CN102046006B - 用于红细胞病原体灭活的改进猝灭方法 - Google Patents

用于红细胞病原体灭活的改进猝灭方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102046006B
CN102046006B CN200980119812.5A CN200980119812A CN102046006B CN 102046006 B CN102046006 B CN 102046006B CN 200980119812 A CN200980119812 A CN 200980119812A CN 102046006 B CN102046006 B CN 102046006B
Authority
CN
China
Prior art keywords
blood cell
quencher
red blood
cell composition
composition
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN200980119812.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102046006A (zh
Inventor
N·穆夫蒂
A·埃里克森
A·诺思
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Cerus Corp
Original Assignee
Cerus Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Cerus Corp filed Critical Cerus Corp
Publication of CN102046006A publication Critical patent/CN102046006A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102046006B publication Critical patent/CN102046006B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/18—Erythrocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
    • A01N1/0215—Disinfecting agents, e.g. antimicrobials for preserving living parts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
    • A01N1/0226—Physiologically active agents, i.e. substances affecting physiological processes of cells and tissue to be preserved, e.g. anti-oxidants or nutrients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/34—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • A01N43/40—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom six-membered rings
    • A01N43/42—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom six-membered rings condensed with carbocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
    • A61L2/0005—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts
    • A61L2/0082—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts using chemical substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N2300/00—Combinations or mixtures of active ingredients covered by classes A01N27/00 - A01N65/48 with other active or formulation relevant ingredients, e.g. specific carrier materials or surfactants, covered by classes A01N25/00 - A01N65/48
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供了在提供合适的病原体灭活同时维持细胞存活力的条件下用病原体灭活化合物处理红细胞组合物的改进方法。还提供了降低红细胞脱水的方法以及处理过的红细胞组合物。

Description

用于红细胞病原体灭活的改进猝灭方法
相关申请的交叉参考 
本申请要求2008年4月9日提交的发明名称为“用于红细胞病原体灭活的猝灭方法”的美国临时申请号No.61/043,666和2008年8月7日提交的发明名称为“用于红细胞病原体灭活的猝灭方法”的美国临时申请号No.61/087,034的优先权利益。在此将这两篇申请的全部内容引入作为参考，如同以下全面陈述一样。 
发明领域
本发明的领域涉及使用于处理血液制品的反应性亲电子化合物猝灭以使可能的病原体污染物灭活的方法。特别地，使用升高浓度的亲核化合物，如硫醇，以使红细胞组合物中的反应性亲电子化合物猝灭，然后将浓度降低，以降低红细胞(RBC)脱水。 
发明背景 
通过血液制品和其它生物材料传播疾病仍然是严重的健康问题。尽管在供血者筛选和血液检测方面已经取得了显著进展，但是诸如乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)和人免疫缺陷病毒(HIV)这类病毒在检测过程中因病毒或病毒抗体的低水平而仍然可能逃脱血液制品中的检测。除病毒的危害外，目前还没有适当的在指定用于输血的血液中筛选非病毒微生物(如细菌或原生动物)存在的经许可的测试。还存在如下的风险：迄今未知的病原体可能在供血中很普遍并且呈现出疾病传播的威胁，正如在认识到HIV通过输血传播的风险前发生的情况。 
已经将化学试剂引入血液或血浆中，以在血液制品的临床使用前使病原体灭活。通常，对于几乎没有红细胞内含物的血液制品(如血 小板和血浆)，使用光化学活化的化合物，如补骨脂素。对于含有红细胞的血液制品，已经研发了无需光活化的用于病原体灭活的化合物。这些化合物通常具有与病原体，更具体地说与病原体核酸反应的亲电子基团。例如，美国专利US 5,055,485中描述了使用芳基二醇环氧化物使细胞和含蛋白组合物中的病毒失活。可以使用原位产生亲电子试剂的其它化合物。LoGrippo等评价了氮芥CH3-N(CH2CH2Cl)2在病毒灭活中的应用。LoGrippo等，Proceedings of the Sixth Congress of the International Society of Blood Transfusion(国际输血学会第六次大会记录)，Bibliotheca Haematologica(Hollander编辑)，1958，pp.225-230。更有意义的是，美国专利5,691,132；6,177,441；6,410,219；6,143,490和6,093,725中描述了使用具有核酸靶向成分以及与核酸反应的亲电子成分的化合物，以灭活病原体，在此将这些文献的公开内容引入作为参考。美国专利US 6,093,725和6,514,987中描述了类似的化合物，其中该化合物的核酸靶向成分通过可水解连接物与反应性亲电子成分连接，在此将这些文献的公开内容引入作为参考。US专利6,136,586和US 6,617,157中描述了使用乙烯亚胺寡聚体和相关化合物使病原体灭活，在此将这些文献的公开内容引入作为参考。这些乙烯亚胺衍生的化合物通常具有提供反应性亲电子成分的氮丙啶基团和提供化合物的核酸靶向的多胺成分。一般类别的带有与核酸反应的亲电子或类似基团的核酸靶向化合物用于使血液、血液制品和各种生物来源样品中的病原体灭活。 
在一定程度上关注的是，尽管设计这些化合物与目标核酸特异性地反应，但是它们仍然可能与血液中的其它成分反应，如蛋白质或细胞膜。这些副反应是不利的，并且可能导致不良作用，如可以由免疫系统识别的蛋白质和细胞膜修饰。当反复使用这类经处理的血液制品时，它们可能使受血者对经处理的血液制品产生免疫反应。美国专利6,270,952；6,709,810；和7,293,985中描述了使这类灭活病原体的化合物猝灭以便降低任何这类不良副反应水平的方法，在此将这 些文献的公开内容引入作为参考。美国专利公开No.2006/0115466描述了这些猝灭条件的改进，其解决了对抗病原体灭活化合物产生的免疫应答。然而，尽管猝灭有效性得到了提高，但在一些情况中，发现处理过的红细胞由于提高的细胞脱水而具有降低的寿命，如通过降低的渗透脆性和降低的自选血细胞比容所测量的。 
因此，对减少病原体灭活化合物的不利亲电子副反应同时保持病原体灭活化合物灭活有害病原体的能力并且没有不利地影响经处理血液制品的活力和寿命的方法存在着需求。具体地，对猝灭红细胞中的病原体灭活化合物的改进方法存在着需求。 
发明概述 
本发明提供了用于处理含有病原体灭活化合物的红细胞组合物的各种方法以及在提供合适的病原体灭活和降低不利副反应(如红细胞的改变)的条件下的猝灭剂，同时降低或最小化反作用，如降低的细胞脱水。在一些实施方案中，猝灭剂是用适量的碱中和的谷胱甘肽。在一些实施方案中，该方法涉及在病原体灭活之后降低谷胱甘肽的浓度。 
在一个方面中，本发明提供了处理红细胞组合物的方法，其包括：a)提供i)有效量的病原体灭活化合物以灭活病原体(如果存在)，其中病原体灭活化合物包括是或形成反应性亲电子基团的官能团，ii)有效量的包括硫醇基的猝灭剂，其中硫醇能够与病原体灭活化合物的反应性亲电子基团反应，和iii)包括红细胞的组合物；b)将病原体灭活化合物和猝灭剂与包括红细胞的组合物混合；和c)将混合物中的猝灭剂浓度充分降低至一定的量，该量可降低由混合物的贮藏引起的红细胞脱水的水平，该水平是相对于在猝灭剂的初始浓度下由混合物的贮藏引起的红细胞脱水的水平而言的。在这些实施方案的一些中，降低猝灭剂浓度包括除去在灭活和添加最终添加剂溶液(例如，在此所述的任何溶液，如SAG-M，AS-5或表2、3或4的任何溶液)的过程中所用的溶液。 
在一些实施方案中，步骤(a)进一步包括提供合适的碱，步骤(b)进一步包括将碱与包括红细胞的组合物混合，并且碱是足量的，以相对于无碱的混合物，降低混合物中病原体灭活化合物与红细胞的不利反应水平。在一些实施方案中，病原体灭活化合物与红细胞的不利反应是病原体灭活化合物对红细胞表面的改变。在一些实施方案中，步骤(a)进一步包括提供合适的碱，步骤(b)进一步包括将碱与包括红细胞的组合物混合，并且碱是足量的，以相对于无碱的混合物，将所得到混合物中的抗病原体灭活化合物抗体结合经处理红细胞组合物的水平降低至少约5％(或至少约10％，至少约25％，至少约50％，至少约75％，或至少约90％)。在一些实施方案中，在将病原体灭活化合物与红细胞组合物混合之前，同时，或之后不超过约30分钟时，将碱和猝灭剂与红细胞组合物混合。在一些实施方案中，在将碱或猝灭剂与红细胞组合物混合之前，将碱和猝灭剂混合在一起。在一些实施方案中，碱是NaOH。在一些实施方案中，碱是碱缓冲液。在一些实施方案中，碱包括约0.5至1.5当量的碱，其中当量意思为等同于混合物中猝灭剂摩尔量的摩尔量。在一些实施方案中，碱包括约0.75至1.25当量的碱。在一些实施方案中，碱包括约1当量的碱。在一些实施方案中，步骤(b)所得到的混合物在37℃下具有约6.0至7.5的pH。在一些实施方案中，pH为约6.5至7.1。在一些实施方案中，pH为约6.8或6.9。 
在一些实施方案中，猝灭剂包括半胱氨酸或半胱氨酸衍生物。在一些实施方案中，猝灭剂是谷胱甘肽或其药物学上可接受的盐。在一些实施方案中，步骤(b)所得到混合物中的猝灭剂浓度为高于2mM。在一些实施方案中，猝灭剂浓度为约5mM至约30mM。在一些实施方案中，猝灭剂浓度为约15mM至约25mM。在一些实施方案中，猝灭剂浓度为约20mM。 
在一些实施方案中，步骤(c)中的降低猝灭剂浓度包括将混合物离心，接着除去上清液。在一些实施方案中，步骤(c)包括大小排阻分离。在一些实施方案中，步骤(c)所得到混合物中的猝灭剂为低于 约10mM的浓度。在一些实施方案中，猝灭剂浓度为低于约8mM。在一些实施方案中，猝灭剂浓度为低于约6mM(或低于约4mM，或低于约2mM)。在一些实施方案中，混合物的贮藏是混合物在4℃下贮藏超过10天。在一些实施方案中，混合物的贮藏是混合物在4℃下贮藏超过42天(或28天)。在一些实施方案中，该方法包括添加添加剂溶液(例如，表2中所述的任何添加剂溶液，和/或包括氯化钠、腺嘌呤、葡萄糖、磷酸盐、鸟苷、柠檬酸盐和/或甘露醇的添加剂溶液)。在一些实施方案中，将混合物贮藏在添加剂溶液中(例如，表2中所述的任何添加剂溶液，和/或包括氯化钠、腺嘌呤、葡萄糖、磷酸盐、鸟苷、柠檬酸盐和/或甘露醇的添加剂溶液)。在一些实施方案中，该方法进一步包括用添加剂溶液(例如，表2中所述的任何添加剂溶液，和/或包括氯化钠、腺嘌呤、葡萄糖、磷酸盐、鸟苷、柠檬酸盐和/或甘露醇的添加剂溶液)替代处理溶液(例如，表2、3或4中所述的任何溶液和/或包括氯化钠、腺嘌呤、葡萄糖、磷酸盐、鸟苷、柠檬酸盐和/或甘露醇的溶液)。在一些实施方案中，在降低猝灭剂浓度之前组合物的氯化物浓度为低于约100mM(或约75mM)。在一些实施方案中，在降低猝灭剂浓度和/或添加添加剂溶液之后组合物的氯化物浓度为高于约100mM(或约125mM)。 
在上述每一种方法的一些实施方案中，以及在此所述的其他方法，官能团是芥子，芥子中间体或芥子等价物。在一些实施方案中，官能团是或能够形成吖丙啶鎓离子。在一些实施方案中，反应性亲电子基团能够与核酸反应。在一些实施方案中，病原体灭活化合物进一步包括核酸结合配体。在一些实施方案中，核酸结合配体是嵌入剂。在一些实施方案中，嵌入剂是吖啶。在一些实施方案中，病原体灭活化合物包括易分裂的连接物，其连接官能团和核酸结合配体。在一些实施方案中，病原体灭活化合物是β-丙氨酸、N-(吖啶-9-基)、2-[双(2-氯乙基)氨基]乙酯。在一些实施方案中，步骤(b)所得到混合物中的病原体灭活化合物的浓度为约0.1μM至约5mM。在一些实施方案中，浓度足以灭活红细胞组合物中至少1log的病原体，如果存在的话。 在一些实施方案中，浓度足以灭活至少3log的病原体。在一些实施方案中，步骤(b)和步骤(c)之间的时间为约1至48小时。在一些实施方案中，时间为约10至30小时。在一些实施方案中，时间为约15至25小时。在一些实施方案中，该处理灭活红细胞组合物中至少1log的病原体污染物，如果存在的话。在一些实施方案中，该处理灭活红细胞组合物中至少3log。在一些实施方案中，该方法进一步包括降低混合物中病原体灭活化合物的浓度的步骤。在一些实施方案中，降低混合物中猝灭剂浓度和降低混合物中病原体灭活化合物浓度的步骤同时进行。 
在上述任一种方法以及在此所述的其他方法的一些实施例中，在步骤(b)后的20小时时，与在相同条件下来自相同方法但没有使用碱的红细胞的ABC值相比，所得到混合物的红细胞(RBC)具有低65％的抗病原体灭活化合物抗体结合能力(ABC)。在一些实施方案中，RBC具有低于约50,000的平均ABC。在一些实施方案中，RBC具有低于约40,000的平均ABC。在一些实施方案中，RBC具有约25,000至70,000的平均ABC。在一些实施方案中，RBC具有约35,000至45,000的平均ABC。在一些实施方案中，步骤(c)后所得到混合物的RBC具有低于1％的溶血现象。在一些实施方案中，在步骤(c)后在4℃下贮藏42天(或28天)时，RBC具有低于1％的溶血现象。在一些实施方案中，在步骤(c)后RBC具有高于50％的收集细胞体积(PCV)。在一些实施方案中，在步骤(c)后在4℃下贮藏42天(或28天)时，RBC具有高于50％的PCV。在一些实施方案中，在步骤(c)后在4℃下贮藏42天(或28天)后，所得到混合物的RBC具有高于140(或150)的平均红细胞脆性值。在一些实施方案中，病原体灭活化合物的含量没有降低和/或病原体灭活化合物没有接触化合物吸收装置(CAD)。 
在其他方面中，本发明提供了降低红细胞脱水的方法，其包括：a)包括以下物质的混合物的红细胞组合物：i)猝灭剂，其中猝灭剂能够与病原体灭活化合物反应，和ii)红细胞；和b)将混合物中的猝灭剂浓度(和任选病原体灭活化合物和/或其副产物的浓度)充分降低至 一定的量，该量可降低由混合物的贮藏引起的红细胞脱水的水平，该水平是相对于在猝灭剂的初始浓度下由混合物的贮藏引起的红细胞脱水的水平而言的。在一些实施方案中，猝灭剂包括半胱氨酸或半胱氨酸衍生物。在一些实施方案中，猝灭剂是谷胱甘肽或其药物学上可接受的盐。在一些实施方案中，步骤(b)所得到混合物中的猝灭剂浓度为低于约10mM。在一些实施方案中，猝灭剂浓度为低于约8mM。在一些实施方案中，猝灭剂浓度为低于约6mM，或低于约2mM。在一些实施方案中，步骤(b)后所得到混合物的红细胞(RBC)具有低于1％的溶血现象。在一些实施方案中，在步骤(b)后在4℃下贮藏42天(或28天)时，RBC具有低于1％的溶血现象。在一些实施方案中，在步骤(b)后所得到混合物的RBC具有高于50％的收集细胞体积(PCV)。在一些实施方案中，在步骤(b)后在4℃下贮藏42天(或28天)时，所得到混合物的RBC具有高于50％的PCV。在一些实施方案中，在步骤(b)后在4℃下贮藏42天(或28天)时后，所得到混合物的RBC具有高于140(或150)的平均红细胞脆性值。在一些实施方案中，混合物的贮藏是混合物在4℃下贮藏超过10天。在一些实施方案中，混合物的贮藏是在4℃下贮藏超过42天(或28天)。在一些实施方案中，病原体灭活化合物的含量没有降低和/或病原体灭活化合物没有接触化合物吸收装置(CAD)。 
提供了通过上述每一种方法产生的红细胞(RBC)。还提供了通过上述每一种方法可制备的RBC组合物。 
在进一步的方面中，本发明提供了一种组合物，其包括a)红细胞，其中红细胞已经与病原体灭活化合物的亲电子基团发生了共价反应；和b)猝灭剂，其包括能够与病原体灭活化合物反应的硫醇基团；其中组合物在4℃下贮藏至多42天(或28天)后适于灌输于人。在一些实施方案中，灭活了至少1log的病原体，如果存在的话。在一些实施方案中，灭活至少3log。在一些实施方案中，亲电子基团是芥子，芥子中间体或芥子等价物。在一些实施方案中，亲电子基团是或能够形成吖丙啶鎓离子。在一些实施方案中，亲电子基团能够与核 酸反应。在一些实施方案中，亲电子基团与红细胞的细胞表面共价反应。在一些实施方案中，病原体灭活化合物进一步包括核酸结合配体。在一些实施方案中，核酸结合配体是嵌入剂。在一些实施方案中，嵌入剂是吖啶。在一些实施方案中，病原体灭活化合物包括易分裂的连接物，其连接亲电子基团和核酸结合配体。在一些实施方案中，病原体灭活化合物是β-丙氨酸、N-(吖啶-9-基)、2-[双(2-氯乙基)氨基]乙酯。在一些实施方案中，猝灭剂包括半胱氨酸或半胱氨酸衍生物。在一些实施方案中，猝灭剂是谷胱甘肽或其药物学上可接受的盐。在一些实施方案中，猝灭剂浓度足够低，以避免或最小化贮藏过程中的红细胞脱水。在一些实施方案中，猝灭剂浓度为低于约10mM。在一些实施方案中，猝灭剂浓度为低于约8mM。在一些实施方案中，猝灭剂浓度为低于约6mM，或低于约2mM。在一些实施方案中，红细胞(RBC)具有高于55％的收集细胞体积(PCV)。在一些实施方案中，RBC具有高于60％的PCV。在一些实施方案中，RBC具有低于约50,000的平均抗体结合能力(ABC)。在一些实施方案中，RBC具有低于约40,000的平均ABC。在一些实施方案中，RBC具有约25,000至60,000的平均ABC。在一些实施方案中，RBC具有约25,000至70,000的平均ABC。在一些实施方案中，RBC具有约35,000至45,000的平均ABC。在一些实施方案中，组合物进一步包括添加剂溶液(例如，表2中所述的任何添加剂溶液，和/或包括氯化钠、腺嘌呤、葡萄糖、磷酸盐、鸟苷、柠檬酸盐和/或甘露醇的添加剂溶液)。在一些实施方案中，添加剂溶液和/或组合物的氯化物浓度高于约100mM(或约125mM)。 
在其他方面中，本发明提供了将红细胞输入个体中的方法，其包括：a)提供上述任一种红细胞组合物或通过在此所述的任一种方法制得的红细胞组合物，和b)将红细胞组合物输入个体中。 
在一个方面中，本发明提供了处理红细胞组合物的方法，其包括：(a)混合以下物质：(i)包括官能团的病原体灭活化合物(例如，有效量的病原体灭活化合物，以灭活病原体，如果存在的话)，官能团是反应性亲电子基团；(ii)包括硫醇基团的猝灭剂(例如，有效 量的猝灭剂)，其中硫醇基能够与病原体灭活化合物的反应性亲电子基团反应；和(iii)包括红细胞的组合物；和(b)将混合物中的猝灭剂浓度充分降低至一定的量，该量可降低由混合物的贮藏引起的红细胞脱水的水平，该水平是相对于在猝灭剂的初始浓度下由混合物的贮藏引起的红细胞脱水的水平而言的。在这些实施方案的一些中，降低猝灭剂浓度包括除去在灭活和添加最终添加剂溶液(例如，在此所述的任何溶液，如SAG-M，AS-5或表2、3或4的任何溶液)的过程中所用的溶液。该方法包括以上和/或在此所示实施方案中的任何一个或多个。 
在一些实施方案中，该方法进一步包括将合适的碱与包括红细胞的组合物混合，并且碱是足量的，以相对于无碱的混合物，降低混合物中病原体灭活化合物与红细胞的不利反应。在一些实施方案中，病原体灭活化合物与红细胞的不利反应是由病原体灭活化合物引起的红细胞表面的改变。在一些实施方案中，该方法进一步包括将合适的碱与包括红细胞的组合物混合，并且碱是足量的，以相对于无碱的混合物，将所得到混合物中的抗病原体灭活化合物抗体结合经处理红细胞组合物的水平降低至少约5％(或至少约10％，至少约25％，至少约50％，至少约75％，或至少约90％)。 
在一个方面中，本发明提供了降低红细胞组合物脱水的方法，其中组合物是包括能够与病原体灭活化合物反应的猝灭剂和红细胞的混合物；该方法包括，将混合物中的猝灭剂浓度充分降低至一定的量，该量可降低由混合物的贮藏引起的红细胞脱水的水平，该水平是相对于在猝灭剂的初始浓度下由混合物的贮藏引起的红细胞脱水的水平而言的。 
在另一个方面中，本发明提供了红细胞灌输的方法，包括将在此所述的红细胞组合物输入个体中。 
附图简述 
图1显示了实施例6中所述的，在最初猝灭剂定量给予后在各种 碱水平下的红细胞渗透脆性。 
图2显示了在培养20小时时，在各种碱水平下的红细胞密度。 
图3显示了在培养并贮藏36天后，在各种碱水平下的红细胞密度。 
图4显示了使用和未用降低猝灭剂浓度(即，使用/未用交换步骤)，在培养并贮藏36天后，红细胞的渗透脆性。 
图5显示了与适度初始猝灭剂浓度(未用交换步骤)相比，使用改变初始猝灭剂浓度(使用交换步骤)，在培养并贮藏42天后，红细胞的渗透脆性。 
图6显示了使用和未用病原体灭活化合物，在培养和贮藏36天后，红细胞的渗透脆性。 
图7显示了使用本发明方法的几种红细胞制剂的抗体结合能力(ABC)值。 
发明详述 
本发明提供了处理红细胞组合物以灭活可能存在的病原体的方法，同时降低或最小化不利的副反应(如导致不利免疫应答的红细胞改变)和同时降低或最小化处理之中或之后对细胞存活力(例如，降低的渗透脆性和/或增加的脱水)和/或寿命的不利作用。我们发现了在病原体灭活处理过程中适当控制pH并结合适量的猝灭剂可以降低用病原体灭活化合物处理的红细胞的初始脱水。然后在该处理后，降低初始猝灭剂浓度，以提供能够进行细胞贮藏而渗透脆性没有明显变化的健康病原体灭活红细胞。这些方法特别适用于制备其中对于临床使用已经将病原体灭活的红细胞组合物，尤其是在临床使用前将组合物贮藏一段时间时。 
因此，在一个方面中，通过(1)将病原体灭活化合物和猝灭剂与包括红细胞的组合物混合；和(2)充分降低猝灭剂的浓度，以降低由混合物的贮藏引起的红细胞脱水的水平，该水平是相对于在猝灭剂的初始浓度下由混合物的贮藏引起的红细胞脱水的水平而言的，本发明提供了处理包括病原体灭活化合物和猝灭剂的红细胞组合物的方法。 
在其他方面中，本发明提供了降低红细胞脱水和/或提高渗透脆性的方法，以及将红细胞输入人体中的方法。还提供了处理过的红细胞组合物。 
红细胞 
本发明的红细胞组合物包括，但不限于，包含红细胞的任何血液制品(例如，人血)，其中血液制品提供，或进行加工来提供，适于在人、哺乳动物和/或脊椎动物体内使用的红细胞，如用于灌输。红细胞组合物包括，例如，全血和红细胞浓缩物，如压积红细胞(pRBC；例如，具有增加的血细胞比容的红细胞和/或不含添加剂溶液的红细胞)。红细胞组合物可以通过它们的血细胞比容或收集细胞体积(PCV)来进行描述，血细胞比容或收集细胞体积是组合物中红细胞浓度的测量。红细胞组合物可以具有约1至100％范围的血细胞比容，更优选约10至90％，以及约35至80％，或约40至70％。这样的红细胞组合物可以包括化学物质，如病原体灭活化合物和猝灭剂。它们还可以包括缓冲剂和其他溶液，如红细胞添加剂溶液(例如，在此所述的任何溶液，如SAG-M，AS-5或表2、3或4的任何溶液)，包括盐或缓冲溶液。在一些实施方案中，在用于在此所述的处理方法之前，在此所述的红细胞组合物是具有约70至90％，或约75至85％，或约80％范围的血细胞比容的压积红细胞。在一些实施方案中，在用于在此所述的处理方法之前和/或之中，红细胞组合物是具有约50至70％，或约55至65％，或约60％范围的血细胞比容的非压积红细胞。在一些实施方案中，在用于在此所述的处理方法之前和/或之中，用稀释溶液稀释红细胞组合物，并且其具有约30至50％，或约35至45％，或约40％范围的血细胞比容。在一些实施方案中，在用于在此所述的处理方法之前，已经将在此所述的红细胞组合物白细胞降低。在一些实施方案中，没有将红细胞组合物的白细胞降低。可以按照在此公开的来处理将接触或引入活的人、哺乳动物或脊椎动物体内的任何红细胞组合物，其中这样的接触由于污染的病原体携带了传播疾病的风险。 
血液病原体 
如果存在，在本发明方法中灭活的病原体污染物包括能够在人、其他哺乳动物或脊椎动物中引起疾病的任何含核酸物质。病原体可以是单细胞的或多细胞的。病原体的实例是细菌、病毒、原生动物、真菌、酵母、霉菌和支原体，这些在人、其他哺乳动物或脊椎动物中引起疾病。病原体的遗传物质可以是DNA或RNA，并且遗传物质可以作为单链或双链核酸存在。表1列出了病毒的实例，并且不是以任何方式来限制本发明。 
表1.病毒的非限制性实例 
  科：   病毒：
  腺病毒科(Adeno)   2型腺病毒
    犬肝炎
  嵌沙样病毒科(Arena)   Pichinde
    拉沙
  布尼病毒科(Bunya)   Turlock
    加利福尼亚脑炎
  疱疹病毒科(Herpes)   1型单纯疱疹
    2型单纯疱疹
    巨细胞病毒
    伪狂犬病
  正黏病毒(Orothomyxo)   流感
  乳多空病毒科(Papova)   SV-40
  副黏病毒科(Paramyxo)   麻疹
    流行性腮腺炎
    2和3型副流感
  小RNA病毒科(Picorna)   1和2型脊髓灰质炎
  科：   病毒：
    科萨奇A-9
    Echo 11
  痘病毒科(Pox)   痘苗
    禽痘
  呼肠病毒科(Reo)   蓝舌
    科罗拉多蜱热
  逆转录病毒科(Retro)   HIV
    禽类肉瘤
    鼠肉瘤
    鼠白血病
  弹状病毒科(Rhabdo)   疱疹性口腔炎病毒
  披膜病毒科(Toga)   西方马脑炎
    2型登革热
    4型登革热
    圣路易斯脑炎
  嗜肝DNA病毒科(Hepadna)   乙型肝炎
  噬菌体   λ
    R17
    T2
  (立克次氏体)   R.akari(立克次氏体痘)
除了灭活可能的病原体污染物，本发明的方法还可以灭活红细胞组合物中存在的白细胞。使用白细胞降低方法来优先从确定用于灌输的红细胞组合物中除去大部分白细胞，因为它们可能在接受者体内导致不利的免疫应答。然而，不是所有血液是白细胞降低的，或白细胞降低方法没有除去全部的白细胞。因此，通过在此所述的本发明的方法的任何残余白细胞的灭活可以进一步降低这些免疫应答的风险。 
病原体灭活化合物 
可以通过将红细胞组合物中的病原体接触病原体灭活化合物来实现红细胞组合物中病原体的灭活。在在此所述的任一个实施方案中，病原体灭活化合物(例如，在此所述的S-303)可以以有效量存在(例如，灭活病原体的有效量，如足以灭活例如至少1log，2log或3log红细胞组合物中的病原体的有效量，如果存在的话)。本发明的方法可以使用的病原体灭活化合物包括包含官能团是或能够形成和已经例如在原位形成反应性基团(如亲电子基团)的化合物。在一些情况中，本发明的病原体灭活化合物不需要光激活成反应性的。例如，官能团可以是芥子基团，芥子基团中间产物，芥子基团等价物，环氧化物，甲醛或甲醛合成纤维。这样的官能团能够在原位形成反应性基团，如亲电子氮丙啶、吖丙啶鎓、硫杂丙环或thiiranium离子。芥子基团可以是单-或双-(卤代乙基)胺基或单(卤代乙基)硫化物基团。芥子等价物是通过与芥子相似的机理反应的基团，例如，通过形成反应性中间产物，如吖丙啶鎓和氮丙啶基团，或硫杂丙环和thiiranium基团。实例包括氮丙啶衍生物，单或双-(甲磺酰乙基)胺基，单-(甲磺酰乙基)硫化物基团，单或双-(甲苯磺酰乙基)胺基和单-(甲苯磺酰乙基)硫化物基团。甲醛合成纤维是分解成甲醛的任何化合物，其包括羟胺，如羟甲基甘氨酸。病原体灭活化合物的反应性基团能够与病原体的核酸反应，例如，与核酸上的亲核基团反应。反应性基团还可以包括将化合物靶向核酸的成分，如锚定部分。锚定部分包括能够非共价结合核酸生物聚合物(如DNA或RNA)的部分，并且也称为核酸结合配体，核酸结合基团或核酸结合部分。这些化合物的实例在美国专利5,691,132，6,410,219，6,136,586，6,617,157和6,709,810中有描述，在此将其引入作为参考。可以通过本发明的方法猝灭的另一类病原体灭活化合物包括通过可水解连接物连接核酸结合基团的上述反应性基团，如美国专利6,514,987中所述的，在此引入作为参考。病原体灭活化合物的锚定部位具有对核酸的亲和性。该亲和性可能是由于 几种非共价结合核酸方式中任一种引起的，这些方式包括但不限于，插入、小沟结合、大沟结合和静电结合(例如，磷酸酯主链结合)。该亲和性还可能是由于混合的结合模式引起的(例如，插入和小沟结合)。结合可以是序列特异性的(即，对于一个或多个特定的核酸序列超过其他核酸序列的提高结合亲和性)或非序列特异性的。这些核酸结合部分的详细实例可以在上述专利中找到。 
在在此所述的方法、组合物和药盒各自的一些实施方案中，病原体灭活化合物可以包括是或形成与选定猝灭剂的亲核物质反应的反应性亲电子基团的官能团。在一些实施方案中，病原体灭活基团包括核酸结合配体和是或形成亲电子基团的官能团。 
用于本发明的合适病原体灭活化合物的具体实例是β-丙氨酸、N-(吖啶-9-基)、2-[双(2-氯乙基)氨基]乙酯(或者在此也称为“S-303”)，其结构如下，包括其盐。 
在一些实施方案中，与红细胞组合物一起的混合物中的病原体灭活化合物(如S-303)的浓度为约0.05mM至4mM，约0.05mM至2mM，约0.05mM至0.5mM，约0.1mM至0.3mM，或约0.2mM。在一些实施方案中，一旦两种成分与红细胞组合物混合，猝灭剂与病原体灭活化合物的摩尔比为约10∶1至约400∶1，还有约10∶1至约200∶1，还有约20∶1至约200∶1，还有约50∶1至约200∶1，还有约100∶1。 
猝灭剂 
打算将本发明方法中所用的猝灭剂用来降低用于灭活病原体的反应性亲电子物质的不利副反应(例如，病原体灭活化合物与RBC表面的结合，其可能导致不希望的免疫应答)。在在此所述的任一个实施 方案中，猝灭剂(例如，在此所述的谷胱甘肽)可以以有效量存在(例如，降低不利副反应的有效量，如在此所述的含量)。合适的猝灭剂包括能够与病原体灭活化合物的亲电子基团反应的亲核基团。非限制性实例在美国专利6,709,810中有详细描述，在此将其全部引入作为参考。在一些实施方案中，猝灭剂能够明显降低红细胞组合物中的不利副反应，同时使病原体灭活化合物充分灭活可能污染红细胞组合物的病原体。在一些实施方案中，本发明的改进方法在提供不利副反应(例如，病原体灭活化合物的结合)的最佳降低并结合病原体充分灭活而没有明显改变(例如，没有降低)细胞渗透脆性和没有明显改变(例如，没有提高)脱水的条件下，提供了有效量的猝灭剂，并结合有效量的病原体灭活化合物。可以降低各种不利副反应，如病原体灭活化合物与蛋白质和/或红细胞成分的反应。在一些实施方案中，猝灭剂提供了红细胞改变的最佳降低，如IgG与红细胞的结合或病原体灭活化合物与红细胞的结合。尽管本发明的方法涉及红细胞组合物的体外处理，在引入个体体内时，一些猝灭剂仍然保留在组合物中。因此，在一些实施方案中，本发明的猝灭剂是适于灌输的。合适的猝灭剂包括，但不限于，包括硫醇基团的化合物，如包括氨基酸半胱氨酸或合适的半胱氨酸衍生物(如N-乙酰半胱氨酸)的猝灭剂。这些猝灭剂的实例包括半胱氨酸和包括至少一个半胱氨酸的肽，如谷胱甘肽。在一些实施方案中，合适的猝灭剂包括可以在原位形成硫醇基团的半胱氨酸衍生物，使用或未用其他的化学物质或添加的酶，如S-乙酰半胱氨酸或其他合适的硫醇衍生的半胱氨酸前药，或包含S-乙酰半胱氨酸或其他合适的硫醇衍生的半胱氨酸前药的肽。合适的半胱氨酸衍生物是其包含或能够在原位形成半胱氨酰硫醇的那些，半胱氨酰硫醇能够与病原体灭活化合物的亲电子基团反应。 
在一些实施方案中，猝灭剂是2至10个氨基酸的肽，其中至少一个氨基酸是半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、S-乙酰半胱氨酸或其他合适的半胱氨酸衍生物。在一些实施方案中，猝灭剂是至少3个氨基酸的肽，如约3-10个氨基酸，还有约3-6个氨基酸，其中至少一个氨基酸 是半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、S-乙酰半胱氨酸或其他合适的半胱氨酸衍生物。在一些实施方案中，猝灭剂是至少3个氨基酸的肽，如约3-10个氨基酸，还有约3-6个氨基酸，其中至少一个氨基酸是半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、S-乙酰半胱氨酸或其他合适的半胱氨酸衍生物，还有其中至少2个或至少3个氨基酸是半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、S-乙酰半胱氨酸或其他合适的半胱氨酸衍生物。 
在优选的实施方案中，猝灭剂是中性谷胱甘肽(也称为L-谷胱甘肽和γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酰-甘氨酸)。谷胱甘肽具有许多使其作为猝灭剂特别有用的特性。其通常存在于所有细胞类型的。不认为能够被动渗透至病原体中，如通过细菌和脂质包膜病毒的细胞膜或脂质层，或通过非包膜病毒的病毒衣壳。在大约中性的pH下，谷胱甘肽是带电的，并且在主动运输不存在下，没有任何程度地渗透脂质双层。这与基本上未受谷胱甘肽影响的脂质包膜病毒(如HIV和VSV)的灭活是相一致的，包括使用高于2mM的中性谷胱甘肽浓度。谷胱甘肽的使用对例如小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)和粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)的灭活具有一定的效果。然而，这可以通过使用有效量的中性谷胱甘肽和病原体灭活化合物来控制。因此，提供了优选的猝灭方法，其中将红细胞组合物受到病毒或细菌病原体的污染灭活至少2log，优选至少3log。在一些实施方案中，表皮葡萄球菌可以灭活至多至少3log，还有约4log，或约5log，VSV可以灭活至多至少4log，还有约5log，或约6log。在一些实施方案中，用S-303灭活表皮葡萄球菌在用2mM酸性谷胱甘肽和0.2mM S-303灭活的相似组合物的约3log内，还有约2log，或约1log。在一些实施方案中，用S-303灭活VSV在用2mM酸性谷胱甘肽和0.2mM S-303灭活的相似组合物的约2log内，还有约1log，或基本上相等。在合适的条件下，如本发明所述的，谷胱甘肽与红细胞的体外贮藏也是相适的，并且所得到的红细胞组合物适于体内引入。 
在一些实施方案中，猝灭剂是还原形式的谷胱甘肽。也可以使用 谷胱甘肽二硫化物，这是谷胱甘肽的氧化形式，只要在将溶液加入包含红细胞组合物的混合物之前，谷胱甘肽二硫化物在溶液中充分还原，或在加入包含红细胞组合物的混合物之后，充分还原。 
在一些实施方案中，猝灭剂是谷胱甘肽衍生物，如谷胱甘肽单酰基酯或二酰基酯，其中烷基是具有1至10个碳原子的直链或支链基团。烷基的特定实例包括，但不限于，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔-丁基、戊基、异戊基、新戊基、叔-戊基、1-甲基丁基、己基、异己基、2-甲基戊基、1-乙基丁基、庚基、辛基、壬基和癸基。例如，谷胱甘肽衍生物的非限制性实例包括谷胱甘肽甲酯，谷胱甘肽单乙酯和谷胱甘肽单异丙酯。在一些实施方案中，使用了谷胱甘肽氧化的二乙酯(GSSG-(甘氨酰)-二乙基-酯)。在一些实施方案中，在加入红细胞组合物后，谷胱甘肽的硫酯水解形成硫醇。 
可以理解，在一些实施方案中，将提供游离酸或碱形式的猝灭剂，而在其他实施方案中，将提供盐形式的猝灭剂。如果猝灭剂是盐形式的，盐优选是药物学上可接受的盐。化合物的药物学上可接受的盐(水-或油-可溶或可分散产品的形式)包括常规的无毒盐或季胺盐，其是例如从无机或有机酸或碱形成。这些酸式加成盐的实例包括醋酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一酸盐。碱式盐包括：铵盐；碱金属盐，诸如钠和钾盐；碱土金属盐，诸如钙和镁盐；与有机碱形成的盐，诸如二环己基胺盐、N-甲基-D-葡糖胺，以及与氨基酸，如精氨酸、赖氨酸等形成的盐。此外，含碱性氮的基团可以由如下这类试剂季铵化：如烷基卤化物，诸如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸盐，如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸盐；长链卤化物，如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂酰基的氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基卤，如苄基溴和苯乙基溴等。其它药物学上可接受的盐包括乙醇化硫酸盐和硫酸盐。
例如，在一些实施方案中，猝灭剂是从谷胱甘肽形成的药物学上可接受的盐形式。在一些实施方案中，猝灭剂是从谷胱甘肽和一种或多种阳离子形成的药物学上可接受盐的形式，阳离子如钠、铝、钙、锂、镁、锌或四甲基铵。在一些实施方案中，猝灭剂是谷胱甘肽(还原的)并且以谷胱甘肽单钠盐的形式来提供(例如，可从BiomedicaFoscama，意大利获得)。在一些其他实施方案中，谷胱甘肽(还原的)是以谷胱甘肽盐酸盐形式来提供的。在一些其他实施方案中，谷胱甘肽是以谷胱甘肽(还原的)二钠盐的形式来提供的。在进一步的实施方案中，使用了谷胱甘肽单烷基酯硫酸盐。在一些实施方案中，谷胱甘肽是以谷胱甘肽氧化二钠盐的形式来提供的。 
灭活和猝灭的方法 
本发明的方法涉及在如下的条件下将红细胞组合物与病原体灭活化合物和猝灭剂的混合，在该条件中，组合物与病原体灭活化合物和猝灭剂混合时，所得到组合物的pH在合适的范围内，以提供适当的病原体灭活和不利副反应的降低(如红细胞的改变)，而对处理过的血液制品的活力(例如，渗透脆性和脱水)和/或寿命具有有限的或没有影响。此外，本发明描述了在病原体灭活一段时间后降低红细胞组合物中的猝灭剂浓度，以帮助维持贮藏过程中红细胞的活力和寿命。如在此所述的，添加剂溶液还可以用于贮藏过程中的红细胞，并可以用来替代病原体灭活过程中所用的处理溶液和/或稀释溶液。 
改进的方法包括几个对于猝灭是重要的特征。第一个特征是硫醇基团，或其他合适的亲核基团。第二个是溶液pH的调节。通过合适地调节溶液的pH可以提供一定水平的猝灭。因此，本发明的猝灭剂给包含红细胞的组合物提供了一些缓冲能力，其中缓冲能力自身提供了改 进的猝灭。例如，使用半胱氨酸类似物(如甲硫氨酸)作为猝灭剂，适当调节以在红细胞组合物中提供合适的pH改变时，将导致一定水平的病原体灭活化合物与红细胞结合的猝灭。因为甲硫氨酸中的硫源自不是亲核的，因此甲硫氨酸没有提供任何猝灭，而是提供了溶液所需的pH。因此，pH调节和硫醇基团的结合提供了改进的猝灭。pH的适当调节和碱等价物也可以降低灭活阶段过程中的红细胞脱水水平。在一些实施方案中，对提供改进猝灭可能重要的第三个特征是基本上没有渗透病原体(病毒和细菌)内部的优选猝灭剂的选择。这些猝灭剂在胞外环境中提供了合适的猝灭，其中发生了有害的反应，如结合红细胞表面，一旦渗透病原体的内部，病原体灭活化合物没有另外的猝灭。最后，本发明的改进猝灭方法包括在灭活后降低猝灭剂浓度，并且在一些情况中，加入用于贮藏的添加剂溶液。已经显示出将猝灭剂的整体浓度降至合适的水平时，红细胞在贮藏过程中具有提高的寿命和降低的脱水水平。 
在一个方面中，本发明提供了处理红细胞组合物的方法，其包括：a)提供i)包括是或形成反应性亲电子基团的官能团的病原体灭活化合物(例如，有效量的病原体灭活化合物，以灭活病原体，如果存在的话)，ii)包括硫醇基团的猝灭剂(例如，有效量的如在此所述的猝灭剂)，其中硫醇基能够与病原体灭活化合物的反应性亲电子基团反应；和iii)包括红细胞的组合物；和b)将病原体灭活化合物和猝灭剂与包含红细胞的组合物混合；和c)将混合物中的猝灭剂浓度充分降低至一定的量，该量可降低由混合物的贮藏引起的红细胞脱水的水平，该水平是相对于在猝灭剂的初始浓度下由混合物的贮藏引起的红细胞脱水的水平而言的。在一些实施方案中，步骤(a)进一步包括提供合适的碱，步骤(b)进一步包括将碱与包含红细胞的组合物混合，并且碱是足量的，以相对于无碱的混合物，降低混合物中病原体灭活化合物与红细胞的不利反应水平。在一些实施方案中，病原体灭活化合物与红细胞的不利反应是病原体灭活化合物对红细胞表面的改变。在一些实施方案中，步骤(a)进一步包括提供合适的碱，步骤(b) 进一步包括将碱与包括红细胞的组合物混合，并且碱是足量的，以相对于无碱的混合物，将所得到混合物中的抗病原体灭活化合物抗体结合经处理红细胞组合物的水平降低至少约5％(或至少约10％，至少约25％，至少约50％，至少约75％，或至少约90％)。在一些实施方案中，混合物的贮藏是在4℃或室温下超过，等同于或低于7、10、14、21、28、35或42天的贮藏。在一些实施方案中，将混合物贮藏在添加剂溶液中(例如，表2中所述的任何添加剂溶液，和/或包含氯化钠、腺嘌呤、葡萄糖、磷酸盐、鸟苷、柠檬酸盐和/或甘露醇的添加剂溶液)。在一些实施方案中，该方法进一步包括用添加剂溶液(例如，表2中所述的任何添加剂溶液，和/或包含氯化钠、腺嘌呤、葡萄糖、磷酸盐、鸟苷、柠檬酸盐和/或甘露醇的添加剂溶液)替代处理过程中所用的溶液。 
在其他方面中，本发明提供了降低红细胞退水的方法，其包括：a)提供红细胞组合物，其包含i)猝灭剂，其中猝灭剂能够与病原体灭活化合物反应，和ii)红细胞；和b)将混合物中的猝灭剂浓度充分降低至一定的量，该量可降低由混合物的贮藏引起的红细胞脱水的水平，该水平是相对于在猝灭剂的初始浓度下由混合物的贮藏引起的红细胞脱水的水平而言的。在一些实施方案中，混合物的贮藏是在4℃或室温下超过，等同于或低于7、10、14、21、28、35或42天的贮藏。在一些实施方案中，该方法进一步包括在贮藏前添加添加剂溶液(例如，表2中所述的任何添加剂溶液，和/或包含氯化钠、腺嘌呤、葡萄糖、磷酸盐、鸟苷、柠檬酸盐和/或甘露醇的添加剂溶液)。 
可以在将病原体灭活化合物加入红细胞组合物之前、同时或之后，将在此所述方法中所用的猝灭剂和/或添加的碱(或中和猝灭剂)与红细胞组合物混合。如果在将病原体灭活溶液与红细胞组合物混合之后，将猝灭剂和碱(或中和猝灭剂)与红细胞组合物混合，优选在显著量的病原体灭活化合物与红细胞的副反应发生之前，将猝灭剂和/或碱(或中和猝灭剂)加入红细胞组合物中，使得可以获得不利副反应的恰当猝灭。在一些实施方案中，将病原体灭活化合物与红细胞组合物 混合后约一小时内，约30分钟内，约20分钟内，约10分钟内，约5分钟内，约2分钟内或约1分钟内，将猝灭剂和/或碱(或中和猝灭剂)与红细胞组合物混合。在一些实施方案中，在病原体灭活化合物的同时，将猝灭剂和碱与红细胞组合物混合。 
在在此所述任一个方法的一些实施方案中，在添加病原体灭活化合物(例如，S-303)之前，将猝灭剂和添加的碱(或中和猝灭剂)与红细胞组合物预处理合适的时间间隔，如在将病原体灭活化合物与红细胞组合物混合之前，少于约一小时，少于约30分钟，少于约20分钟，少于约10分钟，少于约5分钟，少于约2分钟或少于约1分钟。在一些实施方案中，预处理是在约1℃至30℃的温度下，还有约18℃至25℃，或约37℃，或约室温下。 
在在此所述每一个方法的一些实施方案中，在猝灭剂和添加的碱(或中和猝灭剂)的存在下，将病原体灭活化合物(例如，S-303)与红细胞组合物孵育合适的时间间隔，如约30分钟至48小时，还有约2至36小时，还有约8至24小时，还有约20小时。在一些进一步的实施方案中，孵育是在约1℃至30℃的温度范围下，还有约18℃至25℃，或约37℃，或约室温下。 
关于调节红细胞组合物pH的特征，之前的猝灭方法(如病原体灭活化合物)对于灭活过程中的猝灭有效性和细胞存活力未能认识到所得到混合物的pH的重要性。尽管之前的方法证明了为了适当猝灭病原体灭活化合物的不利副反应(例如，通过提高非质子化谷胱甘肽的水平来降低病原体灭活化合物与RBC表面的结合)而对充分的碱和合适的pH水平的需求，但这些方法没有实现和描述提高的碱对灭活处理过程中的细胞脱水的作用。因此，本发明的一个方面涉及将红细胞组合物的pH调节至用于病原体灭活化合物和猝灭剂孵育的合适水平(例如，以避免不利影响脱水的合适水平)。 
在一些实施方案中，将病原体灭活化合物和猝灭剂与红细胞组合物混合时，混合物的pH处于合适的水平，以在灭活过程中降低病原体灭活化合物的不利副反应(例如，病原体灭活化合物与RBC表面的结 合，这可能导致不需要的免疫应答)和充分降低细胞脱水。在一些实施方案中，不利副反应是病原体灭活化合物对红细胞表面的改变。在一些实施方案中，改变是病原体灭活化合物与红细胞表面的共价结合。在其他实施方案中，改变是病原体灭活化合物与红细胞表面的非共价结合。 
如在此所述的，在每个方法的一些实施方案中，降低了病原体灭活化合物与红细胞的不利(在此也称为“不需要的”)副反应。在一些实施方案中，降低的不利副反应是病原体灭活化合物对红细胞表面的改变。在一些实施方案中，副反应的水平降低至少约5％，至少约10％，至少约25％，至少约50％，至少约75％，或至少约90％。例如，可以通过测量病原体灭活化合物特异性的抗体结合经处理红细胞的量和/或测量经处理红细胞在体内的寿命，并将这些测量值与通过第二种不同的方法(例如，没有足量猝灭剂和/或碱加入反应混合物中的方法，其中没有将猝灭剂和/或碱加入反应混合物中的方法，和/或在较低pH下处理)处理的红细胞相比较，来证明副反应的降低。例如，在在此所述方法的一些实施方案中，抗病原体灭活化合物抗体结合经处理红细胞的水平相对于第二种方法(例如，没有足量猝灭剂和/或碱加入反应混合物中的方法，其中没有将猝灭剂和/或碱加入反应混合物中的方法，和/或在较低pH下处理)，降低至少约10％，至少约25％，至少约50％，至少约75％或至少约90％。 
在一些实施方案中，将病原体灭活化合物和猝灭剂与红细胞组合物混合时，混合物的pH为约6.0至8.5的范围，约6.0至7.5，约6.5至7.1，约6.5至7.0，约6.6至6.8，或约6.6，6.7，6.8或6.9。尽管红细胞组合物的pH会随着时间改变，理想的是将猝灭剂加入红细胞组合物中时pH在所需的范围中，不管组合物是否已经包含病原体灭活化合物。本发明的方法涉及将病原体灭活化合物和猝灭剂加入红细胞组合物中。将病原体灭活化合物和/或猝灭剂加入红细胞组合物中时，需要所需的pH范围，与病原体灭活化合物和/或猝灭剂加入红细胞组合物中的次序无关。换句话说，一旦将所有三种成分混合后，pH 在所需的范围内。在一些实施方案中，在病原体灭活化合物之前加入猝灭剂。在一些实施方案中，在猝灭剂之前加入病原体灭活化合物。在一些实施方案中，基本上同时加入猝灭剂和病原体灭活化合物。因此，在加入病原体灭活化合物和猝灭剂时表示将猝灭剂和病原体灭活化合物与红细胞组合物混合时的点。可以通过几种方式获得所需的pH，并且不是对调节红细胞组合物的pH时的限制，或在一些实施方案中，没有从血液制品的天然pH较大程度地调节。例如，可以通过调节pH达到所需的红细胞组合物的pH。例如，在加入病原体灭活化合物和猝灭剂之前，通过加入合适的添加剂溶液，如缓冲溶液，来进行pH调节。在一些实施方案中，在悬浮于相同或其他合适缓冲剂之前，用合适的缓冲剂将红细胞组合物洗涤一次或多次。或者，可以在添加病原体灭活化合物、猝灭剂或两者的同时调节红细胞组合物的pH。在一些实施方案中，添加猝灭剂的同时调节pH。在一些实施方案中，猝灭剂是中性的，使得中性添加剂的添加给红细胞组合物提供了所需的pH范围。作为实例，可以使用谷胱甘肽的中和来实现所需的pH调节。在一些实施方案中，可以使用合适水平的谷胱甘肽的中和，例如，通过加入1当量的碱，以在加入红细胞组合物时，提供将提供所需组合物pH调节的猝灭剂。合适的中和将取决于所用的猝灭剂。例如，使用肽时，这可能取决于肽的氨基酸成分。在一些实施方案中，可以使用没有明显影响红细胞组合物pH的猝灭剂。例如，可以进一步包含一种或多种氨基酸的包含半胱氨酸的肽的使用导致天然分离肽溶液更中性的pH。在一些实施方案中，肽进一步包含至少一种碱性氨基酸，如精氨酸或赖氨酸。 
在在此所述方法的一些实施方案中，将碱与红细胞组合物以及病原体灭活化合物和猝灭剂混合以将混合物的pH提高至所需水平和/或改善不利副反应的猝灭的情况中，碱是碱性盐。首先在与红细胞组合物混合之前，将碱性盐溶解于含水溶液中。在其他实施方案中，将固体形式的盐直接加入红细胞组合物中。在一些实施方案中，碱性盐包括猝灭剂并给混合物提供了猝灭剂和碱。在一些实施方案中，该方法 中所用的碱是强碱，如NaOH。通常，在与红细胞组合物混合之前，首先将强碱(如NaOH)溶解于含水溶液中。在一些实施方案中，在将猝灭剂与红细胞组合物混合之前，将强碱(例如，以溶液或固体形式)与猝灭剂混合。在一些实施方案中，碱是碱性缓冲剂(足量加入并具有合适的pKa，使混合物具有所需的pH范围)。如果使用了碱性缓冲剂，在一些实施方案中，缓冲剂是药物学上可接受的缓冲剂。在一些实施方案中，缓冲剂将具有约7至8范围pKa的可滴定质子。可以用作碱性缓冲剂的缓冲剂实例包括，但不限于，N-(2-羟乙基)-哌嗪-N’-2-乙烷磺酸(HEPES)，磷酸盐缓冲盐水(PBS)和磷酸钠缓冲剂。其他合适的碱性缓冲剂是本领域技术人员容易鉴定的。 
在在此所述的每一种方法和组合物的一些实施方案中，红细胞、猝灭剂、病原体灭活化合物和任何添加的碱的混合物的pH高于约5.5，高于约5.7，高于约6.0，高于约6.3，高于约6.5，高于约6.7，高于约7.0，或高于约7.2。在在此所述的每一种方法和组合物的一些实施方案中，红细胞、猝灭剂、病原体灭活化合物和碱(如果加入的话)的混合物的pH在约6.0至8.5的范围内，约6.0至7.5，约6.5至7.1，约6.5至7.0，或约6.6至6.8，或约6.6，6.7，6.8或6.9。在一些实施方案中，所示的pH是在室温下的pH。在一些实施方案中，所示pH是在37℃下的pH。例如，在一些实施方案中，在猝灭剂和任何添加的碱的存在下，用病原体灭活化合物处理包含红细胞的组合物，其中混合物的pH在37℃在约6.5至约7.0(或7.1)的范围中。 
在一些实施方案中，将病原体灭活化合物与红细胞组合物混合之前，红细胞、猝灭剂和碱(如果作为方法的一部分加入碱)的混合物的pH在约6.0至8.5的范围内，约6.0至7.5，约6.5至7.1，约6.5至7.0，或约6.6至6.8，或约6.5，6.7，6.8或6.9。在一些其他实施方案中，在将病原体灭活化合物与包含红细胞的组合物混合的同时或约1小时内，约30分钟内，约20分钟内，约10分钟内，约5分钟内，或约2分钟内，获得pH。在其中调节pH的那些方法的一些实施方案中，在将病原体灭活化合物与包含红细胞的组合物混合之前、同 时或约1小时内，约30分钟内，约20分钟内，约10分钟内，约5分钟内，或约2分钟内，将pH调节至所需的pH范围。在那些实施方案中，其中猝灭剂是谷胱甘肽，并且病原体灭活化合物是S-303，优选在将S-303与红细胞组合物混合之前，将包含红细胞组合物和猝灭剂的混合物的pH调节至所需的pH范围(例如，pH6.5至7.0)。 
在一些实施方案中，将红细胞、猝灭剂和碱混合后所得到的组合物pH不必定是起始红细胞组合物pH的调节。例如，红细胞组合物可以具有6.0-7.5所需范围内的pH，并且组合物的pH在加入猝灭剂时以及随后加入病原体灭活化合物时没有明显变化。在这样的实施方案中，猝灭剂天然地提供了所需的pH，或将其中和，因此提供所需的pH。结合添加高初始含量的猝灭剂，如约5mM至约40mM，和重要的所需范围内的所得到的pH。例如，使用这些谷胱甘肽浓度的已知方法并没有和所需的pH范围结合本发明的其他方法来一起使用。因此，对于肽，与肽猝灭剂无关，可以按照需要有效中和，以在所需的pH范围中提供合适量的缓冲。因此，中和猝灭剂意思是按照需要用酸或碱合适地滴定猝灭剂，使得加入红细胞组合物中时，所得到的混合物具有提供更好的不利副反应(例如，病原体灭活化合物与RBC表面的结合，这可能导致不需要的免疫应答)猝灭的pH，同时在灭活过程中避免细胞脱水，如约6.0至8.5范围的pH，约6.0至7.5，约6.5至7.0，约6.5至7.1，或约6.6至6.8，或约6.6，6.7，6.8或6.9。在一些实施方案中，将天然分离的肽合适地中和，即不需要添加酸或碱，以在最终的混合物中提供所需的pH。此外，优选的猝灭剂将提供能将pH维持在所需范围的缓冲能力，并持续猝灭不利副反应需要的时间。 
在在此所述每一个方法和组合物的一些实施方案中，将猝灭剂进行中和。通过碱将猝灭剂“中和”，如果将足量的碱与猝灭剂混合，使得包含红细胞、病原体灭活化合物和猝灭剂的组合物的混合物中的病原体灭活化合物和红细胞之间的不利副反应的猝灭得到提高。“中和猝灭剂”不必定具有中性pH，也不必定是不带电荷的。在一些实施方案中，中和猝灭剂既不是其最质子化的形式，也不是其最去质子化的形式。在一些实施方案中，在猝灭剂是非常酸性的情况中，中和猝灭剂的pH仍然低于7.0(例如，约6.6，6.7，6.8或6.9)。在一些实施方案中，中和猝灭剂溶液的pH可以高于7.0。在一些实施方案中，中和猝灭剂溶液的pH将可检测地高于加入碱之前的猝灭剂的pH。在一些实施方案中，用至少约0.25当量，至少约0.5当量，至少约0.75当量，至少约1当量，至少约1.25当量，至少约1.5当量或至少约2当量的碱来中和猝灭剂。在一些实施方案中，用低于约2当量，低于约1.5当量，低于约1.25当量，低于约1当量或低于约0.75当量的碱来中和猝灭剂。在一些实施方案中，用约0.25至约2当量，约0.5至约1.5当量或约0.75至约1.25当量的碱来中和猝灭剂。在一些实施方案中，用约0.75当量的碱来中和猝灭剂。在其他实施方案中，用约1当量的碱来中和猝灭剂。在其他实施方案中，用约1.25当量的碱来中和猝灭剂。例如，在本发明的一些实施方案中，用1当量的合适的碱(如，氢氧化钠)来中和谷胱甘肽。在这种情况下，质子化谷胱甘肽的溶液具有大约3的pH，用1当量的氢氧化钠中和的溶液具有大约4.5的pH，用2当量的氢氧化钠中和的溶液具有大约9.5的pH。可以将包含至少一种半胱氨酸的合适肽猝灭剂适当调节，以在加入红细胞组合物中时提供所需的pH。
用于中和谷胱甘肽和其他猝灭剂的合适方法是本领域技术人员显而易见的。在一些实施方案中，使用氢氧化钠来中和或部分中和猝灭剂。在一些实施方案中，首先将固体颗粒状的NaOH溶解于水中，以产生浓缩的碱溶液，如1N、5N、10N或20N NaOH溶液。在一些实施方案中，然后在将猝灭剂加入混合物之前、同时或之后，将适量的NaOH溶液加入猝灭剂中。或者，在将猝灭剂加入混合物之前，将NaOH加入红细胞组合物或病原体灭活化合物中，或两者的混合物中。 
除了提供合适pH调节的或中和的猝灭剂，在一些实施方案中，优选的猝灭剂不能够明显进入病原体中，使得它们最佳地猝灭胞外环境中的不利反应，而病原体灭活化合物一旦渗透入病原体内部时没有干扰病原体灭活。 
在在此所述每一个方法的一些实施方案中，猝灭剂是酸性化合物。在一些实施方案中，以游离酸形式来提供猝灭剂。在一些实施方案中，猝灭剂是酸性的并且加入至少约1当量碱来中和猝灭剂。在一些实施情况中，包含这种中和猝灭剂的溶液可以是碱性、中性乃至酸性的。在一些实施方案中，加入约1当量的碱来中和或部分中和猝灭剂。在一些实施方案中，加入约2当量碱。在一些实施方案中，猝灭剂是酸性的，并且使用约0.5至约1.5当量的碱来中和猝灭剂。在一些实施方案中，使用了约0.75至约1.25当量的碱。在一些实施方案中，使用了约1当量的碱。 
在一些实施方案中，在加入红细胞组合物和/或病原体灭活化合物之前，将猝灭剂进行中和。在其他实施方案中，将猝灭剂与红细胞组合物和/或病原体灭活化合物混合之后，将猝灭剂进行中和。在一些实施方案中，在加入红细胞组合物和/或病原体灭活化合物之前，中和猝灭剂的pH在约2.5至7.5的范围内，约3.0至6.5，约3.5至5.5，约4.0至5.0，或约4.3至4.5，或约4.4。 
在一些实施方案中，猝灭剂是谷胱甘肽，并且以谷胱甘肽单钠盐的形式来提供，并且用约1当量的碱来中和，或没有用碱中和。在一些其他实施方案中，猝灭剂是谷胱甘肽，并且以谷胱甘肽盐酸盐的形式来提供，并且用约1当量的碱来中和。 
在在此所述的每一个方法的一些实施方案中，包含红细胞组合物、猝灭剂、病原体灭活化合物和任何添加的碱的混合物中的猝灭剂的初始浓度在灭活阶段过程中升高，然后在灭活阶段后降低至较低的浓度。在一些实施方案中，猝灭剂的初始浓度适于显著降低病原体灭活化合物的不利副反应(例如，病原体灭活化合物与RBC表面的结合)，然后降低至较低的浓度，该浓度足以降低细胞贮藏过程中的存活力(例如，渗透脆性和脱水)和/或寿命的不利影响。 
本发明包括许多用于在病原体灭活阶段后降低猝灭剂浓度的方法。在一些实施方案中，通过将包含红细胞组合物、猝灭剂和病原体灭活化合物的混合物离心，接着除去混合的上清液，然后加入新鲜溶 液，如用于细胞重悬浮(例如，通过洗涤细胞)的添加剂溶液(例如，表2中所述的任何添加剂溶液，和/或包括氯化钠、腺嘌呤、葡萄糖、磷酸盐、鸟苷、柠檬酸盐和/或甘露醇的添加剂溶液)来降低猝灭剂(例如，谷胱甘肽)的浓度。在一些实施方案中，离心、上清液去除和添加新鲜溶液(例如，表2中所述的任何添加剂溶液，和/或包括氯化钠、腺嘌呤、葡萄糖、磷酸盐、鸟苷、柠檬酸盐和/或甘露醇的添加剂溶液)的过程可以重复另外的1，2，3，4或5或更多次。在一些实施方案中，用于降低猝灭剂浓度的方法是自动化的。在一些实施方案中，新鲜溶液不含有猝灭剂或包含较低浓度的猝灭剂。在一些实施方案中，通过化学灭活猝灭剂来降低猝灭剂(例如，谷胱甘肽)的浓度。在一些实施方案中，通过使用膜(例如，中空纤维膜或渗析膜)或大小排阻珠子在分批或流动去除方法或流动过程中的大小排阻来降低猝灭剂(例如，谷胱甘肽)的浓度。在一些实施方案中，猝灭剂没有减少和/或没有接触化合物吸附装置(CAD)。 
在在此所述的每一个方法和组合物的一些实施方案中，包含红细胞组合物、猝灭剂、病原体灭活化合物和任何添加的碱的混合物中的猝灭剂(例如，谷胱甘肽)的初始浓度高于约2mM，高于约4mM，高于约6mM，高于约8mM，高于约10mM，高于约15mM或高于约20mM。在一些实施方案中，混合物中的猝灭剂初始浓度为约2mM至100mM，约2mM至40mM，约4mM至40mM，约5mM至40mM，约5mM至30mM，或约10mM至30mM，或至多2mM，5mM，10mM，15mM，20mM，25mM，30mM，35mM，40mM，45mM，50mM或100mM。在一些实施方案中，混合物中的猝灭剂初始浓度为约20mM。 
在在此所述的每一个方法和组合物的一些实施方案中，红细胞、猝灭剂和病原体灭活化合物的混合物中的猝灭剂(例如，谷胱甘肽)初始浓度高于约2mM，高于约4mM，高于约6mM，高于约8mM或高于约10mM，并且混合物的pH高于约5.5，高于约5.7，高于约6.0，高于约6.3，高于约6.5，高于约6.7，高于约7.0或高于约7.2。在在此所述的每一个方法和组合物的一些实施方案中，混合物中的猝灭剂初 始浓度在约2mM至40mM的范围内，约4mM至40mM，约5mM至40mM，约5mM至30mM，或约10mM至30mM，或约20mM，并且混合物的pH在约6.0至8.5的范围内，约6.0至7.5，约6.5至7.1，约6.5至7.0，或约6.6至6.8，或约6.6，6.7，6.8或6.9。在一些实施方案中，混合物中的猝灭剂初始浓度高于约2mM，高于约4mM，高于约6mM，高于约8mM或高于约10mM，并且混合物的pH在约6.0至8.5的范围内，约6.0至7.5，约6.5至7.1，约6.5至7.0，或约6.6至6.8，或约6.6，6.7，6.8或6.9。在一些实施方案中，混合物的猝灭剂(例如，谷胱甘肽)浓度在约10mM至约30mM的范围内，并且混合物的pH在约6.0至7.5的范围内。在一些实施方案中，混合物中的猝灭剂(例如，谷胱甘肽)浓度为约20mM，并且混合物的pH在约6.5至7.0(或7.1)的范围内。 
在在此所述的每一个方法和组合物的一些实施方案中，包含红细胞组合物、猝灭剂、病原体灭活化合物和任何添加的碱的混合物中的猝灭剂(例如，谷胱甘肽)的初始浓度在灭活阶段后相对于混合物中的猝灭剂(例如，谷胱甘肽)的初始浓度降低了高于2倍，或3倍，或4倍，或5倍，或6倍，或7倍，或8倍，或9倍，或10倍，或15倍，或20倍，或25倍，或30倍，或35倍，或40倍，或50倍，或100倍，或500倍，或1000倍。 
在在此所述的每一个方法和组合物的一些实施方案中，包含红细胞组合物、猝灭剂、病原体灭活化合物和任何添加的碱的混合物中的猝灭剂(例如，谷胱甘肽)在灭活阶段后降低的浓度低于约15mM，低于约10mM，低于约8mM，低于约6mM，低于约5mM，低于约4mM，低于约3mM，低于约2mM，低于约1mM，低于约0.75mM，低于约0.5mM，或低于约0.25mM。在一些实施方案中，混合物中的猝灭剂在灭活阶段后降低的浓度在约1mM至20mM的范围内，约2mM至15mM，约3mM至10mM，约4mM至8mM，或约5mM至6mM。在一些实施方案中，混合物中的猝灭剂在灭活阶段后降低的浓度为至多约0.25mM的浓度，或0.5mM，或0.75mM，或1mM，或1.5mM，或2mM，或3mM，或4mM，或5mM，或6mM， 或7mM，或8mM，或9mM，或10mM，或12.5mM，或15mM，或20mM。 
在在此所述的每一个方法和组合物的一些实施方案中，包含红细胞组合物、猝灭剂、病原体灭活化合物和任何添加的碱的混合物中的猝灭剂(例如，谷胱甘肽)的初始浓度为高于2mM，高于约4mM，高于约6mM，高于约8mM或高于约10mM，并且混合物中的猝灭剂在灭活阶段后降低的浓度低于约15mM，低于约10mM，低于约8mM，低于约6mM，低于约5mM，低于约4mM，低于约3mM，低于约2mM，低于约1.5mM，低于约1mM，低于约0.75mM，低于约0.5mM，或低于约0.25mM。在一些实施方案中，猝灭剂的初始浓度在约2mM至100mM的范围内，约2mM至40mM，约4mM至40mM，约5mM至40mM，约5mM至30mM，或约10mM至30mM，或约20mM，并且混合物中的猝灭剂在灭活阶段后降低的浓度在约1mM至20mM的范围内，约2mM至15mM，约3mM至10mM，约4mM至8mM，或约5mM至6mM。在一些实施方案中，猝灭剂(例如，谷胱甘肽)的初始浓度在约10mM至30mM的范围内，并且混合物中的猝灭剂在灭活阶段后降低的浓度在约2mM至15mM的范围内。在一些实施方案中，猝灭剂(例如，谷胱甘肽)的初始浓度为约20mM，并且混合物中的猝灭剂在灭活阶段后降低的浓度在约4mM至8mM的范围内。 
在一些实施方案中，包含红细胞组合物、猝灭剂(例如，谷胱甘肽)、病原体灭活化合物和任何添加的碱的混合物中的猝灭剂(例如，谷胱甘肽)的初始浓度高于2mM，高于约4mM，高于约6mM，高于约8mM或高于约10mM；混合物的pH高于约5.5，高于约5.7，高于约6.0，高于约6.3，高于约6.5，高于约6.7，高于约7.0或高于约7.2；并且混合物中的猝灭剂在灭活阶段后降低的浓度为低于约15mM，低于约10mM，低于约8mM，低于约6mM，低于约5mM，低于约4mM，低于约3mM，低于约2mM，低于约1.5mM，低于约1mM，低于约0.75mM，低于约0.5mM或低于约0.25mM。在一些实施方案中，猝灭剂的初始浓度在约2mM至100mM的范围内，约2mM至40mM，约4mM至40mM，约5mM至40mM，约5mM至30mM，或约10mM至30mM，或约20mM；混合物的pH在约6.0至8.5的范围内，约6.0至7.5，约6.5至7.0，约6.5至7.1，或约 6.6至6.8，或约6.6，6.7，6.8或6.9；并且混合物中的猝灭剂在灭活阶段后降低的浓度在约1mM至20mM的范围内，约2mM至15mM，约3mM至10mM，约4mM至8mM，或约5mM至6mM。在一些实施方案中，猝灭剂(例如，谷胱甘肽)的初始浓度在约10mM至30mM的范围内；混合物的pH在约6.0至7.5的范围内；并且混合物中的猝灭剂在灭活阶段后降低的浓度在约2mM至15mM的范围内。在一些实施方案中，猝灭剂(例如，谷胱甘肽)的初始浓度为约20mM；混合物的pH在约6.5至7.0(或7.1)的范围内；并且混合物中的猝灭剂在灭活阶段后降低的浓度在约4mM至8mM的范围内。 
在在此所述的每一个方法和组合物的一些实施方案中，初始浓度猝灭剂的添加点与将包含红细胞组合物、猝灭剂、病原体灭活化合物和任何添加的碱的混合物中的猝灭剂浓度降低至较低浓度的点之间的时间段足以降低病原体灭活化合物的不利副反应(例如，病原体灭活化合物与RBC表面的结合，这可能导致不需要的免疫应答)。在一些实施方案中，该时间段足以降低灭活处理过程中的病原体灭活化合物的不利副反应并避免或降低细胞脱水。 
在一些实施方案中，初始浓度猝灭剂的添加点与将包含红细胞组合物、猝灭剂、病原体灭活化合物和任何添加的碱的混合物中的猝灭剂浓度降低至较低浓度的点之间的时间段高于，约等同于或低于5小时，10小时，15小时，20小时，25小时，30小时，35小时，40小时或50小时。在一些实施方案中，该时间段为约1至96小时，或约1至72小时，或约1至48小时，或约10至30小时，或约15至25小时，或约20小时。 
在在此所述的每一个方法和组合物的一些实施方案中，包含红细胞组合物、猝灭剂、病原体灭活化合物和任何添加的碱的混合物中的猝灭剂(例如，谷胱甘肽)的初始浓度高于2mM，高于约4mM，高于约6mM，高于约8mM，高于约10mM或高于约15mM；混合物中的猝灭剂在灭活阶段后降低的浓度低于约25mM，低于约20mM，低于约15mM，低于约10mM，低于约8mM，低于约6mM，低于约5mM，低于约4mM，低于 约3mM，低于约2mM，低于约1.5mM，低于约1mM，低于约0.75mM，低于约0.5mM或低于约0.25mM；添加初始浓度猝灭剂的点和降低猝灭剂浓度至较低浓度的点之间的时间段高于，约等同于，或低于5小时，10小时，15小时，20小时，25小时，30小时，35小时，40小时或50小时。 
在一些实施方案中，猝灭剂的初始浓度在约2mM至100mM的范围内，约2mM至40mM，约4mM至40mM，约5mM至40mM，约5mM至30mM，或约10mM至30mM，或约20mM；混合物中的猝灭剂在灭活阶段后降低的浓度在约1mM至20mM的范围内，约2mM至15mM，约3mM至10mM，约4mM至8mM，或约5mM至6mM；并且添加初始浓度猝灭剂的点和降低猝灭剂浓度至较低浓度的点之间的时间段为约1至96小时，或约1至72小时，或约1至48小时，或约10至30小时，或约4至30小时，或约10至25小时，或约15至25小时，或约20小时。 
在一些实施方案中，猝灭剂(例如，谷胱甘肽)的初始浓度在约10mM至30mM的范围内；混合物中的猝灭剂在灭活阶段后降低的浓度在约2mM至15mM的范围内；并且添加初始浓度猝灭剂的点和降低猝灭剂浓度至较低浓度的点之间的时间段为约10至30小时。在一些实施方案中，猝灭剂(例如，谷胱甘肽)的初始浓度为约20mM；混合物中的猝灭剂在灭活阶段后降低的浓度在约4mM至8mM的范围内；并且添加初始浓度猝灭剂的点和降低猝灭剂浓度至较低浓度的点之间的时间段为约15至25小时。在这些实施方案的一些中，混合物的pH在约6.5至7.0(或7.1)的范围内。在这些实施方案中的另一些中，混合物的pH在约6.0至7.5的范围内。 
在这些实施方案的任一个中，在添加初始浓度猝灭剂的点和降低猝灭剂浓度至较低浓度的点之间的时间段过程中，包含红细胞组合物和猝灭剂的混合物的温度在约1℃至30℃的温度范围中，还有约18℃至25℃，或约37℃，或约室温。 
在一些实施方案中，本发明提供了处理红细胞组合物的方法，其包括：a)提供i)包含连接芥子基团和核酸结合配体的易分解连接物 的病原体灭活化合物(例如，S-303)(例如，有效量的病原体灭活化合物，以灭活病原体，如果存在的话)，ii)包含硫醇基团的猝灭剂(例如，有效量的猝灭剂)，其中硫醇基能够与病原体灭活化合物(例如，谷胱甘肽)的反应性亲电子基团反应，iii)包含红细胞的组合物和iv)合适的碱(例如，NaOH)；b)将病原体灭活化合物、猝灭剂和合适的碱与包含红细胞的组合物混合；和c)将混合物中的猝灭剂浓度充分降低至一定的量，该量可降低由混合物的贮藏(例如，在4℃下10、28或42天后)引起的红细胞脱水的水平，该水平是相对于在猝灭剂的初始浓度下由混合物的贮藏引起的红细胞脱水的水平而言的。在一些实施方案中，混合物包含约0.5至1.5当量的碱(或约0.75至1.25当量)，其中当量意思是等同于混合物中猝灭剂摩尔量的摩尔量，和/或步骤(b)所得到的混合物在37℃下具有约6.0至7.5(或约6.5至7.0，或7.1)的pH。在一些实施方案中，步骤(a)的碱是足量的，以相对于无碱的混合物，将所得到混合物中的抗病原体灭活化合物抗体结合经处理红细胞组合物的水平降低至少约5％(或至少约10％，至少约25％，至少约50％，至少约75％，或至少约90％)。在一些实施方案中，猝灭剂浓度为约5mM至约30mM(或约15mM至约25mM)和/或步骤(c)所得到混合物中的猝灭剂浓度为低于约10mM(或低于约6mM，或低于约2mM)。在一些实施方案中，步骤(b)所得到混合物中的病原体灭活化合物的浓度为约0.1μM至约5mM和/或足以灭活红细胞组合物中至少1log(或3log)的病原体，如果存在的话。在一些实施方案中，步骤(b)和步骤(c)之间的时间为约1至48小时(或15至25小时)。在一些实施方案中，在步骤(b)后20小时时，与来自相同条件下但没有使用碱的相同方法的红细胞的ABC值相比，所得到混合物的红细胞(RBC)具有低于65％的抗体结合能力(ABC)和/或具有低于约50,000(或约25,000至70,000之间)的平均ABC，和/或步骤(c)后(或在4℃下贮藏28或42天后)具有低于1％的溶血和/或在步骤(c)后(或在4℃下贮藏28或42天后)具有高于50％的收集细胞体积(PCV)和/或在步骤(c)后在4℃下贮藏28(或42) 天后具有高于140(或150)的中值corpuscular fragility。在这些实施方案的一些中，步骤(c)中降低猝灭剂的浓度包括除去灭活过程中所用的溶液并添加最终的添加剂溶液(例如，在此所述的任何溶液，如，SAG-M、AS-5，表2、3或4中的溶液，和/或包括氯化钠、腺嘌呤、葡萄糖、磷酸盐、鸟苷、柠檬酸盐和/或甘露醇的添加剂溶液)。 
在一些实施方案中，本发明提供了处理红细胞组合物的方法，其包括(a)混合(i)包括是或形成反应性亲电子基团的官能团的病原体灭活化合物(例如，S-303)(例如，有效量的病原体灭活化合物，以灭活病原体，如果存在的话)，(ii)包括硫醇基团的猝灭剂(例如，谷胱甘肽)(例如，有效量的猝灭剂)，其中硫醇基能够与病原体灭活化合物的反应性亲电子基团反应；(iii)包含红细胞的组合物；和(iv)合适的碱(例如，NaOH)，和；b)将混合物中的猝灭剂浓度充分降低至一定的量，该量可降低由混合物的贮藏(例如，在4℃下10、28或42天后)引起的红细胞脱水的水平，该水平是相对于在猝灭剂的初始浓度下由混合物的贮藏引起的红细胞脱水的水平而言的。在一些实施方案中，混合物包含约0.5至1.5当量的碱(或约0.75至1.25当量)，其中当量意思是等同于混合物中猝灭剂摩尔量的摩尔量，和/或步骤(a)所得到的混合物在37℃下具有约6.0至7.5(或约6.5至7.0，或7.1)的pH。在一些实施方案中，步骤(a)的碱是足量的，以相对于无碱的混合物，将所得到混合物中的抗病原体灭活化合物抗体结合经处理红细胞组合物的水平降低至少约5％(或至少约10％，至少约25％，至少约50％，至少约75％，或至少约90％)。在一些实施方案中，猝灭剂浓度为约5mM至约30mM(或约15mM至约25mM)和/或步骤(b)所得到混合物中的猝灭剂浓度为低于约10mM(或低于约6mM，或低于约2mM)。在一些实施方案中，步骤(a)所得到混合物中的病原体灭活化合物的浓度为约0.1μM至约5mM和/或足以灭活红细胞组合物中至少1log(或3log)的病原体，如果存在的话。在一些实施方案中，步骤(a)和步骤(b)之间的时间为约1至48小时(或15至25小时)。在一些实施方案中，在步骤(a)后20小时时， 与来自相同条件下但没有使用碱的相同方法的红细胞的ABC值相比，所得到混合物的红细胞(RBC)具有低于65％的抗体结合能力(ABC)和/或具有低于约50,000(或约25,000至70,000之间)的平均ABC，和/或步骤(b)后(或在4℃下贮藏28或42天后)具有低于1％的溶血和/或在步骤(b)后(或在4℃下贮藏28或42天后)具有高于50％的收集细胞体积(PCV)和/或在步骤(b)后在4℃下贮藏28(或42)天后具有高于140(或150)的平均红细胞脆性。在这些实施方案的一些中，步骤(b)中降低猝灭剂的浓度包括除去灭活过程中所用的溶液并添加最终的添加剂溶液(例如，在此所述的任何溶液，如，SAG-M、AS-5，表2、3或4中的溶液，和/或包括氯化钠、腺嘌呤、葡萄糖、磷酸盐、鸟苷、柠檬酸盐和/或甘露醇的添加剂溶液)。 
在一些实施方案中，本发明提供降低红细胞脱水的方法，其包括：a)提供红细胞组合物，其包含i)猝灭剂(例如，谷胱甘肽)，其中猝灭剂能够与病原体灭活化合物反应，和ii)红细胞；和b)将混合物中的猝灭剂浓度充分降低至一定的量，该量可降低由混合物的贮藏(例如，在4℃下10、28或42天后)引起的红细胞脱水的水平，该水平是相对于在猝灭剂的初始浓度下由混合物的贮藏引起的红细胞脱水的水平而言的。在一些实施方案中，步骤(b)所得到混合物中的猝灭剂浓度低于约10mM(或低于约6mM，或低于约2mM)。在一些实施方案中，所得到混合物的红细胞(RBC)在步骤(b)后(或在4℃下贮藏28或42天后)具有低于1％的溶血和/或在步骤(b)后(或在4℃下贮藏28或42天后)具有高于50％的收集细胞体积(PCV)和/或在步骤(b)后在4℃下贮藏28(或42)天后具有高于140(或150)的平均红细胞脆性。 
本发明的方法包括体内使用病原体灭活化合物和猝灭剂。体内使用涉及在活的人、哺乳动物或脊椎动物的体外使用处理红细胞组合物的化合物，其中处理过的生物材料确定在活的人、哺乳动物或脊椎动物体内使用。例如，从人体中取出血液，并将化合物引入血液中以灭活病原体，如果确定将血液重新引入该人体或另一个人体内，将限定 为化合物的体内使用。将人血液重新引入该人体或另一个人体内将是血液的体内使用，与化合物的体内使用相对。重新引入人体时，如果化合物仍然存在于血液中，那么化合物除了是体内使用外，还是体内引入。本发明的一些实施方案涉及猝灭剂的体内使用，其中确定红细胞组合物是用于体内使用。在一些情况中，一些水平的猝灭剂仍然存在于红细胞组合物中，使得猝灭剂也是体内引入的。材料或化合物的体内使用涉及在活的人、哺乳动物或脊椎动物的体外使用材料或化合物，其中材料或化合物不打算重新引入活的人、哺乳动物或脊椎动物体内。体内使用的实例是红细胞样品成分的诊断分析。本发明的方法适用于红细胞组合物的体外使用，因为红细胞或其他组分的改变可能影响血液样品成分的体外分析。因此，本发明的方法可以提供体外样品操作的安全性，该样品可能另外影响样品诊断测试的改变已经得到了适当猝灭。 
添加剂溶液，包括盐和/或缓冲溶液，可以与在此所述的方法和红细胞组合物一起使用。例如，可以在灭活阶段之前、之中和/或之后，和/或在降低猝灭剂浓度时，将选定的缓冲剂(例如，SAG-M、AS-5，或表2、3和/或4中所述的任何溶液)加入红细胞组合物中。 
使用压积红细胞的灭活方法 
在一些实施方案中，将压积红细胞(pRBC)(例如，缺乏添加剂溶液和/或具有约70至90％，或约75至85％，或约80％血细胞比容的红细胞)接受在此所述的灭活方法(例如，其中组合物包含约20mM GSH与1当量碱和约0.2mM S-303的方法)，然后接受添加剂溶液(在一些情况中，用添加剂溶液保存)(例如，SAG-M、AS-5，或在此或表2中所述的任何溶液)。添加剂溶液的实例显示于表2中和在此所述的。在这些实施方案的一些中，在加入病原体灭活化合物(例如，S-303)和/或猝灭剂(例如，GSH)后的约5分钟至20小时时，将添加剂溶液(例如，在此所述的或表2中的任何溶液)加入包含猝灭剂、病原体灭活化合物和任何添加的碱的红细胞组合物中。在一些实施方案中， 在加入病原体灭活化合物(例如，S-303)和/或猝灭剂(例如，GSH)后的约5分钟至10小时，或约5分钟至5小时，或约5分钟至60分钟，或约5分钟至30分钟，或约10分钟至20分钟，或约15分钟时，将添加剂溶液加入RBC组合物中。在一些实施方案中，在加入添加剂溶液(例如，SAG-M、AS-5，或在此所述的或表2中的任何溶液)后，按照在此所述的将猝灭剂浓度降低。例如，用在此所述的灭活方法处理pRBC(例如，其中组合物包含约20mM GSH，约1当量的碱和约0.2mMS-303的处理)，然后在添加病原体灭活化合物和/或猝灭剂后的特定时间时(如约5分钟至5小时，或约10分钟至20分钟，或约15分钟)，用添加剂溶液(例如，SAG-M、AS-5或在此所述的或表2中的任何溶液)处理，接着按照在此所述的降低猝灭剂浓度(例如，降至低于约10mM，或低于约5mM)。在一些实施方案中，降低猝灭剂浓度包括除去处理溶液和/或添加剂溶液，接着加入最终的添加剂溶液(例如，SAG-M、AS-5，或在此所述的或表2中的任何溶液)，以提供具有例如约50至70％，或约55至65％，或约60％血细胞比容的红细胞组合物。在一些实施方案中，在灭活之前和/或之中，红细胞组合物中的氯离子浓度低于或高于约150mM，或约120mM，或约100mM，或约90mM，或约80mM，或约70mM，或约60mM，或约50mM，约40mM，约30mM，或约20mM，约10mM，或约25至250mM之间，或约40至100mM，或约50至75mM，或约60至70mM，或约65mM。 
在一些实施方案中，在此所指的添加剂溶液(例如，在降低猝灭剂浓度之前和/或之后给予的添加剂溶液)包含一种或多种以下的成分：葡萄糖、腺嘌呤、鸟苷、甘露醇、柠檬酸盐(例如，柠檬酸钠)、柠檬酸、磷酸盐(例如，Na2HPO4和/或NaH2PO4)和氯化物(例如，来自氯化钠)。在一些实施方案中，添加剂溶液的葡萄糖浓度和/或交换后(例如，输血前)RBC组合物中的葡萄糖终浓度为约10mM至约150mM，或约20mM至约120mM，或约25mM至约100mM，或约30mM至约75mM，或约40mM至约50mM。在一些实施方案中，添加剂溶液中的腺嘌呤浓度和/或交换后(例如，输血前)RBC组合物中的腺嘌呤终浓度为约 0.5mM至约5mM，或约0.75mM至约3mM，或约1mM至约2.5mM。在一些实施方案中，添加剂溶液的鸟苷浓度和/或交换后(例如，输血前)RBC组合物中的鸟苷终浓度为约0.5mM至约5mM，或约0.75mM至约3mM，或约1mM至约2.5mM，或约1.5mM至约2mM。在一些实施方案中，添加剂溶液的甘露醇浓度和/或交换后(例如，输血前)RBC组合物中的甘露醇终浓度为约10mM至约150mM，或约20mM至约120mM，或约25mM至约100mM，或约30mM至约75mM，或约40mM至约50mM，或约35mM至约45mM。在一些实施方案中，，添加剂溶液的柠檬酸盐(例如，柠檬酸钠)浓度和/或交换后(例如，输血前)RBC组合物中的柠檬酸盐终浓度为约5mM至约100mM，或约10mM至约75mM，或约15mM至约50mM，或约15mM至约35mM，或约20mM至约30mM。在一些实施方案中，添加剂溶液的磷酸盐(例如，Na2HPO4和/或NaH2PO4)浓度和/或交换后(例如，输血前)RBC组合物中的磷酸盐终浓度为约1mM至约150mM，或约2mM至约100mM，或约3mM至约75mM，或约4mM至约50mM，或约5mM至约25mM，或约10mM至约20mM。在一些实施方案中，添加剂溶液的氯化物浓度和/或交换后(例如，输血前)RBC组合物中的氯化物终浓度为低于或高于约500mM，或约250mM，或约200mM，或约150mM，或约100mM，约75mM，或约50mM，或约25mM，或约25至约250mM，或约40至约100mM，或约50至约75mM，或约60至约70mM，或约100至约200mM，或约125mM至约175mM，或约150mM。 
在一些实施方案中，在此所指的添加剂溶液(例如，在猝灭剂浓度降低之前和/之后给予的添加剂溶液)和/或交换后(例如，在输血之前)的最终RBC组合物包含10mM至约150mM(或约50mM至约90mM)葡萄糖，0.5mM至约5mM(或约0.75mM至约3mM)腺嘌呤，约10mM至约150mM(或约25mM至约100mM)甘露醇，约10mM至约75mM(或约15mM至约50mM)柠檬酸盐(例如，柠檬酸钠)，约3mM至约75mM(或约5mM至约25mM)磷酸盐(例如，Na2HPO4和/或NaH2PO4)和约50至约250mM或(约100至约175mM)氯化物。 
表2：示例性添加剂溶液 
使用稀释红细胞的灭活方法 
可以在灭活前将在此所述的红细胞组合物进行稀释。将红细胞接受稀释可以将溶解的物质(例如，盐，如Cl-)的浓度降至适于使用在此所述的方法灭活的水平。在此描述了稀释溶液的实例并且显示于表3中。在一些实施方案中，在在此所述的灭活方法(例如，其中组合物包含约20mM GSH与约1当量碱和约0.2mM S-303的方法)之前，将非压积的红细胞(例如，具有约50至70％，或约55至65％，或约60％和任选包含SAG-M或Optisol的红细胞)接受稀释溶液(例如，在此所述的或表3中的任何溶液)，接着按照在此所述的降低猝灭剂浓度(例如，降至低于约10mM，或低于约5mM)。在这些实施方案的一些中，降低猝灭剂浓度包括去除处理溶液(例如，稀释的处理溶液)，接着加入最终的添加剂溶液(例如，SAG-M，AS-5，或以上所述的或表 2中任何溶液)以提供例如具有约50至70％，或约55至65％或约60％血细胞比容的红细胞组合物。在一些实施方案中，在灭活之前，将红细胞组合物中的氯离子浓度稀释至低于或高于约150mM，或约120mM，或约100mM，或约90mM，约80mM，或约70mM，或约60mM，或约50mM，约40mM，约30mM，或约20mM，约10mM，或约25至250mM，或约40至100mM，或约50至75mM，或约60至70mM，或约65mM。在一些实施方案中，加RBC溶液中的稀释溶液的含量(以体积计)为RBC溶液含量的约0.2至2倍，或约0.3至1.5倍，或约0.4至1倍，或约0.5至0.75倍。在这些实施方案的一些中，用稀释溶液(例如，在此所述的或表3中的任何溶液)将红细胞组合物稀释至约30至50％，或约35至45％或约40％的血细胞比容水平。 
在一些实施方案中，在此所指的稀释溶液包含一种或多种以下的成分：葡萄糖、腺嘌呤、甘露醇、柠檬酸盐(例如，柠檬酸钠)、柠檬酸、磷酸盐(例如，Na2HPO4和/或NaH2PO4)和氯化物(例如，来自氯化钠)。在一些实施方案中，稀释溶液的葡萄糖浓度和/或用稀释溶液稀释后RBC组合物中的葡萄糖终浓度为约10mM至约150mM，或约20mM至约120mM，或约25mM至约100mM，或约30mM至约75mM，或约40mM至约50mM，或约50mM至约60mM。在一些实施方案中，稀释溶液的腺嘌呤浓度和/或用稀释溶液稀释后RBC组合物中的腺嘌呤终浓度为约0.5mM至约5mM，或约0.75mM至约3mM，或约1mM至约2.5mM。在一些实施方案中，稀释溶液的甘露醇浓度和/或用稀释溶液稀释后RBC组合物中的甘露醇终浓度为约10mM至约150mM，或约20mM至约120mM，或约25mM至约100mM，或约30mM至约75mM，或约40mM至约60mM，或约25mM至约35mM。在一些实施方案中，稀释溶液的柠檬酸盐(例如，柠檬酸钠)浓度和/或用稀释溶液稀释后RBC组合物中的柠檬酸盐终浓度为5mM至约100mM，或约10mM至约75mM，或约15mM至约50mM，或约15mM至约35mM，或约20mM至约30mM。在一些实施方案中，稀释溶液的磷酸盐(例如，Na2HPO4和/或NaH2PO4)浓度和/或用稀释溶液稀释后RBC组合物中的磷酸盐终浓度为约1mM至约150mM， 或约2mM至约100mM，或约3mM至约75mM，或约4mM至约50mM，或约5mM至约25mM，或约10mM至约20mM。在一些实施方案中，稀释溶液和/或用稀释溶液稀释后的氯化物浓度为低于或高于约500mM，或约250mM，或约200mM，或约150mM，或约120mM，或约100mM，或约90mM，或约80mM，或约70mM，或约60mM，或约50mM，或约40mM，或约30mM，或约20mM，或约10mM或约25至约250mM，或约40至约100mM，或约50至约75mM，或约60至约70mM，或约100至约200mM，或约125mM至约175mM。 
在一些实施方案中，在此所指的稀释溶液和/或用稀释溶液稀释后的RBC组合物包含10mM至约150mM(或约35mM至约65mM)葡萄糖，0.5mM至约5mM(或约0.75mM至约3mM)腺嘌呤，约10mM至约150mM(或约25mM至约75mM)甘露醇，约10mM至约75mM(或约15mM至约50mM)柠檬酸盐(例如，柠檬酸钠)，约3mM至约75mM(或约5mM至约25mM)磷酸盐(例如，Na2HPO4和/或NaH2PO4)和约5至约50mM，或(约10至约25mM)氯化物。 
在一些实施方案中，在在此所述的灭活方法之前，将非压积红细胞接受稀释溶液(例如，以上所述的和表3中的任何溶液)，接着按照在此所述的降低猝灭剂浓度，然后用最终的添加剂溶液(例如，SAG-M，AS-5，或以上所述的或表2中的任何溶液)处理，以提供适用(例如，适于输血)的RBC组合物。在一些实施方案中，最终添加剂溶液可以是在此所述的任何添加剂溶液，例如，其中氯化物浓度(和/或交换后(如输血之前)RBC组合物中的氯化物终浓度)为低于约500mM，或约250mM，或约200mM，或约150mM，或约100mM，约75mM，或约50mM，或约25mM，或约25至250mM，或约40至100mM，或约50至75mM，或约60至70mM，或约100至200mM，或约125mM至175mM，或约150mM。 
表3：示例性稀释溶液 
使用重建压积红细胞的灭活反应 
在一些实施方案中，在进行在此所述的灭活方法(例如，其中组合物包含约20mM GSH与约1当量碱和约0.2mM S-303的方法)将压积红细胞(pRBC)(例如，具有约70至90％，或约75至85％，或约80％血细胞比容的红细胞)接受处理溶液。处理溶液的实例显示于表4中。在一些实施方案中，在加入猝灭剂、病原体灭活化合物和任何添加的碱之前，将处理溶液(例如，表4中所述的任何溶液)加入pRBC中。在这些实施方案的一些中，用处理溶液处理pRBC组合物，形成非压积的红细胞(例如，具有约50至70％，或约55至65％，或约60％血细胞比容的红细胞)。在一些实施方案中，(a)将处理溶液加入pRBC中，(b)进行在此所述的灭活方法(例如，其中组合物包含约20mM GSH与约1当量碱和约0.2mM S-303的方法)，和(c)按照在此所述的降低猝灭剂的浓度(例如，降至低于约10mM，或低于约5mM)。在这些实施方案的一些中，步骤(c)包括除去处理溶液并加入最终的添加剂溶液(例如，在此所述的任何溶液，如SAG-M，AS-5或表2、3或4的任何溶液)，以提供例如具有约50至70％，或约55至65％，或约60％血细胞比容的红细胞组合物。在这些实施方案的一些中，在灭活之前和/或之中，红细胞组合物中的氯离子浓度低于或高于约150mM，或约120mM，或约100mM，或约90mM，约80mM，或约70mM，或约60mM，或约50mM，约40mM，约30mM，或约20mM，约10mM，或约25至250mM，或约40至100mM，或约50至75mM，或约60至70mM，或约65mM。 
在一些实施方案中，在此所指的处理溶液包含一种或多种的以下成分：右旋糖、腺嘌呤、甘露醇、柠檬酸盐(例如，柠檬酸钠)、柠檬酸、磷酸盐(例如，Na2HPO4和/或NaH2PO4)和氯化物(例如，来自氯化钠)。在一些实施方案中，处理溶液的葡萄糖浓度和/或RBC组合物中除去处理溶液后添加剂溶液中的葡萄糖浓度为约10mM至约150mM，或约20mM至约120mM，或约25mM至约100mM，或约30mM至约75mM，或约40mM至约50mM，或约50mM至约60mM。在一些实施方案中，处理溶液的腺嘌呤浓度和/或RBC组合物中除去处理溶液后添加剂溶液中的腺嘌呤浓度为约0.5mM至约5mM，或约0.75mM至约3mM，或约1mM至约2.5mM。在一些实施方案中，处理溶液的甘露醇浓度和/或RBC组合物中除去处理溶液后添加剂溶液中的甘露醇浓度为约10mM至约150mM，或约20mM至约120mM，或约25mM至约100mM，或约30mM至约75mM，或约40mM至约60mM。在一些实施方案中，处理溶液的柠檬酸盐(例如，柠檬酸钠)浓度和/或RBC组合物中除去处理溶液后添加剂溶液中的柠檬酸盐浓度为约1mM至约100mM，或约2mM至约75mM，或约5mM至约50mM，或约7.5mM至约25mM，或约10mM至约15mM。在一些实施方案中，处理溶液的磷酸盐(例如，Na2HPO4和/或NaH2PO4)浓度和/或RBC组合物中除去处理溶液后添加剂溶液中的磷酸盐浓度为约1mM至约150mM，或约2mM至约100mM，或约3mM至约75mM，或约4mM至约50mM，或约5mM至约25mM，或约10mM至约20mM。在一些实施方案中，处理溶液的氯化物浓度和/或RBC组合物中除去处理溶液 后添加剂溶液中的氯化物浓度从约250mM，或约200mM，或约150mM，或约120mM，或约100mM，或约90mM，或约80mM，或约70mM，或约60mM，或约50mM，或约40mM，或约30mM，或约20mM，约10mM，或约25至约250mM，或约40至约100mM，或约50至约75mM，或约60至约70mM，或约100至约200mM，或约125mM至约175mM。 
在一些实施方案中，处理溶液和/或RBC组合物中除去处理溶液后的添加剂溶液包含10mM至约150mM(或约35mM至约65mM)葡萄糖，0.5mM至约5mM(或约0.75mM至约3mM)腺嘌呤，约10mM至约150mM(或约25mM至约75mM)甘露醇，约5mM至约75mM(或约10mM至约20mM)柠檬酸盐(例如，柠檬酸钠)，约3mM至约75mM(或约5mM至约25mM)磷酸盐(例如，Na2HPO4和/或NaH2PO4)和约5至约100mM，或(约25至约75mM)氯化物。 
表4：示例性处理溶液 
    溶液1   溶液2   溶液3   溶液4   溶液5
  葡萄糖(mM)   45.4   45.4   45.4   45.4   45.4
  腺嘌呤/腺嘌呤HCl(mM)   1.3   1.3   1.3   1.3   1.3
  甘露醇(mM)   55   44.5   44.5   44.5   30
  柠檬酸钠二水合物或无水的(mM)     12   12   12  
  Na2HPO4(mM)           15
  NaH2PO4(mM)          
  NaCl(mM)   70   60   60   60   70
  渗透度(mOsm)          
  pH(用柠檬酸调节的)       7   6.5   6.5
评价方法效验 
除了比较如上所述的log灭活，可以通过几种其他方法来评价改进的猝灭方法的效力，如美国专利公开No.2006/0115466中所述的，在此将其内容全部引入作为参考。例如，可以就红细胞的功能、形态 和水合状态，以及就处理过的红细胞与免疫系统(如，抗体)的反应性，通过评价红细胞组合物的改变来评价猝灭方法。如果处理过的红细胞组合物确定用于人使用，如输血，猝灭方法应当基本上没有损害红细胞功能(例如，通过脱水)。可以通过本领域已知的用于测试红细胞功能的方法来测量对红细胞功能的实质性损伤的不存在。特别地，可以测量脱水水平，例如，通过血细胞比容(收集细胞体积，PCV)、渗透脆性、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、溶血百分比和红细胞变形计量来测量。可以测量其他功能指示剂的水平，如总ATP(腺苷5’-三磷酸)、总2，3-DPG(2，3-二磷酸甘油)或胞外钾，并与未处理的对照相比。此外，可以测量胞内和胞外pH、血红蛋白、葡萄糖消耗和乳酸产生。可以将本发明的改进方法与之前美国专利公开No.2006/0115466中所述的处理条件进行比较(例如，完全猝灭的(2碱当量)20mM谷胱甘肽结合S-303/红细胞混合物，在此所述的培养后猝灭剂浓度没有降低)。 
在本发明的一些实施方案中，在此所述的方法和组合物的红细胞在处理后具有最小的损伤或没有损伤(例如，脱水、溶血等)。在一些实施方案中，包含红细胞组合物、猝灭剂、病原体灭活化合物和任何添加的碱的所得混合物的红细胞(在猝灭剂浓度降低之前或之后)具有低于4％，或低于3％，或低于2％，低于1％溶血，或低于0.5％的溶血。在一些实施方案中，在猝灭剂(例如，谷胱甘肽)浓度降低后在4℃下约10天，或在4℃下约28或42天，或在4℃下约42天时，所得混合物的红细胞具有低于4％，或低于3％，或低于2％，或低于1％，或低于0.5％的溶血。 
在一些实施方案中，包含红细胞组合物、猝灭剂、病原体灭活化合物和任何添加的碱的所得混合物的红细胞(在猝灭剂浓度降低之前或之后)具有高于50％，或高于55％，或高于60％，或高于65％的收集细胞体积(PCV)。在一些实施方案中，在猝灭剂(例如，谷胱甘肽)浓度降低后在4℃下约10天，或在4℃下约28或42天，或在4℃下约42天时，所得混合物的红细胞具有高于50％，或高于55％，或高于 60％，或高于65％的收集细胞体积(PCV)。 
在一些实施方案中，包含红细胞组合物、猝灭剂、病原体灭活化合物和任何添加的碱的所得混合物的红细胞(在猝灭剂浓度降低之前或之后)具有高于130，或高于135，或高于140，或高于145，或高于150，或高于155的平均红细胞脆性(MCF；产生50％溶血的渗透度)。在一些实施方案中，在猝灭剂(例如，谷胱甘肽)浓度降低后在4℃下约10天，或在4℃下约28或42天，或在4℃下约42天时，所得混合物的红细胞具有高于130，或高于135，高于140，或高于145，或高于150，或高于155的平均红细胞脆性(MCF)。 
测定ATP、2，3-DPG、葡萄糖、血红蛋白、溶血和钾的方法在本领域中是可获得的并且在实验部分中有描述。参见，例如，Davey等，Transfusion，32：525-528(1992)，在此将其公开内容引入。测定红细胞功能的方法在Greenwalt等，Vox Sang，58：94-99(1990)；Hogman等，Vox Sang，65：271-278(1993)；和Beutler等，Blood，Vol.59(1982)，在此将其公开内容引入作为参考。例如，可以使用Sigma ATP试剂盒或2，3-DPG试剂盒(Sigma，St.Louis，Mo.)来测量总ATP和总2，3-DPG。可以按照Sigma程序No.366-UV来使用ATP试剂盒，在此将其公开内容引入作为参考。还可以使用基于荧光素酶的酶试验或通过Beutler(1984)所述的实验方案来测量总ATP。可以使用Ciba Corning Model 614K+/Na+分析仪(Ciba Corning Diagnostics Corp.，Medford，MA)来测量胞外钾水平。可以通过将细胞在4℃和12,000xg下离心15分钟并除去上清液来测量胞外pH，为此，可以在室温下使用标准pH计(例如，Beckman，环氧甘汞电极)来测量pH。对于胞内pH，可以将剩余的沉淀物盖在离心管中并在约-80℃下贮藏至少2小时。然后通过加入去离子水将其裂解。将裂解的样品充分混合，并可以在室温下使用标准pH计或在室温下使用Ciba Corning Model 238血液气体分析仪(Ciba Corning Diagnostics Corp.，Medford，MA)来测量溶液的pH。可以在处理后立刻进行测量并作为处理后贮藏的函数，例如贮藏至多42天。本发明的方法提供了 一种红细胞组合物，其中处理过的红细胞的溶血在28天贮藏后低于3％，更优选在42天贮藏后低于2％，最优选在4℃贮藏42天后低于或等同于约1％。在一些实施方案中，提供了一种红细胞组合物(例如，使用在此所述任一种方法的红细胞组合物)，其中与使用2mM酸性谷胱甘肽和0.2mM S-303处理的红细胞组合物相比时，总ATP水平较高。在一些实施方案中，在此所述的猝灭方法提供了一种红细胞组合物，其与使用2mM酸性谷胱甘肽和0.2mM S-303方法的组合物相比时，具有高约20％，还有30％，还有40％或约50％的ATP水平。在一些实施方案中，在7、14、21、28、35或42天贮藏后，维持了较高水平的ATP。在一些实施方案中，在贮藏过程中，较高水平的ATP降低。 
在本发明的一些实施方案中，在此所述的方法和组合物包括其中红细胞具有降低数量的由病原体灭活化合物引起的不利副反应(例如，病原体灭活化合物与RBC表面的结合)的红细胞组合物。在一些实施方案中，副反应是病原体灭活化合物对红细胞表面的改变。可以通过本领域已知的几种试验来评价本发明方法中的红细胞改变的降低，如美国专利公开No.2006/0115466中所述的那些方法，在此将其内容引入作为参考。还可以使用在此所述的灵敏性荧光激活免疫流式细胞计数试验(IFC)来测定结合RBC表面的吖啶含量。 
关于荧光检测试验，本发明的猝灭方法，与没有使用碱的相同处理比较时(例如，使用中和谷胱甘肽的方法与使用未中和谷胱甘肽的相同方法相比)，可以导致平均荧光降低至少10％，还有至少25％，还有至少50％，还有至少75％，或至少90％。例如，使用所述任一种组合物和使用碱的本发明的猝灭方法(例如，包含约15-25mM谷胱甘肽、约0.5至1.5当量碱和约0.2mM S-303的红细胞组合物)与相同组合物但没有使用碱的相同组合物(例如，包含约15-25mM谷胱甘肽和约0.2mM S-303但不用碱的红细胞组合物)相比时可能导致较低水平的平均荧光。 
还可以就抗体结合能力(ABC；每个红细胞的病原体灭活化合物或其衍生物的分子数量，如使用来自Bangs Laboratories，Inc；Fishers， IN的校准珠子所测定的；参见实施例5和9)测量本发明的猝灭方法和组合物的病原体灭活化合物结合RBC表面的水平，这涉及缀合别藻蓝蛋白(APC)的鼠单克隆抗-吖啶抗体和FACS-Caliber流式细胞计数器(BD Biosciences)。在本发明的任一个方法和组合物的一些实施方案中，RBC具有低于约75,000，或低于约70,000，或低于约60,000，或低于约55,000，或低于约52,500，或低于约50,000，或低于约47,500，或低于约45,000，或低于约42,500，或低于约40,000，或低于约37,500，或低于约35,000，或低于约32,500，或低于约30,000，或低于约27,500，或低于约25,000的平均ABC值。在一些实施方案中，RBC具有约10,000至80,000，或约20,000至70,000，或约25,000至70,000，或约25,000至60,000，或约30,000至50,000，或约35,000至45,000的平均ABC值。在在此所述方法的一些实施方案中，与使用猝灭剂和碱(例如，中和谷胱甘肽)的相似处理相比时，与使用没有用碱处理的RBC组合物的相同方法相比，可能导致低于90％，还有低于75％，还有低于65％，还有低于55％，还有低于45％，还有低于35％，还有低于25％，或低于10％的ABC值。 
还可以通过测定样品中的核酸改变水平，将本发明的猝灭方法与现有方法相比较。通常，红细胞组合物可以含有白细胞，并且可以将白细胞的核酸分离。在化合物与核酸反应时，具有放射性同位素的病原体灭活化合物将仍然结合核酸。这可以用来测定与核酸反应的化合物含量，用于各种猝灭方法，并提供了与预期的白细胞灭活直接相关的测量方法。每1,000核酸碱基对形成的S-303加合物的数量可以用作测定各种方法对病原体灭活的预期影响的模型。或者，可以将合适量的病原体加入红细胞组合物中，并且在处理后分离病原体的核酸。然而，在这种情况下，需要将样品的白细胞降低，使得任何残余的白细胞水平不会影响病原体核酸的测量。 
除了提供合适的病原体灭活，同时降低不利副反应(例如，病原体灭活化合物与RBC表面的结合，这可能导致不需要的免疫应答)和脱水的水平，在至少一些实施方案中，本发明的猝灭方法在病原体灭 活后还提供了反应性亲电子物质的浓度的降低。如果确定红细胞组合物用于输血，重要的是反应性亲电子物质的水平尽可能地低，优选基本上不再可检测。可以使用本领域可用的方法测定反应性亲电子物质的存在，如色谱方法，包括液相色谱-质谱(LC-MS-MS)。此外，可以通过评价与核酸的鸟嘌呤残基反应的能力来测定样品的残余活性，如使用Mattes所述的一般烷基化剂试验(Mattes，WR，Anal.Biochem，1992年10月；206(1)：161-7)。在该试验中，在用病原体灭活化合物和猝灭剂培养合适的时间后，提取RBC。将任何残余的病原体灭活化合物以及猝灭剂和其他小的物质与蛋白质分离。然后用使用8-3H鸟嘌呤残基合成的双链(ds)DNA培养这些物质。残余的病原体灭活化合物在鸟嘌呤的N7位置与ds DNA反应，这酸化了8-H位置并将3H释放至溶液中，其中可以将其分离并进行测量。可以将释放的氚含量定量，并与测试的提取样品中存在的残余烷基化剂含量具有1∶1的相关性。可以使用本发明的改进方法评价通过这些方法测定的亲电子物质的水平并与已知的方法相比较。 
在在此所述每一个方法的一些实施方案中，该方法进一步包括降低混合物中化合物浓度的步骤，其中化合物选自病原体灭活化合物和病原体灭活化合物的降解产物。在一些实施方案中，该方法包括降低混合物中病原体灭活化合物的浓度。在一些实施方案中，该方法包括降低混合物中亲电子物质的浓度。可以在处理后降低生物材料(如，血液制品)中的病原体灭活化合物的浓度，例如通过分批吸附或流动去除方法。可以使用的方法和装置在美国专利6,544,727；6,331,387；6,951,713；和7,037,642；和美国专利申请2002/0192632(放弃)和2001/0009756(放弃)中有描述，在此将每篇的公开内容全部引入作为参考。因此，在一些实施方案中，通过将混合物接触吸附介质来降低病原体灭活化合物的浓度，该吸附介质包含对病原体灭活化合物具有亲和性的吸附颗粒。在一些实施方案中，对吸附系统进行构造，以在分批的方法中除去病原体灭活化合物。在一些实施方案中，通过使用本领域已知的技术洗涤红细胞来降低混合物中的病原体灭活化合 物的浓度。在一些实施方案中，通过在此所述的和/或本领域已知的方法(例如，使用离心机和压榨设备，或结合的离心和压榨，如由 制造的TACSI)除去一些或全部处理溶液(例如，SAG-M，AS-5，或表2、3和/或4中所述的任何溶液)来降低混合物中的病原体灭活化合物的浓度。在一些实施方案中，通过除去一些或全部处理溶液(例如，SAG-M，AS-5，或表2、3和/或4中所述的任何溶液)，接着将添加剂溶液(例如，SAG-M，AS-5，或表2中所述的任何溶液)加入混合物中来降低混合物中的病原体灭活化合物的浓度。在一些实施方案中，在降低猝灭剂浓度的同时降低病原体灭活化合物的浓度。 
处理过的血液组合物 
在一些实施方案中，本发明还提供了从在此所述的每一个处理方法获得的红细胞组合物。在一些实施方案中，本发明还提供了通过在此所述的每一个处理方法可制备的红细胞组合物。在一个方面中，本发明提供了一种组合物，其包含a)红细胞，其中红细胞与病原体灭活化合物的亲电子基团共价反应；和b)猝灭剂，其包含能够与病原体灭活化合物反应的硫醇基团；其中在4℃贮藏28或42天后，该组合物适于输于人体中。 
在在此所述的每一个方法和组合物的一些实施方案中，红细胞组合物中的红细胞是哺乳动物血细胞。例如，红细胞可以是啮齿动物(例如，小鼠或大鼠)、犬、兔类动物(例如，兔子)、非人灵长类动物(例如，黑猩猩)或人红细胞。例如，在一些实施方案中，红细胞是人。在一些实施方案中，红细胞已经降低了白细胞。在一些其他实施方案中，红细胞没有降低白细胞。在一些实施方案中，存在包含红细胞的组合物受到病原体污染的可能性。在一些实施方案中，红细胞组合物受到病原体的污染。在一些实施方案中，组合物中的至少1log，或至少2log，或至少3log，或至少4log的病原体得到灭活，如果存在的话。 
在一些实施方案中，本发明包括红细胞组合物，其中如在此所述 的，红细胞已经由病原体灭活化合物(例如，S-303)进行了改变。在一些实施方案中，通过这些处理方法产生的红细胞组合物包含病原体灭活化合物的降解产物(例如，猝灭剂与病原体灭活化合物的反应产物)。在一些实施方案中，改变是病原体灭活化合物的亲电子基团与红细胞表面的反应。在一些实施方案中，病原体灭活化合物与红细胞表面共价结合。在一些实施方案中，病原体灭活化合物与红细胞表面上的一个或多个蛋白共价结合。在一些实施方案中，改变是红细胞的亲核基团与病原体灭活化合物的亲电子基团的反应，其中亲电子基团是芥子基团，并且亲核基团替代了芥子基团的一个或多个氯原子。在一些实施方案中，病原体灭活化合物与红细胞表面非共价结合。在一些实施方案中，RBC组合物具有低于75,000，或低于70,000，或低于60,000，或低于55,000，或低于52,500，或低于50,000，或低于47,500，或低于45,000，或低于42,500，或低于40,000，或低于37,500，或低于35,000，或低于32,500，或低于30,000，或低于27,500，或低于25,000的平均ABC值。在一些实施方案中，RBC具有约10,000至80,000，或约20,000至70,000，或约25,000至70,000，或约25,000至60,000，或约30,000至50,000，或约35,000至45,000的平均ABC值。 
在一些实施方案中，相对于涉及用病原体灭活化合物处理的其他方法产生的红细胞，红细胞组合物包含降低水平的由病原体灭活化合物对红细胞表面的改变。在一些实施方案中，通过在此所述的处理方法产生的红细胞组合物在处理完成后，相对于涉及用病原体灭活化合物处理的另一种方法(例如，没有足量猝灭剂和/或碱加入反应混合物中的方法，其中无猝灭剂和/或碱加入反应混合物中的方法，和/或在较低pH下的处理)产生的红细胞，包含降低含量的包含反应性亲电子基团的病原体灭活化合物。在一些实施方案中，相对于涉及用病原体灭活化合物处理的另一种方法(例如，没有足量猝灭剂和/或碱加入反应混合物中的方法，其中无猝灭剂和/或碱加入反应混合物中的方法，和/或在较低pH下的处理)处理的组合物，组合物中包含反应性亲电子基团的病原体灭活化合物的量降低了约10％，约25％，约50％，约75％，约90％，约95％或约99％。
在这些实施方案的一些中，红细胞组合物包含残余的猝灭剂化合物(例如，谷胱甘肽)。在一些实施方案中，组合物包含猝灭剂浓度充分降低以在贮藏过程中维持RBC活力和寿命并避免红细胞脱水和/或降低的渗透脆性猝灭剂。在一些实施方案中，组合物包含浓度比组合物中之前所用的猝灭剂浓度低很多的猝灭剂。在一些实施方案中，之前所用的较高浓度的猝灭剂降低了贮藏过程中的RBC活力和寿命和/或提高了红细胞脱水和降低了渗透脆性，而较低的浓度是比组合物中之前所用的猝灭剂浓度低很多。在一些实施方案中，组合物中的猝灭剂浓度低于约25mM，低于约20mM，低于约15mM，低于约10mM，低于约8mM，低于约6mM，低于约5mM，低于约4mM，低于约3mM，低于约2mM或低于约1mM。在一些实施方案中，组合物中的猝灭剂浓度为约1mM至20mM，约2mM至15mM，约3mM至10mM，约4mM至8mM，或约5mM至6mM。 
在一些实施方案中，组合物包含添加剂溶液(例如，表2中所述的溶液，或包含表2中所述成分的任意组合的溶液)。在一些实施方案中，组合物包含氯化钠、腺嘌呤、葡萄糖、磷酸盐、鸟苷、柠檬酸盐和/或甘露醇。在一些实施方案中，RBC组合物中的氯离子的终浓度(例如，在输血前)低于约500mM，或约250mM，或约200mM，或约150mM，或约100mM，约75mM，或约50mM，或约25mM，或约25至250mM，或约40至100mM，或约50至75mM，或约60至70mM，或约100至200mM，或约125mM至175mM，或约150mM。 
在一些实施方案中，在4℃贮藏约2天，或约5天，或约10天，或约15天，或约20天，或约28天，或约35天，或约42天后，组合物适于输入个体中(例如，人)。 
在这些实施方案的一些中，组合物包含a)红细胞，其与细胞表面上的病原体灭活化合物(例如，S-303)的亲电子基团共价反应和i)具有高于60％的收集细胞体积(PCV)和/或ii)具有约25,000至70,000(或约35,000至45,000)的平均抗体结合能力(ABC)和b)浓度低于约8mM(或低于6mM，或低于约2mM)的谷胱甘肽猝灭剂。在一些实施方案中，至少3log(或至少1log)的病原体被灭活，如果存在的话。在一些实施方案中，在4℃下贮藏至多28或42天时，组合物适于输入人体内。 
试剂盒 
除了改进的猝灭方法，本发明提供了用于处理红细胞组合物的一次性试剂盒，其中可以人工或自动进行处理。在一些实施方案中，本发明提供了包含在此所述的每一个方法中所用的病原体灭活化合物、猝灭剂和/或碱的试剂盒。在一些实施方案中，试剂盒提供了新鲜的溶液(如用于细胞重悬浮的缓冲剂)，用于在此所述的猝灭剂浓度降低后的使用。 
在一些实施方案中，试剂盒包含S-303，包括其任何盐，和中和谷胱甘肽，包括其任何盐。S-303可以是固体形式或在溶液中。相似地，中和谷胱甘肽可以是固体形式或在溶液中。这些固体或溶液可以进一步包含可接受的赋形剂、佐剂、稀释剂或稳定剂。在一些实施方案中，S-303是盐酸盐，中和谷胱甘肽是用约1当量的氢氧化钠中和的。在一些实施方案中，S-303和中和谷胱甘肽是固体形式的并且试剂盒进一步包含用于溶解S-303的合适溶液和用于溶解中和谷胱甘肽的合适溶液。在一些实施方案中，本发明提供了包含病原体灭活化合物、猝灭剂和用于溶解猝灭剂的溶液的试剂盒，其中该溶液中和或部分中和猝灭剂。在此所述的方法和试剂盒包括病原体灭活化合物和猝灭剂的任何合适的药物制剂，其可以配制成混合物或分开。药物学上可接受的制剂是本领域技术人员已知的，并且合适的赋形剂、佐剂、稀释剂或稳定剂的实例可以在例如Gennaro编辑，Remington’s The Science and Practice of Pharmacy，第20版，Lippincott Williams& Wilkins中找到。本发明还包括以上所述方法所得到的组合物，其包含如上所述的红细胞、病原体灭活化合物和猝灭剂，其中组合物在合适的pH范围内，以实现改进的病原体灭活化合物猝灭。 
在另一个方面中，本发明提供了例如用于处理红细胞组合物以灭活病原体的试剂盒，其包含包括核酸结合配体和是或形成亲电子基团的官能团的病原体灭活化合物(包括其任何盐)，包括硫醇基团的猝灭剂(包括其任何盐)，和约0.75至约1.25当量的碱，其中当量意思是等同于试剂盒中猝灭剂摩尔量的摩尔量。在一些实施方案中，试剂盒包含约1当量的合适碱。 
在再一个方面中，本发明提供了用于处理红细胞组合物以灭活病原体的试剂盒，其包含核酸结合配体和是或形成亲电子基团的官能团(例如，S-303)，包括其任何盐，包含硫醇基团的中和猝灭剂(例如，中和谷胱甘肽)，包括其任何盐，和任选的新鲜溶液(如，用于细胞重悬浮的缓冲剂)，用于在此所述的猝灭剂浓度降低后的使用。在一些实施方案中，溶液是在此所述的添加剂溶液、稀释剂溶液和/或处理溶液(例如，SAG-M，AS-5，或以上所述的和表2、3和/或4中的任何溶液)。 
实施例，材料&方法 
通过以下的非限制性实施例来进一步说明本发明。 
实施例1：有机体制剂
实施例，材料&方法 
用于这些研究的细菌和病毒株是获自公共医疗卫生加利福尼亚部或美国典型培养物中心的临床份礼物。 
细菌：将细菌的冷冻工作储备物接种于含有50％未添加葡萄糖的酵母提取物和50％胎牛血清培养基的500mL烧瓶中。将烧瓶在设定为37℃的振荡水浴中培养过夜。将接获自过夜培养物的革兰氏阳性细菌添加至血液制品中。革兰氏阴性细菌的过夜培养物通过1∶1000稀释至新鲜培养基中进行进一步的次培养，并如上培养直至它们达到对数期，如通过光密度测定的。将该对数期的生长加入血液制品中，用于PI实验。 
病毒：使用各自病毒合适的细胞系来制备无细胞病毒储备物。将这些储备物冷冻于-80℃，直至将它们融化并直接加入血液制品中，用于PI实验。 
实施例2：RBC部分的制备
在收集那天或在收集后至多3天时作为全血的450mL或500mL单位在Cerus接收血液。在大部分情况中，在加工成RBC部分之前，将全血进行白细胞过滤。偶然的部分可能不会成功地白细胞过滤(例如，来自坚持训练的捐献者的血液)并且使用这些没有白细胞过滤的部分，用于未知内部白细胞存活的生物体的PI研究。 
在白细胞过滤后，将血液离心并且榨出血浆。然后加入所需的RBC添加剂溶液，如AS-3(Nutricel)，并且将所得到的RBC部分立即使用或贮藏于4℃直至使用。 
实施例3：病原体灭活(PI)
PI方法涉及用待测试的生物体的培养物接种RBC部分。RBC部分中典型的生物体目标输入滴定度大约为RBC的106cfu或pfu/mL。在大部分情况中，生物体体积(包括任何培养基)大约是RBC部分体积的1％，并且通常不高于10％。为了评价较低的灭活，更高的生理相关性，使用了输入为10至105cfu/单位的细菌水平。对于低水平输入的研究，合并了两个RBC部分，加入，然后分成按照在此所述的进行处理的测试部分和只加入了猝灭剂(GSH)(无病原体灭活剂，例如，S-303)并且与测试部分保持在相同温度条件下的对照部分。 
将生物体加入RBC部分中后，通过抓住容器的末端并以八字形或自行车踏板运动的形式移动末端10次来混合该部分。 
然后将所含的RBC转移至RBC PI处理一次性装置的混合容器中。该装置由一系列塑料容器和通过塑料管连接的端口组成。混合容器是双-端口600mL容量PL1813塑料容器。连接每个端口的是Y-管装置，其具有连接一个引管的Luer适合的儿科滤器。一个端口上未使用的引 管连接另一个600mL容量PL1813塑料容器(培养容器)。剩余的未使用引管是用于连接初始RBC部分的管线。 
制备给料溶液并如下加入部分中：通过将2.8g GSH溶解于～12mL0.9％盐水和0.9mL 10N NaOH中来制备含有1当量NaOH的600mM谷胱甘肽(GSH)溶液。将合适体积的GSH溶液引入20mL容量的注射器中。所用的体积通常为10mL GSH/280mL RBC，加上2mL线路损耗，以在给料的RBC部分中产生20mM GSH。使用过滤的引管将含有GSH的注射器连接混合容器，过滤的引管与连接培养容器的引管共享Y装置。将部分置于振荡器上以促进给料溶液添加过程中从上至下的混合。将GSH加入部分中，同时将部分在振荡器上混合。然后使用如上所述的八字形混合方法将该部分手动混合。加入GSH后，使该部分在室温下静置5分钟。 
静置阶段后，取出小样RBC，并培养以测定预处理滴定度。将标准平板试验用于细菌样品，而将细胞培养物试验用于病毒。 
通过将46mg S-303溶解于～15mL 0.9％的盐水中来制备6mM盐酸amustaline(S-303)。将合适剂量的S-303引入20mL注射器中。所用的体积通常为10mL S-303溶液/280mL RBC，加上2mL线路损耗，以在给料的RBC部分中产生0.2mM S-303。然后使用如上所述的八字形混合方法将该部分手动混合。加入S-303后，将处理过的RBC部分在室温下培养最小3小时以确保在取样用于处理后滴定之前完成病原体灭活。 
在PI后3小时，如上所述，取样并培养，以测定处理后滴定度。对于评价低水平细菌输入的灭活的研究，处理后，将测试和对照部分在RT下培养～20小时，然后在37℃下培养过夜。在37℃培养后，从每个处理过的测试部分和相同的未处理对照部分取样并培养以获得细菌滴定度的定量测定。未处理部分呈现出生长。 
通过取处理前滴定度与处理后滴定度比例的对数来测定每个部分的对数降低，其中将滴定度表示为10×cfu或pfu/mL。 
实施例4：RBC体外功能实验
根据制造商的说明，在添加剂溶液中(如AS-3(Nutricel))制备人RBC部分。用各种浓度的GSH处理RBC部分，以获得2mM至30mM的终浓度。在一些情况中，在处理之前，用1或2碱当量的碳酸氢钠或氢氧化钠调节GSH的pH。用GSH处理后，用溶解于0.9％氯化钠中的S-303处理RBC，以获得RBC中0.2mM S-303的浓度，或模拟用0.9％氯化钠的给料。处理后，将该部分在20-25℃下培养20小时。培养后，将一些部分在21℃，4100×g下离心6分钟，榨出上清液并将100mL新鲜添加剂溶液加入RBC中。将所有部分置于4℃贮藏。在添加剂溶液中制备后，将未处理对照置于4℃。 
在贮藏过程中的不同时间点试验体外功能。通过在ChironDiagnostics血液气体分析仪中测量每个部分的RBC pH来测定37℃下的胞外pH。使用基于荧光素酶的酶试验或Beutler(1984)所述的实验方案来测量总ATP。制备无细胞上清液来评价胞外钾、葡萄糖和乳酸盐。通过使用Chiron Diagnostics Na/K分析仪(型号#614)或相似的分析仪测量无细胞上清液的K+含量来测定胞外钾。在NexCT分析仪上评价胞外葡萄糖和乳酸盐。使用Advia血液学分析仪(Siemens)收集红细胞指数。 
将RBC在0.9％氯化钠中洗涤三次并在分析渗透脆性和密度特征之前在RT下培养最少1小时。用于渗透脆性的方法是Beutler等，1982，(Blood Journal 59：1141-1147)中所述的并进行改进用于96-孔形式(Lew等，2003，Blood 101：4189-4194)。根据Danon和Marikovsky，1964(J Lab Clin Med 6：668-674)获得密度分布曲线，在微分血器试管中使用酞酸酯。 
实施例5：结合RBC表面的病原体灭活化合物的定量
使用缀合别藻蓝蛋白(APC)的鼠抗-吖啶单克隆抗体和FACS-Caliber流式细胞计数器(BD Biosciences)，用灵敏性荧光激活免疫流式细胞计数试验(IFC)检测结合RBC表面的吖啶的水平。简 而言之，用RBC在0.9％盐水中洗涤三次，并在流动培养缓冲剂中(HBSS，1％BSA，0.1％NaN3，1mM EDTA，3％BSA)重悬浮至4％血细胞比容。接着，加入缀合APC的鼠单克隆抗吖啶抗体并在4℃下培养30分钟；将细胞在流动洗涤缓冲剂(HBSS 1％BSA，0.1％NaN3，1mM EDTA)洗涤，并重悬浮于相同的缓冲剂中，在合适的控制下在FACS-Caliber中评价总共30,000个事件。使用Quantum Simply Cellular珠子试剂盒(Bang Laboratories，Inc；Fishers，IN)进行了结合人RBC(ABC)的细胞表面的S-303分子的数量定量。 
实施例6：对即时和贮藏-相关的RBC脱水和功能的谷胱甘肽pH作用
用S-303(0.2mM)和用NaOH pH调节的GSH(20mM)(不同碱当量(b.e.))处理RBC部分来加强GSH猝灭。所测试的给料溶液的pH对于0b.e.、1b.e.和2b.e.各自为2.9、4.5和8.9。处理后，将RBC贮藏在4℃并周期性地测试胞外pH、葡萄糖、乳酸盐、钾、总ATP和溶血。通过光学流式细胞计数器测量RBC物理参数(MCV、MCH、MCHC、HDW等)，按照Beutler等(1982)和Lew等(2003)的改进进行了渗透脆性测量。 
RBC暴露于碱性GSH导致了降低的Hct，以及即时和持续降低的渗透脆性和提高的RBC密度(例如，参见图1)。这种即时脱水通过降低碱当量来进行校正，导致GSH溶液较低的pH(参见表5)。尽管即时脱水得到了缓解，RBC的渗透脆性持续以浓度依赖性方式受到GSH存在的改变(表6；图2和3中的更多实例)。使用光学流式细胞计数器(Adiva血液学分析仪，Siemens)的MCHC测量和MCH分布与渗透脆性和密度的变化相关。脱水是S-303无关的，因为还通过S-303不存在下的pH和GSH证明了这种作用。 
表5：处理后即刻氢氧化钠碱调节的GSH水平对RBC脱水的作用 
*MCF(平均红细胞脆性)＝发生50％溶血的渗透度 
表6：GSH碱当量对贮藏过程中RBC脱水和功能的影响 
*MCF(平均红细胞脆性)＝发生50％溶血的渗透度 
**给料后的天数。给料的血液是5天时间的。 
RBC脱水变化与GSH、pH和浓度相关，但与S-303或通常用于测定RBC功能的生化试验(ATP、乳酸盐、葡萄糖)不相关。有限暴露于高pH的GSH防止了最初的脱水作用。高水平GSH的有限持续暴露防止了贮藏脱水作用。这些研究表明应当包括贮藏的RBC的水合状态的测定，作为RBC质量的预测因素，因为脱水的实质性变化对常规的标准没有影响，但有助于红细胞寿命的适度变化。 
实施例7：使用随后猝灭剂降低的改进猝灭方法导致贮藏后降低的RBC脱水
用S-303(0.2mM)和用1当量NaOH调节pH的GSH(20mM)处理RBC部分，以加强GSH猝灭。用GSH处理后，用溶解于0.9％氯化钠中的S-303处理RBC，以获得RBC中0.2mM S-303的浓度，或使用0.9％氯化钠模拟给料。处理后，将该部分在20-25℃下培养20h。培养后，将一些部分在21℃，4100×g下离心6min，榨出上清液并将100mL新鲜添加剂溶液加入RBC中。将所有部分在4℃下贮藏。在用添加剂溶液制备后，将未处理的对照置于4℃下。按照Beutler等(1982)和Lew等(2003)的改进进行了RBC渗透脆性测量。 
将RBC延长暴露于高浓度的GSH导致了提高的RBC密度和降低的渗透脆性(例如，参见表5，图3和4)。通过在RBC贮藏之前除去GSH校正了这种贮藏相关的脱水(例如，参见图4和5)。时间和GSH浓度依赖性脱水是S-303无关的，因为还通过S-303不存在下的GSH证明了这种作用(例如，参见图6)。 
RBC脱水变化与GSH相关。通过将处理溶液替换为新鲜的添加剂溶液限制暴露于高浓度的GSH防止了贮藏诱发的脱水作用。 
实施例8：用于改进猝灭方法的病原体灭活
在AS-3贮藏介质中制备具有大约60％血细胞比容的白细胞降低的RBC部分。给RBC部分接种大约6logs/ml的活生物体，取出等份试样来用作未处理的输入对照。将1当量NaOH溶液中的GSH加入接种的部分中至20mM的终浓度并充分混合。加入S-303至0.2mM的终浓度，将该部分再次充分混合，并在20至25℃下培养三个小时。培养后，取出样品并进行试验以检测残余的活生物体。在制备后立即滴定对照样品，并在3-小时培养阶段后再次滴定。对于每种生物体，至少进行重复两次。 
除了假单胞菌以外，革兰氏阴性、革兰氏阳性和一个实例病毒通过用1当量NaOH中和的GSH处理得到有效灭活，与用2当量NaOH的中和相比较(参见表7)。 
使用至多4.4logs/RBC单位的总接种滴定度的铜绿假单胞菌的病原体灭活导致完全灭活。 
表7：改进猝灭条件vs.之前的条件的病原体灭活 
实施例9：使用交换步骤的改进猝灭方法的表面结合吖啶水平
将实施例5中所述的方法用于测定抗吖啶抗体结合用20mM用1当量NaOH中和的GSH和0.2mM S-303处理的红细胞的能力。在几个RBC制剂中测定的抗体结合能力大约为39,000/红细胞(参见图7)。用20mM用2当量NaOH中和的GSH处理RBC时，将这种结合水平与18,407±1195ABC相比，用2mM酸性GSH处理RBC时，结合水平123,714±5123ABC。 
实施例10：在不同血细胞比容(Hct)下用S-303处理的病原体灭活
制备了来自450至500mL WB收集的RBC部分，没有使用添加剂溶液(80％旋转血细胞比容(Hct))或在添加剂溶液中制备(60％Hct)。在处理之前将RBC进行白细胞降低，除非另外指出。用稀释溶液将40％Hct的测试部分进行稀释。用～106生物体/ml的高水平输入或10至105生物体/部分的低水平输入来接种RBC部分。对于高水平输入，在S-303处理之前，取出28mL的对照样品。对于低水平细菌输入，通过合并和分裂全部RBC部分来制备测试和对照部分，并将对照部分接种～10生物体/部分。用200μM S-303和20mM GSH处理具有80％和60％Hct的测试部分，GSH用一碱基当量的氢氧化钠(1b.e.)中和。用130μM S-303和13mM GSH(1.b.e.)处理具有40％Hct的测试部分。基于Hct，用20mM GSH或13mM GSH(1.b.e.)处理对照样品或部分。对于高水平输入的部分，在处理测试部分时测定对照样品的活生物体。在RT下培养3小时后，测定测试部分和对照样品的活生物体，这通过富集琼脂平板(细菌)上的生长或通过Vero细胞上的斑块试验(VSV)来定量。对于低水平输入的部分，将对照和测试部分在RT下培养20小时，然后在37℃下培养～20小时。然后将样品涂布，以检测细菌生长。结果显示于表8中。 
表8：不同血细胞比容值样品的病原体灭活数据 
a对数降低作为Log(未处理滴定度/处理后滴定度)来计算，滴定度表示为10x/mL 
b没有使用白细胞过滤的病原体降低 
cn＝3 
d在所有情况中，最低输入水平的对照部分对细菌生长是阳性的 
实施例11：不同血细胞比容(Hct)下S-303处理后的RBC水合
从白细胞降低的全血在添加剂溶液中制备40％或60％Hct的RBC，通过旋转血细胞比容来测量Hct，并且80％Hct作为压积红细胞。用GSH(钠盐，BioMedica Foscama，意大利)和各自终浓度为20mM和0.2mM的S-303处理这些部分。将所有处理过的部分在RT下培养至多20小时。用SAG-M替代处理溶液，并将这些部分调节至60％Hct，用于在4℃下贮藏。在SAG-M中制备对照RBC部分，并在4℃下贮藏。对所有部分的物理参数进行定期测定；人工测量MCHC，通过标准方法(Beutler等和Lew等，2003)进行了渗透脆性测量。将平均红细胞脆性(MCF)限定为50％RBC溶血的NaCl浓度。MCF的变化是贮藏过程中表面体积比(S/V)和RBC水合的指数。大约6周的贮藏后，所有处理过的部分具有与未处理对照相当的MCF值，与处理时的Hct无关。在贮藏结束时，MCHC(RBC水合的另一个指数)在测试和对照部分之 间相似。结果显示于表9中。在制备RBC浓缩物的常规实践中所用的宽范围Hct中，处理过的RBC贮藏至多6周时没有明显改变RBC水合和S/V。 
表9：不同血细胞比容值样品的水合数据 
实施例12：不同血细胞比容(Hct)下S-303处理后贮藏的RBC的体外质量
从白细胞降低的全血在添加剂溶液中制备40％或60％Hct的RBC，通过旋转血细胞比容来测量Hct，并且80％Hct作为压积红细胞。用GSH(钠盐)和各自终浓度为20mM和0.2mM的S-303处理这些部分。将所有处理过的部分在RT下培养至多20小时。用SAG-M替代处理溶液，并将这些部分调节至60％Hct，用于在4℃下贮藏。在SAG-M中制备对照RBC部分，并在4℃下贮藏。在处理前和处理后以及在至多6周贮藏过程中以规律的时间间隔来测定体外功能。对于体外RBC功能测定的参数包括pH、总ATP、溶血和胞外钾、葡萄糖和乳酸盐。在贮藏大约6周后(38天至44天)，所有测试部分具有高于2μmol ATP/gHb的总ATP水平，并且溶血和MCHC与对照部分相当，与处理Hc t无关。在整个贮藏过程中，对于40％和60％Hct，测试部分胞外葡萄糖高于对照部分的，而具有80％Hct的部分，与对照更相似。与对照相比， 所有测试部分中胞外乳酸盐较低，与Hct无关。在贮藏结束时，对于40％和60％Hct部分，测试部分中的胞外K+略低于对照的，而80％Hct部分与对照相当。在整个贮藏过程中，所有测试部分的pH与对照相似。来自该方法的血红蛋白产量满足AABB要求，与处理Hct无关。在6周贮藏过程中，在宽范围的Hct中，在S-303处理后，所有代谢参数的活性与对照相似。结果显示于表10中。 
表10：不同血细胞比容值RBC的病原体灭活的代谢参数 
实施例13：稀释RBC的体外功能和病原体灭活
从500mL收集的白细胞降低的全血部分制备SAG-M RBC部分。对于RBC功能研究，通过ABO血型合并SAG-M RBC部分，并且分配给相适的测试和对照部分。在处理之前，将150mL包含28.8mM甘露醇、1.3mM腺嘌呤、16.2mM磷酸钠、20mM柠檬酸钠，pH7.5的稀释溶液加入测试部分中。用GSH钠盐和终浓度各自为20mM和0.2mM的S-303处理测试部分。将测试部分在室温(RT)下培养至多20小时。在RT培养后，将该部分离心并将上清液与100mL SAG-M交换，将其在4℃贮藏之前加入。在SAG-M中制备对照RBC部分，并在4℃下贮藏。通过在不同时间点取样，在4℃的大约6周贮藏过程中评价所有部分。对于RBC病原体灭活研究，将SAG-M RBC分成两半，在加入处理溶液 和GSH之前，将RBC部分接种病原体。在加入处理溶液和GSH后，从该部分中取出对照样品(5mL至7mL)，以测定输入病原体滴定度，并用S-303处理剩余的部分。在室温下静置培养3小时后，将处理过的部分取样，用于残余活病原体滴定。 
在贮藏过程中用体外试验在不同的时间点评价体外代谢和物理指数。在Siemens Diagnostics血液气体分析仪中测量37℃下的pH。使用基于荧光素酶的酶试验测量总ATP。制备无细胞上清液，以评价胞外钾(K+)、葡萄糖和乳酸盐。使用 Na/K分析仪通过测量无细胞上清液的K+含量来测定胞外钾。在NexCTTM分析仪上评价胞外葡萄糖和乳酸盐。人工测量了平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)和旋转血细胞比容。通过标准方法(Beutler等和Lew等，2003)进行了渗透脆性测量。将平均红细胞脆性(MCF)限定为50％RBC溶血时的NaCl浓度。 
对于细菌灭活研究，将RBC接种大约6.5log cfu/mL大肠杆菌、粘质沙雷氏菌、金黄色葡萄球菌、小肠结肠炎耶尔森菌或铜绿假单胞菌。对于病毒灭活研究，将RBC接种大约4.1log pfu/mL至6.4logpfu/mL，这取决于病毒。将溶解于盐水中的GSH加入部分中至20mM的终浓度。通过琼脂平板上的菌落形成单位(cfu)的计数来测定细菌滴定度，并通过合适细胞系上的斑形成单位(pfu)来测定病毒滴定度。在计数前将未处理样品连续稀释。在滴定度计数之前，处理过的样品没有稀释。 
以下的表11和12中所示的结果证明了在贮藏持续过程中可接受的RBC代谢功能和生理参数以及可接受的病原体灭活。 
表11：稀释RBC部分的病原体灭活的水合和代谢参数 
N＝4 
表12：稀释RBC部分样品的病原体灭活数据 

Claims (79)

1.一种处理红细胞组合物的方法，其包括：
(a)在处理溶液或稀释剂溶液中混合
(i)有效量的病原体灭活化合物，所述化合物为β-丙氨酸、N-(吖啶-9-基)、2-[双(2-氯乙基)氨基]乙酯；
(ii)有效量的猝灭剂，所述猝灭剂为谷胱甘肽；
(iii)包含红细胞的组合物；和
(iv)0.5至1.5当量的碱，其中当量意思是等同于混合物中猝灭剂的摩尔量的摩尔量；
其中所述处理溶液或稀释剂溶液包含一种或多种以下的成分：右旋糖、腺嘌呤、甘露醇、柠檬酸盐、柠檬酸；并且
其中在加入处理溶液或稀释剂溶液后在步骤(a)的混合物中包含40mM和100mM之间的氯离子；
和
(b)用新鲜添加剂溶液替换在步骤(a)中处理红细胞组合物过程中使用的溶液，以致于使混合物中的猝灭剂浓度降低至低于10mM，其中所述添加剂溶液包含一种或多种以下的成分：10mM至150mM葡萄糖、0.5mM至5mM腺嘌呤、10mM至150mM甘露醇、5mM至75MM柠檬酸盐、3mM至75mM磷酸盐和50mM至250mM氯化物。
2.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中碱是足量的，以相对于无碱的混合物而言，降低混合物中病原体灭活化合物与红细胞的不利反应水平。
3.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中处理溶液包含一种或多种的以下成分：右旋糖、腺嘌呤、甘露醇、柠檬酸盐、柠檬酸、磷酸盐和氯化物。
4.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中稀释剂溶液包含一种或多种以下的成分：右旋糖、腺嘌呤、甘露醇、柠檬酸盐、柠檬酸、磷酸盐和氯化物。
5.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中包含红细胞的组合物(iii)进一步包含添加剂溶液。
6.权利要求2的处理红细胞组合物的方法，其中病原体灭活化合物与红细胞的不利反应是病原体灭活化合物对红细胞表面的改变。
7.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中在将病原体灭活化合物与红细胞组合物混合之前、同时、或之后不超过30分钟时，将碱和猝灭剂与红细胞组合物混合。
8.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中在将碱或猝灭剂与红细胞组合物混合之前，将碱和猝灭剂混合在一起。
9.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中碱是NaOH。
10.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中碱是碱性缓冲剂。
11.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中碱包含0.75至1.25当量的碱，其中当量意思是等同于步骤(a)混合物中猝灭剂摩尔量的摩尔量。
12.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中碱包含1当量的碱，其中当量意思是等同于步骤(a)混合物中猝灭剂摩尔量的摩尔量。
13.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(a)所得到的混合物在37℃下具有6.5至7.1的pH。
14.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中猝灭剂是谷胱甘肽一钠盐。
15.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(a)所得到的混合物中的猝灭剂浓度高于2mM。
16.权利要求15的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(a)所得到的混合物中的猝灭剂浓度为5mM至30mM。
17.权利要求15的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(a)所得到的混合物中的猝灭剂浓度为15mM至25mM。
18.权利要求15的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(a)所得到的混合物中的猝灭剂浓度为20mM。
19.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(b)包括混合物的离心接着除去混合物的上清液。
20.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(b)中包括大小-排阻分离。
21.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(b)包括压榨设备的使用。
22.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(b)所得到的混合物中的猝灭剂浓度低于8mM。
23.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(b)所得到的混合物中的猝灭剂浓度低于6mM。
24.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(a)所得到混合物中的病原体灭活化合物的浓度为0.1μM至5mM。
25.权利要求24的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(a)所得到混合物中的病原体灭活化合物的浓度足以灭活红细胞组合物中至少3log的病原体，如果存在的话。
26.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(a)和步骤(b)之间的时间为1至48小时。
27.权利要求26的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(a)和步骤(b)之间的时间为4至30小时。
28.权利要求27的处理红细胞组合物的方法，其中处理灭活红细胞组合物中至少3log的病原体污染物，如果存在的话。
29.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，进一步包括降低混合物中病原体灭活化合物浓度的步骤。
30.权利要求29的处理红细胞组合物的方法，其中降低混合物中猝灭剂浓度和降低混合物中病原体灭活化合物浓度的步骤同时进行。
31.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中在步骤(a)后，与来自相同条件下的相同方法，但没有使用碱的红细胞的抗体结合能力值相比，所得到混合物的红细胞具有低于55％的抗体结合能力。
32.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(a)后20小时时，与来自相同条件下的相同方法，但没有使用碱的红细胞的抗体结合能力值相比，所得到混合物的红细胞具有低于65％的抗体结合能力。
33.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中所得到混合物的红细胞具有低于50,000的平均抗体结合能力。
34.权利要求33的处理红细胞组合物的方法，其中所得到混合物的红细胞具有低于40,000的平均抗体结合能力。
35.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中所得到混合物的红细胞具有在25,000与70,000之间的平均抗体结合能力。
36.权利要求35的处理红细胞组合物的方法，其中所得到混合物的红细胞具有在35,000与45,000之间的平均抗体结合能力。
37.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中所得到混合物的红细胞在步骤(b)后具有低于1％的溶血。
38.权利要求37的处理红细胞组合物的方法，其中所得到混合物的红细胞在步骤(b)后在4℃下42天时具有低于1％的溶血。
39.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中所得到混合物的红细胞在步骤(b)后具有高于50％的压积细胞体积。
40.权利要求39的处理红细胞组合物的方法，其中所得到混合物的红细胞在步骤(b)后在4℃下42天时具有高于50％的压积细胞体积。
41.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中所得到混合物的红细胞在步骤(b)后在4℃下42天后具有高于140mOsm的平均红细胞脆性值。
42.通过权利要求1-41任一项的方法产生的红细胞组合物在制备用于将红细胞输入个体的药物中的用途。
43.一种降低红细胞组合物脱水的方法，其中该组合物是包含猝灭剂，所述猝灭剂为谷胱甘肽，0.5至1.5当量的碱，其中当量意思是等同于混合物中猝灭剂的摩尔量，红细胞，和处理溶液或稀释剂溶液的混合物；其中所述处理溶液或稀释剂溶液包含一种或多种以下的成分：右旋糖、腺嘌呤、甘露醇、柠檬酸盐和柠檬酸；并且其中所述红细胞组合物包含40mM和100mM之间的氯离子；该方法包括用新鲜添加剂溶液替换混合物中的溶液，以致于使混合物中的猝灭剂浓度降低至低于10mM，其中所述添加剂溶液包含一种或多种以下的成分：10mM至150mM葡萄糖、0.5mM至5mM腺嘌呤、10mM至150mM甘露醇、5mM至75mM柠檬酸盐、3mM至75mM磷酸盐和50mM至250mM氯化物。
44.权利要求43的降低红细胞组合物脱水的方法，其中猝灭剂是谷胱甘肽一钠盐。
45.权利要求44的降低红细胞组合物脱水的方法，其中猝灭剂的浓度降至低于8mM。
46.权利要求44的降低红细胞组合物脱水的方法，其中猝灭剂的浓度降至低于6mM。
47.权利要求43的降低红细胞组合物脱水的方法，其中混合物的红细胞在降低猝灭剂浓度后具有低于1％的溶血。
48.权利要求47的降低红细胞组合物脱水的方法，其中混合物的红细胞在降低猝灭剂浓度后在4℃下42天时具有低于1％的溶血。
49.权利要求43的降低红细胞组合物脱水的方法，其中混合物的红细胞在降低猝灭剂浓度后具有高于50％的收集细胞体积。
50.权利要求49的降低红细胞组合物脱水的方法，其中混合物的红细胞在降低猝灭剂浓度后在4℃下42天时具有高于50％的收集细胞体积。
51.权利要求43的降低红细胞组合物脱水的方法，其中混合物的红细胞在降低猝灭剂浓度后4℃下42天后具有高于140mOsm的平均红细胞脆性值。
52.一种组合物，其包含通过权利要求1-41或43-51任一项的方法产生的红细胞。
53.一种组合物，其包含通过权利要求1-41或43-51任一项的方法可制备的红细胞。
54.一种组合物，其包含：
(a)通过权利要求1-41或43-51任一项的方法可制备的红细胞，其中所述红细胞与病原体灭活化合物的亲电子基团共价结合，所述化合物为β-丙氨酸、N-(吖啶-9-基)、2-[双(2-氯乙基)氨基]乙酯；和
(b)猝灭剂，所述猝灭剂为谷胱甘肽，其中所述猝灭剂的浓度低于10mM；
其中所述红细胞在4℃下28天后具有高于150mOsm的平均红细胞脆性值。
55.权利要求54的组合物，其中灭活了至少3log的病原体，如果存在的话。
56.权利要求54的组合物，其中亲电子基团与红细胞的细胞表面共价结合。
57.权利要求54的组合物，其中猝灭剂是谷胱甘肽一钠盐。
58.权利要求54的组合物，其中猝灭剂浓度低于8mM。
59.权利要求54的组合物，其中猝灭剂浓度低于6mM。
60.权利要求54的组合物，其中红细胞具有高于55％的收集细胞体积。
61.权利要求60的组合物，其中红细胞具有高于60％的收集细胞体积。
62.权利要求54的组合物，其中红细胞具有低于50,000的平均抗体结合能力。
63.权利要求62的组合物，其中红细胞具有低于40,000的平均抗体结合能力。
64.权利要求54的组合物，其中红细胞具有在25,000与70,000之间的平均抗体结合能力。
65.权利要求64的组合物，其中红细胞具有在35,000与45,000之间的平均抗体结合能力。
66.权利要求54的组合物，其中所述组合物进一步包含新鲜添加剂溶液，该溶液包含一种或多种右旋糖、氯化钠、腺嘌呤、鸟苷、葡萄糖、柠檬酸盐、柠檬酸、磷酸盐和甘露醇。
67.权利要求54的红细胞组合物在制备用于将红细胞输入个体的药物中的用途。
68.权利要求8的处理红细胞组合物的方法，其中混合碱和猝灭剂形成猝灭剂的盐形式。
69.权利要求68的处理红细胞组合物的方法，其中盐形式是谷胱甘肽钾或谷胱甘肽钠。
70.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(a)之后和步骤(b)之前的氯化物浓度低于75mM。
71.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(a)中包含红细胞的组合物具有在70与90％之间的收集细胞体积。
72.权利要求71的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(a)中包含红细胞的组合物具有在75与85％之间的收集细胞体积。
73.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(a)中包含红细胞的组合物具有在50与70％之间的收集细胞体积。
74.权利要求73的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(a)中包含红细胞的组合物具有在55与70％之间的收集细胞体积。
75.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(a)中包含红细胞的组合物具有在30与50％之间的收集细胞体积。
76.权利要求75的处理红细胞组合物的方法，其中步骤(a)中包含红细胞的组合物具有在35与45％之间的收集细胞体积。
77.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，步骤(a)中的红细胞已经是白细胞降低的。
78.权利要求1的处理红细胞组合物的方法，步骤(a)中的红细胞不是白细胞降低的。
79.权利要求54的组合物，进一步包含一种或多种右旋糖、氯化钠、腺嘌呤、鸟苷、葡萄糖、柠檬酸盐、柠檬酸、磷酸盐和甘露醇。
CN200980119812.5A 2008-04-09 2009-04-09 用于红细胞病原体灭活的改进猝灭方法 Active CN102046006B (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US4366608P 2008-04-09 2008-04-09
US61/043,666 2008-04-09
US8703408P 2008-08-07 2008-08-07
US61/087,034 2008-08-07
PCT/US2009/040032 WO2009126786A2 (en) 2008-04-09 2009-04-09 Improved quenching methods for red blood cell pathogen inactivation

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102046006A CN102046006A (zh) 2011-05-04
CN102046006B true CN102046006B (zh) 2014-09-24

Family

ID=41162599

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200980119812.5A Active CN102046006B (zh) 2008-04-09 2009-04-09 用于红细胞病原体灭活的改进猝灭方法

Country Status (16)

Country Link
US (3) US8900805B2 (zh)
EP (2) EP2285210B1 (zh)
JP (2) JP5916383B2 (zh)
KR (2) KR101742533B1 (zh)
CN (1) CN102046006B (zh)
AU (1) AU2009233807B2 (zh)
BR (1) BRPI0911176B8 (zh)
CA (1) CA2720824C (zh)
EA (1) EA023596B1 (zh)
ES (1) ES2636563T3 (zh)
HK (1) HK1157140A1 (zh)
IL (1) IL208431A (zh)
MX (1) MX2010011018A (zh)
SG (2) SG10201605663UA (zh)
WO (1) WO2009126786A2 (zh)
ZA (1) ZA201006936B (zh)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102046006B (zh) 2008-04-09 2014-09-24 塞鲁斯公司 用于红细胞病原体灭活的改进猝灭方法
US11284616B2 (en) 2010-05-05 2022-03-29 Hemanext Inc. Irradiation of red blood cells and anaerobic storage
US9199016B2 (en) 2009-10-12 2015-12-01 New Health Sciences, Inc. System for extended storage of red blood cells and methods of use
EP3194576B1 (en) 2014-07-23 2020-11-18 Cerus Corporation Methods for preparing platelet products
CA2978940C (en) 2015-03-10 2023-10-17 New Health Sciences, Inc. Oxygen reduction disposable kits, devices and methods of use thereof
KR102661405B1 (ko) 2015-04-23 2024-04-25 헤마넥스트 인코포레이티드 혐기성 혈액 저장 용기
BR122021024410B1 (pt) 2015-05-18 2022-05-03 Hemanext Inc Métodos para gerenciar um banco de sangue e para prover fornecimento de produtos de sangue total armazenados para medicina de transfusão
EP3313418B1 (en) 2015-06-26 2024-03-13 Cerus Corporation Cryoprecipitate compositions and methods of preparation thereof
EP3364986B1 (en) 2015-10-23 2023-12-13 Cerus Corporation Pathogen-inactivated cryo-poor plasma and methods of use thereof
KR20190017747A (ko) * 2016-05-27 2019-02-20 뉴 헬스 사이언시즈 인코포레이티드 혐기성 혈액 저장 및 병원체 불활성화 방법
IT201600079328A1 (it) * 2016-07-28 2018-01-28 Altergon Sa Metodo migliorato per la decontaminazione di materiale biologico mediante partizione e inattivazione
US20190369087A1 (en) * 2016-12-23 2019-12-05 Cerus Corporation Systems and methods for testing and screening using compound bound substrates
EP3562493A1 (en) 2016-12-31 2019-11-06 Cerus Corporation Compositions and methods for preparation of red blood cells
US11235090B2 (en) 2017-03-03 2022-02-01 Cerus Corporation Kits and methods for preparing pathogen-inactivated platelet compositions
CN116571191A (zh) 2017-12-29 2023-08-11 塞鲁斯公司 用于处理生物流体的系统和方法
WO2020023881A1 (en) * 2018-07-27 2020-01-30 Zata Pharmaceuticals, Inc. Method for pathogens, microorganisms, and parasites inactivation
IL281504B1 (en) 2018-09-20 2024-04-01 Cerus Corp Methods and kits for preparing pathogen-neutralized whole blood
CA3143732A1 (en) 2019-06-28 2020-12-30 Cerus Corporation System and methods for implementing a biological fluid treatment device

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6093725A (en) * 1997-01-06 2000-07-25 Cerus Corporation Frangible compounds for pathogen inactivation
CN101094692A (zh) * 2004-10-29 2007-12-26 塞鲁斯公司 用于红细胞灭活过程的改进的猝灭方法

Family Cites Families (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2402665A (en) 1942-11-12 1946-06-25 Du Pont Chemical process
IT1093275B (it) 1978-01-26 1985-07-19 Snam Progetti Composizione adatta alla purificazione del sangue e suoi impieghi
US4337269A (en) 1979-07-23 1982-06-29 Sutton Laboratories, Inc. Preservative compositions
US4748120A (en) 1983-05-02 1988-05-31 Diamond Scientific Co. Photochemical decontamination treatment of whole blood or blood components
US4727027A (en) 1983-05-02 1988-02-23 Diamond Scientific Co. Photochemical decontamination treatment of whole blood or blood components
US5281579A (en) 1984-03-23 1994-01-25 Baxter International Inc. Purified virus-free hemoglobin solutions and method for making same
US4971760A (en) 1986-03-10 1990-11-20 University Of Southern California Novel method for disinfecting red blood cells, blood platelets, blood plasma, and optical corneas and sclerae
US4944920A (en) 1986-08-01 1990-07-31 University Of Southern California Novel method to treat blood
US4920143A (en) 1987-04-23 1990-04-24 University Of British Columbia Hydro-monobenzoporphyrin wavelength-specific cytotoxic agents
US5094960A (en) 1988-10-07 1992-03-10 New York Blood Center, Inc. Removal of process chemicals from labile biological mixtures by hydrophobic interaction chromatography
US5055485A (en) 1988-12-02 1991-10-08 New York Blood Center, Inc. Inactivation of viruses in cell- and protein-containing compositions using aryl diol epoxides
US5587490A (en) 1990-04-16 1996-12-24 Credit Managers Association Of California Method of inactivation of viral and bacterial blood contaminants
US5418130A (en) 1990-04-16 1995-05-23 Cryopharm Corporation Method of inactivation of viral and bacterial blood contaminants
US5232844A (en) 1990-05-15 1993-08-03 New York Blood Center Photodynamic inactivation of viruses in cell-containing compositions
US5658722A (en) 1990-05-15 1997-08-19 New York Blood Center, Inc. Process for the sterilization of biological compositions using UVA1 irradiation
US5120649A (en) 1990-05-15 1992-06-09 New York Blood Center, Inc. Photodynamic inactivation of viruses in blood cell-containing compositions
US5753258A (en) 1990-10-19 1998-05-19 University Of Florida Artificial viral envelopes
GB9218581D0 (en) 1992-09-02 1992-10-14 Pall Corp Removal of unwanted fluids from processed blood products
KR960703167A (ko) 1993-06-23 1996-06-19 존 더블유. 아담슨 혈액내 바이러스 불활성화 시스템(system for viral inactivation of blood)
US5591350A (en) 1994-04-15 1997-01-07 Pall Corporation Iodine disinfection method using a gaseous iodine treated porous medium
SE9402472L (sv) 1994-07-13 1996-01-14 Forskarpatent I Linkoeping Ab Modifierade ytor
US5522385A (en) 1994-09-27 1996-06-04 Aradigm Corporation Dynamic particle size control for aerosolized drug delivery
US5660731A (en) 1994-11-08 1997-08-26 Pall Corporation Filter for separating photoactive agent
US5691132A (en) 1994-11-14 1997-11-25 Cerus Corporation Method for inactivating pathogens in red cell compositions using quinacrine mustard
US5637451A (en) 1995-03-29 1997-06-10 New York Blood Center, Inc. Photodynamic treatment of red blood cells with phthalocyanines and red light at higher light fluence rates is protective of red blood cells
US6177441B1 (en) 1995-06-05 2001-01-23 Cerus Corporation Treating red blood cell solutions with anti-viral agents
WO1996040857A1 (en) 1995-06-07 1996-12-19 Cerus Corporation Methods and devices for the removal of psoralens from blood products
AU722811B2 (en) 1995-06-07 2000-08-10 Cerus Corporation Treating red blood cell solutions with anti-viral agents
US20020192632A1 (en) 1995-06-07 2002-12-19 Hei Derek J. Method and devices for the removal of psoralens from blood products
AU703108B2 (en) 1995-06-07 1999-03-18 Baxter International Inc. Method of inactivation of viral and bacterial blood contaminants
US6544727B1 (en) 1995-06-07 2003-04-08 Cerus Corporation Methods and devices for the removal of psoralens from blood products
CA2198085A1 (en) 1995-06-29 1997-01-23 Hemasure, Inc. Inactivation of pathogens using hydroxymethylamines
US6136586A (en) 1995-08-29 2000-10-24 Vi Technologies, Inc. Methods for the selective modification of viral nucleic acids
US6114108A (en) 1995-08-29 2000-09-05 V.I. Technologies, Inc. Methods and compositions for the selective modification of viral nucleic acids
DE69627202T2 (de) 1995-11-06 2003-11-13 New York Blood Ct Inc Behandlung von roten blutzellen zur inaktivierung von virien durch verwendung von pathalocyanine und rotlicht
WO1997018844A1 (en) 1995-11-21 1997-05-29 Pall Corporation Inactivation method and system in biological fluids
US20010009756A1 (en) 1998-01-06 2001-07-26 Derek Hei Flow devices for the reduction of compounds from biological compositions and methods of use
CN101676268B (zh) 1997-01-06 2013-09-25 塞鲁斯公司 用于病原体灭活的脆性化合物
US20010018179A1 (en) 1998-01-06 2001-08-30 Derek J. Hei Batch devices for the reduction of compounds from biological compositions containing cells and methods of use
US6514987B1 (en) 1997-01-06 2003-02-04 Cerus Corporation Frangible compounds for pathogen inactivation
US6093564A (en) 1997-10-03 2000-07-25 V.I. Technologies, Inc. Methods and compositions for the selective modification of nucleic acids
WO1999034839A1 (en) 1998-01-06 1999-07-15 Cerus Corporation Methods for quenching pathogen inactivators in biological materials
US20030073650A1 (en) * 1998-07-21 2003-04-17 Heather Reddy Method and apparatus for inactivation of biological contaminants using photosensitizers
US6150109A (en) 1999-01-25 2000-11-21 V. I. TECHNOLOGIES, Inc. Lipophilic quenching of viral inactivating agents
US6288122B1 (en) 1999-02-23 2001-09-11 Icagen, Inc. Gardos channel antagonists
EP1284743A2 (en) 2000-05-31 2003-02-26 Cerus Corporation Preparation of a pathogen inactivated solution of red blood cells having reduced immunogenicity
TW590780B (en) 2000-06-02 2004-06-11 Gambro Inc Additive solutions containing riboflavin
EP1365750A2 (en) * 2000-12-21 2003-12-03 Cerus Corporation Methods for inactivation of pathogens in biological materials
CN102046006B (zh) 2008-04-09 2014-09-24 塞鲁斯公司 用于红细胞病原体灭活的改进猝灭方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6093725A (en) * 1997-01-06 2000-07-25 Cerus Corporation Frangible compounds for pathogen inactivation
CN101094692A (zh) * 2004-10-29 2007-12-26 塞鲁斯公司 用于红细胞灭活过程的改进的猝灭方法

Also Published As

Publication number Publication date
HK1157140A1 (zh) 2012-06-29
CA2720824C (en) 2021-09-14
US20150157665A1 (en) 2015-06-11
EA201071178A1 (ru) 2011-06-30
SG189745A1 (en) 2013-05-31
JP2011516570A (ja) 2011-05-26
EP2285210B1 (en) 2017-05-17
US20180008639A1 (en) 2018-01-11
WO2009126786A3 (en) 2010-07-15
BRPI0911176B8 (pt) 2021-05-25
SG10201605663UA (en) 2016-09-29
US9713627B2 (en) 2017-07-25
ES2636563T3 (es) 2017-10-06
BRPI0911176B1 (pt) 2019-10-15
KR101742533B1 (ko) 2017-06-01
JP2014231528A (ja) 2014-12-11
JP5916383B2 (ja) 2016-05-11
CN102046006A (zh) 2011-05-04
AU2009233807A1 (en) 2009-10-15
MX2010011018A (es) 2010-11-12
EA023596B1 (ru) 2016-06-30
EP3257375A1 (en) 2017-12-20
KR20170037682A (ko) 2017-04-04
AU2009233807B2 (en) 2014-11-27
EP2285210A2 (en) 2011-02-23
BRPI0911176A2 (pt) 2015-07-28
CA2720824A1 (en) 2009-10-15
KR20110009134A (ko) 2011-01-27
ZA201006936B (en) 2016-03-30
WO2009126786A2 (en) 2009-10-15
IL208431A0 (en) 2010-12-30
IL208431A (en) 2016-10-31
US20110286987A1 (en) 2011-11-24
US10357516B2 (en) 2019-07-23
US8900805B2 (en) 2014-12-02
KR101896430B1 (ko) 2018-09-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102046006B (zh) 用于红细胞病原体灭活的改进猝灭方法
CN103961731B (zh) 用于红细胞灭活过程的改进的猝灭方法
US20230263833A1 (en) Compositions and methods for preparation of red blood cells
US20190085289A1 (en) Compositions and methods for pathogen inactivation of platelets
US20020042043A1 (en) Preparation of a pathogen inactivated solution of red blood cells having reduced immunogenicity

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1157140

Country of ref document: HK

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: GR

Ref document number: 1157140

Country of ref document: HK