CN102070598A - 一类降倍半萜过氧化合物及其制备方法和抗肿瘤应用 - Google Patents
一类降倍半萜过氧化合物及其制备方法和抗肿瘤应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102070598A CN102070598A CN2010105940299A CN201010594029A CN102070598A CN 102070598 A CN102070598 A CN 102070598A CN 2010105940299 A CN2010105940299 A CN 2010105940299A CN 201010594029 A CN201010594029 A CN 201010594029A CN 102070598 A CN102070598 A CN 102070598A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- preparation
- peralcohol
- sesquiterpene
- ethyl acetate
- norsesquiterpenoid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 title abstract description 7
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 title abstract 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 229930004725 sesquiterpene Natural products 0.000 claims description 21
- 150000004354 sesquiterpene derivatives Chemical class 0.000 claims description 21
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 8
- 241001207467 Talaromyces sp. Species 0.000 claims description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical group OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 6
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 6
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 6
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 6
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 6
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 6
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 6
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 4
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 3
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 3
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 claims description 3
- 241000690839 Talaromyces sp. HN21-3C Species 0.000 claims description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 claims description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 240000002044 Rhizophora apiculata Species 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- QGZCUOLOTMJILH-UHFFFAOYSA-N 2h-tetrazol-2-ium;bromide Chemical compound [Br-].C1=N[NH+]=NN1 QGZCUOLOTMJILH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- PICXIOQBANWBIZ-UHFFFAOYSA-N zinc;1-oxidopyridine-2-thione Chemical class [Zn+2].[O-]N1C=CC=CC1=S.[O-]N1C=CC=CC1=S PICXIOQBANWBIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZCWPHDXKEDBCER-UHFFFAOYSA-N 2,5-diphenyl-2h-tetrazol-2-ium;bromide Chemical compound [Br-].C1=CC=CC=C1C1=[NH+]N(C=2C=CC=CC=2)N=N1 ZCWPHDXKEDBCER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 206010020843 Hyperthermia Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000013264 Mocyta fungi Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 240000003793 Rhizophora mangle Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000036031 hyperthermia Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003808 methanol extraction Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 239000005418 vegetable material Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一类降倍半萜过氧化合物,分子式为C14H20O4或C16H24O5,该类化合物来源于海洋真菌Talaromycessp.HN21-3CCCTCCNo:M2010266。本发明还公开了该类化合物的制备方法,包括真菌的种子培养、发酵培养、分离菌丝体、有机溶剂萃取菌丝体、色谱分离、凝胶柱层析分离以及重结晶纯化等步骤。本发明的降倍半萜过氧化合物可以用于制备抗肿瘤药物,药效显著。
Description
技术领域
本发明涉及药物化合物领域,具体涉及一类源于真菌的具有抗肿瘤活性的降倍半萜过氧化合物及其制备方法,以及这类降倍半萜过氧化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术
海洋占地球表面积70%,海洋微生物无论从数量上或是多样性方面都相当丰富,美国“国际海洋微生物普查”项目首席科学家米切尔·索金最近公布,海洋微生物的总量应在500~1000万种,远远超出原来20万种的估计,也远远超出全球动植物种类的总和。
海洋微生物生活在特殊环境之中,例如高盐度、高压、低营养、低温(特别是深海)或局部高温和无光照以及不同的生物之间的关系等等。在这些所谓生命的极限环境中,海洋微生物已发展出独特的代谢方式,这不仅确保其在极端环境中生存,也提供了在陆地微生物中未遇到过的代谢产物的生产潜力,因而是多种多样新颖化合物的极好资源。科技界相信,海洋微生物将成为21世纪开发新型医药品的资源。
红树林生态系是世界上最富多样性、生产力最高的海洋生态系之一。红树林沼泽区有充足的植物材料,有丰富的浮游藻类和浮游生物,这些条件正适合于微生物的繁殖。在过去的十几年里,红树林栖息地被证明是真菌新种属的丰富来源,这形成了海洋真菌第二大的生态学亚类。
自从1929年从真菌中发现青霉素以来,真菌的代谢产物成为了药物的丰富来源,它们在抗菌,抗肿瘤,治疗心血管疾病,免疫调节剂等有重要应用。海洋微生物种类繁多,来源广泛,筛选获得率高,根据John教授在2008年《Natural Product Reports》的报道, 2006年发现海洋天然产物新化合物中,海洋微生物是主要来源之一,成为当今国际上研究的热点。
发明内容
本发明的目的在于提供来源于海洋红树林内生真菌的一类降倍半萜过氧化合物。
本发明的另一个目的是提供上述降倍半萜过氧化合物的制备方法。
本发明的又一目的是提供上述降倍半萜过氧化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明通过以下技术方案实现上述目的:
发明人由南海海洋真菌 Talaromyces sp. HN21-3C CCTCC No: M 2010266的发酵培养物中提取分离得到一类降倍半萜过氧化合物,结构式如(Ⅰ)或(Ⅱ):
本发明所用的真菌Talaromyces sp. HN21-3C,已保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC,中国 武汉大学校内),保藏号为CCTCC No:M 2010266,保藏日为2010年10月15日。
上述降倍半萜过氧化合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)真菌Talaromyces sp. HN21-3C CCTCC No: M 2010266的种子培养;
(2)真菌Talaromyces sp. HN21-3C CCTCC No: M 2010266的发酵培养;
(3)将步骤(2)得到的发酵液和菌体离心,除去发酵液,得到菌丝体;
(4)将菌丝体用有机溶剂萃取,浓缩萃取液,得到浸膏,对浸膏进行色谱分离,以石油醚-乙酸乙酯-甲醇为洗脱剂梯度洗脱,收集10%~50%乙酸乙酯/石油醚洗脱液;
(5)将步骤(4)得到的洗脱液以30%的乙酸乙酯-石油醚为洗脱液进行凝胶柱层析分离,重结晶纯化,得到化合物Ⅰ和Ⅱ。
其中,步骤(1)所述种子培养,培养基组成及重量份数为:葡萄糖0.3~2.5,酵母提取物0.03~0.2,蛋白胨0.1~0.5,琼脂1.5~2.5,氯化钠1.5~4,水100;制成试管斜面,挑取菌株接入斜面,28~35℃培养7~10天。
步骤(2)所述发酵培养,发酵培养基组成及重量份数为:葡萄糖0.5~5,酵母提取物0.2~1,蛋白胨0.5~2,氯化钠1.5~5,水100,将斜面中培养好的菌株挑入发酵培养基,于25~35℃静置1~2个月。
步骤(4)中所述有机溶剂为甲醇、乙酸乙酯或丙酮。
上述降倍半萜过氧化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。所述肿瘤为乳腺癌、前列腺癌、子宫颈癌或肝癌。
本发明经试验证明,降倍半萜过氧化合物Ⅰ和Ⅱ能有效抑制多种肿瘤细胞株的生长,可用于制备抗肿瘤药物,可以是药物上可接受的任意一种剂型。
与现有抗肿瘤药物相比,本发明具有如下有益效果:本发明的降倍半萜过氧化合物Ⅰ和Ⅱ来源于海洋真菌,海洋真菌种类繁多、数量庞大,从真菌提取的方法简单,使得降倍半萜过氧化合物Ⅰ和Ⅱ来源丰富、成本低廉;降倍半萜过氧化合物Ⅰ和Ⅱ抗肿瘤活性高,应用前景广阔。
具体实施方式
实施例1 降倍半萜过氧化合物的制备方法
a.真菌Talaromyces sp. HN21-3C CCTCC No:M 2010266的种子培养:
培养基组成按重量比为:葡萄糖2.5,酵母提取物0.2,蛋白胨0.5,琼脂2.5,氯化钠3.5,水100,制成试管斜面,挑取菌株接入斜面,28℃ 培养10天;
b.真菌Talaromyces sp. HN21-3C CCTCC No:M 2010266的发酵培养:
发酵培养基组成按重量比为:葡萄糖5%,酵母提取物1%,蛋白胨2%,氯化钠3.5%,水100;将斜面中培养好的菌株挑入发酵培养基,于室温25~35℃静置1个月;
c. 将上述培养好的发酵液和菌体离心除去发酵液;
d. 将离心得到的菌丝体用甲醇萃取多次,浓缩萃取液,将获得的浸膏利用硅胶柱进行色谱分离,以石油醚-乙酸乙酯-甲醇为洗脱剂梯度洗脱;
e. 收集10%-50%乙酸乙酯/石油醚洗脱液,30%的乙酸乙酯/石油醚为洗脱液,再以凝胶柱层析分离,重结晶纯化,即得到无色颗粒晶体化合物Ⅰ和Ⅱ。
化合物Ⅰ和Ⅱ的试验数据:
化合物Ⅰ: C14H20O4,HRESI-MS:275.1292(M+Na)+(计算值275.1259), mp 232℃. IR ν/cm-1(KBr): 3424, 2952, 2912, 2888, 1739, 1723,1433,1324,1180,1132,1086,1019, 967, 817,739, 591, 509.
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 4.18 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 2.95 (ddd, J = 17.3, 12.0, 8.5 Hz, 1H), 2.75 (ddd, J = 15.2, 14.6, 6.7 Hz, 1H), 2.61 (dd, J = 17.3, 7.4 Hz, 1H), 2.50 (ddd, J = 15.5, 4.8, 2.5 Hz, 1H), 2.36 (dddd, J = 14.1, 8.5, 3.9, 1.6 Hz, 1H), 2.29 (dt, J = 14.1, 3.8 Hz, 1H), 2.06 (td, J = 14.4, 4.7 Hz, 1H), 1.99 – 1.88 (m, 2H), 1.66 (ddd, J = 14.4, 6.6, 2.5 Hz, 2H), 1.52 (s, 3H), 1.32 (s, 3H), 1.04 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, CDCl3):δ 206.98, 206.65, 91.00, 81.63, 41.99, 39.36, 37.71, 35.84, 35.73, 32.21, 26.42, 26.21, 24.82, 22.00.
化合物Ⅱ: C16H24O5,HRESI-MS:319.1518 (M+Na)+(计算值319.1521) , mp 169℃. IR ν/cm-1(KBr): 3434, 2961, 2881, 1729, 1459, 1395, 1370, 1255, 1163, 1126, 1102, 1044, 1013, 965, 900, 810, 623, 605, 545, 500, 469.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ4.87 (ddd, J = 11.3, 7.6, 3.8 Hz, 1H), 4.23 (td, J = 4.4, 2.1 Hz, 1H), 2.72 – 2.59 (m, 1H), 2.46 – 2.33 (m, 2H), 2.14 (s, 1H), 2.07 (s, 3H), 2.05 – 1.91 (m, 3H), 1.73 – 1.47 (m, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.23 (s, 3H), 0.95 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, CDCl3): δ207.91, 171.02, 90.02, 76.02, 71.71, 41.39, 37.40, 35.80, 35.68, 30.53, 27.45, 26.25, 25.37, 24.71, 21.49, 21.27.
实施例2 MTT比色法检测降倍半萜过氧化合物Ⅰ和Ⅱ抗肿瘤活性实验
1.材料:
1.1噻唑蓝(MTT):用0.01mol/L 的磷酸盐缓冲液(PBS)溶解MTT(3-(4,5-dimethythiazol-z-yl)2,5-diphenyl-tetrazolium bromide, SIGMA)终浓度5mg/mL,过滤除菌,分装后4℃避光保存。
1.2靶细胞的制备:人乳腺癌细胞系MDA-MB-435和MCF7、人前列腺癌细胞系PC-3、子宫颈癌细胞系Hela、人肝癌细胞系HepG2和人正常乳腺细胞系MCF-10A的复苏与培养。
a. 从液氮罐中取出人乳腺癌细胞系MDA-MB-435和MCF-7,人前列腺癌细胞系PC-3, 子宫颈癌细胞系Hela,人肝癌细胞系HepG2和人正常乳腺细胞系MCF-10A的冻存管,迅速置入37℃水浴箱中,不停摇动使之迅速溶化,无菌操作移入离心管中;
b. 加DMEM完全培养液至10mL,1000rmp离心5min,弃上清;
c. 重复以上操作一次;
d. 以DMEM完全培养液吹打使细胞混匀后移入培养瓶中,5%CO2,37℃培养;
e. 观察细胞生长情况,及时更换培养液,分瓶。
1.3 细胞计数
a. 选取对数生长期细胞,胰酶消化,DMEM完全培养基终止,移入离心管中,加DMEM完全培养基至10mL;
b. 取10μl细胞悬液滴入计数板一侧凹槽中,显微镜下计数四大格的细胞总数、除以4,乘104,即为每毫升培养液所含细胞数;
c. 调整细胞数至1×105/mL。
1.4降倍半萜过氧化合物Ⅰ和Ⅱ的配制:取降倍半萜过氧化合物Ⅰ和Ⅱ加入到DMEM完全培养基中,调整浓度为500μg/mL,超声乳化,过滤除菌,4℃保存。
2.试验方法
a. 96孔板各孔加入人乳腺癌细胞系MDA-MB-435和MCF-7,人前列腺癌细胞系PC-3, 子宫颈癌细胞系Hela,人肝癌细胞系HepG2和人正常乳腺细胞系MCF-10A 100μL(1×105/mL),5%CO2,37℃培养4h。
b. 加入不同浓度受试对象100 μL,对照加DMEM完全培养基100 μL,继续培养48h。
c.加入MTT(5mg/mL)各10 μL,继续培养4h。
d.去除培养液。每孔加入DMSO100 μL,轻轻振荡5~10min,使颗粒溶解。
e.酶联免疫仪570nm下测定每孔OD值。
f.计算抑制率:
肿瘤细胞杀伤率%=[(对照组测定的平均OD值-加药组测定的平均OD值)/ 对照组测定的平均OD值]×100%。
g. 以抑制率对药物浓度的对数作图,求得IC50值;以lg c为横坐标,抑制率为纵坐标,求得IC50值。
3.试验结果
试验结果显示降倍半萜过氧化合物Ⅰ和Ⅱ均能有效抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-435和MCF-7,人前列腺癌细胞株PC-3, 子宫颈癌Hela,人肝癌细胞株HepG2,化合物Ⅰ和Ⅱ的抑制肿瘤 IC50值(μg/mL)见表1。
表1化合物Ⅰ和Ⅱ的体外细胞毒试验结果(IC50 μg/mL)
Claims (8)
2.一种真菌Talaromyces sp. HN21-3C,于2010年10月15日在中国典型培养物保藏中心保藏,保藏号为M 2010266。
3.权利要求1所述降倍半萜过氧化合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)真菌Talaromyces sp. HN21-3C的种子培养;
(2)真菌Talaromyces sp. HN21-3C的发酵培养;
(3)将步骤(2)得到的发酵液和菌体离心,除去发酵液,得到菌丝体;
(4)将菌丝体用有机溶剂萃取,浓缩萃取液,得到浸膏,对浸膏进行色谱分离,以石油醚-乙酸乙酯-甲醇为洗脱剂梯度洗脱,收集10%~50%乙酸乙酯/石油醚洗脱液;
(5)将步骤(4)得到的洗脱液以30%的乙酸乙酯-石油醚为洗脱液进行凝胶柱层析分离,重结晶纯化,得到化合物Ⅰ和Ⅱ。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于步骤(1)所述种子培养,培养基组成及重量份数为:葡萄糖0.3~2.5,酵母提取物0.03~0.2,蛋白胨0.1~0.5,琼脂1.5~2.5,氯化钠1.5~4,水100;制成试管斜面,挑取菌株接入斜面,28~35℃培养7~10天。
5.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于步骤(2)所述的发酵培养,发酵培养基组成及重量份数为:葡萄糖0.5~5,酵母提取物0.2~1,蛋白胨0.5~2,氯化钠1.5~5,水100;将斜面中培养好的菌株挑入发酵培养基,于25~35℃静置1~2个月。
6.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于步骤(4)中所述有机溶剂为甲醇、乙酸乙酯或丙酮。
7.权利要求1所述降倍半萜过氧化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于所述肿瘤为乳腺癌、前列腺癌、子宫颈癌或肝癌。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 201010594029 CN102070598B (zh) | 2010-12-17 | 2010-12-17 | 一类降倍半萜过氧化合物及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 201010594029 CN102070598B (zh) | 2010-12-17 | 2010-12-17 | 一类降倍半萜过氧化合物及其制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102070598A true CN102070598A (zh) | 2011-05-25 |
CN102070598B CN102070598B (zh) | 2013-05-22 |
Family
ID=44029378
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN 201010594029 Expired - Fee Related CN102070598B (zh) | 2010-12-17 | 2010-12-17 | 一类降倍半萜过氧化合物及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN102070598B (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103183655A (zh) * | 2011-12-27 | 2013-07-03 | 中国科学院微生物研究所 | 一种降倍半萜类化合物及其制备方法与应用 |
CN106588944A (zh) * | 2016-11-23 | 2017-04-26 | 中山大学 | 一种藏药内生真菌来源的化合物及其制备方法和应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101020913A (zh) * | 2006-07-06 | 2007-08-22 | 沈阳药科大学 | 一个来自海洋微生物的具有强抗肿瘤活性倍半萜 |
-
2010
- 2010-12-17 CN CN 201010594029 patent/CN102070598B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101020913A (zh) * | 2006-07-06 | 2007-08-22 | 沈阳药科大学 | 一个来自海洋微生物的具有强抗肿瘤活性倍半萜 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
DONG-ZE LIU, ET AL.: ""Two novel norsesquiterpene peroxides from basidiomycete Steccherinum ochraceum"", 《TETRAHEDRON LETTERS》, vol. 51, 18 April 2010 (2010-04-18), pages 3152 - 3153 * |
KOON-SIN NGO, ET AL.: ""Autoxidation of 4-amorphen-11-01 and the biogenesis of nor- and seco-amorphane sesquiterpenes from Fabiana imbricata"", 《TETRAHEDRON》, vol. 55, 31 December 1999 (1999-12-31), pages 15109 - 15126, XP004184701, DOI: doi:10.1016/S0040-4020(99)00986-2 * |
SUPICHAR CHOKPAIBOON, ET AL.: ""Cytotoxic Nor-chamigrane and Chamigrane Endoperoxides from a Basidiomycetous Fungus"", 《J. NAT. PROD.》, vol. 73, 22 April 2010 (2010-04-22), pages 1005 - 1007 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103183655A (zh) * | 2011-12-27 | 2013-07-03 | 中国科学院微生物研究所 | 一种降倍半萜类化合物及其制备方法与应用 |
CN103183655B (zh) * | 2011-12-27 | 2014-10-29 | 中国科学院微生物研究所 | 一种降倍半萜类化合物及其制备方法与应用 |
CN106588944A (zh) * | 2016-11-23 | 2017-04-26 | 中山大学 | 一种藏药内生真菌来源的化合物及其制备方法和应用 |
CN106588944B (zh) * | 2016-11-23 | 2019-03-29 | 中山大学 | 一种藏药内生真菌来源的化合物及其制备方法和应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN102070598B (zh) | 2013-05-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101544556B (zh) | 醌类化合物Bostrycin及其制备方法与抗肿瘤应用 | |
CN103360351B (zh) | 异海松烷二萜化合物及其应用 | |
CN103740606A (zh) | 植生链霉菌及其产生新抗生素诺沃巢霉素的方法与应用 | |
CN102936252A (zh) | 一类二倍半萜类化合物及其制备方法与应用 | |
CN102070599B (zh) | 降倍半萜过氧化合物及其制备方法与应用 | |
CN103122318B (zh) | 一株海洋真菌桔青霉及其在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
CN102070598B (zh) | 一类降倍半萜过氧化合物及其制备方法 | |
CN105017203A (zh) | 一种来源于海洋真菌的Azaphilones类衍生化合物及其制备方法和应用 | |
CN104804020B (zh) | 硫代二酮哌嗪类化合物及其制备方法和用途 | |
CN102925372B (zh) | 一株海洋真菌小红酵母及其在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
CN102911877B (zh) | 一株海洋真菌分枝孢子菌属真菌球孢枝孢及其应用 | |
CN110330544A (zh) | 一种4,4,1-双环甾类化合物及其制备方法和用途 | |
CN109112171A (zh) | 一种基于海洋微生物的抗菌活性物质的制备方法 | |
CN100410226C (zh) | 一类醌类化合物及其制备方法与抗肿瘤应用 | |
CN104059044A (zh) | 一种呫吨酮衍生物及其制备方法与应用 | |
CN100430361C (zh) | 酚类化合物及其制备方法与抗肿瘤应用 | |
CN101423521A (zh) | 两种异黄酮类化合物制备方法及其抗肿瘤与抗植物病菌用途 | |
CN108794502B (zh) | 一种单端孢霉烯类化合物及其制备方法和用途 | |
CN107226800A (zh) | 一种xanthone类化合物及其单晶的制备方法与作为抗海分枝杆菌药物的应用 | |
CN102168020B (zh) | 一株海洋来源真菌及其应用 | |
CN1212387C (zh) | 从虫草体分离培养的细棒束孢sx-1及其培养方法和用途 | |
CN101362745A (zh) | Xanthenes类化合物及其制备方法与抗肿瘤应用 | |
CN101921255A (zh) | 一种吡喃并环己酮衍生物及其制备方法与应用 | |
CN110172408A (zh) | 一株桃儿七的内生真菌及其应用 | |
CN103483057A (zh) | 一种植物促生诱抗剂及其制备和使用方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20130522 Termination date: 20141217 |
|
EXPY | Termination of patent right or utility model |