CN102124012B - 可作为丙型肝炎病毒抑制剂的大环吲哚衍生物 - Google Patents

Abstract

式(I)的HCV复制的抑制剂，包括其立体化学异构形式，以及盐、水合物、溶剂化物，其中Y、R₁、R₂、R₄和n具有权利要求中定义的含义。本发明还涉及制备所述化合物的方法，含有它们的药物组合物，及其在HCV治疗中的应用。

Description

可作为丙型肝炎病毒抑制剂的大环吲哚衍生物

技术领域

本发明涉及对于丙型肝炎病毒（HCV）的复制具有抑制活性的大环吲哚衍生物。本发明还涉及含有这些化合物作为活性成分的组合物，以及制备这些化合物和组合物的方法。 

背景技术

丙型肝炎病毒是全球慢性肝病的主要原因，已经成为相当大量的医学研究的焦点。HCV是黄病毒科中丙型肝炎病毒属的一个成员，与黄病毒属和动物的瘟病毒家族相近，前者包括与人类疾病有关的多种病毒，例如登革热病毒和黄热病病毒，后者包括牛病毒性腹泻病毒（BVDV）。HCV是一种正义、单链的RNA病毒，拥有约9600个碱基的基因组。该基因组含有5’和3’两个采取RNA二级结构的非翻译区，和一个编码约3,010-3,030个氨基酸的单个多蛋白的中央开放读框。该多蛋白编码10种基因产物，它们藉助由宿主和病毒的蛋白酶介导的一系列精心安排的共翻译和翻译后内切蛋白酶切割，从前体多蛋白中产生。该病毒结构蛋白包括核心核壳蛋白和两种包膜糖蛋白E1和E2。非结构（NS）蛋白编码某些基本的病毒酶催功能（解旋酶、聚合酶、蛋白酶）以及未知功能的蛋白质。病毒基因组的复制是由被非结构蛋白5b(NS5B)编码的RNA依赖性RNA聚合酶介导的。除了该聚合酶之外，病毒解旋酶和蛋白酶功能（二者均被编码在双功能的NS3蛋白中）显示出对于HCV RNA的复制是必不可少的。除了NS3丝氨酸蛋白酶，HCV还编码NS2区域中的一种金属蛋白酶。 

HCV优选在肝细胞中复制，但不是直接致细胞病变的，导致永久性感染。特别是，缺乏活跃的T淋巴细胞响应和病毒极其容易突变似乎促进了高的慢性感染率。有6种主要的HCV基因型和50种以上的亚型，它们的地理分布不同。I型HCV在美国和欧洲是主要的基因型。例如，I型HCV在美国占所有HCV感染的70-75%。HCV的广泛的遗传异质性有重要的诊断和临床意义，或许它解释了疫苗研制的困难和对治疗缺乏响应。估计全球有1亿7千万人受到丙型肝炎病毒的感染。在最初的急性感染之后，大多数受感染的个体发展成慢性肝炎，它能够进展成肝纤维化，导致肝硬化、末期肝病和HCC（肝细胞癌）（National Institutes of Health Consensus Development Conference Statement: Management of Hepatitis C. Hepatology, 36, 5 Suppl. S3-S20, 2002）。由于HCV感染造成的肝硬化是单单在美国每年就死亡约10000人的原因，并且是肝移植的主要原因。 

HCV的传播能通过接触受污染的血或血液产品发生，例如在输血或静脉内用药之后。引入在血液筛选中使用的诊断试验已经导致输血后HCV发生率的下降趋势。但是，鉴于向末期肝病的进展缓慢，现有的感染在几十年内仍然是一个严重的医学和经济负担（Kim, W.R. Hepatology, 36, 5 Suppl. S30-34, 2002）。 

目前的HCV治疗是以（聚乙二醇化）干扰素-α(IFN-α)与利巴韦林联合为基础。这一联合疗法在受基因型I病毒感染的患者有40%以上，在受基因型2和3感染的患者中有约80%，产生了持续的病毒学响应。除了对I型HCV的效能有限之外，联合疗法还有明显的副作用，很多患者难以耐受。例如，在聚乙二醇化的干扰素和利巴韦林的注册试验中，显著的副作用造成约10-14%的患者中断治疗。联合疗法的主要副作用包括流感样症状，血液学异常和神经精神病症状。研制更有效、方便和可耐受的治疗方法是重要的公共健康课题。因此，这种慢性病的治疗是一项未解决的临床需要，因为目前的疗法只是部分有效并且受到不良的副作用的限制。 

特别关注的一个领域是寻找NS5b RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）的抑制剂。此聚合酶的关系密切的结构同源物在未被感染的宿主细胞内不存在，所述聚合酶的抑制剂的发现会提供更特异性的作用方式。目前研究的抑制剂可以分成核苷抑制剂（NI）或非核苷（NNI）抑制剂。NI直接与核酸底物竞争与高度保守的活性位的结合。NNI在该高度保守的活性部位外的独特的别构部位通常只与结构相关的聚合酶相互作用，可以实现更高的特异性。 

吲哚衍生物曾被提到具有HCV抑制活性。WO 2007/092000公开了作为HCV NS5B抑制剂的四环引哚衍生物，用于治疗和/或预防HCV病毒感染。US 2008/0146537公开了环丙基稠合的吲哚苯并氮杂

HCV NS5B抑制剂。WO 2008/075103公开了可用于治疗或预防丙型肝炎病毒感染的大环吲哚衍生物。 

迄今为止，初步的临床试验的失败率高，因此突出了寻找新的NS5b抑制剂的必要。医学上极其需要安全和有效的抗HCV治疗方法。这类HCV抑制剂可以克服目前的HCV疗法的缺点，例如副作用、效力有限、产生抗性和依从性差，并且提高持久的病毒响应。特别是该治疗化合物具有良好的生物利用度和有利的药动学及代谢型式。 

发明概要

业已发现，某些大环吲哚衍生物在受HCV感染的患者中显示出抗病毒活性，在以下一个或多个参量方面具有有用的性能：抗病毒效力，有利的突变型式，没有毒性，有利的药动学和代谢型式，以及容易配制和给药。这些化合物因此可用于治疗或防止HCV感染。 

本发明涉及HCV复制的抑制剂，它可用式（I）表示， 

包括其立体化学异构形式，以及盐、水合物和溶剂化物，其中：

R₁选自氢，卤素和C_1-4烷氧基；

R₂选自C_1-4烷基和C_3-6环烷基；

R₄是任选被卤素取代的C_3-7环烷基；

n是1或2；

Y选自：

a是2，3，4或5；

各b独立地是1或2；

R₃和R₃’独立地选自氢，C_1-6烷基和C_3-6环烷基。

本发明还涉及用于制备式（I）化合物（包括其立体化学异构形式以及盐、水合物或溶剂化物）的方法，它们的中间体，以及这些中间体在制备式（I）化合物中的应用。 

本发明涉及式（I）化合物本身，包括其立体化学异构形式，以及盐、水合物或溶剂化物，用来作为药物。本发明涉及式（I）化合物本身，包括其立体化学异构形式，以及盐、水合物或溶剂化物，用于治疗丙型肝炎。本发明还涉及药物组合物，其中含有载体和抗病毒有效量的本文中指定的式（I）化合物。所述的药物组合物可以含有上述化合物与其它抗HCV药物的组合。本发明还涉及用来向受到HCV感染的对象施用的上述药物组合物。该药物组合物可以进一步包含上述化合物或药物组合物与抗HIV药物的组合。因此本发明还涉及用来向受到HCV/HIV共感染的对象施用的上述药物组合物。 

本发明还涉及式（I）化合物，包括其立体化学异构形式或盐、水合物或溶剂化物，关于制造用于抑制HCV复制的药物的应用。本发明还涉及式（I）化合物，包括其立体化学异构形式，或其盐、水合物或溶剂化物，关于制造用于预防或治疗与HCV有关的病症的药物的应用。本发明还涉及一种抑制温血动物中HCV复制的方法，所述方法包括施用有效数量的式（I）化合物，包括其立体化学异构形式，或者盐、水合物或溶剂化物。本发明还涉及一种预防或治疗温血动物中与HCV有关的病症的方法，所述方法包括施用有效量的式（I）化合物，包括其立体化学异构形式，或者盐、水合物或溶剂化物。本发明还涉及一种预防或治疗温血动物中HCV/HIV共感染的方法，所述方法包括施用有效量的式（I）化合物，包括其立体化学异构形式，或者盐、水合物或溶剂化物。 

发明详述 

现在将进一步描述本发明。在下面几页中，更详细地定义了本发明的不同方面和实施方案。这样定义的各个方面或实施方案可以与任何其它方面或实施方案组合，除非清楚地指出意思相反。特别是，所指出的优选的或有利的任何特点，均可与指出的优选的或有利的其它任何特点结合，构成具体的实施方案。

当在前文和后文中使用时，除非另外指出，采用以下定义。 

就本发明而言，术语“对象”、“被感染的对象”或“患者”，是指需要治疗的受HCV感染的个体。 

术语“卤”或“卤素”是对氟、氯、溴和碘的通称。 

当在本文中使用时，作为基团或基团的一部分的“C_1-4烷基”定义为有1至4个碳原子的直链或支链的饱和烃基，例如甲基、乙基、丙-1-基、丙-2-基、丁-1-基、丁-2-基、异丁基、2-甲基-丙-1-基；作为基团或基团的一部分的“C_1-3烷基”定义为有1至3个碳原子的直链或支链的饱和烃基，例如甲基、乙基、丙-1-基、丙-2-基。“C_1-6烷基”包括C_1-3烷基和C_1-4烷基基团，及其有5或6个碳原子的高级同系物。例如，戊-1-基、戊-2-基、戊-3-基、己-1-基、己-2-基、2-甲基丁-1-基、2-甲基戊-1-基、2-乙基丁-1-基、3-甲基戊-2-基等。在C_1-6烷基中重要的是C_1-4烷基和C_1-3烷基。 

作为基团或基团的一部分的术语“C_1-6亚烷基”是指二价的C_1-6烷基，即，它有两个单键与两个其它基团连接。亚烷基的非限制性实例包括亚甲基、亚乙基、甲基亚甲基、亚丙基、乙基亚乙基、1-甲基亚乙基和1,2-二甲基亚乙基。 

“C_3-7环烷基”是对环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基的通称。术语“C_3-6环烷基”意味着包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。术语“C_3-5环烷基”包括环丙基、环丁基和环戊基。 

作为基团或基团的一部分的“C_1-4烷氧基”是指化学式为-OR^a的基团，其中R^a是以上定义的C_1-4烷基。合适的C_1-4烷氧基的非限制性实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。 

应当注意，基团在定义中所用的任何分子部分上的位置可以是该部分的任何位置，只要它是化学上稳定的。 

在变量的定义中使用的基团，除非另外指出，均包括所有可能的异构体。例如，哌啶基包括哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和哌啶-4-基；戊基包括戊-1-基、戊-2-基和戊-3-基。 

当任何变量在任何组成部分中出现一次以上时，每次的定义均是独立的。 

当在后文中使用时，术语“式（I）化合物”或“本发明化合物”或类似术语，意指包括式（I）化合物，包括其立体化学异构形式，以及盐、水合物或溶剂化物。一项实施方案包括式（I）化合物或本文指定的其任何子群，包括其可能的立体化学异构形式，以及盐、水合物和溶剂化物。另一实施方案包括式（I）化合物或本文中指定的任何子群，包括其可能的立体化学异构形式，以及盐、水合物和溶剂化物。 

当在后文中使用时，术语“任选被取代的”是指未被取代的及被至少一个特定的取代基团取代的。作为实例，“任选被氯取代的C_1-4烷基”包括未被取代的C_1-4烷基以及被氯取代的C_1-4烷基。 

式（I）化合物可以有一个或多个手性中心，并且可以存在立体化学异构形式。在本文中使用时，术语“立体化学异构形式”定义为式（I）化合物可能具有的，由相同原子通过相同的键序结合构成，但具有不同的三维结构的所有可能的化合物。 

对于使用(R)或(S)指定取代基内的手性原子的绝对构型的情形，这种指定是考虑整个化合物而不是孤立地考虑取代基作出的。 

在一个方面，本发明提供式（I）化合物 

包括其立体化学异构形式，N-氧化物，盐，水化物和溶剂化物，其中Y，R₁、R₂、R₄和n具有本文定义的相同含义。

具体的式（I）化合物子群是式（II）、（III）、（IV）、（V）、（VI）和（VII）的化合物。 

其中Y、R₁、R₂、R₃、R₃’、R₄、a和n具有对式（I）化合物定义的相同含义，或者独立地如同本文中定义的它的任何实施方案。 

当Y符合以下化学式时，

Y当然可以沿两个方向取向，即，哌嗪基或3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷部分可以与磺酰胺基团连接，而脂族胺与羰基连接；或者，哌嗪基或3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷部分与羰基连接，脂族胺与磺酰胺基团连接。

本发明的实施方案涉及式（I）化合物，或本文中定义的它的任何特定的子群，其中施加以下一个或多个限制条件： 

- Y选自

- Y选自

- Y选自

- Y选自

，其中哌嗪部分与羰基连接，脂族胺与磺酰基连接；

- Y选自

- Y是

- Y是

，其中哌嗪基部分与羰基连接，脂族胺与磺酰基连接；

- Y有7个碳原子的链长；

- R₃和R₃’独立地选自氢，甲基，乙基，异丙基和环丙基；

- R₃和R₃’独立地选自氢和甲基；

- R₃和R₃’是甲基；

- R₁选自氢、氯、氟或甲氧基；

- R₁是氢或甲氧基或氟；

- R₁是氢；

- R₁位于苯环上，处在连接苯与吲哚基团的键的间位或对位；

- R₁位于苯环上，处在连接苯与吲哚基团的键的对位；

- R₂选自甲基、乙基、异丙基、环戊基和环丙基；

- R₂是甲基或异丙基；

- R₂是甲基；

- R₄选自环戊基、环己基和氟代环己基，特别是2-氟环己基；

- R₄是环己基；

- n是1；

- a是4或5。

在另一特定的实施方案中，当Y可以是以下基团时：

，哌嗪基或3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷部分与羰基连接，脂族胺与磺酰胺基团连接。 

在一项实施方案中，本发明独立地提供式（II）、（III）、（IV）、（V）、（VI）或（VII）化合物，其中R₄是环己基或2-氟环己基。 

在另一实施方案中，本发明提供式（II）、（III）、（IV）、（V）、（VI）或（VII）化合物，其中R₁是氢、甲氧基、氯或氟。 

在另一实施方案中，本发明提供式（II）、（III）、（IV）、（V）、（VI）或（VII）化合物，其中R₂是甲基、乙基或异丙基。 

在另一实施方案中，本发明提供式（II）、（III）、（IV）、（V）、（VI）或（VII）化合物，其中n是1。 

在一项特定的实施方案中，本发明提供式（I）化合物，选自： 

包括其立体化学异构形式，以及盐、溶剂化物或水合物。

除非另外说明或指出，化合物的化学名称包括所述化合物可以具有的一些或所有可能的立体化学异构形式的混合物。所述的混合物可以包含该化合物的基本分子结构的所有非对映体和/或对映体。本发明化合物的所有的立体化学异构形式，无论是纯形式或是彼此混合的形式，都被包括在本发明的范围内。 

本文中所述的化合物和中间体的纯立体异构形式，被定义为基本上不含所述化合物或中间体的相同基本分子结构的其它对映体或非对映体形式的异构体。具体地说，术语“立体异构体纯的”涉及立体异构体过量至少80%（即，最少含90%一种异构体和最多10%的其它可能的异构体），直至立体异构体过量100%（即，100%的一种异构体，没有其它异构体）的化合物或中间体，更具体地说，化合物的立体异构体过量90%至100%，特别是立体异构体过量94%至100%，尤其是立体异构体过量97%至100%。术语“对映体纯的”和“非对映体纯的”应当以类似方式理解，但是分别考虑所关心的混合物的对映体过量和非对映体过量。 

纯立体异构体形式的本发明化合物和中间体可以利用本领域已知的方法得到。例如，对映体可以通过它们与旋光性酸或碱形成的非对映体的盐的选择性结晶而彼此分离。这些酸或碱的实例是酒石酸、二苯甲酰酒石酸、二甲苯酰酒石酸和樟脑磺酸。或者是，可以利用色谱技术，使用手性固定相将对映体分离。所述的纯立体化学异构形式也可以由相应的纯立体化学异构形式的合适起始物衍生形成，只要该反应能立体专一性地进行。具体地说，如果希望得到特定的立体异构体，则所述化合物用立体特异性的制备方法合成。这些方法应有利地使用对映异构体纯的起始物。 

式（I）化合物或其任何子群的非对映体外消旋物可以用常规方法分离。可以方便地采用的合适的物理分离方法是例如选择性结晶和色谱分离，例如柱色谱法。 

对于一些式（I）化合物、其N-氧化物、盐、水合物或溶剂化物，以及在其制备中使用的中间体，绝对的立体化学构型未被实验确定。本领域技术人员能够利用本领域的已知方法，例如X射线衍射法，确定这些化合物的绝对构型。 

然而，那些在化学结构中没有手性中心或立体异构源中心的式（I）化合物可能具有便于工业规模的合成和/或合成的成本效益提高的优点。 

具体的式（I）化合物子群是式（IA）和（IB）化合物 

式（IA）和（IB）化合物是异构体，依赖于二价连接基团Y的长度和R₂（例如当R₂是异丙基时），式（IA）和（IB）化合物可能不处在平衡，而是锁定在各自的构型，即，在其各自的构型中是稳定的。式（I）化合物（例如（IA）或（IB））的构型影响该化合物的特性，包括其代谢稳定性、药动力学和生物活性。

式（IA）和（IB）化合物的具体实例是式（IA-1）和（IB-1）化合物。 

本发明还打算包括在本发明化合物中存在的所有的原子的同位素。同位素包括具有相同的原子序、但质量数不同的那些原子。作为一般性实例而非限制，氢的同位素包括氚和氘。碳的同位素包括C-13和C-14。 

对于治疗用途而言，式（I）化合物的盐是其中的反离子是可药用的那些盐。然而，不可药用的酸和碱的盐也可以在例如制备或纯化可药用化合物方面找到用途。所有的盐，不管是否是可药用的，均被包括在本发明的范围内。 

如上所述的可药用的酸或碱的盐意味着包括式（I）化合物能够形成的有治疗活性的无毒的酸和碱加成盐形式。可药用的酸加成盐能够通过用合适的酸处理碱形式来得到。合适的酸包括，例如，无机酸，比如氢卤酸（如盐酸或氢溴酸）、硫酸、硝酸、磷酸等；或者有机酸，例如，乙酸、丙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸（即乙二酸）、丙二酸、琥珀酸（即丁二酸）、马来酸、富马酸、苹果酸（即羟基丁二酸）、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环己氨磺酸、水杨酸、对氨基水杨酸、双羟萘酸及类似的酸。 

反之，所述的盐形式可以通过用合适的碱处理，转化成游离碱形式。 

含有酸性质子的式（I）化合物或其任何子群也可以通过用合适的有机和无机碱处理，转化成其无毒的金属或胺加成盐形式。合适的碱盐形式包括，例如，铵盐，碱金属和碱土金属盐（例如锂、钠、钾、镁、钙盐等），与有机碱（例如苄星、N-甲基-D-葡糖胺）形成的盐，哈胺（hydrabamine）的盐，以及与氨基酸（例如精氨酸、赖氨酸等）形成的盐。 

本发明化合物的N-氧化物形式是其中一个或几个氮原子被氧化成所谓的N-氧化物的式（I）化合物或其任何子群。这类N-氧化物通常可以在向患者施用式（I）化合物后在体内通过代谢作用形成。或者是，这类N-氧化物可以利用本领域已知的方法化学合成。 

一些式（I）化合物或其任何子群及中间体还可以存在一种或多种互变异构形式。这些形式尽管未在以上化学式中明确指出，但仍打算包括在本发明的范围之内。因此，本发明的化合物和中间体可以以互变异构体的混合物形式，或以个别的互变异构体的形式存在。 

在本发明中，特别优选这样的式（I）化合物或其任何子群，它们在下面描述的抑制试验中，由合适的试验（例如在以下实施例中使用的试验）测得的抑制值小于100 μM，特别是小于50 μM，更特别是小于10 μM，尤其是小于5 μM，甚至小于1 μM，优选小于100 nM，特别是小于50 nM。 

应当清楚，以上定义的式（I）化合物的子群以及本文中定义的任何其它的子群，都意味着包括这些化合物的立体化学异构形式，以及任何盐，水合物和溶剂化物。 

式（I）化合物的制备

一般合成方案

式（I）化合物可以按照下述的不同方法B、C、D、E、F，从如方法A中所述合成的吲哚衍生物A-6制备

其中R₁、R₂、R₄、n与对式（I）化合物或其子群的定义相同，Ra选自甲基和叔丁基，Rb选自甲基或叔丁基。A-1的合成描述于WO 2003/010140A2，Journal of Medicinal Chemistry 2005, 48(5), 1314-1317，和WO 2006/029912A1中。

方法A

方案1

式A-3化合物可利用带有R₄取代基和甲基或叔丁基酯的化合物A-1与带有R₁取代基和被合适的保护基团PG₁（例如苄基）保护的羟基的硼酸衍生物A-2之间的Suzuki交叉偶合反应得到。可以使用的其它的合适保护基团列在例如下述文献中：Greene, “Protective Groups in Organic Chemistry”. John Wiley & Sons, New York (1999)和“The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology”, vol. 3, Academic Press, New York (1987)。此反应可以在钯催化剂（例如二氯化双（三苯膦）钯(II)）和碱（例如碳酸钾）存在下，于合适的溶剂（例如二甲氧基乙烷/水或甲苯/乙醇/水的混合物）中在惰性气氛下进行。

化合物A-4可通过化合物A-3利用烷基卤衍生物（例如甲基碘）在碱（例如氢化钠、碳酸钾、碳酸铯等）和合适的溶剂（例如DMF、THF、乙腈等）存在下进行烷基化反应得到。 

化合物A-5可通过用本领域已知的方法除去苯酚保护基团PG₁得到。对于所用的PG₁，合适的去保护方法在下述文献中有说明：Green, “Protective Groups in Organic Chemistry”, John Wiley & Sons, New York (1999)和“The peptides: Analysis, Synthesis, Biology”, Vol. 3, Academic Press, New York (1987)。例如，苄基保护基团能通过在合适的溶剂（例如甲醇）中使用钯催化剂催化氢化来去除。 

化合物A-6可以通过该苯酚利用例如式X-CH₂-CO-O-Rb（其中X是卤素）的卤代乙酸酯衍生物进行烷基化反应得到。该烷基化反应可以在碱（例如碳酸钾，碳酸铯等）存在下，于合适的溶剂（例如DMF、THF、乙腈等）中进行。Rb取代基可以是甲基，此时Ra为甲基或叔丁基；或者Rb为叔丁基，此时Ra为甲基。 

方法B

方案2给出了式（I）化合物的合成的图解式概述。此方法从式A-6化合物出发。

式B-1化合物可以通过带有Rb基团的酯的区域选择性水解制备。对于其中Rb是甲基、Ra是叔丁基或甲基的化合物A-6，该Rb酯的区域选择性水解可以使用氢氧化物（例如LiOH或NaOH），在极性溶剂，例如水、醇（比如甲醇或乙醇）、四氢呋喃（THF）或其混合物中，于碱性条件下进行。或者是，当Rb是叔丁基时，带有Rb基团的该酯的区域选择性水解可以使用例如TFA，在合适的溶剂（例如DCM）中，于酸性条件下进行。 

随后可以使式PG₂-Y-H的单保护的双官能Y衍生试剂（Y与对于式（I）或其子群的定义相同）与化合物B-1的羧酸偶合，形成酰胺键，结果生成化合物B-2。本文中使用的“PG₂”是合适的胺保护基团，选自本领域已知的保护基。可以作为PG₂使用的合适的保护基团列在例如Greene, “Protective Groups in Organic Chemistry”，John Wiley & Sons, New York (1999)中。具体地说，PG₂是叔丁氧羰基(Boc)保护基团或是2-硝基苯磺酰(nosyl)基团。 

酰胺键的形成可以利用标准方法进行，例如肽合成中用于偶合氨基酸的方法。此方法包括反应物的羧基与另一反应物的氨基脱水偶合，形成连接的酰胺键。此酰胺键的形成可以通过起始物在偶联剂存在下反应，或者通过将羧基官能基转化成活性形式（例如活性酯、混合酐或羧酸酰氯或溴）来完成。关于此类偶合反应及其中使用的试剂的一般性描述可以在关于肽化学的普通教材中查到，例如，M. Bodanszky, “Peptide Chemistry”, 第2修订版，Springer-Verlag, Berlin, Germany (1993)。 

方案2 

形成酰胺键的偶合反应的实例包括叠氮化物法，混合的碳酸-羰酸酐（氯甲酸异丁酯）法，碳化二亚胺（二氯己基碳化二亚胺(DCC)、二异丙基碳化二亚胺(DIC)、或水溶性碳化二亚胺，例如N-乙基-N’-[3-(二甲基氨基)丙基]碳化二亚胺(EDC)）法，活性酯法（例如，对硝基苯基酯、对氯苯基酯、三氯苯基酯、五氯苯基酯、五氟苯基酯、N-羟基丁二酰亚胺基酯等），Woodward试剂K-法，1,1-羰基二咪唑（CDI或N,N’-羰基二咪唑）法，磷试剂或氧化还原法。这些方法中有一些能通过加入合适的催化剂来加速，例如，在碳化二亚胺法中加入1-羟基苯并三唑或4-二甲基氨基吡啶(4-DMAP)。其它的偶联剂是六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧)-三(二甲基氨基)

盐本身或有1-羟基苯并三唑或4-DMAP存在；或者四氟硼酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲

盐，或六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲

盐。这些偶合反应可以在溶液中（液相）或在固相上反应。

该偶合反应特别适宜在惰性溶剂中进行，例如卤化烃类，比如二氯甲烷（DCM）、氯仿，偶极非质子溶剂，例如乙腈、二甲基甲酰胺（DMF）、二甲基乙酰胺、DMSO、HMPT，醚类，例如四氢呋喃（THF）。 

在很多情形，该偶合反应在合适的碱存在下进行，例如叔胺，比如三乙胺、二异丙基乙胺（DIPEA）、N-甲基吗啉、N-甲基吡咯烷、4-DMAP或1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯（DBU）。反应温度可以是0-50℃，反应时间可以从15分到24小时。 

按照本领域已知的方法除去保护基团PG₂会形成化合物B-3。例如，当PG₂是Boc保护基团时，可以通过在合适的溶剂（例如DCM）中用三氟乙酸（TFA）处理化合物B-2，除去PG₂。当PG₂是2-硝基苯磺酰时，可以通过在合适的溶剂（例如DMF、THF）中于碱（例如碳酸铯或LiOH）存在下，用硫醇例如巯基乙酸或者苯硫酚（溶液或者固相）处理化合物B-2来除去PG₂。当Ra是叔丁基；PG₂是Boc保护基团时，如上所述的PG₂的去除会形成化合物B-3，同时Ra是OH。 

在下一步，为引入磺酰胺，化合物B-3可以与磺酰胺在合适的溶剂（例如二氮杂环己烷）中于加热条件（例如约100℃）下反应。此反应可以在微波辐射下进行，结果形成化合物B-4。或者是，该磺酰胺部分可以通过化合物B-3与氨基磺酰氯在合适的碱（例如三乙胺、DIPEA或吡啶）存在下，于合适的溶剂（例如氯化溶剂，如DCM，或DMF、THF）中反应引入。 

化合物B-4的余下的酯官能基，即-CO-O-Ra，随后可以用本领域已知的条件水解，包括在如上所述的碱性介质中皂化，结果生成化合物B-5。为完成此反应可能需要加热。也可以采用酸性条件使化合物B-4的酯官能基水解，例如当Ra是叔丁基时，在合适的溶剂如DCM中用TFA。 

化合物（I）可以通过形成分子内酰基磺酰胺键的大环化反应得到：在偶联剂（例如CDI）存在下将羧酸基团加热转化成反应活性物种酰基咪唑，随后将该酰基咪唑纯化，然后加入合适的碱（例如DBU）以进行关环，这可以在加热条件下进行。这些反应中使用的溶剂可以包括乙腈或THF。也可以采用其它的偶联剂或条件，例如本领域已知的或以上所述的偶联剂或条件，来实现关环。 

方法C

方案3

如方案3中所示，形成化合物B-3的另一方法可以是在化合物B-1与对称的二价链Y（相对于化合物B-1过量使用）之间形成酰胺键。此酰胺键可以如上所述地合成，特别是使用偶联剂如六氟磷酸[二甲基氨基-([1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧)亚甲基]二甲基铵(HATU)，在碱（例如DIPEA）存在下于合适的溶剂（如DCM，DMF，尤其是THF）中进行。然后化合物B-3可以如以上方法B中所述地进行反应，以制备化合物（I）。

方法D

方案4

化合物B-4可按照与以上对于合成化合物B-2所述方法类似的方式，直接从化合物B-1制备，但使用带有一个磺酰胺部分而不是保护基团的二价键Y，即，H₂N-SO₂-Y-H。该磺酰胺可以通过将式H-Y-H试剂与磺酰胺一起在合适的溶剂（例如二氧杂环己烷）中于微波辐射下加热，引入在H-Y-H上，后者可以用合适的保护基团PG₂单保护（即，PG₂-Y-H），或者不保护（对称的）。保护基团PG₂可以随后用本领域已知的方法除去，例如当保护基是Boc保护基时，通过在二氯甲烷中与TFA反应除掉，结果形成式H₂N-SO₂-Y-H的单磺酰胺衍生的Y链。

方法E

式B-2或B-3化合物可进行官能基变换，例如烷基化或还原性胺化，然后进行化合物B-2的PG₂去除和/或反应，形成磺酰胺B-4。

方法F

化合物A-6的带有Ra基团的酯可以如以上对方法B所述地选择性水解。例如，当Ra是叔丁基和Rb是甲基时，Ra可以在酸性条件下于合适的溶剂（例如DCM）中使用TFA去除，生成羧酸衍生物F-1。

化合物F-1与试剂H₂N-SO₂-Y-PG₂的偶合形成酰基磺酰胺化合物F-2。所述的偶合反应可采用对于方法B的末一步描述的条件进行。具体地说，用来活化F-1的羧酸基的偶联剂可以是CDI，在加热条件下于合适的溶剂（例如乙腈或THF）中进行反应。在碱（例如DBU）存在下加入磺酰胺链会随后导致生成化合物F-2。PG₂是一个选自本领域已知保护基的合适的胺保护基团。具体地说，在方法E-F内，PG₂是Boc保护基团。按照本领域已知的方法除去化合物F-2的保护基团PG₂生成了化合物F-3。这些方法包括，当PG₂是Boc保护基时，化合物F-2与TFA在合适的溶剂（例如DCM）中反应。 

方案5 

化合物F-3（其中Rb是甲基）的酯官能基可以随后使用本领域已知的条件水解，包括如上所述地在碱性介质中皂化，形成化合物F-4。

或者是，化合物F-2可以先在碱性介质中进行皂化反应以使带Rb基的该酯水解，然后用上述的条件去除胺保护基团PG₂，形成化合物F-4。 

化合物（I）可以如方法B中所述，通过化合物F-4在偶联剂存在下形成分子内酰胺键进行大环化反应得到。特别是，此酰胺形成步骤可以在高度稀释的条件下进行。 

式（I）化合物或其任何子群的纯立体化学异构形式可利用本领域已知的方法得到。非对映体可利用物理方法分离，例如选择性结晶和色谱技术，比如逆流分布、液相色谱等。 

式（I）化合物或其任何子群可以以对映体的外消旋混合物的形式得到，可按照本领域已知的拆分方法将其彼此分离。有充分碱性或酸性的式（I）化合物或其任何子群，可分别通过与合适的手性酸和手性碱反应，转化成相应的非对映体盐形式。该非对映体盐形式随后用例如选择性结晶或分级结晶法分离，用碱或酸从其释放出对映体。分离式（I）化合物或其任何子群的对映体形式的另一方法涉及液相色谱，尤其是使用手性固定相的液相色谱。所述的纯立体化学异构形式也可以从纯立体化学异构形式的合适起始物衍生得到，条件是该反应要立体专一性地进行。具体地说，如果希望得到特定的立体异构体，该化合物可以用立体特异性的制备方法合成。这些方法可以方便地使用对映体纯的起始物。 

在另一方面，本发明涉及一种药物组合物，其中含有如本文中说明的治疗有效量的式（I）化合物或其任何子群，以及可药用的载体。在本文中，治疗有效量是足以在受感染的对象或有被感染的危险的对象中预防性对抗、稳定或减小病毒感染，特别是HCV病毒感染的某个数量。在另一方面，本发明涉及一种制备如本文中说明的药物组合物的方法，这包括将可药用的载体与如本文中说明的治疗有效量的式（I）化合物或其任何子群紧密混合。 

因此，按照本发明的一项实施方案，式（I）化合物或其任何子群可以配制成各式各样用于给药的药物形式。当然，通常用于全身性施药的所有组合物都作为合适的组合物被包括在内。为制备本发明的药物组合物，将有效数量的特定化合物（任选地是盐形式或是金属络合物）作为活性成分与可药用的载体结合成紧密混合物，该载体可以是各式各样的形式，这取决于希望施用的制剂的形式。这些药物组合物最好是适合（特别是）口服、直肠、透皮或非肠道给药的单位剂型。例如，在制备口服剂型的组合物时，可以使用任何适用的药物介质，例如，在口服液体制剂例如混悬剂、糖浆剂、酏剂、乳剂和溶液剂的情形，使用水、二醇、油、醇等；或者在粉剂、丸剂、胶囊剂和片剂的情形，使用固体载体，例如淀粉、糖、高岭土、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。因为易于服用，片剂和胶囊剂代表最方便的口服单位剂型，在这些情形显然使用固体药物载体。对于非肠道给药，载体通常含有无菌水，至少是占大部分，尽管也可包含例如用于促进溶解的其它成分。例如，可以配制注射溶液剂，其中载体包括盐水溶液、葡萄糖溶液或者盐水与葡萄糖溶液的混合物。也可以配制注射混悬剂，在这种情形可以使用合适的液相载体、悬浮剂等。还包括计划在使用前不久转化成液体形式制剂的固体形式制剂。在适合透皮给药的组合物中，载体任选地包含一种渗透增强剂和/或合适的润湿剂，任选地与少量的任何本性的合适添加剂组合，该添加剂应不对皮肤产生明显的不利作用。 

本发明化合物也可以利用本领域对于经由口腔吸入或吹入给药所用的方法和制剂，以这种方式给药。例如，本发明化合物一般可以以溶液、悬浮液或干粉的形式施用到肺部，优选溶液剂。为经由口腔吸入或吹入输送溶液剂、混悬剂或干粉剂所发展的任何系统均适合本发明化合物的施用。 

业已发现，本发明化合物在口服给药后显示出有利的药动力学特点，即，高肝浓度和高的肝/血浆比。对于抑制HCV复制的化合物，具有高肝浓度是有利的，因为HCV在肝中复制。高的肝/血浆比可以减小副作用和/或降低最小剂量。 

因此，本发明还提供了适合经由口腔吸入或吹入给药的药物组合物，其中含有式（I）化合物或任何子群及可药用的载体。具体地说，本发明化合物通过吸入雾化或气溶胶化的剂量溶液实现给药。 

将上述的药物组合物配制成单位剂型特别有利，因为容易服用并且剂量均一。本文所说的单位剂型是指适合作为单位剂量的物理上分离的单元，每个单元中含有按照计算能产生预期疗效的预定数量的活性成分和所需的药物载体。这类单位剂型的实例是片剂（包括刻痕或包衣片剂）、胶囊剂、丸剂、栓剂、袋装粉剂、糯米纸囊剂、注射溶液剂或混悬剂等，以及它们的分离的多重制剂。 

式（I）化合物及其任何子群显示出抗病毒性质。可用本发明的化合物和方法治疗的病毒感染及其相关疾病包括由HCV及其它的致病黄病毒，例如黄热病毒、登革热病毒（1-4型）、St. Louis脑炎病毒、日本脑炎病毒、墨累山谷脑炎病毒、西尼罗河脑炎病毒和昆津病毒，造成的感染。与HCV相关的疾病包括进行性肝纤维化，导致肝硬化的炎症和坏死，末期肝病及HCC；对于其它的致病黄病毒，所述疾病包括黄热病，登革热、出血热和脑炎。 

然而，本发明化合物还由于它们对其它病毒，特别是对于HIV没有活性而特别有吸引力。HIV感染的患者常受到例如HCV的共感染。用也能抑制HIV的HCV抑制剂治疗此类患者可能导致耐药HIV株系的产生。 

由于它们的抗病毒性质，特别是抗HCV性质，式（I）化合物或其任何子群，包括立体化学异构形式及其N-氧化物、盐、水合物和溶剂化物，可用于治疗受到病毒感染、尤其是HCV感染的个体，以及用于预防这些感染。通常，本发明化合物可用于治疗受病毒，特别是黄病毒，例如HCV，感染的温血动物。 

因此，本发明化合物或其任何子群可作为药物使用。所述的作为药物的应用或治疗方法，包括向病毒感染的对象或易被病毒感染的对象全身性施用对于防治和病毒感染，特别是和HCV感染有关的病症有效的一定数量的本发明化合物。 

本发明还涉及本发明化合物或其任何子群在制造用于治疗或预防病毒感染，特别是HCV感染的药物中的应用。 

本发明还涉及一种治疗受病毒（特别是HCV）感染的，或有被病毒感染的危险的温血动物的方法，所述方法包括施用如本文中说明的抗病毒有效量的式（I）化合物或其任何子群。 

本发明还涉及如本文中说明的式（I）化合物或其任何子群与其它的抗HCV药物的组合。在一项实施方案中，本发明涉及式（I）化合物或其任何子群与至少一种抗HCV药物的组合。在一项特定的实施方案中，本发明涉及式（I）化合物或其任何子群与至少两种抗HCV药物的组合。在一项特定的实施方案中，本发明涉及式（I）化合物或其任何子群与至少三种抗HCV药物的组合。在一项特定的实施方案中，本发明涉及式（I）化合物或其任何子群与至少四种抗HCV药物的组合。 

先前已知的抗HCV药物，例如干扰素α（IFN-α）、聚乙二醇化的干扰素-α、利巴韦林或其组合，与一种式（I）化合物或其任何子群的组合，可以作为联合疗法中的药物。在一项实施方案中，术语“联合疗法”涉及一种产品，其中必须含有（a）一种式（I）化合物，和（b）至少一种其它的抗HCV化合物，作为联合制剂同时、分别或顺序地用于治疗HCV感染，特别是治疗被HCV感染。 

抗HCV化合物包括选自以下的试剂：HCV聚合酶抑制剂，R-7128，MK-0608，ABT-33，VCH759，PF-868554，GS9190，NM283，伐洛他滨，PSI-6130，XTL-2125，NM-107，R7128（R4048），GSK625433，R803，R-1626，BILB-1941，HCV-796，JTK-109和JTK-003，ANA-598，IDX-184，MK-3281，MK-1220，苯并咪唑衍生物，苯并-1,2,4-噻二嗪衍生物，苯丙氨酸衍生物，A-831和A-689；HCV蛋白酶（NS2-NS3和NS3-NS4A）抑制剂，WO 02/18369的化合物（例如见273页9-22行，和274页第4行至276页第11行），BI-1335，TMC435350，MK7009，ITMN-191，BILN-2061，VX-950，BILN-2065，BMS-605339，VX-500，SCH 503034；HCV生命周期中其它靶物的抑制剂，包括解旋酶，和金属蛋白酶抑制剂，ISIS-14803；免疫调节剂，例如α-、β-和γ-干扰素，例如γIFN-α2b，γIFN-α2ba，重组复合IFN-α（干复津），feron，reaferon，intermax α，rIFN-β，干复津+干扰素γ-1b，INF-ω+DUROS，Albuferon（白蛋白-干扰素α-2b），locteron（缓释型干扰素α-2b），利比，口服IFN-α，IFN-α2b XL，AVI-005，聚乙二醇化干复津，聚乙二醇化衍生的干扰素-α化合物，例如聚乙二醇化的rIFN-α2b、聚乙二醇化的rIFN-α2a、聚乙二醇化的IFN-β，刺激细胞内干扰素合成的化合物，白介素，Toll样受体（TLR）激动剂，增强I型辅助性T细胞响应发展的化合物，以及胸腺素；其它抗病毒药物，例如利巴韦林，利巴韦林类似物，例如Rebetol、Copegus和Viramidine（taribavirin），金刚烷胺和替比夫定；内部核糖体进入抑制剂，α-葡糖苷酶1抑制剂，例如MX-3253（西戈维）和UT-231B；保肝药，例如IDN-6556，ME-3738，LB-84451和Mito Q；广谱病毒抑制剂，例如IMPDH抑制剂（例如，US 5,807,876、US 6,498,178、US 6,344,465、US 6,054,472、WO 97/40028、WO 98/40381、WO 00/56331的化合物，麦考酚酸及其衍生物，包括但不限于VX-497、VX-148和/或VX-944）；以及用于治疗HCV的其它药物，例如胸腺肽，硝唑尼特、BIVN-401（virostat）、PYN-17（altirex）、KPE02003002、actilon（CPG-10101）、KRN-7000、civacir、GI-5005、ANA-975、XTL-6865、ANA-971、NOV-205、tarvacin、EHC-18、NIM811、DEBIO-025、VGX-410C、EMZ-702、AVI 4065、巴士昔单抗和奥谷法奈；或上述任何药物的组合。 

于是，为防止或治疗HCV感染，式（I）化合物或其任何子群可以与例如以下药物联合共同施用：干扰素-α（IFN-α）、聚乙二醇化的干扰素-α、利巴韦林或其组合，以及以瞄准HCV抗原表位的抗体为基础的治疗药物，小干扰RNA（SiRNA），核酶，DNA核酶，反义RNA，NS3蛋白酶、NS3解旋酶和NS5B聚合酶的小分子拮抗剂。 

本发明的合剂可以作为药物使用。因此，本发明涉及如上定义的式（I）化合物或其任何子群在制造药物方面的应用，所述药物可用于抑制受HCV病毒感染的哺乳动物中的HCV活性，其中该药物以联合疗法使用，所述的联合疗法特别包括一种式（I）化合物和至少一种其它的HCV抑制化合物，例如IFN-α、聚乙二醇化的IFN-α、利巴韦林或它们的组合。 

另外，已知有很大一部分感染人类免疫缺陷病毒/（HIV）的患者也感染了HCV，即，它们受到HCV/HIV共感染。HIV感染似乎对所有阶段的HCV感染均有不利影响，导致病毒持久性提高，并加速HCV相关的肝病的进展。反之，HCV感染会影响HIV感染的治疗，增加由抗病毒药物治疗引起的肝中毒发生率。 

因此本发明还涉及式（I）化合物或其任何子群与抗HIV药物的联合。同样，一种或多种另外的抗HIV化合物与式（I）化合物或其任何子群的这种联合可作为药物使用。特别是，所述的联合可用于抑制HCV和HIV复制。 

术语“联合疗法”还包括一种产品，其中含有（a）一种式（I）化合物或其任何子群，和（b）至少一种抗HIV化合物，和（c）任选地至少另一种抗HCV化合物，该产品作为一种合剂用于在HCV和HIV的治疗中同时、分别或顺序使用，特别是用于治疗受HCV和HIV感染，或用于预防或治疗与HCV和HIV有关的病症。 

因此，本发明还涉及一种产品，其中含有（a）至少一种式（I）化合物或其任何子群，和（b）一种或多种另外的抗HIV化合物，该产品作为一种合剂，用于在抗HCV和抗HIV治疗中同时、分别或顺序使用。这些不同的药物可以与可药用的载体一起组合在单一的制剂中。所述的抗HIV化合物可以是任何已知的抗逆转录病毒化合物，例如，舒拉明，喷他咪，胸腺喷丁，澳粟精胺，葡聚糖（葡聚糖硫酸盐），膦甲酸钠（膦甲酸三钠盐）；核苷逆转录酶抑制剂（NRTI），例如，齐多天定（AZT），去羟肌苷（ddI），扎西他滨（ddC），拉米夫定（3TC），司他夫定（d4T），恩曲他滨（FTC），阿巴卡韦（ABC），氨多索韦（DAPD），艾夫他滨（ACH-126,443），AVX754（(-)-dOTC），福齐夫定替酯（FZT），叠氮膦，HDP-990003，KP-1461，MIV-210，racivir（PSI-5004），UC-781等；非核苷逆转录酶抑制剂（NNRTI），例如地拉夫定（DLV），依发韦仑（EFV），奈韦拉平（NVP），达匹韦林（TMC120），依曲韦林（TMC125），利匹韦林（TMC278），DPC-082，(+)-胡桐素A，BILR-355等；核苷酸逆转录酶抑制剂（NtRTI），例如，替诺福韦（(R)-PMPA）和富马酸替诺福韦酯（TDF）等；核苷酸竞争性逆转录酶抑制剂（NcRTI），例如NcRTI-1等；反式激活蛋白的抑制剂，例如TAT抑制剂，如RO-5-3355，BI-201等；REV抑制剂；蛋白酶抑制剂，例如，利托那韦（RTV），沙奎那韦（SQV），洛匹那韦（ABT-378或LPV），吲哚那韦（IDV），安普那韦（VX-478），TMC126，奈非那韦（AG-1343），阿扎那韦（BMS 232,632），达芦那韦（TMC114），呋山那韦（GW433908或VX-175），布瑞那韦（GW-640385，VX-385），P-1946，PL-337，PL-100，替拉那韦（PNU-140690），AG-1859，AG-1776，Ro-0334649等；穿入抑制剂，包括融合抑制剂（例如恩夫韦肽（T-20）），附着抑制剂和共受体抑制剂，后者包括CCR5拮抗剂（例如安立韦罗、CCR5mAb004、马拉韦罗（UK-427,857）、PRO-140、TAK-220、TAK-652、维立韦罗（SCH-D，SCH-417,690））和CXR4拮抗剂（例如AMD-070，KRH-27315），穿入抑制剂的实例是PRO-542、TNX-355、BMS-488043、BlockAide/CR^TM、FP21399、hNM01、nonakine、VGV-1；成熟抑制剂，例如PA-457；病毒整合酶抑制剂，例如雷特络韦（MK-0518），埃替拉韦（JTK-303，GS-9137），BMS-538158；核酶；免疫调节剂；单克隆抗体；基因疗法；疫苗；siRNA；反义RNA；杀微生物剂；锌指抑制剂。 

因此，同时患有以下病症的HCV感染的患者，可以方便地用本发明组合物治疗：与HIV或者其它致病性逆转录病毒有关的病症，例如艾滋病、艾滋病相关复合症（ARC）、进行性全身性淋巴结病（PGL），以及由逆转录病毒引起的慢性CNS病，例如HIV介导的痴呆和多发性硬化病。 

本发明组合物可以被配制成合适的药物剂型，例如上述各种剂型。各个活性成分可以分别配制，并且各制剂可以共同施用，或者一个制剂中含有二者，而且如果需要，可以提供其它的活性成分。 

本文中使用的术语“组合物”意在包括含有指定成分的产品，以及直接或间接地从所指定成分的组合中形成的任何产品。 

术语“治疗有效量”在本文中使用时是指一定数量的活性化合物或组分或药剂，它诱发出研究者、兽医、医生或其它临床医师藉助本发明所寻求的组织、系统、动物或人类中的生物或医学响应，包括减轻所治疗的疾病的症状。因为本发明还涉及含有两种或多种药物的合剂，所以本文中合剂的“治疗有效量”是合在一起以使该组合作用诱发所期望的生物或医学响应的各药物的数量。例如，含有（a）式（I）化合物和（b）另一抗HCV药物的组合物，其治疗有效量应是合起来具有治疗上有效的组合效果的式（I）化合物的数量和另一抗HCV药物的数量。 

通常考虑抗病毒有效日剂量应为每kg体重0.01-500 mg，特别是0.1-50 mg。将所需的剂量在全天内分成2、3、4或更多的分剂量可能合适。该分剂量可以配制成单位剂型，例如，每个单位剂型含1-1000 mg，特别是5-200 mg活性成分。 

准确的剂量和用药频率取决于所用的具体的式（I）化合物，所治疗的具体病症，所治疗病症的严重程度，具体患者的年龄、体重、性别、病症程度和一般身体状况，以及该个体可能采取的其它药物治疗，这是本领域技术人员所熟知的。另外，所述的有效日剂量显然可以随被治疗的对象的响应和/或开具本发明化合物处方的医师的评估而提高或降低。因此，上面所述的有效日剂量范围仅供参考。 

在本发明的一项实施方案中提供了一种制品，其中含有对治疗HCV感染或抑制HCV的NS5B聚合酶有效的组合物和包含一个指示该组合物可用于治疗丙型肝炎病毒感染的标签的包装材料，其中该组合物含有式（I）化合物或其任何子群，或本文所述的合剂。 

本发明的另一实施方案涉及一种试剂盒或容器，其中装有式（I）化合物或其任何子群，其数量能有效地在测定潜在药物抑制HCV NS5B聚合酶、HCV生长或抑制二者的能力的试验或分析中作为标准或试剂使用。本发明的这一方面在药物研究程序中会有用处。 

本发明的化合物及合剂可用于高通量靶物-分析物试验，例如用来测定所述合剂在HCV治疗中的效力的试验。 

实施例

以下实施例旨在示例说明本发明，而不是对它的限制。除非另外指出，合成的化合物用柱色谱法或快速色谱法的纯化是在硅胶柱上进行。 

除非另外指出，终产物均利用LCMS分析鉴定，使用SunFire C18 3.5μ 4.6×100 mm柱和两个流动相：流动相A（10 mM甲酸铵（NH₄OOCH）+0.1% HCOOH水溶液）和流动相B（CH₃CN）。柱温为50℃，流速2 mL/min，流动相A和流动相B的梯度表示如下： 

LCMS分析产生的特征数据是HPLC保留时间（Rt）和对分子质量的确定（m/z）。

实施例1：25-环己基-4,10,19-三甲基-5,6,9,10-四氢-2H,8H-14,18:17,20-二（次甲桥）-1,7,11,4,10,12,19-苯并二氧杂硫杂四氮杂环二十二碳烯-3,13(4H,12H,19H)-二酮11,11-二氧化物10的合成

步骤1

将2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯（1，6.14 g, 18.3 mmol）、2-（苄氧基）苯基硼酸（5.00 g, 21.9 mmol）和碳酸钾（5.80 g, 42 mmol）在450 mL 1,2-二甲氧基乙烷/水（4:1）中的溶液用氩气彻底吹洗。然后加入氯化反-双（三苯膦）合钯（II）（0.641 g, 0.91 mmol），在70℃于氩气下加热反应12小时。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，用乙酸乙酯（AcOEt）萃取。合并的有机层用NaHCO₃饱和溶液及盐水洗，用无水Na₂SO₄干燥后过滤。将滤过的溶液减压浓缩，得到2-[2-(苄氧基)苯基]-3-环己基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯2：m/z=440(M+H)⁺。

步骤2

向中间体2（9.4 g, 21.4 mmol）在无水DMF中的溶液加入NaH（810 mg, 32.1 mmol），然后在室温在加入碘甲烷（3.64 g, 25.7 mmol）。12小时后，将反应混合物分配在水（pH 6）和AcOEt中。有机层用无水Na₂SO₄干燥，过滤，然后蒸发。残留物用硅胶柱色谱法纯化（梯度洗脱，庚烷/AcOEt 1:0至80:20），得到7.8 g（80%）2-[2-(苄氧基)苯基]-3-环己基-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯3：m/z=454(M+H)⁺。

步骤3

将中间体3（4.00 g）在甲醇（36 mL）和乙酸（4 mL）中的溶液于作为催化剂的氢氧化钯存在下氢化。12小时后，将反应混合物过滤，滤液蒸发，得到3-环己基-2-（2-羟苯基）-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯4：m/z=364(M+H)⁺。

步骤4

将中间体4（4.00 g, 11.0 mmol）、2-溴乙酸叔丁酯（2.36 g, 12.1 mmol）和碳酸钾（3.04 g, 22.0 mmol）的溶液在室温下搅拌，72小时后将反应混合物减压浓缩，残留物分配在CH₂Cl₂和水中。将有机层干燥，残留物再溶于CH₂Cl₂（20 mL）中，加入TFA（20 mL）。室温下2小时后，将反应混合物减压蒸发，得到4.2 g（90%）{2-[3-环己基-6-（甲氧羰基）-1-甲基-1H-吲哚-2-基]苯氧基}乙酸5：m/z=422(M+H)⁺。

步骤5

将中间体5（650 mg, 1.54 mmol）、N-甲基-2-（甲基氨基乙氧基）乙胺（1.02 g, 7.71 mmol）、二异丙基乙胺（808μL，4.63 mmol）和HATU（880 mg, 2.31 mmol）在无水THF（25 mL）中的溶液于室温下搅拌过夜。然后将反应混合物减压浓缩。残余物分配在AcOEt和水中，有机层用无水Na₂SO₄干燥，蒸发后得到750 mg（91%）3-环己基-1-甲基-2-{2-[2-(甲基{2-[2-(甲基氨基)乙氧基]乙基}氨基)-2-氧代乙氧基]苯基}-1H-吲哚-6-羧酸甲酯6：m/z=536(M+H)⁺。

步骤6

将中间体6（620 mg, 1.16 mmol）和磺酰胺（900 mg, 9.36 mmol）在二氧杂环己烷（10 mL）中的溶液于微波炉中在100℃加热60分钟。将反应混合物冷却至室温，然后减压蒸发。残余物在水中研磨，过滤并用水洗。将粉末重新溶在AcOEt中，该溶液用无水Na₂SO₄干燥，过滤，滤液蒸发，得到610 mg（86%）3-环己基-1-甲基-2-(2-{2-[甲基(2-{2-[甲基(氨磺酰)氨基]乙氧基}乙基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯，为浅黄色粉末：m/z=615(M+H)⁺。

步骤7

在搅拌下向中间体7（370 mg, 0.602 mmol）在MeOH（30 mL）和THF（10 mL）中的溶液加入NaOH（1.00 g, 25 mmol）的水（5 mL）溶液。5小时后，将溶液减压浓缩，用乙酸（AcOH）将pH调节至5。然后用AcOEt萃取该反应混合物，有机层用无水Na₂SO₄干燥，过滤，将滤液蒸发，得到300 mg（83%）3-环己基-1-甲基-2-(2-{2-[甲基(2-{2-[甲基(氨磺酰)氨基]乙氧基}乙基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-1H-吲哚-6-羧酸8，为白色粉本：m/z=601(M+H)⁺。

步骤8

在搅拌下向中间体8（300 mg, 0.50 mmol）在无水乙腈（CH₃CN）（25 mL）中的溶液加入羰基二咪唑（405 mg, 2.50 mmol）。将反应混合物在室温下搅拌1小时，此时观察到转化完全。将形成的溶液蒸发，残余物用硅胶柱色谱法纯化（梯度洗脱，AcOEt/CH₃CN 1:0至0:1），得到315 mg（97%）2-{2-[3-环己基-6-(1H-咪唑-1-基羰基)-1-甲基-1H-吲哚-2-基]苯氧基}-N-甲基-N-(2-{2-[甲基(氨磺酰)氨基]乙氧基}乙基)乙酰胺9，为白色粉末：m/z=651(M+H)⁺。

步骤9

向中间体9（315 mg, 0.48 mmol）在CH₃CN（5 mL）中的溶液加入DBU（147 mg, 0.97 mmol），将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用AcOH将反应混合物的pH调节至5。将该溶液蒸发，残余物先用硅胶柱色谱法（梯度洗脱，AcOEt/CH₃CN 1:0至0:1），然后用制备型HPLC纯化，得到所要的产物25-环己基-4,10,19-三甲基-5,6,9,10-四氢-2H,8H-14,18:17,20-二(次甲桥)-1,7,11,4,10,12,19-苯并二氧杂硫杂四氮杂环二十二碳烯-3,13(4H,12H,19H)-二酮11,11-二氧化物10：m/z=583(M+H)⁺，Rt=5.13分。

实施例2：24-环己基-4,9,18-三甲基-4,5,6,7,8,9-六氢-13,17:16,19-二(次甲桥)-1,10,4,9,11,18-苯并氧杂硫杂四氮杂环二十一碳烯-3,12(2H,11H,18H)-二酮10,10-二氧化物15的合成

步骤1

化合物11从中间体5和N,N’-二甲丁二胺出发，按照关于合成3-环己基-1-甲基-2-[2-(2-{甲基[4-(甲基氨基)丁基]氨基}-2-氧代乙氧基)苯基]-1H-吲哚-6-羧酸甲酯6所描述的步骤，以88%的产率合成：m/z=520(M+H)⁺。

步骤2

3-环己基-1-甲基-2-{2-[2-(甲基{4-[甲基(氨磺酰)氨基]丁基}氨基)-2-氧代乙氧基]苯基}-1H-吲哚-6-羧酸甲酯12由中间体11按照对于合成中间体7所描述的步骤合成，产率68%：m/z=599(M+H)⁺。

步骤3

3-环己基-1-甲基-2-{2-[2-(甲基{4-[甲基(氨磺酰)氨基]丁基}氨基)-2-氧代乙氧基]苯基}-1H-吲哚-6-羧酸13由中间体12按照对于合成中间体8所描述的步骤合成，产率78%：m/z=585(M+H)⁺。

步骤4

2-{2-[3-环己基-6-(1H-咪唑-1-基羰基)-1-甲基-1H-吲哚-2-基]苯氧基}-N-甲基-N-{4-[甲基(氨磺酰)氨基]丁基}乙酰胺14由中间体13按照对于合成中间体9所描述的步骤合成，产率92%：m/z=635(M+H)⁺。

步骤5

24-环己基-4,9,18-三甲基-4,5,6,7,8,9-六氢-13,27:16,19-二(次甲桥)-1,10,4,9,11,18-苯并氧杂硫杂四氮杂环二十一碳烯-3,12(2H,11H,18H)-二酮10,10-二氧化物15由中间体14按照对于产物10所描述的步骤合成，产率12%：m/z=567(M+H)⁺，Rt=5.07分。

实施例3：25-环己基-10,19-二甲基-5,6,7,8,9,10-六氢-2H-14,18:17,20-二(次甲桥)-1,11,4,10,12,19-苯并氧杂硫杂四氮杂环二十二碳烯-3,13(4H,12H,19H)-二酮11,11-二氧化物21

步骤1

将2-(2-(3-环己基-6-(甲氧羰基)-1-甲基-1H-吲哚-2-基)苯氧基)乙酸5（1 g, 2.373 mmol）、N-(5-氨基戊基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺16（0.715 g, 1当量）、二异丙基乙胺（0.92 g, 3当量）和HATU（1.353 g, 1.5当量）在无水THF（25 mL）中的溶液于室温下搅拌过夜。然后将反应混合物连续地倒入水中，用二氯甲烷萃取，用MgSO₄干燥，浓缩。得到的残余物用快速色谱法纯化，使用甲醇/DCM梯度溶液作为洗脱剂，得到1.27 g（产率76%）标题化合物3-环己基-1-甲基-2-(2-{2-[(5-{甲基[(2-硝基苯基)磺酰]氨基}戊基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯17；m/z=705(M+H)⁺。

步骤2

室温下向3-环己基-1-甲基-2-(2-{2-[(5-{甲基[(2-硝基苯基)磺酰]氨基}戊基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-1H-吲哚-6-羧酸甲酯17（1.27 g, 1.802 mmol）在无水DMF（50 mL）中的溶液加入苯硫酚（0.397 g, 2当量）和碳酸铯（1.174 g, 2当量）。将反应混合物搅拌40小时，然后连续地倒入冰水中，用二氯甲烷萃取，用MgSO₄干燥后浓缩。残余物用柱色谱法纯化，使用乙酸乙酯/DCM梯度洗脱，得到600 mg（64%）标题化合物3-环己基-1-甲基-2-[2-(2-{[5-(甲基氨基)戊基]氨基}-2-氧代乙基)苯基]-1H-吲哚-6-羧酸甲酯18，为白色粉沫体；m/z=520(M+H)⁺。

步骤3

向3-环己基-1-甲基-2-[2-(2-{[5-(甲基氨基)戊基]氨基}-2-氧代乙氧基]苯基]-1H-吲哚-6-羧酸甲酯18（0.460 g, 0.885 mmol）在二氧杂环己烷（10 mL）中的溶液加入磺酰胺（0.851 g, 8.85 mmol）。将形成的混合物在微波炉中于100℃搅拌4小时，然后在105℃ 6小时。将反应混合物冷却至室温后浓缩，残余物在二氯甲烷中研磨，滤出多余的磺酰胺形成的沉淀。将溶剂除去，残余物用柱色谱法纯化，使用甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，得到447 mg（84%）标题化合物3-环己基-1-甲基-2-{2-[2-({5-[甲基(氨磺酰)氨基]戊基}氨基)-2-氧代乙氧基]苯基}-1H-吲哚-6-羧酸甲酯19；m/z=599(M+H)⁺。

步骤4

向3-环己基-1-甲基-2-{2-[2-({5-[甲基(氨磺酰)氨基]戊基}氨基)-2-氧代乙氧基]苯基}-1H-吲哚-6-羧酸甲酯19（480 mg, 0.802 mmol）在THF（50 mL）中的溶液加入氢氧化钠（1.283 g, 40当量）的水溶液。将形成的反应混合物于室温下搅拌过夜，然后连续地倒入水中，用HCl酸化至pH = 5，用二氯甲烷萃取，用MgSO₄干燥后浓缩。残余物用柱色谱法纯化，使用甲醇/DCM梯度洗脱，得到330 mg（70%）标题化合物3-环己基-1-甲基-2-{2-[2-({5-[甲基(氨磺酰)氨基]戊基}氨基)-2-氧代乙氧基]苯基}-1H-吲哚-6-羧酸20，为白色固体；m/z=585(M+H)⁺。

步骤5

在搅拌下向3-环己基-1-甲基-2-{2-[2-({5-[甲基(氨磺酰)氨基]戊基}氨基)-2-氧代乙氧基]苯基}-1H-吲哚-6-羧酸20（330 mg, 0.554 mmol）在无水乙腈（CH₃CN）（25 mL）中的溶液加入羰基二咪唑（110 mg, 0.677 mmol）。将反应混合物在室温下搅拌2小时，此时观察到转化完全。反应混合物随后用乙腈（25 mL）稀释，加入DBU（172 mg, 2当量）。然后将反应混合物在室温下搅拌过夜，减压除去溶剂，得到的残留物逐次溶在二氯甲烷中，依次用2M HCl（2次）和盐水洗。形成的有机层用硫酸钠干燥后浓缩。残余物用柱色谱法纯化，使用乙酸乙酯/二氯甲烷梯度洗脱，得到220 mg（69%）标题化合物25-环己基-10,19-二甲基-5,6,7,8,9,10-六氢-2H-14,18:17,20-二(次甲桥)-1,11,4,10,12,19-苯并氧杂硫杂四氮杂环二十二碳烯-3,13(4H,12H,19H)-二酮11,11-二氧化物21，为白色粉末；m/z=567(M+H)⁺。

实施例4：30-环己基-12,21-二甲基-4-氧杂-20-硫杂-1,12,19,21,24-五氮杂五环并[22.2.2.1 ^11,14 .1 ^13,17 .0 ^5,10 ]三十碳-5,7,9,11(30),13(29),14,16-七烯-2,18-二酮20,20-二氧化物22的合成

标题化合物22的合成按照对于化合21的合成所述的5步法，在第一步中用N-甲基-2-硝基-N-(2-(哌嗪-1-基)乙基)苯磺酰胺代替N-(5-氨基戊基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺16，得到33 mg白色固体；m/z 594[M+H]⁺。

实施例5：24-环己基-9,18-二甲基-4,5,6,7,8,9-六氢-13,17:16,19-二(次甲桥)-1,10,4,9,11,18-苯并氧杂硫杂四氮杂环二十一碳烯-3,12(2H,11H,18H)-二酮10,10-二氧化物32的合成

步骤1

起始物化合物23（2-溴-3-环己基-6-四丁基酯吲哚）的合成描述于US 2007270406A1中。

向中间体23（4 g, 10.57 mmol）在无水THF中的溶液加入NaH（400 mg, 15.86 mmol），然后在室温下加入碘甲烷（3 g, 21.15 mmol）。12小时后，将反应混合物分配在水（pH 6）和AcOEt中。有机层用无水Na₂SO₄干燥，过滤后蒸发，残余物用硅胶柱色谱法纯化（庚烷/EtOAc梯度洗脱，1:0至80:20），得到3.8 g（92%）2-溴-3-环己基-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸叔丁酯24；m/z=393(M+H)⁺。 

步骤2

将2-溴-3-环己基-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸叔丁酯(24，500mg，1.27mmol)、2-羟基苯基硼酸(211mg，1.53mmol)和碳酸钾 (1.35g，12.74mmol)在100mL 1,2-二甲氧基乙烷/水(4:1)中的溶液用氩气充分吹洗。加入氯化反-双(三苯膦)合钯(II)(0.147g，0.127mmol)，将反应混合物在氩气下于100℃加热12小时，然后冷却至室温，用水稀释后用乙酸乙酯(EtOAc)萃取。合并的有机层用NaHCO₃饱和溶液和盐水洗，用无水Na₂SO₄干燥后过滤。滤过的溶液减压浓缩，得到3-环己基-2-（2-羟基苯基）-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸叔丁酯25；m/z=406(M+H)⁺。

步骤3

将中间体25(0.6g，1.5mmol)、2-溴乙酸甲酯(0.281g，1.83mmol)和碳酸钾(0.423g，3.06mmol)在MeCN(50mL)中的溶液于室温下搅拌。12小时后，将反应混合物减压浓缩，残余物分配在CH₂Cl₂和水中。将有机层干燥，减压蒸发，得到0.7g(96%)3-环己基-2-[2-(2-甲氧基-2-氧代乙氧基)苯基]-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸叔丁酯26；m/z=478(M+H)⁺。

步骤4

向3-环己基-2-(2-甲氧基-2-氧代乙氧基)苯基-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸叔丁酯26(0.7g，1.46mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液加入三氟乙酸(4.2g，36.6mmol)。将形成的混合物在室温下搅拌12小时。除去溶剂，残余物用柱色谱法纯化，使用二氯甲烷/甲醇洗脱，得到0.59g(96%)3-环己基-2-[2-(2-甲氧基-2-氧代乙氧基)苯基]-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸27；m/z=422(M+H)⁺。

步骤5

在搅拌下向中间体27(590mg，1.4mmol)在无水乙腈(CH₃CN) (30mL)中的溶液加入羰基二咪唑(567mg，3.5mmol)。室温下搅拌反应混合物2小时，此时观察到转化完全。加入4-(甲基(氨磺酰)氨基)丁基氨基甲酸叔丁酯28(394mg，1.4mmol)和DBU(426mg，2.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，减压除去溶剂，形成的残余物逐次溶在二氯甲烷中，用2M盐酸洗2次，然后用盐水洗。得到的有机层用硫酸钠干燥后浓缩。残余物用柱色谱法纯化，使用乙酸乙酯/二氯甲烷梯度洗脱，得到675mg(70%)标题化合物[2-(6-{[{4-[(叔丁氧羰基)氨基]丁基}(甲基)氨磺酰]氨甲酰}-3-环己基)-1-甲基-1H-吲哚-2-基)苯氧基]乙酸甲酯29，为白色粉末；m/z=685(M+H)⁺。

步骤6

向中间体29(0.675g，1mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液加入三氟乙酸(2.86g，20mmol)。形成的混合物在室温下搅拌12小时，除去溶剂，残余物用柱色谱法纯化，使用二氯甲烷/甲醇洗脱，得到0.55g(95%)[2-(6-{[(4-氨基丁基)(甲基)氨磺酰]氨甲酰}-3-环己基-1-甲基-1H-吲哚-2-基)苯氧基]乙酸甲酯30；m/z=585(M+H)⁺。

步骤7

向中间体30(550mg，0.941mmol)在THF和甲醇(4:1)(50mL)中的溶液加入氢氧化锂(79mg，1.88mmol)的水溶液。将形成的混合物在室温下搅拌过夜，然后连续地倒入水中，用HCl酸化至pH=5，用二氯甲烷萃取，用Na₂SO₄干燥后浓缩。残余物用柱色谱法纯化，使用甲醇/DCM梯度洗脱，得到500mg(93%)标题产物[2-(6-{[(4-氨基丁基)(甲基)氨磺酰]氨甲酰}-3-环己基-1-甲基-1H-吲哚-2-基)苯氧基]乙酸31，为白色固体；m/z=571(M+H)⁺。

步骤8

向2-(2-(6-(N-(4-氨基丁基)-N-甲基氨磺酰羰基)-3-环己基-1-甲基-1H-吲哚-2-基)苯氧基)乙酸31(40mg，0.07mmol)在THF(50mL)中的溶液加入HATU(40mg，0.1mmol)和二异丙基乙胺(27mg，0.2mmol)。形成的混合物在室温下搅拌过夜，然后连续地倒入水中，用二氯甲烷萃取，用MgSO₄干燥后浓缩。形成的残余物用快速色谱法纯化，使用甲醇/DCM梯度洗脱剂，得到5mg(产率13%)标题产物24-环己基-9,18-二甲基-4,5,6,7,8,9-六氢-13,17:16,19-二(次甲桥)-1,10,4,9,11,18-苯并氧杂硫杂四氮杂环二十一碳烯-3,12(2H,11H,18H)-二酮10,10-二氧化物32；m/z=533(M+H)⁺。

实施例6：24-环己基-18-环戊基-4,9-二甲基-4,5,6,7,8,9-六氢-13,17:16,19-二(次甲桥)-1,10,4,9,11,18-苯并氧杂硫杂四氮杂环二十一碳烯-3,12(2H,11H,18H)-二酮10,10-二氧化物40的合成

步骤1

使用与制备化合物24相同的步骤制备化合物33，以化合物23和碘代环戊烷作为起始物，得到500mg(产率15%)2-溴-3-环己基-1-环戊基-1H-吲哚-6-羧酸叔丁酯33；m/z=447(M+H)⁺。

步骤2

使用与制备化合物25相同的步骤制备化合物34，以中间体33和2-羟基苯基硼酸为起始物，得到400mg(产率28%)3-环己基-1-环戊基-2-(2-羟基苯基)-1H-吲哚-6-羧酸叔丁酯34；m/z=460(M+H)⁺。

步骤3

使用与制备化合物26相同的步骤制备化合物35，以中间体34和2-溴乙酸甲酯作为起始物，得到450mg(产率97%)3-环己基-1-环戊基-2-[2-(2-甲氧基-2-氧代乙氧基)苯基]-1H-吲哚-6-羧酸叔丁酯35；m/z=532(M+H)⁺。

步骤4

使用与制备化合物31相同的步骤制备化合物36，以中间体35作为起始物，得到410mg(产率94%){2-[6-(叔丁氧羰基)-3-环己基-1-环戊基-1H-吲哚-2-基]苯氧基}乙酸36；m/z=518(M+H)⁺。

步骤5

使用与制备化合物6相同的步骤制备化合物37，以中间体36和N,N’-二甲基丁二胺作为起始物，得到450mg(产率92%)3-环己基-1-环戊基-2-[2-(2-{甲基[4-(甲基氨基)丁基]氨基}-2-氧代乙氧基)苯基]-1H-吲哚-6-羧酸叔丁酯37；m/z=617(M+H)⁺。

步骤6

使用与制备化合物19相同的步骤制备化合物38，以中间体37作为起始物，得到400mg(产率79%)3-环己基-1-环戊基-2-{2-[2-(甲基{4-[甲基(氨磺酰)氨基]丁基}氨基)-2-氧代乙氧基]苯基}-1H-吲哚-6-羧酸叔丁酯38；m/z=695(M+H)⁺。

步骤7

使用与制备化合物27相同的步骤制备化合物39，以中间体38作为起始物，得到150mg(产率41%)3-环己基-1-环戊基-2-{2-[2-(甲基{4-[甲基(氨磺酰)氨基]丁基}氨基)-2-氧代乙氧基]苯基}-1H-吲哚-6-羧酸39；m/z=639(M+H)⁺。

步骤8

使用与制备化合物21相同的步骤制备化合物40，以中间体39作为起始物，得到30mg(产率21%)24-环己基-18-环戊基-4,9-二甲基-4,5,6,7,8,9-六氢-13,17:16,19-二(次甲桥)-1,10,4,9,11,18-苯并氧杂硫杂四氮杂环二十一碳烯-3,12(2H,11H,18H)-二酮10,10-二氧化物40；m/z=621(M+H)⁺。

实施例7：25-环己基-23-氟-10,19-二甲基-5,6,7,8,9,10-六氢-2H-14,18:17,20-二(次甲桥)-1,11,4,10,12,19-苯并氧杂硫杂四氮杂环二十二碳烯-3,13(4H,12H,19H)二酮11,11-二氧化物50的合成

步骤1

使用与制备化合物25相同的步骤制备化合物41，以2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯1和2-(苄氧基)-4-氟苯基硼酸作为起始物，得到14.9g(87%产率)2-[2-(苄氧基)-4-氟苯基]-3-环己基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯41；m/z=458(M+H)⁺。

步骤2

使用与制备化合物3相同的步骤制备化合物42，以中间体41作为起始物，得到2-[2-(苄氧基)-4-氟苯基]-3-环己基-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯42，定量产率：m/z=472(M+H)⁺。

步骤3

使用与制备化合物4相同的步骤制备化合物43，以中间体42作为起始物，得到3-环己基-2-(4-氟-2-羟苯基)-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯43，产率96%；m/z=382(M+H)⁺。

步骤4

使用与制备化合物26相同的步骤制备化合物44，以中间体43和2-溴乙酸叔丁酯作为起始物，得到2-[2-(2-叔丁氧基-2-氧代乙氧基)-4-氟苯基]-3-环己基-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯44，定量产率；m/z=496(M+H)⁺。

步骤5

使用与制备化合物27相同的步骤制备化合物45，以中间体44作为起始物，得到{2-[3-环己基-6-(甲氧基羰基)-1-甲基-1H-吲哚-2-基]-5-氟苯氧基}乙酸45，定量产率；m/z=440(M+H)⁺。

步骤6

使用与制备化合物17相同的步骤制备化合物46，以中间体45和N-(5-氨基戊基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺16作为起始物，得到891mg(产率68%)3-环己基-2-(4-氟-2-{2-[(5-{甲基[(2-硝基苯基)磺酰]氨基}戊基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯46；m/z=723(M+H)⁺。

步骤7

使用与制备化合物18相同的步骤制备化合物47，以中间体46作为起始物，得到520mg(产率78%)3-环己基-2-[4-氟-2-(2-{[5-(甲基氨基)戊基]氨基}-2-氧代乙氧基)苯基]-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯47；m/z=538(M+H)⁺。

步骤8

使用与制备化合物19相同的步骤制备化合物48，以中间体47作为起始物，得到590mg(产率98%)3-环己基-2-{4-氟-2-[2-({5-[甲基(氨磺酰)氨基]戊基}氨基)-2-氧代乙氧基]苯基}-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯48；m/z=617(M+H)⁺。

步骤9

使用与制备化合物8相同的步骤制备化合物49，以中间体48作为起始物，得到399mg(产率67%)3-环己基-2-{4-氟-2-[2-({5-[甲基(氨磺酰)氨基]戊基}氨基)-2-氧代乙氧基]苯基}-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸49；m/z=603(M+H)⁺。

步骤10

使用与制备化合物21相同的步骤，以中间体49作为起始物制备化合物50，得到220mg(产率57%)25-环己基-23-氟-10,19-二甲基-5,6,7,8,9,10-六氢-2H-14,18:17,20-二(次甲桥)-1,11,4,10,12,19-苯并氧杂硫杂四氮杂环二十二碳烯-3,13(4H,12H,19H)-二酮11,11-二氧化物50；m/z=585(M+H)⁺。

实施例8：25-环己基-22-氟-10,19-二甲基-5,6,7,8,9,10-六氢-2H-14,18:17,20-二(次甲桥)-1,11,4,10,12,19-苯并氧杂硫杂四氮杂环二十二碳烯-3,13(4H,12H,19H)-二酮11,11-二氧化物51的合成

标题化合物51的合成按照对于合成化合物50所述的10步方法进行，在第一步中使用2-(苄氧基)-5-氟苯基硼酸，得到431mg白色固体；m/z=585[M+H]⁺。

实施例9：25-环己基-4,10-二甲基-19-(1-甲基乙基)-5,6,9,10-四氢-2H,8H-14,18:17,20-二(次甲桥)-1,7,11,4,10,12,19-苯并二氧杂硫杂四氮杂环二十二碳烯-3,13(4H,12H,19H)二酮11,11-二氧化物52的合成

标题化合物52的合成按照对于合成化合物40所述的8步法进行，在第一步使用2-碘丙烷，在第5步使用N-甲基-2-(甲基氨基乙氧基)乙胺，得到300mg白色固体；m/z 611[M+H]⁺。

实施例10：24-环己基-22-甲氧基-4,9,18-三甲基-4,5,6,7,8,9-六氢-13,17:16,19-二(次甲桥)-1,10,4,9,11,18-苯并氧杂硫杂四氮杂环二十一碳烯-3,12(2H,11H,18H)-二酮10,10-二氧化物53的合成

标题化合物53的合成按照对于化合物10的合成所述的9步法进行，在第1步中使用2-(苄氧基)-4-甲氧基苯基硼酸，在第5步中使用N,N’-二甲基丁二胺，得到57mg白色固体；m/z 597[M+H]⁺。

实施例11：25-环己基-23-甲氧基-4,10,19-三甲基-5,6,9,10-四氢-2H,8H-14,18:17,20-二(次甲桥)-1,7,11,4,10,12,19-苯并二氧杂硫杂四氮杂二十二碳烯-3,13(4H,12H,19H)-二酮11,11-二氧化物54的合成

标题化合物54的合成按照对于化合物10的合成所述的9步法进行，在第一步中使用2-(苄氧基)-4-甲氧基苯基硼酸，得到9mg白色固体；m/z 613[M+H]⁺。

实施例12：N-(5-氨基戊基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺16的合成

步骤1

在冷却下向(5-氨基戊基)氨基甲酸叔丁酯(20g,99mmol)在二氯甲烷(250mL)中的溶液加入2-硝基苯-1-磺酰氯(23g,104mmol)。形成的混合物在0℃搅拌，然后逐滴加入二异丙基乙胺(19.7g,144mmol)。将形成的混合物在室温下搅拌过夜，然后倒入水和柠檬酸中，分离出有机层，依次用MgSO₄干燥后过滤，将滤液浓缩，得到32.6g(85%)(5-{[(2-硝基苯基)磺酰基]氨基}戊基)氨基甲酸叔丁酯55，为白色针状物，m/z 388[M+H]⁺。

步骤2

向(5-{[(2-硝基苯基)磺酰基]氨基}戊基)氨基甲酸叔丁酯55(32.6g,84mmol)在丙酮(300mL)中的溶液加入碳酸钾(23.2g,168mmol)。形成的混合物在室温下搅拌30分钟，然后逐滴加入甲基碘(17.88g,126mmol)。将形成的混合物在室温下搅拌过夜，然后倒入水中，加入二氯甲烷。将有机层分离，依次用MgSO₄干燥，过滤后浓缩。残留物用二异丙基醚研磨，得到31.6g(93%)(5-{甲基[(2-硝基苯基)磺酰基]氨基}戊基)氨基甲酸叔丁酯56，为白色粉末，m/z 402[M+H]⁺。

步骤3

使用与制备化合物27的相同步骤，以中间体56作为起始物制备化合物16，得到N-(5-氨基戊基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺16，定量产率；m/z=302(M+H)⁺。

实施例13—式(I)化合物的活性

细胞试验

在细胞试验中检验式(I)化合物抑制HCV RNA复制的活性。该试验证实，式(I)化合物抑制HCV功能性细胞复制细胞系，也称作HCV复制子。此细胞试验如Lohmann等(1999)，Science vol 285, pp 110-113所述并经Krieger等(2001) Journal of Virology 75:4614-4624修改，在一项多靶筛选策略中以双顺反子表达构建物为基础。这里描述两个HCV细胞试验：复制子试验(其结果表示成EC₅₀)和瞬时复制子试验(其结果表示成EC₅₀-T)。

复制子试验

此试验使用稳定转染的细胞系Huh-7 luc/neo(以后称作Huh-Lue)。该细胞系包含编码双顺反子表达构建物的RNA，构建物中含有从脑心肌炎病毒(EMCV)的内部核糖体进入点(IRES)翻译的1b型HCV的野生型NS3-NS5B区，之前是一个报道基因部分(FfL-萤光素酶)和一个选择性标记部分(neo^R,新霉素磷酸转移酶)。该构建物以1b型HCV的5’和3’NTR(非翻译区)为边界。复制子细胞在G418(neo^R)存在下的连续培养取决于HCV RNA的复制。这种稳定转染的复制子细胞表达能以高水平自主复制，特别是编码萤光素酶的HCV RNA，可用于筛选抗病毒化合物。

将复制子细胞植入384孔板中，板中已加入各种不同浓度的试验与对照化合物。在培养3天后，通过分析萤光素酶活性测定HCV复制(使用标准的萤光素酶试验底物和试剂，以及一台Perkin Elmer ViewLux^TM ultra HTS微板成像仪)。对照样培养物中的复制子细胞在任何抑制剂都不存在下具有高的萤光素酶表达。监测化合物对Huh-Luc细胞的抑制活性，能得到每种试验化合物的剂量-响应曲线。然后计算EC₅₀值，该值表示为使检测的荧光素酶活性水平，或者更具体地说，基因连锁的HCV复制子RNA复制的能力，降低50%所需的化合物之量。 

瞬时复制子试验

此试验使用双顺反子表达构建物，其中含有1b型(con1b)HCV的野生型NS3-NS5B区，带有从衍生自脑心肌炎病毒(EMCV)的内部核糖体进入点(IRES)翻译的ET克隆的细胞培养物适应性突变(E1202G，T12801，K1846T)，之前是Polio病毒IRES驱动的报道基因部分(FfL-萤光素酶)。该构建物以1b型HCV的5’和3’ NTR(非翻译区)为边界。RNA从这一构建物中产生并转染到Huh7治愈细胞中（Koutsoudakis G, Herrmann E, Kallis S, Bartenschlager R, Pietschmann T. The level of CD81 cell surface expression is a key determinant for productive entry of hepatitis C virus into host cells. J. Virol. 2007; 81 (2): 588-598）。被转染的HCV RNA自主和瞬时地高水平复制，特别是编码萤光素酶，可用于试验抗病毒化合物。

穿梭载体的设计  设计用来穿梭NS5B的载体盒由质粒pFKi341Luc＿NS3-3’-ET(20)生成。由此质粒衍生的复制子构成HCV基因型1b Con 1株的NS3至3’-UTR序列，并在NS3中带有两个细胞培养物适应性突变(E1202G和T1280I)和在NS4B中有一个突变(K1846T)。用Stratagene(La Jolla, CA)的QuickChange定位诱变试剂盒，使用pFKi341Luc＿NS3-3’-ET质粒产生两个Afl II限制酶切位点，第一个直接进入NS5A的终止密码子之后的3’ NCR，第2个进入NS5A/NS5B切割位点的8个氨基酸上游。因为发现在体外转录之前将质粒线型化所需的ScaI位点存在于一些临床分离物的聚合酶序列中，我们将其突变成XbaI。萤火虫萤光素酶基因的内源性XbaI位通过引入沉默突变去除。 

NS5B嵌合复制子的构建  编码NS5A的C端(残基440-447)和NS5B全长(残基1-591)的cDNA利用亚型特异性引物从临床分离物中扩增，所述引物带有一个与穿梭载体互补的5’部分(1b个核苷酸)和一个设计成与临床分离物序列互补的3’部分(13-19个核苷酸)。扩增子通过使用In-Fusion克隆法(In-Fusion Dry Down PCR Cloning Kit, Clontech)克隆在NS5B穿梭载体中。转化后得到的个别克隆和克隆集合体被用于体外转录并在瞬时复制子试验中试验。对于本发明化合物，使用来自HCV基因型1a的两种临床分离物1a＿H77和1a＿6(基因库存取号AF011751和EF523592)的两种嵌合复制子产生数据。 

瞬时复制子试验  将10微克体外转录的线型复制子RNA转染到Huh 7-治愈细胞中，培养(37℃，5% CO₂)48小时后加入萤光素酶底物(Steady Lite Plus; Perkin Elmer)测定荧光，定量确定复制子复制。在9点稀释系列中测定化合物对这些复制子的活性，即，抑制活性，从而对每种试验化合物得到剂量-响应曲线。然后计算EC₅₀值，该值代表为将检测到的萤光素酶活性水平，或者更具体地说，基因连锁的HCV复制子RNA的复制能力，降低50%所需的化合物的数量。测得的EC₅₀值列在表1中。对于基因型1b的野生型复制子，得到EC₅₀-T Con1b；对于临床分离物1a＿H77和1a＿6的嵌合复制子，分别得到EC₅₀-T CI1和EC₅₀-TCI2。 

酶抑制试验

a）NS5B的克隆、表达和纯化

将没有21C-末端残基的NS5B(基因型1b共有株系Con1)的编码序列从质粒pFKI₃₈₉/ns3-3’(基因库存取号AJ242654)、质粒pCV-H77C(基因库存取号AF 011751.1)扩增，并如先前所述地(Pauwels等，J. Virol., 2007)亚克隆到pET21b质粒中。将NS5BΔC21表达构建物转移到大肠肝菌Rosetta 2(DE3)(Novagen, Madison, WI)中。将补充了羧苄青霉素(50μg/mL)和氯霉素(34μg/mL)的100毫升LB培养基接种一个菌落，生长过夜，按1:200的比例转移到补充了3%乙醇、羧苄青毒素和氯霉素的新鲜LB培养基中。细胞生长至600nm处光密度为0.6，然后将该表达培养物在用最终浓度分别为0.4mM和10μM的异丙基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷和MgCl₂诱导之后，改换成生长温度20℃。诱导18小时后，离心收取细胞，重新悬浮在补充了无EDTA的完全蛋白酶抑制剂(Roche, Basel, Switzerland)的20mM Tris-HCl，pH7.5，300mM NaCl，10%甘油，0.1% NP40，4mM MgCl₂，5mM DTT中。将细胞悬浮液超声粉碎，与10-15mg/L的DNase I(Roche, Basel, Switzerland)一起培养30分钟。在30000 × g下离心1小时除去细胞碎片，澄清的细胞裂解液在纯化前于-80℃快速冷冻储存。

将澄清的细胞裂解液解冻，随即加入到一只用25mM HEPES，pH7.5，500mM NaCl，10%甘油和5mM DTT平衡的5mL预填充的HisTrap FF柱中。蛋白质用500mM的咪唑以1mL/分的流速洗脱。将含有所关心的蛋白质的级分加在与25mM HEPES，pH7.5，250mM NaCl，10%甘油和5mM DTT平衡的预填充的26/10 Hiprep脱盐柱上。然后将缓冲液交换的NS5B峰级分加到一只6mL的Resource S柱上。用渐增盐梯度的溶液洗脱蛋白质，收集级分。蛋白质纯度在Nu-PAGE预制凝胶(Invitrogen, Carlsbad, CA)上分析。纯化过的NS5B样品用Centri-Prep浓缩仪(Millipore, Billerica, MA, USA)浓缩，蛋白质浓度使用Nanodrop (Nanodrop Technologies, Wilmington, DE, USA)以分光光度法测定。 

b）RNA依赖性RNA聚合酶试验

HCV NS5B聚合活性的测定通过使用杂聚的RNA模板/引物评价在新合成的RNA中被该酶结合的放射性标记的GTP数量来进行。该RdRp试验在384孔板中进行。2.5nM纯化的NS5B酶与150nM 5’-生物素化低聚(rG₁₃)引物、15nM聚(rC)模板在18nM Tris-HCl, pH7.5, 5mM MgCl₂, 20.5mM KCl, 17mM NaCl和2.5mM DTT中预培养10分钟。将试验化合物加到该预形成的聚合酶-模板复合物中，在室温下培养15分钟，然后加入600nM GTP和0.13μCi的[³H]GTP。将30μL反应混合物在室温下培养2小时，然后加入在0.5M EDTA中的30μL用链霉亲和素包覆的SPA珠(GE Healthcare, Uppsala, Sweden)使反应停止。此30μL反应混合物在25℃于加入30μL链霉亲和素包覆的SPA珠(GE Healthcare, Uppsala, Sweden 5mg/ml在0.5M EDTA中)后2小时终止反应。在25℃培养30分钟后，用Packard TopCount酶标仪对板计数(30秒/孔，1分钟计数延迟)，计算IC₅₀值。IC₅₀值代表为使通过检测结合的放射性标记的GTP测得的RNA产生量减少50%所需的化合物浓度。得到的IC₅₀值列在表1中。

以下表1列出了已根据实施例3测定了活性的以上任一项实施例的化合物。 

酶结合试验

利用基于表面等离子体共振(SPR)的方法，即，Biacore表面等离子体共振仪，检验式(I)化合物的酶结合动力学或亲和性。抑制化合物从其病毒靶物上的缓慢解离(低K_off，低K_d)据信有可能减慢对于抗病毒药物的耐药性的发生(Dierynx等，2007，Journal of Virology, vol. 81, No. 24, 13845-13851)。所有测量均在一台Biacore T100仪器(GE Healthcare)上进行。纯化的HIS₆标记的NS5BΔC21聚合酶利用非共价键俘获在固定缓冲液(20mM MOPS pH7.4, 500mM/NaCl, 0.005% Tween-P20,1mM DTT, 50 μM EDTA)中的NTA传感器芯片(GE Healthcare)上。相互作用研究全在25℃进行。将抑制剂系列地稀释在含有5%二甲基亚砜(DMSO)的运行缓冲液(20mM Tris-HCl pH7.4, 150mM NaCl, 50 μM EDTA, 1mM DTT, 0.005% Tween P-20)中。采用单周期动力学，其中在单个周期中注入化合物的5种渐增的浓度，每种浓度300秒，监测解离一段1200秒的时间。在两个周期之间使传感器表面完全再生。利用适合单周期动力学的同时非线性回归分析(整体拟合)，用Biacore T100 BiaEval评估软件2.0(GE Healthcare)分析数据。通过该传感图的动力学评价，确定各个速率常数K_on和K_off以及导出的亲和性常数K_d=K_off/K_on。此动力学模型考虑了整体和有限质量传递效应。每次分析均用至少两次独立的实验完成。动态相互作用的解离速率可以转化成化合物停留时间(解离半寿期t_1/2=ln(2)/K_off)，它代表聚合酶及其抑制剂之间的相互作用时间。

对于式(I)化合物或其子群在NS5B野生型酶基因型1a、1b和4a上测得的结合速率常数(K_on)、解离速率常数(K_off)、导出的亲和性常数(K_d)和解离半寿期(t_1/2)，列在表2中。 

实施例14—式(I)化合物的药物组合物

制剂

将活性成分(在本情形是式(I)化合物)溶在有机溶剂，例如乙醇、甲醇或二氯甲烷中，优选乙醇和二氯甲烷的混合物。将聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮与乙酸乙烯酯(PVP-VA)或羟丙基甲基纤维素(HPMC)的共聚物，通常为5mPa·s，溶于有机溶剂如乙醇、甲醇和二氯甲烷中。适宜的是将聚合物溶于乙醇。将聚合物溶液与化合物溶液混合，随后喷雾干燥。化合物/聚合物之比选择为1:1至1:6。中间范围是1:1.5和1:3。一个合适的比例是1:6。将喷雾干燥的粉末(固体分散体)随后装入用于给药的胶囊中。每只胶囊中的药物载量在50-100mg的范围，取决于所用胶囊的尺寸。

包膜片剂

片剂核心的制备

将100g活性成分(本情形为式(I)化合物)、570g乳糖和200g淀粉充分混合，然后用5g十二烷基硫酸钠和10g聚乙烯吡咯烷酮在约200mL水中的溶液加湿。将湿的粉末混合物过筛、干燥，再过筛。然后加入100g微晶纤维素和15g氢化植物油。将其整体充分混合，压制成片，得到10000片，每片含10mg活性成分。

包膜 

向10g甲基纤维素在75mL变性乙醇中的溶液加入5g乙基纤维素在150mL二氯甲烷中的溶液。然后加入75mL二氯甲烷和2.5mL 1,2,3-丙三醇。将10g聚乙二醇熔化并溶在75mL二氯甲烷中。将后一溶液加到前一溶液中，然后加入2.5g硬脂酸镁，5g聚乙烯吡咯烷酮和30mL浓的着色剂悬浮液，将整个体系均化。用这样得到的混合物在涂布装置中将片剂核心包膜。

实施例15—单次口服后的药动力学分析

向三只雄性Sprague-Dawley大鼠给予单次口服10mg/Kg剂量的研究药物。化合物以在PEG 400/2%维生素E生育酚聚乙二醇琥珀酸酯(维生素E-TPGS)中的溶液的形式用管饲法施用。服用后7小时将动物处死，取出血浆和肝样品。这些样品用鉴定合格的研究型LC-MS/MS方法分析，以便确定在服药7小时后化合物在肝中的浓度和肝/血浆比。得到的结果总结在表3中。发现口服研究化合物7小时后Sprague-Dawley大鼠的肝浓度高，并且所研究的化合物显示出很高的肝/血浆比。

表3

化合物编号	肝浓度	肝/血浆比
			10	1717ng/g	64
15	1524ng/g	99

Claims (11)

1.式(I)化合物，

以及其药学可接受盐，其中：

R₁选自氢，卤素和C_1-4烷氧基；

R₂选自C_1-4烷基和C_3-6环烷基；

R₄是任选被卤素取代的C_3-7环烷基；

n是1或2；

Y选自以下基团：

a是2、3、4或5；

各个b独立地是1或2；

R₃和R₃’独立地选自氢，C_1-6烷基和C_3-6环烷基。

2.权利要求1的化合物，其中Y选自

。

3.权利要求1或权利要求2的化合物，其中R₁是氢或甲氧基或氟。

4.权利要求1或2的化合物，其中R₂选自甲基、乙基、异丙基和环丙基。

5.权利要求1或2的化合物，其中R₄选自环己基和2-氟环己基。

6.权利要求1或2的化合物，其中n是1。

7.权利要求1或2权利要求的化合物，其选自

以及其药学可接受盐。

8.药物组合物，其中含有载体和作为活性成分的抗病毒有效量的权利要求1至7中任一项的化合物。

9.权利要求8的药物组合物，其中还含有至少一种其它的抗HCV化合物。

10.权利要求8或权利要求9的药物组合物，其中还含有至少一种抗HIV化合物。

11.权利要求1至7中任一项的化合物在制造用于抑制HCV复制的药物方面的应用。