育10分钟。
④置于离心机,10,000r.p.m离心1分钟,终止孵育。
⑤用移液枪轻轻取出上清液于1cm比色皿中,530nm测吸光度OD530nm。采用样品和PBS的混合液作为空白对照。
⑥阴性对照:设530nm下,975μLPBS+25μLRBC的溶血率为0%;阳性对照:设530nm下,975μL水+25μLRBC的溶血率为100%。
⑦结果分析:溶血率(%)计算=样品吸光度/阳性对照吸光度×100。
三、实验结果
表4中药组合物a1及对照样在530nm下的吸光度表
编号 |
样品名 |
吸光度 |
1 |
中药组合物a1 |
0.074 |
2 |
氮酮 |
0.133 |
3 |
阳性对照 |
1.563 |
结果分析:从表4可以看出,以阳性对照(975μL水+25μLRBC)完全溶血率为100%,中药组合物a1的刺激率都明显低于化妆品中常用的化学促透剂氮酮,且都在安全范围内(<10%),可见,本发明化妆品中所含的中药组合物作为皮肤外用原料是安全的。
实施例9促透效果评价
一、实验目的
通过对比分析评价甘松、八月札混合提取物及氮酮的促透作用。
二、实验方法
1、实验材料和仪器
样品和试剂:按照实施例1的制备步骤和参数制得的甘松、八月札混合提取物、氮酮、氢氧化钠(分析纯);
仪器:756型紫外分光光度计(上海第三分析仪器厂);ZD85型气浴恒温振荡器(常州市国华仪器厂);
动物:昆明种小白鼠,体重为20-24g,雄性,普通级,由广州医科大学实验动物中心提供。
2、实验步骤
(1)离体鼠皮的制备:用自制的脱毛剂去小鼠腹部的毛清水洗净皮肤表面,继续饲养,24h后处死小鼠,剥取腹部皮肤,剪除损伤的皮肤,去掉皮下脂肪,置-40℃保存备用;
(2)释放液的制备:按照实施例1的制备步骤和参数制备夏枯草、桂花、三棱、蜂胶、五倍子的混合提取物,用50%的乙醇溶解成l%的溶液;接收液的制备:用0.1mol/L的氢氧化钠为接收液;
(3)取上述鼠皮,常温下解冻,在透皮装置上进行试验,释放
液用量为lml,接收液为10ml,扩散面积为0.5cm2,试验温度为37±0.5℃,每次取液1ml,同时补加1ml0.1mol/L的NaOH液,在300nm波长处测量吸收度,用吸收系数(EL km)为260求出各个取样时间的药物浓度;
(4)实验结果处理:因接收室内连续取样,并每次补加新的NaOH液,测得数值较真值为小,故按下式进行校正:
Dn=VCn`=VCn+V`∑n-1Cn-1
式中Dn为校正后接收池中夏枯草、桂花、三棱、蜂胶、五倍子的混合提取物的量,Cn`为第n次样品的校正浓度(mg·ml-1),Cn为第n次样品的实测浓度,V为接收室内溶液的体积,V`为每次取样量。
三、实验结果
表5不同释放液中夏枯草、桂花、三棱、蜂胶、五倍子的混合提取液渗透系数
与A组比较:*P<0.05*1P<0.01
结果分析:由表5可知,甘松、八月札混合提取物随着浓度增加,促透作用明显增强(P<0.05),而3%与1%的氮酮的促透作用相当,3%与1%的氮酮与1%的甘松、八月札混合提取物促透作用无明显差异,但与3%的甘松、八月札混合提取物相比,促透作用显著降低,由此说明甘松、八月札混合提取物对夏枯草、桂花、三棱、蜂胶、五倍子的混合提取物促透作用比氮酮强,但当甘松、八月札混合提取物与氮酮合用时,促透作用并不比分别单独使用时促透效果好,甚至降低促透效果。
实施例10功效评价
一、实验目的
通过对比分析评价实施例6-7所制得的化妆品对胼胝的改善和治疗功效。
二、实验方法
1、临床实验评价
征集有浅表性溃疡,没有临床感染征象,并出现胼胝的患者共210例,其中男140例,女70例,年龄41-80岁,平均(56.0±7.6)岁;随机分为13组,每组30例,经过为期3月的系统客观临床观察,患者均无严重心、肝、肾及血液疾病,利用自身对照对疗效进行研究。
2、实验方法
以A1、B1、E1、A2、C1、D1组产品作为实验品,以B2、E2、A0、C2、D2、A3组产品为相应的对照品,在受试者胼胝患处左右两侧选定约5×5cm大小的区域作为实验区域分别涂抹实验品和对照品,涂抹量约为5g,早晚各一次,连续使用3个月。
3、评价方法
评定标准参照中医胼胝的诊断疗效标准。治愈:皮损完全消退,皮肤颜色恢复正常,溃疡面完全愈合;显效:皮损变软变薄,皮肤颜色改善,溃疡面缩小70%以上;有效:皮损变软变薄,皮肤颜色改善,溃疡面缩小30%以上。
三、实验结果
表6胼胝患处改善结果值
在试用者临床试验过程中均未见刺激性反应及其他毒性反应。“A1、A2组”表示试用者同时使用两组产品。
结果分析:从以上表6中可以看出实验组A1、B1、E1、A2、C1、D1组产品与B2、E2、A0、C2、D2、A3组产品对试用者胼胝患处的皮损和溃疡均有不同程度的治疗和改善作用,但实验组产品对胼胝及溃疡的治疗和改善效果明显优于对照组产品的效果,其中实验组产品功效A1、A2组>E1组>A1组>B1组,D1组>A2组>C1组,说明加入提取物的浓度越高,效果越明显,但E1组与A1组及D1组与A2组效果相差并不明显,故从经济价值等角度考虑优选A1、A2组中药组合物的浓度及添加量,A1、A2组效果最佳,说明本发明软化水和治疗胼胝的膏霜同时使用效果最佳。上述结果证明本发明治疗胼胝的化妆品具有显著的治疗胼胝功效。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。