CN102087219A - 一种特异性含巯基氨基酸的检测方法 - Google Patents

一种特异性含巯基氨基酸的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102087219A
CN102087219A CN 201010600608 CN201010600608A CN102087219A CN 102087219 A CN102087219 A CN 102087219A CN 201010600608 CN201010600608 CN 201010600608 CN 201010600608 A CN201010600608 A CN 201010600608A CN 102087219 A CN102087219 A CN 102087219A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ssdna
solution
nano
amino acid
silver
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN 201010600608
Other languages
English (en)
Inventor
罗胜联
陈章
何晔娟
席强
刘承斌
蔡青云
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hunan University
Original Assignee
Hunan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hunan University filed Critical Hunan University
Priority to CN 201010600608 priority Critical patent/CN102087219A/zh
Publication of CN102087219A publication Critical patent/CN102087219A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种特异性含巯基氨基酸的检测方法，包括以下步骤：1)非修饰银纳米的合成；2)ssDNA对银纳米的保护；3)含巯基氨基酸的标准溶液的检测；4)待测样品检测。本发明方法实现了对血清样中的含巯基氨基酸特异性、快速检测。该方法与传统方法相比，不仅具有较高灵敏度和特异性；同时，检测时间短、样品处理简单，在不使用任何仪器条件下就可以实现对血样中含巯基氨基酸进行可视化便捷分析。

Description

一种特异性含巯基氨基酸的检测方法
技术领域
本发明涉及一种简便、快速、高灵敏度、低检测限检测含巯基氨基酸的新方法。
背景技术
含巯基氨基酸主要有半胱氨酸、同型半胱氨酸等，它们在血液中的平衡影响着人类健康。半胱氨酸是一种天然产生的氨基酸，它的缺失会导致水肿。同型半胱氨酸是蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中重要的中间产物，也是身体健康的重要指标，在健康状态下，其在血液中的含量很低。如果身体代谢平衡失调，血液中的同型半胱氨酸将会积蓄，从而增加患病风险。与之相关的疾病有50多种，包括心脏病、中风、某些癌症、糖尿病、忧郁症和老年性痴呆等。研究证实血清同型半胱氨酸水平升高是动脉粥样硬化性血管病，动、静脉血栓栓塞以及周围血管性疾病的一个重要的危险因素。目前，各种检测方法包括高效液相色谱、气-质联用技术，电化学方法以及荧光检测能够有效检测含巯基氨基酸，但是这些检测方法过程复杂、耗时、需要倚仗昂贵和高精密仪器，因此开发新型快速、特异性检测含巯基氨基酸方法显得格外重要。本发明使用的方法实现了简便、快速、可视化检测含巯基氨基酸。
发明内容
本发明的目的是提供一种简便、快速、高灵敏度、低检测限检测含巯基氨基酸的方法。
1)非修饰银纳米的合成
6mL浓度为10mM的NaBH4和200mL浓度为0.25mM含有0.25mM柠檬酸钠的AgNO3溶液混合，充分搅拌30min，产生黄色溶液，静置过夜；
2)ssDNA对银纳米的保护
将步骤1)得到的98μL的银纳米溶液中加入2μL浓度为100μM ssDNA室温下放置1小时，使ssDNA充分保护银纳米；
3)含巯基氨基酸的标准溶液的检测
将不同浓度的含巯基氨基酸的标准溶液分别加入步骤2)得到的ssDNA充分保护的银纳米溶液中，静置1小时，加入100mM的NaNO3后，观察或者紫外分光法检测；
4)待测样品检测
检测样品加入步骤2)得到的ssDNA充分保护的银纳米溶液中，然后再加入100mM的NaNO3，两分钟后稀释到500μL，观察颜色或者使用紫外吸收光谱仪进行分析。
本发明原理见图1，银纳米颗粒本身由于其表面的静电效应分散于水溶液中形成稳定的黄色的水溶胶，其静电作用非常小，以至于加入盐后，静电作用被屏蔽，发生聚沉，颜色由黄色转变为深棕色。单链DNA(ssDNA)通过静电作用吸附在银纳米的表面，保护银纳米颗粒抵抗盐诱导的聚集，当存在盐溶液时，颜色将不会发生改变。另一方面，含巯基氨基酸通过Ag-S键吸附在银纳米颗粒的表面，由于其Ag-S键的作用强于ssDNA与银纳米之间的静电吸附作用，当加入含巯基氨基酸检测物时，ssDNA被挤开从而失去其保护作用，银纳米在盐的诱导下发生聚沉，其溶液颜色发生变化，紫外吸收峰值降低，从而达到检测的目的。同时，其它不含巯基的氨基酸则不能吸附在银纳米的表面，ssDNA的保护作用仍然存在，颜色不发生改变(图2)。说明该方法具有很强的特异性。
通过紫外吸收光谱仪分析可得知(图3、图4)：图3显示，在没有同型半胱氨酸存在的条件下，紫外吸收峰值非常高，随着同型半胱氨酸的加入，其峰值越来越低，其最低检测线可以达到20nM。通过观察颜色我们可以看到，银纳米溶液颜色由黄色向棕色转变，其颜色变化的临界浓度约为300nM，可知，用观察颜色法可以检测到300nM的同型半胱氨酸。
通过本发明方法，实现了对血清样中的含巯基氨基酸特异性、快速检测。该方法与传统方法相比，不仅具有较高灵敏度和特异性；同时，检测时间短、样品处理简单，在不使用任何仪器条件下就可以实现对血样中含巯基氨基酸进行可视化便捷分析，节省了成本和时间。
附图说明
图1为本发明的原理图；
图2为采用本发明方法的氨基酸特异性检测图(A0表示空白样品银纳米393nm处紫外吸收峰值，AX表示加入了各氨基酸后银纳米393nm处紫外吸收峰值)；
图3为不同浓度同型半胱氨酸的检测；
图4为不同浓度半胱氨酸和谷胱甘肽检测(正方形点表示半胱氨酸浓度，三角形点表示谷胱甘肽浓度)；
图5为模拟样品中同型半胱氨酸检测流程图；
图6为模拟样品中各氨基酸检测结果。
具体实施方式
以下结合实施例旨在进一步说明本发明，而非限制本发明。
1)非修饰银纳米的合成
6mL浓度为10mM的NaBH4和200mL浓度为0.25mM含有0.25mM柠檬酸钠的AgNO3溶液混合，充分搅拌30min，产生黄色溶液，静置过夜；
2)ssDNA对银纳米的保护
将步骤1)得到的98μL的银纳米溶液中加入2μL浓度为100μM ssDNA室温下放置一小时，使ssDNA充分保护银纳米；
3)含巯基氨基酸的标准溶液的检测
将不同浓度的含巯基氨基酸的标准溶液分别加入ssDNA充分保护的银纳米溶液中，静置一小时，加入100mM的NaNO3后，观察或者紫外分光法检测；
4)待测样品检测
检测样品加入到ssDNA充分保护的银纳米溶液中【98μL的银纳米溶液中加入2μL浓度为100μM ssDNA，室温下放置一小时】，然后再加入100mM的NaNO3，两分钟后稀释到500μL，观察颜色或者使用紫外吸收光谱仪进行分析。
通过该方法实现了对模拟血样牛血清蛋白中同型半胱氨酸的检测。
模拟样品中同型半胱氨酸检测流程如图5所示。
模拟样品中各氨基酸检测结果如图6所示。

Claims (1)

1.一种特异性含巯基氨基酸的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)非修饰银纳米的合成
6mL浓度为10mM的NaBH4和200mL浓度为0.25mM含有0.25mM柠檬酸钠的AgNO3溶液混合，充分搅拌30min，产生黄色溶液，静置过夜；
2)ssDNA对银纳米的保护
将步骤1)得到的98μL的银纳米溶液中加入2μL浓度为100μM ssDNA室温下放置1小时，使ssDNA充分保护银纳米；
3)含巯基氨基酸的标准溶液的检测
将不同浓度的含巯基氨基酸的标准溶液分别加入到步骤2)得到的ssDNA充分保护的银纳米溶液中，静置1小时，加入100mM的NaNO3后，观察或者紫外分光法检测；
4)待测样品检测
待检测样品加入到步骤2)得到的ssDNA充分保护的银纳米溶液中；然后再加入100mM的NaNO3，两分钟后稀释到500μL，观察颜色或者使用紫外吸收光谱仪进行分析。
CN 201010600608 2010-12-22 2010-12-22 一种特异性含巯基氨基酸的检测方法 Pending CN102087219A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 201010600608 CN102087219A (zh) 2010-12-22 2010-12-22 一种特异性含巯基氨基酸的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 201010600608 CN102087219A (zh) 2010-12-22 2010-12-22 一种特异性含巯基氨基酸的检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102087219A true CN102087219A (zh) 2011-06-08

Family

ID=44099117

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN 201010600608 Pending CN102087219A (zh) 2010-12-22 2010-12-22 一种特异性含巯基氨基酸的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102087219A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103308512A (zh) * 2013-05-22 2013-09-18 陕西师范大学 L-半胱氨酸包被的纳米金在手性识别酪氨酸中的应用
CN106896076A (zh) * 2017-04-26 2017-06-27 江南大学 一种紫外光谱法高通量检测对香豆酸的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1773264A (zh) * 2004-11-12 2006-05-17 中国科学院兰州化学物理研究所 半胱氨酸的比色检测分析方法
CN101329279A (zh) * 2008-07-18 2008-12-24 山西大学 快速检测水溶液中半胱氨酸的方法
CN101408509A (zh) * 2008-10-27 2009-04-15 中国科学技术大学 一种基于金纳米颗粒溶胶吸收光谱的半胱氨酸快速检测法
CN101915760A (zh) * 2010-07-07 2010-12-15 东华大学 一种比色法即时检测半胱氨酸含量的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1773264A (zh) * 2004-11-12 2006-05-17 中国科学院兰州化学物理研究所 半胱氨酸的比色检测分析方法
CN101329279A (zh) * 2008-07-18 2008-12-24 山西大学 快速检测水溶液中半胱氨酸的方法
CN101408509A (zh) * 2008-10-27 2009-04-15 中国科学技术大学 一种基于金纳米颗粒溶胶吸收光谱的半胱氨酸快速检测法
CN101915760A (zh) * 2010-07-07 2010-12-15 东华大学 一种比色法即时检测半胱氨酸含量的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《Analyst》 20100210 Zhang Chen等 Label-free colorimetric assay for biological thiols based on ssDNA/silver nanoparticle system by salt amplification 1066-1069 第135卷, 第5期 2 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103308512A (zh) * 2013-05-22 2013-09-18 陕西师范大学 L-半胱氨酸包被的纳米金在手性识别酪氨酸中的应用
CN106896076A (zh) * 2017-04-26 2017-06-27 江南大学 一种紫外光谱法高通量检测对香豆酸的方法
CN106896076B (zh) * 2017-04-26 2019-08-20 江南大学 一种紫外光谱法高通量检测对香豆酸的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Rezende et al. Cloud point extraction for determination of cadmium in soft drinks by thermospray flame furnace atomic absorption spectrometry
Wadhwa et al. Polyhydroxybutyrate-b-polyethyleneglycol block copolymer for the solid phase extraction of lead and copper in water, baby foods, tea and coffee samples
CN110045040A (zh) 一种测定肠道内容物或粪便中短链脂肪酸含量的方法
Zmozinski et al. Method development for the simultaneous determination of methylmercury and inorganic mercury in seafood
CN105259292B (zh) 一种测定水产品中麻痹性贝类毒素的方法
CN106290785B (zh) 一种采用dgt技术分离土壤不同形态重金属的方法
WO2017113881A1 (zh) 利用hplc指纹图谱鉴别葡萄籽提取物真伪的方法
CN102590411B (zh) Hplc-icp-ms联用技术检测水产品中二价镉离子的方法
CN107727758A (zh) 一种测定痕量硒元素形态的方法及其检测富硒饲料的应用
CN107727872A (zh) 一种肝素测定的试剂盒
CN104280383A (zh) 一种血液和尿液中亚硝酸盐的快速检测方法
CN103267760A (zh) 一种地沟油的检测方法及检测试剂盒
CN102087219A (zh) 一种特异性含巯基氨基酸的检测方法
WO2006066917A3 (en) Use of asc as a marker for colorectal cancer
CN104411833B (zh) 应用maldi‑toff质谱分析法的侵染性真菌感染的体外诊断方法
Blandini et al. Determination of hydroxyl free radical formation in human platelets using high-performance liquid chromatography with electrochemical detection
CN104849268A (zh) 一种基于核酸适体包裹的金纳米粒子探针比色检测氧化乐果的试剂及其应用
CN104406962A (zh) 一种用于快速检测水样中铅离子的试剂盒及其使用方法
CN115656072A (zh) 一种基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中亚硝酸盐的方法
CN102445509B (zh) 一种快速微量检测鲜河鲀血液中ttx反相离子对hplc法
CN109324136A (zh) Hplc-icp-ms联用技术检测海产贝类中无机铅离子的方法
CN103728298A (zh) 中药材及其饮片、农产品、食品中二氧化硫残留量的快速限量检测方法
Kabak et al. Separation and preconcentration of cobalt (II) from water samples with Amberlite CG-120 resin
CN103792296A (zh) 一种乳胶漆中甲醛含量的测定方法
CN103245658A (zh) 一种面包中溴酸盐的快速检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20110608