CN101669430B - 暗褐网柄牛肝菌半人工栽培方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及暗褐网柄牛肝菌的半人工栽培方法。先培养凤凰木、菠萝蜜树幼苗及柚子树嫁接苗，然后将凤凰木、菠萝蜜幼苗及柚子树嫁接苗移栽于田间，树龄1年时将暗褐网柄牛肝菌固体菌种接种在凤凰木、菠萝蜜幼树及幼龄或成龄柚子树的根系上，接种次年凤凰木、菠萝蜜树及柚子树下即生长暗褐网柄牛肝菌子实体并发育成熟，每100m²可产暗褐网柄牛肝菌10kg-80kg以上。利用该方法可快速实现暗褐网柄牛肝菌半人工栽培并快速实现产业化。该种暗褐网柄牛肝菌半人工栽培，方法简便、省去了人工合成菌根苗过程，出菇时间短，同时收获经济作物果实与牛肝菌子实体，实现果、菌双收，大幅度增加产值。节约了资金及其他相应的栽培成本，提高了土地利用率。

Description

暗褐网柄牛肝菌半人工栽培方法

技术领域

本发明涉及菌根食用真菌半人工栽培技术领域，尤其是暗褐网柄牛肝菌田间、圃地的半人工栽培方法。

背景技术

暗褐网柄牛肝菌(Phlebopus portentosus)，味道鲜美，营养价值丰富，有较好的食用及药用价值，是一种较好的保建食品，深受产地消费者喜爱。分布于斯里兰卡、越南、印度尼西亚、泰国、巴西、墨西哥、澳大利亚，新西兰(Maria2007，Bandala2004，Watling2001，Barbara 1987，Heinemann1982)。在我国分布于云南、广西和海南等地(臧穆等1986，2006；杨祝良和臧穆2003)。目前市场上销售的暗褐网柄牛肝菌均采自野生自然生长。由于受气候季节条件的限制产量有限。加上不注重对野生自然资源的保护，人为过度采摘导致数量越来越少。

一般认为牛肝菌均为菌根食用菌。许多菌根食用菌半人工模拟栽培的过程相当长，需要4～5年，甚至6～7年才能完成(弓明钦等2006)。在实验室条件下Boletus菌丝在锯末和麦粒组成的培养基上生长良好，避光条件下培养90天产生具担孢子的成熟子实体(Ohta A等2003)。目前世界菌根食用栽培最为成功的是黑孢块菌(Tuber melanosporum)。在新西兰，黑孢块菌人工栽培从种植园的建立到有块菌子囊果收获需要6-7年时间(谭著明等2002)。松乳菇(Lactarius deliciosus)半人工栽培，菌根苗合成需5～8个月时间，用菌根合成苗继续原地栽培或移植到普通土壤中培养出菇需2～3年时间(谭著明等2000)。采用合成的褐环粘盖牛肝菌(Suillus luteus)湿地松菌根苗密植于经过消毒的围地实现人工栽培，菌根苗栽植至褐环粘盖牛肝菌子实体生长需12个月时间(应国华等2007)。

综上所述，目前仅有少数种类的菌根食用菌可进行半人工模拟栽培，或处于实验室栽培研究状态，暗褐网柄牛肝菌半人工栽培未见报道。

参考文献

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应国华，吕明亮，李伶俐.褐黄粘盖牛肝菌人工栽培方法，中国专利，申请专号，200710164731.X.

发明内容

本发明的目的是提供一种简便、快捷的半人工的暗褐网柄牛肝菌半人工栽培方法，利用该方法可实现暗褐网柄牛肝菌产业化，极大地满足人们对该种美味食用菌的需求，缓解对野生自然资源的压力，保护生态。

本发明的技术方案为：暗褐网柄牛肝菌半人工栽培方法按以下步骤进行：

1、凤凰木(Delonix regia(Boj.)Raf.)树幼苗培育及移栽

1)播种催芽：凤凰木种子采自云南西双版纳热带花卉园。挑选无病虫害、饱满、颗粒均匀的种子在温水中浸泡24小时，然后播种于沙床中催芽，保持沙床湿润培养种子萌发；

2)幼苗培育：种子萌发、真叶展开，当苗高5cm长出第一轮侧根时将幼苗移栽入盛有营养土基质的育苗袋中，自然光照，保持育苗袋中土壤基质湿润培养幼苗生长；

3)幼苗移栽：雨季时将幼苗移栽入田间，栽苗时脱去塑料薄膜袋，尽量使幼苗根部的土壤少脱落，将苗及营养土一同放入栽培坑中，覆土并浇足定根水，培养幼苗生长；

2.菠萝蜜(Artocarpus heterophyllus Lam.)树幼苗培育及移栽

1)幼苗培育：菠萝蜜种子采自云南西双版纳。挑选无病虫害、饱满、颗粒均匀的种子播种于袋装的营养土中，保持土湿润培养种子萌发及幼苗生长；

2)幼苗移栽：雨季来临时将幼苗移栽入田间，栽苗时脱去塑料薄膜袋，尽量使幼苗根部的土壤少脱落，将苗及营养土一同放入栽培坑中，覆土并浇足定根水，培养幼苗生长；

3.柚子(Citrus g randis L.)树嫁接苗培育及移栽

1)播种催芽：挑选无病虫害、饱满、颗粒均匀的柚子树种子在温水中浸泡24小时，然后播种于沙床中催芽，保持沙床湿润培养种子萌发；

2)砧木苗培育：种子萌发、真叶展开，当苗高5cm长出第一轮侧根时将幼苗移栽入盛有营养土基质的育苗袋中，自然光照，保持育苗袋中土壤基质湿润培养砧木苗生长；

3)幼苗嫁接：砧木苗苗龄一年时，选取好的柚子品种如冬试早的芽嫁接于砧木苗上，芽点萌发后切除砧木树杆，使嫁接的萌发的芽旺盛生长。

4)幼苗移栽：雨季时将幼苗移栽入田间，栽苗时脱去塑料薄膜袋，尽量使幼苗根部的土壤少脱落，将嫁接苗及营养土一同放入栽培坑中，覆土并浇足定根水，培养幼苗生长；

4.暗褐网柄牛肝菌固体菌种培养：用以下培养基培养暗褐网柄牛肝菌固体菌种，固体菌种的制备由下述原料及方法配制而成：

1)原料组成：

橡胶木锯木屑或其他杂木屑        10.0～30.0kg

谷粒或小麦                      2.0～10.0kg

蔗糖                            50.0～200.0g

M_gSO₄                           10.0～30.0g

KH₂PO₄                          10.0～30.0g

pH                              4.0～6.0

2)配制方法：将谷粒或小麦称量后放入容器中，加水浸泡10～12h，然后滤除多余水份待用；橡胶木锯木屑或杂木屑料预湿，然后加入浸泡滤水后的谷粒或小麦，将蔗糖、MgSO₄、KH₂PO₄用适量的水溶解后喷洒入锯木屑料堆中，调料堆含水量60.0％，最后将各种原料均匀拌匀混合，培养基pH 4.0～6.0，即得固体培养基；将配制好的固体培养基分装于聚丙烯菌种袋中，124℃灭菌60分钟，待冷却后备用；

3)接种培养：将预先培养好的暗褐网柄牛肝菌液体菌种接种于步骤2)中的灭菌的袋装培养基质中，接种后将培养袋置于28～30℃的培养室中暗光培养40天～60天，菌丝体长满培养袋，即得固体菌种；

5.接种凤凰木、菠萝蜜幼树及柚子树的根系培养子实体生长

1)接种：凤凰木或菠萝蜜幼树树龄达一年以上，柚子树树龄达一年以上或成龄树，在雨季田间、圃地的土壤潮湿时或旱季节对田间、圃地土壤浇透水后，挖开菠萝蜜、凤凰木及柚子树的根圈部土壤，露出根系的主、侧根；然后将预先培养好的固体菌种掰成团块状，接种在根系主、侧根或单纯接种于侧根上，每株树接菌种量50g-500g，接种时菌种尽量与植物的根系紧密接触，接种完后在接种部位覆土恢复原状；

2)培养出菇：保持接种树的根部土壤潮湿，接种后4个月至10个月菠萝蜜、凤凰木及柚子树树根部周围土壤中即生长暗褐网柄牛肝菌子实体并发育成熟。

本发明暗褐网柄牛肝菌半人工栽培方法，为菌根食用菌半人工栽培方法的首创，其特点及优点如下：

①方法简便、易行：不用合成菌根苗，直接用纯培养固体菌种接种田间栽培的宿主树幼树根系，菌种与宿主树在田间自然形成共生关系并生长子实体。与一般菌根食用菌(如块菌、红汁浮菇)半人工栽培相比较，省去了先人工合成菌根苗，然后再将菌根苗移栽于田间的过程，简化了栽培环节。

②固体菌种培养基成份简单，培养方法简便，培养时间短：培养基配方中只用了简单的碳氮源(谷粒、小麦、蔗糖)，一般的无机盐(MgSO₄、KH₂PO₄)及橡胶木或其他杂木的锯木屑即可进行固体菌种培养；用聚丙烯塑料薄膜袋、一般培养室(可加温)可进行固体菌种培养；培养需60天菌丝即长满培养袋。

③接种至出菇的时间短：与其他菌根食用菌半人工栽培(如块菌)从种植园的建立至子实体生长需要6-7年时间相比较，本发明暗褐网柄牛肝菌半人工栽培从接种至子实体生长仅需4个月至10个月时间，大大缩短了种植园出菇及投产的时间。

④经济作物果实与牛肝菌子实体同时收获，提高了土地利用率，增加了产值，提高了种植户收入。

本发明将暗褐网柄牛肝菌固体菌种接种在田间栽培的凤凰木树、菠萝蜜树等热带植物根系上培养出菇的方法，适用于将暗褐网柄牛肝菌纯培养固体菌种、液体菌种及自然生长子实体产生的孢子接种于其他热带经济作物及热带花卉植物的根系上培养出菇。

具体实施方式

实施例1

1.凤凰木树幼苗培育及移栽

1)播种催芽：凤凰木种子于第一年的11月采自云南西双版纳热带花卉园。挑选无病虫害、饱满、颗粒均匀的种子在温水中浸泡24小时，然后播种于沙床中芽，保持沙床湿润培养种子萌发。

2)幼苗培育：种子萌发、真叶展开，当苗高5cm长出第一轮侧根时将幼苗移栽入盛有营养土基质的育苗袋中，自然光照，保持育苗袋中土壤基质湿润培养幼苗生长。

3)幼苗移栽：于来第二年7月雨季时将幼苗移栽入田间，栽苗时脱去塑料薄膜袋，尽量使幼苗根部的土壤少脱落，将苗及营养土一同放入栽培坑中，覆土并浇足定根水，培养幼苗生长。

2.暗褐网柄牛肝菌固体菌种培养

用以下培养基培养暗褐网柄牛肝菌固体菌种，固体菌种的制备由下述原料及方法配制而成。

1)原料组成：

橡胶木锯木屑          10.0kg

谷粒                  2.0kg

蔗糖                  50.0g

M_gSO₄                 10.0g

KH₂PO₄                10.0g

pH                    4.0

2)配制方法：将谷粒称量放入容器中，加水浸泡10～12h，然后滤除多余水份均匀拌入橡胶木锯木屑中，然后将蔗糖、MgSO₄、KH₂PO₄用适量的水溶解后喷洒入锯木屑料堆，水的用量以料堆含水量60.0％为准，最后将各种原料均匀混合，培养基自然pH 4.0，得固体培养基。将配制好的固体培养基分装于17cm×30cm的聚丙烯塑料膜制成的菌种袋中，每袋750ml，装袋后124℃灭菌60分钟，冷却后备用；

3)接种培养：将培养好的暗褐网柄牛肝菌液体菌种接种于步骤2)中的袋装的培养料中，接种后将培养袋置于28℃～30℃的培养室中暗光培养50天，菌丝体长满培养袋，得固体菌种。

3.固体菌种接种凤凰木幼树根系培养子实体生长及种的鉴定

1)接种田间栽培的凤凰木幼树根系培养出菇

(1)接种方法：于第三年7月雨季到来后田间土壤潮湿，挖开树龄一年的凤凰木幼树的根部土壤，露出根系的侧根；然后将固体菌种掰成团块状，接种在侧根上，每株接入菌种量150.0g，接种时菌种尽量与树的侧根紧密接触。

(2)培养出菇：保持接种树的根部土壤潮湿，接种当年的11月份(接种4个月)凤凰木树下根部周围土壤中即生长暗褐网柄牛肝菌子实体并发育成熟。接种的次年5月至8月凤凰木树下土壤中共出菇6潮。

2)半人工培养子实体种的鉴定

半人工培养的子实体形态，其特征如下：菌盖黄褐色，黑褐色，5-14cm，盖中央凸起，成熟后平展，无裂纹，盖缘多上翘。盖肉厚2-6cm，松软，海绵质，淡黄色，伤后很少呈现淡蓝色。菌孔单孔型，黄色。菌管长1.0-2.0cm，孔口近圆型至多角型，黄色或黑褐色。菌柄粗壮，基部往往膨大呈臼状，2-3×6-9cm，几与菌盖同色。担孢子长梨型，长椭圆型，7.5-13.0um×5.0-7.45um，橄榄绿色。综上所述，半人工培养的子实体与野生子实体形态特征一致，可鉴定为同一个种。半人工培养的子实体凭证标本放在中国科学院昆明植物研究所真菌标本室，编号为HKAS 49706。

实施例2

1.菠萝蜜树幼苗培育及移栽

1)幼苗培育：菠萝蜜种子于第一年7月采自云南西双版纳。挑选无病虫害、饱满、颗粒均匀的种子播种于袋装的营养土中，保持土湿润培养种子萌发及幼苗生长。

2)幼苗移栽：于第二年5月雨季来临时将幼苗移栽入田间，栽苗时脱去塑料薄膜袋，尽量使幼苗根部的土壤少脱落，将苗及营养土一同放入栽培坑中，覆土并浇足定根水，培养幼苗生长。

2.固体暗褐网柄牛肝菌菌种培养

用以下固体培养基培养暗褐网柄牛肝菌固体菌种，菌种的制备由下述原料及方法配制而成。

原料组成：

橡胶木锯木屑或其他杂木屑         15.0kg

小麦                             3.0kg

蔗糖                             100.0g

M_gSO₄                            15.0g

KH₂PO₄            15.0g

pH                5.0

以下配制方法及接种培养同实施例一。

3.接种田间栽培的菠萝蜜树根系培养子实体生长

1)接种方法：在第二年雨季来临田间土壤湿透后，挖开树龄一年的菠萝蜜树的根部土壤，露出根系的主、侧根；然后将预先培养好的固体菌种掰成团块状，接入主、侧根部。每株接入菌种150.0g，接种时菌种尽量与菠萝蜜树的主、侧根紧密接触。

2)培养出菇：保持接种树的根部土壤潮湿，接种后10个月即第三年5月菠萝蜜树根部周围土壤中即生长暗褐网柄牛肝菌子实体并发育成熟，5月至8月共出菇6潮。

实施例3

1.柚子树嫁接苗培育及移栽

1)播种催芽：挑选无病虫害、饱满、颗粒均匀的柚子树种子在温水中浸泡24小时，然后播种于沙床中催芽，保持沙床湿润培养种子萌发；

2)砧木苗培育：种子萌发、真叶展开，当苗高5cm长出第一轮侧根时将幼苗移栽入盛有营养土基质的育苗袋中，自然光照，保持育苗袋中土壤基质湿润培养砧木苗苗生长；

3)幼苗嫁接：砧木苗苗龄一年时，选取冬试早品种的芽嫁接于砧木苗上，芽点萌发后切除砧木树稍，使嫁接萌发的芽旺盛生长。

4)幼苗移栽：雨季时将幼苗移栽入田间，栽苗时脱去塑料薄膜袋，尽量使幼苗根部的土壤少脱落，将苗及营养土一同放入栽培坑中，覆土并浇足定根水，培养幼苗生长。

2.固体暗褐网柄牛肝菌菌种培养

固体菌种培养基配方及制备方法配制同实施例2。

3.接种田间栽培的柚子树根系培养子实体生长

1)接种方法：选成龄柚子树，在雨季来临田间土壤湿透后，挖开柚子树的根部土壤，露出根系的侧根；然后将预先培养好的固体菌种掰成团块状，接入主、侧根部。每株接入菌种150.0g，接种时菌种尽量与柚子树的侧根紧密接触。

2)培养出菇：保持接种树的根部土壤潮湿，接种后10个月柚子树根部周围土壤中即生长暗褐网柄牛肝菌子实体并发育成熟，5月至8月共出菇6潮。

实施例4

1.凤凰木树幼苗培育及移栽同实施例1

2.暗褐网柄牛肝菌固体菌种培养

用以下固体培养基培养固体菌种，菌种的制备由下述原料及方法配制而成。

原料组成：

橡胶木锯木屑或其他杂木屑           20.0kg

谷粒                               5.0kg

蔗糖                               150.0g

M_gSO₄                              20.0g

KH₂PO₄                             20.0g

pH                                 6.0

以下配制方法及接种培养同实施例1。

3.固体菌种接种凤凰木幼树根系培养子实体生长

1)接种方法：在第二年4月的旱季对凤凰木树根部土壤浇透水，挖开树龄一年的凤凰木幼树的根部土壤，露出根系的侧根；然后将固体菌种掰成团块状，接种在侧根上。每株接入菌种量250g，接种时菌种尽量与树的侧根紧密接触，并在接种部盖膜保持土壤湿润。

2)培养出菇：保持接种树的根部土壤潮湿，接种的当年的11月份(接种4个月)凤凰木树下根部周围土壤中即生长暗褐网柄牛肝菌子实体并发育成熟。接种的次年5月至8月凤凰木树下土壤中共出菇6潮。

实施例5

1.菠萝蜜树幼苗培育及移栽同实施例2

2.暗褐网柄牛肝菌固体菌种培养

用以下固体培养基培养暗褐网柄牛肝菌固体菌种，固体菌种的制备由下述原料及方法配制而成。

原料组成：

橡胶木锯木屑或其他杂木屑            30.0kg

小麦                                8.0kg

蔗糖                                200.0g

M_gSO₄           30.0g

KH₂PO₄          30.0g

pH              5.0

以下配制方法及接种培养同实施例一。

3.接种田间栽培的菠萝蜜树根系培养子实体生长

1)接种方法：在第二年4月旱季对菠萝蜜树根部土壤浇透水，挖开树龄一年的菠萝蜜树的根部土壤，露出根系的主、侧根；然后将预先培养好的固体菌种掰成团块状，接入主、侧根部，每株接入菌种500.0g，接种时菌种尽量与菠萝蜜树的主、侧根紧密接触，并在接种部盖膜保持土壤湿润。

2)培养出菇：保持接种树的根部土壤潮湿，接种后10个月(即第三年5月)菠萝蜜树根部周围土壤中即生长暗褐网柄牛肝菌子实体并发育成熟，5月至8月共出菇6潮。

Claims (4)

1.暗褐网柄牛肝菌半人工栽培方法，其特征在于按以下步骤进行：

(1)暗褐网柄牛肝菌固体菌种培养：用以下培养基培养暗褐网柄牛肝菌固体菌种，固体菌种的制备由下述原料及方法配制而成：

1)原料组成：

橡胶木锯木屑或其他杂木屑    10.0～30.0kg

谷粒或小麦                  2.0～10.0kg

蔗糖                        50.0～200.g

M_gSO₄                       10.0～30.0g

KH₂PO₄                      10.0～30.0g

2)配制方法：将谷粒或小麦称量后放入容器中，加水浸泡10～12h，然后滤除多余水份待用；橡胶木锯木屑或杂木屑料预湿，然后加入浸泡滤水后的谷粒或小麦，将蔗糖、MgSO₄、KH₂PO₄用适量的水溶解后喷洒入锯木屑料堆中，调料堆含水量60％，最后将各种原料均匀拌匀混合，培养基pH 4.0～6.0，即得固体培养基；将配制好的固体培养基分装于聚丙烯菌种袋中，124℃灭菌60分钟，待冷却后备用；

3)接种培养：将预先培养好的暗褐网柄牛肝菌液体菌种接种于步骤2)中的灭菌的袋装培养基质中，接种后将培养袋置于28～30℃的培养室中暗光培养40天～60天，菌丝体长满培养袋，即得固体菌种；

(2)接种凤凰木、菠萝蜜幼树及柚子树的根系培养子实体生长：

1)接种：凤凰木或菠萝蜜幼树树龄达一年以上，柚子树树龄达一年以上，在雨季田间、圃地的土壤潮湿时或旱季节对田间、圃地土壤浇透水后，挖开菠萝蜜、凤凰木及柚子树的根圈部土壤，露出根系的侧根；然后将预先培养好的固体菌种掰成团块状，接种在根系的侧根上，每株树接菌种量50g-500g，接种时菌种尽量与植物的根系紧密接触，接种完后在接种部位覆土恢复原状；

2)培养出菇：保持接种树的根部土壤潮湿，接种后4个月至10个月菠萝蜜、凤凰木及柚子树树根部周围土壤中即生长暗褐网柄牛肝菌子实体并发育成熟。

2.权利要求1所述的暗褐网柄牛肝菌半人工栽培方法，其特征在于所述的凤凰木树幼苗培育及移栽方法为：

1)播种催芽：挑选无病虫害、饱满、颗粒均匀的凤凰木种子在温水中浸泡24小时，然后播种于沙床中催芽，保持沙床湿润培养种子萌发；

2)幼苗培育：种子萌发、真叶展开，当苗高5cm长出第一轮侧根时将幼苗移栽入盛有营养土基质的育苗袋中，自然光照，保持育苗袋中土壤基质湿润培养幼苗生长；

3)幼苗移栽：雨季时将幼苗移栽入田间，栽苗时脱去塑料薄膜袋，尽量使幼苗根部的土壤少脱落，将苗及营养土一同放入栽培坑中，覆土并浇足定根水，培养幼苗生长。

3.权利要求1所述的暗褐网柄牛肝菌半人工栽培方法，其特征在于所述的菠萝蜜树幼苗培育及移栽方法为：

1)幼苗培育：挑选无病虫害、饱满、颗粒均匀的菠萝蜜种子播种于袋装的营养土中，保持土湿润培养种子萌发及幼苗生长；

2)幼苗移栽：雨季来临时将幼苗移栽入田间，栽苗时脱去塑料薄膜袋，尽量使幼苗根部的土壤少脱落，将苗及营养土一同放入栽培坑中，覆土并浇足定根水，培养幼苗生长。

4.权利要求1所述的暗褐网柄牛肝菌半人工栽培方法，其特征在于所述的柚子树嫁接苗培育及移栽方法为：

1)播种催芽：挑选无病虫害、饱满、颗粒均匀的柚子树种子在温水中浸泡24小时，然后播种于沙床中催芽，保持沙床湿润培养种子萌发；

2)砧木苗培育：种子萌发、真叶展开，当苗高5cm长出第一轮侧根时将幼苗移栽入盛有营养土基质的育苗袋中，自然光照，保持育苗袋中土壤基质湿润培养砧木苗生长；

3)幼苗嫁接：砧木苗苗龄一年时，选取柚子品种冬试早的芽片嫁接于砧木苗上，芽点萌发后切除砧木树稍，使芽点萌发旺盛生长；

4)幼苗移栽：雨季时将幼苗移栽入田间，栽苗时脱去塑料薄膜袋，尽量使幼苗根部的土壤少脱落，将苗及营养土一同放入栽培坑中，覆土并浇足定根水，培养幼苗生长。