CN102083425A - 治疗真菌感染的方法 - Google Patents

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Abstract

本申请披露了识别可增强抗真菌药物活性的化合物的方法，用这些方法识别出的增强剂，以及利用增强剂治疗真菌感染的方法。

Description

治疗真菌感染的方法
相关申请的交叉引用
本专利申请要求于2008年4月22日提交的美国临时专利申请第61/046,953号的优先权，其全部内容在此被参考并入。
技术领域
本发明是有关药物，尤其是有关真菌感染的治疗。
背景技术
病原菌的多重耐药性主要是微生物细胞进入休眠状态的结果。这种休眠细胞可引发潜伏性(慢性)疾病或引起疾病复发。很多这样的休眠细胞可被已知的抗真菌药物抑制，但从未被根除。
真菌生物膜(fungal biofilms)是位于表面并分裂繁殖的细胞的群落，其被外聚合基质(exopolymer matrix)所覆盖。它们生长缓慢，并且很多处于生长的静止期。它们可由大多数，如果不是全部，病原菌形成。根据CDC的报告，在美国境内发生的所有感染的65％是由生物膜所引起的，这些生物膜可由普通病原菌形成。所述生物膜外聚合基质可抵御免疫细胞，这样，所述生物膜内的持留细胞可在抗真菌治疗和免疫系统的攻击下存活。当抗真菌水平降低，这些持留细胞可重新繁殖所述生物膜，这将使浮游细胞脱落，产生复发性生物膜感染。真菌生物膜感染对抗真菌治疗高度顽抗。因此，有必要提供对这些感染的充分的疗法。
发明内容
本发明的各方面至少部分地基于可抑制真菌生长或杀死真菌的化合物的识别。相应地，本发明的一方面是有关抑制真菌生长或杀死真菌的方法，该方法包括将所述真菌与(i)一抗真菌药物以及(ii)如通式I的增强剂化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、或前药相接触。
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可任选地被取代，或者是5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
从而抑制所述真菌生长或者杀死所述真菌。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ia：
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，R1是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是OH。
在又一些实施例中，R1是-NH-烷基。
在又一些实施例中，R1是-N(烷基)2。
在又一实施例中，R1是5元或6元杂环。
在又一实施例中，R1是羰基取代的5元杂环。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ib：
Figure BPA00001276396200031
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或者是5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在又一实施例中，R1是NH2取代的烷基。
在一些实施例中，所述增强剂化合物增强所述抗真菌药物的活性。在一些实施例中，所述增强剂化合物不是抗真菌化合物。
在一些实施例中，所述真菌是以下的一种或多种：曲霉菌属的一种(例如黄曲霉、烟曲霉、灰绿曲霉、构巢曲霉、黑曲霉以及土曲霉)、皮炎芽生菌、念珠菌属的一种(例如白念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌以及季也蒙假丝酵母)、粗球孢子菌、隐球菌属的一种(例如新型隐球菌、白色隐球菌以及罗伦特隐球菌)、荚膜组织胞浆菌荚膜变种、荚膜组织胞浆菌杜波氏变种、巴西副球孢子菌、申克孢子丝菌、伞状犁头霉、微小根毛霉以及无根根霉。
在一些实施例中，所述真菌是顽固真菌。在又一实施例中，所述真菌是真菌生物膜。在又一实施例中，所述真菌包括持留细胞。
在一些实施例中，所述抗真菌药是两性霉素B、咪唑(例如咪康唑)、克霉唑、氟康唑、伊曲康唑、酮康唑、雷夫康唑、泊沙康唑、伏立康唑、卡泊芬净、米卡芬净、FK463、阿尼芬净(LY303366)、羟芪巴脒、5氟胞嘧啶、氟胞嘧啶、碘化物、特比萘芬、制霉菌素、灰黄霉素或环吡司。
在另一方面，本发明是有关治疗个体内真菌感染的方法，该方法包括向该个体给药联用的有效量的抗真菌药和有效量的如通式I的增强剂化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药。
Figure BPA00001276396200041
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或者是5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
从而治疗所述真菌感染。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ia：
Figure BPA00001276396200042
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，R1是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是OH。
在又一些实施例中，R1是-NH-烷基。
在又一些实施例中，R1是-N(烷基)2。
在又一实施例中，R1是5元或6元杂环。
在又一实施例中，R1是羰基取代的5元杂环。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ib：
Figure BPA00001276396200051
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在又一实施例中，R1是NH2取代的烷基。
在一些实施例中，所述增强剂化合物增强所述抗真菌药物的活性。在一些实施例中，所述增强剂化合物不是抗真菌化合物。
在一些实施例中，所述真菌感染包括以下的一种或多种：曲霉菌属的一种(例如黄曲霉、烟曲霉、灰绿曲霉、构巢曲霉、黑曲霉以及土曲霉)、皮炎芽生菌、念珠菌属的一种(例如白念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌以及季也蒙假丝酵母)、粗球孢子菌、隐球菌属的一种(例如新型隐球菌、白色隐球菌以及罗伦特隐球菌)、荚膜组织胞浆菌荚膜变种、荚膜组织胞浆菌杜波氏变种、巴西副球孢子菌、申克孢子丝菌、伞状犁头霉、微小根毛霉以及无根根霉。
在一些实施例中，所述真菌是顽固真菌。在又一实施例中，所述真菌是真菌生物膜。在又一实施例中，所述真菌包括持留细胞。
在一些实施例中，所述抗真菌药是两性霉素B、咪唑(例如咪康唑)、克霉唑、氟康唑、伊曲康唑、酮康唑、雷夫康唑、泊沙康唑、伏立康唑、卡泊芬净、米卡芬净、FK463、阿尼芬净(LY303366)、羟芪巴脒、5氟胞嘧啶、氟胞嘧啶、碘化物、特比萘芬、制霉菌素、灰黄霉素或环吡司。
在一些实施例中，所述真菌感染是曲霉菌病、芽生菌病、念珠菌病(例如口腔念珠菌病或阴道炎)、球孢子菌病、隐球菌病、组织胞浆菌病、类球孢子菌病、孢子丝菌病或接合菌病。在一些实施例中，所述真菌感染是与导管、整形假体或心脏瓣膜有关。
在又一方面，本发明是有关治疗一个体内复发性阴道炎的方法，该方法包括向所述个体给药联用的有效量的咪康唑和有效量的如通式I的增强剂化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药。
Figure BPA00001276396200061
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
从而治疗所述个体内的复发性阴道炎。在一些实施例中，所述复发性阴道炎包括白念珠菌。在又一些实施例中，所述复发性阴道炎包括白念珠菌持留细胞。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ia：
Figure BPA00001276396200071
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，R1是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是OH。
在又一些实施例中，R1是-NH-烷基。
在又一些实施例中，R1是-N(烷基)2。
在又一实施例中，R1是5元或6元杂环。
在又一实施例中，R1是羰基取代的5元杂环。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ib：
Figure BPA00001276396200072
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、一NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，一NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在又一实施例中，R1是NH2取代的烷基。
在又一方面，本发明是有关抑制真菌生长或杀死真菌的方法。该方法包括将如通式I的增强剂化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药与所述真菌接触。
Figure BPA00001276396200081
其中，每一R1独立地是-OH、一OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、一NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、一NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、一NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，一NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
从而抑制所述真菌生长或杀死所述真菌。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ia：
Figure BPA00001276396200082
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，R1是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是OH。
在又一些实施例中，R1是-NH-烷基。
在又一些实施例中，R1是-N(烷基)2。
在又一实施例中，R1是5元或6元杂环。
在又一实施例中，R1是羰基取代的5元杂环。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ib：
Figure BPA00001276396200091
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在又一实施例中，R1是NH2取代的烷基。
在一些实施例中，所述真菌包括以下的一种或多种：曲霉菌属的一种(例如黄曲霉、烟曲霉、灰绿曲霉、构巢曲霉、黑曲霉以及土曲霉)、皮炎芽生菌、念珠菌属的一种(例如白念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌以及季也蒙假丝酵母)、粗球孢子菌、隐球菌属的一种(例如新型隐球菌、白色隐球菌以及罗伦特隐球菌)、荚膜组织胞浆菌荚膜变种、荚膜组织胞浆菌杜波氏变种、巴西副球孢子菌、申克孢子丝菌、伞状犁头霉、微小根毛霉以及无根根霉。
在一些实施例中，所述真菌是顽固真菌。在又一实施例中，所述真菌是真菌生物膜。在又一实施例中，所述真菌包括持留细胞。
在又一方面，本发明是有关在有需要的个体内治疗真菌感染的方法。该方法包括向所述个体给药有效量的如通式I的增强剂化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药。
Figure BPA00001276396200101
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
从而治疗所述真菌感染。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ia：
Figure BPA00001276396200102
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，R1是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是OH。
在又一些实施例中，R1是-NH-烷基。
在又一些实施例中，R1是-N(烷基)2。
在又一实施例中，R1是5元或6元杂环。
在又一实施例中，R1是羰基取代的5元杂环。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ib：
Figure BPA00001276396200111
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中，所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中，所述芳基任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是烷基，还可以是烷基、卤素、OH或NH2取代的烷基。
在又一实施例中，R1是NH2取代的烷基。
在一些实施例中，所述真菌感染包括以下的一种或多种：曲霉菌属的一种(例如黄曲霉、烟曲霉、灰绿曲霉、构巢曲霉、黑曲霉以及土曲霉)、皮炎芽生菌、念珠菌属的一种(例如白念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌以及季也蒙假丝酵母)、粗球孢子菌、隐球菌属的一种(例如新型隐球菌、白色隐球菌以及罗伦特隐球菌)、荚膜组织胞浆菌荚膜变种、荚膜组织胞浆菌杜波氏变种、巴西副球孢子菌、申克孢子丝菌、伞状犁头霉、微小根毛霉以及无根根霉。
在一些实施例中，所述真菌是顽固真菌。在又一实施例中，所述真菌是真菌生物膜。在又一实施例中，所述真菌包括持留细胞。
在一些实施例中，所述真菌感染是曲霉菌病、芽生菌病、念珠菌病(例如口腔念珠菌病或阴道炎)、球孢子菌病、隐球菌病、组织胞浆菌病、类球孢子菌病、孢子丝菌病或接合菌病。在一些实施例中，所述真菌感染是与导管、整形假体或心脏瓣膜有关。
在又一方面，本发明是有关治疗一个体内复发性阴道炎的方法。该方法包括向所述个体给药联用的有效量的咪康唑和有效量的如通式I的增强剂化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药。
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
从而治疗所述个体内的复发性阴道炎。在一些实施例中，所述复发性阴道炎包括白念珠菌。在又一些实施例中，所述复发性阴道炎包括白念珠菌持留细胞。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ia：
Figure BPA00001276396200131
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，R1是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是OH。
在又一些实施例中，R1是-NH-烷基。
在又一些实施例中，R1是-N(烷基)2。
在又一实施例中，R1是5元或6元杂环。
在又一实施例中，R1是羰基取代的5元杂环。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ib：
Figure BPA00001276396200132
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在又一实施例中，R1是NH2取代的烷基。
在又一方面，本发明是有关治疗或预防一个体内口腔念珠菌病的方法，该方法包括向所述个体给药联用的有效量的咪康唑和有效量的如通式I的增强剂化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药。
Figure BPA00001276396200141
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
从而治疗或预防所述个体内的口腔念珠菌病。在一些实施例中，所述口腔念珠菌病包括白念珠菌。在又一些实施例中，所述口腔念珠菌病包括白念珠菌持留细胞。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ia：
Figure BPA00001276396200142
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，R1是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是OH。
在又一些实施例中，R1是-NH-烷基。
在又一些实施例中，R1是-N(烷基)2。
在又一实施例中，R1是5元或6元杂环。
在又一实施例中，R1是羰基取代的5元杂环。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ib：
Figure BPA00001276396200151
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在又一实施例中，R1是NH2取代的烷基。
在又一方面，本发明是有关处理医疗器械上的真菌感染的方法。该方法包括向所述医疗器械给药联用的有效量的咪康唑和如通式I的增强剂化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药。
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
从而处理所述器械的真菌感染。在一些实施例中，所述感染包括白念珠菌。在又一些实施例中，所述感染包括白念珠菌持留细胞。
在一些实施例中，所述医疗器械是导管、整形假体或心脏瓣膜。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ia：
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，R1是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是OH。
在又一些实施例中，R1是-NH-烷基。
在又一些实施例中，R1是-N(烷基)2。
在又一实施例中，R1是5元或6元杂环。
在又一实施例中，R1是羰基取代的5元杂环。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ib：
Figure BPA00001276396200171
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在又一实施例中，R1是NH2取代的烷基。
在又一方面，本发明是有关抑制白念珠菌生长或杀死白念珠菌的方法。该方法包括把有效量的(i)抗真菌药物和(ii)一种或多种如通式I的增强剂化合物或其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，与所述真菌接触。
Figure BPA00001276396200181
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
从而抑制所述真菌生长或杀死所述真菌。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ia：
Figure BPA00001276396200182
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，R1是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是OH。
在又一些实施例中，R1是-NH-烷基。
在又一些实施例中，R1是-N(烷基)2。
在又一实施例中，R1是5元或6元杂环。
在又一实施例中，R1是羰基取代的5元杂环。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ib：
Figure BPA00001276396200191
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在又一实施例中，R1是NH2取代的烷基。
在又一方面，本发明是有关在有需要的个体内治疗白念珠菌感染的方法，该方法包括向所述个体给药有效量的(i)抗真菌药物，和，与其联用的有效量的(ii)如通式I的一种或多种增强剂化合物或其药学上可接受的盐、水合物及溶剂化物。
Figure BPA00001276396200192
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
从而治疗所述真菌感染。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ia：
Figure BPA00001276396200201
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，R1是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代芳基，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是OH。
在又一些实施例中，R1是-NH-烷基。
在又一些实施例中，R1是-N(烷基)2。
在又一实施例中，R1是5元或6元杂环。
在又一实施例中，R1是羰基取代的5元杂环。
在一些实施例中，所述如通式I的化合物的结构如通式Ib：
Figure BPA00001276396200211
及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物及前药。
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中所述烷基可以任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，其中所述芳基可以任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在一些实施例中，R1是NH2。
在又一些实施例中，R1是烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代。
在又一实施例中，R1是NH2取代的烷基。
以下附图是以说明的目的被提供，而不是用于限制本发明。
附图说明
图1A是经两性霉素B处理后，存活的白念珠菌3153A细胞数量的图形化展示。
图1B是经氯己定处理后，存活的白念珠菌3153A细胞数量的图。
图2是经两性霉素B或氯己定处理后，存活的细胞数量的图形化展示。
图3是经两性霉素B或氯己定或两者的联用处理后，存活的细胞数量的图形化展示。
图4A是活的白念珠菌浮游细胞的显微照片的数字化展示。
图4B是经两性霉素B处理后，死的白念珠菌浮游细胞的显微照片的数字化展示。
图4C是未处理的白念珠菌生物膜的显微照片的数字化展示。
图4D是经两性霉素B处理18小时后的白念珠菌生物膜的显微照片的数字化展示。
图4E是经两性霉素B处理48小时后的白念珠菌生物膜的显微照片的数字化展示。
图5是用生物膜筛选咪康唑增强剂的方法的示意图。
图6是在白念珠菌生物膜中高通量筛选咪康唑增强剂化合物的图形化展示。
图7是通过提高AC17单用浓度或与咪康唑的联用浓度杀灭白念珠菌生物膜的图形化展示。
图8A是分别以两性霉素B或氯己定处理的白念珠菌临床分离株的图形化展示。
图8B是经过或未经AC17、咪康唑或两者联用处理的hip菌株的白念珠菌生物膜的图形化展示。
图9A是AC17对白念珠菌细胞悬浮液形成生物膜的影响的图形展示。
图9B是经过和未经过AC17处理的白念珠菌培养物的生长曲线的图形化展示。
图10A展示了未处理白念珠菌细胞的显微照片。
图10B展示了经AC17处理的白念珠菌细胞的显微照片。
图10C是未经AC17处理的白念珠菌细胞的菌丝长度和以增加浓度的AC17处理的白念珠菌细胞的菌丝长度的图形化展示。
图11展示了有或无AC17的条件下，在各种培养基(Spider、Lee’s、YPS、YPD)中生长的白念珠菌细胞的显微照片。
图12A展示了在有或无AC17的条件下生长的野生型白念珠菌细胞的显微照片。
图12B展示了在有或无AC17的条件下生长的UZ24白念珠菌细胞的显微照片。
图12C展示了在有或无AC17的条件下生长的UZ43白念珠菌细胞的显微照片。
图12D展示了在有或无AC17的条件下生长的UZ149白念珠菌细胞的显微照片。
图13A展示了在37℃下，在YPD培养基中生长的白念珠菌株UZ149细胞的显微照片。
图13B展示了在37℃下，在强力霉素存在的条件下，在YPD培养基中生长的白念珠菌株UZ149细胞的显微照片。
图13C展示了在37℃下，在YPD培养基中生长的白念珠菌株UZ149细胞被以1∶500的比例稀释后的显微照片。
图13D展示了在37℃下，先在强力霉素存在的条件下，再在去除强力霉素的条件下，在YPD培养基中生长的白念珠菌株UZ149细胞的显微照片。
图13E展示了在37℃下，在强力霉素和AC17存在的条件下，在YPD培养基中生长的白念珠菌株U149细胞的显微照片。
发明的详细描述
本发明至少部分地关于利用筛选方法识别抗真菌化合物，以及这些化合物的治疗真菌感染的用途。
定义
本披露的化合物包括任意及所有可能的同分异构体、立体异构体、对映异构体、非镜像异构体、互变异构体、其药学上可接受的盐和溶剂化物。因此，本披露所用的术语“化合物”(单数)和“化合物”(复数)是指任意及所有可能的同分异构体、立体异构体、对映异构体、非镜像异构体、互变异构体、其药学上可接受的盐和溶剂化物。
总的来说，本披露的组合物可被配制成包括本披露所披露的任意合适的组分，或由本披露所披露的任意合适的组分所构成，或基本由本披露所披露的任意合适的组分所构成。另外，或可选择的，本披露的组合物可被配制成不含或者基本不含已知组合物中所采用的任意组分、材料、要素、佐剂或物种，或者不是为达到本披露的功能和/或目标所必要的组分、材料、要素、佐剂或物种。
在本披露中，冠词“一”(a)或“一”(an)被用于指一个或一个以上(即至少一个)该冠词语法上的标的。例如，“一个元素”是指一个或多于一个元素。
在本披露中，除非特别表明，术语“或”可与“和/或”互换。
在本披露中，术语“大约”是指一给定数值±20％范围内的值。这样，“大约60％”是指在60减去60的20％到60加上60的20％之间(即48％到72％)的值。
除非特别定义，术语“烷基”和“alk”是指直链或支链烷(碳氢)基，其可以是完全饱和的，单不饱和的或多不饱和的，并可包括二价基，其具有1到大约15个碳原子。饱和碳氢基的例子包括但不限于如甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基，以及如正戊基、正己基、正庚基、正辛基、1，1-二甲基-庚基、1，2-二甲基-庚基的同系物或异构体等。不饱和烷基包括一个或多个双键或三键或其组合。不饱和烷基的例子包括但不限于乙烯基、丙烯基、巴豆基、2-异戊烯基、联烯基(allenyl)、丁烯基、丁间二烯基、戊烯基、戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、己烯基、己二烯基、乙炔基、丙炔基、丁炔基及更高的同系物或异构体。术语“C1-m-烷基”是指具有1到大约m个碳原子的烷基。如以下所定义，所述烷基可以任选地在任意可用的结合点被一个或多个取代基取代，如1到5个取代基。
除非特别定义，术语“芳基”是指环状的，具有1到5个芳香环的芳香族碳氢化合物基，包括单环或双环基，如苯基、联苯基或萘基。包含两个或更多芳香环时(双环等)，该芳基的芳香环可以在单个点连接(如联苯基)，或稠合(如萘基、菲基等)。在任意连接点，所述芳基可以任选地被一个或多个取代基取代，比如1到5个取代基。除了“取代”的定义下所描述的取代基，其他取代基的例子包括但不限于硝基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、氰基、烷基、稠合环基、稠合环烷基、稠合环烯基、稠合杂环基以及稠合芳基，以及以上所引用的示例性的烷基取代基。取代基本身也可以任选地被取代。
除非特别定义，术语“杂芳基”是指具有1-5个芳香环的环状的芳香族碳氢化合物基，包括单环基或双环基，其含有至少一个杂原子，例如N、S或O，比如吡啶或喹啉。含有两个或更多芳香环时(双环等)，所述芳基的芳香环可以在单点连接(比如苯基吡啶)，或稠合(比如喹啉等)。所述芳基可以任选地被一个或多个取代基在任意结合点取代，比如1到5个取代基。除了“取代的”的定义部分所描述的取代基，其他取代基的例子包括但不限于硝基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、氰基、烷基、稠合环基、稠合环烷基、稠合环烯基、稠合杂环基以及稠合芳基，以及以上所引用的示例性的烷基取代基。取代基本身也可以是取代的。
除非特别定义，术语“杂环”或“杂环的”是指完全饱和的，或部分不饱和或完全不饱和的，包括芳香(即“杂芳基”)环基(例如，4到7元单环的，7到12元双环的，或8到16元三环的环系统)，其中至少一个含碳原子的环内具有至少一个杂原子。所述含有杂原子的杂环基的每一环都可以有1、2、3或4个杂原子，其中，杂原子是选自氮原子、氧原子和硫原子，其中，所述氮和硫杂原子可以任选地被氧化，而所述氮杂原子可被任选地季铵化。所述杂环基可在所述环或环体系的任何杂原子或碳原子处与该分子其余部分连接。单环杂环基的例子包括但不限于氮杂环丁基、吡咯烷基、吡咯基、吡唑基、环氧丙烷基(oxetanyl)、二氧杂环己基(dioxanyl)、二氧戊环基(dioxolanyl)、氧硫杂环戊基(oxathiolanyl)、吡唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、唑基、噁唑烷基、异唑啉基、异噁唑基、硫杂环丁基(thietanyl)、氮杂环丁二烯基、二氮杂环丁烷基、硫杂环戊基、噻唑基、噻二唑基、噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、呋喃基、四氢呋喃基、噻吩基、噁二唑基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基(2-oxopiperazinyl)、2-氧代哌啶基(2-oxopiperidinyl)、2-氧代吡咯烷基、2-氧代吖庚因基、吖庚因基(azepinyl)、六氢二吖庚因基、4-哌啶基、吡啶基、嘌呤基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基、三唑基、四唑基、四氢吡喃基、吗啉基、噻吗啉基、噻吗啉亚砜基、噻吗啉砜基、1，3-二氧戊环基以及四氢-1，1-二氧代噻吩基等。双环杂环基的例子包括但不限于吲哚基、异吲哚基、苯并噻唑基、苯并恶唑基、苯并恶二唑基、苯并噻吩基、苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯基(benzo[d][1，3]dioxolyl)、2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧(杂)芑基dioxinyl、奎宁环基、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、吲哚嗪基、苯并呋喃基、苯并呋咕基、色满基、香豆素基、苯并吡喃基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯吡啶基、呋喃吡啶基(例如呋喃[2，3-c]吡啶基、呋喃[3，2-b]吡啶或呋喃[2，3-b]吡啶)、二氢异吲哚基、二氢喹唑啉基(例如3，4-二氢-4-氧代-喹唑啉基)、三嗪吖庚因基、四氢喹啉基等。三环杂环基的例子包括但不限于咔唑基、苯并吲哚基、啡啉基、吖啶基、啡啶基、吨基等。
杂环基可以任选地在任意连接点被一个或多个取代基“取代”，如1到5个取代基。除了“取代”的定义部分所描述的取代基，其他取代基的例子包括但不限于环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、硝基、氧代(即O＝)、氰基、烷基或取代的烷基、在任意连接点处的螺环连接的或稠合的环取代基、螺环连接的环烷基、螺环连接的环烯基、螺环连接的杂环基(不包括杂芳基)、稠合环烷基、稠合环烯基、稠合杂环基、稠合芳基等。取代基本身也可以任选地被取代。
术语“取代”是指在任何可能的位置被以下描述的取代基团取代。可用于本披露的以上基团的取代基团不会明显降低所披露的化合物的所述生物活性。不会明显降低所披露的化合物的所述生物活性的取代基团包括但不限于氢、卤素、N3、NCS、CN、NO2、NX1X2、OX3、C(X3)3、OAc、O-酰基、O-芳酰基、NH-酰基、NH-芳酰基、NHCO烷基、CHO、C(卤素)3、Ph、OPh、CH2Ph、OCH2Ph、COOX3、SO3H、PO3H2、SO2NX1X2、CONX1X2、烷基、醇基、烷氧基、二氧杂环戊烷基、烷基巯基、双氧环己烷基、二噻吩基(dithianyl)、烷基氨基、二烷基氨基、硫胺基、硫代烷氧基或当所述取代的结构具有两个相邻的碳原子时的亚甲二氧基，其中，X1和X2每一单独地包括氢或烷基，X3包括氢、烷基、羟基低级烷基。除非特别限定，取代基可以在任意可能的位置。
本披露所用术语“前药”是指一化合物，其在活体内通过代谢途径(例如通过水解)可转化成如通式I的化合物。
本披露所用术语“盐”(单数)或“盐”(复数)是指与无机的和/或有机的酸和碱形成的酸性的和/或碱性的盐。
本披露所用术语“互变异构体”是指在一个分子的一个原子的一个质子转移到另一个原子的现象中所产生的化合物(March，Advanced Organic Chemistry：Reactions， Mechanisms and Structures，4th Ed.，John Wiley & Sons，pp.69-74(1992))。
以下缩写被本披露所采用并具有以下定义：DMF是二甲基甲酰胺；DMSO是二甲亚砜；THF是四氢呋喃；以及Tris是三羟甲氨基甲烷。
本披露所用术语“载体”包括载体、赋形剂以及稀释剂，是指涉及承载或运送药物从个体的一个器官或部分到另一器官或部分的材料、组合物或赋形剂，如液体或固体填料、稀释剂、辅料、溶剂或封装材料。
本披露所用短语“药学可接受的”是指那些化合物、材料、组合物和/或剂型，其在合理的医学判断范围内，适于和人体或动物体组织接触，而没有过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，具有合适的有益/风险比率。
本披露所用术语“给药”(现在时)、“给药”(进行时)或“给药”(名词)是指向一个体直接给药化合物或该化合物药学上可接受的盐或组合物，或向所述个体给药所述化合物的前药衍生物或类似物或药学上可接受的所述化合物的盐或组合物，其可在所述个体内形成等量的有活性的化合物。
本披露所用术语“增强剂”或“具有增强功能的化合物”是指补充或增强抗真菌药物活性，例如抗真菌药物的抗真菌活性，的化合物。在一些实施例中，所述增强剂不是抗真菌药物，即其本身不具有抗真菌活性。在又一些实施例中，所述增强剂本身就是抗真菌药物。在一些实施例中，所述抗真菌药物的活性与所述增强剂的活性协同作用。
本披露所用术语“增强”是指提高、增加、加强、使变强、改善和/或协同作用。例如，第一化合物增强第二化合物的活性，提高、增加、加强、使变强、改善所述第二化合物的活性和/或与所述第二化合物协同作用。
当“有效量”与本披露所描述的组合物一起使用时，是指治疗真菌感染，或抑制真菌生长或杀死真菌的有效量。
本披露所用术语“个体”是哺乳动物，例如人、小鼠、大鼠、豚鼠、狗、猫、马、奶牛、猪，或非人灵长类动物，例如猴子、黑猩猩、狒狒或恒河猴。
如本披露所用，“治疗”(现在时)、“治疗”(进行时)或“治疗”(名词)是指给药治疗物质，其给药量、方式(例如，给药的时间表)和/或模式(例如给药的途径)能有效改善疾病(例如，本披露所描述的感染)或其症状，或预防或延缓疾病(例如，本披露所描述的感染)或其症状的发展。这可以由，例如与疾病或其症状相关的参数的改善至例如统计学上显著的程度或业界技术人员可测量到的程度来证实。有效量、方式或模式可根据个体变化，也可为个体定制。通过预防或延缓疾病或其症状的发展，治疗可预防或缓解受影响的或诊断出的个体内由疾病或其症状所引起的恶化。
如本披露所用，“联用给药”是指在同时或在一定时间间隔内向一个体给药两种或多种制剂，从而使得每一制剂对该个体的效果相叠加。所述第一和第二制剂的给药可以间隔足够接近，从而获得联用的效果，例如协同作用的效果。该间隔可以是数小时、数天或数周。这些制剂可以同时在所述个体内有生物利用，例如可检测的。例如，在所述个体内一种制剂，例如本披露所描述的化合物，仍然处于治疗水平时，可以对该个体给药另一制剂，例如抗真菌药物。该个体可能在之前已经有了未达到预定阈值的反应。例如，该个体之前可能有失败的或不完全的反应，例如，对该抗真菌药的失败的或不完全的临床反应。可以把抗真菌药物和本披露所描述的化合物制剂成单独给药或一起给药。
除非特别定义，本披露所采用的技术和科学术语的含义与本发明所属技术领域的普通技术人员对这些术语通常所理解的含义相同。尽管与本披露所描述的方法和材料相似或等同的方法和材料可用于实施或测试本发明，以下对合适的方法和材料进行描述。本披露所提及的发表、专利申请、专利以及其他参考资料，其全部内容在此被参考并入。若存在冲突，以本说明书，包括定义，为准。另外，这些材料、方法以及例子仅是示例性的，并非限制性的。
根据以下详细描述和权利要求，本发明的其他特点和优点显而易见。
识别增强剂的方法
在一些情况下，此处所描述的方法可用于识别可增强抗真菌药物活性的化合物。其基本原理是用以抗真菌药物处理的真菌菌株筛选化合物。这些筛选方法适用高通量筛选(HTS)。
在一个非限制性例子中，该筛选涉及把真菌与抗真菌药物接触。该筛选还涉及把这些真菌与候选化合物接触。该筛选还涉及比较存在所述候选化合物时所述真菌的活细胞数量和不存在所述候选化合物时所述真菌的活细胞数量。若不存在所述候选化合物时所述真菌的活细胞数量大于存在所述候选化合物时所述真菌的活细胞数量，说明所述候选化合物是增强剂。
在一些情况下，所述方法还包括在不存在所述抗真菌药物的情况下，把第二真菌与所述候选化合物接触，并确定不存在和存在所述候选化合物时，所述第二真菌的活细胞的数量，其中，所述真菌和所述第二真菌是相同的。
可采用业界已知的任意方法来检测活细胞数量。例如，可用可区分活细胞和死细胞的染料来观察真菌细胞。染料的例子包括阿尔玛蓝(alamar blue)、XTT、FUN-1、二乙酸荧光素以及LIVE/DEAD
Figure BPA00001276396200281
Yeast Viability Kit(Invitrogen)中的那些染料。其他非限制性例子如美国专利第5445946号和第5437980号以及Jin等所发表的Mycopathol 159：353-360(2005)中所描述的。
在一些例子中，对在液体生长培养基中生长的细胞进行所述实验。在又一些例子中，在平板检测中确定活细胞的数量，例如检测在微孔板上生长的细胞。
所述筛选方法可对任何真菌实施，例如以下的一个或多种：一些曲霉菌属的菌(例如黄曲霉、烟曲霉、灰绿曲霉、构巢曲霉、黑曲霉以及土曲霉)、皮炎芽生菌、一些念珠菌属的菌(例如白念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌以及季也蒙假丝酵母)、粗球孢子菌、一些隐球菌属的菌(例如新型隐球菌、白色隐球菌以及罗伦特隐球菌)、荚膜组织胞浆菌荚膜变种、荚膜组织胞浆菌杜波氏变种、巴西副球孢子菌、申克孢子丝菌、伞状犁头霉、微小根毛霉以及无根根霉。
所述筛选所识别出的增强剂可用于抑制、减少、预防真菌生长或杀死真菌。这样的真菌可以是在任何地方生长的真菌，包括在个体内比如哺乳动物内生长的真菌。因此，该增强剂可用于治疗个体内的真菌感染。
在本披露中所描述的筛选中，可以测试任何候选化合物，以确定其是否具有增强能力。例如，候选化合物库可被用来提供候选化合物。候选化合物库的非限制性的例子包括新英格兰地区性生物防卫和新发传染病杰出中心的化合物库、国立卫生院分子库筛选中心的化合物库、ChemBridge库、ChemDiv库以及MayBridge库。或者，可以利用已知的方法合成候选化合物。
如通式I的化合物
本披露所描述的组合物及方法包括根据通式I的化合物：
Figure BPA00001276396200291
或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药：
其中，R1如以上对通式I的描述。
如通式I的非限制性的示例性的化合物包括：
Figure BPA00001276396200292
Figure BPA00001276396200301
本披露所描述的组合物及方法包括如通式Ia的化合物：
Figure BPA00001276396200302
或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药：
其中，R1如以上对通式Ia的描述。如通式Ia的非限制性的示例性的化合物包括：
本披露所描述的组合物及方法包括如通式Ib的化合物：
Figure BPA00001276396200321
或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药：
其中，R1如以上对通式Ib的描述。如通式Ib的非限制性的示例性的化合物包括：
Figure BPA00001276396200322
如通式I的化合物还可形成盐，其也在本发明的范围内。除非特别指明，在提到本披露的化合物时，也包括其盐。如通式I的化合物可形成药学上可接受的盐(即无毒的，生理学上可接受的)以及其他例如可用于在制备过程中可采用的分离或纯化步骤中的盐。
如通式I的包括碱性部分如，但不限于胺或吡啶或咪唑环的化合物，可以与各种有机的和无机的酸形成盐。酸加成盐的例子包括但不限于醋酸盐(如那些与醋酸或三卤醋酸，如三氟醋酸形成的盐)、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖盐(glucoheptanoates)、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、羟乙基磺酸盐(如2-羟乙基磺酸盐)、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐(如2-萘磺酸盐)、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、丙酸苯盐(如3-丙酸苯盐)、磷酸盐、苦酸盐、三甲基乙酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐(如与硫磺酸形成的盐)、磺酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐，如甲苯磺酸盐、十一酸盐等。
如通式I的包括酸性部分如，但不限于羧酸的化合物，可以与各种有机的和无机的碱形成盐。碱性盐的例子包括但不限于铵盐，碱金属盐，如钠盐、锂盐、钾盐，碱土金属盐，如钙盐、镁盐，具有有机碱(如有机胺)如苄星、二环己基胺、海巴明(与N，N-二(去氢枞基)乙二胺形成)、N-甲基-D-葡糖胺、N-甲基-D-咪唑双酰胺、叔丁胺的盐，以及具有氨基酸，如精氨酸、赖氨酸等的盐。可以用下列试剂季铵化碱性的含氮基团，如低卤代烃(如氯代、溴代或碘代甲基、乙基、丙基、丁基)、二烷基硫酸盐(如二甲基、二乙基、二丁基、二戊基硫酸盐)、卤代长链(如氯代、溴代或碘代癸基、十二烷基、十四烷基、十八烷基)、卤代芳烷基(如溴代苯甲基、苯乙基)等。
在以下实施例部分列出了示例性的非限制性的如通式I的化合物。本披露的化合物的溶剂化物包括这些化合物的水合物，及这些化合物的水合形式和酮形式的混合物，它们也在本披露的范围之内。
制备金刚烷衍生物的方法
本披露所描述的化合物可以通过以下通用方案及例子中所描述的化学手段合成。所述化合物可以由市售的原料合成，并且并非只能由这些示例性的合成来制备。本领域的技术人员能够理解，存在其他制备所述化合物的方法。本领域的技术人员也能理解，通过以下的示例性的合成方案，可以理解本披露所披露的化合物的其他通用合成方案。或者，在递交本申请时，本披露所披露的所有所述化合物都是市场上可购得的(例如，从Ambinter，法国巴黎；Sigma Aldrich，密苏里州圣路易斯；Ryan Scientific，南卡罗来纳州芒特普莱森特；Enamine，乌克兰基辅；ASDI Biosciences，特拉华州纽瓦克)。
方案1
方案1展示了金刚烷直接转化成羟基取代的金刚烷。
Figure BPA00001276396200331
两种羟基取代的金刚烷都可以根据方案1中所示的化学式以及Alonso et al.，Tetrahedron，64(8)，1847-1852(2008)的描述来制备。
方案2
方案2(“AC17”)中的金刚烷胺可以根据Miriyala et al.，Tetrahedron，60(7)，1463-1472，(2004)中的描述来制备。
方案3
Figure BPA00001276396200342
或者，方案2中的金刚烷胺可以根据Malik et al.，Synthesis，6：450-451，(1989)中的描述来制备。
方案4
Figure BPA00001276396200343
可以根据Wipf，Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis.Ed.，Peter Wipf，Wiley and Sons：Chichester，2005中描述的方法来制备金刚烷胺(amantidine)，方案5中氨基金刚烷(aminoadamantane)的衍生物。
方案5
如Jones et al.，J.Org.Chem.，63(8)，2758-2760(1998)中所描述的，该氨基金刚烷的甲胺基衍生物可用方案5中所列的试剂合成。
方案6
Figure BPA00001276396200351
或者，如美国专利第4,826,667号所描述的，可以用方案6中所列的试剂合成氨基金刚烷的所述甲胺基衍生物。
方案7
如Matolcsy et al.，Acta Phytopathol.Acad.Sci.Hung.，13(1-2)，223-225(1978)中所描述的，金刚烷胺的所述咪唑衍生物可以根据方案7所列来制备。
方案8
Figure BPA00001276396200353
或者，如PCT国际申请第2005/108361号所描述的，可以用方案8中所列的试剂来合成氨基金刚烷的所述吡咯衍生物。
方案9
Figure BPA00001276396200361
根据Klimova et al.，Khimiko-Farmatsevticheskii Zhurnal，9(11)，8-11(1975)中所描述的方法可以合成金刚烷胺的所述哌嗪衍生物。
方案10
Figure BPA00001276396200362
根据Bhattacharyya，J.Chem.Soc.，Perkin Trans.1：Organic and Bio-OrganicChemistry，14，1845-1847(1995)中所描述的方法可以合成金刚烷乙胺。
治疗真菌感染的方法
本披露所描述的一些增强剂化合物可以和已知的抗真菌药物一起用于治疗各种真菌感染，但是其本身没有抗真菌活性。另外，一些增强剂化合物具有抗真菌活性，同时也可以增强抗真菌药物的活性。
真菌和真菌感染
真菌感染是由一些真菌引起的，而本披露所描述的所述化合物可被用于抑制这些真菌的生长或杀死这些真菌。这些真菌包括但不限于曲霉菌属的一种(例如黄曲霉、烟曲霉、灰绿曲霉、构巢曲霉、黑曲霉以及土曲霉)、皮炎芽生菌、念珠菌属的一种(例如白念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌以及季也蒙假丝酵母)、粗球孢子菌、隐球菌属的一种(例如新型隐球菌、白色隐球菌以及罗伦特隐球菌)、荚膜组织胞浆菌荚膜变种、荚膜组织胞浆菌杜波氏变种、巴西副球孢子菌、申克孢子丝菌、伞状犁头霉、微小根毛霉以及无根根霉。
这些真菌促成了一些真菌感染，包括但不限于曲霉菌病、芽生菌病、念珠菌病(例如口腔念珠菌病或阴道炎)、球孢子菌病、隐球菌病、组织胞浆菌病、类球孢子菌病、孢子丝菌病或接合菌病。可以用本披露所描述的所述化合物和方法来治疗任意这些真菌感染。在一些例子中，所述真菌感染是由白念珠菌促成的，比如口腔念珠菌病(Thein et al.，Arch.Oral Biol.52：1200-1208(2007))或阴道炎(Rex et al.，Clin.Infect.Dis.30：662-678(2000))。
某些真菌感染可能与内置器械有关，例如导管和假体。例如，真菌生物膜是导管和其他器械相关的感染的主要问题(Kuhn et al.，Curr.Opin.Investig.Drugs 5：186-197(2004)；Ramage et al.，FEMS Yeast Res.6：979-986(2006))，而本披露所描述的所述化合物可用于处理这些情况。例如，为处理一医疗器械上的白念珠菌感染，可以把本披露所描述的所述化合物应用于该医疗器械表面作为涂层。在其他例子中，例如假牙或导管，本披露所描述的所述化合物可直接用于所述器械(Nikawa et al.，Int.J.Prosthodont.8：434-444(1995)；Sherertz et al.，Antimicrob.Agents Chemother.50：1865-1868(2006)；Fortun，Enferm.Infecc.Microbiol.Clin.26：168-174(2008))。
在一些情况下，本披露所描述的所述化合物可用于在免疫缺陷的个体内，例如正在进行化疗的中性白细胞缺乏的个体内，治疗这些感染和疾病。在另一些例子中，该个体可以正在进行或者已经进行了额外治疗，例如抗生素疗法。
抗真菌药物
本披露所描述的所述增强剂化合物可以和任何已知的抗真菌药物联合使用。有用的抗真菌药物包括但不限于两性霉素(例如两性霉素-B、两性霉素B脂质复合物(ABLC)、两性霉素B脂质体(L-AMB)以及两性霉素B胶体悬浮剂(ABCD))、唑类(例如咪唑(例如咪康唑，例如Monistat)、克霉唑、氟康唑、伊曲康唑、酮康唑、雷夫康唑、泊沙康唑以及伏立康唑)、卡泊芬净、米卡芬净、FK463、阿尼芬净(LY303366)、羟芪巴脒、5-氟胞嘧啶、氟胞嘧啶、碘化物(例如，以碘化钾的饱和溶液的形式或SSKI)、特比萘芬、制霉菌素、灰黄霉素以及环吡酮。抗真菌药物的一个例子是咪康唑，例如Monistat
Figure BPA00001276396200372
，这是一种咪唑类抗真菌药物，通常局部地应用，以治疗真菌感染。这些和其他抗真菌药物是业界一般技术人员所知的，也可以从市场上购买获得。例如，这些抗真菌药物的很多可以从以下公司购得：辉瑞公司(Pfizer Inc.)、McNeil-PPC，Inc.、强生公司(Johnson & Johnson)、安龙制药公司(Enzon Pharmaceuticals，Inc.)、先灵葆雅健康产品公司(Schering-Plough HealthCare Products)、山德士公司(Sandoz Inc.)、兰伯西实验室有限公司(Ranbaxy Laboratories Ltd.)、Mylan Pharmaceuticals，Inc.、Roxane Laboratories，Inc.、Sicor Pharmaceuticals，Inc.、Novopharm Ltd.、奥贝泰克公司(Apotex Inc.)、Bedford Laboratories、Pliva Inc.、Taro Pharmaceutical Industries，Ltd.以及American Pharmaceutical Partners，Inc.。
治疗性给药
本披露所描述的抗真菌药物和增强剂化合物的给药途径和/或方式可根据期望的结果而变化。例如，所述抗真菌药物和化合物的剂量可以如此选择，使得其疗效比单独使用所述抗真菌药物(即不存在本披露所描述的化合物)时的疗效好10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、125％、150％、175％、或200％。这些效果可以由本领域技术人员所确认，例如使用标准的与真菌感染相关的参数。给药方案可以调整，以提供期望的反应，例如治疗反应或者联用的治疗效果。总之，可采用本披露所描述的抗真菌药物和化合物的任意剂量组合(单独的或联合制剂的)，从而向一个体以生物可利用的量提供这两种制剂。
给药的方法包括但不限于皮内的、肌内的、腹膜内的、静脉内的、皮下的、鼻内的、硬膜外的、口服的、舌下的、脑内的、阴道内的、透皮给药的、直肠的、通过吸入或外用的，尤其是对耳朵、鼻子、眼睛或皮肤。在一些例子中，给药可导致本披露所描述的抗真菌药物和/或增强剂释放到血流中。给药的方式由实施者自行决定。
在一些例子中，本披露所描述的抗真菌药物和/或增强剂可以本地给药。这可以通过以下手段实现，例如在手术过程中局部输液，外用涂抹(例如以霜或者膏)，通过注射、通过导管、通过栓剂或灌肠剂，或通过植入剂，所述植入剂是多孔的、无孔的或凝胶材料，包括薄膜，例如硅橡胶薄膜，或纤维。
在一些情况下，通过任意途径，包括心室内的、鞘内注射、脊柱旁注射、硬膜外注射、灌肠以及末梢神经附近注射，可以把本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物引入中枢神经系统、循环系统或胃肠道。心室内注射可以通过连接于一贮器，如连接于Ommaya贮器的心室内导管实现。
本披露还提供了用于给药所描述的抗真菌药物和化合物的器械。该器械可包括一个或多个用于存储药物组合物的外壳，并可被设置成供给单位剂量的本披露所描述的抗真菌药物和化合物。本披露所描述的抗真菌药物和化合物可存储于同一隔室或独立的隔室。例如，在给药前该器械可合并所述抗真菌药物和所述化合物。也可以用不同的器械来给药所述抗真菌药物和所述化合物。
也可以采用肺部给药，例如通过使用吸入器或者喷雾器，以及含有雾化剂的制剂，或通过碳氟化合物或合成的肺部表面活性剂灌注。
在一些例子中，本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物可通过泡囊(vesicle)输送，特别是脂质体(请参Langer，Science 249：1527-1533(1990)；and Treat et al.，Liposomes in the  Therapy of Infectious Disease and Cancer，Gabriel Lopez-Berestein，John Wiley & Sons Canada，pp.317-327 and pp.353-365(1989))。
在又一些情况下，本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物可通过控释系统或缓释系统输送(请参例如Goodson，in Medical Applications of Controlled Release，Robert L.Langer，Donald Lee Wise，CRC Press，2：115-138(1984))。Langer，Science 249：1527-1533(1990)中所讨论的其他控释系统或者缓释系统也可以被采用。在一个实施例中，泵可以被采用(Langer，Science 249：1527-1533(1990)；Sefton，CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14：201(1987)；Buchwald et al.，Surgery 88：507(1980)；and Saudek et al.，N.Engl.J.Med.321：574(1989))。在又一实施例中，可以采用聚合材料(请参Medical Applications of Controlled Release(Langer and Wise，eds.，1974，CRC Press)；Controlled Drug Bioavailability，Drug Product Design and Performance(Smolen and Ball eds.，John Wiley，1984)；Ranger et al.，J.Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.2：61(1983)；Levy et al.，Science 228：190(1935)；During et al.，Ann.Neural.25：351(1989)；and Howard et al.，J.Neurosurg.71：105(1989))。
在又一些情况下，控释系统或缓释系统可以放置在本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物的靶点附近，例如生殖器官的附近，把剂量减少到系统剂量的一部份。
本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物可被配制成药物组合物，其包括适当量的生理学上可接受的赋形剂(请参例如Remington’s Pharmaceutical Sciences pp.1447-1676(Alfonso R.Gennaro，ed.，19th ed.1995))。这样的生理学上可接受的赋形剂可以是例如液体，比如水和油，包括石油产品、动物油、植物油或合成来源的产品，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。该生理学上可接受的赋形剂可以是盐水、阿拉伯树胶、明胶、淀粉糊、滑石粉、角蛋白、胶体硅、尿素等。另外，可采用辅助剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂以及着色剂。在一个实施例中，当向动物给药时，所述生理学上可接受的赋形剂是无菌的。在生产和存储条件下，所述赋形剂应该是稳定的，并且储存时应该避免微生物污染。静脉内给药本披露所描述的增强剂和/或抗菌药物时，水是特别有用的赋形剂。盐水溶液以及葡萄糖水溶液和甘油水溶液也可以作为液体赋形剂，特别是用于可注射的溶液。合适的生理学上可接受的赋形剂还包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。合适的生理学上可接受的赋形剂的其他例子如Remington’s Pharmaceutical Sciences pp.1447-1676(Alfonso R.Gennaro，ed.，19th ed.1995)中所描述。如果需要，所述药物组合物还可以含有少量的湿润剂或乳化剂或pH缓冲剂。
液体载体可用于制备溶液、悬浮液、乳状液、糖浆以及酏剂。本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物可溶解于或悬浮于生理学上可接受的液体赋形剂，例如水、有机溶剂、两者的混合物或生理学上可接受的油或脂肪。所述液体赋形剂可以含有其他合适的生理学上可接受的添加剂，包括增溶剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、增甜剂、搅味剂、助悬剂、增稠剂、着色剂、黏度调节剂、稳定剂或渗透调节剂。对于口服给药和肠胃外给药，合适的液体载体的例子包括水(特别是含有本披露所描述的添加剂，例如纤维素衍生物，包括羧甲基纤维素钠溶液)、醇(包括饱和一元醇和多元醇，例如乙二醇)及其衍生物以及油(例如分馏椰子油和花生油)。对于肠胃外给药，所述载体还可以是油酯(oily ester)，例如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。这些液体载体可以以无菌形式用于给药。对加压的组合物，所述液体载体可以是卤代烃或其他药学上可接受的推进剂。
本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物可以采用以下形式：溶液、混悬液、乳剂、片剂、丸剂、颗粒、胶囊、含液体的胶囊、粉末、缓释制剂、栓剂、乳剂、气雾剂、喷剂、混悬液以及其他任何适用的形式。在一个实施例中，所述组合物采用胶囊形式。
在一些例子中，根据常规工艺，把本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物制剂成适于人口服的组合物。用于口服的组合物可以是以下形式，例如片剂、锭剂、口含片、口含剂、水或油混悬液或溶液、颗粒、粉末、乳化剂、胶囊、糖浆或酏剂。口服给药的组合物可以含有一个或多个添加剂，例如增甜剂，例如果糖、阿斯巴甜或糖精；搅味剂，如薄荷、冬青油或樱桃；着色剂；以及防腐剂，以提供药学上可口的制剂品。若是粉末形式，所述赋形剂可以是精细分的固体，它是本披露所描述的精细分的增强剂和/或抗真菌药物的掺合剂。若是片剂，可以适当的比例把本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物与具有压片性质的载体混合，并压片成希望的形状和尺寸。所述粉末和片剂可以含有最多约99％的本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物。
胶囊可含有本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物与惰性填充剂和/或稀释剂的混合物。所述填充剂和/或稀释剂的例子包括药学上可接受的淀粉(例如玉米、土豆或木薯淀粉)、糖、人造增甜剂、粉末状纤维素(例如晶状纤维素或微晶状纤维素)、面粉、明胶、树胶等。
可以采用传统的压片方法、湿法造粒及干法造粒的方法来制造片剂。该片剂可采用药学上可接受的稀释剂，粘合剂，润滑剂，崩解剂，表面改性剂(包括表面活性剂)，助悬剂或稳定剂包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、十二醇硫酸钠、滑石粉、糖、乳糖、糊精、淀粉、凝胶、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙、聚乙烯吡咯烷、褐藻酸、阿拉伯橡胶、黄原胶、柠檬酸钠、复合硅酸盐、碳酸钙、氨基乙酸、蔗糖、山梨醇、磷酸二钙、硫酸钙、乳糖、高岭土、甘露醇、氯化钠、低熔点蜡以及离子交换树脂。表面改性剂包括非离子表面改性剂和阴离子表面改性剂。表面改性剂的代表性例子包括但不限于泊洛沙姆188、杀藻胺、硬脂酸钙、cetostearl alcohol、聚乙二醇单鲸蜡基醚乳化蜡、山梨糖醇酯、胶态二氧化硅、磷酸盐、十二烷基硫酸钠、硅酸镁铝以及三乙醇胺。
另外，当是片剂或丸剂时，本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物可被涂层覆盖，以延缓在胃肠道内的崩解和吸收，从而在延长的期间内提供持续的效果。包围等渗活性的，驱动本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物的选择性渗透膜也适用于口服给药组合物。在这些后面的平台，来自包围所述胶囊的环境的液体可被所述驱动化合物所吸收，其膨胀以通过孔移动所述药物或药物组合物。这些传递平台提供了基本上零阶的传递曲线，与速释制剂的毛刺状曲线相反。时间延迟材料，如单硬脂酸甘油酯或硬脂酸甘油酯可被采用。口服组合物可包括标准的赋形剂，例如甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素以及碳酸镁。在一些情况下，所述赋形剂是制药级的。
在又一些例子中，本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物可配制成用于静脉内给药。静脉内给药的组合物可包括无菌的等渗水相缓冲液。这些组合物还可包括增溶剂。静脉内给药的组合物可任选地包括局部麻醉剂，如利诺卡因，以减轻注射处的痛苦。这些组分可以被单独地供应，也可以混合在一起按单位剂量供应，例如以冻干粉末或无水浓缩物的形式提供于密封容器内，如标明有效成分的量的安瓿或小袋。当本披露所描述的增强剂和抗真菌药物是通过输液给药时，其可以用例如含有无菌制药级水或盐水的输液瓶分派。当本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物是通过注射给药时，可以提供用于注射的一安瓿的无菌水或盐水，使得所述组分可以在给药前进行混合。
在又一些情况下，本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物可透过身体表面或身体通道的内层，包括上皮和粘膜组织，进行给药。可以用露、霜、泡沫、贴片、悬浮液、溶液以及栓剂(例如直肠的或阴道的)来对本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物的实施这样的给药。在一些例子中，可采用的透皮给药的贴片含有本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物以及对本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物惰性的并且对皮肤无毒性的载体，其可使所述传递通过皮肤系统性吸收进入血流。所述载体可以有多种形式，例如霜或软膏、糊、凝胶或闭合的器械。所述霜或软膏可以是粘稠的液体或者水包油或者油包水型的半固体乳剂。也可采用含有本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物的石油产品或亲水性石油产品，分散于中的可吸收的粉末的糊剂。多种闭合器械可被用于把本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物释放至血流中，例如覆盖有半渗透薄膜的贮器，该贮器含有本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物，可以带有或不带有载体，或者含有本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物的基质。
本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物可以通过栓剂在直肠内或阴道内给药。可以用业界技术人员所知的方法，以传统的材料来制造栓剂，包括可可油，可在其中添加或者不添加蜡来调节栓剂的熔点，以及甘油。可采用水溶性的栓剂基质，如各种分子量的聚乙二醇。
可用业界技术人员所知的标准临床技术来确定有效治疗感染所需的本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物的量。另外，任选地，可使用体外和体内评价来帮助确定优化的剂量范围。可以根据给药途径、条件、欲治疗的条件的严重性以及与被治疗的个体相关的各种身体因素，由医疗从业人员决定所需的精确剂量。例如，本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物中的每一个的剂量可以是每天约0.01mg/kg到约250mg/kg体重，每天约1mg/kg到约250mg/kg体重，每天约1mg/kg到约50mg/kg体重，或者每天约1mg/kg到约20mg/kg体重。可以跨不同的期间给药等同的剂量，包括但不限于大约每2小时，大约每6小时，大约每8小时，大约每12小时，大约每24小时，大约每36小时，大约每48小时，大约每72小时，大约每周，大约每两周，大约每三周，大约每月，大约每两月。可以由医疗从业人员决定一个完整的疗程的按剂量给药的次数和频率。
在一些例子中，本披露所描述的药物组合物是单位剂量形式，例如片剂、胶囊、粉末、溶液、混悬液、乳剂、颗粒或栓剂。在这样的形式中，该药物组合物可被分成含有适当量的本披露所描述的增强剂和/或抗真菌药物的多个单位剂量。所述单位剂量形式可以是包装好的药物组合物，例如，袋装粉末、含有液体的小瓶、安瓿、预装的针管或小袋。该单位剂量形式可以是例如胶囊或片剂，或者是可以是包装形式的合适量的任意这些组合物。这样的单位剂量形式可以含有大约1mg/kg到大约250mg/kg，并可以用单个剂量提供，也可以用两个或多个分开的剂量提供。
在以下例子中进一步对本发明进行描述，这些例子并不限制本发明权利要求所描述的范围。
实施例
实施例1
白色念珠菌持留菌的表征
针对可能存在的持留菌，对浮游群体和生物膜群体都作了检查。某些化合物包括两性霉素B、氯己定以及卡泊芬净可杀死念珠菌生物膜，用剂量依赖性实验测试这些化合物。如果得到反映出幸存者亚群的双相杀菌曲线，则表明有持留细胞存在。
在微孔板上，白色念珠菌3153A细胞的生物膜在RPMI培养液中培养48小时(Ramage et al.，Antimicrob.Agents Chemother.45：2475-2479(2001))，接着，用pH7.4的PBS洗两次，以去除无附着性的细胞，并重新悬浮于含有抗真菌药物的100ul的RPMI生长培养液中。经过24小时抗真菌的处理，所述生物膜和培养物被清洗两次，并重新悬浮于100ul的PBS中，然后进行刮片并移入埃彭多夫管，接着将其振匀，在YPD培养基上铺板以确定其集落形成单位(CFU)。显微镜显示该材料是单个细胞和≤10个细胞的细胞团块的混合物。这可能导致对存活细胞＜10倍的低估。将快速生长的和静态的浮游培养物平行地在RPMI培养液中培养48小时，接着加入抗真菌药物后再培养24小时。该实验重复三次，误差条显示标准偏差(请参图1A-1B)。
卡泊芬净对生物膜的效果有限，只能产生≤10倍的杀菌作用。两性霉素B可有效杀死快速生长的和静态的细胞，几乎没有存活细胞的迹象(图1A)。相反的，在念珠菌生物膜中观察到了双相的杀菌效果，大多数细胞是在低浓度(但高于1ug/ml的MIC)药物下被杀死，而其他细胞在更高浓度药物时也未受影响(图1A)。超过1％的细胞展示出可抵抗两性霉素B，表明酵母生物膜中存在持留细胞，与在细菌中观察到的相反，细菌中静态的浮游群体比生物膜产生更多的持留细胞。两性霉素B可在细胞膜上打“洞”，对两性霉素B杀菌作用的抗药性是没有预料到的。该化合物的活性有赖于并受限于麦角固醇的可用性。
与用两性霉素B所观察到的结果类似，氯己定也产生了对生物膜的双相杀菌效果，快速生长的和静态的培养物中的细胞都被消灭(图1B)。在更高浓度下(高于100ug/ml)，观察到持留细胞被杀死，并且在1000ug/ml(比通常用于漱口液和用于治疗由白色念珠菌引起的口腔念珠菌病的药物配方(0.2％)低两倍的浓度)的浓度下，所述生物膜被完全灭菌。
所述双相杀菌性特征说明所述群落中存在有耐药突变体。为了确定存活细胞是野生细胞的表型变异体还是突变体，检查了存活细胞的耐药性。
在微孔板上培养生物膜，并以两性霉素B或氯己定(100ug/ml)处理24小时，然后，如以上所讨论的那样将其清洗并振匀。接着，这些细胞被重新接种至微孔板，以形成新的生物膜。由经药物处理存活下来的所述持留细胞产生的新的生物膜被再次以抗真菌药物处理(如以上所讨论)，并且这个过程被重复总共三次。在抗真菌药物处理前后分别采样生物膜，以确定CFU。该实验重复三次。
如图2所示，存活的持留细胞所产生的集群并不具备更强的耐药性，而是导致新的持留细胞亚集群(请参图2，误差条表示标准偏差)。如果所述存活细胞是突变体，预计重新用抗真菌药物后会完全耐药，或者每一轮处理后，存活细胞的数量逐渐增加。因此，白色念珠菌持留细胞就是野生型细胞的表型变异，来自于遗传上相同细胞的克隆群落。
还进行了测试，以确定酵母持留细胞是否对多种药物耐药。利用以上所讨论的相同方法，以100ug/ml两性霉素B、100ug/ml氯己定或两者的联用形式，对成熟的48小时白色念珠菌生物膜处理24小时。如以上所讨论的那样，在抗真菌药处理前后对生物膜进行清洗和采样，以确定CFU。
与单独以上述两种抗真菌药处理相比，以这两种抗真菌药的联用形式对生物膜进行处理中，并没有检测到额外的杀菌效果(图3，该实验重复三次，误差条表示标准偏差)。类似的，先以两性霉素B再以氯己定，或者以相反顺序，处理生物膜24小时后，持留细胞的数量基本相同(1％-3％)。这些实验表明存在单一的均匀的持留细胞群落。
接着以几种染料，包括荧光素二乙酸酯，来观察生物膜内的持留细胞，这些染料可区分出活的和死的真菌细胞。以100ug/ml荧光素二乙酸酯染色浮游的或生物膜细胞，并以荧光显微镜检查。图4A展示了活的浮游细胞；图4B展示了经过100ug/ml两性霉素B的处理后(400倍放大)死的浮游细胞；图4C-4E分别展示了未处理的对照生物膜，经两性霉素B(100ug/ml)处理18小时或48小时后的生物膜(1000倍放大)。
如预期的那样，以两性霉素B杀死的快速生长的白色念珠菌细胞容易被荧光素二乙酸酯染色(图4A-4B)。然后以荧光素二乙酸酯染色生物膜(图4C-4E)。加入两性霉素B后，可观察到活细胞(黑色)的数量的减少，并且它们的形态开始异常(图4D)。经48小时两性霉素B的处理后，只有很少数量的细胞没有被染色。它们呈现出普通的假菌丝或酵母的形式，并且很难与正常形态的未处理的细胞区分。用荧光检测和前向散射，把暗的持留细胞从瓦解的生物膜中物理分选出来，并放在琼脂培养基中生长。分选的持留细胞在琼脂培养基上产生菌落，说明它们是活的细胞。利用标准方法，使用分选持留细胞的能力获取它们的转录谱。
由于持留细胞只在所述生物膜中出现，它们的形成有赖于与决定生物膜发育相同的基因/路径。因此，通过测量大量生物膜有缺陷的突变体在高浓度两性霉素B下的存活，来测试它们产生持留细胞的能力。这些变异体能够附着于微孔板表面，使得可以使用如上所述的生物膜存活方案进行实验。所有菌株都可产生基本正常水平的持留细胞(表1)。这说明附着，而不是后续的生物膜形成，是持留细胞形成的诱因。
表1：由生物膜有缺陷的白色念珠菌菌株形成持留细胞
Figure BPA00001276396200451
Figure BPA00001276396200461
Figure BPA00001276396200471
+++表示1-2％存活
2++表示0.1-1％存活
3+表示0.05-0.1％存活
实施例2
咪康唑增强剂的高通量筛选
由于现有的抗真菌药物对持留细胞无效(高浓度氯己定除外)，开发了一种筛选方法，用于识别潜在的持留细胞化合物，其与传统的抗真菌药物的联用能够阻止持留细胞的形成以及消灭感染。具体地，开发了一种筛选方法，在用低于抑制浓度的咪康唑处理的白色念珠菌细胞中加入候选增强剂化合物。在微孔板上培养生物膜，并利用阿尔玛蓝的还原被用作定量的读数。阿尔玛蓝被活细胞还原，并产生荧光指示剂，由蓝色转变成红色，因此其可以被可视地检测到。这个初选无法区分直接作用的化合物和增强咪康唑的化合物。以下所描述的对初选中选化合物的后续验证使得可以识别协同作用的化合物。
图5示意性地展示了咪康唑增强剂的生物膜高通量筛选(HTS)。在筛选增强剂之前，在对照条件下测试该筛选的稳健性，以获得因子Z’。白色念珠菌被接种至RPMI 1640培养液，并以每孔30ul分配至384孔板。在37℃下培养48小时后，以含有100ug/ml咪康唑(阴性对照)或含有联用的100ug/ml咪康唑和50ug/ml氯己定(阳性对照)的新鲜的培养液替换所述培养液。在37℃下再培养48小时后，以含有10％阿尔玛蓝的PBS替换所述培养液。通过利用荧光板分析仪测量由白色念珠菌细胞引起的阿尔玛蓝还原而产生的荧光，根据以下方程式计算因子Z’：
Z′＝1-(3SD++3SD-)/(Ave+-Ave-)
其中，
SD+＝阳性对照标准偏差；
SD-＝阴性对照标准偏差；
Ave+＝阳性对照平均值；以及
Ave-＝阴性对照平均值
≥0.5的Z’表明有效的筛选，1.0是理论上最大的值。对于该对照实验，计算所得的Z’是0.8。接着，如图5，进行所述增强剂的高通量筛选。
首先，将30ul的RPMI 1640培养基中的白色念珠菌(OD600＝0.1)播种到384孔板中形成生物膜。所述微孔板在37℃下培养48小时后，以含有100ug/ml咪康唑的新鲜培养基替换所述培养基。来自以下所描述的化学库的测试化合物被定点转移至所述微孔板的各个孔，使得最终浓度为17ug/ml。生物膜再培养48小时后，以含有10％阿尔玛蓝的PBS替换所述培养基。所述微孔板在37℃下培养另外的6小时后，用荧光读板仪在激发波长为544nm和发射波长为590nm处测量阿尔玛蓝的还原。
以重复两次的模式，筛选了大约70,000种化合物，产生了6个较强的中选化合物(展示出对阿尔玛蓝的还原的抑制大于大约75％)，以及52个中等的中选化合物(展示出介于大约50％至大约75％的抑制)，这些中选化合物被进一步检测。图6展示了来自以重复两次筛选的一代表化合物的结果(板A和B)。筛选的总体中选率是0.47％。表2展示了该筛选的结果。
表2：咪康唑增强剂高通量筛选的概要
Figure BPA00001276396200481
通过测量菌落数量，对这些中选化合物的活性进行验证，再对其在咪康唑(100ug/ml)存在时杀死生物膜的能力进行检测。包括AC17在内的五种化合物在咪康唑联用时能够杀死生物膜，而单用时不能杀死生物膜。
实施例3
AC17的体外验证
在体外评价了AC17杀灭高持留细胞变异体生物膜的药效、毒性和能力。
药效
在咪康唑存在的条件下，确定杀死生物膜和消灭持留细胞所必需的AC17的最低浓度。用AC17对野生型的成熟白色念珠菌生物膜处理48小时。清洗生物膜，刮片，重新悬浮于PBS，振匀30秒，并铺板以用于菌落计数。咪康唑的浓度为100ug/ml。
AC17对杀死生物膜具有很强的增强活性(图7)，但单独作用时，无论针对生物膜或生长的细胞，都不具备活性(MIC＞512ug/ml)。
毒性
以原代人体成纤维细胞IMR-90进行了体外细胞毒性评价。在37℃和5％CO2的条件下，在10％的FBS-DMEM中培养成纤维细胞。在96孔平底板的每一个孔内播种105个细胞。细胞培养48小时，以达到70％汇合度，然后加入用新鲜培养基二倍连续稀释的所述化合物。细胞培养24小时，然后以新鲜培养基替换含有所述化合物的培养基。成纤维细胞再培养18小时，然后通过阿尔玛蓝的还原测定细胞的存活能力。利用所述阿尔玛蓝读数，确定减少存活能力超过50％的药物浓度(EC50)，该浓度被用于计算治疗指数(EC50/MFC生物膜，其中，MFC生物膜表示存在咪康唑时，消灭生物膜的AC17的最小浓度)。AC17的EC50、MFC生物膜以及治疗指数分别为250ug/ml、20ug/ml以及12.5。还测试了存在咪康唑时，AC17的细胞毒性。咪康唑单用的EC50被测定为16ug/ml。16ug/ml的咪康唑的加入没有增加AC17的细胞毒性效果。
高持留突变体的生物膜的消灭
周期性地应用高浓度的杀菌抗生素可在体外大肠杆菌内筛选高持留“hip”突变体。为确定在体内是否也会发生对“hip”突变体的类似筛选，测试了白色念珠菌的131份临床分离株的持留水平。这些菌株来自于因抗癌化疗而得口腔念珠菌病的病人。这些病人每天外用氯己定。
由微孔板内的白色念珠菌的临床分离株制备生物膜(如例1中所描述)，然后以100ug/ml两性霉素B或者100ug/ml氯己定处理。菌株1-6是来自有顽固性念珠菌病的病人(组1)，而菌株7-15是来自其感染在三周内治愈的病人(组2)。
如图8A所示，相当数量的分离株中存活的持留细胞水平升高。两性霉素B和氯己定对这些菌株的MIC没有改变(分别为1ug/ml和4ug/ml)，这表明这些不是抗药突变体，而是提高了药物耐受性的hip突变体。该唯一的hip突变体是来自未在三周内治愈感染的病人(图8A)。这样，这些发现把微生物持留细胞和临床疾病表现联系起来，说明所述顽固发作可能是由于持留细胞。
由于难以治愈的病例与白色念珠菌的hip突变体相关，对AC17进行了针对这些病原菌的活性测试。从hip菌株培养生物膜，并以AC17(100ug/ml)、咪康唑(100ug/ml)或两者的联用形式进行处理。如图8B所示，咪康唑和AC17的联用消灭了所述生物膜。
实施例4
AC17抑制生物膜形成
如以上所描述，发现AC17可与咪康唑联用杀死念珠菌生物膜。确定了AC17对生物膜形成是否有直接的效果。
根据标准生物膜形成流程，用RPMI培养基调节白色念珠菌细胞悬浮液至OD600值为0.1，并且加入来自10mg/ml储备液的各种浓度的AC17。100ul等份被加入平底微孔板(CoCostar 3370)的孔内，在37℃下，在微孔板摇床上(Lab-Line Instruments；型号4625)，以大约100rpm摇晃培养24小时，以形成生物膜。24小时后，以无菌PBS清洗所述生物膜三次，以去除不附着的细胞和AC17。通过在孔内加入100ul 10％的阿尔玛蓝，并在37℃下培养2小时，测量了生物膜的代谢活动。将板置于荧光分光光度计内，以激发波长为544nm，发射波长为590nm读板，测量了生物膜代谢活动的荧光密度。如图9A所示，AC17以剂量依赖的方式抑制了细胞形成野生型生物膜的能力。
为验证AC17所具备的活性是特别针对生物膜，对经AC17处理和未经AC17处理的细胞绘制了在YPD培养基中的生长曲线。菌株CAF2-1在YPD培养基中过夜培养，并以新鲜的YPD培养基和含有30ug/ml AC17的YPD培养基稀释。在24小时内的多个时间点，用分光光度计测量了600nm处的光密度，以产生一生长曲线。与未经处理的对照相比，在以YPD培养基培养的经AC17处理的酵母细胞中，未检测到生长速度的不同(请参图9B)。根据显微镜分析，细胞大小和形态也呈现出完全正常。
实施例5
AC17抑制菌丝延长
为更好地理解AC17是如何抑制生物膜形成，而对生长没有直接抑制活性，确定了AC17对丝状生长的影响。利用显微镜分析了AC17是否专门地抑制酵母菌丝转变或防止菌丝延长。
来自在YPD培养基中培养的过夜培养物白色念珠菌细胞在RPMI培养基中稀释到OD600nm值为0.2。1ml细胞悬浮液被等份地加入15ml的培养管内，并且来自10mg/ml存储液的溶于RPMI培养基的适当浓度的AC17被加入这些试管。在37℃下，在以200rpm摇动的培养箱内培养这些试管12小时。12小时后，来自这些试管的样本被湿封，并用具有AxioCam黑白CCD相机(Carl Zeiss)的Zeiss Axioskop 2显微镜拍照。利用Axiovision Rel.4.5软件量化菌丝长度，识别出产生单芽管的酵母细胞和测量所述菌丝首尾端之间距离。对每一处理，测量90个细胞，并取平均值，并且所述实验是重复两次进行。
通过显微镜观察显示，与经AC17处理的细胞(图10B)相比，未经处理的细胞(图10A)具有更长的菌丝。在含有AC17的RPMI 1640培养基中生长12小时后，测量了各个菌丝的长度，发现了浓度依赖性的菌丝延长的衰减(图10C)。以50ug/ml的AC17处理导致了菌丝长度减小了两倍，而与未经处理的对照相比，12.5ug/ml就足以导致菌丝长度上的显著差异。通过显微镜观察还发现AC17不抑制酵母进行菌丝转换，因为几乎每一个细胞都存在芽管(图10B)。
实施例6
AC17抑制侵袭性生长
念珠菌的侵袭性生长促成发病和体内感染的建立。实验测试了AC17防止固态培养基被入侵的能力。一些基因通路可触发菌丝形成和侵袭性生长。例如，在植入生长条件下，转录因子CZF1介导入侵，而CPH1的突变则导致在特定培养基中有缺陷的菌丝生长，但在琼脂中只表现出轻微的缺陷。这样，测试了在不同条件下AC17抑制侵入不同介质的能力。
通过把在30℃下，在YPD培养基中培养的过夜(ON)培养物中的大约100个白色念珠菌细胞平铺到Lee’s、Spider以及YPS琼脂培养基的表面，测定侵袭性生长。Lee’s培养基含有，在每1000ml蒸馏水中5.0g(NH4)2SO4、0.2g MgSO4、2.5g K2HPO4(无水的)、5.0g NaCl、12.5g甘露醇、0.5g L-丙氨酸、1.3g L-亮氨酸、1.0g L-赖氨酸、0.1g蛋氨酸、0.0714g L-鸟氨酸、0.5g L-苯丙氨酸、0.5g L-脯氨酸、0.5g L-苏氨酸、0.001g生物素以及15g琼脂。Spider培养基含有1％营养肉汁(Difco)、1％甘露醇、1.35％琼脂以及2g/L KH2PO4。YPS培养基含有1％细菌蛋白胨(Difco)、0.5％酵母抽提物(Difco)、1.5％琼脂以及2％蔗糖(Fluka)。还对植入YPD琼脂培养基的细胞测定了侵袭性生长。大约100个细胞被铺到YPD琼脂上，然后在这些细胞上铺一层薄的熔化的YPD琼脂。在该培养基中加入适当浓度的溶解于水的AC17，AC17来自10或50mg/ml的存储液。用Spider琼脂对AC17进行两倍稀释，确定抑制侵袭性生长所要求的AC17的最低浓度。Lee’s、Spider以及YPD琼脂板在37℃下培养5-7天。YPS琼脂板在25℃下培养5-7天。通过可视化观察，确定了侵袭性生长，并且利用AxioCam黑白CCD相机和Zeiss Discovery V12立体镜拍摄了单个菌落的照片。
如图11A-11C所示，当酵母细胞被铺在琼脂上面时，AC17防止了对Lee’s、Spider以及YPS培养基的侵入。当细胞被播种在熔化的YPD琼脂培养基内时，AC17也防止了在植入条件下的入侵(图11D)。浓度低至3ug/ml的AC17防止了Lee’s、Spider以及YPS培养基内的侵袭性生长，说明AC17是强效的入侵抑制剂。在所有测试过的生长条件下和培养基条件下，AC17都抑制了入侵，说明AC17的作用靶点是大多数或所有已知的入侵途径共有的因子。
实施例7
AC17以UME6途径为作用靶点
已知UME6是维持菌丝生长所必需的转录因子。由于Δume6突变导致缩短的菌丝表型，类似于经AC17处理的细胞，因此UME6可能是假定的AC17的作用靶点。为测试AC17是否作用于UME6通路，把经AC17处理的细胞和UME6突变体进行了比较。
根据以上所描述的方法培养野生型白色念珠菌细胞和白色念珠菌菌株UZ24(ume6Δ::CmLEU2/UME6his1Δ/his1Δ)、UZ43(ume6Δ::CdHIS1/ume6Δ::CmLEU2)以及UZ149((ADH1/adh1::Ptet-UME6(PACT1-CaSAT1)UME6/UME6)(Zeidler et al.，FEMS Yeast Res.9：126-142(2009))。在存在100ug/ml的AC17的条件下培养酵母细胞，并把等份的RPMI-细胞悬浮液加入15ml培养管内。在适当的时候加入AC17，并且其最终浓度为100ug/ml。在UZ149中加入20ug/ml强力霉素，以诱导UME6的表达。在37℃下，在摇晃的培养器内，以200rpm转速培养所述试管大约18小时。采自培养管的样本被湿封于显微镜载片，并利用安装了Axiovision Rel.4.5软件和AxioCam(Carl Zeiss)黑白CCD相机的Zeiss Axioskop 2显微镜，以40倍放大对其进行拍照。
图12展示了AC17对野生型(A)、Δ/Δume6(B)、ume6异质接合体(C)以及UME6过表达(D)的影响，相比于各菌株未经处理的对照。在野生型、ume6异质接合体、以及UME6过表达的菌株中，AC17阻止了菌丝延长，但它对Δ/Δume6没有影响。经AC17处理的ume6异质接合体细胞非常像未经处理的Δ/Δume6细胞。这些结果说明AC17是以UME6或其通路为作用靶点。
当UME6在无菌丝生成的条件下被过表达时，测试了AC17处理导致菌丝逆转生长为酵母的能力。在37℃下，在含有和不含用于诱导菌丝生长的10ug/ml强力霉素的YPD液态培养基中过夜培养酵母菌株UZ149。在37℃下，以200rpm培养过夜(ON)后，通过离心分离收获酵母和菌丝细胞，然后在无菌PBS中清洗两次，并以1∶500的比例在新鲜YPD培养基中进行稀释。所述YPD培养基含有10ug/ml强力霉素，或联用的10ug/ml强力霉素和100ug/ml的AC17，或无额外添加的药物。在37℃和200rpm下，将培养管再培养另外18小时。采自培养管的样本被湿封于显微镜载片上，并利用安装了Axiovision Rel.4.5软件和AxioCam(Carl Zeiss)黑白CCD相机的Zeiss Axioskop 2显微镜，以40倍放大对其进行拍照。
当在37℃下，在YPD培养基中过夜培养所述UME6过表达菌株UZ149时，只有酵母细胞存在(图13A)。当UME6诱导剂强力霉素(25ug/ml)被加入所述YPD培养基时，由于有芽管的存在，显示导致了菌丝生长(图13B)。在强力霉素的继续存在下稀释和培养细胞，所述菌丝的状态被保持(图13C)。然而，通过清洗去除强力霉素导致逆转为酵母生长(图13D)。另外，把AC17加入经强力霉素处理的细胞，也导致逆转为显著的酵母生长(图13E)。当有少数芽管存在时，与强力霉素存在下连续生长的细胞相反，所述经AC17处理的细胞与去除强力霉素的效果相似。这些芽管可能是在这些条件下高水平人造Ume6过表达以及AC17对UME6的不完全抑制的结果。AC17看起来是作用于UME6途径，因为AC17阻止了UME6过表达的效果。
实施例8
以AC17和咪康唑处理导管上的真菌感染
为了处理被白色念珠菌感染的导管，制备了含2％咪康唑和1％AC17的导管封管溶液。当所述导管不使用时，通过锁住导管的腔，并以每天2小时用药所述溶液7天，处理所述导管。在使用前清洗导管。以所述咪康唑/AC17溶液处理导管可消灭生物膜和持留细胞，使得导管可被继续使用。
实施例9
以AC17和克霉唑治疗口腔念珠菌病
为治疗一个体内的口腔念珠菌病，制备了含有10mg克霉唑和5mg的AC17的锭剂。给药所述锭剂，每天5次，给药7天。使用含有AC17和克霉唑的锭剂消灭了生物膜和持留细胞，并且防止疾病的复发。
实施例10
以AC17和咪康唑治疗阴道炎
为治疗一个体内由念珠菌引起的阴道酵母菌感染，在含有2％咪康唑、氢化植物油基质、苯甲酸、十六烷醇、肉豆蔻酸异丙酯、聚山梨醇酯60、氢氧化钾、丙二醇、纯净水以及十八烷醇的乳霜(例如Monistat
Figure BPA00001276396200541
乳霜)中加入1％的AC17。以每天一次对阴道内被感染的区域给药所述乳霜7天。在含有咪康唑的乳霜内加入AC17增加了咪康唑的效果，并防止疾病的复发。
等同性
可以理解的，虽然结合了具体实施例对本发明进行了描述，但以上详细描述只是为了说明本发明，而非限制本发明的范围，本发明的范围由后附的权利要求界定。其他各方面、优势以及修饰都包含在后附的权利要求的范围内。

Claims (42)

1.一种抑制真菌生长或杀死真菌的方法，该方法包括把所述真菌与有效量的以下物质接触：
(a)一种抗真菌药物；以及
(b)一种或多种如通式I的增强剂化合物：
Figure FPA00001276396100011
或其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，
其中，所述烷基任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，
其中，所述芳基任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，从而抑制所述真菌生长或者杀死所述真菌。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述增强剂化合物增强所述抗真菌药物的活性。
3.如权利要求1所述的方法，其中，所述增强剂化合物不是抗真菌化合物。
4.一种抑制真菌生长或杀死真菌的方法，该方法包括把所述真菌与有效量的以下物质接触：
(a)一种抗真菌药物；以及
(b)一种或多种如通式Ia的增强剂化合物：
Figure FPA00001276396100021
或其药学上可接受的盐、水合物及溶剂化物，
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，
其中，所述烷基任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，
其中，所述芳基任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，从而抑制所述真菌生长或者杀死所述真菌。
5.如权利要求4所述的方法，其中，所述化合物是：
6.如权利要求4所述的方法，其中，所述化合物是：
Figure FPA00001276396100023
7.如权利要求4所述的方法，其中，所述化合物是：
Figure FPA00001276396100031
8.如权利要求4所述的方法，其中，所述化合物是：
Figure FPA00001276396100032
9.如权利要求4所述的方法，其中，所述增强剂化合物增强所述抗真菌药物的活性。
10.如权利要求4所述的方法，其中，所述增强剂化合物不是抗真菌化合物。
11.一种抑制真菌生长或杀死真菌的方法，该方法包括把所述真菌与以下物质接触：
(a)一种抗真菌药物；以及
(b)一种或多种如通式Ib的增强剂化合物：
Figure FPA00001276396100033
或其药学上可接受的盐、水合物及溶剂化物，
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，
其中，所述烷基任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，
其中，所述芳基任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，从而抑制所述真菌生长或者杀死所述真菌。
12.如权利要求11所述的方法，其中，所述化合物是：
Figure FPA00001276396100041
13.如权利要求11所述的方法，其中，所述化合物是：
14.如权利要求11所述的方法，其中，所述增强剂化合物增强所述抗真菌药物的活性。
15.如权利要求11所述的方法，其中，所述增强剂化合物不是抗真菌化合物。
16.一种在有需要的个体内治疗真菌感染的方法，其中，该方法包括向所述个体给药有效量的以下物质：
(a)一种抗真菌药物；和，与其联用的
(b)有效量的一种或多种如通式I的增强剂化合物：
Figure FPA00001276396100043
或其药学上可接受的盐、水合物及溶剂化物，
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中，所述烷基任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，
其中，所述芳基任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，
从而治疗所述真菌感染。
17.如权利要求16所述的方法，其中，所述增强剂化合物增强所述抗真菌药物的活性。
18.如权利要求16所述的方法，其中，所述增强剂化合物不是抗真菌化合物。
19.一种在有需要的个体内治疗真菌感染的方法，其中，该方法包括向所述个体给药有效量的以下物质：
(a)一种抗真菌药物；和，与其联用的
(b)有效量的一种或多种如通式Ia的增强剂化合物：
Figure FPA00001276396100051
或其药学上可接受的盐、水合物及溶剂化物，
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，
其中，所述烷基任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，
其中，所述芳基任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，
从而治疗所述真菌感染。
20.如权利要求19所述的方法，其中，所述化合物是：
Figure FPA00001276396100061
21.如权利要求19所述的方法，其中，所述化合物是：
22.如权利要求19所述的方法，其中，所述化合物是：
23.如权利要求19所述的方法，其中，所述化合物是：
Figure FPA00001276396100064
24.如权利要求19所述的方法，其中，所述增强剂化合物增强所述抗真菌药物的活性。
25.如权利要求19所述的方法，其中，所述增强剂化合物不是抗真菌化合物。
26.一种在有需要的个体内治疗真菌感染的方法，其中，该方法包括向所述个体给药有效量的以下物质：
(a)一种抗真菌药物；和，与其联用的
(b)有效量的一种或多种如通式Ib的增强剂化合物：
Figure FPA00001276396100071
或其药学上可接受的盐、水合物及溶剂化物，
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，
其中，所述烷基任选地被取代，
-NH(S(O)2)芳基，
其中，所述芳基任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，
从而治疗所述真菌感染。
27.如权利要求26所述的方法，其中，所述增强剂化合物增强所述抗真菌药物的活性。
28.如权利要求26所述的方法，其中，所述增强剂化合物不是抗真菌化合物。
29.一种在有需要的个体内治疗或预防复发性阴道炎的方法，其中，该方法包括向所述个体给药有效量的以下物质：
(a)咪康唑，和，与其联用的
(b)有效量的增强剂化合物1：
Figure FPA00001276396100072
化合物1
从而治疗所述个体内的复发性阴道炎。
30.一种在有需要的个体内治疗或预防口腔念珠菌病的方法，其中，该方法包括向所述个体给药有效量的以下物质：
(a)咪康唑，和，与其联用的
(b)有效量的增强剂化合物1：
Figure FPA00001276396100081
化合物1
从而治疗所述个体内的口腔念珠菌病。
31.一种处理医疗器械真菌感染的方法，该方法包括向所述器械给药有效量的以下物质：
(a)咪康唑，和，与其联用的
(b)有效量的增强剂化合物1：
Figure FPA00001276396100082
化合物1
从而处理所述真菌感染。
32.一种抑制真菌生长或杀死真菌的方法，该方法包括把所述真菌与以下物质接触：
Figure FPA00001276396100083
从而抑制所述真菌生长或杀死所述真菌。
33.一种在有需要的个体内治疗真菌感染的方法，其中，该方法包括向所述个体给药有效量的以下物质：
Figure FPA00001276396100091
从而治疗所述真菌感染。
34.一种在有需要的个体内治疗或预防复发性阴道炎的方法，其中，该方法包括向所述个体给药有效量的增强剂化合物1：
化合物1
从而治疗所述个体内的复发性阴道炎。
35.一种在有需要的个体内治疗或预防口腔念珠菌病的方法，其中，该方法包括向所述个体给药有效量的增强剂化合物1：
Figure FPA00001276396100093
化合物1
从而治疗所述个体内的口腔念珠菌病。
36.一种处理医疗器械真菌感染的方法，其中，该方法包括向所述器械给药有效量的增强剂化合物1：
Figure FPA00001276396100101
化合物1
从而处理所述器械的真菌感染。
37.一种抑制白色念珠菌生长或杀死白色念珠菌的方法，该方法包括把该真菌与有效量的以下物质接触：
(a)一种抗真菌药物；与
(b)一种或多种如通式I的增强剂化合物：
Figure FPA00001276396100102
或其药学上可接受的盐、水合物及溶剂化物，
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，
其中，所述烷基任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，
其中，所述芳基任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，
从而抑制所述真菌生长或杀死所述真菌。
38.一种抑制白色念珠菌生长或杀死白色念珠菌的方法，该方法包括把该真菌与有效量的以下物质接触：
(a)一种抗真菌药物；与
(b)一种或多种如通式Ia的增强剂化合物：
Figure FPA00001276396100111
或其药学上可接受的盐、水合物及溶剂化物，
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中，所述烷基任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，
其中，所述芳基任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，
从而抑制所述真菌生长或杀死所述真菌。
39.一种抑制白色念珠菌生长或杀死白色念珠菌的方法，该方法包括把该真菌与以下物质接触：
(a)一种抗真菌药物；与
(b)一种或多种如通式Ib的增强剂化合物：
Figure FPA00001276396100112
或其药学上可接受的盐、水合物及溶剂化物，
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，
其中，所述烷基任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，
其中，该芳基任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，
从而抑制所述真菌生长或杀死所述真菌。
40.一种在有需要的个体内治疗白色念珠菌感染的方法，其中，该方法包括向所述个体给药有效量的以下物质：
(a)一种抗真菌药物；和，与其联用的
(b)有效量的一种或多种如通式I的增强剂化合物：
Figure FPA00001276396100121
或其药学上可接受的盐、水合物及溶剂化物，
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中，所述烷基任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，
其中，所述芳基任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，
从而治疗所述真菌感染。
41.一种在有需要的个体内治疗白色念珠菌感染的方法，其中，该方法包括向所述个体给药有效量的以下物质：
(a)一种抗真菌药物；和，与其联用的
(b)有效量的一种或多种如通式Ia的增强剂化合物：
Figure FPA00001276396100131
或其药学上可接受的盐、水合物及溶剂化物，
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，其中，所述烷基任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，
其中，所述芳基任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，
从而治疗所述真菌感染。
42.一种在有需要的个体内治疗白色念珠菌感染的方法，其中，该方法包括向所述个体给药有效量的以下物质：
(a)一种抗真菌药物；和，与其联用的
(b)有效量的一种或多种如通式Ib的增强剂化合物：
Figure FPA00001276396100132
或其药学上可接受的盐、水合物及溶剂化物，
其中，每一R1独立地是-OH、-OC(O)H、-OC(O)烷基、-NH2、-NH-烷基、-N(烷基)2、-NH-氨基酸、-NHC(O)烷基、-NHC(O)芳基、-NH(S(O)2)烷基，
其中，所述烷基任选地被取代，-NH(S(O)2)芳基，
其中，所述芳基任选地被取代，或5元杂芳基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，或5元或6元杂环，任选地被烷基、卤素、OH、NH2或羰基取代，或烷基，任选地被烷基、卤素、OH或NH2取代，
从而治疗所述真菌感染。
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