CN102061263A - 一种天麻种子萌发菌(xl-m0701)及制备方法和应用 - Google Patents

一种天麻种子萌发菌(xl-m0701)及制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明是一种天麻种子萌发菌(XL-M0701)及其制备方法。该菌株的分类命名为Mycenadendrobii，保藏登记号为：CGMCC No.3848。将纯化的菌株制成生产种用于乌天麻种的培养，得到了优质的乌天麻栽培种子。因XL-M0701菌株的菌源采自于野生状态的乌天麻原球茎，保证了国家地理标志保护产品昭通天麻的品质特性，并且在与其他菌种的对比试验中证明本发明(XL-M0701)菌株对昭通乌天麻种子的萌发数量和速度较优。能够为昭通天麻的规模化种植提供优质乌天麻良种。

Description

一种天麻种子萌发菌(XL-M0701)及制备方法和应用 
技术领域
本发明涉及一种微生物技术领域，具体地说是国家地理标志保护产品“昭通天麻”种子萌发菌(XL-M0701)及制备方法和应用。 
背景技术
以云南省彝良县小草坝林区乌天麻为代表的国家地理标志保护产品“昭通天麻”(2004年获得认证)是享誉中外的名贵中药材。天麻是树兰亚科异养型植物，在自然条件下，天麻种子萌发生长必须依靠萌发菌、蜜环菌这类真菌供给营养，不同萌发菌所提供的营养对天麻种子的萌发和种子发芽后原球茎的生长都有不同影响。国内公知的已鉴定到种的天麻种子萌发菌株紫萁小菇(Mycena osmundicola)、石斛小菇(Mycena dendrobii)、兰小菇(Mycena orchidicola)和开唇兰小菇(Mycena anoectochila)，其中石斛小菇在天麻人工种植中运用较多。为了在人工栽培“昭通天麻”的过程中得到纯正品质的乌天麻种子，需要在乌天麻野生环境寻找一种与乌天麻最具共生优势的萌发菌源，并分离、纯化出对昭通天麻种子萌发、生长较优良的萌发菌株，以保证昭通天麻栽培质量和产量。 
发明内容
本发明的目的是提供一种用于播种“昭通天麻”种子的萌发菌(XL-M0701)，以及它的制备方法和应用，该菌株有效地保证昭通天麻的纯正品质。 
本发明以采自野生状态萌发的乌天麻初生球菌为菌源，筛选、分离、纯化出能保持昭通天麻特性的优良萌发菌株(XL-M0701)，该菌株的分类命名为：石斛小菇Mycena dendrobii，保藏登记号为：CGMCC No.3848。 
该菌株的制备方法为： 
1)野外培育天麻原球茎： 
选择天麻种子自然成熟的7-8月，用双层地膜制成一个约30立方厘米的袋子，袋底凿几个孔后装上10厘米鲜沙土，采集野生天麻适生林间地面潮湿的含有阔叶树半腐落叶或日本金星蕨根，平铺在袋内沙土上，适量喷水后均匀播上天麻种子，种面上盖一层落叶再覆鲜沙土8-10厘米，扎好袋口并将播种袋置于事先挖好的林地塘穴内，盖土堆高出地面，稍压紧，再盖一层枯枝落叶。 
2)整粒球茎分离： 
上述播种袋培育50-60天后，取出袋子(可见到部分天麻种子已经被萌发成初生球茎)，挑选发育健壮的乌天麻原球茎置于培养皿内，用自来水洗净杂物后带入接种室，在洁净工作台内经消毒处理后，无菌操作将球茎接入PDA斜面培养基，接种完毕，贴上标签，将接种管(皿)放入 
Figure BSA00000317275700021
恒温箱内培养； 
3)菌种纯化： 
恒温培养3-10天，见球茎萌生出白色菌丝后，立即挑取基质内菌丝点无菌移接到斜面培养基上，观察菌丝生长情况并作好记录，将长势不一(或有杂菌)的管(皿)种再度提纯，把提纯后的菌种两两之间做拮抗试验，从而纯化出本发明的XL-M0701菌株； 
4)将纯化的菌株制成生产种用于天麻种子萌发，再次得到了优质的乌天麻栽培种子。 
菌落特性： 
XL-M0701菌株在PDA固体培养基上生长的形态特征为菌落白色、规则，具有荧光反应，菌丝无色，具有锁状联合，菌丝呈束状螺旋弯曲生长，气生菌丝发达。 
该菌株经中科院昆明植物所标本馆用延长因子(EF1-a)序列分子鉴定与石斛小菇形似性最近。 
该菌株在10℃-30℃均能生长，以25℃生长最快，基质含水量40％-60％，PH5.5-6范围菌丝生长最好。 
菌株应用：将XL-M0701菌株扩转培养为三级生产种，在干净容器内把片状的生产种撕成碎片，与粉状的天麻种子均匀拌合后，再播种在林下塘穴内的阔叶树枝材(直径50-80mm)上，覆叶盖土50-60天后，天麻粉种即可萌发生长为天麻原生球茎。 
本发明的积极效果：因XL-M0701菌株的菌源采自于野生状态的乌天麻原球茎，保证了国家地理标志保护产品昭通天麻的品质特性，并且在与其他菌种的对比试验中证明本发明(XL-M0701)菌株对昭通乌天麻种子的萌发数量和速度较优。能够为昭通天麻的规模化种植提供优质乌天麻良种。 
本发明的萌发菌株(XL-M0701)于2010年5月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏登记号为：CGMCC No.3848，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 
具体实施方式
1、XL-M0701菌株的制备方法： 
1)野外培育天麻原球茎：选择天麻种子自然成熟的7-8月，用双层地膜制成一个约 30立方厘米的袋子，袋底凿几个孔后装上10厘米鲜沙土，采集野生天麻适生林间地面潮湿的含有阔叶树半腐落叶或日本金星蕨根的腐殖土，平铺在袋内沙土上，适量喷水后均匀播上天麻种子，种面上盖一层落叶再覆鲜沙土8-10厘米，扎好袋口并将播种袋置于事先挖好的林地塘穴内，盖土堆高出地面，稍压紧，再盖一层枯枝落叶； 
2)整粒球茎分离：上述播种袋培育50-60天后，取出袋子，挑选发育健壮的乌天麻原球茎置于培养皿内，用自来水洗净杂物后带入接种室，在洁净工作台内经消毒处理后，无菌操作将球茎接入PDA斜面培养基，接种完毕，贴上标签，将接种管(皿)放入 
Figure BSA00000317275700031
恒温箱内培养； 
3)菌种纯化：恒温培养3-10天，见球茎萌生白色菌丝后，立即挑取基质内菌丝点无菌移接到PDA斜面培养基上，观察菌丝生长情况并作好记录，将长势不一(或有杂菌)的管(皿)种再度提纯，把提纯后的菌种两两之间做拮抗试验，从而纯化出本发明的XL-M0701菌株(试管种)。 
2、菌种扩繁：使用含水量55％的木屑、麦麸等体积比的混合培养料，将XL-M0701试管种扩转培养成600ml瓶装二级种，再用等体积的木屑、麦麸混合料拌合阔叶树树叶制成袋装培养料，灭菌后在无菌条件下接入二级种，在湿度70％、室温22℃-25℃条件下培养60-80天，即成为三级生产用种。 
3、菌株的应用：将上述三级生产用种用于乌天麻种的培养，得到了优质的乌天麻栽培种子。 
应用实例： 
1)2008年7-10月，在云南省彝良县小草坝林间，使用XL-M0701转扩的三级生产种，拌合小草坝野生乌天麻粉种1080穴/袋，播种90天后抽样检查，结果见下表： 
Figure BSA00000317275700032
2)2009年，利用本发明菌种首次规模化繁育乌天麻种11200袋获得成功，抽查结果预计在今年将收获天麻栽培中约10000斤以上，较当地传统方式提高育种效率约5-10倍。 

Claims (3)

1.一种天麻种子萌发菌(XL-M0701)，其特征在于该菌株的分类命名为Mycenadendrobii，保藏登记号为：CGMCC No.3848。
2.权利要求1所述的天麻种子萌发菌(XL-M0701)的制备方法，其特征在于按以下步骤进行：
1)野外培育天麻原球茎：选择天麻种子自然成熟的7-8月，用双层地膜制成一个约30立方厘米的袋子，袋底凿几个孔后装上10厘米鲜沙土，采集野生天麻适生林间地面潮湿的含有阔叶树半腐落叶或日本金星蕨根的腐殖土，平铺在袋内沙土上，适量喷水后均匀播上天麻种子，种面上盖一层落叶再覆鲜沙土8-10厘米，扎好袋口并将播种袋置于事先挖好的林地塘穴内，盖土堆高出地面，稍压紧，再盖一层枯枝落叶；
2)整粒球茎分离：上述播种袋培育50-60天后，取出袋子，挑选发育健壮的乌天麻原球茎置于培养皿内，用水洗净杂物后带入接种室，经消毒处理后，无菌操作将球茎接入PDA斜面培养基，接种完毕，将接种管(皿)放入
Figure FSA00000317275600011
恒温箱内培养；
3)菌种纯化：恒温培养3-10天，见球茎萌生白色菌丝后，立即挑取基质内菌丝点无菌移接到PDA斜面培养基上，观察菌丝生长情况，将长势不一的管种再度提纯，把提纯后的菌种两两之间做拮抗试验，从而纯化出XL-M0701菌株；
3.权利要求1所述的天麻种子萌发菌(XL-M0701)的应用，其特征在于将纯化的菌株制成生产种用于乌天麻种的培养，得到了优质的乌天麻栽培种子。
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