CN102066936A - 测定方法和设备 - Google Patents

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Abstract

提供了一种用于分析液体样本中的至少两种分析物的方法，所述方法包括以下步骤：a)提供基板，其中至少两种不同类型的捕捉分子被固定在基板上并且其中每一种类型的捕捉分子都具有针对一种分析物的特定亲和力，b)使样本与所述捕捉分子接触，c)对于要分析的至少一种分析物：在捕捉分子和针对分析物具有特定亲和力的被标记检测分子之间引发接触，并且对于要分析的至少另一种分析物：在捕捉分子和被标记形式的分析物之间引发接触，以及d)测量来自于被标记检测分子和基板上的被标记分析物的可检测信号，其中被标记分析物的浓度与样本中分析物的浓度相适应。

Description

测定方法和设备
技术领域
本发明涉及用于分析液体样本的方法和测定设备。
背景技术
在很多测定中都需要在同一样本中同时测量两种或多种分析物的浓度。在基于亲和力的测定例如免疫测定中同样如此。分析物经常以明显不同的浓度存在。对基于亲和力的测定来说，由于存在源于一种分析物测量的信号可以影响源于另一种分析物测量的信号或使之饱和的风险，因此在要同时测量不同分析物的浓度时可能会有问题。
饱和可能会在包括捕捉装置的基于亲和力的测定中发生，例如在所有的捕捉区域都被占据时发生。饱和也可能会在变送器（例如测量来自于被标记分子的荧光的传感器）饱和时发生。
在现有技术中，已经为解决在基于亲和力的测定中测量两种或多种具有明显不同浓度的分析物的问题进行了努力。一种方法是将样本分为几等份，将其稀释为不同的浓度。另一种方法是调节变送器、检测器或传感器对不同浓度的增益。
US7271009公开了用于样本中若干生物标志物的免疫测定，包括使用颗粒物。每一种颗粒物都涂有参与到基于亲和力的测定中的一种类型的分子。有几种类型的颗粒物，每一种都涂有一种类型的分子。为了处理各种分析物的水平明显不同的情况，通过使用稀释剂降低了用于某些分析物的信号。介绍了稀释剂不会介入与任何一种分析物的具体结合。稀释剂争夺颗粒物上的可用面积并降低分析物的涂层密度。由此通过使用稀释剂而减小被捕获的分析物分子数量。还介绍了其中某些颗粒物被涂有提高特定分析物灵敏度的试剂的实施例。
在根据现有技术发展水平的某些分析设备中，捕捉抗体或捕捉分子捕获一种或多种分析物。将分析物结合到捕捉区域在所有捕捉区域饱和以前的平衡之前被中断以使信号不会变得过高。
在某些情况下，在要检测的至少一种分析物上只有一个可用的结合表位。
尽管根据现有技术的现有工艺中对于可能必须要对几等份在若干步骤中进行稀释的样本和/或变送器、检测器和/或传感器必须要调节以适应不同浓度水平的增益仍然存在改进的空间，但是仍然希望能有步骤尽可能少的（例如不必在其中处理颗粒物）快速测定方法。还希望能有不必加入稀释剂的测定方法。还希望能有可以只用一个表位来测量至少一种分析物的测定方法。还希望能有在液体样本混合物中可以只用一个表位来测量分析物浓度的测定方法。
发明内容
本发明的一个目标是提供一种改进的方法和一种用于实现所述方法以避免了现有技术中的至少部分缺点的设备。
所述方法和设备的优点包括不用将样本划分为必须要进行不同稀释的几等份。
另一个优点是不必再为了顾及明显不同的浓度水平而调节变送器、检测器和/或传感器的增益。
进一步的优点是在基于亲和力的测定中不必再向捕捉分子中加入稀释剂。而且不必再加入增强亲和力的添加剂。
优点还包括不必再处理颗粒物，所述方法由于要执行的步骤较少而变得简单并且易于执行。
另一个优点是直到达到平衡之前都可以进行分析物分子与捕捉分子的结合。因此在达到平衡之前不必为了使所有的捕捉区域饱和而停止结合。这样所具有的优点是不必在精确确定的时刻停止结合。由此得到的一个优点是可以通过达到平衡来实现高精度。在根据现有技术的工艺中，由于难以控制影响结合速率的所有参数，因此难于每一次都恰好在相同的阶段停止结合。
进一步的优点是可以测量几种分析物，其中至少一种分析物只具有一个能够结合抗体的表位。
设备制造简单并且节约成本。简易性也使所述方法非常节约成本。
在第一种应用中，提供了一种用于分析液体样本中的至少两种分析物的方法，所述方法包括以下步骤：
a)提供基板，其中至少两种不同类型的捕捉分子被固定在基板上并且其中每一种类型的捕捉分子都具有针对一种分析物的特定亲和力，
b)使样本与所述捕捉分子接触，
c)对于要分析的至少一种分析物：在捕捉分子和针对分析物具有特定亲和力的被标记检测分子之间引发接触，并且对于要分析的至少另一种分析物：在捕捉分子和被标记形式的分析物之间引发接触，以及
d)测量来自于被标记检测分子和基板上的被标记分析物的可检测信号，其中被标记分析物的浓度与样本中分析物的浓度相适应。
在第二种应用中，提供了一种适用于所述方法的设备。
本发明更多的应用和实施例在所附权利要求中加以确定，通过引用将它们并入本文。
附图说明
在以下的说明、示例和附图中更加详细地介绍本发明，其中：
图1将相对荧光强度(RFU)作为微流体通道内位置的函数示出。
图2a和2b分别示出了用于NTproBNP和CRP的测定结果。
图3将相对荧光强度(RFU)作为另一微流体通道内位置的函数示出。
图4示出了用于cTnI和CRP的测定结果。
定义
在介绍本发明的方法和设备之前，应该理解本发明并不局限于特定结构、方法步骤以及本文中公开的设备，因而结构、步骤和设备都可以在一定程度上加以改变。还应该理解本文中使用的术语仅仅是为了用于介绍特定实施例而并不是为了加以限定，原因在于本发明的保护范围应该只由所附权利要求及其等价形式限定。
还有必须要注意的是，除非上下文另有清楚地说明，否则如本说明书和所附权利要求中所用的单数形式“一个”、“一种”和“这个”也包括复数形式的限定。因此，例如对含有“一种抗体”的反应混合物的限定包括了两种或多种抗体的混合物。
在介绍和以权利要求限定本发明时，以下术语将根据本文中阐述的定义使用。
如权利要求和说明书中一直使用的那样，术语“大约”在用于数值语境中时表示本领域技术人员熟悉和可接受的准确度区间。所述区间为±10%。
如权利要求和说明书中一直使用的那样，术语“分析物”表示在分析过程中确定其一种或多种性质的物质或者是化学或生物成分。分析物或其组分经常不能被测量，但是可以测量分析物的可测量性质。例如，可以测量葡萄糖浓度。
如权利要求和说明书中一直使用的那样，术语“捕捉分子”表示具有结合并捕获分析物分子的能力的分子。
如权利要求和说明书中一直使用的那样，术语“可检测组”表示在基板上存在时就能够被检测到的任何分子或原子排列。
如权利要求和说明书中一直使用的那样，术语“可检测信号”表示能够被检测到的任意信号，包括但不限于电磁波、电子信号、电化学信号、化学信号、磁场、放射性信号和质谱。
如权利要求和说明书中一直使用的那样，术语“检测分子”表示具有结合分析物的能力并且包括可检测组的分子。
如权利要求和说明书中一直使用的那样，术语“被标记分析物”表示包括可检测组的分析物。
如权利要求和说明书中一直使用的那样，术语“被标记检测分子”表示包括可检测组的检测分子。
如权利要求和说明书中一直使用的那样，术语“样本”表示要分析的混合物或溶液。样本的示例包括但不限于血液、血浆、血清、汗液、唾液、尿液、泪液、水样本以及食品样本的悬浮液或溶液。
如权利要求和说明书中一直使用的那样，术语“基板”表示承载构成分析物的分子的载体。
具体实施方式
在第一种应用中，提供了一种用于分析液体样本中的至少两种分析物的方法，所述方法包括以下步骤：
a)提供基板，其中至少两种不同类型的捕捉分子被固定在基板上并且其中每一种类型的捕捉分子都具有针对一种分析物的特定亲和力，
b)使样本与所述捕捉分子接触，
c)对于要分析的至少一种分析物：在捕捉分子和针对分析物具有特定亲和力的被标记检测分子之间引发接触，并且对于要分析的至少另一种分析物：在捕捉分子和被标记形式的分析物之间引发接触，以及
d)测量来自于被标记检测分子和基板上的被标记分析物的可检测信号，
其中被标记分析物的浓度与样本中分析物的浓度相适应。
提供了一种有捕捉分子固定于其上的基板。在一个实施例中，捕捉分子被固定在特定区域。在一个实施例中，不同的区域具有被固定的不同类型的捕捉分子。捕捉分子对要分析的分析物具有亲和力。在一个实施例中，每一种类型的捕捉分子都对要分析的至少一种分析物具有亲和力。在一个实施例中，有一种类型的捕捉分子对每一种要分析的分析物都具有亲和力。在一个实施例中，一种类型的捕捉分子对一种分析物具有特定的亲和力。在一个实施例中，有两种不同类型的捕捉分子。在一个实施例中，有两种不同类型的捕捉分子被固定到基板上两个特定并且分离的区域。在一个可选实施例中，不同类型的捕捉分子被固定到同一个特定区域。在一个实施例中，捕捉分子被固定到能够由测定中使用的可检测组的类型加以区分的相同区域。在一个实施例中，至少两种不同类型的捕捉分子被固定到基板上的至少两个不同区域上。
在一个实施例中，提供了一种已经将几种类型的捕捉分子固定于其上的基板。在一个实施例中，每一种类型的捕捉分子都被固定到至少一个特定区域。
在一个实施例中，有将多于一种不同类型的捕捉分子的混合物连接于其上的区域。
捕捉分子的示例包括但不限于抗体、适体、核酸探针和抗体片段。核酸探针的示例包括但不限于DNA、RNA和PNA。抗体片段的示例包括但不限于Fab和scFv。在一个实施例中，捕捉分子是抗体。在另一个实施例中，捕捉分子是从抗体、适体、核酸探针、DNA探针、RNA探针、PNA探针、抗体片段、Fab片段和scFv片段中选出的至少一种分子。在进一步的实施例中，所述捕捉分子中的每一种都是从抗体、适体、核酸探针、DNA探针、RNA探针、PNA探针、抗体片段、Fab片段和scFv片段构成的组中独立选出的。
样本与捕捉分子相接触以使样本中的分析物能够结合对它们有特定亲和力的捕捉分子。在一个实施例中，通过将样本添加至设备中的基板来使样本与捕捉分子接触。在一个实施例中，样本与设备相接触。在一个实施例中，样本与捕捉分子接触足够长的一段时间以达到平衡，用于将分析物分子结合至捕捉分子。能够允许反应进行至平衡是有利的。
在样本已与捕捉分子相接触时，至少两个不同种类的分子与捕捉分子相接触。与捕捉分子相接触的分子种类与所用的分析物和测定相适应。添加有至少一种类型的被标记检测分子。检测分子对分析物具有特定的亲和力并且包括允许通过任意装置能被检测的组。进一步添加有至少一种被标记分析物。作为被标记分析物的可选或附加，可以加有被标记分析物片段，该片段包括具有结合捕捉分子能力的表位。被标记分析物是包括可检测组的分析物。
可检测组的示例包括但不限于荧光团、放射性追踪迹、质谱、生物发光组、化学发光组和电化学标记。
对于预计会以低浓度存在于样本中的分析物，加有被标记检测分子。被标记检测分子结合至与捕捉分子相结合的分析物分子。标记允许检测到检测分子。检测的信号是分析物浓度的函数。检测的信号随着分析物浓度的增加而增大。这是一种夹心测定法。
对于预计会以高浓度存在于样本中的分析物，样本中加有被标记分析物。被标记分析物是一种包括可检测组的分析物。可选地或附加地，可以加入分析物的类似物。被标记分析物与分析物争夺捕捉分子上的结合面积。被标记分析物的数量与样本中分析物分子的浓度相适应。本领域技术人员能够在本说明书的教导下用不同浓度的被标记分析物以样本中给定浓度的分析物分子进行常规试验并由此确定合适的被标记分析物的数量。在加入的(被标记和未被标记的)已捕捉分析物的数量接近平衡值之后，已捕捉的被标记分析物和未被标记的分析物之比即可反映出样本中这些种类的比值。检测的信号是分析物浓度的函数。检测的信号随着分析物浓度的增加而减小。这是一种竞争测定法。
在一个实施例中，被标记检测分子和被标记分析物被同时加到基板中。在一个可选实施例中，它们被相继添加。在一个实施例中，至少一种被标记分析物被首先添加而至少一种被标记检测分子被随后添加。在一个可选实施例中，至少一种被标记检测分子被首先添加而至少一种被标记分析物被随后添加。
在一个实施例中，被标记检测分子和被标记分析物被加到基板中。在一个实施例中，被标记检测分子被预先分配到基板上。在一个实施例中，被标记分析物被预先分配到基板上。在一个实施例中，被标记检测分子和被标记分析物都被预先分配到基板上。在一个实施例中，一种被标记检测分子和/或一种被标记分析物被预先分配而一种被标记检测分子和/或一种被标记分析物被加到基板中。
在一个实施例中，捕捉分子和被标记分析物之间的接触是通过首先将被标记分析物加入样本并且随后使样本与捕捉分子相接触而引发的。因此存在将样本与至少一种要分析的分析物混合并随后将样本加到设备中以使包含分析物的样本与捕捉分子形成接触的可能性。
在一个实施例中，步骤b)和c)在一个步骤内进行。
在一个实施例中，预先分配的被标记检测分子或预先分配的被标记分析物通过向基板中加入一种物质并对该物质进行干燥以使溶剂蒸发而制成。在一个实施例中，溶剂是水。用这种方式使预先分配的干燥物质处于基板上。在一个实施例中，至少一种试剂被添加到溶剂中。这些添加剂的示例包括但不限于BSA(牛血清白蛋白)和海藻糖。
在加入液体样本后，预先分配的一种或多种物质就开始溶解。在一个实施例中，设备相对于被固定的捕捉分子在上游具有预先分配的一种或多种物质并且溶解的预先分配的一种或多种物质可以向下游流动并在捕捉分子的区域内进行反应。
在一个实施例中，设备具有定时门，其允许液体样本与捕捉分子接触并且在一段时间之后使预先分配的一种或多种物质溶解并允许其与分析物和捕捉分子反应。用于在一段时间间隔期间使液体停止的微流体开关例如可以从US 2004/0206408中获知，通过引用其全文将其明确地并入本文。
在一个实施例中，设备是为了用于分析液体样本中的第一和第二分析物的浓度。第一分析物以低浓度存在而第二分析物则以高浓度存在。第一分析物被预计以低浓度存在并利用夹心测定法进行分析。第二分析物被预计以高浓度存在并利用竞争测定法进行分析。基板上的第一区域固定了具有特定地结合第一分析物的能力的捕捉分子，而基板上的第二区域则固定了具有特定地结合第二分析物的能力的捕捉分子。在样本已与捕捉分子相接触之后，就加入具有特定地结合第一分析物的能力的被标记检测分子。也可以加入被标记形式的第二分析物。在一段时间之后即可检测被标记检测分子和被标记形式的分析物。
检测分子的示例包括但不限于抗体、抗体片段、Fab、scFv、适体、核酸探针、DNA、RNA和PNA。在一个实施例中，检测分子是抗体。在一个实施例中，检测分子是从抗体、抗体片段、Fab片段、scFv片段、适体、核酸探针、DNA探针、RNA探针和PNA探针中选出的至少一种分子。
在一个实施例中，样本与捕捉分子接触足够长的一段时间以达到平衡，用于将分析物分子结合至捕捉分子。
在一个实施例中，使用微流体设备来进行测定。
在一个实施例中，使用包括至少一条通道的设备。在一个实施例中，使用包括至少一条通道的设备，通道具有固定了捕捉分子的区域。在一个实施例中，这样的通道进一步包括预先分配的被标记分析物分子和/或预先分配的被标记被标记检测分子。样本被加入设备中并且样本沿至少一条通道流动至捕捉分子和预先分配的物质。
在一个实施例中，基板至少部分地由基本上垂直于所述表面并且具有高度(H1)、直径(D1)和倒易间距(x1,y1)的凸起覆盖以实现所述液体样本的横向毛细流动。
在一个实施例中，基板包括至少一个样本添加区域、具有接纳至少一部分样本能力的至少一个接受区域以及在一个或多个样本添加区域和一个或多个接受区域之间建立起流体连接的至少一个连接区域。
在一个实施例中，样本添加区域、接受区域以及连接样本添加区域和接受区域的区域包括基本上垂直于所述表面，具有高度(H1)、直径(D1)和倒易间距(x1,y1)的凸起以实现所述液体样本的横向毛细流动。
在第二种应用中，提供了一种包括基板的分析设备，所述基板包括至少一个样本添加区域、具有接纳至少一部分样本能力的至少一个接受区域以及在一个或多个样本添加区域和一个或多个接受区域之间建立起流体连接的至少一个连接区域，所述区域至少部分地由基本上垂直于所述表面并且具有高度(H1)、直径(D1)和倒易间距(x1,y1)的凸起覆盖以实现所述液体样本的横向毛细流动，其中所述基板包括固定在基板上的至少两种不同类型的捕捉分子并且其中每一种类型的捕捉分子都具有针对一种分析物的特定亲和力。
在一个实施例中，基板进一步包括至少一种预先分配的物质。
在一个实施例中，基板包括至少一种预先分配的被标记检测分子。
在一个实施例中，基板包括至少一种预先分配的被标记分析物。
在一个实施例中，所述基板包括预先分配的被标记检测分子和预先分配的被标记分析物。
在一个实施例中，所述基板包括至少一种预先分配的被标记检测分子和至少一种预先分配的被标记分析物。
实施例
实施例1
微流体芯片被用作以热塑性塑料注模成形并在氧等离子体内氧化的基板(Zeonor 1060R, Zeon, 日本)。氧化在处于等离子腔(400等离子系统)内的6分钟期间以0.26mbar的工作压力、1000W并以100毫升/分钟的氧气流量进行。芯片被浸入95％乙醇(Kemetyl，瑞典)中含有3%体积APTES(Fluka)的溶液中2小时。固化在夜间室温下的空气中进行，这就允许在稳定的胺功能化表面中生成的硅烷交联。涂有APTES的表面随后被浸入氧化的2%葡萄聚糖溶液(Dextran T40(40kDa), Pharmacosmos,丹麦)中2小时，用纯净水冲洗并在30mM的NaIO4(Sigma Aldrich)中进一步氧化2小时。
模制的芯片具有一个可以加入样本的样本添加区域、具有接纳至少一部分样本能力的一个接受区域以及在接受区域和样本添加区域之间建立起流体连接的一个连接区域。连接区域具有在设备中部居中的带有捕捉抗体的区域。样本添加区域、接受区域和连接区域具有垂直于基板表面的凸起，具有70μm的高度、90μm的直径和50μm的间距以在加入样本时形成横向的毛细流动。
设备被用于C反应蛋白(CRP)和NTproBNP的双重检测。血清中CRP的临床相关浓度范围大约在0.5-500μg/ml，而对于NTproBNP来说则为10-10000pg/ml，也就是多于四个数量级的浓度差异。为了能够测量在浓度上具有这么大差异的分析物，以竞争模式测量CRP而以夹心模式测量NTproBNP。
通过首先将用于两种分析物的捕捉抗体固定在连接区域内的不同位置来同时确定同一液体样本内两种分析物的浓度。捕捉抗体(单克隆的αCRP和αNTproBNP)被沿着流体通道在两条直线上点样。点样的溶液含有1%体积的海藻糖(Sigma Aldrich)，50mM的NaPO4(Ph 7.5, Sigma Aldrich)缓冲剂和0.5mg/ml的捕捉抗体。混合物在潮湿的条件下(相对湿度75%)被用Nano-plotter NP 2.1(Ge-Sim,德国)沿着流体通道点样，形成一个大约为0.5×2mm的谱带。用于每一个谱带的总沉积量是5.25nl。
通过将混有Alexa 647被标记CRP(250ng/ml)的15μl血清样本溶液加至芯片的样本区域来实现测定。样本流过连接通道，由此使其与捕捉抗体相接触。在全部样本液滴都已被移入孔柱阵列内之后，5μl的Alexa 647被标记检测抗体(血清中为20μg/ml，与捕捉抗体相比朝向不同表位引导的单克隆αNTproBNP)被加入样本区域。最后，将15μl的血清加入样本区域作为清洗步骤。利用线照明的荧光扫描仪来记录沿微流体连接通道的荧光信号强度，示出已沉积了捕捉抗体的特有波峰。图1将相对荧光强度(RFU)作为微流体通道内位置的函数示出。每一条曲线都表示在一个芯片上记录的荧光信号。垂直线表示积分边界。对于每一次测定都使用一个新芯片。
对具有由瑞典Uppsala大学医院的中心实验室确定的已知NTproBNP和CRP浓度的五个病人血清样本重复上述过程，所得强度曲线中的波峰作为由中心实验室测量浓度的函数被积分并绘出，参见图2a和2b。针对NTproBNP的测定表现出响应于分析物浓度的线性信号(图2a)而针对CRP的信号则随着分析物的浓度而下降(图2b)。最高的CRP浓度(21μg/ml)比最低的NTproBNP浓度(55pg/ml)超出了380000倍以上。
实施例2
重复实施例1中的试验，但是这一次是组合了心肌肌钙蛋白I(cTnI)和CRP的测定。用与实施例1中所述相同的方式来准备和完成芯片与测定，其修改之处是使用单克隆的αcTnI用于cTnI的捕捉和检测。以竞争模式测量CRP而以夹心模式测量cTnI。通过在耗尽了CRP的血清中掺入已知浓度的CRP和cTnI来制备血清样本。制备并测定五个具有恒定的CRP浓度(5μg/ml)和增加的cTnI浓度(0,2,10,50,250ng/ml)的样本。
图3将相对荧光强度(RFU)作为微流体通道内位置的函数示出。积分的波峰被作为实施例1中所述的浓度函数绘出。针对cTnI的测定表现出响应于分析物浓度的线性信号(图4)而针对CRP的信号则保持恒定。CRP信号不受cTnI信号改变的影响。
尽管已经参照对于发明人来说构成目前已知的最佳实施方式的本发明优选实施例介绍了本发明，但是应该理解对于本领域普通技术人员来说可以进行各种修改和变形而并不背离由以下所附权利要求阐明的本发明的保护范围。

Claims (15)

1.一种用于分析液体样本中的至少两种分析物的方法，所述方法包括以下步骤：
a. 提供基板，其中至少两种不同类型的捕捉分子被固定在基板上并且其中每一种类型的捕捉分子都具有针对一种分析物的特定亲和力，
b. 使样本与所述捕捉分子接触，
c. 对于要分析的至少一种分析物：在结合至捕捉分子的分析物分子和针对分析物具有特定亲和力的被标记检测分子之间引发接触，并且
对于要分析的至少另一种分析物：在捕捉分子和被标记形式的分析物之间引发接触，以及
d. 测量来自于被标记检测分子和基板上的被标记分析物的可检测信号，其中被标记分析物的浓度与样本中未标记分析物的浓度相适应。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述捕捉分子中的每一种都是从抗体、适体、核酸探针、DNA探针、RNA探针、PNA探针、抗体片段、Fab片段和scFv片段构成的组中独立选出的。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述捕捉分子是抗体。
4.如权利要求1至3中的任意一项所述的方法，其中所述检测分子是从抗体、抗体片段、Fab片段、scFv片段、适体、核酸探针、DNA探针、RNA探针和PNA探针中选出的至少一种分子。
5.如权利要求1至3中的任意一项所述的方法，其中所述检测分子是抗体。
6.如权利要求1至5中的任意一项所述的方法，其中通过将被标记检测分子加入设备中来引发捕捉分子和被标记检测分子之间的所述接触。
7.如权利要求1至5中的任意一项所述的方法，其中通过在设备上溶解预先分配的物质来引发捕捉分子和被标记检测分子之间的所述接触。
8.如权利要求1至7中的任意一项所述的方法，其中通过在设备中加入被标记分析物来引发捕捉分子和被标记分析物之间的所述接触。
9.如权利要求1至7中的任意一项所述的方法，其中通过首先在样本中添加被标记分析物并随后使样本与捕捉分子相接触来引发捕捉分子和被标记分析物之间的所述接触。
10.如权利要求1至7中的任意一项所述的方法，其中通过在设备上溶解预先分配的物质来引发捕捉分子和被标记分析物之间的所述接触。
11.如权利要求1至10中的任意一项所述的方法，其中样本与捕捉分子接触足够长的一段时间以达到平衡，用于将分析物分子结合至捕捉分子。
12.如权利要求1至11中的任意一项所述的方法，其中所述基板至少部分地具有基本上垂直于所述表面的凸起，所述凸起具有高度(H1)、直径(D1)和倒易间距(x1,y1)以实现所述液体样本的横向毛细流动。
13.如权利要求1至12中的任意一项所述的方法，其中所述基板包括至少一个样本添加区域、具有接纳至少一部分样本能力的至少一个接受区域以及在一个或多个样本添加区域和一个或多个接受区域之间建立起流体连接的至少一个连接区域。
14.如权利要求1至13中的任意一项所述的方法，其中所述至少两种不同类型的捕捉分子被固定在基板上的至少两个不同区域上。
15.一种包括基板的分析设备，所述基板包括至少一个样本添加区域、具有接纳至少一部分样本能力的至少一个接受区域以及在一个或多个样本添加区域和一个或多个接受区域之间实现流体连接的至少一个连接区域，所述区域至少部分地由基本上垂直于所述表面的凸起覆盖，所述凸起具有高度(H1)、直径(D1)和倒易间距(x1,y1)以实现所述液体样本的横向毛细流动，其中所述基板包括固定在基板上的至少两种不同类型的捕捉分子并且其中每一种类型的捕捉分子都具有针对一种分析物的特定亲和力，并且其中所述基板进一步包括预先分配的被标记检测分子和预先分配的被标记分析物。
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