CN102093422A

CN102093422A - 无环核苷膦酸酯衍生物及其医药用途

Info

Publication number: CN102093422A
Application number: CN2009102521619A
Authority: CN
Inventors: 仲伯华; 何新华; 王勇广; 刘河
Original assignee: Institute of Pharmacology and Toxicology of AMMS
Current assignee: Institute of Pharmacology and Toxicology of AMMS
Priority date: 2009-12-10
Filing date: 2009-12-10
Publication date: 2011-06-15
Anticipated expiration: 2029-12-10
Also published as: US20120322764A1; EP2511281A4; US9187507B2; WO2011069322A1; CN102093422B; JP2013513552A; EP2511281A1

Abstract

本发明涉及无环核苷膦酸酯衍生物及其医药用途。具体地，本发明涉及具有强效抗病毒例如乙肝病毒活性和较低细胞毒性的式I所示的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物：其中，R₁选自H或甲基；各R₂各自独立地选自-R₃或-OR₃；各R₃各自独立地选自C₁-C₈烷基、C₃-C₈环烷基。本发明还涉及式I化合物的制备方法，包含它们的药物组合物以及它们的医药用途。本发明的无环核苷膦酸酯衍生物可以有效地抗病毒例如乙肝病毒活性并且具有良好的体内行为特征。

Description

无环核苷膦酸酯衍生物及其医药用途

技术领域

本发明涉及具有强效抗病毒例如乙肝病毒活性和较低细胞毒性的无环核苷膦酸酯衍生物，其制备方法及其用于制备治疗病毒感染例如乙肝病毒感染的药物的用途。

背景技术

病毒性肝炎例如乙型病毒性肝炎是威胁人民生命健康的重大疾病，治疗乙肝的根本途径是抗病毒治疗。目前临床有效的抗乙肝病毒药物主要为干扰素和拉米夫定。但是干扰素治疗的有效率只有30-50％，而且具有剂量限制性的毒副作用。拉米夫定具有确切的抗乙肝病毒作用，但是长期使用易产生耐药性，连续用药2年后，耐药性的发生率高达40-50％，由此可引发肝炎的急性发作等严重后果。

核苷酸类似物在细胞内毋需磷酸化，因此能够克服拉米夫定的耐药性，而且自身不产生耐药性。其代表性药物阿德福韦酯已在欧美获准上市。但是，阿德福韦酯有一定的细胞毒性，临床应用能够产生肾脏毒性；而且，与拉米夫定相似，阿德福韦酯治疗在停药后，会出现乙肝病毒复制的反跳，引起乙肝的复发。

根据抗HIV药物研究的成功经验，通过联合用药的COCKTAIL的疗法，能够有效克服抗药性，加快病毒的清除。乙肝感染的人数是HIV感染人数的10多倍，但是与抗HIV药物相比，临床有效的抗乙肝病毒药物还屈指可数。

欧洲专利EP0785208公开了结构如下的一系列无环核苷膦酸酯化合物：

其中，R₁代表烷氧基，烷基等单取代基；R₂代表氢或烷基，R₃和R₄代表氢，烷基等。其中化合物2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-[2-[双(2，2，2-三氟乙基氧基)膦酰基甲氧基]丙基]-嘌呤(MCC-478，Alamifovir)已经进入临床研究。

MCC-478是新结构类型的核苷酸类的抗乙肝病毒新药。在化学结构上，与目前已知的核苷类抗乙肝药物不同，MCC-478分子除了对糖基结构进行改造外，在核苷碱基母核的6位为苯硫基取代；在药理学性质上MCC-478也表现出与其它抗HBV药物不同的特性，通过抑制蛋白合成的启动反应和组装反应，从而抑制病毒的复制(Clark Chan，et al.Clinical Pharmacokin etics ofAlamifovir and Its Metabolites.Antivicrob AgentsChemother，2005，49(5)：1813-1822)；它对HBV具有高度选择性的抑制作用，体外活性高达拉米夫定的20-80倍，为阿德福韦(adefovir)的10-20倍；但是，它对HIV、HSV等其它逆转录病毒没有作用(Kamiya N，et al.Antiviral activities of MCC-478，a novel andspecific inhibitor of hepatitis B Virus.Antimicrob AgentsChemother 2002；46(9)：2872)，显示出独特的药理学性质；MCC-478对抗拉米夫定的HBV耐药株也有抑制作用(SuzaneKioko Ono-Nita，Ono-Nita SK，et al.Novel Nucleoside analogueMCC-478(LY582563)is effective against wild-type orlamivudine-resistant hepatitis B virus.Antimicrob AgentsChemother 2002；46：2602-2605)。

作为核苷酸类似物的前药，MCC-478进入体内后水解释放出游离酸(602076)发挥抗病毒作用；但是药代动力学研究结果表明，MCC-478在人体内的主要代谢产物为核苷酸单酯(602074)，游离酸602076的血药浓度只有单酯602074的1/10(Clark Chan，etal.Clinical Pharmaco-kinetics of Alamifovir and Its Metabolites.Antivicrob Agents Chemother，2005，49(5)：1813-1822)，而单酯602074的细胞毒性(CC₅₀＝548μM)显著高于MCC-478和602076(CC₅₀均＞1000μM)(Kamiya N，et al.Antiviral activities ofMCC-478，a novel and specific inhibitor of hepatitis B Virus.Antimicrob Agents Chemother 2002；46(9)：2872)。

目前仍然需要寻找新型的有效特别是生物利用度高的抗病毒活性的药物例如抗乙肝病毒的药物以供临床应用。

发明内容

本发明的目的是提供具有抗病毒活性的新型的有效特别是生物利用度高的化合物。本发明发现了一类新颖结构的化合物，其不但具有良好的抗病毒活性，而且具有令人惊奇的优良体内行为特征。本发明基于上述发现而得以完成。

发明概述：

本发明第一方面提供了以下式I所示的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物：

其中，

R₁选自H或甲基；

各R₂各自独立地选自-R₃或-OR₃；

各R₃各自独立地选自C₁-C₈烷基、C₃-C₈环烷基。

根据本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其中R₁为H。

根据本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其中R₁为甲基。

根据本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其中两个R₂相同。

根据本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其中两个R₂不同。

根据本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其中R₂为-R₃。

根据本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其中R₂为-OR₃。

根据本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其中一个R₂为-R₃，另一个R₂为-OR₃。

根据本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其中每次出现的R₃各自独立地选自C₁-C₆烷基或C₃-C₆环烷基。

根据本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其中每次出现的R₃各自独立地选自C₂-C₆烷基或C₄-C₆环烷基。

根据本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其中所述的烷基(例如C₁-C₈烷基)为含有指定数目的直链或支链烷基(例如含有1-8个碳原子的烷基)。

根据本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其中所述的环烷基(例如C₃-C₈环烷基)为含有指定数目的环烷基或环烷基烷基(例如，含有3-8个碳原子的环烷基；或者，例如，含有3-8个碳原子的环烷基烷基，例如环丙基甲基或环己基甲基)。

根据本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其中每次出现的R₃各自独立地选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、特丁基、正戊基、异戊基、新戊基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、-CH(CH₂CH₃)₂等。

根据本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其中每次出现的R₃各自独立地选自乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、异戊基、新戊基、环戊基、环己基、-CH(CH₂CH₃)₂等。

根据本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其选自：

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(乙酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(丙酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(丁酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(异丁酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(新戊酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(环戊甲酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(环己甲酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(乙基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(丙基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(异丙基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(环戊基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(环己基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(乙酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(丙酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(丁酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(异丁酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(新戊酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(环戊甲酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(环己甲酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(丙基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(异丙基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(异丁基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(新戊基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(戊基-3-氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(环戊基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤；和

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(环己基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤。

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(丙酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I₁)；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(异丁酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I₂)；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(新戊酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I₃)；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(环己甲酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I₄)；

(R)-2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(新戊酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤(I₅)；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(乙基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I₆)；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(丙基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I₇)；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(异丙基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I₈)；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(异丁基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I₉)；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(新戊基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I₁₀)；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(戊基-3-氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I₁₁)；

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(环己基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I₁₂)；

(R)-2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(异丙基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤(I₁₃)；和

2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(环己基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤(I₁₄)。

根据本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其选自本发明实施例的化合物。

本发明第二方面提供制备本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物的方法，其包括以下步骤：

(i)在适宜的溶剂(例如DMF)中，在适宜的试剂(例如DBU(即二环脒，Bicyclic amidine)，特别是在R₁为氢时)或碳酸钾(特别是在R₁为甲基时)存在下，在高温下(例如60～140℃，例如80-120℃，或例如80-100℃)下，使式

化合物与

化合物或式

化合物反应，得到以下式II化合物：

ii)在适宜的溶剂(例如DMF)中，在有机碱(例如三乙胺)存在下，在高温下(例如50～120℃，例如60-100℃)下，使式II化合物与式

化合物反应，得到以下式II化合物：

iii)在10～40℃(例如室温)下，使式III化合物与烷基卤硅烷(例如三甲基溴硅烷)反应，得到以下式IV游离酸化合物：

iv)在10～40℃(例如室温)下，使式IV化合物与烷酰氧基甲基卤化物或烷氧羰基氧基甲基卤化物(例如氯化物，如

)反应，得到以下式I化合物：

和任选的

v)使所得式I化合物进行分离、纯化、形成药学上可接受的盐、形成水合物或溶剂合物的步骤，

其中，R₁和R₂如本发明第一方面任一项所述定义。

本发明第三方面提供了一种药物组合物，其包含治疗和/或预防有效量的本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物的方法，以及任选的一种或多种药学可接受的载体或赋形剂。本发明的药物组合物可以是溶液剂、片剂、胶囊或注射剂；这些药物组合物可以通过注射途径给药或口服给药。在本发明第三方面的一个实施方案中，本发明的式I化合物或其药物组合物优选通过口服给药。

本发明第四方面提供了本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物或者本发明第三方面任一项所述药物组合物在制备用于治疗和/或预防与病毒感染相关的疾病的药物中的用途。根据本发明第四方面任一项的用途，其中所述的病毒是肝炎病毒，例如乙肝病毒。根据本发明第四方面任一项的用途，其中所述的与病毒感染相关的疾病是肝炎，例如乙型肝炎。

本发明第五方面提供了一种在有需要的哺乳动物中治疗和/或预防与病毒感染相关的疾病的方法，该方法包括给有需要的哺乳动物施用治疗和/或预防有效量的本发明第一方面任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物或者本发明第三方面任一项所述药物组合物。根据本发明第五方面的方法，其中所述的其中所述的与病毒感染相关的疾病是肝炎，例如乙型肝炎。

发明详述：

下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

术语“卤”、“卤素”、“Hal”或“卤代”是指氟、氯、溴、和碘。

本发明中所采用的术语“烷基”、“链烯基”和“炔基”具有本领域公知的一般含义，它们是直链或支链的烃基基团，例如但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、烯丙基、丙烯基、丙炔基等，并且所述的“烷基”、“链烯基”和“炔基”可以统称为“烃基”或“链烃基”。

如本文使用的，短语“C₁-C₈烷基”是指具有指定数目碳原子的取代或未取代的烷基基团，其实例包括但不限于：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基、新戊基。

如本文使用的，短语“C₃-C₈环烷基”是指具有指定数目碳原子的取代或未取代的环状烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基。

根据本发明的详细教导以及已有的合成化常知识，本领域技术人员可以容易地合成本发明的式I化合物。

在一个实施方案中，当R₁＝H时，结构式I所示的目标化合物可以按照如下所示的一种示例性的合成路线来制备：

示例性的合成步骤为，将2-氨基-6-氯-嘌呤和双-(异丙基)-亚磷酰基乙基氯溶于DMF，在DBU作用下于80℃-100℃搅拌反应，得到中间体II；将II和对甲氧基苯硫酚溶于DMF，在三乙胺作用下于60℃-100℃搅拌反应得到对甲氧基苯硫基取代衍生物III；III与三甲基溴硅烷在室温搅拌反应，使异丙酯水解，得到游离酸IV，IV再与烷酰氧基甲基氯或烷氧羰基氧基甲基氯在室温反应，即可得到目标化合物I。

在另一个实施方案中，当R₁＝CH₃时，结构式I所示的目标化合物可以按照如下所示的一种示例性的合成路线来制备：

将2-氨基-6-氯-嘌呤和(R)-{1-甲基-2-[(1-甲磺酰氧基)乙氧基]甲基}膦酸二异丙酯溶于DMF，在碳酸钾作用下于80℃-120℃搅拌反应，得到中间体II。接着，参照上文关于R₁＝H的式I化合物合成路线进行后续操作。

在本发明合成式I化合物的方法中，反应所用的各种原材料是本领域技术人员根据已有知识可以制备得到的，或者是可以通过文献公知的方法制得的，或者是可以通过商业购得的。以上反应方案中所用的中间体、原材料、试剂、反应条件等均可以根据本领域技术人员已有知识可以作适当改变的。或者，本领域技术人员也可以根据本发明第二方面方法合成本发明未具体列举的其它式I化合物。

本发明式I化合物既可以其本身也可以其药学可接受的盐或溶剂合物的形式使用。式I化合物的药学可接受的盐包括与药学上可接受的无机酸或有机酸、或者无机碱或有机碱形成的常规盐。合适的酸加成盐的例子包括与盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、高氯酸、富马酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、羟基乙酸、甲酸、乳酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、扑酸、丙二酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸、羟基萘甲酸、氢碘酸、苹果酸、鞣酸等形成的盐。药用盐包括其无机或有机酸盐，其中包括但不限于：氢碘酸盐、硫酸氢盐、磷酸氢盐、丁酸盐、草酸盐、三甲基乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、苦味酸盐、天冬氨酸盐、葡糖酸盐、乙磺酸盐、对甲苯磺酸盐、双羟萘酸盐、丙酮酸盐、乙醇酸盐、三氟乙酸盐、对氨基水杨酸盐、扑酸盐和抗坏血酸盐等。合适的碱加成盐的例子包括与钠、锂、钾、镁、铝、钙、锌、N，N’-二苄基乙二胺、氯代普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺和普鲁卡因等形成的盐。本文中涉及到本发明化合物时，包括式I化合物及其药学可接受的盐或溶剂合物。本发明化合物的游离碱形式与它们各自的盐形式在某些物理性质(如在极性溶剂中的溶解度)上稍有不同，但对于本发明目的，各酸式盐与它们各自的游离碱形式相当。(参见例如S.M.Berge，et al.，“Pharmaceutical Salts，”J.Pharm.Sci.，66：1-19(1977)，其通过引用并入本文。本发明化合物或其药学上可接受的盐可以形成溶剂化物，例如水合物、醇合物等。

根据本发明，本发明式I化合物可用于制备治疗肝炎病毒(例如乙肝病毒)感染的药物。

本文所用的术语“组合物”意指包括包含指定量的各指定成分的产品，以及直接或间接从指定量的各指定成分的组合产生的任何产品。根据本发明，所述的“组合物”是指“药物组合物”。

本发明式I化合物还包括其异构体、消旋体、对映体、非对映体、对映体富集物、溶剂合物、和酯，本发明式I化合物以及它的异构体、消旋体、对映体、非对映体、对映体富集物、溶剂合物、和酯还可以形成溶剂合物，例如水合物、醇合物等。上述化合物还可以是前药或可在体内代谢变化后释放出所述活性成分的形式。选择和制备适当的前药衍生物是本领域技术人员公知技术。一般来说，对于本发明的目的，与药学可接受的溶剂如水、乙醇等的溶剂合物形式与非溶剂合物形式相当。

可改变本发明药物组合物中各活性成分的实际剂量水平，以便所得的活性化合物量能有效针对具体患者、组合物和给药方式得到所需的治疗反应。剂量水平须根据具体化合物的活性、给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。

当用于上述治疗和/或预防或其他治疗和/或预防时，治疗和/或预防有效量的一种本发明化合物可以以纯形式应用，或者以药学可接受的酯或前药形式(在存在这些形式的情况下)应用。或者，所述化合物可以以含有该目的化合物与一种或多种药物可接受赋形剂的药物组合物给药。词语“治疗和/或预防有效量”的本发明化合物指以适用于任何医学治疗和/或预防的合理效果/风险比治疗障碍的足够量的化合物。但应认识到，本发明化合物和组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。一般说来，本发明式I化合物用于哺乳动物特别是人的剂量可以介于0.001～1000mg/kg体重/天，例如介于0.01～100mg/kg体重/天，例如介于0.01～10mg/kg体重/天。

本发明化合物或其药学上可接受的盐可以单独或以药物组合物的形式给药。本发明药物组合物可根据给药途径配成各种适宜的剂型。使用一种或多种生理学上可接受的载体，包含赋形剂和助剂，它们有利于将活性化合物加工成可以在药学上使用的制剂。适当的制剂形式取决于所选择的给药途径，可以按照本领域熟知的常识进行制造。

因此，运用本领域技术人员熟悉的药物载体可以制备成含有效剂量的本发明化合物的药物组合物。因此本发明还提供包含与一种或多种无毒药物可接受载体配制在一起的本发明化合物的药物组合物。所述药物组合物可特别专门配制成以固体或液体形式供口服给药、供胃肠外注射或供直肠给药。

给药途径可以是口服、非肠道或局部给药，优选口服和注射形式给药。可以口服的药物制剂包括胶囊剂和片剂等。病人吞咽有困难时，也可以采用舌下片或者其他非吞咽的方式给药。本发明化合物也可以配制用于肠胃外给药或者透皮给药或者经粘膜给药。本领域技术人员可以理解，本发明化合物可以采用合适的药物释放系统(DDS)以得到更有利的效果。

具体地，本发明的药物组合物可通过口服、直肠、胃肠外、池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过散剂、软膏剂或滴剂)、口颊给予人类和其他哺乳动物，或者作为口腔喷雾剂或鼻腔喷雾剂给予。本文所用术语“胃肠外”指包括静脉内、肌肉内、腹膜内、胸骨内、皮下和关节内注射和输液的给药方式。

适合于胃肠外注射的组合物可包括生理上可接受的无菌含水或非水溶液剂、分散剂、混悬剂或乳剂，及供重构成无菌可注射溶液剂或分散剂的无菌散剂。合适的含水或非水载体、稀释剂、溶剂或媒介物的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、植物油(如橄榄油)、可注射有机酯如油酸乙酯及它们的合适混合物。

这些组合物也可含有辅料，如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如尼泊金酯类、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等，可确保防止微生物的作用。还期望包括等渗剂，例如糖类、氯化钠等。通过使用能延迟吸收的物质，例如单硬脂酸铝和明胶，可达到可注射药物形式的延长吸收。

混悬剂中除活性化合物外还可含有悬浮剂，例如乙氧基化异十八醇、聚氧乙烯山梨醇和聚氧乙烯失水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶或者这些物质的混合物等。

在一些情况下，为延长药物的作用，期望减慢皮下或肌内注射药物的吸收。这可通过使用水溶性差的晶体或无定形物质的液体混悬剂来实现。这样，药物的吸收速度取决于其溶解速度，而溶解速度又可取决于晶体大小和晶型。或者，胃肠外给药的药物形式的延迟吸收通过将该药物溶解于或悬浮于油媒介物中来实现。

可注射贮库制剂形式可通过在生物可降解聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯(polylactide-polyglycolide)中形成药物的微胶囊基质来制备。可根据药物与聚合物之比和所采用的具体聚合物的性质，对药物释放速度加以控制。其他生物可降解聚合物的实例包括聚原酸酯类(poly(orthoesters))和聚酐类(poly(anhydrides))。可注射贮库制剂也可通过将药物包埋于能与身体组织相容的脂质体或微乳中来制备。

可注射制剂可例如通过用滤菌器过滤或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，所述固体组合物可在临用前溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质。

本发明化合物或其组合物可用口服方法或非胃肠道给药方式。口服给药可以是片剂、胶囊剂、包衣剂，肠道外用药制剂有注射剂和栓剂等。这些制剂是按照本领域的技术人员所熟悉的方法制备的。为了制造片剂、胶囊剂、包衣剂所用的辅料是常规用的辅料，例如淀粉、明胶、阿拉伯胶，硅石，聚乙二醇，液体剂型所用的溶剂如水、乙醇、丙二醇、植物油(如玉米油、花生油、橄榄油等)。含有本发明化合物的制剂中还有其它辅料，例如表面活性剂，润滑剂，崩解剂，防腐剂，矫味剂和色素等。在片剂、胶囊剂、包衣剂、注射剂和栓剂中含有本发明式I化合物的剂量是以单元剂型中存在的化合物量计算的。在单元剂型中本发明式I化合物一般含量为1-5000mg，优选的单元剂型含有10-500mg，更优选的单元剂型含有20-300mg。具体地说，本发明可以提供的供口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性的药物可接受赋形剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b)粘合剂如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶；c)保湿剂如甘油；d)崩解剂如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂如石蜡；f)吸收加速剂如季铵化合物；g)湿润剂如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；h)吸附剂如高岭土和膨润土以及i)润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠和它们的混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，所述剂型中也可包含缓冲剂。

相似类型的固体组合物使用赋形剂例如乳糖及高分子量聚乙二醇等，也可用作软胶囊和硬胶囊中的填充物。

片剂、糖衣丸剂(dragees)、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可与包衣和壳料如肠溶衣材和医药制剂领域公知的其他衣材一起制备。这些固体剂型可任选含有遮光剂，且其组成还可使其只是或优先地在肠道的某个部位任选以延迟方式释放活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包括高分子物质和蜡类。如果适合，活性化合物也可与一种或多种上述赋形剂配成微囊形式。

供口服给药的液体剂型包括药学可接受的乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。液体剂型除含有活性化合物外还可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇(tetrahydrofurfuryl alcohol)、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯及它们的混合物。口服组合物除包含惰性稀释剂外还可包含辅料，例如湿润剂、乳化和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香味剂。

供直肠或阴道给药的组合物优选是栓剂。栓剂可通过将本发明化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，它们在室温下为固体，但在体温下则为液体，因此可在直肠腔或阴道腔内熔化而释放出活性化合物。

本发明的化合物及其组合物还考虑用于局部给药。供局部给予本发明化合物的剂量形式包括散剂、喷雾剂、软膏剂和吸入剂。在无菌条件下将活性化合物与药学可接受的载体和任何所需的防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。眼用制剂、眼软膏剂、散剂和溶液剂也被考虑在本发明范围内。

本发明化合物也可以脂质体形式给药。如本领域所公知，脂质体通常用磷脂或其他脂类物质制得。脂质体由分散于含水介质中的单层或多层水化液晶所形成。任何能够形成脂质体的无毒、生理上可接受和可代谢的脂质均可使用。脂质体形式的本发明组合物除含有本发明化合物外，还可含有稳定剂、防腐剂、赋形剂等。优选的脂类是天然和合成的磷脂和磷脂酰胆碱(卵磷脂)，它们可单独或者一起使用。形成脂质体的方法是本领域公知的。参见例如Prescott，Ed.，Methods in Cell Biology，Volume XIV，Academic Press，New York，N.Y.(1976)，p.33。

本发明人惊奇地发现，结构式I所示的无环核苷膦酸酯衍生物具有良好的抗病毒例如抗肝炎病毒特别是抗乙型肝炎病毒的活性，并且具有令人惊奇的体内行为特征。

具体实施方式

通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。

本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。

实施例1、2-(二异丙基-膦酰基甲氧基)-乙基氯的制备合成路线如下：

在150ml三口瓶中，加入84.6g(70.5ml，1.05mol)2-氯乙醇及31.6g(1.09mol)粉碎的多聚甲醛，搅拌下通入干燥的氯化氢气体，持续24小时。停止搅拌后反应液分为两层；分出下层，以氯化钙干燥。过滤后，将滤液减压分馏，收集沸程为80-84℃/28-30mmHg的馏分，得氯甲基-2-氯乙基醚74.3g。

在300mL反应瓶中，加入18g(0.3mol)异丙醇、23.7g(0.3mol)吡啶及100ml石油醚，冰浴冷却。剧烈搅拌下滴加13.8g(0.1mol)三氯化磷于40ml石油醚的溶液。加完后，于50℃油浴中搅拌反应1小时，滤去固体，将滤液减压蒸去溶剂，残留物减压蒸馏，收集106-108℃/60mmHg的馏分，得三异丙基亚磷酸酯15.8g。

将8.3g(0.064mol)氯甲基-2-氯乙基醚加于100ml三口瓶中，在90℃油浴中加热搅拌，滴加15.8g(0.076mol)异丙基亚磷酸酯。加完后，于125℃油浴中继续搅拌反应4小时，硅胶薄层检测反应完全(展开剂：乙酸乙酯，R_f＝0.6)。减压蒸馏，收集118-122℃/1.5mmHg的馏分，得2-(二异丙基-膦酰基甲氧基)-乙基氯13.5g。

实施例2、(R)-{1-甲基-2-[(1-甲磺酰氧基)乙氧基]甲基}膦酸二异丙酯的制备

合成路线如下：

在1000ml烧瓶中加入24.0g(0.315moL)(R)-1，2-丙二醇、0.25g N，N-二甲氨基吡啶、350mL二氯甲烷和46.0g(0.45moL)三乙胺，冰水浴冷却，磁力搅拌。分批加入88.7g(0.315moL)三苯基氯甲烷，约1小时加完，1.5小时去掉冰水浴，升至室温后反应约15小时(TLC检测，至三苯基氯甲烷消失为止)。加入蒸馏水(100mL)以溶解反应生成的三乙胺盐酸盐，转入分液漏斗分层，油相依次用5％碳酸氢钠溶液(2×100mL)、蒸馏水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸掉溶剂，得(R)-1-O-三苯甲基-1，2-丙二醇粗品96.6g，直接用于下步反应。

将96.6g(约0.30moL)(R)-1-O-三苯甲基-1，2-丙二醇粗品加于、500mL无水四氢呋喃中，磁力搅拌，冰水浴冷却。分批加入11.3g(70％，0.33moL)氢化钠，约40min加完。0.5小时后去掉冰水浴，升至室温后反应约2小时，再加热微回流3小时左右，至无气体产生。降温至5℃以下，滴加106.2g(0.30moL)对甲苯磺酰基氧甲基膦酸二异丙酯的无水四氢呋喃(200mL)溶液，约0.5小时加完，1小时后去冰水浴，升至室温后反应约30小时。反应结束后，旋转蒸发溶剂，加入乙酸乙酯(250mL)和蒸馏水(200mL)搅拌至残余固体物溶解，转入分液漏斗分层，水相再用乙酸乙酯(2×70mL)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压除去溶剂，残余物经柱层析分离(柱层析条件：硅胶200～300目；洗脱剂为石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1到5∶1)，得(R)-[(2-三苯甲氧基-1-甲基乙氧基)甲基]膦酸二异丙酯的黄色透明油状物90.6g。¹H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：7.22-7.48(m，15H)，4.51-4.67(m，2H)，3.62-3.88(m，3H)，2.99(dd，1H，)，2.92(dd，1H)，1.12-1.28(m，12H)，1.07(d，3H)。

将(R)-[(2-三苯甲氧基-1-甲基乙氧基)甲基]膦酸二异丙酯的黄色透明油状物90.6g(0.182mol)和80％乙酸溶液(380mL)搅拌成均相溶液，置于85℃油浴中加热搅拌反应20分钟，冰水浴冷却过夜，使副产物三苯基甲醇充分析出。过滤，滤饼用80％乙酸溶液(3×15mL)洗涤，合并滤液，减压除去乙酸和水，残余物加入乙酸乙酯(250mL)，饱和盐水(2×50mL)洗涤，分得油层，经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压下除去溶剂，残余物经柱层析分离(柱层析条件：硅胶200～300目；洗脱剂二氯甲烷∶甲醇＝50∶1到10∶1)，得到(R)-[(2-羟基-1-甲基乙氧基)甲基]膦酸二异丙酯的淡黄色透明油状产物24.1g。

将22.9g(90mmol)(R)-[(2-羟基-1-甲基乙氧基)甲基]膦酸二异丙酯加于150mL二氯甲烷中，加入三乙胺18.4g(180mmol)，磁力搅拌，冰水浴冷却。通过恒压漏斗滴加12.6g(0.108mol)甲磺酰氯，约1小时加完，半小时后去掉冰水浴，升至室温后反应过夜。加入蒸馏水(70mL)溶解掉反应生成的三乙胺盐酸盐，转入分液漏斗分层，水相再用二氯甲烷(70mL)萃取，合并油层，经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压除去溶剂，残余物经柱层析分离(柱层析条件：硅胶200-300目；洗脱剂二氯甲烷∶甲醇＝60∶1到20∶1)，得到(R)-{1-甲基-2-[(1-甲磺酰氧基)乙氧基]甲基}膦酸二异丙酯的浅橙色透明油状产物27.1g。¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)δ：4.72-4.78(m，2H)，4.24(dd，1H)，4.18(dd，1H)，3.73-3.90(m，3H)，3.09(s，3H)，1.33-1.37(m，12H)，1.24(d，3H)。

实施例3、2-氨基-6-氯-9-{2-[双(异丙氧基)-膦酰基甲氧基]- 乙基}-嘌呤(II 1)的制备

于120mlDMF中加入DBU 29.3g，2-氨基-6-氯嘌呤32.45g(0.191mol)，80℃搅拌30分钟，然后加入2-(二异丙氧基-膦酰基甲氧基)-乙基氯50g(0.193mol)，100℃反应8小时，冷却，减压除去DMF，加入水和乙酸乙酯，分层，水相用乙酸乙酯提取二次，合并有机层，干燥，用硅胶柱层析分离，用MeOH∶CH₂Cl₂＝1∶30洗脱，得II ₁46克。

实施例4、(R)-2-氨基-6-氯-9-{2-[双(异丙氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤(II2)的制备

在500mL烧瓶(配备CaCl₂干燥管)中加入(R)-{1-甲基-2-[(1-甲磺酰氧基)乙氧基]甲基}膦酸二异丙酯26.6g(80.0mmoL)、二甲基甲酰胺200mL、2-氨基-6-氯嘌呤16.8g(96.0mmoL)和无水碳酸钾16.8g(120mmol)，磁力搅拌，于95℃油浴中加热反应。4小时后去掉油浴，降至室温后过滤，滤饼用二甲基甲酰胺(2×30mL)洗涤，合并滤液，经旋转蒸发器减压蒸掉溶剂(45℃，2-5mmHg)，残余物冷却后加入乙酸乙酯250mL和饱和盐水100mL搅拌溶解，转入分液漏斗分层，油层再用饱和盐水(2×50mL)洗涤，油层经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液经旋转蒸发器减压蒸掉溶剂，粗品经柱层析分离(柱层析条件：硅胶200～300目；洗脱剂二氯甲烷∶甲醇＝100∶1到50∶1到15∶1)，柱层析后所得产物进一步用乙酸乙酯-石油醚重结晶，过滤、干燥得白色固体产物；母液经旋转蒸发器减压蒸干，再次按上面精制粗品的方法得到第二批产物。共计得产物27.1g，熔点：130～132℃，比旋光度：[α]_D ²³＝-44.09(二氯甲烷，c＝1.002)。¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)δ：7.95(s，1H)，5.21(br s，2H)，4.64-4.75(m，2H)，4.22(dd，1H)，4.07(dd，1H)，3.85-3.97(m，1H)，3.81(dd，1H)，3.78(dd，1H)，1.12-1.23(m，15H)。

实施例5、2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-(2-膦酰基甲氧基乙基)-嘌呤-(IV1)的制备

室温下，于30mlDMF中依次加入5g(12.8mmol)II ₁，2.6g(25.6mmol)三乙胺及2.7g(19.2mmol)对甲氧基苯硫酚，在充氮气保护下，于70℃反应4小时，冷却，减压除去DMF，加入乙酸乙酯，水搅拌，分层，水层用乙酸乙酯在提取两次，合并有机层，干燥，用硅胶柱层析分离，用MeOH∶CH₂Cl₂＝1∶30洗脱，得2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(异丙氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(III₁)的粘稠液体3.98克。

将3.98g(8mmol)III₁溶于30ml乙腈中，室温下加入7.25ml(48mmol)三甲基溴硅烷，反应过夜，然后加入5.5ml乙醇搅拌2小时，析出淡黄色固体，过滤，真空干燥，得到IV₁的黄色固体3.3克，熔点：81.5～82.5℃。¹H-NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：8.51(s，1H)，7.54(d，2H)，7.06(d，2H)，4.265(t，2H)，3.86(t，2H)，3.84(3，3H)，3.62(d，2H)。

实施例6、(R)-2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(异丙基) 膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤(IV2)-的制备；

参照实施例5的方法，用II₂代替II₁在三乙胺作用下与甲氧基苯硫酚反应，用硅胶柱层析分离，得R-2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(异丙氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤(III₂)，产率68％。

参照实施例5的方法，将III₂用三甲基溴硅烷脱保护，得到IV₂，产率73％。熔点：178℃(dec.)。¹H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：8.08(s，1H)，7.51(d，2H)，7.02(d，2H)，4.14(dd，1H)，4.05(dd，1H)，3.84-3.93(m，1H)，3.81(s，3H)，3.50-3.64(m，2H)，1.05(d，3H)。

实施例7、2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(丙酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I1)的制备

将IV₁ 0.41g(1mmoL)、无水DMF5.0mL和三乙胺0.2g(2mmoL)加入烧瓶中，氮气保护下于常温搅拌10分钟，加入丙酸氯甲酯0.46g(4mmoL)，氮气保护下于常温搅拌反应35小时。转入分液漏斗，加入水(60mL)，用乙酸乙酯(3×40mL)萃取，合并有机层，用饱和盐水(3×40mL)洗涤。油层经无水硫酸钠干燥，滤去干燥剂，滤液经旋转蒸发器常温减压浓缩，残留物经柱层析分离(柱层析条件：硅胶200～300目；洗脱剂二氯甲烷∶甲醇＝80∶1到40∶1)，得I₁0.185g。¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)δ：7.78(s，1H)，7.54(dd，2H)，6.96(dd，2H)，5.65-5.70(m，4H)，4.84(brs，2H)，4.28(t，2H)，4.09(t，2H)，3.86(s，3H)，3.92(m，2H)，2.37(q，4H)，1.12(t，6H)。

实施例8、2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(异丁酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I 2)的制备

参照实施例7的方法，用异丁酸氯甲酯代替丙酸氯甲酯与IV₁反应，反应产物经硅胶柱层析分离，得到I ₂，收率31％。¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)δ：7.78(s，1H)，7.54(dd，2H)，6.96(dd，2H)，5.65-5.70(m，4H)，4.84(br s，2H)，4.28(t，2H)，4.09(t，2H)，3.86(s，3H)，3.92(m，2H)，2.53(m，2H)，1.13(d，12H)。

实施例9、2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(新戊酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I3)的制备

参照实施例7的方法，用新戊酸氯甲酯代替丙酸氯甲酯与IV₁反应，反应产物经硅胶柱层析分离，得到I ₃，收率35％。¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)δ：7.78(s，1H)，7.54(dd，2H)，6.96(dd，2H)，5.65-5.70(m，4H)，4.84(br s，2H)，4.28(t，2H)，4.09(t，2H)，3.86(s，3H)，3.92(m，2H)，1.23(s，9H)，1.22(s，9H)。

实施例10、2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(环己甲酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I 4)的制备

参照实施例7的方法，用环己甲酸氯甲酯代替丙酸氯甲酯与IV₁反应，反应产物经硅胶柱层析分离，得到I ₄，收率35％。¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)δ：7.78(s，1H)，7.54(dd，2H)，6.96(dd，2H)，5.65-5.70(m，4H)，4.84(br s，2H)，4.28(t，2H)，4.09(t，2H)，3.86(s，3H)，3.92(m，2H)，2.27(m，2H)，1.91(m，4H)，1.66(m，4H)；1.39-1.47(m，12H)。

实施例11、(R)-2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(新戊酰氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤(I 5)的制备

参照实施例7的方法，用IV₂与特戊酸氯甲酯反应，反应产物经硅胶柱层析分离，得到I ₅，收率36.5％。¹H-NMR(CDCl₃，400MHZ)δ_H：7.78(s，1H)，7.54(dd，2H)，6.96(dd，2H)，5.65-5.70(m，4H)，4.84(br s，2H)，4.18(dd，1H)，4.01(dd，1H)，3.69-3.96(m，6H)，1.23(s，9H)，1.22(s，9H)，1.19(d，3H)。

实施例12、2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(乙基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I 6)的制备

室温下，将IV₁ 1.64g(4mmoL)、三乙胺0.8g(8mmoL)加于12ml N-甲基吡咯烷酮中，搅拌30分钟，然后加入氯甲基乙基碳酸酯2.2g(16mmol)，于70℃搅拌反应2小时，冷却，加入300ml1％柠檬酸水溶液和500ml乙醚，搅拌，分层，水层用乙醚提取两次，合并有机层，干燥，用硅胶柱层析分离，用MeOH∶CH₂Cl₂＝1∶30洗脱，得I₆ 0.92克。¹H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：7.86(s，1H)，7.50(d，2H)，7.02(d，2H)，6.30(s，2H，NH₂)，5.47-5.78(m，4H)，4.24(m，4H)，4.28(t，2H)，4.09(t，2H)，3.95(m，2H)，3.83(s，3H)，1.30(m，6H)。

实施例13、2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(丙基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I7)的制备

参照实施例12的方法，用氯甲基丙基碳酸酯代替氯甲基乙基碳酸酯与IV₁反应，反应产物用硅胶柱层析分离，得I ₇，产率32％。¹H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：7.86(s，1H)，7.50(d，2H)，7.02(d，2H)，6.30(br s，2H)，5.47-5.78(m，4H)，4.28(t，2H)，4.22(m，4H)，4.09(t，2H)，3.95(m，2H)，3.83(s，3H)，1.62(m，4H)，0.98(m，6H)。

实施例14、2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(异丙基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I8)的制备

参照实施例12的方法，用氯甲基异丙基碳酸酯代替氯甲基乙基碳酸酯与IV₁反应，反应产物用硅胶柱层析分离，得I ₈，产率27％。¹H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：7.86(s，1H)，7.50(d，2H)，7.02(d，2H)，6.30(s，2H，NH₂)，5.47-5.78(m，4H)，4.83(m，2H)，4.28(t，2H)，4.09(t，2H)，3.95(m，2H)，3.83(s，3H)，1.26(s，6H)，1.24(s，6H)。

实施例15、2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(异丁基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I9)的制备

参照实施例12的方法，用氯甲基异丁基碳酸酯代替氯甲基乙基碳酸酯与IV₁反应，反应产物用硅胶柱层析分离，得I ₉，产率20％。¹H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：7.86(s，1H)，7.50(d，2H)，7.02(d，2H)，6.30(br s，2H)，5.47-5.78(m，4H)，4.28(t，2H)，4.11(d，4H)，4.09(t，2H)，3.95(m，2H)，3.83(s，3H)，1.87(m，2H)，0.97(m，12H)。

实施例16、2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(新戊基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I10)的制备

参照实施例12的方法，用氯甲基异丙基碳酸酯代替氯甲基乙基碳酸酯与IV₁反应，反应产物用硅胶柱层析分离，得I ₁₀，产率18％。¹H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：7.86(s，1H)，7.50(d，2H)，7.02(d，2H)，6.30(br s，2H)，5.47-5.78(m，4H)，4.28(t，2H)，4.13(s，4H)，4.09(t，2H)，3.95(m，2H)，3.83(s，3H)，0.94(s，18H)。

实施例17、2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(戊基-3-氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I11)的制备

参照实施例12的方法，用氯甲基-(3-戊基)-碳酸酯代替氯甲基乙基碳酸酯与IV₁反应，反应产物用硅胶柱层析分离，得I₁₁，产率15％。¹H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：7.86(s，1H)，7.50(d，2H)，7.02(d，2H)，6.30(br s，2H)，5.47-5.78(m，4H)，4.28(t，2H)，4.11(m，2H)，4.09(t，2H)，3.95(m，2H)，3.83(s，3H)，1.52-1.62(m，8H)，0.92(t，12H)。

实施例18、2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(环己基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-乙基}-嘌呤(I12)的制备

参照实施例12的方法，用氯甲基环己基碳酸酯代替氯甲基乙基碳酸酯与IV₁反应，反应产物用硅胶柱层析分离，得I ₁₂，产率24％。¹H-NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.86(s，1H)，7.50(d，2H)，7.02(d，2H)，6.30(br s，2H)，5.47-5.78(m，4H)，4.52-4.61(m，2H)，4.28(t，2H)，4.09(t，2H)，3.95(m，2H)，3.83(s，3H)，2.55(m，2H)，1.80(m，4H)，1.15-1.50(m，12H)。

实施例19、(R)-2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(异丙基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤(I13)的制备

参照实施例12的方法，用氯甲基异丙基碳酸酯与IV₂反应，反应产物用硅胶柱层析分离，得I₁₃，产率16％。¹H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：7.86(s，1H)，7.50(d，2H)，7.02(d，2H)，6.30(br s，2H)，5.47-5.78(m，4H)，4.83(m，2H)，4.18(dd，1H)，4.01(dd，1H)，3.85-4.06(m，3H)，3.81(s，3H)，1.26(s，6H)，1.24(s，6H)，1.07(d，3H)。

实施例20、2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-{2-[双(环己基氧基羰基氧基甲氧基)膦酰基甲氧基]-丙基}-嘌呤(I 14)的制备

参照实施例12的方法，用氯甲基环己基碳酸酯与IV₂反应，反应产物用硅胶柱层析分离，得I₁₄，产率21％。¹H-NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.83(s，1H)，7.50(dd，2H)，7.02(dd，2H)，6(br s，2H)，5.47-5.78(m，4H)，4.52-4.61(m，2H)，3.82-4.15(m，5H)，3.80(s，3H)，1.80(m，4H)，1.63(m，4H)，1.15-1.50(m，12H)，1.05(d，3H)。

本领域技术根据本发明特别是以上实施例的方法的教导以及拥有的已有知识和参考文献，还可以合成得到本发明其它未示例合成的式I化合物，特别是还可以合成得到本发明上文所提出的具体化合物或者所附权利要求书中列出的具体化合物。

实验例1、体外抗HBV活性测定

用Hep G 2.2.15细胞体外试验法测定了目标化合物对HBVDNA的抑制作用和细胞毒性。

实验方法

通过定量实时荧光PCR法测定目标化合物对HBV DNA的抑制作用：Hep G 2.2.15细胞培养于含10％小牛血清的DMEM培养液中，在5％CO2培养箱中孵育。然后将细胞接种于96孔板中，细胞数3×10⁴，继续培养，当细胞密度达到80％左右，弃去旧培养液，加入含不同浓度药物的新培养液，设置3个平行孔；每隔2天更换培养液。在给药后第10天，取100μl上清，通过定量PCR的方法，测定HBV DNA的含量，计算50％抑制浓度，即为IC₅₀值。

通过MTT法测定目标化合物的细胞毒性：Hep G₂细胞培养于含10％小牛血清的DMEM培养液中，在5％CO2培养箱中孵育。然后将细胞接种于96孔板中，细胞数5×10⁴，继续培养3天，加入含不同浓度药物的新培养液，设置3个平行孔；在给药后第3天，加入MTT至7.5mg/ml，继续培养2小时，弃去上清，加入含10％吐温X-100异丙醇，120μl/孔，再加入0.4μl/孔，用酶联仪测定540nm处的吸收，计算50％抑制浓度，即为CC₅₀值。结果见表1。

表1、本发明部分示例化合物的IC₅₀值和CC₅₀值

本发明其它实施例化合物以及本发明上文所提出的具体化合物或者所附权利要求书中列出的具体化合物也可以得到与上表1中本发明实施例化合物的IC50值和CC50值基本上相同的结果。

实验例2、口服生物利用度的比较

SD雄性大鼠，体重为180至220g，每组3只。所有动物给药前禁食12小时。将待测样品配成浓度为10mg/ml的1％羧甲基纤维素钠的悬浮液，灌胃给药，给药剂量相当于20毫克/公斤的2-氨基-6-(4-甲氧基苯硫基)-9-(2-膦酰基甲氧基乙基)-嘌呤(IV₁，602076)；将602076配成10mg/ml的生理盐水溶液，尾静脉注射给药，给药剂量10毫克/公斤。于给药前和给药后0.25，0.5，0.75，1.0，1.5，2.0，3.0，6.0，12.0，24.0小时，于大鼠眼底静脉丛采血0.5mL，参考文献(Clark Chan，et al.ClinicalPharmaco-kinetics of Alamifovir and Its Metabolites AntivicrobAgents Chemother，2005，49(5)：1813-1822.)的方法，测定不同时间点血液中602076的浓度。

将血药浓度-时间数据输入计算机，采用非室模型法计算药物动力学参数，用梯形法计算AUC_0-∞值，由受试大鼠分别口服受试样品与静注602076后所测定的602076的平均血药浓度-时间曲线下面积(AUC_0-∞)，计算出大鼠口服各前体化合物后活性代谢物602076的绝对生物利用度(F)。

F＝AUC_0-∞(口服)/AUC_0-∞(静注)X100％X2

表2、大鼠口服给予本发明部分示例化合物后的生物

利用度比较，以602076计

本发明其它实施例化合物以及本发明上文所提出的具体化合物或者所附权利要求书中列出的具体化合物也可以得到与上表2中本发明实施例化合物的生物利用度值基本上相同的结果。

Claims

1.式I所示的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物：

其中，

R₁选自H或甲基；

各R₂各自独立地选自-R₃或-OR₃；

各R₃各自独立地选自C₁-C₈烷基、C₃-C₈环烷基。

2.权利要求1所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其中两个R₂相同；或者，其中两个R₂不同。

3.权利要求1或2所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其特征在于以下任一项或多项：

i)R₂为-R₃；

ii)R₂为-OR₃；

iii)一个R₂为-R₃，另一个R₂为-OR₃。

4.权利要求1至3任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其中每次出现的R₃各自独立地选自C₁-C₆烷基或C₃-C₆环烷基；优选地，每次出现的R₃各自独立地选自C₂-C₆烷基或C₄-C₆环烷基。

5.权利要求1至4任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其中每次出现的R₃各自独立地选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、特丁基、正戊基、异戊基、新戊基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、-CH(CH₂CH₃)₂等；优选地，每次出现的R₃各自独立地选自乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、异戊基、新戊基、环戊基、环己基、-CH(CH₂CH₃)₂等。

6.权利要求1至5任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其选自：

7.权利要求1至5任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物，其选自：

8.制备权利要求1至7任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物的方法，其包括以下步骤：

(i)在适宜的溶剂(例如DMF)中，在适宜的试剂(例如DBU(即二环脒，Bicyclic amidine)，特别是在R1为氢时)或碳酸钾(特别是在R₁为甲基时)存在下，在高温下(例如60～140℃，例如80-120℃，或例如80-100℃)下，使式

化合物与化合物或式化合物反应，得到以下式II化合物：

化合物反应，得到以下式II化合物：

)反应，得到以下式I化合物：

；和任选的

其中，R₁和R₂如权利要求1所述定义。

9.一种药物组合物，其包含治疗和/或预防有效量的权利要求1至7任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物的方法，以及任选的一种或多种药学可接受的载体或赋形剂。

10.权利要求1至7任一项所述的无环核苷膦酸酯衍生物或其药学上可接受的盐、异构体、水合物或溶剂合物或者权利要求9所述药物组合物在制备用于治疗和/或预防与病毒感染相关的疾病的药物中的用途；优选的，其中所述的病毒是肝炎病毒，例如乙肝病毒；优选的，其中所述的与病毒感染相关的疾病是肝炎，例如乙型肝炎。