CN102018669B - 长效盐酸头孢噻呋注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及长效盐酸头孢噻呋注射液，由下述方法制得：将盐酸头孢噻呋原料药加入复合溶媒中搅拌，充分混匀得混悬液；将助悬剂加入注射剂溶媒中并在80℃～90℃下溶解得溶解液；将溶解液冷却至室温后加入到混悬液中，搅拌均匀得混合液；再加入抑菌剂于混合液中，加入剩余的注射级溶媒定至全量，搅拌混匀；然后过高速剪切分散机，再过胶体磨，灭菌，制得长效盐酸头孢噻呋注射液。本发明制备工艺操作简单，得到的混悬注射液均匀、重分散性好、流动性好、沉降慢。溶解度和稳定性好，猪肌内注射该制剂后消除半衰期长，可延长药物在体内的有效作用时间，减少用药次数。

Description

长效盐酸头孢噻呋注射液及其制备方法

技术领域

本发明属于动物药品领域，具体涉及一种长效盐酸头孢噻呋混悬注射液及其制备方法。

背景技术

头孢噻呋具有药效持久的特点，它在动物体内可与蛋白质进行可逆性结合，形成杀菌力库存，其抗菌谱广，对各种革兰氏阴性菌（如大肠杆菌、沙门氏菌、绿脓杆菌）及革兰氏阳性菌（如葡萄球菌、链球菌）均有显著效力。头孢噻呋分子结构稳定，不被β-内酰胺酶破坏，因此不易产生抗药性或交叉抗药性，被广泛应用于兽药领域。

现国内外研究的头孢噻呋剂型有注射用头孢噻呋钠粉针剂、头孢噻呋钠脂质体等剂型，这些剂型的缺点是作用时间短，其用药方法基本均为每天注射一次，连用3～5天，为减少因头孢噻呋频繁注射给药造成的养殖场人力财力的浪费，并尽量避免多次给药引起的动物应激反应，因此本发明为我国养殖业提供一种给药方便的头孢噻呋长效制剂，为临床用药提供便利。

发明内容

本发明的目的是提供一种长效盐酸头孢噻呋注射液及其制备方法，将盐酸头孢噻呋分散于特制的复合溶媒中制成的一类长效制剂，所得药物进入体内后缓慢吸收和释放，使血液中药物峰浓度降低并延长有效血药浓度的持续时间，从而达到提高疗效，减少剂量，延长药效（药物逐渐被吸收），降低副作用的目的。同时还可减少用药次数，为规模化养殖户带来很大的便利。

本发明的技术方案是：长效盐酸头孢噻呋注射液，由下述方法制得。

长效盐酸头孢噻呋注射液的制备方法，包括以下步骤：

（1）将盐酸头孢噻呋原料药加入复合溶媒中搅拌，充分混匀得混悬液；

（2）将助悬剂加入注射剂溶媒中并在80℃～90℃下溶解得溶解液；

（3）将步骤（2）的溶解液冷却至室温后加入到步骤（1）混悬液中，搅拌均匀得混合液；

（4）再加入抑菌剂于步骤（3）的混合液中，加入剩余的注射级溶媒定至全量，搅拌混匀；然后过高速剪切分散机，再过胶体磨，灭菌，制得长效盐酸头孢噻呋注射液；

所述盐酸头孢噻呋原料药的加入量为注射液总体积的5%～10%（g/ml），复合溶媒为注射级溶媒与聚乙二醇或注射级溶媒与聚乙二醇和司盘的混合液，其中配置成复合溶媒中注射级溶媒的用量为注射液总体积的20%～50%。当复合溶媒为注射级溶媒与聚乙二醇的混合液时，聚乙二醇的加入量为注射液总体积的4%～8%（v/v）；当复合溶媒为注射级溶媒与聚乙二醇和司盘的混合液，聚乙二醇和司盘混合液的加入量为注射液总体积的4%～8%（v/v），聚乙二醇和司盘的体积比为3:2～5:2。

所述注射级溶媒为三乙酸甘油酯、大豆油或橄榄油（优选三乙酸甘油酯）。

所述混悬注射液中助悬剂为氢化蓖麻油和卵磷脂复合物，氢化蓖麻油和卵磷脂的混合比例（g/g）为2:3～2:5，助悬剂的加入量为注射液总体积的0.1%～0.5%（g/ml）。所述抑菌剂为三氯叔丁醇、苯甲醇或硫柳汞（优选三氯叔丁醇），用量为注射液总体积的0.1%～0.5%（g/ml）。

所述高速剪切分散机的速度为1200～2000r/min，过高速剪切分散机的时间为15～60min，过胶体磨2～5h，所述灭菌是通过1～6KGY辐照灭菌。

本发明将盐酸头孢噻呋直接分散于复合溶媒中制成的一类长效混悬液制剂，通过高速剪切分散机和胶体磨分别处理后而得的一种混悬液，肌内注射后能够缓慢释放，以达到延长药物在体内的消除半衰期的作用。

本发明中加入聚乙二醇可以增加注射剂溶媒对药物的承载力，提高了药物的混悬附着效果，提高了混悬液的沉降比和重分散性；另外本发明将聚乙二醇与司盘合用，可进一步提高混悬液的稳定性和流动性。

本发明通过制备一个复合溶媒提高了混悬液的稳定性和重分散性，通过高速剪切分散机和胶体磨处理能将盐酸头孢噻呋混悬液注射液的粒径控制在8～10μm，提高了混悬液的流动性，解决了以往很多混悬液制剂挂壁的问题；另外本发明将成品通过辐照灭菌避免了头孢噻呋对热敏感的问题并加入了一定的抑菌剂进一步提高了制剂的稳定性。本发明制备工艺操作简单，减少了为了达到混悬液所需粒径大小而对制剂中的主要原粉或辅料进行研磨或超微粉碎等繁琐操作。申请人意外发现，通过采用复合溶媒可提高本发明药物的溶解度和稳定性；通过高速剪切分散机和胶体磨处理，对制备设备、条件要求低，得到的混悬注射液均匀、重分散性好、流动性好、沉降慢等特点，猪肌内注射该制剂后消除半衰期长，可延长药物在体内的有效作用时间，减少用药次数。

附图说明

图1～4分别为空白样品色谱图、盐酸头孢噻呋对照品色谱图、实施例3制得的盐酸头孢噻呋混悬注射液样品及空白中添加药物色谱图；

图5为实施例3除不加药物的空白制剂添加药物浓度5～150μg/mL范围内标准曲线图；

图6为实施例3制得的长效盐酸头孢噻呋注射液粒径40倍光学显微镜图；

图7为实施例3制得的长效盐酸头孢噻呋注射液和美国辉瑞公司生产的盐酸头孢噻呋注射液对猪机内注射后血浆中头孢噻呋的浓度-时间曲线。

具体实施方式

将5～10%（g/ml）盐酸头孢噻呋加入到三乙酸甘油酯或大豆油、橄榄油等注射级溶媒中的一种或与聚乙二醇或与聚乙二醇和司盘的复合溶媒中，充分混匀，得到含药混悬液，并不停地搅拌；再将0.1～0.5%（g/ml）复合助悬剂氢化蓖麻油：卵磷脂以2:3～2:5（g/g）的比例混合而成的复合物加入到80℃～90℃的注射级溶媒中溶解，待冷却至室温加入正在搅拌的混悬液中，搅拌均匀，同时加入0.1～0.5%（g/ml）抑菌剂三氯叔丁醇、苯甲醇或硫柳汞其中的一种，加入剩余的注射级溶媒定至全量，搅拌混匀，过高速剪切分散机，最后过胶体磨，灭菌，制得乳白色或淡黄色混悬液。

上述复合溶媒为注射剂溶媒三乙酸甘油酯或大豆油、橄榄油等注射级溶媒中的一种与聚乙二醇或体积比为3:2～5:2聚乙二醇和司盘的混合物，用量为混悬注射液总体积的4%～8%（v/v），配制成复合溶媒中注射级溶媒的用量为注射液总体积的20%～50%。

（注：以上g/ml均表示加入物的质量（g）与所配置的盐酸头孢噻呋注射液总体积（ml数）的比值，以下类同）。

下面结合具体实施例进一步详细说明本发明。

实施例1

（1）将7.5g盐酸头孢噻呋加入40ml三乙酸甘油酯，磁力搅拌，充分混匀；

（2）将0.3g复合助悬剂（氢化蓖麻油：卵磷脂1:2 (g/g）混合物）加入到90℃的三乙酸甘油酯中溶解；

（3）将步骤（2）的溶解液待冷却至室温加入正在搅拌的步骤（1）混悬液中，搅拌均匀；

（4）再加入0.5g抑菌剂三氯叔丁醇于步骤（3）的混悬液中，用剩余的三乙酸甘油酯定至100ml，充分搅拌；

（5）搅拌混匀30min，过高速剪切分散机30min，转速为1200r/min，再过胶体磨4h，最后将样品60Co-γ射线3KGY辐照灭菌，制得乳白色或淡黄色混悬液。

混悬液性状为乳白色或淡黄色，粒径分布均匀，平均粒径为8.38μm，大于12μm的占0.14%，沉降体积比0.92，重分散性较好。稳定性考察：在条件为温度40士2℃，相对湿度为65士5%的条件下进行加速试验，三个月后，含量测定为投料量的97.46%。

实施例2

（1）将7.5g盐酸头孢噻呋加入40ml复合溶媒（36ml三乙酸甘油酯与4ml聚乙二醇200），磁力搅拌，充分混匀；

（2）将0.3g复合助悬剂（氢化蓖麻油：卵磷脂1:2 (g/g）混合物）加入到90℃的三乙酸甘油酯中溶解；

（3）将步骤（2）的溶解液待冷却至室温加入正在搅拌的步骤（1）混悬液中，搅拌均匀；

（4）再加入0.2g抑菌剂苯甲醇于步骤（3）的混悬液中，用剩余的三乙酸甘油酯定至100ml，充分搅拌；

（5）搅拌混匀30min，过高速剪切分散机30min，转速为1200r/min，再过胶体磨4h，最后将样品60Co-γ射线3KGY辐照灭菌，制得乳白色或淡黄色混悬液。

混悬液性状为乳白色或淡黄色，粒径分布均匀，平均粒径为8.19μm，大于12μm的占0.11%，沉降体积比0.98，重分散性好。稳定性考察：在条件为温度40士2℃，相对湿度为65士5%的条件下进行加速试验，三个月后，含量测定为投料量的99.32%。

实施例3

（1）将7.5g盐酸头孢噻呋加入40ml复合溶媒（36ml三乙酸甘油酯与4ml聚乙二醇200：司盘80按2:1（v/v）混合液），磁力搅拌，充分混匀；

（2）将0.3g复合助悬剂（氢化蓖麻油：卵磷脂1:2 (g/g）混合物）加入到90℃的三乙酸甘油酯中溶解；

（3）将步骤（2）的溶解液待冷却至室温加入正在搅拌的步骤（1）混悬液中，搅拌均匀；

（4）再加入0.5g抑菌剂苯甲醇于步骤（3）的混悬液中，用剩余的三乙酸甘油酯定至100ml，充分搅拌；

（5）搅拌混匀30min，过高速剪切分散机30min，转速为1200r/min，再过胶体磨4h，最后将样品60Co-γ射线3KGY辐照灭菌，制得乳白色或淡黄色混悬液。

混悬液性状为乳白色或淡黄色，粒径分布均匀（见图6），平均粒径为8.14μm，大于12μm的占0.1%，沉降体积比1.0，重分散性好。稳定性考察：在条件为温度40士2℃，相对湿度为65士5%的条件下进行加速试验，三个月后，含量测定为投料量的99.44%。

实施例4

（1）将7.5g盐酸头孢噻呋加入20ml大豆油，磁力搅拌，充分混匀；

（2）将0.5g复合助悬剂（氢化蓖麻油：卵磷脂1:2 (g/g）混合物）加入到90℃的三乙酸甘油酯中溶解；

（3）将步骤（2）的溶解液待冷却至室温加入正在搅拌的步骤（1）混悬液中，搅拌均匀；

（4）再加入0.5g抑菌剂三氯叔丁醇于步骤（3）的混悬液中，用剩余的大豆油定至100ml，充分搅拌；

（5）搅拌混匀30min，过高速剪切分散机30min，转速为1500r/min，再过胶体磨4h，最后将样品60Co-γ射线3KGY辐照灭菌，制得乳白色或淡黄色混悬液。

混悬液性状为乳白色或淡黄色，粒径分布均匀，平均粒径为8.26μm，大于12μm的占0.12%，沉降体积比0.94，重分散性较好。稳定性考察：在条件为温度40士2℃，相对湿度为65士5%的条件下进行加速试验，三个月后，含量测定为投料量的97.29%。

实施例5

（1）将7.5g盐酸头孢噻呋加入20ml复合溶媒（15ml大豆油与5ml聚乙二醇200），磁力搅拌，充分混匀；

（2）将0.5g复合助悬剂（氢化蓖麻油：卵磷脂1:2 (g/g）混合物）加入到90℃的三乙酸甘油酯中溶解；

（3）将步骤（2）的溶解液待冷却至室温加入正在搅拌的步骤（1）混悬液中，搅拌均匀；

（4）再加入0.5g抑菌剂苯甲醇于步骤（3）的混悬液中，用剩余的大豆油定至100ml，充分搅拌；

（5）搅拌混匀30min，过高速剪切分散机30min，转速为1500r/min，再过胶体磨4h，最后将样品60Co-γ射线3KGY辐照灭菌，制得乳白色或淡黄色混悬液。

混悬液性状为乳白色或淡黄色，粒径分布均匀，平均粒径为8.18μm，大于12μm的占0.11%，沉降体积比0.98，重分散性好。稳定性考察：在条件为温度40士2℃，相对湿度为65士5%的条件下进行加速试验，三个月后，含量测定为投料量的99.16%。

实施例6

（1）将7.5g盐酸头孢噻呋加入20ml复合溶媒（15ml大豆油与5ml聚乙二醇200：司盘80按2:1（v/v）混合液，磁力搅拌，充分混匀；

（2）将0.5g复合助悬剂（氢化蓖麻油：卵磷脂1:2 (g/g）混合物）加入到90℃的三乙酸甘油酯中溶解；

（3）将步骤（2）的溶解液待冷却至室温加入正在搅拌的步骤（1）混悬液中，搅拌均匀；

（4）再加入0.5g抑菌剂硫柳汞于步骤（3）的混悬液中，用剩余的大豆油定至100ml，充分搅拌；

（5）搅拌混匀30min，过高速剪切分散机30min，转速为2000r/min，再过胶体磨4h，最后将样品60Co-γ射线3KGY辐照灭菌，制得乳白色或淡黄色混悬液。

混悬液性状为乳白色或淡黄色，粒径分布均匀，平均粒径为8.16μm，大于12μm的占0.11%，沉降体积比0.98，重分散性好。稳定性考察：在条件为温度40士2℃，相对湿度为65士5%的条件下进行加速试验，三个月后，含量测定为投料量的99.25%。

实施例7

（1）将7.5g盐酸头孢噻呋加入50ml橄榄油，磁力搅拌，充分混匀；

（2）将0.1g复合助悬剂（氢化蓖麻油：卵磷脂1:2 (g/g）混合物）加入到90℃的三乙酸甘油酯中溶解；

（3）将步骤（2）的溶解液待冷却至室温加入正在搅拌的步骤（1）混悬液中，搅拌均匀；

（4）再加入0.5g抑菌剂三氯叔丁醇于步骤（3）的混悬液中，用剩余的三乙酸甘油酯定至100ml，充分搅拌；

（5）搅拌混匀30min，过高速剪切分散机30min，转速为2000r/min，再过胶体磨4h，最后将样品60Co-γ射线3KGY辐照灭菌，制得乳白色或淡黄色混悬液。

混悬液性状为乳白色或淡黄色，粒径分布均匀，平均粒径为8.28μm，大于12μm的占0.14%，沉降体积比0.95，重分散性较好。稳定性考察：在条件为温度40士2℃，相对湿度为65士5%的条件下进行加速试验，三个月后，含量测定为投料量的97.67%。

实施例8

（1）将7.5g盐酸头孢噻呋加入50ml复合溶媒（42ml橄榄油与8ml聚乙二醇200），磁力搅拌，充分混匀；

（2）将0.1g复合助悬剂（氢化蓖麻油：卵磷脂1:2 (g/g）混合物）加入到90℃的三乙酸甘油酯中溶解；

（3）将步骤（2）的溶解液待冷却至室温加入正在搅拌的步骤（1）混悬液中，搅拌均匀；

（4）再加入0.5g抑菌剂苯甲醇于步骤（3）的混悬液中，用剩余的橄榄油定至100ml，充分搅拌；

（5）搅拌混匀30min，过高速剪切分散机30min，转速为2000r/min，再过胶体磨4h，最后将样品60Co-γ射线3KGY辐照灭菌，制得乳白色或淡黄色混悬液。

混悬液性状为乳白色或淡黄色，粒径分布均匀，平均粒径为8.15μm，大于12μm的占0.11%，沉降体积比0.98，重分散性好。稳定性考察：在条件为温度40士2℃，相对湿度为65士5%的条件下进行加速试验，三个月后，含量测定为投料量的99.22%。

实施例9

（1）将7.5g盐酸头孢噻呋加入50ml复合溶媒（42ml橄榄油与8ml聚乙二醇200：司盘80按2:1（v/v）混合液，磁力搅拌，充分混匀；

（2）将0.1g复合助悬剂（氢化蓖麻油：卵磷脂1:2 (g/g）混合物）加入到90℃的三乙酸甘油酯中溶解；

（3）将步骤（2）的溶解液待冷却至室温加入正在搅拌的步骤（1）混悬液中，搅拌均匀；

（4）再加入0.1g抑菌剂硫柳汞于步骤（3）的混悬液中，用剩余的橄榄油定至100ml，充分搅拌；

（5）搅拌混匀30min，过高速剪切分散机30min，转速为2000r/min，再过胶体磨4h，最后将样品60Co-γ射线3KGY辐照灭菌，制得乳白色或淡黄色混悬液。

混悬液性状为乳白色或淡黄色，粒径分布均匀，平均粒径为8.14μm，大于12μm的占0.11%，沉降体积比0.99，重分散性好。稳定性考察：在条件为温度40士2℃，相对湿度为65士5%的条件下进行加速试验，三个月后，含量测定为投料量的99.31%。

以上实施例说明采用注射级溶媒三乙酸甘油酯、大豆油或橄榄油作为溶媒研制盐酸头孢噻呋注射液，其各项考察指标均能符合要求,但三乙酸甘油酯、大豆油或橄榄油中的一种与聚乙二醇或与聚乙二醇和司盘的混合物作为盐酸头孢噻呋注射液的复合溶媒时，所制备的混悬注射液的稳定性更好，加速试验三个月后含量测定为投料量的99%以上，与单独用三乙酸甘油酯、大豆油或橄榄油做溶媒时含量测定差异极显著（P＜0.01），且沉降体积比均达到0.98以上，粒径小于8.2μm。差异显著（P＜0.05）。该结果进一步说明聚乙二醇和司盘的加入，与注射级溶媒以适宜的比例混合作为盐酸头孢噻呋混悬注射液的复合溶媒能提高盐酸头孢噻呋注射液的稳定性。

盐酸头孢噻呋注射液含量测定方法学研究

1 试验材料

1.1 主要试剂

盐酸头孢噻呋标准品：白色或淡黄色粉末，纯度87.5%，源自于中国兽药监察所

长效盐酸头孢噻呋注射液：武汉回盛生物科技有限公司自制

 N一N二甲基甲酰胺 分析纯

四氢呋喃  色谱纯

甲醇      色谱纯

醋酸铵    分析纯

2.1.2主要仪器

KQ-3200E超声波清洗机(江苏昆山超声仪器)

XW-80A旋涡混合器(上海青浦沪西仪器厂)

电子天平 (北京赛多利斯天平有限公司)

TGL-16GB台式高速离心机(上海安亭科学仪器厂)

XMT-9017药物稳定性试验箱(重庆市永生实验仪器厂)

DHG-9070A电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)

1.2 试验方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱:  Agilent SB-C₁₈柱（150mm×4.6mm，5μm）

流动相：四氢呋喃：甲醇：四丁基氢氧化铵：0.5mol/L醋酸铵(含0.1%三乙胺，0.1%冰醋酸 (10:25:5:65)；

流速：1mL/min；柱温：35℃；紫外检测波长：254nm；进样量：20μL。

1.2.2 样品预处理

量取样品5 mL置25mL量瓶中，用N-N二甲基甲酰胺-正丁醇(1：1)溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL，加乙腈-水(1：1)10mL，正己烷5mL，振摇2分钟，离心，精密量取下层溶液1mL，再用乙腈-水(1：1)定容至10mL，摇匀，取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸头孢噻呋标准品适量，置10mL量瓶中，加二甲基甲酰胺-正丁醇(1：1)1mL，用乙腈-水(1：1)溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL，再用乙腈-水(1：1)定容至10mL，摇匀，取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。由于盐酸头孢噻呋混悬注射液粘稠，不易精密测定体积，所以另取盐酸头孢噻呋混悬注射液测定相对密度，将盐酸头孢噻呋混悬注射液重量换算成mL数，采用外标法计算盐酸头孢噻呋的含量。

1.2.3杂质干扰试验

按处方配比加入各辅料配置成空白混悬液(与盐酸头孢噻呋混悬液相比，仅不含盐酸头孢噻呋，其余成分相同)然后分别配置盐酸头孢噻呋空白混悬液和盐酸头孢噻呋混悬液，按样品预处理方法处理后进行HPLC测定。

2.2.4线性关系

精密称取盐酸头孢噻呋标准品适量于10mL容量瓶中，加入适量N-N二甲基甲酰胺-正丁醇(1：1)超声5min使之完全溶解，再用乙腈-水(1：1)定容至10mL，超声摇匀，精密量取1mL，再用乙腈-水(1：1)定容至10mL，得0.15mg/mL标准液，取标准液用流动相稀释成0.05、0.01、0.02、0.05、0.1、0.15mg/mL溶液，以乙腈-水作为空白，经0.45μm滤膜过滤，取20μL进行测定，记录色谱图。

1.2.5回收率测定

精密称取空白混悬液5mL于25mL容量瓶中，共取6份，再分别加入盐酸头孢噻呋标准品使含盐酸头孢噻呋浓度为5、50、150μg/mL，分别混匀，按样品处理方法处理，进行HPLC测定，根据药物色谱峰面积，从回归方程中算得盐酸头孢噻呋的浓度，计算测定值并换算为制得样品实测浓度。按下式计算回收率：

回收率=(制得样品实测浓度/理论浓度)×100%。

1.2.6精密度测定

分别准确量取混悬液适量，每批取样3份，共3批，按“样品预处理”方法处理，处理后再进行HPLC测定，计算批内及批间变异系数。

1.2.7样品测定

准确量取样品混悬液5mL，按“样品预处理”方法处理，取20μL进行HPLC测定，记录色谱峰面积。

2 试验结果

2.1色谱行为

空白样品色谱图、盐酸头孢噻呋（盐酸CEF）、对照品溶液色谱图、盐酸CEF混悬注射液样品及空白中添加药物色谱图分别见图1、2、3、4。

2.2 标准曲线

由行为图谱可知，样品中杂质分离良好，无明显干扰峰。在空白中添加浓度为5～150μg/mL范围内色谱峰面积与浓度呈线性相关。其线性方程为:Y=1.4245X-0.2373，r=0.9999，线性关系好，说明盐酸噻呋注射液在该方法下检测稳定性良好，见图5。

由样品色谱图可知，样品中杂质分离良好，无明显干扰峰。盐酸头孢噻呋在5～150μg/mL添加水平时，平均回收率为96.34%～98.62%，日间变异系数为2.9%～3.4%，日内变异系数为2.7%～3.2%，结果见表2-1。

表2-1 空白混悬液添加盐酸头孢噻呋的方法学考察结果（n=3）

长效盐酸头孢噻呋注射液在猪体内的药物动力学研究

1 试验材料

1.1仪器设备

Agilent1100高效液相色谱仪，美国Agilent公司；

JY2002型电子天平，上海市精密科学仪器有限公司；

BP211D型分析天平，德国Sartoraus公司；

KQ-100B型超声波清洗机，昆山市超声仪器有限公司；

TGL-16G台式离心机，上海安亭科技仪器厂；

YKH性液体快速混合器，江西医疗机械厂。

1.2药品与试剂

去呋喃甲酰基头孢噻呋标准品（98.0%），Sigma公司；

长效盐酸头孢噻呋注射液（7.5%），含量：103.25%，武汉回盛生物科技有限公司

生产，批号：20090608；

盐酸头孢噻呋混悬注射液（5%），美国辉瑞公司生产，批号：0A3YW；

二硫赤鲜醇，纯度>99%，美国ACROS生物公司；

碘乙酰胺，纯度>98%，美国ACROS生物公司；

甲醇：分析纯，国药集团化学试剂有限公司；

磷酸二氢钾：分析纯，国药集团化学试剂有限公司；

氯化钾：分析纯，国药集团化学试剂有限公司；

乙腈：分析纯，国药集团化学试剂有限公司；

四硼酸钠：分析纯，上海试一化学试剂有限公司；

氢氧化钾：分析纯，国药集团化学试剂有限公司；

三氟乙酸：色谱纯，美国Tedia公司。

1.3实验动物 

试验动物：健康大白×长白二元杂交猪12头，体重25±2kg，购于湖北建丰牧业有限公司革新猪场。

饲料：试验期间按常规饲养，自由饮水和采食，饲料为不含抗菌药物的全价日粮。

1.4 主要溶液配制

去呋喃甲酰基头孢噻呋标准贮备液(200μg/mL)：准确称取0.0204g去呋喃甲酰基头孢噻呋(DFC)标准品于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，在-20℃保存备用。

去呋喃甲酰基头孢噻呋标准工作液：分别移取适量的标准储备液添加于100 mL容量瓶中，用三蒸水稀释定容，配制成0.05、0.1、0.5、2、5、10、20μg/mL的标准工作液，4℃保存。

硼酸盐缓冲液(pH 9)：准确称取四硼酸钠19.00g，氯化钾3.70g，加水约700mL后用盐酸调节pH至9.0，定容至1000mL。

磷酸盐缓冲液(pH 7)：准确称取3.40g磷酸二氢钾，加水约700mL后用氢氧化钾调节pH至7.0，定容至1000mL。

提取液：称取0.04g二硫赤鲜醇，用硼酸盐缓冲液溶解并稀释至100 mL，现配现用。

碘乙酰胺溶液：称取1.40g碘乙酰胺，用磷酸盐缓冲液100 mL溶解，现配现用。

1.5色谱检测条件

流动相及紫外检测波长见表1-1。

表1-1  高效液相色谱法检测盐酸头孢噻呋流动相组成及检测波长

时间（min）	0.1%三氟乙酸溶液	乙腈
			0	100%	0
0-20	70%	30%
			20-25	100%	0

色谱柱：Sapphire  C18(4.6×250mm，5μm)

检测波长：254nm；流速：1 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：50μL。

1.6试验动物分组、给药及血样采集

1.6.1 实验动物分组和给药

将试验动物随机分成两组，每组6头，第一组肌内注射5%盐酸头孢噻呋混悬注射液给药组(辉瑞研制)，第二组肌内注射7.5%长效盐酸头孢噻呋注射剂(回盛研制)。肌内注射的给药方式均为颈部肌内一次性注射头孢噻呋注射液。给药前对每只猪进行称重，经过预试，根据药物在体内吸收、分布及消除规律确定采样时间点及肌内注射的间隔时间，以5mg/kg体重剂量颈部肌内注射5%盐酸头孢噻呋混悬注射液和长效盐酸头孢噻呋注射液。

1.6.2 血样采集

猪只仰卧保定，从前腔静脉采血，给药前每只猪分别采集一次空白血样，给药后于不同时间点分别对每只猪进行采血，其中，给药动物采血时间点为0.13、0.25、0.5、1、2、4、5、6、8、12、24、48、72、96、120、144、168h。每次采血量约5mL，采集完毕后立即移入加有抗凝剂的离心管中，1500r/min离心15min分离血浆，置于-20℃冰箱保存，待测定。

1.7血浆样品前处理

准确吸取血浆样品2mL，置于15mL具塞塑料离心管中，加入7mL血浆药物提取液，涡旋1min；50℃水浴15min，水浴时每隔3min涡旋10s。振荡涡旋后立即放入水浴中，20min后置于室温，待冷却至室温时加入碘乙酰胺1.5mL涡漩1~2min混匀，室温避光衍生2h，每隔10min涡漩混匀一次。衍生完毕后加入5%磷酸2.5mL调节pH值至2.5～3.0后，10000r/min离心20min，取上清液进行SPE净化。Bond Elut C18固相萃取小柱分别用甲醇3mL、水3mL活化，样品上柱，5%甲醇水溶液3mL淋洗，用真空固相萃取装置抽干后，甲醇3mL洗脱，收集洗脱液，35℃氮气吹干至0.2mL以下，用0.5mL三蒸水定容，9000r/min离心10min后取100μL进行HPLC检测。

1.8建立标准曲线

分别取浓度为0.05、0.1、0.5、2、5、10、20μg/mL的标准工作溶液各100μL进HPLC分析。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并求出回归方程和相关系数。

1.9方法学验证

1.9.1灵敏度(检测限和定量限的确定)

最低检测限：以仪器能测定的三倍信噪比(S/N)时的进样药物量为最低检测限，所对应的药物在生物样品中的浓度为其最低检测浓度。

最低定量限：以仪器能测定的十倍信噪比时的进样药物量为最低定量限。

1.9.2 回收率和变异系数的考察

将高、中、低三个浓度的DFC标准贮备液添加到空白猪血浆中，充分混匀，以获得DFC分别为5.0、1.0和0.05μg/mL的血浆，按血浆样品前处理方法进行处理，进行HPLC检测，每个浓度设置5份样品，1d内测定5次，以考察日内变异系数续重，5d内连复测定5次，每天1次，以考察日间变异系数，并考察方法的绝对回收率。

1.9.3 数据分析

使用Excel、3p97药动学软件等统计学及药物动力学软件对试验数据进行分析。

2 试验结果

2.1血浆中药-时数据

长效盐酸头孢噻呋注射液和辉瑞盐酸头孢噻呋注射液给药后血浆中头孢噻呋的浓度-时间曲线见附图7，从图中可知本发明的长效缓释制剂和辉瑞的盐酸头孢噻呋注射液相比具有较长的半衰期，有效血药浓度维持时间延长。

2.2  药物动力学数据分析

给猪分别肌内注射长效盐酸头孢噻呋注射液和辉瑞盐酸头孢噻呋注射液后，药物动力学参数见表1-2。见过房室模型分析，两种制剂其血药浓度-时间数据均符合一级吸收二室开放模型。

表2-2 两种制剂的药物动力学参数

Claims (7)

1.长效盐酸头孢噻呋注射液的制备方法，包括以下步骤：

（1）将盐酸头孢噻呋原料药加入复合溶媒中搅拌，混匀得混悬液；

（2）将助悬剂加入注射级溶媒中并在80℃～90℃下溶解得溶解液；

（3）将步骤（2）的溶解液冷却至室温后加入到步骤（1）混悬液中，搅拌均匀得混合液；

（4）加入抑菌剂于步骤（3）的混合液中，加入剩余的注射级溶媒定至全量，搅拌混匀；然后过高速剪切分散机，再过胶体磨，灭菌，制得长效盐酸头孢噻呋注射液；

所述盐酸头孢噻呋原料药的加入量为5-10g/100ml注射液，复合溶媒为注射级溶媒与聚乙二醇200的混合液或注射级溶媒与聚乙二醇200和司盘的混合液，其中当复合溶媒为注射级溶媒与聚乙二醇200的混合液时，聚乙二醇200的加入量为注射液总体积的4%～8%，当复合溶媒为注射级溶媒与聚乙二醇200和司盘的混合液，聚乙二醇200和司盘混合液的加入量为注射液总体积的4%～8%，聚乙二醇200和司盘的体积比为3:2～5:2，配置成复合溶媒中注射级溶媒的用量为注射液总体积的20%～50%；所述注射级溶媒为三乙酸甘油酯、大豆油或橄榄油。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：助悬剂的加入量为0.1～0.5g/100ml注射液。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是：助悬剂为氢化蓖麻油和卵磷脂的复合物，其中氢化蓖麻油和卵磷脂的重量比为2:3～2:5。

4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征是：抑菌剂的加入量为0.1～0.5g/100ml注射液。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征是：抑菌剂为三氯叔丁醇或苯甲醇。

6.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征是：所述高速剪切分散机的速度为1200～2000r/min，过高速剪切分散机的时间为15～60min，过胶体磨2～5h，所述灭菌是通过1～6KGY辐照灭菌。

7.由权利要求1或2所述的方法制备的长效盐酸头孢噻呋注射液。

Images