CN102091240A - 一种大川芎方微乳鼻腔给药制剂及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种大川芎方微乳鼻腔给药制剂及其制备方法与应用，该大川芎方微乳鼻腔给药制剂由川芎挥发油1～3份、川芎和天麻提取物10～20份、表面活性剂，如聚氧乙烯氢化蓖麻油6～8份和助表面活性剂，如聚乙二醇-400，2～4份制成。本发明提供的大川芎方微乳，作为油/水分散体系，具有很好的溶解脂溶性的川芎挥发油和水溶性的川芎、天麻活性提取物，载药量高，且稳定性好，易吸收，起效迅速，并且生物利用度高，镇痛作用强，药物的脑靶向性强，毒副作用小，且可以制成鼻腔喷雾制剂或滴鼻剂，临床用药方便。

Description

一种大川芎方微乳鼻腔给药制剂及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及一种中药复方，具体涉及一种大川芎方的微乳鼻腔给药制剂及其制备方法和其应用。

背景技术

大川芎方出自《宣明论方》(公元1172年成书)，川芎与天麻是历代治疗偏头痛的要药，两者配伍具有深刻的中医内涵。中医认为，川芎味辛，性温，性善疏通，上行头目，旁达肌腠，能行气开郁，活血化瘀，祛风止痛；天麻甘平，具有平肝熄风、通络止痛之功效，二药合用，相辅相成，共奏活血化瘀、平肝息风、镇定止痛之疗效。

微乳(microemulsion，ME)是一种新型的药物载体，在室温下易于制备，对水溶性和脂溶性药物都有溶解能力。目前，药物学家普遍认为，微乳是一种极具潜力的新型药物载体，具有其它药物载体不可比拟的优点，且其制剂可制成黏膜、口服、注射、透皮等不同的给药系统，因此微乳制剂在医药领域的应用具有重要意义。

偏头痛(migraine)是一种原发性颅内血管运动和神经功能调节失常所引起的复发性疾病，属于中医学“头痛”、“头风”的范畴。具有发病率高，疼痛剧烈，发作迅速，迁延难愈的特点。近年来其发病率呈上升趋势，世界卫生组织(WHO)将其看作与四肢瘫痪、痴呆等同样严重的致残性疾病，严重影响患者的生活质量。偏头痛的发病机制仍未完全阐明，而研制新的偏头痛治疗药物，是当今世界医学的热点之一。尽管现代医学治疗偏头痛的药物不断更新，但是目前临床用药存在一些缺点：(1)口服药物起效缓慢、生物利用度低；(2)远期疗效不肯定；(3)静脉给药不方便；(4)中药制剂组方复杂、服用量大；(5)化学药物价格昂贵，不良反应大。这严重影响了在我国的临床推广使用。脑部是靶向给药的一个重要部位，很多药物需要进入人脑内才能发挥好的疗效，然而，由于血脑屏障的存在，常规途径给药后在脑内药物浓度都比较低，限制了脑内疾病的治疗。

因此，寻求安全有效、速效止痛、生物利用度高，携带和服用方便、价格合理，防治偏头痛新型药物制剂具有重要意义。

发明内容

发明目的：本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种安全有效、用药量少、起效迅速、生物利用度高、止痛效果更好的大川芎方微乳鼻腔给药制剂，本发明另一个目的是提供该大川芎方微乳鼻腔给药制剂的制备方法和其在防治偏头痛中的应用。大川芎方在现有制剂中仅有口服制剂，且现有制剂中仅保留了水溶性有效成分，弃去了挥发油成分，大川芎方中川芎含有以藁本内酯为代表的挥发油成分，本发明经实验证明以藁本内酯为代表的挥发油成分具有改善微循环，增加脑血流量，调节心血管功能，抗凝血，镇痛、镇静等作用，是大川芎方治疗偏头痛的重要物质基础，本发明以微乳制剂的方式把极性低的挥发油有效成分和极性高的水溶性成分有机结合，共同发挥协同增效的镇痛作用。

技术方案：为了实现以上目的，本发明所采取的技术方案为：

一种大川芎方微乳鼻腔给药制剂，它是由下列重量份数的原料制成：川芎挥发油1～3份、川芎和天麻提取物10～20份、表面活性剂6～8份和助表面活性剂2～4份。

作为优选方案，以上所述的大川芎方微乳鼻腔给药制剂，它是由下列重量份数的原料制成：川芎挥发油1～2份、川芎和天麻提取物共12～16份、表面活性剂6～7份和助表面活性剂2～3份。

作为更优选的方案，以上所述的大川芎方微乳鼻腔给药制剂，它是由下列重量份数的原料制成：川芎挥发油2份、川芎和天麻提取物共12份、表面活性剂7份和助表面活性剂3份。

作为优选方案，以上所述的大川芎方微乳鼻腔给药制剂，其中川芎和天麻的重量比例为4∶1。

作为优选方案，以上所述的大川芎方微乳鼻腔给药制剂，所述的表面活性剂为吐温-80、聚氧乙烯氢化蓖麻油或泊洛沙姆，所述的助表面活性剂为乙醇、1，2-丙二醇或聚乙二醇。

作为更优选的方案，以上所述的大川芎方微乳鼻腔给药制剂，所述的表面活性剂为聚氧乙烯氢化蓖麻油，所述的助表面活性剂为聚乙二醇-400。

表面活性剂的选择对微乳的形成很重要，微乳一般采用高HLB值(9～20)的非离子型表面活性剂，其毒性较其它离子型的表面活性剂低，在溶液中比较稳定，不易受无机盐类、强电解质等的影响，也不易受酸碱的影响，可以与多种类型的助表面活性剂合用，溶血作用较小，能与大多数药物配伍，且高HLB值表面活性剂的强亲水性也是立即形成O/W型微乳所必须的。微乳要求表面活性剂本身也能溶解相对大量的疏水性药物，这样可以防止药物沉积而延长药物分子的溶解状态，这对有效吸收非常重要。本发明选用吐温-80(Tween-80)、聚氧乙烯氢化蓖麻油(Cremophor RH-40)及泊洛沙姆(Pluronic F68)三种表面活性剂进行筛选。

微乳的形成一般还需要加入助表面活性剂，协调表面活性剂降低界面张力；增加界面流动性，减少微乳形成时的界面弯曲能，调节表面活性剂的HLB值，使表面活性剂在油—水界面上有较大的吸附。常用的助表面活性剂有短链醇、有机氨、烷基素酸、单双烷基酸、甘油酯以及聚氧乙烯脂肪酸酯等，在这些助表面活性剂中，醇类的应用最为广泛，醇类能提高载药量，增大药物溶解度，所形成的微乳区范围大，但在放置过程中醇类易于挥发，导致主药析出。本发明采用乙醇(EtOH)、1，2-丙二醇(PrOH)、聚乙二醇-400(PEG-400)三种助表面活性剂进行筛选。

一、微乳处方筛选

1.实验设计

根据微乳形成理论，结合中药复方微乳体系处方设计对安全性的特殊要求，并对本发明大川芎方微乳鼻腔给药途径特点，按处方量中川芎挥发油与整方醇提部位水溶液固定比例(油相和水相分别为等量药材的提取物)，用滴定法结合伪三元相图进行初步筛选，最后根据微乳理化性质及特点并结合鼻腔给药要求确定微乳处方组成。表面活性剂有：Tween-80、Cremophor RH-40、Pluronic F68，助表面活性剂有：EtOH、PrOH及PEG-400，油相为川芎挥发油，水相为川芎和天麻提取物的水溶液。

2.处方筛选

将不同表面活性剂与不同助表面活性剂共1g按质量比值(Km)9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8、1∶9混匀置于具塞平底锥形瓶中，在25℃恒温磁力搅拌器搅拌下加入0.34mL川芎挥发油，然后按处方等量药材提取物的水溶液滴加水相并在磁力搅拌器下搅拌，观察测定各实验组的外观性状。具体实验结果如表1所示。

表1微乳处方筛选实验结果

从表1实验结果可看出，Cremophor RH-40与EtOH比例9∶1～4∶6，Cremophor RH-40与PEG400比例9∶1∶～5∶5及Cremophor RH-40与PrOH比例9∶1～6∶4能形成透明或半透明溶液；Tween80与EtOH比例9∶1～5∶5及Cremophor RH-40与PEG-400比例9∶1能形成透明或半透明溶液，从实验结果得出表面活性剂Cremophor RH-40与Tween-80和助表面活性剂乙醇和聚乙二醇-400配比符合微乳制剂要求，为本发明优选的微乳处方组成。

二、微乳的鉴定

微乳是一种均匀、低黏度、热力学稳定的透明或半透明分散体系，且液滴粒径在10～100nm之间。因此，根据这些特性并结合鼻腔给药特点，本部分通过稳定性试验(高速低温、常温离心试验及低温、常温稳定性试验)、电导率测定、折光率测定、相对密度、黏度测定及pH值测定等理化性质检测，粒度及其分布测定进行微乳鉴定。具体实验结果见表2至表4所示。

表2微乳稳定性试验结果

表3微乳理化性质测定结果

表4微乳粒径及粒度分布测定结果

根据本发明大川芎方活性成分，包括油相的川芎挥发油和水相的大川芎方提取物的特点和微乳性状的要求，由以上微乳稳定性试验，微乳理化性质测定和微乳粒径及粒度分布测定结果，表明本发明微乳处方中表面活性剂优选Crempohor RH-40，Crempohor RH-40是聚氧乙烯脂肪酸酯类，具有辅助溶解药物，降低表面张力，增大乳滴界面膜的柔顺性的优点。并且通过以上实验结果，本发明微乳处方中的助表面活性剂优选PEG类助表面活性剂，PEG类助表面活性剂与表面活性剂和油的相容性很好，PEG类助表面活性剂能够协调表面活性剂降低界面张力，增加界面流动性，减少微乳形成时的界面弯曲能，调节表面活性剂的HLB值，从而使表面活性剂在油--水界面上有较大的吸附，因此本发明所提供的微乳处方中优选PEG-400，PEG-400是一种毒性小且生理相容性好的助表面活性剂。

本发明通过以上微乳处方的筛选，由以上微乳外观性状、稳定性试验、理化性质测定、粒径及粒度分布测定结果表明，当表面活性剂和助表面活性剂的用量比为7∶3时，即实验编号2-③的组合，所得的大川芎方微乳具有很好的透明性状，尤其是稳定性好，且微乳的电导率、相对密度、黏度、折光率、pH值符合微乳要求，并且所得微乳的粒径(20～40nm)和分散指数等指标均符合微乳粒径的要求。

在以上优化处方的基础上，本发明在尽量减少表面活性剂用量的前提下，通过绘制伪三元相图，并结合微乳各种理化性质等特点，确定表面活性剂用量较少，鼻粘膜毒性较小，质量稳定的大川芎方微乳鼻腔给药系统，即表面活性剂Cremophor RH-40 7份，助表面活性剂PEG-400 3份，挥发油2份(折算成体积(ml)3.4份)，大川芎方提取物共12份。其中表面活性剂Cremophor RH-40和助表面活性剂PEG-400的用量比为7∶3。

本发明提供的以上微乳组分配比，表面活性剂和助表面活性剂配比合理，具有良好的生物相容性，特别是能够与大川芎方中提取的挥发油和水溶性成分能形成微乳，且不影响主药的药效和稳定性。

本发明提供的大川芎方微乳鼻腔给药制剂的制备方法，具体包括以下步骤：

(1)取川芎药材，粉碎，过筛，采用CO₂超临界萃取方法提取得到川芎挥发油，备用；

(2)取步骤(1)川芎药渣，用6～12倍量浓度为20～80％的乙醇加热回流提取2～3次，每次0.5～2.5小时，合并提取液，浓缩，得浓缩液，上大孔吸附树脂柱，吸附后将过柱液再上大孔吸附树脂柱吸附30～60分钟，然后用蒸馏水洗，再用浓度为20-80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得川芎提取物，备用；

(3)取川芎重量四分之一的天麻，用6～12倍量浓度为20～80％的乙醇加热回流提取2～3次，每次0.5～2.5小时，合并提取液，浓缩至1.0-2.0g(生药)/ml的浓缩液，加入乙醇，使乙醇浓度达60～80％，静置，取上清液，浓缩得到天麻提取物，备用；

(4)按权利要求1所述的重量比例取表面活性剂、助表面活性剂混匀，搅拌下加入步骤(1)制得川芎挥发油，混匀，然后分别滴加步骤(2)和步骤(3)制备得到的川芎和天麻提取物的水溶液，搅拌混匀，即可制得O/W型大川芎方微乳鼻腔给药制剂。

作为优选方案，以上所述的大川芎方微乳鼻腔给药制剂的制备方法，步骤(1)CO₂超临界萃取条件为萃取压力30～35MPa、萃取温度40～45℃、萃取时间2～3h。

大川芎方中川芎含有以藁本内酯为代表的挥发油及以阿魏酸为代表的酚酸等主要成分，天麻含有以天麻素为主的酚类化合物及其苷类，且为治疗偏头痛的活性成分。本发明对大川芎方中具有镇痛作用的藁本内酯进行清醒大鼠脑部动力学过程研究，结果显示藁本内酯鼻腔给药后，在0～20min时即可检测到，且15min达到最大值，表明藁本内酯通过鼻腔给药后可以快速进入脑部并可迅速发挥镇痛效果。川芎挥发油为大川芎方治疗偏头痛的活性成分，，因此，本发明采用CO₂超临界萃取川芎中的挥发油成分，超临界萃取技术是一种新型的中药成分提取分离技术，是一种有机溶剂用量少，低温下萃取，可保证热不稳定成分原有结构和活性的提取方法，且对低级性化合物具有很高的提取效率。因此本发明以得油率和藁本内酯含量等为评价指标，经过正交实验筛选各萃取影响因素包括萃取压力、萃取温度和萃取时间，确定川芎挥发油CO₂超临界萃取的最佳方案，即萃取压力为30～35MPa、萃取温度为40～45℃、萃取时间为2～3h；作为更优的方案，CO₂超临界萃取条件为萃取压力为35MPa、萃取温度为40℃、萃取时间为2h。

同时本发明对大川芎方水溶性成分的提取和精制工艺进行了筛选。经实验研究表明，川芎和天麻中的阿魏酸、天麻素为大川芎方亲水性醇提物中治疗偏头痛的有效组分，本发明以阿魏酸、天麻素含量为评价指标，通过正交试验对大川芎方水溶性活性成分的提取工艺进行优化。

作为优选方案，步骤(2)中，川芎药渣用10倍量浓度为70％的乙醇加热回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液，浓缩，得浓缩液，阿魏酸提取率可达90％，然后浓缩液再上D101型大孔吸附树脂柱，吸附后将过柱液再上D101型大孔吸附树脂柱吸附30分钟，然后先用10倍体积的蒸馏水洗脱，再用5倍体积，浓度为50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得川芎提取物。本发明通过对AB-8、D101和D401不同型号大孔树脂和不同浓度的乙醇洗脱液进行筛选，确定用D101型大孔吸附树脂和浓度为50％的乙醇可以更好地吸附和纯化阿魏酸等酚酸类有效成分，所得川芎提取物中阿魏酸等酚酸类有效成分含量可达30-40mg/g。

作为优选方案，步骤(3)取川芎重量四分之一的天麻药材，先用12倍量浓度为50％的乙醇加热回流提取1.5小时，然后再用10倍量浓度为50％的乙醇加热回流提取1.5小时，合并二次提取液，浓缩得比重为1.5g/ml的浓缩液，加入浓度95％乙醇，使乙醇浓度达70％，静置，取上清液，浓缩得到天麻提取物，备用；

其中鼻腔给药时，鼻黏膜可吸收被动扩散和主动转运的药物，包括亲脂性和亲水性药物且分子量小于1000的药物，但大分子化合物在不加适当吸收促进剂下不能较好地吸收，且会影响其他化合物的吸收，影响药物的疗效。因此，本发明在保证有效组分不损失的情况下，以阿魏酸、天麻素含量及得膏率为指标，对大川芎方中的川芎和天麻的醇提物进行了上大孔树脂或醇沉等分离、精制工艺，去除提取物中大量非活性大分子化合物，保留活性小分子化合物。

以上制备方法中，步骤(3)中所述的表面活性剂为吐温-80、聚氧乙烯氢化蓖麻油或泊洛沙姆，优选聚氧乙烯氢化蓖麻油(Cremophor RH-40)；所述的助表面活性剂为乙醇、1，2-丙二醇或聚乙二醇，优选聚乙二醇。

本发明提供的大川芎方微乳鼻腔给药制剂在防治偏头痛中的应用。

作为优选方案，把大川芎方微乳液制备成鼻腔给药的喷雾剂，或加入适量稀释剂制备成滴鼻剂，临床上使用方便，患者可以自行给药，且由于微乳的粒径小制成喷雾剂后通过鼻腔黏膜可以迅速起效。

有益效果：本发明提供的大川芎方微乳鼻腔给药制剂和现有技术相比具有以下优点：

1.本发明提供的大川芎方微乳，经过处方筛选和活性成分提取工艺的优化，所得微乳中表面活性剂、助表面活性剂、挥发油活性成分和复方水溶性活性成分配比科学合理，大川芎方以往制剂中挥发油都作为弃去的不用成分，本发明经药理实验验证挥发油是治疗偏头疼的有效成分，本发明通过微乳制剂将大川芎方的极性低的挥发油成分和极性大的水溶性有效成分有机结合，从而具有更好的镇痛效果，能达到协同增效的作用，临床上用药更少。并且实验结果表明，所得的微乳具有黏度低、热力学及动力学稳定性好、载药量高的优点，且微乳的电导率、相对密度、折光率、pH值和粒径等指标均符合微乳要求。

2.本发明提供的大川芎方微乳鼻腔给药制剂的其它优点为：(1)生物利用度高。复方微乳经鼻腔给药，不经胃肠道而直达作用部位，很少量的药物即达较高的血药浓度，一般仅需口服药物剂量的1/10或1/15左右。因而使药物的毒副作用下降，既提高生物利用度，又避免药物引起胃肠道反应，降低肝脏对药物代谢的负荷及药物对肝脏的不良反应；(2)吸收快，起效快，镇痛效果更好，微乳粒径小，可经鼻粘膜血管迅速吸收进入循环；且神经纤维通过很薄的一层筛板分布于鼻腔粘膜，从鼻腔给药，能较快传入大脑，增加脑靶向性；(3)可通过血脑屏障，鼻腔的血液循环与大脑的血液循环密切相通，鼻颅之间存在着潜在而又直接的微细通道，可经过嗅神经通路、嗅粘膜上皮通路和血液循环等通路，透过血脑屏障，向脑部直接输送药物；(4)可避免长期皮下注射引起局部组织过敏、变性或坏死；(5)给药方便：以滴入或喷入方式给药，患者可自行完成。

附图说明

附图为本发明所述大川芎方微乳鼻腔给药制剂的制备工艺流程图。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1

如附图所示，大川芎方微乳鼻腔给药制剂的制备方法，具体包括以下步骤：

(1)取川芎药材，粉碎，过20目筛，采用CO₂超临界萃取方法提取得到川芎挥发油备用，其中萃取压力35MPa、萃取温度40℃、萃取时间2h；

(2)取步骤(1)川芎药渣，用10倍量浓度为70％的乙醇加热回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液，浓缩，得浓缩液，上D101型大孔吸附树脂柱，吸附后将过柱液再上D101型大孔吸附树脂柱吸附30分钟，然后先用10倍体积的蒸馏水洗脱，再用5倍体积，浓度为50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得川芎提取物，备用；

(3)取川芎重量四分之一的天麻，先用12倍量浓度为50％的乙醇加热回流提取1.5小时，然后再用10倍量浓度为50％的乙醇加热回流提取1.5小时，合并二次提取液，浓缩至1.5g(生药)/ml的浓缩液，加入浓度95％乙醇，使乙醇浓度达70％，静置，取上清液，浓缩得到天麻提取物，备用；

(4)取表面活性剂聚氧乙烯氢化蓖麻油70g、助表面活性剂聚乙二醇30g混匀，搅拌下加入步骤(1)制得川芎挥发油20g(折合体积34m1)，混匀，然后搅拌下滴加步骤(2)和(3)制得的川芎和天麻提取物的混合物共100g，加双蒸馏水至2000ml，搅拌混匀，调节pH值为6，即可制得大川芎方微乳鼻腔给药制剂。

实施例2

大川芎方微乳鼻腔给药制剂的制备方法，具体包括以下步骤：

(1)取川芎药材，粉碎，过20目筛，采用CO₂超临界萃取方法提取得到川芎挥发油备用，其中萃取压力30MPa、萃取温度45℃、萃取时间3h；

(2)取步骤(1)川芎药渣，用8倍量浓度为80％的乙醇加热回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液，浓缩，得浓缩液，上D101型大孔吸附树脂柱，吸附后将过柱液再上D101型大孔吸附树脂柱吸附40分钟，然后先用10倍体积的蒸馏水洗脱，再用5倍体积，浓度为40％乙醇洗脱，收集40％乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得川芎提取物，备用；

(3)取川芎重量四分之一的天麻，先用10倍量浓度为40％的乙醇加热回流提取1.5小时，然后再用8倍量浓度为40％的乙醇加热回流提取1.5小时，合并二次提取液，浓缩至1.3g(生药)/ml的浓缩液，加入浓度95％乙醇，使乙醇浓度达60％，静置，取上清液，浓缩得到天麻提取物，备用；

(4)取表面活性剂聚氧乙烯氢化蓖麻油80g、助表面活性剂聚乙二醇40g混匀，搅拌下加入步骤(1)制得川芎挥发油30g(折合体积51ml)，混匀，然后搅拌下滴加步骤(2)和(3)制得的川芎和天麻提取物的混合物共150g，加双蒸馏水至2000ml，搅拌混匀，调节pH值为6，即可制得大川芎方微乳，取以上制得的大川芎方微乳按常规方法制成鼻腔给药喷雾剂即得。

实施例3

大川芎方微乳鼻腔给药制剂的制备方法，具体包括以下步骤：

(1)取川芎药材，粉碎，过20目筛，采用CO₂超临界萃取方法提取得到川芎挥发油备用，其中萃取压力35MPa、萃取温度40℃、萃取时间3h；

(2)取步骤(1)川芎药渣，用6倍量浓度为50％的乙醇加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩，得浓缩液，上D101型大孔吸附树脂柱，吸附后将过柱液再上D101型大孔吸附树脂柱吸附50分钟，然后先用10倍体积的蒸馏水洗脱，再用6倍体积，浓度为60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得川芎提取物，备用；

(3)取川芎重量四分之一的天麻，先用12倍量浓度为70％的乙醇加热回流提取1.5小时，然后再用6倍量浓度为70％的乙醇加热回流提取2小时，合并二次提取液，浓缩至1.6g(生药)/ml的浓缩液，加入浓度95％乙醇，使乙醇浓度达80％，静置，取上清液，浓缩得到天麻提取物，备用；

(4)取表面活性剂泊洛沙姆70g、助表面活性剂1，2-丙二醇30g混匀，搅拌下加入步骤(1)制得川芎挥发油20g(折合体积34ml)，混匀，然后搅拌下滴加步骤(2)和(3)制得的川芎和天麻提取物的混合物共120g，加双蒸馏水至2000ml，搅拌混匀，调节pH值为6，即可制得大川芎方微乳，取以上制得的大川芎方微乳按常规方法制成鼻腔给药滴鼻剂即得。

实施例4

大川芎方微乳鼻腔给药制剂的制备方法，具体包括以下步骤：

(1)取川芎药材，粉碎，过20目筛，采用CO₂超临界萃取方法提取得到川芎挥发油备用，其中萃取压力30MPa、萃取温度45℃、萃取时间2h；

(2)取步骤(1)川芎药渣，用8倍量浓度为60％的乙醇加热回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，浓缩，得浓缩液，上D101型大孔吸附树脂柱，吸附后将过柱液再上D101型大孔吸附树脂柱吸附50分钟，然后先用10倍体积的蒸馏水洗脱，再用6倍体积，浓度为50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得川芎提取物，备用；

(3)取川芎重量四分之一的天麻，先用10倍量浓度为60％的乙醇加热回流提取1.5小时，然后再用6倍量浓度为60％的乙醇加热回流提取2小时，合并二次提取液，浓缩至1.8g/ml的浓缩液，加入浓度95％乙醇，使乙醇浓度达70％，静置，取上清液，浓缩得到天麻提取物，备用；

(4)取60g表面活性剂吐温-80、20g助表面活性剂聚乙二醇-400混匀，搅拌下加入步骤(1)制得川芎挥发油15g(折合体积26ml)，混匀，然后搅拌下滴加步骤(2)和(3)制得的川芎和天麻提取物的混合物共180g，加双蒸馏水至2000ml，搅拌混匀，调节pH值为6，即可制得大川芎方微乳，取以上制得的大川芎方微乳按常规方法制成鼻腔给药滴鼻剂即得。

实施例5 药理实验

1实验材料

1.1实验动物

昆明种小鼠，清洁级，雌雄兼有，体重(20±2)g，由上海斯莱克实验动物有限公司提供，合格证号：SCXK(泸)2007-0005；扬州大学比较医学中心，合格证号：SCXK(苏)2007-0001。饲养于空调温室内，温度20±1℃，湿度40-50％，光照12h。喂标准颗粒饲料(汤山龙泉牌实验鼠颗粒饲料)，自由饮水和摄食。

1.2实验仪器

电子天平(Sartoris BP211D，德国赛多利斯科学仪器有限公司)；智能热板仪(YLS-6B型，北京吉安得尔科技有限公司)。

1.3实验药物

本发明提供的大川芎方微乳制剂(实施例1制得)，大川芎方常规提取物(按大川芎方4∶1药材配比，采用8倍量乙醇提取3次，得到提取物，浓缩，得浓缩物用水溶解得到和大川芎方微乳制剂药物浓度相等的受试药物)；冰醋酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)，使用时，配成浓度为0.6％溶液；杜冷丁：批号071102，东北制药集团公司沈阳第一制药厂，使用时，配成浓度为25mg/kg的溶液，临用现配，

2方法与结果

2.1小鼠扭体实验

昆明种小鼠，雌雄兼有，40只，18～22g，随机分成4组，每组10只，即空白组，阳性组、大川芎方微乳制剂鼻腔给药组，大川芎方常规提取物灌胃给药组。于实验前12h禁食，对照组灌喂给予同体积蒸馏水，阳性组给予25mg/kg的杜冷丁0.1mL/20g，鼻腔给药组给予1.88g/kg生药量大川芎方微乳制剂，灌喂给药组给予18.8生药量大川芎方提取物。鼻腔给药组于给药15min及灌喂给药组于给药1h后，腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2mL/只，观察记录各组小鼠扭体反应潜伏期及15min扭体次数(扭体反应的典型症状表现为腹部内凹，躯干和后肢伸张，臀部高起如此1次记为1次扭体)，比较组间差异，并按以下公式计算药物镇痛百分率，并进行统计分析，具体实验结果如表5所示。

表5小鼠扭体反应的抑制率(n＝10)

由表5实验结果表明，大川芎方微乳鼻腔给药15min后，具有明显延长小鼠腹腔注射醋酸所致扭体反应潜伏期，并能减少扭体次数，抑制率达46.5％，和空白组相比具有统计学意义(p＜0.05)，并且和大川芎方常规提取物灌胃给药相比，本发明提供的大川芎方微乳制剂具有起效快，镇痛作用强的优点。

2.2小鼠热板法测痛实验

取昆明种小鼠，雌性，18～22g，电热板温度调至55℃，预热20min后将小鼠逐一放入电热板上，盖好盖子，以小鼠受热后出现舔后足反应的所需时间(s)作为痛阈值，在10～30秒内出现舔足反应的为合格小鼠，不到10s或超过30s或喜跳跃者剔除，间隔0.5h重新筛选1次，取平均值作为小鼠给药前痛阈值(Q)。将小鼠随机分为4组，每组10只，即对照组，阳性组、大川芎方微乳制剂(实施例2)鼻腔给药组，大川芎方常规提取物灌喂给药组。于实验前12h禁食，对照组灌喂给予同体积蒸馏水，阳性组给予25mg/kg的杜冷丁0.1mL/20g，鼻腔给药组给予1.88g/kg生药量大川芎方微乳制剂，灌喂给药组给予18.8g/kg生药量大川芎方常规提取物，测定给药后15、30、60min小鼠的痛阈值(H)，比较组间差异，按以下公式计算给药后不同时间的痛阈提高百分率，并进行统计分析，具体实验结果如表6所示。

表6小鼠热板法测痛实验结果

^*与模型组相比，P＜0.05

由以上表6实验结果表明，本发明提供的大川芎方微乳鼻腔给药组比大川芎方常规提取物灌胃给药组具有更好的镇痛效果，在给药15分钟后就能发挥强的镇痛效果，表明本发明提供的大川芎方微乳具有较高的生物利用度，活性成分能够迅速进入血液，发挥镇痛作用，从而可以用于治疗临床发病急的偏头痛。

2.3巴比妥钠的协同作用实验

延长阈上催眠剂量戊巴比妥钠的睡眠时间：昆明种小鼠，雌雄兼有，18-22g，随机分组，每组10只。鼻腔给药大川芎方微乳1.88g/kg及灌胃给药大川芎方常规提取物18.8g/kg后15、30、60min，腹腔注射戊巴比妥钠溶液阈上剂量50mg/kg，记录翻正发射消失和翻正反射恢复时间，即各组小鼠的入睡潜伏期和睡眠时间。当再次出现翻正反射有疑问时，则重新轻轻使小鼠背部朝下仰卧，如果1min内出现翻正反射，该时间即为翻正反射恢复时间，具体实验结果如表7所示。

戊巴比妥钠阈下催眠剂量试验：在做正式实验前，先通过预实验，选择戊巴比妥钠阈下催眠剂量(40mg/kg、30mg/kg、25mg/kg)，即90％-100％小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥钠最大阈下剂量。鼻腔给药微乳制剂1.88g/kg及灌胃给药常规提取物18.8g/kg后15min后，腹腔注射戊巴比妥钠最大阈下剂量30mg/kg，凡30min内翻正反射消失达1min以上者，为阳性反应，表明已发生了睡眠。用χ²值测定两者入睡动物数之间的差别，P＜0.05，具有显著性，表明鼻腔给药具有快速镇静催眠作用，具体实验结果如表8所示。

表7延长戊比妥钠阈上催眠剂量的睡眠时间试验

表8戊巴比妥钠阈下催眠剂量试验

从表7和表8的实验结果表明，本发明提供的大川芎方微乳制剂鼻腔给药能够明显减少正常小鼠的自主活动数，能够快速延长戊比妥钠阈上催眠剂量的睡眠时间，并能协同戊巴比妥钠诱发小鼠睡眠，表明大川芎方微乳制剂对小鼠具有镇静作用，其对中枢神经系统具一定的抑制作用，有利于改善偏头痛患者发病时的急躁情绪，且鼻腔给药具有快速起效特点。

2.4对低5-HT伴局部脑血管痉挛大鼠脑内5-HT，5-HIAA及NA的影响

本实验分为假手术组，模型组，阳性对照药西比灵组和本发明提供的大川芎方微乳制剂组(实施例1)，造模制成低5-HT伴局部脑血管痉挛大鼠模型，假手术组，模型组给与等量的生理盐水，阳性对照药西比灵灌胃给与4.6mg/kg，大川芎方微乳制剂组鼻腔给药1.88g/kg，给药15分钟后，取组织，测量各组大鼠脑组织中5-羟色胺(5-HT)，5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)及NA的含量，具体实验结果如表9所示：

表9药物对低5-HT伴局部脑血管痉挛大鼠脑内5-HT，5-HIAA及NA的影响

^*与模型组相比，P＜0.05

由以上表9实验结果表明，本发明提供的大川芎方微乳制剂鼻腔给药15分钟后，和模型组相比，能明显提高5-HT伴局部脑血管痉挛大鼠脑内5-羟色胺(5-HT)和5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)的含量，并能降低模型大鼠中NA的数量，表明本发明提供的大川芎方微乳制剂对低5-HT伴局部脑血管痉挛大鼠脑组织具有明显改善作用，从而能缓解脑血管痉挛导致的头痛，并且实验结果表明大川芎方微乳比阳性对照药西比灵具有起效迅速，作用更强的优点。

本发明提供的大川芎方微乳制剂以鼻腔作为给药途径，用于头痛的治疗有明显的针对性及良好的疗效，本发明根据“纳鼻而通十二经”、“内病外治”、“鼻为肺之窍，其气上通于脑，下行于肺”的中医辩证理论采取微乳制剂鼻疗法治疗偏头痛。偏头痛的病机为发作性神经-血管功能障碍，从神经系统看，鼻腔、鼻窦与颅脑关系极为密切，不仅鼻颅之间存在潜在的细微通道，而且十二对脑神经中有三对(三叉神经的眼支及上颌支，嗅神经和面神经分支)分布于鼻腔粘膜。分布在鼻腔的神经正是易引起头痛的传导神经，故鼻疗法利用鼻腔解剖生理特点，使药物直接作用在与头痛有关的血管，调节血管的舒缩功能；并作用于三叉神经及舌咽、迷走神经表面，调节营养神经，迅速缓解头痛。其次，本发明的微乳药物粒径小，能够通过局部渗透作用于嗅黏膜的嗅细胞，经筛孔穿过筛板进入嗅球，以达颅底硬脑膜，从而减轻脑膜张力增高所引起的头痛。并且鼻黏膜的穿透性较高而酶相对较少，对药物的降解作用比胃肠道黏膜低，将微乳制剂应用于鼻黏膜给药，作为鼻腔快速给药载体，有效延长药物在鼻黏膜滞留时间，增强药效，大大提高药物的生物利用度，此外，鼻黏膜给药可透过血脑屏障，提高药物的脑靶向性，能使更多的药物到达脑部。

通过以上实验结果表明，大川芎方微乳鼻腔给药制剂具有吸收迅速、起效快、剂量小等优点，且有明显的镇痛、镇静作用，鼻腔微乳给药避免了药物胃肠道降解、肝脏首过效应及血脑屏障对药物阻断，生物利用度高，可快速到达脑部并迅速起效，还具有使用方便、患者依从性好等优点。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种大川芎方微乳鼻腔给药制剂，其特征在于，它是由下列重量份数的原料制成：川芎挥发油1～3份、川芎和天麻提取物10～20份、表面活性剂6～8份和助表面活性剂2～4份。

2.根据权利要求1所述的大川芎方微乳鼻腔给药制剂，其特征在于，它是由下列重量份数的原料制成：川芎挥发油2份、川芎和天麻提取物12份、表面活性剂7份和助表面活性剂3份。

3.根据权利要求1或2所述的大川芎方微乳鼻腔给药制剂，其特征在于，所述的川芎和天麻的重量比例为4∶1。

4.根据权利要求1或2所述的大川芎方微乳鼻腔给药制剂，其特征在于，所述的表面活性剂为聚氧乙烯氢化蓖麻油、吐温-80或泊洛沙姆，所述的助表面活性剂为聚乙二醇、1，2-丙二醇或乙醇。

5.根据权利要求4所述的大川芎方微乳鼻腔给药制剂，其特征在于，所述的表面活性剂为聚氧乙烯氢化蓖麻油，所述的助表面活性剂为聚乙二醇-400。

6.权利要求1或2所述的大川芎方微乳鼻腔给药制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)取川芎药材，粉碎，过筛，采用CO₂超临界萃取方法提取得到川芎挥发油，备用；

(2)取步骤(1)川芎药渣，用6～12倍量浓度为20～80％的乙醇加热回流提取2～3次，每次0.5～2.5小时，合并提取液，浓缩，得浓缩液，上大孔吸附树脂柱，吸附后将过柱液再上大孔吸附树脂柱吸附30～60分钟，然后用蒸馏水洗，再用浓度为20-80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得川芎提取物，备用；

(3)取川芎重量四分之一的天麻，用6～12倍量浓度为20～80％的乙醇加热回流提取2～3次，每次0.5～2.5小时，合并提取液，浓缩得至1.0-2.0g生药/ml的浓缩液，加入乙醇，使乙醇浓度达60～80％，静置，取上清液，浓缩得到天麻提取物，备用；

(4)按权利要求1或2所述的重量比例取表面活性剂、助表面活性剂混匀，搅拌下加入步骤(1)制得川芎挥发油，混匀，然后分别滴加步骤(2)和步骤(3)制备得到的川芎和天麻提取物的水溶液，搅拌混匀，即可制得大川芎方微乳鼻腔给药制剂。

7.根据权利要求6所述的大川芎方微乳鼻腔给药制剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)CO₂超临界萃取条件为萃取压力30～35MPa、萃取温度40～45℃、萃取时间2～3h。

8.根据权利要求6所述的大川芎方微乳鼻腔给药制剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述的表面活性剂为聚氧乙烯氢化蓖麻油、吐温-80或泊洛沙姆，所述的助表面活性剂为聚乙二醇、1，2-丙二醇或乙醇。

9.权利要求1或2所述的大川芎方微乳鼻腔给药制剂在防治偏头痛中的应用。

10.根据权利要求1或2所述的大川芎方微乳鼻腔给药制剂，其特征在于，所述的制剂为喷雾剂或滴鼻剂。

Images