CN101999295B - 一种蜜环菌(xl-a0704)及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明是一种蜜环菌(XL-A0704)及其制备方法和应用。该菌株的分类命名为Armillaria sinapina，保藏登记号为：CGMCC No.3847。将XL-A0704纯菌株扩转成二级固体菌种，用二级固体菌种扩转培养三级瓶装树枝菌种，使用树枝菌种作引菌培育枝材或菌材供天麻栽培使用。本发明的菌株具有以下优点：1)该菌株的使用减少了麻农种植昭通乌天麻的盲目性。2)该菌株对昭通天麻球茎生长具有较好的亲和力，能保证“昭通天麻”特性，有效地实现国家地理标志保护产品“昭通天麻”的纯正品质，实现标准化、专业化、规模化发展天麻产业。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体地说是国家地理标志保护产品“昭通天麻”的一种共生蜜环菌(XL-A0704)及其制备方法和应用。
背景技术
以云南省彝良县小草坝林区乌天麻为代表的国家地理标志保护产品“昭通天麻”，是享誉中外的名贵中药材。天麻是树兰亚科异养型植物，在自然条件下，天麻种子发芽形成原球茎后，主要靠消化浸入繁殖茎和麻体的蜜环菌菌丝供给营养。蜜环菌生物种株较多，分布地域广阔。但不同生物种的蜜环菌株其成分含量有明显差异，种出的天麻产品其种质就有优劣之分。云南省昭通市各县山区所产的天麻，在1960年代被中科院昆明植物所研究员周铉首次发表，定名为乌天麻(Gastrodia elata Bl.f.glauca S.Chow)、黄天麻(Gastrodia elataBl.f.flavida S.Chow)，但是多年来昭通乌天麻生长所必须的共生蜜环菌一直未能被分离提纯使用。昭通天麻适生区的麻农，沿用寻找林间染菌的朽木、枯枝作引菌种植天麻，但产量低且不确定，在栽培过程中存在林材浪费和经济损失。
发明内容
本发明的目的是提供一种天麻生长所必需的蜜环菌(XL-A0704)及其制备方法和应用，该菌种(XL-A0704)能确保昭通天麻的人工种植生产。
本发明利用野外采集的优势蜜环菌源，筛选、分离、纯化出能保持昭通天麻特性的优良蜜环菌株，该菌株的分类命名为Armillaria sinapina，保藏登记号为：CGMCC No.3847。
该菌株的制备方法为：
1)采集野外蜜环菌源材料作为引菌，与直径50-80mm阔叶树枝拌合并植入林下塘穴作为菌材。在次年天麻种子自然成熟的7-8月再将与萌发菌拌好的天麻种子均匀撒播在塘穴内的菌材上，覆盖阔叶树鲜叶和砂土进行培育。
2)16-24个月后，在塘穴内天麻生长数量多、形体好的菌材上挑选成丛着生、粗细适宜、生长健壮、顶端白色的菌索数段置于培养皿内，按无菌操作规程接种到PDA试管斜面培养基上，把接种好的试管贴上标签作好记录，放入25℃恒温箱，相对湿度60～70％， 培养3-10天，再选择长入培养基的幼嫩菌索进行纯化，直至筛选得到所需的纯菌株(试管菌种)。
菌落特性：
XL-A0704菌株在PDA固体培养基上生长的形态特征为菌丝白灰色，菌索黄白色，分枝多，荧光反应强，黑色素分泌少。
该菌株气温在6℃-30℃、PH5-6.5范围均能生长，以25℃生长最快。湿度在60％-100％以内能正常生长，但在纯液体培养基内生长缓慢或不生长，全光照环境下菌索生长缓慢，黑暗条件下菌索生长最快。
该菌株经中科院昆明植物所用延长因子(EF1-a)序列分子鉴定为芥黄类蜜环菌混合群。菌株的应用：使用麦麸煮汁、葡萄糖、琼脂培养基，将XL-A0704菌株试管种扩转成二级固体菌种，用二级固体菌种扩转培养三级瓶装树枝菌种，使用树枝菌种作引菌培育枝材或菌材供天麻栽培使用。
本发明的优点：
1)该菌株的使用减少了麻农种植昭通乌天麻的盲目性。
2)该菌株对昭通天麻球茎生长具有较好的亲和力，能保证“昭通天麻”特性，有效地实现国家地理标志保护产品“昭通天麻”的纯正品质，实现标准化、专业化、规模化发展天麻产业。
本发明的蜜环菌(XL-A0704)于2010年5月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。保藏登记号为：CGMCC No.3847。
具体实施方式
1、制备试管菌种：
1)野外选择蜜环菌源(采集小草坝天麻产区不同地段的蜜环菌源材料)作为引菌，与直径50-80mm阔叶树枝拌合并植入林下塘穴作为菌材。在次年天麻种子自然成熟的7-8月再将与萌发菌(石斛小菇Mycena dendrobii，保藏登记号为：CGMCC No.3848，或用其它萌发菌)，拌好的天麻种子均匀撒播在塘穴内的菌材上，覆盖阔叶树鲜叶和砂土进行培育。
2)16-24个月后，在塘穴内天麻生长数量多、形体好的菌材上挑选成丛着生、粗细适宜、生长健壮、顶端白色的菌索数段置于培养皿内，按无菌操作规程接种到PDA试管斜面培养基上，把接种好的试管贴上标签作好记录，放入25℃恒温箱，相对湿度60～70％，培养3-10天，再选择长入培养基的幼嫩菌索进行纯化，直至筛选得到所需的纯菌株即试 管菌种。
2、菌种扩繁：按1000毫升水秤取麦麸200克、葡萄糖20克、琼脂18克制成瓶装固体培养基，无菌操作将XL-A0704试管种转接到上述培养基上，放入室温25℃，湿度70％-80％的黑暗培养室培养25天，即可长成二级菌种。再制备将长度2-3厘米、径粗1-2厘米的阔叶树鲜枝节清水浸泡24小时，装入750毫升菌种瓶至瓶肩，向瓶内注入清洁水到半淹没表面枝节，经加盖灭菌后，无菌操作接入二级菌种，把接种后的种瓶放进室温22℃-25℃，相对湿度70％-80％的黑暗培养室培养50-60天，即可培育出三级树枝菌种。
3、点菌播种：7-8月份，采用菌种、枝材、天麻种子“三下窝”播种方式，选择适宜荒林地开挖成70厘米×50厘米×15-20厘米的播种穴，挖松捣平穴底，铺一薄层树叶，将径粗5-8厘米阔叶树枝材砍成60厘米节段，段木两侧砍好鱼鳞口后间隔5-8厘米平放穴内，把树枝菌种从瓶内掏出卡入鱼鳞口中，再在段木之间放入适量鲜树枝节，回填鲜砂土至平齐枝材，压实。将拌和好天麻种子的萌发菌种叶均匀撒播在枝材面上，盖一薄层鲜叶后，覆土10-15厘米，使穴顶高出地面。
应用实施例：
1)2008年7月，在昭通市彝良县小草坝林间，使用扩转培养的(XL-A0704)三级树枝菌种点培枝材，采用“三下窝”方法播种小草坝野生乌、绿天麻种子1080穴/袋，播种20个月后抽样检查，结果见下表。
2)2009年，利用本发明菌种首次规模化繁育乌天麻种11200袋获得成功，抽查结果预计在今年将收获天麻栽培中约10000斤以上，较当地传统方式提高育种效率约5-10倍。
Claims (3)
1.一种蜜环菌XL-A0704，其特征在于该菌株的分类命名为Armillaria sinapina，保藏登记号为：CGMCC No.3847。
2.权利要求1所述的蜜环菌XL-A0704的应用，其特征在于将XL-A0704纯菌株扩转成二级固体菌种，用二级固体菌种扩转培养三级瓶装树枝菌种，使用树枝菌种作引菌培育枝材或菌材供天麻栽培使用。
3.权利要求2所述的蜜环菌XL-A0704的应用，其特征在于7-8月份，选择适宜荒林地开挖成70厘米×50厘米×15-20厘米的播种穴，挖松捣平穴底，铺一薄层树叶，将径粗5-8厘米阔叶树枝材砍成60厘米节段，段木两侧砍好鱼鳞口后间隔5-8厘米平放穴内，把树枝菌种卡入鱼鳞口中，再在段木之间放入适量鲜树枝节，回填鲜砂土至平齐枝材，压实，将拌和好天麻种子的萌发菌种叶均匀撒播在枝材面上，盖一薄层鲜叶后，覆土10-15厘米，使穴顶高出地面。
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