CN102033047B - 一种简便快速测定茶叶中γ-氨基丁酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种简便快速测定茶叶中γ-氨基丁酸的方法,利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮去除茶样中的茶多酚类物质,然后基于Berthelot反应的分光光度法测定茶叶中r-氨基丁酸含量。本发明通过与纸电泳法的比较实验、α-氨基酸的干扰实验及加标样的回收实验确定该方法的特异性、稳定性及准确性。结果表明:本发明利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮去除茶样中的茶多酚类物质,消除茶多酚干扰;利用本发明与纸电泳法两种方法测得的茶叶中GABA含量无显著差异;本发明测定茶叶GABA含量具有较高的可靠性,平均加样回收率为98.2%;同时α -氨基酸对该方法测定茶叶中GABA含量没有明显干扰,表明该法对于γ-氨基酸具有较好的特异性。
Description
技术领域
本发明涉及一种简便快速测定茶叶中γ-氨基丁酸的方法。
背景技术
γ-氨基丁酸(GABA)茶具有显著的降血压及改善肝功能等保健功效,已成为近年国内外研发热点,这样就迫切要求为富GABA茶的研发及质检提供一种简便快速准确的测定方法,目前国内外大多利用Berthelot显色反应原理的分光光度法对食品中的GABA进行定量分析,但由于茶叶富含茶多酚等还原性很强的成分严重干扰Berthelot显色反应的问题,影响检测结果的稳定性及准确性。利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)吸附除去茶样中的茶多酚,然后进行基于Berthelot反应的分光光度法定量测定茶叶中r-氨基丁酸含量。本发明为富GABA茶的研发及质检提供了一种简便快速定量测定茶叶中γ-氨基丁酸的改良分光光度法。
发明内容
本发明的目的是提供一种简便快速测定茶叶中γ-氨基丁酸的方法,该方法测定茶叶GABA含量具有较高的可靠性和稳定性。
本发明提供的技术方案是:一种简便快速测定茶叶中γ-氨基丁酸的方法,利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)去除茶样中的茶多酚类物质,然后基于Berthelot反应的分光光度法测定茶叶中r-氨基丁酸含量。
所述利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮去除茶样中的茶多酚类物质为:将粒度为40目的茶叶粉碎样2.0 g置于研钵中,加体积百分比10%冰醋酸5 mL研磨成匀浆,再加入10%冰醋酸5 mL混匀,然后转移至三角烧瓶中,将三角烧瓶置于沸水浴中加热浸提45min,趁热抽滤得滤液;按1ml滤液:50-200mg不溶性聚乙烯吡咯烷酮的比例,在滤液中加入不溶性聚乙烯吡咯烷酮,有白色沉淀物产生,振荡后放置30℃水浴锅中,吸附10-30min,离心去沉淀,取上清液;所述基于Berthelot反应的分光光度法测定茶叶中r-氨基丁酸含量为:取上述上清液1ml,加0.01 mol/L四硼酸钠缓冲液1mL,体积百分比6%重蒸苯酚溶液1mL,有白色絮状物产生,振荡溶解,混匀后再加入体积百分比7.5%的NaClO溶液5mL,振荡;于沸水中加热10min后置于冰浴中5min,取上清液,加入体积百分比60%的乙醇溶液2.0mL,于波长645nm、1cm比色皿测定其吸光度,再据标准曲线便可计算出茶叶中γ-氨基丁酸含量。
本发明通过与纸电泳法的比较实验、α-氨基酸的干扰实验及加标样的回收实验确定该方法的特异性、稳定性及准确性。结果表明:本发明利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮去除茶样中的茶多酚类物质,消除茶多酚干扰;利用本发明与纸电泳法两种方法测得的茶叶中GABA含量无显著差异( t=3.464<t0.05=4.303);本发明测定茶叶GABA含量具有较高的可靠性,平均加样回收率为98.2%;同时α-氨基酸对该方法测定茶叶中GABA含量没有明显干扰(变异系数为1.47%<5%),表明该法对于γ-氨基酸具有较好的特异性。
具体实施方式
茶叶样品预处理
称取粒度为40目的茶叶粉碎样2.0 g置于研钵中,加10%(V/V)冰醋酸5 mL研磨成匀浆,再加入10%(V/V)冰醋酸5 mL混匀,将匀浆转移至150 mL三角烧瓶中,取蒸馏水(已沸腾)40mL,分3次冲洗研钵,将冲洗液倒入三角烧瓶后置于沸水浴中加热浸提45min,趁热抽滤,滤液用蒸馏水定容至50mL得样液。
处理茶样
在1ml样液中加入50-200mg的PVPP,有白色沉淀物产生,振荡后放置30℃水浴锅中,吸附时间10-30min,离心去沉淀,取上清液待用。
茶叶中GABA含量的分光光度法的测定
取上述上清液1ml,加0.01 mol/L四硼酸钠缓冲液1mL,6%(体积百分比)重蒸苯酚溶液1mL,有白色絮状物产生,振荡溶解,混匀后再加入7.5% (V/V)NaClO溶液5mL,振荡。于沸水中加热10min后置于冰浴中5min,取上清液,加入60%(V/V)的乙醇溶液2.0mL,于波长645nm、1cm比色皿测定其吸光度,再据标准曲线便可计算出茶叶中GABA含量。
通过上述分光光度法测得的3个富GABA茶样的GABA含量分别为1.725、2.675和1.650mg/g,与纸电泳法两种方法测得的茶叶中GABA含量无显著差异( t=3.464<t0.05=4.303)。
Claims (1)
1.一种简便快速测定茶叶中γ-氨基丁酸的方法,利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮去除茶样中的茶多酚类物质,然后基于Berthelot反应的分光光度法测定茶叶中r-氨基丁酸含量;所述利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮去除茶样中的茶多酚类物质为:将粒度为40目的茶叶粉碎样2.0 g置于研钵中,加体积百分比10%冰醋酸5 mL研磨成匀浆,再加入体积百分比10%冰醋酸5 mL混匀,然后转移至三角烧瓶中,将三角烧瓶置于沸水浴中加热浸提45min,趁热抽滤得滤液;按1ml滤液:50-200mg不溶性聚乙烯吡咯烷酮的比例,在滤液中加入不溶性聚乙烯吡咯烷酮,有白色沉淀物产生,振荡后放置30℃水浴锅中,吸附10-30min,离心去沉淀,取上清液;所述基于Berthelot反应的分光光度法测定茶叶中r-氨基丁酸含量为:取上述上清液1ml,加0.01 mol/L四硼酸钠缓冲液1mL,体积百分比6%重蒸苯酚溶液1mL,有白色絮状物产生,振荡溶解,混匀后再加入体积百分比7.5% NaClO溶液5mL,振荡;于沸水中加热10min后置于冰浴中5min,取上清液,加入体积百分比60%的乙醇溶液2.0mL,于波长645nm、1cm比色皿测定其吸光度,再据标准曲线便可计算出茶叶中γ-氨基丁酸含量。
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