CN102038710B - 一种蜂毒注射液的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种蜂毒注射液的制备方法，它包括以下步骤：(a)按照质量体积比1∶20～30∶5～7的比例，量取蜂毒、注射用水、辛醇；(b)将蜂毒溶于注射用水中后，倒入辛醇萃取；萃取液经葡聚糖凝胶柱分离。(c)蜂毒液体在-10～-15℃条件下，冷冻1～2小时；用配好的缓冲液将冷冻后的蜂毒溶液稀释至标示量；经超滤设备超滤后，按照加入0.05～0.1％的甘氨酸，搅拌，粗滤、精滤封装。本发明方法所制蜂毒注射液，质量稳定，产品合格率高。

Description

一种蜂毒注射液的制备方法

技术领域：

本发明涉及药品制剂的制备方法，具体地说是一种蜂毒注射液的制备方法。

背景技术：

蜂毒是一种透明的液体，具有特殊的芳香气味，味苦，呈酸性。pH值为5.0-5.5。比重为1.313。蜂毒具有抗炎和镇痛作用，可用于治疗风湿性关节炎，类风湿性关节炎，周围神经炎及神经痛等疾病。目前临床使用的蜂毒制剂主要为蜂毒注射液。由于蜂毒溶液不稳定，容易污染杂菌和变质，在常温下通常只能保存几天。而对蜂毒进行加热灭菌处理，其药效则可完全丧失。因此，如何制备质量稳定可靠的蜂毒注射液，一直是医药研究人员关注的重点问题。

CN101259144公开了一种蜂毒注射液制备方法，它包括以下步骤：(1)溶解：取蜂毒按一定重量比例，加水溶解，若含脂较多用50％(V/V)乙醚脱脂二次，加热，挥尽残留乙醚，过滤，除去不溶性杂质。(2)分离提取：将葡聚糖凝胶G-50用注射用水浸泡12小时后，用注射用水反复清洗3次(除去细小微粒)，装入层析柱中，接好给水系统，用注射用水冲洗2小时备用。(3)将药液加入葡聚糖凝胶中，使药液在葡聚糖凝胶柱中进行分离提取。出液口用紫外监测记录仪监测收集(控制流速每分钟5ml)，在波长280nm处有吸收成份，即收集到玻璃瓶中，至蛋白峰流尽为止。(4)将上述流出液过10万分子量超滤柱过滤。(5)制剂：上述过滤液测定含量后，稀释至规定的浓度，除菌过滤，灌封灭菌即得蜂毒注射液。

该方法忽略了蜂毒不稳定的特性，因此其产品质量难以控制。

发明内容

本发明的目的就是要提供一种蜂毒注射液的制备方法，以有效提高蜂毒注射液的质量稳定性。

本发明的目的是这样实现的：

本发明所提供的蜂毒注射液的制备方法，包括以下步骤：

(a)蜂毒溶于少量注射用水中，按照质量体积比1∶20～30∶5～7的比例，量取蜂毒、注射用水、辛醇；

(b)将蜂毒溶于注射用水中后，倒入蜂毒萃取；萃取液经葡聚糖凝胶柱分离，在波长280nm处收集蜂毒液体；

(c)将上述蜂毒液体在-10～-15℃条件下，冷冻1～2小时；

(d)用水温在30℃以下的注射用水配制KH₂PO₄缓冲液，pH值控制在4.5～5.5，然后，用配好的缓冲液将冷冻后的蜂毒溶液稀释至标示量；

(e)蜂毒溶液经5000～10000分子量超滤设备超滤后，按照质量体积比加入0.05～0.1％的甘氨酸，搅拌均匀，加0.1～0.2％活性炭，搅拌后粗滤，检验合格后，料液经过0.2um滤膜除菌过滤的后进行封装即得。

本发明中(a)步工序所说的蜂毒、注射用水、辛醇的用量配比优选：1∶20∶7。

本发明方法中选用辛醇(如正辛醇、仲辛醇、异辛醇)，作为萃取剂萃取蜂毒，既提高了蜂毒的纯度，又降低成本，简化了工艺。再辅以将经葡聚糖凝胶柱进行分离收集的蜂毒液体在-10～-15℃条件下，冷冻1～2小时再进行配制，由此进一步抑制了蜂毒活性成分的氧化变质，提高了药品质量的稳定性。

本发明方法加入稳定剂甘氨酸，不但可以防止氧化，还可以起到保护细胞，与蜂毒一起共同起到抗炎作用。

具体实施方式

以下通过具体实施例对本发明作进一步的详述：

实施例1

称取蜂毒5g，用注射用水100ml将其溶解，加入500ml分液漏斗中，用35ml正辛醇萃取2次，将水层放出。用葡聚糖凝胶柱进行分离，在波长280nm处收集得到蜂毒液体，将其放置在-10～-15℃冷冻2小时待用；再用30℃以下注射用水配制0.2mol/L KH₂PO₄缓冲液200ml，pH值控制在4.5-5.5。然后用配好的缓冲液将冷冻后的蜂毒溶液溶解，加入注射用水约至20000ml，用5000分子量超滤设备超滤，滤液中加入10g甘氨酸，加20g活性炭，除热源，充分搅拌后粗滤，检验合格后，料液经过0.2um滤膜除菌过滤的后进行封装即得。

配料、分装生产过程要求在百级洁净环境下进行，并充氮气保护。

制剂规格：2ml∶0.5mg。

实施例2

称取蜂毒5g，用注射用水200ml将其溶解，加入500ml分液漏斗中，用25ml异辛醇萃取2次，将水层放出。用葡聚糖凝胶柱进行分离(葡聚糖凝胶G-10(40～120m)，流动相A 0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)，流动相B水，流速1.5ml/min)，在波长280nm处收集得到蜂毒液体，将其放置在-15℃冷冻1小时待用；再用30℃以下注射用水配制0.2mol/L KH₂PO₄缓冲液200ml，pH值控制在5.2。然后用配好的缓冲液将冷冻后的蜂毒溶液溶解，加入注射用水约至20000ml，用10000分子量超滤设备超滤，滤液中加入20g甘氨酸，加40g活性炭，除热源，充分搅拌后粗滤，检验合格后，料液经过0.2um滤膜除菌过滤的后进行封装即得。

配料、分装生产过程要求在百级洁净环境下进行，并充氮气保护。

实施例3(按照CN101259144公开的蜂毒注射液制备方法制备)

(1)溶解：取蜂毒5g，加100ml水注射用水溶解，加50％(V/V)乙醚脱脂二次，加热，挥尽残留乙醚，过滤，除去不溶性杂质。

(2)分离提取：将葡聚糖凝胶G-50用注射用水浸泡12小时后，用注射用水反复清洗3次，装入层析柱中，接好给水系统，用注射用水冲洗2小时备用。

(3)将药液加入葡聚糖凝胶中，使药液在葡聚糖凝胶柱中进行分离提取。出液口用紫外监测记录仪监测收集(控制流速每分钟5ml)，在波长280nm处有吸收成份，即收集到玻璃瓶中，至蛋白峰流尽为止。

(4)将上述流出液过10万分子量超滤柱过滤。

(5)制剂：上述过滤液测定含量后，稀释至规定的浓度，除菌过滤，灌封灭菌即得蜂毒注射液。

实施例4  强光照射、高温对不同方法所制蜂毒注射液的影响。

根据中国药典2005年版的有关要求，选择光照、高温60℃作为影响因素对样品进行考察。

取实施例1、2、3所制样品置于烘箱内，控制温度60±2℃，于0天、5天、10天取样考察；

取实施例1、2、3所制样品置于光橱内，控制光度4500±500LX，于0天、5天、10天取样考察。

结果详见表1、表2、表3。

表1：实施例1产品测试结果。

表2：实施例2产品测试结果。

表3：实施例3产品测试结果。

实施例5  加速试验对不同方法所制蜂毒注射液的影响。

试验方法：

将按照实施例1、2、3所制备的蜂毒注射液，在温度40±2℃、湿度75％±5％的条件下放置6个月，在试验期间第1个月、第2个月、第3个月、第6个月末分别取样1次，按稳定性考察项目检测，结果见表5.

表5：

上述试验表明，本发明方法所制蜂毒注射液，质量稳定，产品合格率高。

Claims (2)

1.一种蜂毒注射液的制备方法，其特征在于它包括以下步骤：

(a)称取蜂毒5g，用注射用水100ml将其溶解，加入500ml分液漏斗中，用35ml正辛醇萃取2次，将水层放出；用葡聚糖凝胶柱进行分离，在波长280nm处收集得到蜂毒液体，将其放置在-10～-15℃冷冻2小时待用；

(b)再用30℃以下注射用水配制0.2mol/L KH₂PO₄缓冲液200ml，pH值控制在4.5-5.5；

(c)然后用配好的缓冲液将冷冻后的蜂毒溶液溶解，加入注射用水约至20000ml，用5000分子量超滤设备超滤，滤液中加入10g甘氨酸，加20g活性炭，除热源，充分搅拌后粗滤，检验合格后，料液经过0.2um滤膜除菌过滤的后进行封装即得；

配料、分装生产过程要求在百级洁净环境下进行，并充氮气保护。

2.一种蜂毒注射液的制备方法，其特征在于它包括以下步骤：

(a)称取蜂毒5g，用注射用水200ml将其溶解，加入500ml分液漏斗中，用25ml异辛醇萃取2次，将水层放出；用葡聚糖凝胶柱进行分离，流动相A0.1mol/L磷酸盐缓冲液，流动相B水，流速1.5ml/min，在波长280nm处收集得到蜂毒液体，将其放置在-15℃冷冻1小时待用；

(b)再用30℃以下注射用水配制0.2mol/L KH₂PO₄缓冲液200ml，pH值控制在5.2；

(c)然后用配好的缓冲液将冷冻后的蜂毒溶液溶解，加入注射用水约至20000ml，用10000分子量超滤设备超滤，滤液中加入20g甘氨酸，加40g活性炭，除热源，充分搅拌后粗滤，检验合格后，料液经过0.2um滤膜除菌过滤的后进行封装即得；

配料、分装生产过程要求在百级洁净环境下进行，并充氮气保护。