CN102105056B - 抗菌剂和抗菌方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种抗菌剂和抗菌方法，该抗菌剂对革兰氏阳性菌有效，特别是，即使将其添加在食品等中时也安全。所述抗菌剂含有由下述式(1)或式(2)表示的化合物中任一种化合物或这两种化合物作为有效成分，在唇形科植物提取物中含有所述化合物。该抗菌剂对葡萄球菌属、乳酸杆菌属、李斯特氏菌属、脂环酸芽孢杆菌属和杆菌属等的革兰氏阳性菌显示抗菌活性。

Description

抗菌剂和抗菌方法
技术领域
本发明涉及一种抗菌剂和抗菌方法，更详细地说，涉及含有在唇形科植物提取物中所含的特定化合物作为有效成分的抗菌剂和使用该抗菌剂的抗菌方法。
背景技术
最近的研究表明，由李斯特氏菌种(Listeria)、特别是单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)引起的人的李斯特氏菌病与各种食品、特别是软质奶酪、干酱、火腿、其他的预包装食用兽肉和鸡肉制品的摄取有关(例如，PHLS(PublicHealthLaboratoryService)食品链的16个公共卫生研究所的调查(参见非专利文献1))。并且，一般认为李斯特氏菌的主要的污染源是食品制造者。
在日本，作为食品病原菌的单核细胞增生性李斯特氏菌一年导致约70例死亡，这超过其他食品病原菌情况下的死亡数字的2倍。此外，在美国，在2000年的时候李斯特氏菌性食物中毒造成的死亡人数上升至约500名，其状况与沙门氏菌和肠出血性大肠杆菌O157所引起的受害量相匹敌。
另一方面，啤酒花酸和类似于啤酒花酸的酸一直以来被认作细菌抑制剂(参见专利文献1)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特表平8-502887号公报
非专利文献
非专利文献1：《ListeriaMonocytogenesinPrePackedReady-To-EatSlicedMeat》S.Velani和R.J.Gilbert，PHLSMicrobiologyDigest，7卷(1977)
发明内容
但是，已知，抗菌剂(特别是来源于天然物的抗菌剂)一般根据微生物的种类其抗菌活性不同，虽然现有的抗菌剂对沙门氏菌、病原性大肠杆菌等具有抗菌活性，但对李斯特氏菌属的细菌等革兰氏阳性菌有效的抗菌剂、特别是添加在食品等中也安全的来源于天然物的抗菌剂不太为人所知。
并且，作为来源于天然物的抗菌剂的啤酒花酸(特别是含有β-酸的啤酒花提取物)对李斯特氏菌的抗菌活性的效果也不充分。而且，啤酒花酸由于其本身具有特有的异味，所以不适合作为添加在食品中的抗菌剂。
即，本发明的目的是提供一种来源于天然物的抗菌剂，其对革兰氏阳性菌具有抗菌活性，并且异味小、即使将其添加在食品等中时也安全。
本发明人为了解决上述课题进行了深入研究，结果发现在唇形科植物提取物、例如迷迭香提取物中所含有的某种化合物对革兰氏阳性菌、例如属于李斯特氏菌属的细菌具有优异的抗菌活性，从而完成了本发明。
即，本发明被以下[1]～[13]所记载的方案所特定。
[1]一种抗菌剂，其特征在于，其含有唇形科植物提取物中所含有的、由下述式(1)或式(2)表示的任一种化合物或这两种化合物作为有效成分。
[2]如上述[1]所述的抗菌剂，其中，唇形科植物提取物是选自由迷迭香提取物、鼠尾草(セ一ジ)提取物、百里香提取物和牛至提取物组成的组中的至少一种提取物。
[3]一种抗菌剂，其特征在于，其含有由下述式(2)表示的化合物作为有效成分。
[4]如上述[1]～[3]中任一项所述的抗菌剂，其对属于革兰氏阳性菌的细菌显示抗菌活性。
[5]如上述[4]所述的抗菌剂，其中，属于革兰氏阳性菌的细菌是属于选自由葡萄球菌(Staphyrococcus)属、乳酸杆菌(Lactobacillus)属、李斯特氏菌(Listeria)属、脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus)属和杆菌(Bacillus)属组成的组中的任一属的细菌。
[6]如上述[4]或[5]所述的抗菌剂，其中，属于革兰氏阳性菌的细菌是属于选自由金黄色葡萄球菌(Staphyrococcusaureusu)、植物乳酸杆菌(Lactobacillusplantarum)、单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)、酸土环脂芽泡杆菌(Alicyclobacillusacidoterrestris)和枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)组成的组中的任一种的细菌。
[7]一种抗菌剂，其特征在于，其含有下述式(1)表示的化合物作为有效成分，并用于抗属于李斯特氏菌属的细菌的抗菌用途。
[8]一种抗菌剂，其特征在于，其含有50ppm以上的由下述式(1)或式(2)表示的化合物的至少任一种化合物。
[9]如上述[8]所述的抗菌剂，其中，使由式(1)或式(2)表示的化合物溶解或分散在水、醇、食用油脂或它们的混合液中的任一物质中。
[10]如上述[8]或[9]所述的抗菌剂，其中，由式(1)或式(2)表示的化合物中的至少任一种化合物是从唇形科植物中提取的。
[11]如上述[1]～[10]中任一项所述的抗菌剂，其进一步含有啤酒花提取物。
[12]如上述[1]～[11]中任一项所述的抗菌剂，其用于食品的抗菌用途。
[13]一种抗菌方法，其特征在于，使上述[1]～[12]中任一项所述的抗菌剂含有在试样中。
通过使用本发明的抗菌剂，以相对于试样(对象物)非常少的添加量，对革兰氏阳性菌、特别是对属于李斯特氏菌属的细菌发挥充分的抗菌效果，革兰氏阳性菌有葡萄球菌属、乳酸杆菌属、李斯特氏菌属、脂环酸芽孢杆菌属和杆菌属等。本发明的抗菌剂能够广泛用于例如食品、饮料、医疗、医药品、环境安全等领域中，尤其作为食品防腐剂是有用的，本发明的抗菌方法尤其作为食品的保存方法是有用的。
具体实施方式
以下详细说明本发明，但该说明是本发明实施方式的一例(代表例)，只要不超出其要点，本发明不限于以下内容。
本发明的抗菌剂含有在唇形科植物提取物中所含有的特定化合物、即由上述式(1)和式(2)表示的化合物的任一种化合物或这两种化合物作为有效成分。由式(1)和式(2)表示的化合物都是在唇形科植物提取物中所含有的非水溶性的化合物。
在本发明中，对唇形科植物提取物没有限定，例如可以为选自由迷迭香提取物、鼠尾草提取物、百里香提取物和牛至提取物组成的组中的至少一种提取物，其中特别优选迷迭香提取物。
迷迭香、鼠尾草、百里香和牛至是同一目的植物，含有相同的成分。而且，这些植物是唇形科植物，只要是相同科的植物的提取物，则即使成分的比例改变，也含有大致同样的成分。
并且，对提取部位没有限定，可以为选自由叶、茎、花和根组成的组中的至少一种部位，可根据唇形科植物的种类、提取方法、提取条件等适宜选择提取部位。特别地，由叶或茎得到的提取物是适合的。
本发明中的唇形科植物提取物可以为任何物质，只要是上述唇形科植物提取物就可，但特别优选为非水溶性的提取物。更优选在25℃的100g水中的溶解度小于0.1g的非水溶性唇形科植物提取物，并优选非水溶性的迷迭香提取物。相对于25℃的100g水，在水中的溶解度优选为0.05g以下、进一步优选为0.01g以下。
唇形科植物提取物能够通过例如以下所示的方法制备，但并不仅限于以下方法。
首先，将上述唇形科植物、例如迷迭香的叶、茎干燥，使用己烷、乙酸乙酯、乙醇、乙醚、碱性水、中性的水、酸性水或它们的混合液进行提取。或者，也能够使用超临界状态或亚临界状态的流体、例如处于这些状态的二氧化碳进行提取。优选的提取方法是使用己烷、己烷/乙醇、乙醇、乙醇/水的提取方法。
通常，相对于1kg唇形科植物、例如1kg迷迭香，使用10倍量的上述溶剂，在5～80℃、优选在40～70℃搅拌提取，过滤后，得到滤液。进而，用同样的溶剂清洗残渣数次，得到滤液。合并这些滤液，用与滤液等量的水使沉淀物析出，添加滤液的1/10量的活性炭，搅拌1小时，在冷处保存一昼夜，过滤沉淀物。重复该操作数次，合并所得到的滤液，减压浓缩，得到非水溶性唇形科植物提取物。
此外，也可以不使用用于提取的液体进行提取，例如将唇形科植物加热并进行加压、压榨等，也能够得到唇形科植物提取物。
对构成本发明抗菌剂的上述式(1)或上述式(2)的化合物的提取方法没有限定，对上述唇形科植物提取物使用例如ODS(十八烷基硅烷键合硅胶)柱Φ30mm×120mm，使洗脱液CH3CN流过该柱后，用三氯甲烷/甲醇＝100/0或99/1(体积比)将残留在树脂中的成分推出，得到100％三氯甲烷流过时的粗分级分离提取物。进而，用三氯甲烷/甲醇＝99/1(体积比)清洗，由此能够得到粗分级分离提取物。利用该方法得到的成分为两种物质，一种是铁锈醇(上述式(1)的化合物；以下有时将其称为“类萜-1”)，另一种为天然物中的新颖的成分(上述式(2)的化合物；以下有时将其称为“类萜-2”)。
可利用NMR(1H-NMR)(1H-核磁共振)来进行这些化合物的鉴定。作为新颖成分的式(2)化合物的NMR数据和质谱数据如下。
在本发明中，作为由上述式(1)和式(2)表示的化合物，可以为提取物，也可以为从提取物中分离的化合物或合成化合物。换言之，只要本发明的抗菌剂具有上述式(1)或上述式(2)的化合物，就不限于来自唇形科植物的提取物。使用提取物时，可以直接将该提取物用作抗菌剂，但优选的是，将该提取物浓缩、分离和精制后使用。特别地，从唇形科植物提取物中提取上述式(1)或上述式(2)的化合物，只要再经由选自由浓缩、提取、析出、分离和精制组成的组中的至少一个工序得到上述式(1)或上述式(2)的化合物，就能够提高这些化合物的浓度，因此能够更显著地表现出作为本发明目的的抗菌性。
这两种化合物具有对革兰氏阳性菌、特别是属于李斯特氏菌属的细菌的抗菌作用，能够用作抗菌剂的有效成分。
从唇形科植物中已经分离和鉴定了各种萜类化合物。其中，鼠尾草酸的抗李斯特氏菌效果是已知的。但是，据本发明人所知，上述类萜-1和类萜-2为非水溶性的唇形科植物提取物的抗菌活性的有效成分、以及这些化合物对特别是属于李斯特氏菌属的细菌具有优异的抗菌活性，此乃本发明首次发现。进而，类萜-2作为天然物是新颖物质，其抗菌作用也是本发明首次发现的。
本发明的抗菌剂能够以溶液、分散液、粉末、造粒物等任何形态使用。因此，能够以含有由上述式(1)或上述式(2)表示的化合物的混合物来使用。本发明的抗菌剂为溶液或分散液时，考虑使用上的便利性，适宜使用将由上述式(1)或上述式(2)表示的化合物溶解或分散在水、乙醇等醇、食用的油脂类、或它们的混合液等中而得到的溶液或分散液。
当本发明的抗菌剂为混合物时，对由上述式(1)或上述式(2)表示的化合物的含量没有限定，但理想的是，这些化合物的至少任一种化合物含量通常为50ppm以上、优选为100ppm以上、更优选为200ppm以上。当混合物中的上述化合物的含量不足上述下限值时，有可能不能充分发挥作为抗菌剂的效果。对混合物中上述化合物的含量的上限没有限制，然而由于本发明的抗菌剂以微量发挥充分的效果，所以含量通常为5重量％以下、进而为2重量％以下、特别是1重量％以下也能够发挥充分的抗菌效果。
并且，在合用上述式(1)和上述式(2)的化合物时，对混合物中的这些化合物的总含量也没有限定，但理想的是总含量通常为50ppm以上、优选为100ppm以上、更优选为200ppm以上。当混合物中的上述化合物的总含量不足上述下限值时，可能不能充分发挥作为抗菌剂的效果。对混合物中的上述化合物的总含量的上限没有限制，然而由于本发明抗菌剂以微量发挥充分的效果，所以总含量通常为5重量％以下、进而为2重量％以下、特别是1重量％以下也能够发挥充分的抗菌效果。当混合物中的上述化合物的总含量超过上述上限时，有时其量已足够产生必要的抗菌效果。
如上所述，作为唇形科植物提取物，已经分离和鉴定了类萜等公知物质。对于这些各成分，采用与用于获得类萜-1和类萜-2的上述的提取和分级分离方法相同的方法，并通过调整提取溶剂和提取条件等能够得到各成分。作为唇形科植物提取物所含有的成分，可举出作为非水溶性的提取物的、7α-乙氧基迷迭香酚、鼠尾草苦内酯、鼠尾草酸(12-甲氧基-反式-鼠尾草酸)、迷迭香酚、表迷迭香酚、白桦脂醇、白桦脂酸等。也可以将这些成分中的1种或2种以上组合而合用在混合物中。作为与类萜-1和/或类萜-2合用的成分，如果使用选自由迷迭香酚、鼠尾草苦内酯、鼠尾草酸和白桦脂酸组成的组中的1种以上化合物，则有时能够增强本发明抗菌剂的抗菌作用。并且，也可以将水溶性的唇形科植物提取物合用在混合物中，例如可举出迷迭香酸等。
此外，必要时，在本发明的抗菌剂中可以添加乳化剂、增量剂等。
作为上述的乳化剂，可举出例如聚甘油月桂酸酯、聚甘油十四酸酯、聚甘油棕榈酸酯、聚甘油硬脂酸酯、聚甘油油酸酯、聚甘油二十二酸酯等聚甘油脂肪酸酯；蔗糖辛酸酯、蔗糖癸酸酯、蔗糖月桂酸酯、蔗糖十四酸酯、蔗糖棕榈酸酯、蔗糖硬脂酸酯、蔗糖油酸酯等蔗糖脂肪酸酯；聚山梨醇酯40、60、65、80等聚山梨醇酯类；卵磷脂分解物等，这些化合物也可以合用2种以上。对乳化剂的含量没有限定，但相对于类萜-1和类萜-2的总量，乳化剂的含量通常为0.001～1000重量％、优选为0.01～90重量％、更优选为0.1～50重量％、进一步优选为1～20重量％。
作为上述的增量剂，可举出例如糊精、α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、加工淀粉；以及蔗糖、乳糖等糖类；Oligotose、海藻糖、木糖醇、红藓醇等糖醇类；白桦脂酸、白桦脂酸酯衍生物等三萜烯类，这些化合物也可以合用2种以上。对增量剂的含量没有限定，但相对于类萜-1和类萜-2的总量，增量剂的含量通常为0.01～1000重量％、优选为0.1～90重量％、更优选为0.5～50重量％、进一步优选为1～20重量％。
在本发明中，也可以合用维生素C、生育酚、维生素P、绿原酸、咖啡豆提取物、向日葵提取物、葡萄籽提取物、α-葡萄糖基芦丁(αG-rutin)、儿茶素、绿茶提取物、迷迭香提取物等其他抗氧化剂。这些化合物也可以合用2种以上，对其含量没有限定，但相对于类萜-1和类萜-2的总量，其通常为0.01～1000重量％、优选为0.1～50重量％、更优选为0.5～30重量％、进一步优选为1～20重量％。
本发明的抗菌剂对微生物显示有效的抗菌活性，特别优选用于抗革兰氏阳性菌，例如，属于选自由葡萄球菌(Staphyrococcus)属、乳酸杆菌(Lactobacillus)属、李斯特氏菌(Listeria)属、脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus)属和杆菌(Bacillus)属组成的组中的任一属的细菌。
特别是，本发明的抗菌剂对属于选自由金黄色葡萄球菌(Staphyrococcusaureusu)、植物乳酸杆菌(Lactobacillusplantarum)、单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)、酸土环脂芽泡杆菌(Alicyclobacillusacidoterrestris)和枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)组成的组中的属种的细菌发挥显著的效果。
并且，含有由式(1)或式(2)表示的化合物作为有效成分的抗菌剂作为抗属于李斯特氏菌(Listeria)属的细菌、例如单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)的抗菌剂特别有效。
本发明的抗菌剂能够广泛用于例如食品、饮料、医疗、医药品、环境安全等领域中，特别是作为食品防腐剂是有用的。通过将本发明的抗菌剂添加在这些领域中的诸种试样中，能够表现出试样中的抗菌活性。需要说明的是，在本发明中，试样是指使本发明抗菌剂发挥作用的对象物。
如上所述，除了本发明的抗菌剂之外，从天然物提取的、对属于李斯特氏菌(Listeria)属的细菌具有高的抗菌活性、且不具有令人不快的异味的抗菌剂还没得到证实。
作为添加本发明抗菌剂的试样，微生物易于繁殖的食品是有效的，作为其具体例，可举出水产品、家畜肉、油脂加工品等。特别优选使用于易变质的水产品、家畜肉、油脂加工品以及长期保存的水产品、家畜肉、油脂加工品等。作为其具体例，有鲜鱼、干鱼(贝)、一夜风干鱼、甜干鱼、贝类、红鱼、甲壳类、鱼糜(すり身)、鱼糜制品(水産練り製品)、珍馐、鱼香肠、腌制品、紫菜、海藻食品、鸡肉、猪肉、牛肉、羊肉、香肠、火腿、以及对它们进行加工得到的制品等。并且，不仅是人的食用，还能够很好地适用于宠物食品和饲料。进而，不仅是家畜肉、水产品用途，还能够用作防止利用土壤生产的农产品(蔬菜、根菜、水果等)腐败的抗菌剂。
本发明的抗菌剂在试样中的添加浓度以上述式(1)和/或(2)表示的化合物中的任一者或这两者的总量计，通常为0.01～10000ppm、优选为0.1～5000ppm、进一步优选为1～1000ppm。
此外，本发明的抗菌剂通过与其他抗菌剂组合使用，能够用作抗菌活性更加优异的抗菌剂，所述其他抗菌剂例如有作为唇形科植物提取物已为人们所知的鼠尾草酸、作为啤酒花提取物的啤酒花酸、尼生素(尼生素A、尼生素Z)、聚赖氨酸、鱼精蛋白、溶菌酶等。
特别是将本发明的抗菌剂与啤酒花酸等啤酒花提取物合用时，降低了啤酒花酸所具有的特有异味，并且具有高的抗菌性，作为来源于天然物的抗菌剂是有用的。
需要说明的是，本发明的抗菌剂除用作食品的抗菌用途外，还能够很好地用作在食品操作环境等中所使用的杀菌剂。具体地说，也能够用作用于保持食品操作人员的手、衣服、烹调用具、烹调室等清洁的杀菌剂。在用于这种用途的情况下，优选以粉末、液态、喷雾等形态使用。
实施例
以下举出实施例，更详细地说明本发明，只要不超出其要点，对本发明的解释不限于这些实施例。
[实验例1]
(非水溶性迷迭香提取物的制造)
在1kg的迷迭香中加入10L的50重量％含水乙醇，加热回流3小时，温热时过滤，得到滤液。再重复两次将残渣用6L的50重量％含水乙醇同样地提取的操作，得到滤液。合并这些滤液，加入5L的水，使沉淀物析出。向其中加入100g的活性炭，搅拌1小时，在冷处保存一夜后，过滤，得到沉淀和活性炭的混合物。向该混合物中加入4L的乙醇，加热回流3小时，温热时过滤，得到滤液。采用同样的方法，再重复两次将残渣用2.4L的乙醇提取的操作，得到滤液。合并这些滤液，减压浓缩，蒸馏除去乙醇，得到粉末状的非水溶性迷迭香提取物(鼠尾草苦内酯和鼠尾草酸的含量：24.9重量％)。
(非水溶性迷迭香提取物的有效成分的分离和鉴定)
对于非水溶性迷迭香提取物，使用ODS(十八烷基硅烷键合硅胶)柱(Φ30mm×120mm)，使洗脱液乙腈流过该柱后，用三氯甲烷/甲醇(体积比)＝100/0、99/1将残留在树脂中的成分推出，收集100％三氯甲烷流过时的粗分级分离迷迭香提取物。进而，用三氯甲烷/甲醇(体积比)＝99/1清洗后，得到两种成分。对这些成分进行基于1H-NMR的结构解析，其结果可知，一种成分是铁锈醇(类萜-1；式(1)的化合物)，另一种成分是天然物中的新颖成分(类萜-2；式(2)的化合物)。
新颖成分类萜-2的NMR(1H-NMR)数据和质谱数据如下。
(对单核细胞增生性李斯特氏菌的抗菌活性)
用DMSO(二甲基亚砜)将非水溶性迷迭香提取物的分离成分(类萜-1、类萜-2)溶解成2,000ppm的浓度，作为抗菌活性试验用的各样品。
使用单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)JCM2873株如下进行抗菌试验。
(1)培养液的制备
将8.95ml的MuellerHintonBroth(MHB)培养基加入试管中，用高压釜进行灭菌处理。培养基浓度在加入50μl的样品时调整至规定浓度。
(2)菌液的制备
用MHB培养基将上述菌株在37℃下振荡培养1天，将培养产物用MHB培养基稀释为适当的菌浓度(3.1×104cfu/ml)。
(3)抗菌试验
在加入有8.95ml的上述(1)中所制备的MHB培养基的试管中，加入50μl的样品和1ml的上述(2)中所制备的菌液，搅拌后(试验时的分离成分浓度为10ppm)在37℃下静置24h。需要说明的是，代替样品加入灭菌水和红霉素(用乙醇溶解为2,000ppm的浓度)的溶液分别作为阴性对照和阳性对照。
(4)判定
从于37℃静置24h后的试管中取1接种耳培养液，涂抹在MuellerHinton琼脂培养基上。于37℃培养2天后，判定琼脂培养基上有无形成菌落和菌落形成的程度。
其结果，在加入有灭菌水的阴性对照的培养基中，形成了较多菌落(3×108cfu/ml)。另一方面，在加入有样品(类萜-1和/或类萜-2)的培养基、阳性对照的培养基中没有发现形成菌落。由以上结果可知，类萜-1和类萜-2具有优异的抗菌活性。
[实验例2]
(提取成分的分级分离)
用与实验例1相同的方法得到902mg的粉末状的非水溶性的迷迭香提取物。将其溶解在少量的乙腈中，上样于30gODS(十八烷基硅烷键合硅胶)的柱(Φ30mm×120mm)后，通过使用水/乙腈混合液的分级梯度法洗脱。洗脱液的混合比例设定为水/乙腈(体积比)＝80∶20、60∶40、40∶60、20∶80、0∶100，各使用150ml。接着，将柱用150ml的三氯甲烷洗脱后，进而用150ml的甲醇洗脱。
将水/乙腈(体积比)＝60∶40、40∶60、20∶80的洗脱液分别用硅胶薄层色谱法(TLC)分级分离，用NMR(1H-NMR)分析各成分，鉴定结果如表1所示。
将乙腈(100％)、三氯甲烷和甲醇的洗脱液全部混合，浓缩使其干固，进而，进行以下硅胶分级分离。即，将浓缩干固物溶解在三氯甲烷中，上样于填充有15g硅胶的柱，然后，通过利用三氯甲烷/甲醇混合液的梯度法洗脱。洗脱液的混合比例设定为三氯甲烷/甲醇(体积比)＝100∶0、99∶1、98∶2、97∶3、96∶4、95∶5、0∶100，各使用150ml。
将各洗脱液浓缩干固后，用高效液相色谱法(HPLC)进一步进行分级分离。HPLC使用ODS柱，用水/甲醇混合溶液(体积比10∶90)洗脱。由三氯甲烷/甲醇(体积比)＝98∶2、96∶4、0∶100的洗脱液的干固物，用NMR(1H-NMR)进行分析，鉴定结果如表1所述。
[表1]
(对单核细胞增生性李斯特氏菌的抗菌活性)
将上述得到的各分级分离成分用二甲基亚砜(关东化学社制造)稀释，制备成分级分离品浓度(重量％)分别为2％、1％、0.5％的3种溶液。作为阳性对照，将红霉素(和光纯药工业社制造)用乙醇(纯正化学社制造)溶解，制备了浓度为1000ppm、500ppm、250ppm的3种溶液。作为阴性对照，使用灭菌水。
使用单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)ATCC49594株，如下进行抗菌试验。
(1)培养液的制备
将8.9ml的脑心浸液培养基(BHI)(日水制药社制造)放入试管中，用高压釜(Tomyseiko社制造、TOMYBS-325)进行处理。培养基浓度在加入0.1ml的上述各试验液时调整至规定浓度。
(2)菌液的制备
用BHI培养基将上述菌株在37℃下振荡培养1天，将培养产物用BHI培养基稀释成适当的菌浓度(2.0×103cfu/ml)。
(3)抗菌试验
在加入有8.9ml的上述(1)中所制备的BHI培养基的试管中，加入0.1ml的所制备的试验液和1ml的上述(2)中所制备的菌液，搅拌后在30℃下静置24h。
(4)抑制率的评价
用浊度计(Taitec社制造、Miniphoto518R)在660nm波长下测定于30℃静置24h(小时)后的试管的培养液的浊度。代替试验液，加入0.1ml的二甲基亚砜，将此时的培养液的浊度值作为A，通过下式计算抑制率。
抑制率(％)＝〔(A-[培养液的浊度])/A〕×100
(5)菌的增殖性的评价
将于30℃静置24h后的试管的培养液用磷酸缓冲溶液(PBS)稀释，涂抹在BHI的琼脂培养基上。将其在37℃下培养24h后，通过显微镜观察来测定琼脂培养基上的菌数。需要说明的是，关于用PBS进行的稀释，预先将培养液在102～109倍的范围内适宜稀释，稀释成24h后用显微镜可测定的菌数的浓度(根据预先用PBS稀释的比例对24h后的菌数进行校正)。
含有红霉素、类萜-1和类萜-2的培养液的抑制率和菌的增殖性评价结果示于表2。作为阳性对照的合成抗菌剂红霉素在2.5～10ppm的浓度范围内显示高抗菌性。关于天然提取物类萜-1和类萜-2，在浓度为50ppm以上时，也确认到对单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)的抗菌活性。进而，通过升高类萜-1或类萜-2的浓度，显示出显著的抗菌活性。
采用与类萜-1和类萜-2相同的条件，对除类萜-1和类萜-2以外的提取成分进行抑制率和菌的增殖性的评价，评价结果示于表3。其结果，7α-乙氧基迷迭香酚、鼠尾草苦内酯、12-甲氧基-反式-鼠尾草酸、迷迭香酚、表迷迭香酚和白桦脂酸对单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)的抗菌活性均低或没有发现抗菌活性。
[表2]
[表3]
工业实用性
本发明的抗菌剂可以由天然物获得，以少量的含量对特别是属于李斯特氏菌(Listeria)属的细菌具有高抗菌活性，且不具有令人不快的异味，所以不仅在食品、饮料、医疗、医药品、环境安全等领域，而且在宽广的领域中作为抗菌物质是有用的。
考虑到近来的能量削减、地球环境对策、人口增加对策、食料问题等，通过使用本发明的抗菌剂，可以抑制特别是新鲜的饮食品的腐败，可以有效利用饮食品。即，本发明的抗菌剂在畜产、水产、食品加工、饮食品制造、饮食品销售、流通、医疗、卫生等各种工业中是有用的。
需要说明的是，作为本发明的说明书的公开内容，将2008年8月4日提交的日本专利申请2008-201147号的说明书、权利要求书和摘要的全部内容以引用的方式并入本文中。

Claims (1)

1.一种抗菌方法，其特征在于，使如下抗菌剂以使下式(1)和(2)表示的化合物的总量在试样中为1～1000ppm的方式含有在作为食品的试样中，
所述抗菌剂含有由唇形科植物提取物分离的下式(2)表示的化合物作为有效成分，进一步含有由唇形科植物提取物分离的下式(1)表示的化合物作为有效成分，其中，
该唇形科植物提取物是迷迭香提取物，
该抗菌剂用于抗属于李斯特氏菌属的细菌的抗菌用途，
该抗菌剂含有200ppm以上的上述式(1)和上述式(2)表示的化合物，
该抗菌剂进一步是使上述式(1)和上述式(2)表示的化合物溶解或分散在水、醇、食用油脂或它们的混合液中的任一种物质中而成的抗菌剂，
该抗菌剂用于食品的抗菌用途
。
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