CN104359879B - 一种测定茶多酚的共振瑞利散射光谱法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种简单快速测定茶多酚的共振瑞利散射光谱法，包括如下步骤：（1）制备茶多酚标准溶液体系；（2）制备空白对照溶液体系；（3）分别测定茶多酚标准溶液体系和空白对照溶液体系的共振瑞利散射峰强度值I 标准及I 空白，计算ΔI=I 空白–I 标准；（4）以ΔI对茶多酚的浓度关系做工作曲线；（5）被测物样品的测定，计算ΔI 样=I 空白‑I 样；（6）根据样品测得的ΔI 样，查步骤（4）的工作曲线，计算出被测物中茶多酚的含量。本测定方法的仪器简单，操作快速，灵敏度高、选择性好。

Description

一种测定茶多酚的共振瑞利散射光谱法
技术领域
本发明涉及分析化学领域，具体是测定茶多酚的共振瑞利散射光谱法。
背景技术
茶叶源于中国，传播于世界，是世界三大饮料之一。茶水是中华民族的传统保健饮品之一，其主要药效成分是茶多酚即多羟基酚类物质。茶多酚具有抗氧化作用和良好的药理作用，高效的抗癌、抗病毒、抗衰老、抗辐射、抗突变、清除人体自由基、强心利尿、兴奋中枢神经、降血糖和血脂、治心血管病、抑菌抑酶、预防动脉硬化、抗龋护齿等多种作用。茶多酚的分析测定方法主要有福林酚比色法（新国标法）、原子吸收法、近红外光谱法、电化学分析法、高效液相色谱法、毛细管电泳法等，但未见茶多酚的共振瑞利散射光谱分析方法报道。本发明采用共振瑞利散射光谱法研究了钼酸铵-茶多酚-碳纳米微粒反应体系，建立了一种检测茶多酚的共振瑞利散射光谱方法。该方法具有灵敏度高、选择性好、稳定性高、操作简单、速度快等特点。
发明内容
本发明的目的是为了提供一种简单测定茶多酚的共振瑞利散射光谱法。
应用共振瑞利散射光谱法测定茶多酚，包括如下步骤：
（1）制备茶多酚标准溶液体系：取刻度试管，依次移取5～500μL 0.1 mg/mL茶多酚标准溶液，120～200 µL 0.2 mmol/L pH 5.0 HAc-NaAc缓冲溶液，80～150 µL 0.01 mol/L钼酸铵溶液，350～450 µL 15 µg/mL碳纳米微粒溶液，用二次蒸馏水定容至2.0 mL，混匀，静置10 min；
（2）制备空白对照溶液体系：用步骤（1）的方法不加茶多酚标准液制备空白对照溶液体系；
（3）分别取按步骤（1）、(2）制备的茶多酚标准溶液体系及空白对照溶液体系适量，置于比色皿中，在荧光分光光度计上，同步扫描激发波长和发射波长，获得体系的共振瑞利散射光谱，测定体系最大波长370 nm处茶多酚标准溶液体系的共振瑞利散射峰强度值I ，以及测定空白对照溶液体系的共振瑞利散射峰强度值I 0，计算ΔI = I 0-I ；
（4）以ΔI 对茶多酚的浓度关系做工作曲线；
（5）被测物样品测定：取含有茶多酚的待测样品，按步骤（1）～（3）操作。算出被测物的ΔI 样＝I 0 -I 样；
（6）根据样品测得的ΔI 样，查步骤（4）的工作曲线，计算出被测物中茶多酚的含量。
所述的碳纳米微粒的制备方法是：称取10mg乙炔黑置于50mL烧杯，加入2 mL HNO3和6 mL H2SO4，磁力搅拌器搅拌、50℃硝化4.5 h，将硝化后的溶液倒入36mL的二次蒸馏水中，冷却至室温，缓慢加入10 mol/L NaOH溶液调至中性，转移到100mL容量瓶，用二次蒸馏水定容，得到100 μg/mL 碳纳米微粒溶液。使用前用二次蒸馏水稀释为15μg/mL作为工作溶液。
实现本发明的原理是：钼酸铵与茶多酚反应生成黄色的钼酸酯，钼酸酯在酸性条件下能稳定存在；当有碳纳米微粒时，随着茶多酚的增加，反应生成的钼酸酯增多，370nm处的共振瑞利散射峰强度线性降低。据此可建立一个简便快速测定茶多酚的共振瑞利散射光谱法。
本发明的优点是：与已有的方法相比，本测定方法操作简便，灵敏度高、选择性好、体系稳定。
附图说明
图1为本发明实施例测定茶多酚的部分共振瑞利散射光谱图。
图中：(a) pH 5.0 HAc-NaAc缓冲溶液-0.5mmol/L钼酸铵-3.0 μg/mL碳纳米微粒;(b) a+0.25 μg/mL茶多酚; (c) a+5.0 μg/mL茶多酚; (d) a+12.5μg/mL茶多酚; (e) a+20 μg/mL茶多酚; (f) a+25 μg/mL茶多酚。
具体实施方式
实施例：
应用共振瑞利散射光谱法测定茶多酚，包括如下步骤：
（1）制备茶多酚标准溶液体系：取刻度试管，分别移取5,100,250,400,500μL 0.1mg/mL茶多酚标准溶液加入到不同试管中，再在各试管中依次加入150 µL 0.2 mmol/L pH5.0 HAc-NaAc缓冲溶液，100 µL 0.01 mol/L钼酸铵溶液，400 µL 15 µg/mL碳纳米微粒溶液，用二次蒸馏水定容至2.0 mL，混匀，静置10min，制成多个茶多酚标准溶液体系；
（2）制备空白对照溶液体系：用步骤（1）的方法不加茶多酚标准液制备空白对照溶液体系；
（3）分别取按步骤（1）、(2）制备的茶多酚标准溶液体系及空白对照溶液体系适量，置于比色皿中，在荧光分光光度计上，同步扫描激发波长和发射波长，获得体系的共振瑞利散射光谱，测定体系最大波长370 nm处茶多酚标准溶液体系的共振瑞利散射峰强度值I ，以及测定空白对照溶液体系的共振瑞利散射峰强度值I 0，计算ΔI = I 0-I ；
（4）以ΔI 对茶多酚的浓度关系做工作曲线；
（5）被测物样品测定：取市售的黄山毛峰、云南大理普洱茶、湖南黑毛茶、西湖龙井茶、铁观音茶、霍山黄芽茶样品，分别准确称取0.1g茶叶，于50mL的沸水中煮沸30min，用抽滤瓶抽滤，再将滤渣用50mL沸水煮沸20min，抽滤，合并两次滤液，定容到100mL，得到6种不同的待测茶样品溶液，移取100μL，按步骤（1）～（3）操作。算出被测物的ΔI 样＝I 0 -I 样；
（6）根据样品测得的ΔI 样，查步骤（4）的工作曲线，计算出被测物中茶多酚的含量分别为14.64%、13.26%、9.72%、25.36%、12.94%、19.41%。
本发明实施例测定茶多酚含量范围为0.25～25 µg/mL范围，线性回归方程为ΔI= 103.7C+ 89.8，检出限为0.05 µg/mL。
回收率实验：分别移取步骤（5）的6个待测茶样品溶液50 μL，再加入7.5μg/mL茶多酚标准溶液，按步骤（1）～（3）操作，计算回收率分别是98.6～102.4%，相对标准偏差为1.1%～2.8%。说明该方法正确可靠。

Claims (1)

1.一种测定茶多酚的共振瑞利散射光谱法，其特征是：包括如下步骤：
（1）制备茶多酚标准溶液体系：取刻度试管，依次移取5～500μL 0.1 mg/mL茶多酚标准溶液，120～200 μL 0.2 mmol/L pH 5.0 HAc-NaAc缓冲溶液，80～150 μL 0.01 mol/L钼酸铵溶液，350～450 μL 15 μg/mL碳纳米微粒溶液，用二次蒸馏水定容至2.0 mL，混匀，静置10 min；
（2）制备空白对照溶液体系：用步骤（1）的方法不加茶多酚标准溶液制备空白对照溶液体系；
（3）分别取按步骤（1）、(2）制备的茶多酚标准溶液体系及空白对照溶液体系适量，置于比色皿中，在荧光分光光度计上，同步扫描激发波长和发射波长，获得体系的共振瑞利散射光谱，测定体系最大波长370 nm处茶多酚标准溶液体系的共振瑞利散射峰强度值I ，以及测定空白对照溶液体系的共振瑞利散射峰强度值I 0，计算ΔI = I 0-I ；
（4）以ΔI 对茶多酚的浓度关系做工作曲线；
（5）被测物样品测定：取含有茶多酚的待测样品，按步骤（1）～（3）操作，算出被测物的ΔI 样＝I 0 -I 样；
（6）根据样品测得的ΔI 样，查步骤（4）的工作曲线，计算出被测物中茶多酚的含量。
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