CN101416939B - 葛根素液体制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种葛根素液体制剂及其制备方法。该方法包括如下步骤：将葛根素溶于水中，再向其中加入等渗调节剂，混匀得到溶液I；将溶液I进行0.22μm孔径过滤，得到滤液a；再将滤液a用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤，得到滤液b；将滤液b进行0.22μm孔径过滤，得到滤液c；将滤液c进行0.22μm孔径过滤，得到葛根素液体制剂。本发明的葛根素制剂的制备方法，克服了现有制剂中不良反应因素多的缺点。实验证明，本发明方法得到的制剂中不含增溶剂，其它微粒及菌的含量低，葛根素纯度高，稳定性好；而且本发明方法生产的各批样品质量均符合质量标准，批间稳定，质量可靠；本发明方法工艺简单，便于生产操作和控制，适合大规模生产。

Description

葛根素液体制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种葛根素液体制剂及其制备方法。

背景技术

葛根素(puerarin，Pur)，化学名称为4，7-二羟基-8-β-D-葡萄糖基异黄酮，相对分子量为416。葛根素是中药葛根中的有效成分，可以从豆科植物野葛根或甘葛藤根中提取得到。葛根素在扩张血管和降压方面比硝酸酯类效果要好，因为其在扩张血管、降低血压时既能使心率减慢，又能降低心肌耗氧量。葛根素还能降低血小板表面活性，抑制血小板黏附和聚集，抗血栓形成，改善微循环。葛根素在治疗冠心病、心绞痛、高血压、肾病综合征、心力衰竭、缺血性脑血管疾病、突发性耳聋、帕金森病等方面有很好的疗效。葛根素可直接作用于血管平滑肌，通过抑制肾上腺素受体使血管舒张；葛根素通过影响内皮祖细胞(EPC)参与内皮保护作用，以改善冠心病患者的临床症状和预后；葛根素通过改善脂肪酸代谢，抑制炎症及稳定动脉粥样硬化斑块，抑制心肌细胞内钙超载途径(心肌Ica—L)，起到抗心肌缺血和低氧的作用。

虽然葛根素注射剂具有很好的临床疗效，但现有的葛根素注射剂在国家不良反应信息中心的不良反应报告数较多，原因主要如下：

1、葛根素是通过植物提取、半合成的药物，其原料中可能含有大分子的植物蛋白，导致产生不良反应；

2、有些注射剂处方中含有大量的增溶剂丙二醇，丙二醇引起不良反应；

3、现有的葛根素注射剂的制备工艺中，通常采用活性炭脱炭工艺去除药液中的热原。但是活性炭带有电荷，其进入注射剂后会分散在注射用水中构成胶体溶液，能透过滤棒或滤膜，从而使注射剂污染了新的微粒杂质，这种微粒不能在体内代谢，故可能引发肉芽肿、肺水肿、静脉炎、血栓、组织坏死、过敏、热原、肿瘤样反应等多种反应。

综上，葛根素注射剂的不良反应较多，归根结底是因为其中的大分子等杂质不能彻底清除，所以设计完善的制备工艺对提高产品质量、降低不良反应发生率有着重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种制备葛根素液体制剂的方法。

本发明所提供的制备葛根素液体制剂的方法，包括如下步骤：

将葛根素溶于水中，再向其中加入等渗调节剂，混匀得到溶液I；

将溶液I进行0.22μm孔径过滤，得到滤液a；再将滤液a用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤，得到滤液b；将滤液b进行0.22μm孔径过滤，得到滤液c；将滤液c进行0.22μm孔径过滤，得到葛根素液体制剂。

其中，所述等渗调节剂可以为氯化钠或葡萄糖。

所述水的温度可以为80-90℃；所述水为注射用水。

所述葛根素、所述等渗调节剂的质量比为1-2：4-50。

所述方法中，先将所述溶液I的温度降低至大于等于40℃小于等于45℃，再进行过滤。

所述方法中，在将所述溶液I进行所述过滤前，先将所述溶液I的pH值调节至5.0-5.3。

所述pH值是用盐酸、磷酸、枸橼酸、冰醋酸中的任一种进行调节的。

所述方法中还可包括将所述葛根素液体制剂灭菌的步骤；所述灭菌的方法是在115℃-121℃的条件下，热压灭菌15-50分钟。

所述液体制剂为输液剂或注射剂。

上述任一所述方法制得的葛根素液体制剂也属于本发明的保护范围。

本发明的葛根素制备方法中，先溶解葛根素，再溶解等渗调节剂，有利于葛根素的溶解，克服了葛根素微溶于水的缺陷；

将溶解后的溶液的PH值调节在5.0-5.3，能够使葛根素更加稳定，不降解，能够使灭菌后产品仍然达到无色，并能够使产品在贮藏期内颜色也没有变化，符合药品质量标准规定的“与黄色1号标准比色液比较不得更深”的要求；

将溶解后的溶液进行过滤前，先将溶液的温度调节在45℃以下，使葛根素中的某些大分子物质或杂质通过温度的降低而析出，在接下来的过滤操作中易被滤掉；

过滤过程中，使用0.22μm滤器循环过滤，去除了细菌和颗粒以及不溶性杂质，减轻超滤膜的负荷；10000道尔顿分子量的超滤膜超滤，去除了内毒素和原料中可能存在的大分子植物蛋白，提高溶液的澄清度，降低葛根素输液剂不良反应的发生率，提高了产品的安全性；超滤后再进行2道0.22μm滤器循环过滤，进一步去除了细菌，消除了浓度梯度，提高了溶液的澄明度。采用这样的配滤工艺，减少了杂质的引入，防止细菌的产生，提高了葛根素在溶液状态下的稳定性。

最后的灭菌步骤中，采用的工艺条件是115℃-121℃，热压灭菌15-50分钟，使产品的无菌水平达到F0值大于8的残存概率法和F0值大于12的过度杀灭法的要求，使产品达到无菌保证的要求。

本发明制备方法中没有引入活性炭，避免了使用活性炭后造成将活性炭微粒引入制剂中从而对人体产生伤害的危险，同时保证制剂中有效成分的稳定性、成品的安全性。

本发明的葛根素制剂的制备方法，克服了现有制剂中不良反应因素多的缺点。实验证明，本发明方法得到的制剂中不含增溶剂，其它微粒及菌的含量低，葛根素纯度高，稳定性好；而且本发明方法生产的各批样品质量均符合质量标准，批间稳定，质量可靠；本发明方法工艺简单，便于生产操作和控制，适合大规模生产。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所使用的葛根素均购自陕西镇坪制药厂，其产品批号是20050702。

加速试验：是在加速条件下进行，其目的是通过加速药物的化学或物理变化，探讨药物的稳定性，为制剂设计、包装、运输、贮存提供必要的资料。供试品要求三批，按市售包装，在温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月，分别于1、2、3、6个月取样进行检测。

长期试验：是在接近药物的实际贮存条件下进行，其目的是为制定药物的有效期提供依据。供试品三批，市售包装，在温度25±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置36个月，分别于0、3、6、9、12、18、24、36个月取样进行检测。

实施例1、葛根素注射剂的制备

一、葛根素注射剂的制备

在无菌操作室中，将1g葛根素溶解于80℃的注射用水中，再加入4g氯化钠搅拌至充分溶解，得到溶液I；用10％盐酸溶液调节溶液I的pH值至5.0；

在无菌操作室中，将上述溶液I温度降低至40℃，然后将溶液I用0.22μm滤器进行过滤，得到滤液a；将滤液a用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤，得到滤液b；用注射用水将滤液b补足至1000ml，再用0.22μm滤器进行过滤，得到滤液c；再将滤液c用0.22μm滤器过滤，得到滤液d。

对滤液d进行如下指标检验，葛根素含量、等渗调节剂的含量、药液PH值、色泽、可见异物、不溶性微粒、有关物质；检验合格，将滤液d封装于输液瓶或袋中，再经115℃热压灭菌30分钟，即得到葛根素注射剂。

二、葛根素注射剂的检测

取按照步骤一所述方法制备的、不同批次的、保存不同时间的葛根素注射剂进行如下检测。

1、检测葛根素的含量

对滤液d和注射剂中葛根素含量分别检测，均按照如下方法进行。

精密量取注射剂(或滤液d)，向其中加入流动相(流动相为甲醇-0.1％枸橼酸溶液(体积比为25：75))，稀释制成每1ml含0.05mg葛根素的溶液，混匀，作为供试液；另取葛根素对照品(来源于中国药品生物制品检定所，批号：110752-200511)，用流动相稀释成每1ml含葛根素0.05mg的溶液作为对照液。

按照下述步骤进行检测：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％枸橼酸溶液(25：75)为流动相；检测波长为250nm，进样量20μl，流速1.0ml/min，主成分峰的保留时间为25～30min。

分别取上述供试液和对照液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算葛根素含量，计算公式如下：

检测结果如表1-1和表1-2所示，结果表明，葛根素在滤液d和注射剂中的浓度相同，葛根素的含量在灭菌前后没有变化，且在加速实验和长期实验中，注射剂中的葛根素含量均在97％以上，符合要求，表明本发明的注射剂中葛根素稳定，注射剂中没有其它降解产物。

2、检测葛根素注射剂中的“有关物质”的含量

“有关物质”的定义：药剂中除了葛根素以外的其它物质。

检测方法：取注射剂，向其中加流动相(流动相组成为：甲醇-0.1％枸橼酸溶液(25：75))，混匀，得到的溶液中葛根素的浓度为0.4mg葛根素/ml溶液，作为供试溶液；取上述供试液，向其中加流动相(流动相组成为：甲醇-0.1％枸橼酸溶液(25：75))，制成每1ml中含葛根素12μg的溶液，作为对照溶液。

进行液相色谱检测，色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％枸橼酸溶液(25：75)为流动相；检测波长为250nm，进样量20μl，流速1.0ml/min，主成分峰的保留时间为25～30min。

取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的20％以上，再精密量取供试溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍。

“有关物质”的计算方法：

实验设3次重复，结果取平均数。检测结果如表1-1和表1-2所示。结果表明，本发明制得的葛根素注射剂中的“有关物质含量”均小于2.0％，符合低于3.0％要求。

3、检测葛根素注射剂中的“不溶性微粒”的含量

“不溶性微粒”是指注射剂中的颗粒状杂质。

检测方法：采用光阻法测定。取5ml注射剂作为供试液，用水将取样杯外壁洗净，将5ml供试液置于取样杯中，超声处理(80～120W)30秒脱气或静置适当时间脱气后，将取样杯置于取样器上，开启搅拌或手动缓缓转动，使溶液均匀(避免气泡产生)，然后进行检测。

实验设3次重复，第一次数据不计，取后续测定结果的平均值，计算每个取样杯所含的微粒数；检测结果如表1-1和表1-2所示。结果表明，本发明制得的葛根素注射剂中的“不溶性微粒”的含量符合标准要求(本领域中要求：每1ml中含10μm以上的微粒不得过25粒，含25μm以上的微粒不得过3粒)。

4、检测葛根素注射剂中的“可见异物”的含量

“可见异物”是指注射剂中，目视可以观测到的、粒径或长度通常大于50μm的不溶性物质。

检测方法：采用灯检法检查，取装有本发明注射剂的瓶，除去标签，擦净外壁，轻轻旋转和翻转瓶，使瓶中的药液中存在的可见异物悬浮(注意不使药液产生气泡)，将瓶置于灯检仪黑色背景下，在1000～1500lx光照强度下轻轻翻转，目检视；

检测结果如表1-1和表1-2所示。结果表明，本发明制得的葛根素注射液中未检出可见异物。

5、氯化钠含量测定

精密量取本发明注射剂10ml，加水40ml，加2％糊精溶液5ml。碳酸钙0.1g，荧光黄指示液5～8滴，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于5.844mg的氯化钠。实验设3次重复，检测结果如表1-1和表1-2所示，氯化钠含量为标示量的95.0％～105.0％，符合要求。

综上分析各指标表明，本发明得到的葛根素注射剂中能引起不良反应的大分子等物质含量非常低。

表1-1葛根素氯化钠注射剂加速试验结果

表1-2葛根素氯化钠注射剂长期试验结果

实施例2、葛根素输液剂的制备

配制过程在万级洁净区进行，灌装过程在万级洁净区的局部百级下进行。

一、葛根素输液剂的制备

在无菌操作室中，将2g葛根素溶解于80℃的注射用水中，再加入50g葡萄糖搅拌至充分溶解；得到溶液I；用10％冰醋酸溶液调节溶液I的pH值至5.1；

在无菌操作室中，将上述溶液I温度降低至45℃，然后将溶液I用0.22μm滤器进行过滤，得到滤液a；将滤液a用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤，得到滤液b；用注射用水将滤液b补足至1000ml，再用0.22μm滤器进行过滤，得到滤液c；再将滤液c用0.22μm滤器过滤，得到滤液d。

对滤液d进行如下指标检验，葛根素含量、等渗调节剂的含量、药液PH值、色泽、可见异物、不溶性微粒、有关物质；检验合格，将滤液d封装于输液瓶或袋中，再经115℃热压灭菌30分钟，即得到葛根素注射剂。

二、葛根素输液剂的检测

取按照步骤一所述方法制备的、不同批次的、保存时间不同的葛根素输液剂进行如下实验。

1、检测葛根素的含量

方法：与实施例1中所述一致。

实验设3次重复，结果取平均数。结果如表2-1、2-2所示，表明，葛根素的含量在灭菌前后没有变化，本发明输液剂稳定。

2、检测葛根素输液剂中的“有关物质”的含量

方法：与实施例1中所述一致。

实验设3次重复，结果取平均数。检测结果如表2-1和表2-2所示。结果表明，本发明制得的葛根素输液剂中的“有关物质含量”均小于2.0％，符合要求。

3、检测葛根素输液剂中的“不溶性微粒”的含量

方法：与实施例1中所述一致。

检测结果如表2-1和表2-2所示。结果表明，本发明制得的葛根素输液剂中的“不溶性微粒”含量少，符合要求。

4、检测葛根素输液剂中的“可见异物”的含量方法：与实施例1中所述一致。

检测结果如表2-1和表2-2所示。结果表明，本发明制得的葛根素输液剂中未检出可见异物。

5、葡萄糖含量测定

方法：取本品，采用旋光度测定法测定旋光度，与2.0852相乘，即得供试品中含有葡萄糖的重量(g)。

旋光度测定法：

采用钠光谱的D线(589.3nm)测定旋光度，测定管长度为1dm，测定温度为20℃，使用读数至0.01°并经过检定的旋光计。将测定管用本品冲洗数次，缓缓注入本品适量，置于旋光计内检测读数，即得本品的旋光度。

实验设3次重复，检测结果如表2-1和表2-2所示，葡萄糖含量为标示量的95.0％～105.0％，符合要求。

综上分析各指标表明，本发明得到的葛根素输液剂中能引起不良反应的大分子等物质含量非常低。

表2-1葛根素葡萄糖输液剂加速试验结果

表2-2葛根素葡萄糖输液剂长期试验结果

实施例3、葛根素输液剂的制备

配制过程在万级洁净区进行，灌装过程在万级洁净区的局部百级下进行。

一、葛根素输液剂的制备

在无菌操作室中，将2g葛根素溶解于90℃的注射用水中，再加入9g氯化钠搅拌至充分溶解，得到溶液I；用10％盐酸溶液调节溶液I的pH值至5.2；

在无菌操作室中，将上述溶液I温度降低至42℃，然后将溶液I用0.22μm滤器进行过滤，得到滤液a；将滤液a用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤，得到滤液b；用注射用水将滤液b补足至1000ml，再用0.22μm滤器进行过滤，得到滤液c；再将滤液c用0.22μm滤器过滤，得到滤液d。

对滤液d进行如下指标检验，葛根素含量、等渗调节剂的含量、药液PH值、色泽、可见异物、不溶性微粒、有关物质；检验合格，将滤液d封装于输液瓶或袋中，再经121℃热压灭菌15分钟，即得到葛根素输液剂。

二、葛根素输液剂的检测

取按照步骤一所述方法制备的、不同批次的、保存时间不同的葛根素输液剂进行如下实验。

1、检测葛根素的含量

方法：与实施例1中所述一致。

实验设3次重复，结果取平均数。结果如表3-1、3-2所示，表明，葛根素的含量在灭菌前后没有变化，本发明输液剂稳定。

2、检测葛根素输液剂中的“有关物质”的含量

方法：与实施例1中所述一致。

实验设3次重复，结果取平均数。检测结果如表3-1和表3-2所示。结果表明，本发明制得的葛根素输液剂中的“有关物质含量”均小于2.0％，符合要求。

3、检测葛根素输液剂中的“不溶性微粒”的含量

方法：与实施例1中所述一致。

检测结果如表3-1和表3-2所示。结果表明，本发明制得的葛根素输液剂中的“不溶性微粒”含量少，符合要求。

4、检测葛根素输液剂中的“可见异物”的含量

方法：与实施例1中所述一致。

检测结果如表3-1和表3-2所示。结果表明，本发明制得的葛根素输液剂中未检出可见异物。

5、氯化钠含量测定

方法：与实施例1中所述一致。

实验设3次重复，检测结果如表3-1和表3-2所示，氯化钠含量为标示量的95.0％～105.0％，符合要求。

综上分析各指标表明，本发明得到的葛根素输液剂中能引起不良反应的大分子等物质含量非常低。

表3-1葛根素氯化钠输液剂加速试验结果

表3-2葛根素氯化钠输液剂长期试验结果

实施例4、葛根素注射剂的制备

配制过程在万级洁净区进行，灌装过程在万级洁净区的局部百级下进行。

一、葛根素注射剂的制备

在无菌操作室中，将2g葛根素溶解于90℃的注射用水中，再加入30g葡萄糖搅拌至充分溶解，得到溶液I；用10％盐酸溶液调节溶液I的pH值至5.3；

在无菌操作室中，将上述溶液I温度降低至42℃，然后将溶液I用0.22μm滤器进行过滤，得到滤液a；将滤液a用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤，得到滤液b；再将滤液b用0.22μm滤器进行过滤，得到滤液c；再将滤液c用0.22μm滤器过滤，得到滤液d。

对滤液d进行如下指标检验，葛根素含量、等渗调节剂的含量、药液PH值、色泽、可见异物、不溶性微粒、有关物质；检验合格，将滤液d封装于输液瓶或袋中，再经121℃热压灭菌15分钟，即得到葛根素注射剂。

二、葛根素注射剂的检测

取按照步骤一所述方法制备的、不同批次的、保存时间不同的葛根素注射剂进行如下实验。

1、检测葛根素的含量

方法：与实施例1中所述一致。

实验设3次重复，结果取平均数。结果如表4-1、4-2所示，表明，葛根素的含量在灭菌前后没有变化，本发明输液剂稳定。

2、检测葛根素注射剂中的“有关物质”的含量

方法：与实施例1中所述一致。

实验设3次重复，结果取平均数。检测结果如表4-1和表4-2所示。结果表明，本发明制得的葛根素注射剂中的“有关物质含量”均小于2.0％，符合要求。

3、检测葛根素注射剂中的“不溶性微粒”的含量方法：与实施例1中所述一致。

检测结果如表4-1和表4-2所示。结果表明，本发明制得的葛根素注射剂中的“不溶性微粒”含量少，符合要求。

4、检测葛根素注射剂中的“可见异物”的含量

方法：与实施例1中所述一致。

检测结果如表4-1和表4-2所示。结果表明，本发明制得的葛根素注射剂中未检出可见异物。

5、葡萄糖含量测定

方法：与实施例2中所述一致。

实验设3次重复，检测结果如表4-1和表4-2所示，葡萄糖含量为标示量的95.0％～105.0％，符合要求。

综上分析各指标表明，本发明得到的葛根素注射剂中能引起不良反应的大分子等物质含量非常低。

表4-1葛根素葡萄糖注射剂加速试验结果

表4-2葛根素葡萄糖注射剂长期试验结果

Claims (7)

1.一种制备葛根素液体制剂的方法，包括如下步骤：

将葛根素溶于水中，再向其中加入等渗调节剂，混匀得到溶液I；所述水的温度为80-90℃；所述水为注射用水；将所述溶液I的pH值调节至5.0-5.3，将所述溶液I的温度降低至大于等于40℃小于等于45℃；

将溶液I进行0.22μm孔径过滤，得到滤液a；再将滤液a用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤，得到滤液b；将滤液b进行0.22μm孔径过滤，得到滤液c；将滤液c进行0.22μm孔径过滤，得到葛根素液体制剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述等渗调节剂为氯化钠或葡萄糖。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述葛根素与所述等渗调节剂的质量比为1-2∶4-50。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述pH值是用盐酸、磷酸、枸橼酸、冰醋酸中任一种进行调节的。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法中包括将所述葛根素液体制剂进行灭菌的步骤；所述灭菌的方法是在115℃-121℃的条件下，热压灭菌15-50分钟。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述液体制剂为注射剂。

7.权利要求1-6任一所述方法制得的葛根素液体制剂。