CN110412147A - 一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，四种注射用头孢噻呋钠产品在1日龄黄鸡体内的药代动力学特征，每种药物选用1日龄健康雏鸡，每只皮下注射0.1mg的头孢噻呋钠，以高效液相色谱法检测血浆中去呋喃甲酰基头孢噻呋(DFC)浓度，研究其在1日龄黄鸡体内的药代动力学，实现了我们对于头孢噻呋钠在1日龄黄鸡体内药代动力学的研究。

Description

一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法。

背景技术

头孢噻呋(ceftiofur)又名赛得福，是20世纪80年代问世的畜禽专用第三代头孢菌素类抗生素。1988年，美国食品与药品管理局(FDA)批准了头孢噻呋钠用于治疗牛呼吸道细菌性疾病。由于头孢噻呋具有抗菌谱广、抗菌活性强、对胃酸和β-内酰胺酶稳定性好、药效持久和残留少等特点，其在世界范围内得到广泛的认可和使用，北美、欧洲一些国家以及日本正式批准用于1日龄鸡、火鸡、肉牛、奶牛、羊、猪、马的呼吸道疾病的治疗。

头孢噻呋钠是头孢菌素类兽医临床专用抗生素，有文献报道了大动物、水禽、成年鸡的头孢噻呋钠药代动力学，有些专利明确了头孢噻呋钠复方制剂。CN201010225428.8头孢噻呋钠复方制剂中，涉及头孢噻呋钠复方制剂，特别涉及头孢噻呋钠复方制剂在制备治疗鸡和猪大肠杆菌或沙门氏菌感染的药物中的应用。其具体公开了一种头孢噻呋钠复方制剂的配方如下：按重量份数，头孢噻呋钠0.5-8份、磷霉素钠0.5-6份、舒巴坦钠1-3份、蒽诺沙星钠4-7份。上述配方在使用过程中可以可制成预混剂、饮水剂或注射液。

目前，该药对大动物、水禽的药代动力学研究较多，未见在小天龄黄鸡中的药代动力学的相关研究报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，用于研究头孢噻呋对黄鸡的药代动力学。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，包括如下步骤:

S1.选取若干1d龄黄鸡，向每只黄鸡注射头孢噻呋钠，根据不同时间点针对不同黄鸡采取心脏血，分离血浆置于低温备用；

S2.对S1中采取的心脏血进行色谱分析；

S3.心脏血样品处理，包括：

S31.取心脏血样品，加入二硫赤鲜醇溶液进行提取；取出提取液，静置后加入碘乙酰胺溶液，进行衍生处理，然后酸化，取上清液备用；

S32.将S31中的上清液进行萃取，取萃取液并用高效液相色谱外标法测定DCA含量；

S4.建立检测方法，包括：

S41.色谱专属性检测；取空白血浆，添加头孢噻呋标准工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定；

S42.建立标准曲线和计算线性范围；取头孢噻呋标准工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定，将去呋喃羰基头孢噻呋乙酰胺的色谱峰面积对应的药物浓度作线性回归，计算回归方程和相关系数；

S43.测定检测限与定量限；取空白血浆，添加头孢噻呋标准工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定，以最低检出浓度计算，信噪比S/N≥3时的样品浓度为检测限，信噪比S/N≥10时的样品浓度为定量限；

S44.测定回收率；取头孢噻呋标准工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定；取空白血浆，添加头孢噻呋标准工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定，以样品中DCA峰面积与标准溶液中的DCA峰面积之比，求得回收率；

S45.测定精密度；取空白血浆，添加头孢噻呋标准工作液，后按照S2、S3步骤进行处理和测定，上机检测，同一天内，重复测样5次，连续测定3天，计算日内和日间的变异系数；

S46.样品处理和数据分析；根据HPLC测得药物峰面积代入标准曲线，计算得到药物浓度，再根据药物浓度-时间数据，计算出药动学参数。

优选的，在所述S1中，选用265只1d龄黄鸡，且均为公鸡。

优选的，将所有鸡随机分为4组实验组和1组对照组，其中实验组每组65只，每只颈部皮下注射头孢噻呋钠0.1mg，分别于5min、15min、30min、45min、1h、2h、4h、8h、12h、24h、36h、48h和72h后采血，每个时间点随机取5只雏鸡每只心脏采血1mL，置于肝素化的离心管中，混匀，以3000r/min的转速离心10min，分离血浆置于-20℃备用；对照组注射等量生理盐水，采用同样方法采血和分离血浆。

优选的，在所述S2中，采用液相色谱柱进行色谱分析，所述液相色谱柱的检测波长为266nm，柱温为30℃，流速为1.0mL/min；流动相A液为三氟乙酸水溶液，B液为乙腈。

优选的，在所述S31中，取心脏血样品在室温下自然解冻，摇匀，量取0.4mL的心脏血样品置于10mL离心管中，加入1mL质量百分比为2％的DTE溶液，摇匀，放入恒温震荡水槽仪中在50℃下水浴20min；取出，静置至室温，加入0.4mL质量百分比为10％的碘乙酰胺溶液，摇匀，用锡纸包好后置于恒温震荡水槽仪中在30℃下水浴衍生30min，衍生后的混合液体加入80μL质量百分比为20％的磷酸酸化，加入1mL水混匀，4℃条件下，以10000r/min的转速离心10min，取上清液备用。

优选的，在所述S32中，采用MCX固相萃取柱预先依次用3mL色谱纯甲醇、3mL水活化，将所述上清液过萃取柱，保持流速1-2mL/min，再依次用3mL甲醇、3mL水淋洗，真空抽干4min，加入1mL乙酸铵-乙腈的混合洗脱液，所述乙酸铵-乙腈的体积比为85:15，所得洗脱液用0.45μm微孔滤膜过滤，取20μL过滤液进样，采用高效液相色谱外标法测定DCA含量。

优选的，在所述S41中，取0.35mL空白血浆，添加0.05mL浓度为10μg/mL的头孢噻呋工作液，使得样品中头孢噻呋的质量浓度为1.25μg/mL，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定；取0.4mL空白血浆，添加0.4mL浓度为1.25μg/mL的头孢噻呋工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定。

优选的，在所述S42中，分别量取0.4mL浓度分别为0.125μg/mL、0.5μg/mL、1.25μg/mL、2.5μg/mL和12.5μg/mL的头孢噻呋标准工作液，按照S2、S3步骤进行处理和测定，上机浓度对应为0.05μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL和5μg/mL，最后将去呋喃羰基头孢噻呋乙酰胺的色谱峰面积对应的药物浓度作线性回归，计算回归方程和相关系数。

优选的，在所述S43中，确量取0.35mL的空白血浆，添加0.05mL浓度分别为1μg/mL、1.6μg/mL、2μg/mL、3μg/mL、4μg/mL的头孢噻呋标准工作液，按照S2、S3步骤进行处理和测定，样品的对应上机浓度分别为0.05μg/mL，0.08μg/mL，0.1μg/mL，0.15μg/mL，0.2μg/mL。

优选的，在所述S44中，取0.4mL浓度分别为0.125μg/mL、1.25μg/mL和12.5μg/mL的头孢噻呋标准工作液，按照S2、S3步骤进行处理和测定，标准溶液衍生化后的质量浓度为低浓度(0.05μg/mL)、中浓度(0.5μg/mL)和高浓度(5μg/mL)，并对所述质量浓度样品设5个平行样，采用相同方法处理；量取0.35mL空白血浆，添加0.05mL浓度分别为1μg/mL、10μg/mL、100μg/mL的头孢噻呋标准工作液，使样品中头孢噻呋浓度为0.125μg/mL、1.25μg/mL和12.5μg/mL，按照S2、S3步骤进行处理和测定，上机分别对应低浓度(0.05μg/mL)、中浓度(0.5μg/mL)和高浓度(5μg/mL)，并对所述质量浓度样品设5个平行样，采用相同方法处理；以样品中DCA峰面积与标准溶液衍生化后上机测定的DCA峰面积之比，求得回收率。

本发明的有益效果是：

1.本发明填补了国内关于头孢噻呋应用在小天龄黄鸡的研究空白，实现了头孢噻呋在小天龄黄鸡中的药代动力学研究；

2.本发明研究了四种注射用头孢噻呋钠产品在1日龄黄鸡体内的药代动力学特征，在具体实施例中，每种药物选用1日龄健康雏鸡65只，每只皮下注射0.1mg的头孢噻呋钠，以高效液相色谱法检测血浆中去呋喃甲酰基头孢噻呋(DFC)浓度，研究其在1日龄黄鸡体内的药代动力学，实现了我们对于头孢噻呋钠在1日龄黄鸡体内药代动力学的研究。

附图说明

图1为空白血浆色谱图；

图2为标准溶液色谱图；

图3为空白血浆添加10μg/mL头孢噻呋标准工作液色谱图；

图4为四种禽注射用头孢噻呋钠产品的血药浓度-时间曲线。

具体实施方式

下面结合附图进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。

本实施例中的试剂与主要溶液配制

注射用头孢噻呋钠供试样品，规格均为1.0g；头孢噻呋标准品，纯度96％，购自德国Dr.Ehrenstorfer公司；乙腈、三氟乙酸为色谱纯；二硫赤鲜醇(DTE)，碘乙酰胺，四硼酸钠，乙酸铵，氯化钾，磷酸二氢钾，氢氧化钾，甲醇为国产分析纯；MCX固相萃取柱购自美国Waters公司；肝素钠购自北京奥博星生物技术有限责任公司。

浓度为头1mg/mL的孢噻呋标准储备液：准确称取头孢噻呋标准品约25mg于25ml棕色容量瓶中，用0.05mol/L的乙酸铵溶液溶解并稀释定容至刻度即可。现配现用。

0.05mol/L乙酸铵：精密称取0.38g乙酸铵，置于100mL容量瓶内，用双蒸水稀释并定容至刻度即可。

硼酸盐缓冲液(pH＝9):准备称取四硼酸钠19g，氯化钾3.7g，定容至1000mL即可。

磷酸盐缓冲液(pH＝7):准确称取3.4g磷酸二氢钾，加水约700mL后用氢氧化钾调节pH至7.0，定容至1000mL即可。

二硫赤鲜醇提取液：2％(w/v)，准确称取二硫赤鲜醇1.0g，加0.05mol/L硼酸盐缓冲液溶解并定容至50mL即可。现配现用

碘乙酰胺工作液：准确碘乙酰胺5.0g，加pH7.0的磷酸盐缓冲液溶解并定容至50mL，碘乙酰胺工作液需现配现用。

20％磷酸：13.88g浓磷酸在100mL纯化水中稀释，即得。

乙酸铵-乙腈洗脱液：85mL乙酸铵+15mL乙腈

实施例

一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，包括如下步骤:

S1.选取265只1d龄黄鸡，且均为公鸡,将所有鸡只随机分为4组实验组和1组对照组，其中实验组每组65只,并向每只黄鸡注射0.1mg头孢噻呋钠，分别于5min、15min、30min、45min、1h、2h、4h、8h、12h、24h、36h、48h和72h后采血，每个时间点随机取5只雏鸡每只心脏采血1mL，置于肝素化的离心管中，混匀，以3000r/min的转速离心10min，分离血浆置于-20℃备用。对照组5只，注射等量生理盐水，采用同样方法采血和分离血浆。

S2.对S1中采取的心脏血进行色谱分析；采用Eclipse XDB-C18(4.6×250mm，5μm)进行色谱分析；检测波长为266nm；柱温为30℃；流速为1.0mL/min；流动相A液为体积百分比为0.1％三氟乙酸水溶液，B液为乙腈，参照表1进行梯度洗脱。

表1.梯度洗脱步骤

S3.心脏血样品处理，包括：

S31.取心脏血样品在室温下自然解冻，摇匀，量取0.4mL的心脏血样品置于10mL离心管中，加入1mL质量百分比为2％的DTE溶液，摇匀，放入恒温震荡水槽仪中在50℃下水浴20min；取出，静置至室温，加入0.4mL质量百分比为10％的碘乙酰胺溶液，摇匀，用锡纸包好后置于恒温震荡水槽仪中在30℃下水浴衍生30min，衍生后的混合液体加入80μL质量百分比为20％的磷酸酸化，加入1mL水混匀，4℃条件下，以10000r/min的转速离心10min，取上清液备用；

S32.采用MCX固相萃取柱预先依次用3mL色谱纯甲醇、3mL水活化，将所述上清液过萃取柱，保持流速1-2mL/min，再依次用3mL甲醇、3mL水淋洗，真空抽干4min，加入1mL乙酸铵-乙腈,的混合洗脱液，所述乙酸铵-乙腈的体积比为85:15，所得洗脱液用0.45μm微孔滤膜过滤，取20μL过滤液进样，采用高效液相色谱外标法测定DCA含量；

S4.建立检测方法，包括：

S41.色谱专属性检测；取0.35mL空白血浆，添加0.05mL浓度为10μg/mL的头孢噻呋工作液，使得样品中头孢噻呋的质量浓度为1.25μg/mL，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定；取0.4mL空白血浆，添加0.4mL浓度为1.25μg/mL的头孢噻呋工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定；

S42.建立标准曲线和计算线性范围；分别量取0.4mL浓度分别为0.125μg/mL、0.5μg/mL、1.25μg/mL、2.5μg/mL和12.5μg/mL的头孢噻呋标准工作液，按照S2、S3步骤进行处理和测定，上机浓度对应为0.05μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL和5μg/mL，最后将去呋喃羰基头孢噻呋乙酰胺的色谱峰面积对应的药物浓度作线性回归，计算回归方程和相关系数；

S43.测定检测限与定量限；确量取0.35mL的空白血浆，添加0.05mL浓度分别为1μg/mL、1.6μg/mL、2μg/mL、3μg/mL、4μg/mL的头孢噻呋标准工作液，按照S2、S3步骤进行处理和测定，样品的对应上机浓度分别为0.05μg/mL，0.08μg/mL，0.1μg/mL，0.15μg/mL，0.2μg/mL；

S44.测定回收率；分别取0.4mL浓度为0.125μg/mL、1.25μg/mL和12.5μg/mL的头孢噻呋标准工作液，按照S2、S3步骤进行处理和测定，标准溶液衍生化后的质量浓度为低浓度(0.05μg/mL)、中浓度(0.5μg/mL)和高浓度(5μg/mL)，并对所述质量浓度样品设5个平行样，采用相同方法处理；量取0.35mL空白血浆，分别添加0.05mL浓度为1μg/mL、10μg/mL和100μg/mL的头孢噻呋标准工作液，使样品中头孢噻呋浓度为0.125μg/mL、1.25μg/mL和12.5μg/mL，按照S2、S3步骤进行处理和测，上机对应浓度为0.05μg/mL、0.5μg/mL和5μg/mL，并对所述质量浓度样品设5个平行样，采用相同方法处理；以样品中DCA峰面积与标准溶液衍生化后上机测定的DCA峰面积之比，求得回收率。

S45.测定精密度；取0.35mL空白血浆，添加0.05mL浓度为1μg/mL、10μg/mL和100μg/mL头孢噻呋标准工作液，使样品中头孢噻呋浓度为0.125μg/mL、1.25μg/mL和12.5μg/mL，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定，上机检测，分别对应上机浓度为低浓度(0.05μg/mL)、中浓度(0.5μg/mL)和高浓度(5μg/mL)，将该质量浓度设置三个平行样，采用相同方法处理，同一天内，重复测样5次，连续测定3天，计算日内和日间的变异系数；

S46.样品处理和数据分析；根据HPLC测得药物峰面积代入标准曲线，计算得到药物浓度，再根据药物浓度-时间数据，计算出药动学参数。而在计算药动学参数时，采用药动学软件WinNonlin5.2.1软件模拟拟合。

结果分析

色谱专属性分析

如图1-图3所示，色谱图基准线平稳度较好，样品中DCA与血浆中其它内源性杂质可以有效分离，药物峰与杂峰相互之间无干扰，DCA在血浆中的保留时间为11.6min，保留时间稳定。

标准曲线和线性范围

在0.05-2μg/mL范围时线性关系良好，回归方程为y＝19745x+483.5，相关系数R2＝0.9971，其中，y表示峰面积，x表示血浆中DCA浓度。该方法检测限为0.05μg/mL，定量限为0.15μg/mL，表明该方法灵敏度高，可以满足血浆中头孢噻呋检测需要。

回收率和变异系数

按上述处理方法，在0.05μg/mL、0.5μg/mL和5μg/mL共3个质量浓度下，头孢噻呋的回收率为101.33％-108.28％，批内变异系数为1.6％～5.12％，批间变异系数为4.55％-7.87％，批内和批间变异系数均低于10％，表明本方法回收率高且稳定性好。

药代动力学参数

采用药动学软件WinNonlin5.2.1的房室模型分析方法，计算得到的药物动力学参数，注射药物后的主要药代动力学参数见表2-表6，血药浓度-时间曲线见图4。

表2空白血浆的血药浓度

注：Kb为空白血浆；ND表示低于检测限，未测到血药浓度。

表3皮下注射0.1mg注射用头孢噻呋钠(A厂、B厂)A药和B药的血药浓度

表4皮下注射0.1mgC药和D药的血药浓度

注：Kb为空白血浆；“/”表示异常浓度，剔除；ND表示低于检测限，未测到血药浓度。

表5皮下注射头孢噻呋A、B、C、D药的血药浓度(n＝5)

表6皮下注射A药、B药、C药和D药后的药动学参数

本发明方法为1日龄的鸡心脏采血，不同的时间点的血浆从不同的鸡体内采集得到。总体上，血药浓度呈现一定的规律性，但存在较大的个体差异，整体上4种药物在12h后的血药浓度均已低于检测限。因此此次的药动学参数是通过将同一个药的同一时间点的血药浓度取得平均数再进行拟合统计。从上述数据可知，随机抽取五组鸡的空白血浆测定，未测到药物浓度。A组药物的达峰时间较快，达峰浓度较高，但消除速率大，消除半衰期最短，说明这个药的起效较快，药效维持时间短。B组药物的达峰时间较快，消除半衰期长，但达峰浓度相对较低，AUC也相对较低，说明该药起效较快，但相对生物利用度不高。C药物的达峰时间最快，达峰浓度较高，消除半衰期较长，但AUC不大。D组药物的达峰浓度较高，消除半衰期较长，AUC最大，达峰时间相对延后。

通过本发明，将头孢噻呋应用在小天龄黄鸡的研究空白，再通过设计药物消除检测方法，实现了头孢噻呋在小天龄黄鸡中的药代动力学研究。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：包括如下步骤:

S1.选取1d龄黄鸡，向每只黄鸡注射头孢噻呋钠，采取心脏血，分离血浆置于低温备用；

S2.对S1中采取的心脏血进行高效液相色谱分析；

S3.心脏血样品处理，包括：

S31.取心脏血样品，加入二硫赤鲜醇溶液进行提取；取出提取液，静置后加入碘乙酰胺溶液，进行衍生处理，然后酸化，取上清液备用；

S32.将S31中的上清液进行萃取，取萃取液并用高效液相色谱外标法测定DCA含量；

S4.建立检测方法，包括：

S41.色谱专属性检测；取空白血浆，添加头孢噻呋标准工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定；

S42.建立标准曲线和计算线性范围；取头孢噻呋标准工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定，将去呋喃羰基头孢噻呋乙酰胺的色谱峰面积对应的药物浓度作线性回归，计算回归方程和相关系数；

S43.测定检测限与定量限；取空白血浆，添加头孢噻呋标准工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定，以最低检出浓度计算，信噪比S/N≥3时的样品浓度为检测限，信噪比S/N≥10时的样品浓度为定量限；

S44.测定回收率；取头孢噻呋标准工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定；取空白血浆，添加头孢噻呋标准工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定，以样品中DCA峰面积与标准溶液中的DCA峰面积之比，求得回收率；

S45.测定精密度；取空白血浆，添加头孢噻呋标准工作液，后按照S2、S3步骤进行处理和测定，上机检测，同一天内，重复测样5次，连续测定3天，计算日内和日间的变异系数；

S46.样品处理和数据分析；根据HPLC测得药物峰面积代入标准曲线，计算得到药物浓度，再根据药物浓度-时间数据，计算出药动学参数。

2.根据权利要求1所述的一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：在所述S1中，选用黄鸡，且均为公鸡。

3.根据权利要求2所述的一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：将所有鸡随机分为实验组和对照组，每只颈部皮下注射头孢噻呋钠，分别于5min、15min、30min、45min、1h、2h、4h、8h、12h、24h、36h、48h和72h后采血，每个时间点随机取若干只雏鸡每只心脏采血，置于肝素化的离心管中，混匀，离心分离后置于低温备用；对照组若干只，注射等量生理盐水，采用同样方法采血和分离血浆。

4.根据权利要求1所述的一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：在所述S2中，对心脏血采用液相色谱柱进行色谱分析，所述液相色谱柱的检测波长为266nm，柱温为30℃，流速为1.0mL/min；流动相A液为三氟乙酸水溶液，B液为乙腈。

5.根据权利要求1所述的一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：在所述S31中，取心脏血样品在室温下自然解冻，摇匀，量取0.2-0.6mL的心脏血样品置于离心管中，加入0.6-1.3mL质量百分比为2％的DTE溶液，摇匀，放入恒温震荡水槽仪中在40-55℃下水浴n；取出，静置至室温，加入0.36-0.44mL质量百分比为10％的碘乙酰胺溶液，摇匀，用锡纸包好后置于恒温震荡水槽仪中在20-36℃下水浴衍生20-40min，衍生后的混合液体加入60-100μL质量百分比为20％的磷酸酸化，加入水混匀，2-6℃条件下，转速离心，取上清液备用。

6.根据权利要求5所述的一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：在所述S32中，采用MCX固相萃取柱预先依次用色谱纯甲醇、水活化，将所述上清液过萃取柱，保持流速1-2mL/min，再依次用甲醇、水淋洗，真空抽干，加入乙酸铵-乙腈的混合洗脱液，所述乙酸铵-乙腈的体积比为85:15，所得洗脱液用0.41-0.48μm微孔滤膜过滤，取过滤液进样，采用高效液相色谱外标法测定DCA含量。

7.根据权利要求1所述的一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：在所述S41中，取空白血浆，添加0.03-0.06mL浓度为10μg/mL的头孢噻呋工作液，使得样品中头孢噻呋的质量浓度为1.25μg/mL，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定；取空白血浆，添加0.2-0.5mL浓度为1.25μg/mL的头孢噻呋工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定。

8.根据权利要求1所述的一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：在所述S42中，分别量取0.2-0.45mL浓度分别为0.125μg/mL、0.5μg/mL、1.25μg/mL、2.5μg/mL和12.5μg/mL的头孢噻呋标准工作液，按照S2、S3步骤进行处理和测定，上机浓度对应为0.05μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL和5μg/mL，最后将去呋喃羰基头孢噻呋乙酰胺的色谱峰面积对应的药物浓度作线性回归，计算回归方程和相关系数。

9.根据权利要求1所述的一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：在所述S43中，取空白血浆，添加0.02-0.06mL浓度分别为1μg/mL、1.6μg/mL、2μg/mL、3μg/mL、4μg/mL的头孢噻呋标准工作液，按照S2、S3步骤进行处理和测定，样品的对应上机浓度分别为0.05μg/mL，0.08μg/mL，0.1μg/mL，0.15μg/mL，0.2μg/mL。

10.根据权利要求1所述的一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：在所述S44中，取0.2-0.6mL浓度为0.125μg/mL、1.25μg/mL和12.5μg/mL的头孢噻呋标准工作液，按照S2、S3步骤进行处理和测定，标准溶液衍生化后的0.05μg/mL、0.5μg/mL和5μg/mL，并对所述质量浓度样品设若干个平行样，采用相同方法处理；取空白血浆，添加0.02-0.06mL浓度分别为1μg/mL、10μg/mL和100μg/mL的头孢噻呋标准工作液，使样品中头孢噻呋浓度分别为0.125μg/mL、1.25μg/mL和12.5μg/mL，按照S2、S3步骤进行处理和测，上机对应浓度为0.05μg/mL、0.5μg/mL和5μg/mL并对所述质量浓度样品设3个平行样，采用相同方法处理；以样品中DCA峰面积与标准溶液衍生化后上机测定的DCA峰面积之比，求得回收率。