CN101099781B - 一种治疗中晚期脑肿瘤的外用中药 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗中晚期脑肿瘤的外用中药，它包括主药和赋形剂，所述的主药是由下述以重量为单位计的原料药组成：全蝎25-35，川乌16-20，草乌16-20，蛤壳(文蛤)16-20，穿山甲15-25，僵蚕10-20，马钱子4-8，壁虎3-7，斩龙草3-8，红大戟3-7，甘遂2-6，五倍子1-3，土牛膝1-3，冰片(合成龙脑)0.5-1.5，蜣螂0.5-1.5，斑蝥0.5-1.5，樟脑0.5-1.5麝香6-10，牛黄10-14，塞隆骨25-35；所述的赋形剂由下述以重量为单位计的原料药制成：红花3-7，甘草3-7，蜈蚣3-7，山西老陈醋浓汁(以体积为单位计)485；所述的主药与赋形剂调配后外敷，通过其渗透功能，排除脑积液功能，消除癫痫，阻断癌细胞生存，杀灭癌细胞的靶细胞功能，将死亡癌细胞组织液排出体外等拔痈机制，同时提高机体免疫功能，最终达到治愈脑肿瘤的目的。

Description

一种治疗中晚期脑肿瘤的外用中药

技术领域

本发明涉及一种外用中药，具体的是指一种治疗中晚期脑肿瘤的外用中药，本发明的商品名称为中华拔瘤膏药。

背景技术

脑肿瘤的治疗是当今现代医学面临的难题。据世界卫生组织2003年的统计，依照地区、种族和环境污染程度的不同，包括良性和恶性的原发性脑肿瘤的年发病率为25-35人/10万人。其中原发性恶性脑肿瘤占60％以上。虽然神经外科领域的两大革命，即以CT问世为划时代标志的影像诊断技术的进步和显微神经外科技术的应用，对神经外科的发展起到了巨大的促进作用，但是，传统西医对恶性脑肿瘤的治疗方法仍不能取得满意的效果。如恶性晚期脑肿瘤80％多在治疗后一年死亡。

目前，全世界对脑肿瘤的治疗方法是经神经外科开颅手术，由于颅内的生理解剖结构给切除全部脑肿瘤带来极大的难题，颅内残留的癌细胞因医务种植会在短期内复发与扩散，配合神经外科的方法只能是放疗与化疗。而放化疗在抑制癌细胞生长的同时，又极大地损伤了人体的正常细胞，当正常机体无法再承受放化疗时，癌细胞自然复发，随之二次开颅手术，从而加速死亡。该方法不能根治脑肿瘤(恶性)只能相对的延长患者的生命。我国中医药口服法治疗脑肿瘤目前已进入临床应用阶段，但由于头颅具有屏蔽药物通过消化系统和血液系统进入病灶的天然排斥机能，故疗程长、在短期内疗效不显著，且长期口服中药由于毒性强会导致患者消化系统的损伤，使患者无法坚持完成全疗程。

用中药外敷的方法治疗各种原发性中晚期脑肿瘤是我国中医药学界始终追寻的最理想治疗方法。中国人民武装警察部队张财医师在对中华传统中医药经典理论——内病外治方法深入研究和临床实践的基础上，通过对药理、病理、脑肿瘤生物特性、病理解剖与动物模型实验的科学分析与了解，掌握了应用中医药外敷治疗方法根治中晚期脑肿瘤的医学机理。为中华民族的中医药宝库开辟了一条通往世界医学领域，以中药外敷疗法率先攻克脑癌的新途径。该疗法不用开刀手术，不需放疗化疗，是一种既安全又经济的有效新疗法。

发明内容

为了克服神经外科手术治疗、放化疗和中药口服所不可愈越的难题，本发明人利用了中药材原有的生物药理特性，科学地调制成功一种外用中药，即本发明提供一种治疗中晚期脑肿瘤的外用中药。

本发明是提供一种治疗中晚期脑肿瘤的外用中药，属中医药学内病外治范畴，是一种利用中药生物特性与药理特性，通过其渗透功能，排除脑积液功能，消除癫癇，阻断癌细胞生存，杀灭癌细胞的靶细胞功能，将死亡癌细胞组织液排出体外等拔痈机制，同时提高机体免疫功能，最终达到治愈脑肿瘤的目的。

本发明提供的技术方案是：一种治疗中晚期脑肿瘤的外用中药，它包括主药和赋形剂，所述的主药是由包含下述以重量为单位计的原料药组成：

全蝎25-35      川乌16-20              草乌16-20    蛤壳(文蛤)16-20

穿山甲15-25    僵蚕10-20              马钱子4-8    壁虎3-7

斩龙草3-8      红大戟3-7              甘遂2-6      五倍子1-3

土牛膝1-3      冰片(合成龙脑)0.5-1.5  蜣螂0.5-1.5

斑蝥0.5-1.5    樟脑0.5-1.5     麝香6-10  牛黄10-14 塞隆骨25-35。

所述的主药优选由包含下述以重量为单位计的原料药组成：

全蝎30        川乌18        草乌18     蛤壳(文蛤)18

穿山甲18      僵蚕15        马钱子6    壁虎5

斩龙草5       红大戟5       甘遂4      五倍子2

土牛膝2       冰片(合成龙脑)1          蜣螂1

斑蝥1         樟脑1         麝香8    牛黄12    塞隆骨30。

所述的赋形剂由下述以重量为单位计的原料药制成：

红花3-7       甘草3-7       蜈蚣3-7    山西老陈醋浓汁以体积为单位计485。

所述的赋形剂优选下述以重量为单位计的原料药制成：

红花5         甘草5          蜈蚣5     山西老陈醋浓汁以体积为单位计485。

所述的山西老陈醋浓汁是将山西产老陈醋用文火熬成浓醋汁，使其体积缩至为山西产老陈醋的1/2，冷却后即得。

所述赋形剂的制备方法是：将所述的红花、甘草、蜈蚣三味药粉碎为细粉，与所述的山西老陈醋浓汁按比例混合后用文火熬至三十分钟，冷却后即得。

所述的主药与赋形剂调配后外敷，所述的主药与所述赋形剂的用药配比重量/体积为6-8∶2-4。

所述的主药与赋形剂调配后外敷，所述的主药与所述赋形剂的用药配比重量/体积为7∶3。

所述主药中的成分塞隆骨与虎骨功效相近，在本发明中也可以用虎骨作为塞隆骨的替代品。

塞隆骨元与虎骨氨基酸含量对比(％)

名称	塞隆骨含量	虎骨含量	备注
				天门冬氨酸Asp	2.82	1.89	酸性氨基酸
苏氨酸Thr	1.30	0.883	中性氨基酸
				丝氨酸Ser	2.22	1.37	中性氨基酸
谷氨酸Glu	6.95	2.95	酸性氨基酸

名称	塞隆骨含量	虎骨含量	备注
				脯氨酸Pro	1.46	1.30	中性氨基酸
甘氨酸Gly	3.52	2.46	中性氨基酸
				丙氨酸Ala	4.58	2.17	中性氨基酸
缬氨酸Val	1.15	1.35	中性氨基酸
				蛋氨酸Met	0.506	0.503	中性氨基酸
异亮氨酸Ile	0.690	1.04	中性氨基酸
				亮氨酸Leu	1.31	2.49	中性氨基酸
酪氨酸Tyr	1.60	1.53	中性氨基酸
				苯丙氨酸Phe	0.810	1.83	中性氨基酸
组氨酸His	0.385	1.28	碱性氨基酸
				赖氨酸Lys	2.60	0.998	碱性氨基酸
精氨酸Arg	0.887	1.29	碱性氨基酸

塞隆骨的氨基酸总含量为：32.7％

虎骨的氨基酸总含量为：25.04％

塞隆是藏语译音，学名高原鼢鼠。高原鼢鼠生活在海拔2800米至4300的高寒草地上，终年在地下生活，洞穴深2米至2.5米，活动通道离地面约30厘米，专吃草的根茎，独居生活，4月交配，9月产子。高原鼢鼠的生命期只有3年左右。

1990年，塞隆骨被国家正式批准为“国家一类动物新药材”，这是建国以来我国权威医药主管部门批准认定的第一个“一类动物药材”。

塞隆骨性味“辛咸、微温，归肝、肾经”。功能主治：具有祛风、散寒、除湿、通络止痛、补益肝肾之功效，用于风寒湿痹引起的肢体关节疼痛肿胀、屈伸不利、肌肤麻木、腰膝酸软等症。研究证明，塞隆骨与虎骨有类似的性味功效。其主要化学成分及药效与虎骨极其相似。

质量标准：

通用名称：塞隆骨

汉语拼音：sai long gu

标准号：WS-207(Z-46)-90

性状：头骨扁而宽，略呈三角形；鼻骨较长，未端呈钝锥状，两鼻骨前缘连合处凹入缺刻浅；颧内向外扩展；两顶脊在前方不相会合；枕脊强壮，枕中脊不发达；门齿孔小，前颌骨下延包围门齿孔；上颌骨生有门齿一对，无犬齿臼齿三对。

第三臼齿常具一后伸小叶，下领骨亦有门齿一对，较上门齿大，呈凿状。

功能与主治：祛风散寒除湿，通络止痛，补益肝肾，且于风寒湿痹引起的肢体关节疼痛、肿胀、屈伸不利，肌肤麻木，腰漆酸软。

用中药外敷的方法治疗中晚期恶性脑肿瘤，它的最大优点在于不用通过开刀手术，放疗化疗，彻底解决了中西医传统疗法的各种弊端，只通过中药外敷即可治愈脑肿瘤，治疗成本低，病人无治疗痛苦。

本发明的治疗方法是：根据西医影像学手段(核磁和CT)确定病灶部位就近外敷施药，疗程为每天换药一次，4-5天为一疗程，共需6-7个疗程可完成治疗。一般1例晚期脑肿瘤治疗全程需赋形剂总用量400-500毫升，所述的主药与所述赋形剂的用药配比为7∶3，主药与副药调配后外敷。

(一)外敷中药：在本疗法操作时应对照核磁和CT影像中所显示标明的肿瘤病灶部位，根据肿瘤性质、病灶大小、患者体重和临床症状，将患者颅外头发剃尽进行定量外敷施药(糊剂膏药外敷——手术膜盖严——胶布固定)。

(二)临床表现：1、敷药后1-2个小时药力可全部渗入颅内达病灶部位；2、可见敷药部位表皮与真皮间因大量脑积液渗出鼓起大量水泡，其细胞组织液呈黄红色，临床可用牙签在水泡下部扎一个小孔放出脑积液(注意：该药不可在与机体接触时使用任何金属类医用器械，会形成感染)。3、当大量脑积液排出颅外时，晚期重症患者会因颅压降低而快速苏醒，中度患者可使因颅压引起的复视消失，其它临床症状如知觉和听觉也逐渐恢复，癫痫消失。4、临床可见颅外渗出大量的死亡癌细胞及组织液，经7-10天逐渐干燥形成硬痂。由于硬痂阻隔了新药的渗入和组织液的渗出渠道(颅骨板障和泌汗渠道)，需停止敷药7天，待硬痂自然脱落后方可进行第2个疗程的敷药。5、以此规律循环敷药6-7个疗程，至临床未见死亡癌细胞与组织液渗出，即可进行出院前影像学确诊。

针对S180型实体瘤和艾氏腹水瘤以及脑胶质瘤3种肿瘤动物模型，经大量动物模型验证，该疗法的显著疗效是：10天解剖试验动物观察实体瘤变化情况，瘤体重量普遍减少30％以上(约43g)，15天瘤体重量减少40％以上(约52g左右)。MO％、GR％、T-Bil和CK均显著高于对照组；而Crea、T-P和ALB显著下降，具有显著的生物统计学意义。经急性毒性试验和长期毒性试验，全疗程未见皮肤过敏和皮肤刺激性反应，动物模型解剖未见各正常器官及组织有任何异常变化。本发明中药外敷治疗各种脑肿瘤抑制脑肿瘤的靶细胞性强，治疗晚期脑肿瘤的作用与疗效显著。

为了进一步证明本发明一种治疗中晚期脑肿瘤的外用中药(商品名称中华拔瘤膏)的药效，提供以下动物实验。

选用S180实体瘤和脑胶质瘤G422等2种肿瘤动物模型，观察中华拔瘤膏对在体动物的抗肿瘤作用，并选择荷瘤动物观察对动物免疫系统的影响。拔瘤膏选用高、中、低3个浓度，以环磷酰胺作为阳性对照药，并以生理盐水作对空白照组，拔瘤膏采用外敷给药，并作适当覆盖和固定，环磷酰胺采用腹腔注射给药。抗肿瘤试验进行三批重复试验，结果显示如下：

1.对S180实体瘤动物模型，拔瘤膏连续外敷给药，高浓度组对实体瘤的生长具有显著的抑制作用(P＜0.05)，3批试验肿瘤抑制率分别为31.6％、32.8％、30.7％，具有抗肿瘤作用。阳性对照药环磷酰胺也具有显著抗肿瘤作用，抑制率分别为51.2％、55.4％、46.7％。

2.对脑胶质瘤G422动物模型，拔瘤膏连续外敷给药，高浓度组对脑胶质瘤G422的生长具有显著的抑制作用(P＜0.05)，三批试验结果显示，肿瘤抑制率分别为31.3％、31.8％、33.6％，具有抗肿瘤作用。阳性对照药环磷酰胺具有抗肿瘤作用，抑瘤率分别为45.4％、42.2％、41.9％。

3.对免疫系统的作用，选择荷瘤S180动物，观察对体液免疫和细胞免疫的影响，结果显示，试药高浓度组使迟发性免疫反应动物的足跖肿胀显著增加(P＜0.05)，血清溶血素HC₅₀显著升高(P＜0.05)，表明试药拔瘤膏能改善荷瘤动物的免疫系统，提高体液免疫功能。

4.对应激反应的影响，中华拔瘤膏外用给药，高剂量组可以增加小鼠的耐疲劳时间。

1材料

1.1药物

中华拔瘤膏(以下简称拔瘤膏)：由本药发明人张财提供，低温处保存备用。本拔瘤膏选用的主药原料药是：

全蝎30，川乌18，草乌18，蛤壳(文蛤)18，穿山甲18，僵蚕15，马钱子6，壁虎5，斩龙草5，红大戟5，甘遂4，五倍子2，土牛膝2，冰片(合成龙脑)1，蜣螂1，斑蝥1，樟脑1，麝香8，牛黄12，塞隆骨30。

赋形剂原料药是红花5，甘草5，蜈蚣5，山西老陈醋浓汁(以体积为单位计)485：

拔瘤膏选用高、中、低3个浓度剂量组，

高剂量组：所述的主药与所述赋形剂的用药配比为8∶2

中剂量组：所述的主药与所述赋形剂的用药配比为7∶3

低剂量组：所述的主药与所述赋形剂的用药配比为6∶4

环磷酰胺(CTX)中美合资山西泰盛制药有限公司产品，批号050115。

1.2瘤株

S180实体瘤株接种于小鼠腋下，并生长旺盛，以上接种动物均由中国医学科学院肿瘤研究所提供，并于本实验室接种传代，每隔14天左右传代一次，用于连续试验。

1.3动物

清洁级ICR小鼠，体重18-22g，雌雄各半，购于维通利华试验动物中心，许可证号：SCXK(京)2002-0003，实验动物设施许可证号：SYXK(京)2004-0008。饲料均购自北京科澳协力公司，每天喂食1次。

2方法和结果

2.1中华拔瘤膏对S180瘤作用研究

2.1.1小鼠S180细胞混悬液的制备

选取已接种S180瘤，瘤大小为1cm左右肿瘤生长良好的荷瘤小鼠，颈椎脱臼处死，用碘酒、酒精消毒，摘取右腋下的肿瘤组织置于已消毒的烧杯中，剔除肿瘤外边的组织，将肿瘤块置于组织匀浆仪中，加1ml的生理盐水进行匀浆，取匀浆后肿瘤细胞以生理盐水稀释20倍，光学显微镜下计算1ml瘤液中活体瘤细胞数，以此计算瘤液的稀释倍数，用生理盐水稀释成2×10⁶个/0.2ml。置于冰水中保存，75％酒精消毒小鼠右腋皮肤，按每鼠0.2ml接种于小鼠右腋皮下。整个操作在无菌条件下60min内完成。接种24h后称重，随机分为5组：空白对照组、阳性对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组。每组10只小鼠，雌雄各半。

2.1.2实验步骤、结果

于分组当天用5％Na₂S脱毛剂，除去小鼠右腋下皮肤表面的毛，用清水洗去残留的脱毛剂。中华拔瘤膏高、中、低剂量组开始右腋下皮肤涂抹给药，并作适当固定保持药物充分接触皮肤不易挥发，阳性对照药(CTX 100mg/kg)、生理盐水对照组腹腔注射给药。中华拔瘤膏组、生理盐水组连续给药，阳性对照药组给药7天。第11天，处死小鼠并称体重，随机严格剥离干净皮下肿瘤组织，使用电子秤称量(精确到0.01g)，计算各组瘤体平均重量及肿瘤抑制率。

肿瘤抑制率＝(空白对照组瘤重-给药组瘤重)/空白对照组瘤重×100％

结果：本实验进行了三批重复实验，结果见表1，表2，表3，表中结果显示，对S180实体瘤动物模型，拔瘤膏连续外敷给药10d，高浓度组对实体瘤的生长具有显著的抑制作用(P＜0.05)，3批试验肿瘤抑制率分别为31.6％、32.8％、30.7％，具有抗肿瘤作用。阳性对照药环磷酰胺也具有显著抗肿瘤作用，抑制率分别为46.7％、51.2％、55.4％。

表1中华拔瘤膏对小鼠S180实体瘤生长的影响(第一次实验)

注：*为与对照组相比P＜0.05；**为P＜0.01

表2中华拔瘤膏对小鼠S180实体瘤生长的影响(第二次实验)

表3中华拔瘤膏对小鼠S180实体瘤生长的影响(第三次实验)

2.2对脑胶质瘤的作用

2.2.1小鼠G422细胞混悬液的制备

选取接种G422瘤，瘤大小为1cm左右肿瘤生长良好的荷瘤小鼠，颈椎脱臼处死，用碘酒、酒精消毒，摘取右腋下的肿瘤组织置于已消毒的烧杯中，剔除外边的组织，将肿瘤块置于组织匀浆仪中，加1ml的生理盐水进行匀浆，取匀浆后肿瘤细胞以生理盐水稀释20倍，光学显微镜下计算1ml瘤液中活体瘤细胞数，以此计算瘤液的稀释倍数，用生理盐水稀释成2×10⁶个/0.2m1.置于冰水中保存，75％酒精消毒小鼠右腋皮肤，按每鼠0.2ml接种于小鼠右腋皮下.整个操作在无菌条件下60min内完成。接种24h后称重，随机分为5组：空白对照组、阳性药对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组。每组10只小鼠，雌雄各半。

2.2.2实验步骤

于分组当天用5％Na₂S脱毛剂，除去小鼠右腋下皮肤表面的毛，用清水洗去残留的脱毛剂。中华拔瘤膏高、中、低剂量组右腋下皮肤涂抹给药，给药量为0.5ml。阳性药对照组、空白对照组开始腹腔注射给药，中华拔瘤膏组、空白对照组连续给药14天，阳性对照药组连续给药7天。给药前、给药期间用游标卡尺测量小鼠的右前肢直径进行记录，以肿瘤大小的变化和给药时间t(d)作图，绘制移植瘤生长速度曲线。并在给药期间观察各给药组小鼠的体重变化。药后第15天，处死小鼠并称体重，随机严格剥离干净皮下肿瘤组织，使用电子秤称量(精确到0.01g)，计算各组瘤体平均重量及肿瘤抑制率。本实验进行了三批重复实验。

肿瘤抑制率＝(空白对照组瘤重-给药组瘤重)/空白对照组瘤重×100％

2.2.3实验结果

本实验进行了三批重复实验，结果显示，对鼠脑胶质瘤G422动物模型，拔瘤膏连续外敷给药14d，给药期间小鼠脑胶质瘤G422体瘤生长明显减小，体重变化不十分明显，结果见表4，表5和图1，图2。对3批试验肿瘤重进行考察，高浓度组对实体瘤的重量均具有显著的抑制作用(P＜0.05，P＜0.01)，3批试验肿瘤抑制率均在30％以上，因此可以认为具有抗肿瘤作用。阳性对照药CTX也具有显著抗肿瘤作用(P＜0.01)，肿瘤抑制率为30％以上，结果见表6，表7，表8。

表4给药期间小鼠脑胶质瘤G422大小(第15天为处死日)

图1是G422瘤生长曲线图。

表5中华拔瘤膏对接种脑胶质瘤G422小鼠体重的影响(第15天为处死日)

图2是接种G422瘤小鼠体重变化图。

表6中华拔瘤膏对小鼠脑胶质瘤G422生长的影响(第一次实验)

表7中华拔瘤膏对小鼠脑胶质瘤G422生长的影响(第二次实验)

表8中华拔瘤膏对小鼠脑胶质瘤G422生长的影响(第三次实验)

讨论

中华拔瘤膏临床主要针对各种晚期脑瘤，尤其对较普遍发生的胶质性晚期肿瘤疗效更为显著。药效实验结果表明中华拔瘤膏作用于S180实体瘤、脑胶质瘤G422动物模型，其中对S180实体瘤的生长具有显著的抑制作用，对脑胶质瘤的有明显抑制作用。同时中华拔瘤膏作为一中成药的外用药，毒副作用小，作用直接，用药方便，值得开发研究。

2.4中华拔瘤膏对荷瘤动物免疫系统的影响

2.4.1试验目的

通过设计一系列给药剂量(浓度)观察试药对荷瘤动物免疫系统的影响。

2.4.2试验材料

2.4.2.1药物与试剂

拔瘤膏：同上。用于皮肤外用涂抹。

北京人参蜂王浆：市售，北京三九药业有限公司产品，口服液，主要原料：蜂蜜、人参、蜂王浆、五味子。规格：10支×10ml，每100ml中含总皂甙60mg～85mg，10-羟基-α-癸烯酸14mg～18mg，用于免疫调节、延缓衰老。生产批号：20040707，保质期至2007年6月。临用时直接应用，用于口服给药。

Alsever‘s液：葡萄糖2.000g、柠檬酸钠0.800g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.420g、加蒸馏水100ml混匀，10磅10min灭菌。

都氏试剂：氰化钾        0.025g

          高铁氰化钾    0.100g

          碳酸氢钠      0.500g

          蒸馏水        1000ml

无水碳酸钠：西安化学试剂厂产品，批号：030812，配制成0.1％Na₂CO₃溶液，用于稀释血液。

2.4.2.2仪器设备

150mm镀铬游标卡尺：北京量具刃具厂生产，精度0.02mm；

显微镜：OLYMPUS CH.2显微镜，日本OLYMPUS公司产品；

HD型单列恒温水浴锅，辽阳市恒温仪器厂制造。

UV-1601PC型可见紫外分光光度计，日本Shimadzu公司产品。

2.4.2.3动物：

清洁级ICR小鼠，体重18～22g，雌雄各半，购于维通利华试验动物中心，许可证号：SCXK(京)2002-0003，实验动物设施许可证号：SYXK(京)2004-0008。饲料均购自北京科澳协力公司，每天喂食1次。

豚鼠：3只，体重460～500g，雄性，用于取血分离血清。由北京通利实验动物养殖场提供，许可证号：SCXK(京)2000-0018。

健康雄性绵羊，家养，用于取血提供绵羊红细胞。

2.4.3试验方法：

2.4.3.1对小鼠的迟发性免疫作用

绵羊红细胞悬液的制备：无菌条件下，由健康的成年绵羊外颈静脉取血，至于有玻璃珠的三角烧瓶中，振动10min，以除去纤维蛋白，加入相当于羊血2倍的Alsever`s液，摇匀，置于4度冰箱中保存备用。临用时取出，用生理盐水洗涤3次，每次2000rpm离心10min，弃上清液配成所需浓度。

植瘤：于超净工作台中，先取S180瘤液0.1ml，以生理盐水20倍稀释，光学显微镜下计算瘤液中活体瘤细胞数，以此计算1ml瘤液的稀释倍数，用生理盐水稀释成2×10⁶个/0.2ml，置于冰水中，每只小鼠前肢腋下皮下注射后的瘤液0.2ml。

给药：小鼠(已植瘤)50只，雌雄各半，按体重随机分成5组，每组10只(雌雄各半)，分别为空白对照组，阳性对照组和试药高、中、低三个剂量组，连续给药10天，第4天尾静脉注射羊红细胞约5×10⁶个/只致敏，第10天用20％羊红细胞0.02ml分别注入小鼠后肢左脚掌皮下，右后肢脚掌皮下注射0.02ml的生理盐水，24h后，用游标卡尺测量足跖肿胀度(FPR)，以两足厚度差值作为迟发性免疫反应(DTH)指标。

数据统计学处理：计算各组足K值、α值对各组间进行Student’t检验，采用孙瑞元、陈志扬、郑青山教授等主编的DAS软件对上述结果进行统计学处理，判定显著性差异。

2.4.3.2对小鼠体液免疫的影响

羊红细胞悬液的制备(方法同上)。

临用时取上述所保存的羊红细胞，用生理盐水洗涤3次，每次2000rpm离心5min，弃去上清液，用生理盐水以3∶5(v∶v)稀释，使红血球浓度为每毫升约20亿个。

豚鼠血清制备：在无菌条件下，从健康豚鼠心脏取血，放置约1h后，用长针将凝固血于管壁玻璃，使血清充分渗出，2000rpm离心5min，取血清-20℃保存，临用时用生理盐水1∶10稀释。

免疫与给药：小鼠(植瘤方法同前)50只，雌雄各半，按体重随机分成5组，每组10只(雌雄各半)，分别为空白对照组，阳性对照组和试药高、中、低三个剂量组，连续给药10天，给药第3天，每只小鼠ip3:5棉羊红细胞稀释液0.2ml，第10天给药后20min眼眶取血进行溶血素测定。

血清凝集素测定：眼眶取血于离心管内，放置约1h后，使血清充分分离出，2000rpm离心10min，取血清，生理盐水稀释200倍按下表进行试验。

然后于37℃水浴中保温10min，冰浴终止反应后2000rpm离心10min，取上清液1.0ml，都氏液3.0ml于试管内。

用空白对照管于540nm波长处调零待测个管吸收度值。

绵羊红细胞半数溶血值测定管：取10％绵羊红细胞稀释液0.25ml，都氏试剂4.0ml于另一试管内用于测定绵羊红细胞半数溶血值。

计算：

按下列公式计算每只小鼠样品的半数溶血值HC₅₀

样品HC₅₀＝(样品吸收度值÷羊红细胞半数溶血时吸收度值)×稀释倍数

数据统计学处理：计算各组HC₅₀值对各组间进行Student’t检验，采用孙瑞元、陈志扬、郑青山教授等主编的DAS软件对上述结果进行统计学处理，判定显著性差异。

2.4.4结果

2.4.4.1拔瘤膏对小鼠细胞免疫功能的影响

从表9实验数据表明，所选用的中华拔瘤膏高、中、低三个剂量外敷给药，对S180荷瘤小鼠DTH的影响，与空白对照组比较，DTH有增加的趋势，但未见有显著性差异(P＞0.05)，表明中华拔瘤膏对荷瘤动物的细胞免疫功能有一定的改善作用。同样试验条件下，阳性对照药人参蜂王浆有显著性增加DTH(P＜0.05)，表明可以显著提高荷瘤动物的细胞免疫功能。

表9中华拔瘤膏对荷瘤S180鼠迟发性免疫反应的影响

注：*为与对照组相比P＜0.05；**为P＜0.01

2.4.4.2拔瘤膏对小鼠体液免疫功能的影响

表10实验数据表明，所选用的中华拔瘤膏高剂量组外敷给药，对S180荷瘤小鼠血清凝集素(HC₅₀)的影响，与空白对照组比较，HC₅₀显著升高(P＜0.05)，表明中华拔瘤膏可以显著提高荷瘤动物的体液免疫功能。同样试验条件下，阳性对照药人参蜂王浆显著增加HC₅₀(P＜0.01)，表明可以显著提高荷瘤动物的体液免疫功能。

表10中华拔瘤膏对荷瘤S180鼠血清凝集素的影响

2.4.5结论

中华拔瘤膏能改善荷瘤S180动物的细胞免疫功能，显著提高机体的体液免疫功能。

2.5中华拔瘤膏对动物应激能力的影响

2.5.1试验材料

2.5.1.1药物与试剂

中华拔瘤膏：同上。

S180瘤株：北京肿瘤医院传代培养提供。

0.9％氯化钠注射液：山东齐都药业有限公司。批号：04120903

人参蜂王浆：北京三九药业有限公司。批号：20040707

碱石灰：北票矿务局氢氧化钙厂。批号：930708

2.5.1.2动物

清洁级ICR小鼠，体重18～22g，雌雄各半，购于维通利华试验动物中心，许可证号：SCXK(京)2002-0003，实验动物设施许可证号：SYXK(京)2004-0008。饲料均购自北京科澳协力公司，每天喂食1次。

2.5.2方法

2.5.2.1试验分组与给药方法：

每次试验取二级性成熟清洁级ICR小鼠60只，雌雄各半。随机分为6组。中华拔瘤膏高剂量组、中华拔瘤膏中剂量组、中华拔瘤膏低剂量组、模型对照组，空白对照组。中华拔瘤膏外用给药0.5ml/只，人参蜂王浆口服给药20ml/kg，模型组给予等体积溶媒。

2.5.2.2试验方法：

取接种7d，处于指数生长期且荷瘤状况较好的种鼠，处死。无菌操作，抽取腹腔积液，用0.9％氯化钠注射液将S180瘤株稀释至2.0×10⁶个/0.2ml，以每只0.2ml的细胞量接种于小鼠腋下。24h后开始给药，连续给药10d。

2.5.2.2.1耐缺氧试验

取接种小鼠60只随机分6组，皮肤外用给药每日一次，连续10天。末次给药后0.5小时，将各组小鼠放入盛有5克钠石灰的250ml磨口广口瓶内，密封瓶口，记录自封瓶口至小鼠死亡时间，结果见表11。

2.5.2.2.2耐疲劳试验

取接种小鼠60只随机分6组，外用给药每日一次，连续10天。末次给药后0.5小时，于小鼠尾部负重(体重的10％)后投入24℃温水槽中游泳，观察并记录小鼠自投入水中至头部沉入水中7秒中不能游出水面的时间，作为游泳耗竭时间，结果见表12。

表11中华拔瘤膏抗缺氧实验数据

表12中华拔瘤膏耐疲劳实验数据

2.5.3结果

通过抗缺氧试验可以看出，中华拔瘤膏外用给药，没有增强小鼠的耐缺氧性，而同样条件下，阳性对照药与模型组比较显著性增强了小鼠的耐缺氧能力。

通过耐疲劳实验可以看出，中华拔瘤膏外用给药，高剂量组连续给药十天与空白组比较可以增强小鼠的耐疲劳能力，而中剂量、低剂量与对照组比较没有明显作用。

2.5.4结论

中华拔瘤膏外用给药，高剂量组可以增加小鼠的耐疲劳时间。

皮肤过敏试验：观察中华拔瘤膏、赋型剂和阳性致敏物(2，4-二硝基氯苯)对豚鼠皮肤的致敏作用。结果显示，中华拔瘤膏对皮肤反应平均值0，无致敏性，对照组为0，无致敏性，阳性致敏物(2，4-二硝基氯苯)组为4.0，致敏率最高为83％，为高度致敏性。

皮肤刺激试验：将中华拔瘤膏一次给药在家兔完整和破损皮肤上，观察每次去掉受试物后1h内以及末次给药后的72h内对皮肤的刺激性。结果显示，中华拔瘤膏和赋型剂的刺激反应分值均为0，表明中华拔瘤膏单次给药对家兔完整皮肤和破损皮肤均无刺激性。

急性毒性实验观察了拔瘤膏对大鼠完整皮肤和破损皮肤短时期一次性接触所产生的毒性反应。将全部大鼠背部脱毛3×3cm²，分完整皮肤和破损皮肤，分别给予赋形剂和拔瘤膏四个浓度(高、2中、低浓度)，给药后24h观察动物的行为活动、皮毛光泽、饮食、体重和死亡情况，连续观察14天。全部大鼠在给药后观察期14天内，未见明显的毒性反应，动物的外部特征、排泄物、及行为表现均无异常。体重增长情况与空白对照组比较无显著性差异。

具体实施方式

实施例1

选择如下以重量为单位计的原料药制备主药：

全蝎30，川乌18，草乌18，蛤壳(文蛤)18，穿山甲18，僵蚕15，马钱子6，壁虎5，斩龙草5，红大戟5，甘遂4，五倍子2，土牛膝2，冰片(合成龙脑)1，蜣螂1，斑蝥1，樟脑1，麝香8，牛黄12，塞隆骨30，

将上述二十味药，粉碎成细粉，过筛，混均，即得。

选择如下以重量为单位计的原料药制备赋形剂：红花5，甘草5，蜈蚣5，山西老陈醋浓汁(以体积为单位计)485；当重量单位选择克时，体积单位就对应选择毫升；选用山西产地的老陈醋用瓦锅用文火熬成山西老陈醋浓汁(以体积为单位计)485(即由山西老陈醋970体积单位熬制成)，老陈醋浓汁的体积已经缩至为原山西老陈醋体积的1/2，浓度为原山西老陈醋浓度的200％，冷却后备用；将所述的红花5，甘草5，蜈蚣5三味药粉碎为细粉，再与山西老陈醋浓汁混合后用文火熬制三十分钟，冷却，即得。

所述的主药与赋形剂调配后外敷，所述的主药与所述赋形剂的用药配比重量/体积为7(克)∶3(毫升)。

实施例2

选择如下以重量为单位计的原料药为主药：

全蝎30，川乌20，草乌20，蛤壳(文蛤)20，穿山甲25，僵蚕20，马钱子8，壁虎7，斩龙草8，红大戟7，甘遂6，五倍子3，土牛膝3，冰片(合成龙脑)1.5，蜣螂1.5，斑蝥1.5，樟脑1.5，麝香6，牛黄10，塞隆骨30。

选择如下以重量为单位计的原料药制备赋形剂：红花3，甘草3，蜈蚣5，山西老陈醋浓汁(以体积为单位计)485；

所述主药与赋形剂的制备方法同实施例1；

所述的主药与赋形剂调配后外敷，所述的主药与所述赋形剂的用药配比为6∶2。

实施例3

选择如下以重量为单位计的原料药为主药：

全蝎35，川乌18，草乌16，蛤壳(文蛤)16，穿山甲15，僵蚕10，马钱子4，壁虎3，斩龙草3，红大戟3，甘遂2，五倍子1，土牛膝1，冰片(合成龙脑)0.5，蜣螂0.5，斑蝥0.5，樟脑0.5，麝香6，牛黄14，塞隆骨35。

选择如下以重量为单位计的原料药制备赋形剂：红花7，甘草7，蜈蚣6，山西老陈醋浓汁(以体积为单位计)485；

所述主药与赋形剂的制备方法同实施例1；

所述的主药与赋形剂调配后外敷，所述的主药与所述赋形剂的用药配比为6∶4。

实施例4

选择如下以重量为单位计的原料药为主药：

全蝎28，川乌16，草乌18，蛤壳(文蛤)16，穿山甲15，僵蚕10，马钱子4，壁虎3，斩龙草3，红大戟3，甘遂2，五倍子1，土牛膝1，冰片(合成龙脑)0.5，蜣螂0.5，斑蝥0.5，樟脑0.5，麝香7，牛黄10，塞隆骨28。

将上述十八味药，粉碎成细粉，过筛，混均，即得。

选择如下以重量为单位计的原料药制备赋形剂：红花3，甘草4，蜈蚣3，山西老陈醋浓汁(以体积为单位计)485；当重量单位选择克时，体积单位就对应选择毫升；赋形剂的制备方法同实施例1，选用山西产地的老陈醋用瓦锅用文火熬成山西老陈醋浓汁(以体积为单位计)485，浓度为原老陈醋浓度的200％，冷却后备用；将所述的红花3，甘草4，蜈蚣3三味粉碎为细粉，再与山西老陈醋浓汁混合后用文火熬制三十分钟，冷却，即得。

所述的主药与赋形剂调配后外敷，所述的主药与所述赋形剂的用药配比为8∶2。

实施例5

选择如下以重量为单位计的原料药为主药：

全蝎30，川乌20，草乌20，蛤壳(文蛤)20，穿山甲25，僵蚕20，马钱子8，壁虎7，斩龙草3，红大戟5，甘遂4，五倍子3，土牛膝2，冰片(合成龙脑)1，蜣螂1.5，斑蝥1，樟脑1，麝香9，牛黄12，塞隆骨25。

选择如下以重量为单位计的原料药制备赋形剂：红花7，甘草7，蜈蚣7，山西老陈醋浓汁(以体积为单位计)485；

所述主药与赋形剂的制备方法同实施例4；

所述的主药与赋形剂调配后外敷，所述的主药与所述赋形剂的用药配比为6∶4。

实施例6

选择如下以重量为单位计的原料药制备主药：

全蝎25，川乌18，草乌18，蛤壳(文蛤)18，穿山甲18，僵蚕15，马钱子6，壁虎5，斩龙草5，红大戟5，甘遂4，五倍子2，土牛膝2，冰片(合成龙脑)1，蜣螂1，斑蝥1，樟脑1，麝香8，牛黄14，塞隆骨30。

选择如下以重量为单位计的原料药制备赋形剂：红花5，甘草4，蜈蚣6，山西老陈醋浓汁(以体积为单位计)485；

所述主药与赋形剂的制备方法同实施例4；

所述的主药与赋形剂调配后外敷，所述的主药与所述赋形剂的用药配比为7∶3。

Claims (6)

1.一种治疗中晚期脑肿瘤的外用中药，其特征在于：它包括主药和赋形剂，所述的主药是由下述以重量为单位计的原料药组成：

全蝎25-35     川乌16-20      草乌16-20     蛤壳16-20

穿山甲15-25   僵蚕10-20      马钱子4-8     壁虎3-7

斩龙草3-8     红大戟3-7      甘遂2-6       五倍子1-3

土牛膝1-3     冰片0.5-1.5    蜣螂0.5-1.5

斑蝥0.5-1.5   樟脑0.5-1.5    麝香6-10      牛黄10-14  塞隆骨25-35；

所述的赋形剂由下述原料药制成：

以重量为单位计，红花3-7、甘草3-7、蜈蚣3-7；以体积为单位计，山西老陈醋浓汁485；其中，当重量单位选择克时，体积单位就对应选择毫升；

所述的主药与赋形剂调配后外敷，所述的主药与所述赋形剂的用药配比重量/体积为6-8∶2-4。

2.如权利要求1所述的一种治疗中晚期脑肿瘤的外用中药，其特征在于：所述的主药由下述以重量为单位计的原料药组成：

全蝎30        川乌18        草乌18     蛤壳18

穿山甲18      僵蚕15        马钱子6    壁虎5

斩龙草5       红大戟5       甘遂4      五倍子2

土牛膝2       冰片1         蜣螂1

斑蝥1         樟脑1         麝香8      牛黄12    塞隆骨30。

3.如权利要求1所述的一种治疗中晚期脑肿瘤的外用中药，其特征在于：所述的赋形剂由下述原料药制成：

以重量为单位计，红花5、甘草5、蜈蚣5；以体积为单位计，山西老陈醋浓汁485；其中，当重量单位选择克时，体积单位就对应选择毫升。

4.如权利要求1所述的一种治疗中晚期脑肿瘤的外用中药，其特征在于：所述的山西老陈醋浓汁是将山西产老陈醋用文火熬成浓醋汁，使其体积缩至为山西产老陈醋的1/2，冷却后即得。

5.如权利要求1所述的一种治疗中晚期脑肿瘤的外用中药，其特征在于：所述赋形剂的制备方法是：将所述的红花、甘草、蜈蚣三味粉碎为细粉，与所述的山西老陈醋浓汁按比例混合后用文火熬制三十分钟，冷却后即得。

6.如权利要求1所述的一种治疗中晚期脑肿瘤的外用中药，其特征在于：所述的主药与赋形剂调配后外敷，所述的主药与所述赋形剂的用药配比重量/体积为7∶3。

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