CN102093244A - 一种神经酰胺的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种从海葵中提取神经酰胺的方法，包括破碎、抽提、萃取、吸附、洗脱、蒸干、重结晶等步骤，得到纯度较高的神经酰胺。本方法操作简单，易放大生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种神经酰胺的提取方法，尤其涉及一种从海葵中提取神经酰胺的方法。
背景技术
神经酰胺(ceramide)即N-脂酰神经鞘胺醇，是细胞膜的组成成分-鞘磷脂的基本单位，由一长链的鞘胺醇和连接在其氨基端的饱和脂肪酸组成。它是体内一类重要的生物活性物质，主要存在于角质层中的细胞膜和细胞间基质中。
神经酰胺是人体皮肤最外侧的角质层细胞间类脂体的主要构成成分(＞50％)，起着防止水分散发、滋润和保护皮肤的重要作用。近年来开发的最新一代神经酰胺保湿剂，是水溶性脂质物质，它和构成皮肤角质层的物质结构相近，能很快渗透进皮肤，和角质层中的水结合，形成一种网状结构，锁住水分。有许多研究报告指出，使用含神经酰胺的外用膏类产品，可防止过敏性皮肤病和抑制黑色素褐斑。因此神经酰胺作为一种新型化妆品添加剂，有着广阔的市场空间。
在日本这种新颖的美容原料正在以每年15％左右的增长率迅速发展，市场的需求不断扩大。神经酰胺除了作为化妆品的添加剂，在功能性食品中的应用也非常广泛，成为一大热点。神经酰胺在服用后，经小肠吸收，转移到血液，然后运送到全身，使皮肤细胞得到良好的恢复和再生，同时还可以促使人体自身合成神经酰。
神经酰胺的来源非常广泛，可以从众多的海洋生物如海星、海葵、海绵、珊瑚中得到，也可以从被囊类动物和某些高等植物如大豆、洋葱中得到。但是现在提取神经酰胺的主要方法如高效液相色谱法、薄层色谱法等，受到实验仪器和成本的制约，一般不适用于大规模生产。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的是提供一种神经酰胺的提取方法，此方法具有工艺简单，容易放大的特点。
本发明所述的神经酰胺的提取方法，是以海葵为原料，通过以下步骤提取：
1)破碎：把海葵用自来水清洗干净，晾干，粉碎；
2)抽提：称取破碎好的海葵原料，加入1-3倍体积95％工业乙醇，在50-60℃搅拌3-4h，静置使固形物沉淀，倒出抽提液，重复抽提3-5次，合并抽提液，用0.45μm滤膜过滤，减压浓缩得浸膏；
3)萃取：将浸膏悬浮于30-60倍体积水中，以与水等体积乙酸乙酯搅拌萃取3-4h，静置分层后取出乙酸乙酯层，重复萃取2-3次，合并萃取液，减压浓缩得焦油状脂类混合物；
4)吸附：取萃取的脂类混合物溶于二氯甲烷，上大孔树脂色谱柱吸附，用2-5倍柱体积的正己烷洗柱；
5)洗脱：用极性逐渐增大的正己烷/乙醇进行梯度洗脱，通过神经酰胺苯甲酰化UV法检测洗脱液，合并含神经酰胺的洗脱液；
6)蒸干：减压蒸干洗脱液，得到物质固体；
7)重结晶：将上一步的到的固体物质溶于50-80℃丙酮，搅拌溶解，减压浓缩，于4-10℃结晶，减压抽滤收集晶体。
进一步的，所述大孔树脂色谱柱填料选用中等极性大孔吸附树脂。本发明中所述中等极性大孔树脂是含酯基的吸附树脂，且多功能团的甲基丙烯酸酯作为交联剂。其表面兼有疏水和亲水两部分。既可极性溶剂中吸附非极性物质，又可由非极性溶剂中吸附极性物质，也称为脂肪族吸附剂，例如聚丙烯酸酯型聚合物。
本发明具有以下优点：从海葵中提取神经酰胺的收率较高；不干扰海葵中其他天然活性的提取；分离出来的神经酰胺纯度高，可以应用于化妆品原料和神经酰胺单体的分离。由于本发明所述提取步骤为常规实验，因此操作简单，适用于大规模工业生产。
具体实施方式
结合具体实施例进行说明。
实施例1
取新鲜的海葵放入水中浸泡，冲洗干净，放在室外晾干，用搅拌机打碎。称取500g破碎海葵加入500ml的95％工业乙醇，在60℃搅拌3小时。停止搅拌，待固体物质沉淀下去收集抽提液，反复3次，合并抽提液，用0.45μm有机相滤膜过滤，然后用旋转蒸发仪浓缩抽提液得15克浸膏。将浸膏悬浮于1L蒸馏水中，加入1L乙酸乙酯，搅拌4h，静置2h分层，抽取乙酸乙酯层。重复萃取2次，合并萃取液，减压蒸干乙酸乙酯，得到棕色固体6.2g。把此固体溶于10ml二氯甲烷，上10*180mm苯乙烯型CG161大孔树脂柱(罗门哈斯)，上样流速为0.2ml/min。用20ml正己烷洗柱，流速为0.5ml/min。然后用极性逐渐增大的正己烷/乙醇进行梯度洗脱，流速为0.5ml/min，用苯甲酰化UV法检测后合并含有神经酰胺的洗脱液。旋转蒸发有机溶剂后得到粗制神经酰胺固体0.2g。将得到的固体溶于70℃的丙酮2ml中，搅拌至溶解，放入4℃冰箱结晶，减压抽滤通过0.45μm有机相滤膜，得神经酰胺结晶0.041g。
Claims (2)
1.一种神经酰胺的提取方法，其特征在于：以海葵为原料，通过以下步骤进行提取：
1)破碎：把海葵用自来水清洗干净，晾干，粉碎；
2)抽提：称取破碎好的海葵原料，加入1-3倍体积95％工业乙醇，在50-60℃搅拌3-4h，静置使固形物沉淀，倒出抽提液，重复抽提3-5次，合并抽提液，用0.45μm滤膜过滤，减压浓缩得浸膏；
3)萃取：将浸膏悬浮于30-60倍体积水中，用与水等体积乙酸乙酯搅拌萃取3h-4h，静置分层后取出乙酸乙酯层，重复萃取2-3次，合并萃取液，减压浓缩得焦油状脂类混合物；
4)吸附：取萃取的脂类混合物溶于二氯甲烷，上大孔树脂色谱柱吸附，用2-5倍柱体积的正己烷洗柱；
5)洗脱：用极性逐渐增大的正己烷/乙醇进行梯度洗脱，通过神经酰胺苯甲酰化UV法检测洗脱液，合并含神经酰胺的洗脱液；
6)蒸干：减压蒸干洗脱液，得到物质固体；
7)重结晶：将上一步得到的固体物质溶于50-80℃丙酮，搅拌溶解，减压浓缩，于4-10℃结晶，减压抽滤收集晶体。
2.根据专利要求1所述的神经酰胺的提取方法，其特征在于：大孔树脂色谱柱填料选用中等极性大孔吸附树脂。
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