CN102584847B

CN102584847B - 一种抗单纯疱疹病毒hsv的莪术醇衍生物

Info

Publication number: CN102584847B
Application number: CN201210060471.2A
Authority: CN
Inventors: 邱峰; 李天宪; 王绍杰; 陈丽霞; 康宁; 罗桓
Original assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Current assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Priority date: 2012-03-09
Filing date: 2012-03-09
Publication date: 2015-03-25
Anticipated expiration: 2032-03-09
Also published as: CN102584847A

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及通式Ⅰ所示的具有抗单纯疱疹病毒HSV活性的新化合物，其中R如说明书中所定义。本发明还涉及所述化合物的用途和制备方法，以及这些化合物可以和药学上可接受的载体结合，制备临床上可接受的治疗单纯疱疹病毒HSV感染性疾病的药物。通式Ⅰ的结构：<b /><CNIPR:IMG <CNIPR:IMG wi="39.42" he="40.22" file="2012100604712100004dest_path_image002.GIF" img-format="jpg"

Description

一种抗单纯疱疹病毒HSV的莪术醇衍生物

技术领域

本发明涉及医药技术领域，确切的说是涉及一种抗单纯疱疹病毒HSV的莪术醇衍生物。

技术背景

单纯疱疹病毒属于疱疹病毒科、α疱疹病毒亚科，是最早发现的人类疱疹病毒，分为1型(HSV-l)与2型(HSV-2)两个血清型，其感染十分普遍，呈全球性分布。HSV-1多感染口、唇、眼的皮肤与粘膜，以及中枢神经系统，偶见于生殖器感染(Ann Intern Med，1983，98(6)：958-972；J Med Virol，1977，l(3)：175-181)；HSV-2多与新生儿感染和生殖器感染相关。血清学调查表明，HSV抗体水平直接与年龄和社会经济状况相关，在多数欠发达国家，30岁以上人群HSV-1抗体的阳性率近90％；美国中产阶层人群中约有50-60％可检出HSV-1抗体，而社会经济状况较差的群体则接近90％。

HSV可形成潜伏感染，即病毒沿神经髓鞘到达三叉神经节(HSV-l)和脊神经节(HSV-2)细胞中或周围星形神经胶质细胞，以潜伏状态持续存在，与机体处于相对平衡，不引起临床症状，并在一定外界因素的刺激下重新激活病毒繁殖。其特点是每次复发病变往往发生于同一部位。最常见在唇鼻间皮肤与粘膜交界处出现成群的小疱疹。疱疹性角膜炎、疱疹性宫颈炎等亦可反复发作。研究表明HSV-2与人类免疫缺陷病毒1型(HIV-l)感染密切相关。HIV-1感染可加重HS V-2感染导致的临床症状、增加HSV-2复发频率；HSV-2感染则有利于HIV-1的传播，在共感染病人中，可加剧HIV-1引起的疾病发生进程(Drugs，2007，67(2)：155-174；Lancet Infect Dis，2008，8(8)：490-497)。

由于缺乏有效的病毒疫苗，药物治疗成为治疗HSV感染的主要途径。目前临床用核苷类似物抗病毒药物主要适用于病毒复制的原发性和复发性感染，对潜伏感染则难以奏效。早期核苷类似物包括碘脱氧尿普、阿糖腺苷、三氟胸苷，其选择性低，对正常细胞毒性较大。目前广泛使用的是以阿昔洛韦(Acyclovir，ACV)为代表的无环鸟苷类似物，包括阿昔洛韦、伐昔洛韦(阿昔洛韦前体药)、喷昔洛韦、泛昔洛韦(喷昔洛韦前体药)以及更昔洛韦。此外还有以焦磷酸钠为代表的非核苷类似物。

核苷类似物作为治疗HSV感染的主要途径，其存在的问题主要包括两个方面：(l)部分核苷类似物如碘脱氧尿苷、三氟胸苷、阿糖腺苷及更昔洛韦等为诱变剂，导致其使用安全性降低；(2)耐药株的出现增加了疾病治疗的困难。如对于无环鸟苷类药物而言，当HSV的胸苷激酶(TK)或DNA聚合酶发生突变时，病毒即可产生耐药能力。由于临床用核苷类似物基本都作用于病毒TK或DNA聚合酶相同位点，对一种核苷类似物耐药的病毒株往往对其他核苷类似物也具有耐药能力，因而使HSV感染的治疗更加困难。有研究表明，从感染HIV的病人中分离的HSV约有6％为ACV耐药株，此时比ACV毒性更大的焦磷酸盐类则成为唯一的治疗用替代药(Arch Intern Med，2003，163(1)：76-80)。因此，寻找高效、低毒的抗单纯疱疹病毒的药物已成为医药界关注的课题。

中药莪术及其挥发油制剂作为抗病毒药物广泛应用于临床。2010版药典规定莪术醇为临床抗病毒药物莪术油质量控制的指标成分。药理学研究表明莪术醇具有抗病毒、抗肿瘤、保肝、抗早孕等多方面的作用。莪术醇具有与莪术油一致的药理活性，因此，莪术醇是莪术油的主要药效成分之一。但由于其水溶性很差，只易溶于乙醇、丙酮、氯仿等小极性有机溶剂中，长期以来一直未能开发为临床用药。鉴于其结构中化学可变化位点的局限，截止目前采用有机化学方法对它进行结构修饰的报道比较少。本课题组对莪术醇进行了化学结构修饰研究，并发现了具有良好抗单纯疱疹病毒的活性衍生物。

发明内容

本发明的首要目的在于提供新的莪术醇衍生物。

本发明的另一目的在于提供所述莪术醇衍生物的制备方法。

本发明的再一目的在于提供所述莪术醇衍生物在治疗单纯疱疹病毒感染疾病方面的应用。

本发明所述的化合物具有通式Ⅰ的结构：

其中，R代表硝基苯氧基、氨基、苄氨基、苄硫基、对氰基苯氧基。

本发明的新的莪术醇衍生物的化学名称和化学结构式优选如下：

(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-邻硝基苯氧基愈创木醇(1)

(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-间硝基苯氧基愈创木醇(2)

(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-对硝基苯氧基愈创木醇(3)

(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-苄氨基愈创木醇(4)

(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-氨基愈创木醇(5)

(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-二甲氨基愈创木醇(6)

(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-二乙氨基愈创木醇(7)

(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-苄硫基愈创木醇(8)

(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-对氧苯甲腈基愈创木醇(9)

本发明提供了上述化合物的制备方法：

莪术醇在m-CPBA的作用下，得到了14位双键环氧化后，在碱性条件下，通过开环脱水，形成了关键的中间体(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-8,14-愈创木二醇，并在此中间体的基础上，将醇羟基转化为反应活性比较高的卤代烃，设计并合成了上述化合物。

所述莪术醇衍生物可以作为由单纯疱疹病毒引起的各种疾病的治疗药物，包括常见的龈口炎，唇疱疹、湿疹样疱疹、疱疹性角膜炎、疱疹性脑炎、生殖器疱疹等。

所述抗单纯疱疹病毒药物含有治疗有效量的上述莪术醇衍生物和药学上可接受的载体。

本发明莪术醇衍生物可与药学意义上可用的各种辅料制成各种常规制剂和剂型，采用口服、胃肠外(例如，肌内、腹膜内、静脉内、脑池内注射或者输注、皮下注射或者植入，或通过吸入喷雾剂，或经鼻、阴道、直肠、舌下或者局部给药途径)给药的方式，例如，可为片剂、酊剂、含水或油混悬剂、可分散性粉剂、颗粒剂、乳剂、糖浆剂、注射剂、硬胶囊或者软胶囊等，用于治疗抗单纯疱疹病毒感染疾病。

本发明相对现有技术具有如下的优点及效果：

(1)提供了新的抗单纯疱疹病毒的化合物，其中化合物3和9抗单纯疱疹病毒活性较阿昔洛韦更强；(2)本发明上述化合物的制备工艺简单，药品纯度高、质量稳定，易于进行大规模工业生产，具有良好的研究开发前景。

具体实施方式

本发明可通过下面的实施例加以说明。

实施例1：本发明化合物(1)的制备

中间体的制备：

将m-CPBA(17.2g，1mol)溶解于二氯甲烷(100ml)中，0℃下加入到莪术醇(11.8g，0.05mol)的二氯甲烷(100ml)溶液中，保持0℃搅拌2小时。反应结束后，反应液用NaOH(2mol/l)溶液萃取3次，合并有机相，再用水萃取至中性，无水硫酸钠干燥。将溶液浓缩蒸干，得粗品经硅胶柱色谱纯化(环己烷∶乙酸乙酯＝50∶1～10∶1)得到白色蜡状固体10,14-环氧莪术醇11.95g，收率95％。

将10，14-环氧莪术醇(10.08g，0.04mol)溶解于乙腈中(600ml)中，室温下加入三水高氯酸锂(6.4g，0.04mol)，二乙胺(20ml)。所得混合物加热回流过夜。反应液浓缩蒸干，用等体积的乙酸乙酯和水萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥。将溶液浓缩蒸干，得粗品经硅胶柱色谱纯化(环己烷∶乙酸乙酯＝10∶1～4∶1)得白色针状结晶(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-8,14-愈创木二醇3.04g，收率30％。化合物的波谱数据如下：MS(ESI)m/z:275.2[M+Na]⁺；¹H-NMR(300MHz,CDCl₃)δ(ppm)：1.98(1H,dd,J＝9.2,15.3Hz,H-1)、1.89(1H,m,H-2a),1.52(1H,m,H-2b)、1.89(1H,m,H-3a)、1.56(1H,m,H-3b)、1.80(1H,m,H-4)、2.19(1H,dd,J＝11,12.6Hz,H-6a)、1.23(1H,dd,J＝7.3,12.6Hz,H-6B)、1.65(1H,dd,J＝3.2,10.6Hz,H-7)、5.8(1H,s,H-9)、1.45(1H,m,H-11)、0.85(3H,d,J＝6.4Hz,H-12)、0.98(3H,d,J＝6.4Hz,H-13)、4.06(2H,brs,H-14)、1.00(3H,d,J＝5.3Hz,H-15)；¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃)δ(ppm)：49.8(C-1)、27.8(C-2)、31.4(C-3)、40.4(C-4)、87.4(C-5)、36.6(C-6)、59.6(C-7)、103.7(C-8)、123.8(C-9)、144.1(C-10)、31.0(C-11)、22.8(C-12)、21.6(C-13)、64.6(C-14)、11.9(C-15)。

将(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-8,14-愈创木二醇(2.52g,0.01mol)，三苯基膦(5.24g，0.02mol)依次加入到CCl₄/CH₂Cl₂(1∶1，400ml)。所得混合物加热回流3小时。反应液浓缩蒸干，得粗品经硅胶柱色谱纯化(环己烷∶乙酸乙酯＝50∶1～10∶1)得白色油状化合物(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-氯代愈创木醇2.56g，收率95％。

目标化合物(1)的制备：

将(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-氯代愈创木醇(27mg，0.1mmol)溶解于丙酮(4ml)中，加入邻硝基苯酚(16.6mg，0.12mmol)，无水碳酸钾(20.7mg，0.15mmol)，碘化钾(5mg，0.03mmol)。所得混合物加热回流3小时。反应液浓缩蒸干，所得粗品经PTLC纯化(环己烷∶乙酸乙酯＝2.5∶1，乙酸乙酯洗脱)得无色油状化合物(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-邻硝基苯氧基愈创木醇(1)27.9mg，收率75％。

实施例2：本发明化合物(2)的制备

中间体的制备：同实施例1中中间体的制备方法。

目标化合物(2)的制备：

将(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-氯代愈创木醇(27mg，0.1mmol)溶解于丙酮(4ml)中，加入间硝基苯酚(16.6mg，0.12mmol)，无水碳酸钾(20.7mg，0.15mmol)，碘化钾(5mg，0.03mmol)。所得混合物加热回流3小时。反应液浓缩蒸干，所得粗品经PTLC纯化(环己烷∶乙酸乙酯＝2.5∶1，乙酸乙酯洗脱)得无色油状化合物(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-间硝基苯氧基愈创木醇(2)26.1mg，收率70％。化合物的波谱数据如下：MS(ESI)m/z:396.0[M+Na]⁺；¹H-NMR(300MHz,CDCl₃)δ(ppm)：2.08(1H,dd,J＝6.4,9.3Hz,H-1)、1.93(1H,m,H-2a)、1.59(1H,m,H-2b)、1.93(1H,m,H-3a)、1.59(1H,m,H-3b)、1.84(1H,m,H-4)、2.20(1H,dd,J＝10.9,12.7Hz,H-6a)、1.21(1H,dd,J＝7.3,12.7Hz,H-6b)、1.66(1H,dd,J＝3.2,10.6Hz,H-7)、5.95(1H,s,H-9)、1.37(1H,m,H-11)、0.82(3H,d,J＝6.5Hz,H-12)、0.94(3H,d,J＝6.5Hz,H-13)、4.53(2H,brs,H-14)、1.00(3H,d,J＝6.4Hz,H-15)、7.70(1H,d,J＝8.1Hz,H-2′)、7.80(1H,d,J＝8.1Hz,H-4′)、7.38(1H,dd,J＝2.38.2Hz,H-5′)、7.24(1H,d,J＝2.3Hz,H-6′)；¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃)δ(ppm)：49.7(C-1)、27.6(C-2)、31.3(C-3)、40.4(C-4)、87.5(C-5)、36.6(C-6)、59.8(C-7)、103.6(C-8)、127.5(C-9)、139.2(C-10)、31.0(C-11)、22.7(C-12)、21.5(C-13)、70.2(C-14)、11.8(C-15)、159.2(C-1′)、109.5(C-2′)、149.3(C-3′)、116.2(C-4′)、122.2(C-5′)、130.2(C-6′)。

实施例3：本发明化合物(3)的制备

中间体的制备：同实施例1中中间体的制备方法。

目标化合物(3)的制备：

将(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-氯代愈创木醇(27mg，0.1mmol)溶解于丙酮(4ml)中，加入对硝基苯酚(16.6mg，0.12mmol)，无水碳酸钾(20.7mg，0.15mmol)，碘化钾(5mg，0.03mmol)。所得混合物加热回流3小时。反应液浓缩蒸干，所得粗品经PTLC纯化(环己烷∶乙酸乙酯＝2.5∶1，乙酸乙酯洗脱)得无色油状化合物(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-对硝基苯氧基愈创木醇(3)31.7mg，收率85％。化合物的波谱数据如下：MS(ESI)m/z:396.0[M+Na]⁺；¹H-NMR(300MHz,CDCl₃)δ(ppm)：2.07(1H,t,J＝7.8Hz,H-1)、1.88(1H,m,H-2a)、1.59(1H,m,H-2b)、1.91(1H,m,H-3a)、1.56(1H,m,H-3b)、1.83(1H,m,H-4)、2.21(1H,dd,J＝10.9,12.7Hz,H-6a)、1.21(1H,dd,J＝7.3,12.7Hz,H-6b)、1.65(1H,dd,J＝3.2,10.7Hz,H-7)、5.94(1H,s,H-9)、1.40(1H,m,H-11)、0.84(3H,d,J＝6.5Hz,H-12)、0.96(3H,d,J＝6.5Hz,H-13)、4.53(2H,brs,H-14)、1.00(3H,d,J＝6.4Hz,H-15)、6.95(2H,d,J＝9.2Hz,H-2′,H-6′)、8.17(2H,d,J＝9.2Hz,H-3′,H-5′)；¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃)δ(ppm)：49.7(C-1)、27.6(C-2)、31.3(C-3)、40.4(C-4)、87.3(C-5)、36.6(C-6)、59.9(C-7)、103.5(C-8)、127.5(C-9)、138.9(C-10)、31.0(C-11)、22.8(C-12)、21.5(C-13)、70.2(C-14)、11.9(C-15)、163.7(C-1′)、115.0(C-2′,C-6′)、126.1(C-3′,C-5′)、141.8(C-4′)。

实施例4：本发明化合物(4)的制备

中间体的制备：同实施例1中中间体的制备方法。

目标化合物(4)的制备：

将(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-氯代愈创木醇(27mg，0.1mmol)溶解于DMF(2ml)中，加入苄胺(100μl)。所得混合物70℃反应过夜。反应液浓缩蒸干，所得粗品经PTLC纯化(环己烷∶乙酸乙酯＝2∶1，乙酸乙酯洗脱)得无色油状化合物(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-苄氨基愈创木醇423.9mg，收率70％。化合物的波谱数据如下：MS(ESI)m/z:342.1[M+H]⁺；¹H-NMR(300MHz,CDCl₃)δ(ppm)：2.03(1H,t,J＝9.1Hz,H-1)、1.86(1H,m,H-2a)、1.51(1H,m,H-2b)、1.86(1H,m,H-3a)、1.51(1H,m,H-3b)、1.81(1H,m,H-4)、2.18(1H,t,J＝12.1Hz,H-6a)、1.22(1H,dd,J＝7.2,12.1Hz,H-6b)、1.63(1H,dd,J＝3.2,10.7Hz,H-7)、5.75(1H,s,H-9)、1.46(1H,m,H-11)、0.87(3H,d,J＝6.4Hz,H-12)、0.98(3H,brs,H-13)、3.17(2H,brs,H-14)、1.00(3H,brs,H-15)、3.75(2H,dd,J＝13.2,22.9Hz,H-16)、7.31(2H,d,J＝6Hz,H-2′,H-6′)、7.23(2H,m,H-3′,H-5′)、7.29(1H,m,H-4′)；¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃)δ(ppm)：50.7(C-1)、27.8(C-2)、31.3(C-3)、40.5(C-4)、87.1(C-5)、36.8(C-6)、59.7(C-7)、103.6(C-8)、124.8(C-9)、143.0(C-10)、31.3(C-11)、22.9(C-12)、21.6(C-13)、52.2(C-14)、12.0(C-15)、53.3(C-16)、140.3(C-1′)、128.6(C-2′,C-6′)、128.4(C-3′,C-5′)、127.2(C-4′)。

实施例5：本发明化合物(5)的制备

中间体的制备：同实施例1中中间体的制备方法。

目标化合物(5)的制备：

将(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-氯代愈创木醇(27mg，0.1mmol)，加入到氨水(4ml)中。所得混合物加热回流3小时。反应液浓缩蒸干，所得粗品经PTLC纯化(氯仿∶甲醇＝2∶1，甲醇洗脱)得白色蜡状固体(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-氨基愈创木醇(5)13.3mg，收率53％。化合物的波谱数据如下：MS(ESI)m/z:251.9[M+H]+；1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)：1.98(1H,dd,J＝9.2,15.3Hz,H-1)、1.89(1H,m,H-2a)、1.51(1H,m,H-2b)、1.89(1H,m,H-3a、1.56(1H,m,H-3b)、1.80(1H,m,H-4)、2.17(1H,t,J＝12.6Hz,H-6a)、1.19(1H,dd,J＝7.3,12.6Hz,H-6b)、1.65(1H,dd,J＝3.2,10.6Hz,H-7)、5.75(1H,s,H-9)、1.43(1H,m,H-11)、0.85(3H,d,J＝6.4Hz,H-12)、0.96(3H,brs,H-13)、3.26(2H,brs,H-14)、0.98(3H,brs,H-15)；13C-NMR(75MHz,CDCl3)δ(ppm)：50.8(C-1)、27.8(C-2)、31.4(C-3)、40.4(C-4)、87.0(C-5)、36.6(C-6)、59.3(C-7)、103.7(C-8)、123.4(C-9)、143.6(C-10)、31.0(C-11)、22.8(C-2)、21.7(C-13)、64.4(C-14)、11.9(C-15)。

实施例6：本发明化合物(6)的制备

中间体的制备：同实施例1中中间体的制备方法。

目标化合物(6)的制备：

将(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-氯代愈创木醇(27mg，0.1mmol)溶解于DMF(2ml)中，加入二甲胺盐酸盐(24.3mg，0.03mmol)、三乙胺(50μl)。所得混合物70℃反应过夜。反应液浓缩蒸干，所得粗品经PTLC纯化(环己烷∶乙酸乙酯＝1∶1，乙酸乙酯洗脱)得白色蜡状固体(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-二甲氨基愈创木醇(6)17.8mg，收率63％。化合物的波谱数据如下：MS(ESI)m/z:280.0[M+H]⁺；¹H-NMR(300MHz,CDCl₃)δ(ppm)：2.08(1H,t,J＝8.5Hz,H-1)、1.87(1H,m,H-2a)、1.50(1H,m,H-2b)、1.88(1H,m,H-3a)、1.53(1H,m,H-3b)、1.80(1H,m,H-4)、2.15(1H,m,H-6a)、1.20(1H,dd,J＝7.0,12.4Hz,H-6b)、1.62(1H,dd,J＝3.1,10.5Hz,H-7)、5.71(1H,s,H-9)、1.42(1H,m,H-11)、0.86(3H,d,J＝6.4Hz,H-12)、0.98(3H,s,H-13)、3.07(1H,J＝13.0Hz,H-14a)、2.51(1H,J＝13.0Hz,H-14b)、1.00(3H,s,H-15)、2.18(6H,s,N-1)；¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃)δ(ppm)：50.5(C-1)、27.5(C-2)、31.3(C-3)、40.4(C-4)、87.0(C-5)、36.8(C-6)、59.9(C-7)、103.5(C-8)、126.9(C-9)、142.4(C-10)、31.2(C-11)、22.9(C-12)、21.6(C-13)、64.0(C-14)、12.0(C-15)、45.8(N-1)。

实施例7：本发明化合物(7)的制备

中间体的制备：同实施例1中中间体的制备方法。

目标化合物(7)的制备：

将(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-氯代愈创木醇(27mg，0.1mmol)溶解于DMF(2ml)中，加入二乙胺(50μl)。所得混合物70℃反应过夜。反应液浓缩蒸干，所得粗品经PTLC纯化(环己烷∶乙酸乙酯＝1∶1，乙酸乙酯洗脱)得白色蜡状固体(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-二乙氨基愈创木醇(7)23.9mg，收率78％。化合物的波谱数据如下：MS(ESI)m/z:308.1[M+H]⁺；¹H-NMR(300MHz,CDCl₃)δ(ppm)：2.13(1H,m,H-1)、1.89(1H,m,H-2a)、1.46(1H,m,H-2b)、1.89(1H,m,H-3a)、1.52(1H,m,H-3b)、1.80(1H,m,H-4)、2.18(1H,m,H-6a)、1.20(1H,dd,J＝6.5,12.0Hz,H-6b)、1.64(1H,dd,J＝3.5,10.9Hz,H-7)、5.77(1H,s,H-9)、1.39(1H,m,H-11)、0.86(3H,d,J＝6.4Hz,H-12)、0.98(3H,d,J＝6.4Hz,H-13)、3.12(1H,J＝13.6Hz,H-14a)、2.81(1H,J＝13.6Hz,H-14b)、1.00(3H,d,J＝5.9Hz,H-15)、2.63(2H,q,J＝6.4Hz,N-1a)、2.46(2H,q,J＝6.4Hz,N-1b)、1.04(6H,m,N-2)；¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃)δ(ppm)：50.5(C-1)、27.7(C-2)、31.4(C-3)、40.4(C-4)、87.1(C-5)、36.8(C-6)、59.9(C-7)、103.5(C-8)、127.2(C-9)、142.2(C-10)、31.2(C-11)、22.9(C-12)、21.6(C-13)、56.7(C-14)、12.0(C-15)、46.9(N-1)、11.1(N-2)。

实施例8：本发明化合物(8)的制备

中间体的制备：同实施例1中中间体的制备方法。

目标化合物(8)的制备：

将(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-氯代愈创木醇(27mg，0.1mmol)溶解于DMF(2ml)中，加入苄硫醇(50μl)，碳酸钾(20.7mg，0.15mmol)。所得混合物70℃反应过夜。反应液浓缩蒸干，粗品经PTLC纯化(环己烷∶乙酸乙酯＝5∶1，乙酸乙酯洗脱)得淡黄色油状化合物(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-苄硫基愈创木醇(8)25mg，收率70％。化合物的波谱数据如下：MS(ESI)m/z:381.0[M+Na]⁺；¹H-NMR(300MHz,CDCl₃)δ(ppm)：2.14(1H,brs,H-1)、1.86(1H,m,H-2a)、1.53(1H,m,H-2b)、1.86(1H,m,H-3a)、1.53(1H,m,H-3b)、1.80(1H,m,H-4)、2.23(1H,dd,J＝10.2,12.2Hz,H-6a)、1.24(1H,dd,J＝7.1,11.9Hz,H-6b)、1.63(1H,dd,J＝3.4,10.6Hz,H-7)、5.70(1H,s,H-9)、1.43(1H,m,H-11)、0.90(3H,d,J＝6.4Hz,H-12)、0.98(3H,d,J＝6.4Hz,H-13)、2.91(2H,brs,H-14)、1.03(3H,d,J＝6.6Hz,H-15)、3.63(2H,brs,H-16)、7.30(2H,d,J＝6Hz,H-2′,H-6′)、7.23(2H,m,H-3′,H-5′)、7.28(1H,m,H-4′)；¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃)δ(ppm)：50.3(C-1)、27.5(C-2)、31.7(C-3)、40.3(C-4)、87.2(C-5)、36.9(C-6)、59.7(C-7)、103.6(C-8)、127.0(C-9)、140.7(C-10)、31.2(C-11)、22.9(C-12)、21.5(C-13)、35.4(C-14)、12.0(C-15)、35.8(C-16)、138.2(C-1′)、129.1(C-2′,C-6′)、128.8(C-3′,C-5′)、127.3(C-4′)。

实施例9：本发明化合物(9)的制备

中间体的制备：同实施例1中中间体的制备方法。

目标化合物(9)的制备：

将(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-氯代愈创木醇(27mg，0.1mmol)溶解于丙酮(4ml)中，加入对羟基苯甲腈(14.2mg，0.12mmol)，无水碳酸钾(20.7mg，0.15mmol)，碘化钾(5mg，0.03mmol)。所得混合物加热回流3小时。反应液浓缩蒸干，所得粗品经PTLC纯化(环己烷∶乙酸乙酯＝2.5∶1，乙酸乙酯洗脱)得无色油状化合物(1S,4S,5S,7S,8R)-5,8-环氧-9,10-烯-14-对氧苯甲腈基愈创木醇(9)26.1mg，收率71％。化合物的波谱数据如下：MS(ESI)m/z:376.0[M+Na]⁺；¹H-NMR(300MHz,CDCl₃)δ(ppm)：2.06(1H,t,8.3Hz,H-1)、1.90(1H,m,H-2a)、1.59(1H,m,H-2b)、1.90(1H,m,H-3a)、1.59(1H,m,H-3b)、1.83(1H,m,H-4)、2.21(1H,dd,J＝10.9,12.7Hz,H-6a)、1.20(1H,dd,J＝7.3,12.7Hz,H-6b)、1.65(1H,dd,J＝3.4,10.6Hz,H-7)、5.91(1H,s,H-9)、1.39(1H,m,H-11)、0.84(3H,d,J＝6.5Hz,H-12)、0.96(3H,d,J＝6.5Hz,H-13)、4.90(2H,d,J＝3.1Hz,H-14)、1.00(3H,d,J＝6.4Hz,H-15)、6.94(2H,d,J＝8.8Hz,H-2′,H-6′)、7.55(2H,d,J＝8.8Hz,H-3′,H-5′)；¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃)δ(ppm)：49.7(C-1)、27.6(C-2)、31.3(C-3)、40.4(C-4)、87.3(C-5)、36.6(C-6)、59.9(C-7)、103.5(C-8)、127.3(C-9)、139.1(C-10)、31.0(C-11)、22.8(C-12)、21.5(C-13)、69.8(C-14)、11.9(C-15)、162.0(C-1′)、115.8(C-2′,C-6′)、134.1(C-3′,C-5′)、104.4(C-4′)、119.3(CN)。

实施例10：本发明化合物抗单纯疱疹病毒HSV-Ⅱ333活性实验

一、实验材料

1、药物：莪术醇衍生物样品化合物1～9

2、稀释液0.1％DMSO-PBS

3、细胞：Vero细胞

4、病毒：HSV-Ⅱ333

5、主要试剂：DMEM(GiBCO)、小牛血清、胎牛血清(Sigma)、胰蛋白酶等

二、实验方法

1、细胞培养：用细胞接种于96孔培养板内，待细胞长成单层；

2、病毒增殖：HSV-Ⅱ333；

3、病毒滴度的测定

1)96孔培养板内接种细胞，培养至单层进行实验；

2)将原细胞培养板中的含有10％血清的培养液移出，病毒按照10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7和10^-8的稀释度加入细胞板中，35℃吸附30min后，加细胞维持液，同时设立正常细胞对照，35℃培养；

3)每天观察细胞的病变情况，记录结果。

4)计算TCID₅₀。

4、样品细胞毒性测定

1)选用病毒易感细胞Vero，加入不同浓度样品(ug/ml)，培养7天，每天观察细胞毒性，利用R-M公式计算半数中毒浓度(TD₅₀)和最大无毒浓度(TD₀)，重复试验2次，确定数值。

2)样品溶解方法：用DMSO试剂溶解药品配成浓度为10mg/ml的母液，使用时取1ul用DMEM培养基配制成最大浓度为100ug/ml的实验浓度，倍比稀释，依次为100ug/ml，50ug/m1，25ug/ml，12.5ug/ml，6.25ug/ml，3.125ug/ml。

3)设正常细胞对照。

4)实验结果见表1。

5、样品抗病毒实验方法

1)病毒感染剂量：Vero TCID₅₀10^4.6/孔；

2)样品设置三个浓度，以2^-1TD₅₀为最大浓度，分别为2^-1TD₅₀，2^-2TD₅₀，2^-3TD₅₀。

3)96孔板培养细胞，待细胞长成单层，分别加入100ul病毒液/孔，吸附半小时后，分别加入不同浓度样品，35℃培养24h-96h，观察CPE。

4)对照组：①病毒+细胞；②正常细胞；③阿昔洛韦对照组。

6、样品抗病毒实验结果

1)表1莪术醇衍生物对病毒致细胞病变作用的影响

2)表2莪术醇衍生物对Vero细胞毒性及体外抗HSV-Ⅱ333病毒作用

7、小结

本发明的化合物3和9抗HSV-Ⅱ333病毒的效果强于阿昔洛韦；1～2和4～8有治疗效果，但低于阿昔洛韦。

表1 莪术醇衍生物对病毒致细胞病变作用的影响

注：-示无细胞病变(很好的抑制病毒作用)；±示有延缓细胞病变作用(较好的抑制病毒作用)；+示1/4以下的细胞病变(中等程度的抑制病毒作用)；++示1/4～1/2的细胞有病变(较弱的抑制病毒作用)；+++示1/2～3/4的细胞有病变(弱的抑制病毒作用)；++++示3/4以上的细胞有病变(无抑制病毒作用)。

表2 莪术醇衍生物对Veio细胞毒性及休外抗HSV.II333病毒作用

药物	1	2	3	4	5	6	7	8	9	阿昔洛韦
											TC50	47.12	176.32	87.36	107.79	77.84	176.32	87.36	57.79	104.19	88.9
IC50	1.07	1.14	0.25	1.58	3.18	2.44	1.16	0.89	0.15	0.29

P＜0.001，药物浓度(Log10)与病毒抑制率成线性关系，存活率为三次测定后的平均值

实施例11：本发明化合物9片剂的制备

1.处方：

2.制备工艺：将原料、辅料分别过100目筛，备用；按照处方量称取原料和辅料；将化合物9、微晶纤维素、预胶化淀粉，混合均匀，加水适量，搅拌均匀，制成适宜软材；过20目筛制颗粒；颗粒在60℃条件下烘干；干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀；压片。

实施例12：本发明化合物9水针剂的制备

1.处方：

2.制备工艺：将化合物9、吐温-80、注射用水溶解配液，经活性炭吸附处理后过滤、定容、精滤、灌封、灭菌、检漏、灯检，后制成水针剂成品。

Claims

1.具有通式（I）的抗单纯疱疹病毒HSV的莪术醇衍生物：

Ⅰ

2.抗单纯疱疹病毒HSV的莪术醇衍生物，其特征在于，所述的化合物选自：

(1S, 4S, 5S, 7S, 8R)-5, 8-环氧-9,10-烯-14-邻硝基苯氧基愈创木醇 (1)

(1S, 4S, 5S, 7S, 8R)-5, 8-环氧-9,10-烯-14-间硝基苯氧基愈创木醇 (2)

(1S, 4S, 5S, 7S, 8R)-5, 8-环氧-9,10-烯-14-对硝基苯氧基愈创木醇 (3)

(1S, 4S, 5S, 7S, 8R)-5, 8-环氧-9,10-烯-14-苄氨基愈创木醇 (4)

(1S, 4S, 5S, 7S, 8R)-5, 8-环氧-9, 10-烯-14-氨基愈创木醇 (5)

(1S, 4S, 5S, 7S, 8R)-5, 8-环氧-9, 10-烯-14-二甲氨基愈创木醇 (6)

(1S, 4S, 5S, 7S, 8R)-5, 8-环氧-9, 10-烯-14-二乙氨基愈创木醇 (7)

(1S, 4S, 5S, 7S, 8R)-5, 8-环氧-9, 10-烯-14-苄硫基愈创木醇 (8)

(1S, 4S, 5S, 7S, 8R)-5, 8-环氧-9, 10-烯-14-对氧苯甲腈基愈创木醇 (9)

。

3.一种如权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）莪术醇在m-CPBA的作用下，得到了14位双键环氧化的化合物；

（2）在碱性条件下，通过开环脱水，形成了关键的中间体(1S, 4S, 5S, 7S, 8R)-5, 8-环氧-9, 10-烯-8, 14-愈创木二醇；

（3）在此中间体的基础上，将醇羟基转化为反应活性比较高的卤代烃(1S, 4S, 5S, 7S, 8R)- 5, 8-环氧-9, 10-烯-14-氯代愈创木醇，最终得到目标化合物。

4.权利要求1或2所述的化合物在制备治疗单纯疱疹病毒HSV感染性疾病药物中的应用。

5.一种药物组合物，包含权利要求1或2所述的化合物和药学上可接受的赋型剂。

6.根据权利要求1-2任何一项所述的化合物或权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述的化合物或组合物与药学上接受的载体混合制备临床上接受的制剂。