CN102119921A

CN102119921A - 猪用泰万菌素注射液及其制备方法

Info

Publication number: CN102119921A
Application number: CN 201110009247
Authority: CN
Inventors: 张卫元; 操继跃; 肖飞; 陈翠兰
Original assignee: WUHAN HVSEN BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Current assignee: WUHAN HVSEN BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority date: 2011-01-17
Filing date: 2011-01-17
Publication date: 2011-07-13

Abstract

本发明涉及猪用泰万菌素注射液，每100毫升注射液含有20克酒石酸乙酰异戊酰基泰乐菌素、20～35克丙二醇、10～15克N，N-二甲酰基乙酰胺、2～4克苯甲醇、0.1～1.0克二叔丁基对甲酚和余量的三乙酸甘油酯。其制备方法，包括以下步骤：将三乙酸甘油酯、丙二醇、苯甲醇、N，N-二甲基乙酰胺加到一起混合均匀，得到油相；在油相中添加抗氧剂搅拌直至所加的颗粒溶解；加入泰万菌素搅拌让其溶解。本发明采用油性溶剂作为溶媒，将药物溶解在油性溶媒中，利用油性溶媒肌内注射后缓慢消除的特点，延长药物在动物体内的消除半衰期。

Description

猪用泰万菌素注射液及其制备方法

技术领域

本发明属于动物药品领域，具体涉及到动物专用的大环内酯类抗菌药泰万菌素的注射液及其制备方法。

背景技术

泰万菌素（其酒石酸盐的商品名为AIVLOSIN），是由英国伊科动物保健有限公司商品化的全新大环内酯类抗生素.其化学名称是酒石酸乙酰异戊酰基泰乐菌素( Acetylisovaleryl Tylosin Tartrate)。是由泰乐菌素A经化学改造而生成的衍生物。主要用于治疗猪的增生性肠炎（PPE）、痢疾、支原体性肺炎（猪喘气病）以及鸡的支原体病、产气荚膜芽孢杆菌病、鼻气管鸟疫杆菌。

目前市场上出售的泰万菌素制剂仅有预混剂和饮水剂。然而由于口服泰万菌素在动物体内的生物半衰期短，所以给临床带来了不便。因此，本发明为兽医临床提供了一种能够延长泰万菌素在动物体内消除半衰期的油性注射液，从而为兽医临床用药提供了便捷。

发明内容

本发明的目的是提供一种泰万菌素注射液及其制备方法，将泰万菌素溶解在油性溶媒中，利用油性注射液肌内注射后吸收缓慢以达到延长药物在体内的消除半衰期的作用。

本发明的技术方案是：猪用泰万菌素注射液，每100毫升注射液含有20克酒石酸乙酰异戊酰基泰乐菌素、20～35克丙二醇、10～15克N，N-二甲酰基乙酰胺、2～4克苯甲醇、0.1～1.0克二叔丁基对甲酚和余量的三乙酸甘油酯。

本发明的泰万菌素注射液的制备方法，包括以下步骤：

（1）配制油相：将三乙酸甘油酯、丙二醇、苯甲醇、N，N-二甲基乙酰胺加到一起混合均匀，得到油相；

（2）在油相中添加抗氧剂搅拌直至所加的颗粒溶解；

（3）加入酒石酸乙酰异戊酰基泰乐菌素搅拌让其溶解。

步骤（2）、（3）所述的搅拌条件为400～800 r/min，搅拌时间为20～40 min。

本发明采用油性溶剂作为溶媒，将药物溶解在油性溶媒中，利用油性溶媒肌内注射后缓慢消除的特点，延长药物在动物体内的消除半衰期。

申请人发现本发明中通过添加N，N-二甲基乙酰胺发现可使油性溶媒以及其它的辅料很好的互溶，不会产生分层的现象（见附图2和3）。申请人还发现丙二醇不仅能够起到助溶的作用，还可保证油与体液在注射部位能够很好的融合，添加的苯甲醇能够起到局部麻醉和防腐的作用。本发明制备工艺操作简单，对操作设备、条件要求低。得到淡黄透明的油状注射液，对猪肌内注射该注射液后可延长药物在体内的有效作用时间。

附图说明

图1为本发明猪肌内注射泰万菌素注射液后血浆中的药物浓度-时间曲线。

图2为本发明实施例1制得的注射液外观图。

图3为本发明实施例2制得的注射液外观图。

图4为本发明比较例制得的注射液外观图。

具体实施方式

本发明提出的泰万菌素注射液的制备方法，具体步骤如下：取丙二醇、苯甲醇、N-N二甲基乙酰胺与三乙酸甘油酯混合均匀后，加入2,6-二叔丁基对甲酚让其充分溶解，加入20 g泰万菌素搅拌30 min，溶解完全后用三乙酸甘油酯定容至100 mL。加入二氧化硅抽滤，即得淡黄澄明的泰万菌素注射液。

下面结合具体实施例进一步详细说明本发明。

实施例1

⑴量取三乙酸甘油酯40 mL于250 mL烧杯中，再量取30 mL丙二醇，2 mL苯甲醇，11 mL N，N-二甲酰基乙酰胺置于磁力搅拌器上混合均匀；

⑵加入0.3 g 2,6-二叔丁基对甲酚，让其充分溶解；

⑶称取20 g泰万菌素加入烧杯中，于600 r/min搅拌40 min。

⑷用三乙酸甘油酯定容至100 mL，抽滤即得泰万菌素注射液。

注射液的理化性质稳定，通过微生物测定其效价结果为96.35%。油性溶媒以及其它的辅料和泰万菌素很好的互溶，无分层的现象（参见图2）。对该例制得的样分装成三批，分别存放至4℃冰箱、常温以及40℃烘箱中考察发现注射液的澄明度，色泽均较稳定，而不加丙二醇的注射剂在上述3种条件下考查时药物很容易析出。用该注射剂给猪肌内注射后，局部注射部位无明显的红斑、红肿现象。试验数据见表1。

表1 10头猪肌内注射部位的特征

实施例2

⑴量取三乙酸甘油酯50 mL于250 mL烧杯中，再量取20 mL丙二醇，2 mL苯甲醇，11mL N，N-二甲酰基乙酰胺置于磁力搅拌器上混合均匀；

⑵加入0.5 g 2,6-二叔丁基对甲酚，让其充分溶解；

⑶称取20 g泰万菌素加入烧杯中，于600 r/min搅拌30 min。

⑷用三乙酸甘油酯定容至100 mL，抽滤即得泰万菌素注射液。

注射液的理化性质稳定，通过微生物测定其效价结果为98.68%。油性溶媒以及其它的辅料和泰万菌素很好的互溶，无分层的现象（参见图3）。

本试验制得的泰万菌素注射液通过常温试验和加速试验，其含量结果为90%～110%，满足注射液的质量标准要求。在考察过程中无析出，澄明度良好。对该例制得的样分装成三批，分别存放至4℃冰箱、常温以及40℃烘箱中考察发现注射液的澄明度，色泽均较稳定，而不加丙二醇的注射剂在上述3种条件下考查时药物很容易析出。用该注射剂给猪肌内注射后，局部注射部位无明显的红斑、红肿现象。试验数据见表2。

表2 5头猪肌内注射部位的特征

比较例

⑴量取三乙酸甘油酯50 mL于250 mL烧杯中，再量取20 mL丙二醇，2 mL苯甲醇置于磁力搅拌器上混合均匀；

⑵加入0.5 g 2,6-二叔丁基对甲酚，让其充分溶解；

⑶称取20 g泰万菌素注射液加入烧杯中，于600 r/min搅拌30 min。

⑷用三乙酸甘油酯定容至100 mL，抽滤即得泰万菌素注射液。

油性溶媒以及其它的辅料和泰万菌素互溶较差，有分层现象（参见图4）。

泰万菌素注射液在猪体内的药动学研究

一、实验材料

1．主要试剂和药品

20%（g/ml）泰万菌素注射液（按本发明的技术方案制得）；其它试剂均符合试验要求。

2．流动相配制

流动相：乙腈:0.15 mol/L乙酸铵缓冲液=49：51，用0.22 μm滤膜过滤，脱气处理备用。

3．主要仪器设备

安捷伦1100型高效液相色谱仪美国Agilent公司

TGL-16G台式离心机上海安亭科技仪器厂

KQ-100B超声波清洗机昆山市超声仪器有限公司

WH-2型微型旋涡混合仪上海沪西分析仪器厂

4．实验动物

长白猪，体重8.5～10.0 kg，共5头，笼养，自由采食饮水，饲喂不含抗菌药物的全价日粮，试验前饲养5 d。

二、实验方法

1．给药

以20 mg/kg于耳后肌内注射泰万菌素注射液。

2．样品采集

给药后按以下时间点前腔静脉采血：0、0.083、0.167、0.25、0.5、0.75、1、2、3、4、6、8、12、24、48、60 h，采血2 mL左右，置于已加肝素钠的聚丙烯离心管中，以3000 r/min离心10 min，取上清液于﹣20℃保存待测。

3．血浆样品处理

先将冷冻保存的血浆置于室温下自然解冻，摇匀后精密移取600 μL置于3 mL离心管中，加入3 mL乙腈作为蛋白沉淀剂，漩涡混匀1 min，超声10 min，然后以10000 r/min离心10 min，取上清液于50℃水浴N₂流吹干，150 μL流动相溶解，再加400 μL正己烷去脂，漩涡振荡2 min，10000 r/min高速离心10 min，取上清液50 μL进样分析。

4．标准曲线的绘制

取7支具塞离心管，依次加入空白血浆0.6 mL，然后分别加入60 μL标准工作液，便得到药物浓度梯度依次为5、2、1、0.5、0.2、0.1、0.05 μg/mL的血浆样品。按照血浆样品处理方法处理后，进样分析，以测得的泰万菌素峰面积(A)为横坐标，以药物在样品中的质量浓度(C)为纵坐标建立标准曲线，标准曲线的回归方程为y=0.0066x-0.0053，相关系数r为0.9998。

5．回收率和精密度试验

分别以0.05、0.50和5.00 μg/mL的3种浓度的药物血浆样品作为考察对象，按血浆样品方法处理并进行HPLC检测，每个浓度制备3份样品以测定日内变异系数，连续测定3 d以测定日间变异系数。泰万菌素在血浆中的平均回收率大于80%，变异系数小，说明本方法可用于血浆中样品测定。高、中、低3个浓度（0.05、0.50和5.00 μg/mL）的日内变异系数分别为5.23%、2.67%和2.97%，日间变异系数分别是5.26%、4.35%和6.12%。结果表明本方法可用于药代动力学试验。

6．色谱条件

色谱柱：Agilent TC-C18(5 μm，4.6×250 mm，I.D)，保护柱为Agilent TC-C₁₈(5 μm，4.6×12.5 mm，I.D)

检测器：紫外检测器；检测波长：289 nm

流动相：乙腈：0.15 mol/L乙酸铵缓冲液=49：51

流速：1 mL/min；柱温：40℃；进样量：50 μL

7．数据处理

所得药时数据以3P97药物动力学程序软件在微机上处理，进行优度选择和房室模型拟合，计算出药动学参数；药时曲线图采用Excel软件绘制。

三、实验结果

1．血浆中药-时曲线

猪肌内注射泰万菌素注射液后血浆中的药物浓度-时间曲线见图1。从图1曲线可以看出药物在猪体内呈现一级吸收二室开放模型。

2．药物动力学数据分析

给猪肌内注射泰万菌素注射液后，药物动力学参数见表3。

表3 猪肌内注射泰万菌素注射液的药动学参数

由上述试验结果可知：消除半衰期（12.62±0.8 h）大于分布相半衰期（1.22±0.18 h），表明药物在体内消除缓慢。药时曲线下面积（AUC）为75.63±4.66 (μg/mL)h，说明泰万菌素在猪体内的血管外组织分布广泛。最大血药浓度（C_max）为8.33 μg/mL，达峰时间（T_max）为0.66±0.07 h，表明泰万菌素在猪体内分布快且持效时间长。试验结果表明，泰万菌素注射液的缓释效果较好。

Claims

1.猪用泰万菌素注射液，每100毫升注射液含有20克酒石酸乙酰异戊酰基泰乐菌素、20～35克丙二醇、10～15克N-N二甲酰基乙酰胺、2～4克苯甲醇、0.1～1.0克二叔丁基对甲酚和余量的三乙酸甘油酯。

2.权利要求1所述猪用泰万菌素注射液的制备方法，包括以下步骤：（1）将三乙酸甘油酯、丙二醇、苯甲醇、N-N二甲基乙酰胺加到一起混合均匀，得到油相；（2）在油相中添加抗氧剂2,6-二叔丁基对甲酚搅拌直至所加的颗粒溶解；（3）加入酒石酸乙酰异戊酰基泰乐菌素搅拌使其溶解即得猪用泰万菌素注射液。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）和（3）所述的搅拌条件分别为400～800 r/min；搅拌时间20～ 40min。