CN102021176A

CN102021176A - 稻瘟病抗性基因Pik-h及其应用

Info

Publication number: CN102021176A
Application number: CN2010101056970A
Authority: CN
Inventors: 潘庆华; 翟纯; 林菲; 董忠秋; 王玲
Original assignee: South China Agricultural University
Current assignee: South China Agricultural University
Priority date: 2010-02-02
Filing date: 2010-02-02
Publication date: 2011-04-20

Abstract

本发明公开了一种稻瘟病抗性基因Pik-h及其应用。本发明提供了所述水稻稻瘟病抗性基因Pik-h的核苷酸序列及其编码的氨基酸多肽序列，该序列包含有2个基因，都属于CC-NBS-LRR抗性基因家族的成员，且皆为组成型表达的基因。本发明还提供了该基因在转化水稻或其它植物培育抗病品种方面的应用以及根据该基因序列产生的分子标记在育种中的应用。

Description

稻瘟病抗性基因Pik-h及其应用

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种水稻稻瘟病抗性基因Pik-h及其克隆和应用。

背景技术

植物在生长的过程中，常常受到多种病原物的侵害，而植物则采取多种防御策略以保护自身，避免受其侵袭。植物中一个最重要的防御机理就是能够识别专性致病微生物的存在并启动自身的防御应答系统。植物对病原菌的识别由抗病基因所介导。因此，对抗病基因产物结构进行分析与研究，是了解植物抗病机制的基础，对于其病害的预防和控制也具有重要的指导意义。

迄今为止，已经从植物中分离了80多个抗病基因。对这些抗病基因的结构和产物的研究发现，虽然寄主植物不同，所对应的病原物也有真菌、细菌、病毒和线虫等差异，但抗病基因的结构和产物却有许多共同的结构特征，如C-端存在富亮氨酸重复序列(leucine-richrepeat，LRR)，N-端存在核苷酸结合位点(nucleotide binding site，NBS)，亮氨酸拉链(leucinezipper，LZ)，卷曲螺旋结构域(coiled-coil，CC)，跨膜结构域(transmembrane domain，TM)，蛋白激酶(protein kinase，PK)，以及果蝇Toll蛋白及哺乳动物白介素-1受体(Toll andinterleukin-1receptor，TIR)等。根据它们所编码蛋白的结构特征，可将抗病基因分为7类(Hammond-Kosack&Jones，1997；Dangl&Jones 2001；Iyer&McCouch 2004)。

第一类，毒素还原酶类抗病基因。如玉米抗病基因Hm1，它是第1个被克隆的植物抗病基因，它控制对真菌Cochliobolus carbonum小种1的抗性。Hm1编码的解毒酶能钝化病原真菌所产生的HC毒素，而HC毒素是真菌C.carbonum小种1产生的致病因子，它决定该病菌只能感染玉米的某些基因型(Johal等，1992)。第二类，NBS-LRR类抗病基因。它们编码的蛋白近N端为NBS，而近C端则由LRR组成。如RPS2(Bent et al.，1994)、RPM1(Grant et al.，1995)、I2(Simon et al.，1998)；RPP5(Parker et al.，1997)、N(Dodd etal.，2001)、L6(Lawrence et al.，1995)、Mla1(Zhou et al.，2001)、Mla6(Halterman et al.，2001)；水稻的抗病基因如Xa1(Yoshimura et al.，1998)、Pib(Wang et al.，1999)、Pita(Bryan et al.，2000)等。第三类，PK类抗病基因。如番茄Pto基因，其产物是一种位于细胞内的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶，没有LRR结构域(Martin et al.，1993)。第四类，LRR-TM类抗病基因。番茄抗叶霉病不同生理小种的基因Cf-2(Dixon et al.，1996)、Cf-4(Thomas etal.，1997)、Cf-5(Dixon et al.，1998)、Cf-9(Jones et al.，1994)，以及甜菜抗胞囊线虫的基因Hs1^pro-1(Cai et al.，1997)等。第五类，LRR-TM-PK类抗病基因，以水稻抗白叶枯病基因Xa21(Song et al.，1995)为代表。第六类，以拟南芥的RPW8为代表，其编码的蛋白仅含有完整的CC和NBS结构域(Xiao et al.，2001)。第七类，以水稻的xa5基因为代表，其编码的蛋白为一个转录因子(TFIIA□)(Iyer&McCouch，2004)。

编码NBS-LRR类抗病蛋白的抗病基因是植物抗病基因中最大的一类抗病基因，根据NBS-LRR类抗病蛋白N末端的结构特点，又可将该类基因分为两大类TIR-NBS-LRR和CC-NBS-LRR(Meyers et al.，2002；Pan et al.，2000；Cannon et al.，2002；Richly et al.，2002)。TIR-NBS-LRR类抗病基因主要发现在双子叶植物，至今还没有在单子叶植物基因组中发现(Bai et al.，2002；Meyers et al.，2002)。目前在单子叶植物中鉴定到的抗病基因主要编码CC-NBS-LRR类抗病蛋白，双子叶植物中也存在大量的CC-NBS-LRR类抗病基因，相对而言，单子叶植物中的CC-NBS-LRR类抗病基因比双子叶植物中的更丰富多样(Cannon et al.，2002)。

研究表明，NBS、CC、TIR结构域可能参与信号传导(Hammond-Kosack&Jones 1997)，尽管这类R蛋白不具有内在的激酶活性，但NBS可以激活激酶或G蛋白，NBS具有结合ATP或GTP以及水解酶活性(Traut et al.，1994)。TIR结构可能参与植物抗病防卫反应下游的信号传导(Jones et al.，1994)。最近的证据表明，亚麻的L族多样性选择也发生在TIR区域，这个区域与相应的LRR区域共进化形成特异性(Luck et al.，2000)。LRR结构域的功能主要涉及到蛋白质-蛋白质和与配体的相互作用(Jones&Jones，1996；Kajava et al.，1998)，据推测是抗病基因产物直接和病原菌无毒基因编码的产物或间接产物相互作用的部位(Bent，1996；Baker et al.，1997)。Jia et al.(2000)通过酵母双杂交证明AVR-Pita编码的蛋白加工为一个176氨基酸的活性蛋白AVR-Pita₁₇₆小种特异性的激发子，传递到植物细胞质特异地与Pita受体的LRD区域结合，从而激活细胞内Pita介导的防卫反应。当Pita中的Ala变为Ser后Av-rPita₁₇₆不能与LRD结合，因而表现感病。这一结果直接证明了LRR结构域可能就是病原菌识别的区域；Pita与AvrPita的互作第一次从分子水平验证了水稻与稻瘟病菌的“基因对基因”关系。

水稻是世界上最重要的粮食作物之一，约有一半以上的人口以稻米为主食。由病原真菌Magnapothe oryzae(无性态：Pyricularia oryzae)引起的稻瘟病是对水稻生产危害最严重的病害之一，每年都造成严重的粮食损失。从环境保护与农业的可持续发展的观点来看，抗病品种的育成与利用是防治稻瘟病最安全有效的方法。但是，由于稻瘟病菌群体的多样性及易变性，加之人们缺乏对抗性基因的有效利用，以及对抗性机理缺乏充分的了解，以致抗病品种的感病化问题不但没有得到解决，反而因有效抗源基因的缺乏和抗病品种的短命化而成为育种学家最为棘手的问题。因此，发掘、鉴定和克隆抗病基因并合理地应用于抗病育种计划中，已成为农业科研中优先解决的重要问题。

随着分子生物学的快速发展，迄今，至少有80多个水稻稻瘟病主效抗性基因已经被报道，其中60个已经被分子定位。目前，除了水稻的第3染色体上还没有被鉴定到稻瘟病主效抗性基因之外，其余的11条染色体上均被鉴定到有主效抗性基因位点，并且有的染色体上含有多个稻瘟病抗性位点，而且有些基因位点的抗性基因是成簇存在的。目前，在稻瘟病抗性基因的克隆研究方面，正式报道的已有13个抗性基因，Pib(Wang et al.，1999)，Pita(Bryan et al.，2000)，Pi9(Qu et al.，2006)，Pid2(Chen et al.，2006)，Piz-t和Pi2(Zhou et al.，2006b)，Pi36(Liu et al.，2007a)，Pi37(Lin et al.，2007)，Pik-m(Ashikawa et al.，2008)，Pit(Hayashi et al.，2009)，Pi5(Lee et al.，2009)，Pid3(Shang et al.，2009)和pi21(Fukuoka et al.，2009)。

克隆抗病基因是对水稻抗性机理深入研究的前提，揭示水稻抗稻瘟病的分子机理可以更好地控制和降低稻瘟病菌对水稻的危害。同时，对克隆的抗病基因进行修饰和改造，可以人为地控制和增加植物的抗病性，拓宽植物的抗谱。这些方面是采用常规植物育种和改良技术所不能达到的。

发明内容

本发明的目的是提供一种水稻稻瘟病抗性基因和包含调控这个基因的启动子的DNA片段。本发明的另一个目的是提供上述稻瘟病抗性基因所编码的蛋白质。本发明的另一个目的是提供上述含有上述抗性基因的载体。本发明的另一个目的是提供上述载体的宿主细胞。本发明的另一个目的是提供上述基因在制备转基因植物中的应用。本发明的进一步目的是提供上述抗性基因产生的分子标记及其在选育对稻瘟病具有抗病性的水稻中的应用。

本发明从水稻品种K3中分离得到Pik-h基因，包括2个编码NBS-LRR类蛋白的基因Pikh-1和Pikh-2，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示，它们分别编码SEQ IDNO.3以及SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，结构如附图6和附图7所示。它们的蛋白都包含2个主要的结构域：NBS和LRR区域，其中Pikh-1NBS结构域含有保守的kinase 1a：GLPGGGKTTVAR，kinase2：NKKYLIVIDDIW，kinase3a：DLGGRIIMTTRLNSI，GLPL：EDSPCYDIVNMCYGMPLALI；Pikh-2NBS结构域含有保守的kinase1a：VLSIVGFGGVGKTTIA，kinase2：LEQLLAEKSYILLIDDIW，kinase3a：GGRIIVTTRFQAV，GLPL：EQVPEEIWKICGGLPLAIV，RNBS-D：CLLYLSIFPKGWK，MHDV：KTFQVHDMVLEYI。而Pikh-1蛋白的C-末端为16个不完整的LRR重复，其亮氨酸含量为14.0％(附图6)；Pikh-2蛋白的C-末端为13个不完整的LRR重复，其亮氨酸含量为17.0％(附图7)。

应当理解，在不影响蛋白活性的前提下(不在蛋白的活性中心)，本领域技术人员可对SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列进行各种取代、添加和/或缺失一个或几个氨基酸获得具有同等功能的氨基酸序列。此外，考虑到密码子的简并性，例如可在其编码区，在不改变氨基酸序列的条件下，或在其非编码区在不影响蛋白表达的条件下，对编码上述蛋白的基因序列进行修改。本发明还包括基于所述基因的正义序列或反义序列，包括含有所述核苷酸序列或其片段的克隆载体或表达载体、含有所述载体的宿主细胞、含有所述核苷酸序列或其片段的转化的植物细胞和转基因植物。

本发明同样包括将Pik-h抗性基因的主要结构部分有效地连接上合适的调节序列所形成的嵌合基因，以及在基因组中包含这种基因的植物和这种植物的种子。这种基因可以是天然的或是嵌合的。例如，将包含该基因的片段和一个组成型表达的启动子连接，该启动子可以在任何条件下和细胞发育的任何时期表达。这种组成型表达的启动子包括花椰菜花叶病毒的35S启动子等。另一方面，也可以将该基因和一个组织特异性表达的启动子或发育时期特异性表达的启动子或精确环境诱导的启动子连接，这些启动子称之为诱导型启动子。这样，环境的改变，发育时期的不同都可以改变该基因的表达。同样地，也可以将该基因的表达限定在某一个组织内，使由该基因诱导的抗病反应得到人为的控制。其中环境条件包含病原菌的攻击、厌氧条件和光等，组织和发育时期包括叶、果实、种子和花等。

本发明还进一步克隆得到所述基因的启动子，包含调控该基因的启动子的DNA片段分别如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

根据本发明提供的Pik-h基因序列信息(SEQ ID No.1和SEQ ID No.2)，本领域技术人员可以通过以下方法容易地获得与Pik-h等同的基因：(1)通过数据库检索获得；(2)以Pik-h基因片段为探针筛选水稻或其它植物的基因组文库或cDNA文库获得；(3)根据Pik-h基因序列信息设计寡核苷酸引物，用PCR扩增的方法从水稻或其它植物的基因组、mRNA和cDNA中获取；(4)在Pik-h基因序列的基础上用基因工程方法改造获得；(5)用化学合成的方法获得该基因。

本发明提供的稻瘟病抗性基因Pik-h具有重要的应用价值，其赋予植物对稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)所引起的病害产生特异性的抗病反应。其适用于对所有对该病原菌敏感的植物，这些植物包括单子叶植物和双子叶植物。应用之一是将所述的Pik-h基因序列连接到任何一种植物转化载体，用任何一种转化方法将Pik-h抗病基因导入水稻或其他植物细胞，可获得表达所述基因的转基因抗病品种，从而应用于生产。本发明所述的基因构建到植物转化载体中，可以对所述基因或其调控序列作适当的修饰，也可以在其转录起始密码子前用其它启动子取代所述基因原有的启动子，从而拓宽和增强植物对病原菌的抗性。

本发明提供的抗性基因的另一个应用是根据所述基因序列信息产生特异性的分子标记，包括但不限于SNP(单核苷酸多态)、SSR(简单序列重复多态)、RFLP(限制性内切酶长度多态)、CAPS(切割扩增片段多态)。用此标记可鉴定水稻或其它植物的抗性基因型，用于分子标记辅助选择育种，从而提高育种的选择效率。

本发明具有明显的优点和效果。将克隆的抗病基因转入感病的植物，有助于产生新的抗病植物。特别是可以用转化技术在植物中累加多个抗病基因，而不会产生传统育种技术中伴随出现的基因组中不良基因的连锁问题，并且可以缩短育种时间。抗病基因的克隆是克服传统育种中不能在植物种间转移抗病基因的问题的前提。

本发明能够进一步提供或应用基于上述DNA片段获得的抗病的转基因植株和相应的种子，以及用本发明的基因或基于该基因的重组体转化的植株或由这类植株获得的种子。可以用有性杂交的方式将本发明的基因转入其他的植株中。

附图说明

图1.水稻稻瘟病抗性基因Pik-h的图位克隆技术路线图。

图2.Pik簇等位基因对8个稻瘟病菌群体抗谱的比较。图中纵坐标为抗性频率，横坐标为8个稻瘟病菌群体(GD，广东；FJ，福建；YN，云南；GZ，贵州；SC，四川；JS，江苏；JL，吉林；HLJ，黑龙江)。5个Pik簇等位基因(Shin 2，Pik-s；K60，Pik-p；Kusabue，Pik；Tsuyuake，Pik-m；K3，Pik-h)。由此可以看出，Pik-h对广东、福建、云南、贵州、四川、江苏的稻瘟病菌群体表现高度的抗性。

图3A.Pik-h基因位点的连锁标记图。横线上面的数字为标记之间的物理距离[用碱基(bp)表示]；括号内的数字为该标记检测出的重组体/配子体。

图3B.Pik-h基因位点在日本晴类型基因组上存在的具有NBS-LRR保守结构的6个抗病候选基因。

图3C.Pik-h基因位点在K3/K60/Tsuyuake类型基因组上存在的具有NBS-LRR保守结构的2个抗病候选基因。由此可以看出，在Pik-h基因位点存在两种类型的基因组，彼此之间存在很大的缺失/插入；Pik-h基因只有2个候选基因(Pikh-1和Pikh-2)。

图4(左).水稻稻瘟病抗性基因Pik-h之组成基因Pikh-1之遗传互补T₀植株的抗性鉴定实物图。图中所有转化植株都表现感病，说明单一的Pikh-1不具备抗性功能。

图4(右).水稻稻瘟病抗性基因Pik-h(由Pikh-1和Pikh-2组成)之遗传互补T₀植株的抗性鉴定实物图。图中实线箭头所指的是抗病植株，虚线箭头所指的是感病植株，说明抗性基因Pik-h由Pikh-1和Pikh-2组成才能表现功能。

图5.水稻稻瘟病抗性基因Pik-h遗传互补的部分T₀转化体的选择标记HPT基因的PCR检测图。图中由左至右，泳道1：分子量标记DL2000；泳道2：空载体(Vector)，阳性对照；泳道3：H₂O，阴性对照；泳道4：受体品种龙粳24，阴性对照；泳道5-14：T₀转化体。结果表明，所有抗病的转化体都检测到了选择性标记的PCR扩增产物，而感病的转化体没有检测到选择性标记的PCR扩增产物，说明抗病的转化体是由于转化构建体已经整合到了高感的受体品种中获得了表达而恢复了抗性。R：高抗；MR：中抗；MS：中感；S：感病。

图6A.水稻稻瘟病抗性基因Pik-h之组成基因Pikh-1的基因结构图。

图中浅色方框表示5’和3’-UTR；深色方框表示外显子；线条表示内含子；该基因编码区的启动子(ATG)和终止子(TAG)以及各个区域的大小(bp)亦标示于其中。

图6B.水稻稻瘟病抗性基因Pik-h之组成基因Pikh-1编码的氨基酸多肽序列及结构图。

图中CC结构域中的斜体字表示形成CC motif的氨基酸，NBS区域带下划线的黑体字表示NBS中保守的氨基酸序列。下部分独立列出的氨基酸残基为C-末端LRR区域；带下划线的黑体字表示形成LRR区域的xLDL保守基序；LRR区域后面还带有一段CNL(C端非LRR区域)氨基酸序列。双下线标示的氨基酸序列为Pik-h特异的氨基酸替换[substitution，与Pik簇的其他其他等位基因(Pik，Pik-s，Pik-p，Pik-m)相比]。

图7A.水稻稻瘟病抗性基因Pik-h之另一组成基因Pikh-2的基因结构图。

图7B.水稻稻瘟病抗性基因Pik-h之另一组成基因Pikh-2编码的氨基酸多肽序列及结构图。图中CC结构域中的色斜体字表示形成CC结构的氨基酸，NBS区域带下划线的黑体字表示NBS中保守的氨基酸序列。下部分独立列出的氨基酸残基为C-末端LRR区域；带下划线的黑体字表示形成LRR区域的xLDL保守基序。双下线标示的3个氨基酸序列为等位基因特异的氨基酸替换(substitution，与已被克隆的Pik-m基因相比)。

图8.水稻稻瘟病抗性基因Pik-h表达特性的定量RT-PCR检测图。左图为组成基因Pikh-1在不同的接种时间点(0hr，12hr，24hr，72hr)的相对表达水平，由此可以看出，该基因呈逐步上调的表达类型。中图为另一个组成基因Pikh-2在不同的接种时间点的相对表达水平，由此可以看出，该基因也呈逐步上调的表达类型，但是后者逐步上调的幅度比前者的大。右图为病原菌诱导表达基因PBZ1(pathogenesis-related probenazole-inducible gene)作为对照的相对表达水平，由此可以看出，该基因在接种对照(H₂O)和接种病原菌之间表现明显不同的诱导型表达。2个组成基因都表现为组成型表达，因为接种之前和之后都能检测到2个基因的表达。

图9.利用水稻稻瘟病抗性基因Pik-h特异性分子标记的基因型鉴定图。由此可以看出，利用该分子标记可以把抗性品种K3的基因型(Pikh/Pikh)；感病品种AS20-1的基因型(pikh/pikh)；含有与Pik-h等位的抗性品种Kusabue的基因型(Pik/Pik)；抗性品种Tsuyuake的基因型(Pikm/Pikm)；抗性品种K60的基因型(Pikp/Pikp)；以及抗性品种K3与感病品种AS20-1的杂交F₂之感病个体S1-S6的基因型(pikh/pikh)鉴别出来。图中，M：分子量标记DL2000。

具体实施方式

以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。在本发明的实施例部分，我们阐述了Pik-h基因的分离过程(附图1)和该基因的特点，分离的Pik-h基因能够与适当的载体连接，转入植物体中，使该植物体带有一定的抗性。

实施例1：抗性基因Pik-h的抗性特征

首先，为了比较和明确在Pik位点上5个等位基因(Pik，Pik-p，Pik-s，Pik-m，Pik-h)的抗谱，利用从广东(60个菌株)，福建(40个)，云南(43个)，贵州(60个)，四川(66个)，江苏(72个)，吉林(60个)，黑龙江(63个)，收集的总计464个菌株对上述5个等位基因所持品种(分别是Kusabue，K60，Shin 2，Tsuyuake和K3)进行了抗谱比较分析。结果表明，Pik-h对广东、福建、云南、贵州、四川、江苏的稻瘟病菌群体表现高度的抗性。由此说明该基因可在上述地区使用。水稻品种K3已在文献(Xu et al.Efficient authentic finemapping of the rice blast resistance gene Pik-h in the Pik cluster，using new Pik-h-differentiatingisolates.Molecular Breeding，2008，22：289-299)中公开。水稻品种Shin 2，K60，Kusabue，Tsuyuake，AS20-1已在文献(Wang et al.Characterization of rice blast resistance genes in thePik cluster and fine mapping of the Pik-p locus.Phytopathology，2009，99：900-905)中公开。

实施例2：水稻稻瘟病抗性基因Pik-h的定位及电子物理作图

本发明对由粳稻抗病品种K3与籼稻感病品种AS20-1的杂交组合由来的F₂群体，接种对双亲品种表现分明的非亲和性/亲和性反应的菌株CHL867，CHL1946，M028(Wang et al.Characterization of rice blast resistance genes in the Pik cluster and fine mapping of the Pik-plocus.Phytopathology，2009，99：900-905)。结果表明，该F₂群体中抗病植株与感病植株的分离比都符合3∶1。由此推断，K3所表现的对3个接种菌株的抗性都是由一对显性基因控制的。对该F₂群体对应的抗性基因进行连锁分析，结果表明它们受同一显性基因控制，因此，构建了由634个体组成的一个作图群体(相当于1268个配子体)。

前期的遗传分析表明Pik-h基因与Pik-m基因是等位的，而申请人所在的研究室已经对Pik-m基因进行了精细定位(Li et al.2007，Molecular Breeding，20：179-188)。因此，申请人利用Li et al(2007)开发的分子标记进行了连锁分析。结果表明，在标记K37和K25分别检测出了1个和22个重组体(图3)。为了缩小Pik-h位点的染色体区域并找到与之共分离的标记(没有重组体的标记)，进一步在K37--K25区域内，从Li et al(2007)开发的标记中获得了5个多态性标记(K36，K34，K39，K33，K28)，并对上述23个不同的重组体进行了连锁分析。结果表明，除了在K28位点检测出13个重组体之外，其余4个标记都与Pik-h位点表现完全的共分离。因此，Pik-h位点最终被界定于K37--K28之间的区域内，其中4个标记与之完全共分离。

为了构建Pik-h位点的电子物理图，把与之连锁的标记通过生物信息学方法着陆于水稻品种日本晴(Nipponbare)的参考序列上，并由此构建了该基因位点的重叠群。由参考序列可以推测Pik-h位点被界定于侧翼标记K37和K28之间约200kb的范围内。

实施例3：水稻稻瘟病抗性基因Pik-h候选基因的注释及序列分析

为了确定Pik-h的候选基因，申请人利用日本晴的参考序列，通过3种基因预测软件RiceGAAS(http://ricegaas.dna.affrc.go.jp)、Gramene(http://143.48.220.116/resources/)和Softberry的FGENESH(http://www.softberry.com)对目的基因区域进行了基因预测及注释分析，初步确定了Pik-h的候选抗性基因为6个核苷酸结合位点和富亮氨酸重复(nucleotidebinding site-leucine-rich repeat，NBS-LRR)的候选基因(Pikh1-NP，Pikh2-NP，Pikh3-NP，Pikh4-NP，Pikh5-NP，和Pikh6-NP)。

对6个候选基因进行基于基因特异性标记的存在/缺失(presence/absence，P/A)分析，结果表明，在日本晴参考序列存在的4个候选基因(Pikh1-NP，Pikh2-NP，Pikh3-NP，Pikh4-NP)在K3中是不存在的。因此，Pik-h的候选抗性基因只有Pikh1-K3和Pikh2-K3，下一步将通过以下的基因功能互补实验确认其功能(附图3)。

实施例4：水稻稻瘟病抗性基因Pik-h的遗传互补实验及转化子的抗性鉴定

首先，利用高保真酶phusion结合长片段PCR(long-range PCR，LR-PCR)技术，以K3的总DNA为模板，根据或参考Liu et al.(2007，Genetics，176：2541-2549)和Lin et al.(2007，Genetics，177：1871-1880)描述的实验方法和程序，分别扩增、克隆了Pikh-1和Pikh-2；并进行了遗传互补实验，结果表明，这2个候选基因都没有在感病受体品种Q1063(Lin et al.，2007，Genetics，177：1871-1880)中实现功能互补，见表1和附图4左。

扩增、克隆Pikh-1的引物为：

正向引物：TTTTGGCGCGCCGCCAGTGTCCACCAACCACAGTAATAAA；

反向引物：TTTTGGCGCGCCGAACAGCCTGAGGAAGCAGAACATCGTC。

扩增、克隆Pikh-2的引物为：

正向引物：TTTTGGCGCGCCGCAAGATCAGTACCATCACGAGTAATAGCA；

反向引物：TTTTGGCGCGCCAGGGACAGAATGACAGTGTAAGTGAGTTTG。

当将上述2个候选基因拼接为一个整体的基因进行遗传互补实验时，则获得了功能互补的转化体，见表1和附图4右。利用转化载体中的潮霉素基因(HPT)标记对转化体进行了PCR检测。检测结果证明目的基因片段已经导入抗病转化体中，而没有导入感病转化体中，见附图5。

表1.Pik-h 2个组成基因的遗传互补实验分析结果

^a自各个构建体的T₀植株接种对Pik-h无毒性的菌株CHL381。R，抗病；MR，中抗；MS，中感；S，感病。

^b功能互补成功率(％)为R+MR/R+MR+MS+S*100。

上述遗传互补的实验结果表明，抗性基因Pik-h由2个基因Pikh-1和Pikh-2组成才能表现其功能。水稻品种Q1063以及生物材料载体pCAMBIA1300已在文献(Lin et al.，Theblast resistance gene Pi37 encodes an NBS-LRR protein and is a member of a resistance genecluster on rice chromosome 1.Genetics，2007，177：1871-1880)中公开。水稻品种龙粳24为我国北方已公开推广种植的水稻品种。

实施例5：Pik-h基因的结构

采用移步法对Pik-h的DNA序列进行了测定。利用RACE技术，获得了Pik-h的全长cDNA序列并对其进行了测序。Pik-h基因DNA长度为16.9kb(包含Pikh-1和Pikh-2)，其中，Pikh-1的全长cDNA序列为3753bp，含有一个3429bp的开放读码框，5’和3’非翻译区分别为134bp和190bp。通过比较基因组DNA和cDNA序列，发现该基因的开放读码框含有2个内含子和3个外显子，见附图6A。另一个组成基因Pikh-2的全长cDNA为3482bp，含有一个3066bp的开放读码框，5’和3’非翻译区分别为133bp和283bp。通过比较基因组DNA和cDNA序列，发现该基因的开放读码框含有1个内含子和2个外显子，见附图7A。

实施例6：Pik-h抗性蛋白的结构

Pik-h基因包含的2个组成基因编码的蛋白序列如序列表中Pikh-1SEQ ID No.3和Pikh-2SEQ ID No.4所示。Pikh-1基因编码1个由1142个氨基酸残基组成的蛋白多肽，分子量为126.60KD，等电点为6.46。利用COIL分析表明该蛋白多肽有CC(coiled-coil)结构域。Pikh-1蛋白属于NBS-LRR蛋白，NBS结构域中保守的kinase 1a(GLPGGGKTTVAR)位于该多肽的第290个氨基酸残基；kinase 2(NKKYLIVIDDIW)位于该多肽的第376个氨基酸残基；kinase 3a(DLGGRIIMTTRLNSI)位于该多肽的第402个氨基酸残基，GLPL(EDSPCYDIVNMCYGMPLALI)位于该蛋白多肽461个氨基酸残基。而该蛋白的C-端的610-960个氨基酸残基为16个不完整LRR重复，其亮氨酸含量为14.0％，其C末端还有个非LRR结构(CNL)的氨基酸序列(图6B)。图中双下线标示的氨基酸序列为Pik-h基因特异的氨基酸替换(substitution)，由此可以鉴别Pik-h基因与其他等位基因(Pik，Pik-m，Pik-p，Pik-s)的不同。

Pikh-2基因编码1个由1021个氨基酸残基组成的蛋白多肽，分子量为114.57KD，等电点为8.64。利用COIL分析表明该蛋白多肽没有CC(coil-coil)结构域，但是利用更为强大的预测工具Paircoil2分析发现有CC结构域。Pikh-2蛋白属于NBS-LRR蛋白，NBS结构域中保守的kinase 1a(GFGGVGKTTIA)位于该多肽的第211个氨基酸残基；kinase 2(KSYILLIDDIW)位于该多肽的第330个氨基酸残基；kinase 3a(GGRIIVTTRFQAV)位于该多肽的第358个氨基酸残基，GLPL(EQVPEEIWKICGGLPLAIV)位于该多肽的第415个氨基酸残基，RNBS-D(CLLYLSIFPKGWK)位于该多肽的第488个氨基酸残基，MHDV(KTFQVHDMVLEYI)位于该多肽的第553个氨基酸残基。而该蛋白的C-末端的610-960个氨基酸残基为13个不完整LRR重复，其亮氨酸含量为17.0％(图7B)。

实施例7：Pik-h基因的表达特性分析

利用定量RT-PCR技术对Pik-h基因的表达模式进行了分析。在抗病品种K3接种后不同的时间点(0hr，12hr，24hr，72hr)上采集叶片并提取其总RNA，利用反转录试剂盒SuperScript^TM Reverse Transcriptase II进行反转录cDNA第一条链的合成。RT-PCR的引物为，

RRT5F：GAAGCTCTGATCAACGGTATTCC，

RRT5R：TCTTTGATCATCTTCGGGATACG；

RRT17F：TGAACTTCCACGATTGGATCCAC，

RRT17R：ACATGGTTCTTGAATACATCATGTC。

实时定量RT-PCR使用CFX96Real-time PCR检测系统和SYBR Premix Ex Taq试剂盒(宝生物公司)，操作按照试剂盒说明进行。图8(左)为组成基因Pikh-1在不同的接种时间点的相对表达水平，由此可以看出，该基因呈逐步上调的表达类型。图8(中)为另一个组成基因Pikh-2在不同的接种时间点的相对表达水平，由此可以看出，该基因也呈逐步上调的表达类型，但是后者逐步上调的幅度比前者的大。图8(右)为病原菌诱导表达基因PBZ1(pathogenesis-related probenazole-inducible gene)作为对照的相对表达水平，由此可以看出，该基因在接种对照(H₂O)和病原菌接种之间表现明显不同的诱导型表达。2个组成基因都表现为组成型表达，因为接种之前和之后都能检测到2个基因的表达。附图8左中右图纵坐标都为相对表达水平，横坐标都表示时间，单位为小时(h)，斜纹框图为对照(接种之前)，黑框图为接种对照(H₂O)，空白框图为病原菌接种。

实施例8：转化Pik-h基因产生的抗性植株的应用

将Pik-h基因克隆到植物转化载体pCAMBIA1300，导入农杆菌菌株EHA105中，用于转化感病的水稻品种龙粳24，获得了162株转化植株，其中120株表现抗性反应，见表1。这说明可以用Pik-h基因转化水稻感病品种，经过自交、纯化选择等一系列育种程序之后，即可产生抗病品种而应用于生产。

实施例9：Pik-h基因序列在分子标记辅助选择育种中的应用

利用本发明提供的Pik-h基因序列信息可开发基因特异性的分子标记(Pikh-SNP-1F：AGCTGTTCTGTCCATAGTCGG；Pikh-SNP-1R：GATGCCCGGCACTGAAATTG，扩增产物用限制性内切酶MboI进行酶切)，既可用于鉴别Pik-h基因与其他等位基因(Pik，Pik-m，Pik-p)的不同(条带位置不同)，也可在杂交后代用于鉴定Pik-h位点上的各种基因型，即Pikh/Pikh和pikh/pikh的植株(后者不出条带)，这些信息可在分子标记辅助选择育种过程中加以应用，以提高育种的目的性和效率，见附图9。

序列说明

SEQ ID NO.1&2是Pikh-1和Pikh-2的核苷酸序列；SEQ ID NO.3&4是SEQ ID NO.1&2的编码产物；SEQ ID NO.5&6是带有启动子的Pikh-1和Pikh-2核苷酸序列。SEQ IDNO.7&8和SEQ ID NO.9&10是分别用来扩增Pikh-1和Pikh-2的引物对；SEQ ID NO.11&12和SEQ ID NO.13&14分别是引物对RRT5F、RRT5R和RRT17F、RRT17R；SEQ ID NO.15&16是引物对Pikh-SNP-1F和Pikh-SNP-1R；SEQ ID NO.17～26分别是Pikh-1的kinase1a、kinase 2、kinase 3a、GLPL序列以及Pikh-2的kinase 1a、kinase 2、kinase 3a、GLPL、RNBS-D、MHD序列。

序列表

<110>华南农业大学

<120>稻瘟病抗性基因Pik-h及其应用

<130>*********

<160>22

<170>PatentIn version 3.5

<210>1

<211>8169

<212>DNA

<213>稻属水稻(Orysa sativa L.)

<220>

<221>5’UTR

<222>(1)..(134)

<220>

<221>CDS

<222>(135)..(698)，(849)..(1416)，(4189)..(6485)

<220>

<221>3’UTR

<222>(6486)..(6675)

<400>1

aaattgaagc tactagttgg ctatactgtt aaccttgctc taattacact cggagtcgga 60

gagtcaggag gtgagagagt agcactcaac gcaaaagggc atcggccgag ccgccgatcg 120

aggcgcgagt agggatggag gcggctgcca tggccgtaac cgcagccacg ggggccttgg 180

cgcccgtgct agtgaagctg gccgctttgc tggacgacgg ggagtgcaat cttctggagg 240

ggagccggag cgacgcagag ttcatcagat ccgagctgga ggccgttcat tctctcctca 300

ccccaaatat cttggggagg atgggggatg acgatgcggc gtgcaaggat ggcttgattg 360

cggaggtccg ggagctgtcc tacgacctgg atgatgccgt cgacgacttc ttggagctca 420

atttcgagca gcgaagaagc gcaagccctt tcggtgagct caaggcaaga gttgaggagc 480

atgtctccaa tcgcttctct gactggaagc taccggcggc gagccttccg ccgtcgtcgg 540

tacaccgccg agctggcttg ccgccaccag atgcagagct ggtggggatg gacaaacgta 600

tggaagagct caccaaattg ctggaacaag ggagcaatga tgcttcacga tggcgcaagc 660

gaaaaccgca tttcccgctc agaaaaacag ggctaaaggt acggttggat ctcgattctt 720

cacaaatata gcttcctccg atagcagtgc caatgaattt gtttacttct ctcttgattc 780

tttaatttgg aagtactgta taacaaacat ggagggatcg tcatttaact taattttttt 840

tgttgcagca aaaaatcgtg atcaaggttg ccatggaggg caataattgc cgttcaaaag 900

caatggcttt agttgcgagc actggaggag tggactcggt tgcgctcgta ggtgatctaa 960

gagacaagat agaggtggtc ggttatggca ttgaccccat caagctgatc tccgcgctcc 1020

ggaagaaggt gggcgatgcg gagttgctgc aggtcagcca agcaaaaaaa gatgtgaagg 1080

agacgacgcc gatgcttgcg ccggtgaaat ccatatgtga atttcacaag gtcaaaacag 1140

tttgcatcct tggattgcca ggtggaggca aaacaacggt tgccagagaa ttatatgacg 1200

ccttgggaac gcacttccca tgccgggttt tcgtgtcagt ctctccaagt tctagtccca 1260

gtcccaatct cacaaagact cttgcagaca ttttcgctca agcacaacta ggagtaaccg 1320

atacacttag cacaccatat ggtgggagtg ggaccgggag agctcttcaa caacacctca 1380

tcgacaacat atcagctttc ctcctcaaca aaaagtaagc aatatcttat atctcttatc 1440

tagcttgtcc ttaatccggc ttcccaaatt aaagtgaaca ggctatatgt ccatataatg 1500

ttgggttttt tttttctgtc ctcgatgagg tatatatcaa gatatgccaa acttttttta 1560

attagcgtta ctttattcta cctagtaaat agatacagaa atggggcagg cccctccttt 1620

gtgacaggcc aatggtttta tgatgtggaa acaactccct tatcactgaa gctcttgcta 1680

ttactcgtga tggtactgat cttgcaaagg cttgcagtat ttgtaaatcc acagggagtg 1740

gtcatctttt tttttttaag ataatgaata gaaatctggc ctctatatag aaagccaaag 1800

gttacacaag tgcatacact ccaaatctca aagctgagaa acacgaaaaa caaacgacca 1860

aaaagaaaag acgataagat taagtttcaa gcttttcctc cttgcttcag aaaacaggga 1920

aatgcagagc tagcccgctc ttcccctgcc atgccctctc actgccattg caactaccac 1980

aaaagctccc ctgtttcgcc gtgagcgaag ggaggggatg gaactagtct gctgctttgt 2040

tgtcgccaag cactggtttc atgctgccca aacaacctat gccccgctag cgataacgag 2100

tctgttgccg ccatgctgtt gtcgctggag agcacttgtc gctgctcagc tatgtgttaa 2160

gtaagctact aacaatctct ccattctctt gtagactgct tataaaagat tgtacttcaa 2220

ctttttatta atgaaataga gttcctgcct tacaacaaca agaacgagag agagagagag 2280

agccaatatc acgagttagc actgtgaaga cttcctgact gttatgtctt caagaacagt 2340

ataaaagcat ttgccactat aaaaatatga tagccctcaa gatcattaaa aatatgtcat 2400

gttcttttac cttcataaca accagtatca caaatatgaa aacatttaaa ggaaaatcag 2460

tatttgccat ttatgtaaag aaaaactaga ctagaactct gggcttttat tttagtgcac 2520

actgtataca tgtgtgttct ttgacgtata tacttgatat tttttcaaaa acttttgggg 2580

gcatatctgt aacccatgcc ccatgcatcc aaagtagtag tgagacaact ttcgtatcaa 2640

tggacatgtg gcattaaatt taatcccaat atttgttctc tcgaagtcct gaacatataa 2700

ttggacaaaa ttatataatt taattaggcc aattgagcca tatatacaca cactataaga 2760

aacttctaca aaacaaacat tcgctccttt taggttttga ccagtctata catgaaccag 2820

ccaacggtgt gctggtctga ctataaatgt ttttttagag agtaaaggca ccttccagta 2880

cctctctcga ggacagtaaa aacacccatg ctttaaggtt atgaacaaca aagcatagaa 2940

caaccacaag aaaaaaaaac aactagaaca agttctggaa ctagttaggg attcgggaag 3000

ccattgcttg ctggcttggg acaagctatg cctgccattg gactatggtg gagactgggc 3060

ataaaggatc tcaatctctt ggagattggc ctatgtccta ggtggccatg gctgactgca 3120

aggagatata tttcttgcaa cggaaatttt cattgcaaaa gctgaaaatc gttgcgatat 3180

gtacctattg tgacataatt gaatccattg ggagccgtag caataaatcc cgtggtaata 3240

ggctattgca atgattttcc gatggttgca taaaaaggtg ctattacaat ggttttgcat 3300

tgctattgca acaacttgat atgtcatagg tatttattgc aacagtttgt accatgctgc 3360

aataagattt cgcaacacag acctattcat taaatagcct atttccacac attcattttt 3420

gtggcaataa ttcagtgcga caagcatgtt ctatagctat aacctgatgc aacgggttag 3480

acttgttgca gtaacttatt agcacattta attttttact aaatttatat tgattcaact 3540

atttcaacat cattcaatac agtaaatact ggaaaatgca agcaatctcc aaaaattcac 3600

caataagaga aacgaattaa atcatataca caattatttc acaccgtaca gtgcacttaa 3660

gtgtaggaaa tataatgcta tatacatttc caaccctcaa tacaggttct gtaaataatg 3720

aaaagaaaca tcaatttgat ttcttgaccg gtccctctga gacacacagt gctttcctca 3780

gcaacatcgt tgccgatcta tgtaacttgt aaactccttg tgcttaataa attctggcca 3840

gggttacttc agcctgcatg gcgaaaaaaa agaacttgtt agggagatcg caaacaaatg 3900

ttagctgccc catttcttct ctactgacca taaaagctct aggatcaggt catgaaaaca 3960

atgccgtcag accggaaata ctcaagattc agaacacgac tcctaggaac tgcaagttta 4020

aatttcaaca aaagcaaaat acaaccagat gacaaactaa tatatatcag ctgactgttc 4080

atctcaagtg gactcacatc tgtgaaattg ttagttctat gcatatatgc taatgtaata 4140

ctaatatgct attgaggctt attactcttc tcgactttta taggtatctc attgtaatcg 4200

atgacatttg gcattgggaa gaatgggaag tcatcagaaa gtccattccc aagaatgatc 4260

tgggtggtag aataatcatg actactcgtc ttaattcaat agctgggaag tgccacactg 4320

atgacaatga tgtttttgtc tacgaagttg gggatctaga taataatgat gctttgtcgt 4380

tgtcttgggg gatagcaaca aagtctgggg caggcaacag gatcggaact ggagaggata 4440

gtccatgcta tgatattgtg aacatgtgtt atggtatgcc tttagcactt atttggctgt 4500

cgtcagcatt ggttggagag atagaagaat taggtggtgc tgaagtgaaa aaatgtaggg 4560

atttgagaca catagaggat ggtattttgg acatcccatc cttacaacca ttggcggaga 4620

gtttatgcct tggttataac catcttcctc tttatctgag gactttgttg ttgtactgta 4680

gtgcatacca ttggtctaac agaatcgaaa ggggtcgtct ggtcaggagg tggattgcgg 4740

aaggatttgt gtcggaagag aaagaagcag aaggttactt tggcgagctt attaacagag 4800

gatggattac gcagcacgga gacaacaaca gttataatta ctatgagatc caccccgtga 4860

tgctggcctt cctgagatgc aagtccaagg agtacaattt tttaacatgc ttgggtctgg 4920

gatctgatac tagtactagt gcatcctccc caaggttgat tcgccggctg tctcttcagg 4980

gggggtatcc agtggactgc ttgtcaagca tgagtatgga tgtgtcacac acttgcagcc 5040

ttgtcgtcct tggtgacgtg gcgcgaccca agggaatccc cttctatatg tttaagcgct 5100

tgcgagtgtt ggaccttgaa gataataagg atatacagga ttctcatctg cagggcatat 5160

gtgaacagtt aagcctcaga gtgaggtacc ttggtctcaa gggaacgcgg atccgaaagc 5220

tccctcagga gatgaggaag ctgaagcatt tggagatttt gtatgtgggg agcactcgga 5280

tcagtgaact tccgcaagag attggagagc tgaagcatct gcggattctg gacgtgagaa 5340

acacggacat cactgagctc ccactgcaga tacgggagct gcagcatctg cacactctgg 5400

acgtgaggaa cactccaatc agtgagctcc cgccgcaggt tggcaagctg cagaatctca 5460

agattatgtg cgtgaggagc actggggtta gggagctccc aaaggagatt ggggagctga 5520

atcatctaca gactctggac gtgagaaaca cgagggtgag agagctgcca tggcaagctg 5580

gccagatctc ccaatcgttg cgcgtgcttg ccggtgacag tggcgatggc gtgcggttgc 5640

ccgaaggcgt ctgcgaagct ctgatcaacg gtattccagg ggctacgcgt gcaaaatgca 5700

gggaggttct gtccatcgcg atcatcgatc gtttcggacc tccccttgtt gggatattca 5760

aagttcccgg cagtcatatg cgtatcccga agatgatcaa agaccacttc cgcgttcttt 5820

cttgcctaga catcaggctc tgccacaagc ttgaggatga tgaccaaaag ttcctcgccg 5880

agatgcccaa cctgcagacg ctcgtgctga ggttcgaggc cctaccaaga caacccataa 5940

ccatcaacgg cacaggcttc cagatgctgg agagcttccg tgtcgacagc cgggtgccaa 6000

ggatagcctt ccatgaagac gccatgccca acctcaagct tctcgagttc aagttctacg 6060

ccggcccagc aagcaacgat gccatcggca tcaccaacct gaagagcctc caaaaggtgg 6120

tctttcggtg ctcgccatgg tacaagagcg acgcccctgg catcagcgcc accattgacg 6180

tcgtgaagaa agaagccgag gagcatccca accggccgat caccctcctc atcaatgctg 6240

ggtataagga gatatcaact gagtcacacg ggagcagtga aaacattgcg ggcagcagtg 6300

ggatcgatac tgagcctgca caggcacagc atgataatct ccctgctgtt cgagatgact 6360

acaagggaaa agggattctt cttgatggca ggtgtcctac ctgcggccga gcgactaaaa 6420

ttgaagagga aacccaagat cgagtagcag atattgaaat tcaaacagaa actactagct 6480

agctagtacc gctgtctaat tttatttgta ttaaatactc tccttcatgt aatactctaa 6540

gtccccgctc aatttttctt gcctccgcaa ctctacatga tactcaaaac tgatttctta 6600

cctccctttg attgtagaaa aaacatggga agtttggagg atttcaatcc tatgaaaagg 6660

actttgagaa acaaattacg gaatcctatc ttttccttta aaagatatat aatagaaaat 6720

cctatagaga tttttatagg aaagttaaca aaagcctcaa tcttatggag aattcctgtg 6780

tttatttgca tagaggaaag tgagactcac ctaatcaggg gcggttctag tgggtggtcc 6840

aggtgatccc tggaccaccc taaaatttgg cccacgagaa ccgccccccc cccctcctcc 6900

tcccggggtt ggtcgaaacc agaaaaaagg ccactgagct aagctagggt tagggagagg 6960

tgtagccatg aactagccac agcagcacgc atcgctggct gccgcctccg cctctgcgtc 7020

agcgccagcg tgccgtctcc ccggctctcg actctgcctc cgcctccgcc ttggcgccga 7080

tgcgtcgcct cctcggctcc cgcttctacc tcagcgccag cgtgccgcct ccgccttagc 7140

gccgcctcct cgcctcctcc cttccccgac tcctccagtc ccccactcct gtcggttgct 7200

atcgtcggcg ggcggcgacc aacgcctaca agccaactac ggctgcctgg gcaagccggc 7260

ggccaccccc gcccctggaa agggaaaaca ttgccattcc acaggcggcg ccaggtcccc 7320

tttctctcta gctttcttgt tgctcagcaa agttcaaagg tcagtagaca tttcttgttg 7380

gttttttgca atgttgccct atgcagtagt gagtagtcag tactcagtag tagtgctagt 7440

gaaaaatttc tgccttgagt gtagtgaaaa gcaagctgag aaatagcatg tgtgacaaat 7500

tattaaatga tggtttaatc acatctattg agcgggttat tttctctcaa gttagcaaag 7560

aagacattat gcataatttc atgtctatat atgaacggag agtagaaaag aagtagggtt 7620

ttgtaatctt ctacttatct attataagat atttgaatga ttatgttcta actttcgtaa 7680

cttcaaattt agatgttggt tttaagcaag ttgtgatgtt gtgagatata ttgctacatt 7740

tcaattatat ttttattatt tttgacacat ttggcttgaa tttgtaacaa tgtgacaatt 7800

tggagcatca agtaggacta cccgacgatt catgaaacca atgtgccgat atttagcggt 7860

tcttaatcat actgaggtaa gaaggcaaca ttttgcaaaa gtagaatttc ttcatgaaaa 7920

tcaggcttat agctttaatg ttcacaaact agctaagttt ccttgtacct tagaggaggg 7980

gcatcatgtt cgattctcaa atactccttg taatctaagt aggaatgtaa ataatttggt 8040

tgttaatgaa taaaatgcca gaattttatt ctaaaagaat atgtaattca aattaatatt 8100

attctagatg tatcttgaat agcccattag cactggacca gtctttcaag ttgggtcagt 8160

ggtcggtac 8169

<210>2

<211>6338

<212>DNA

<213>稻属水稻(Orysa sativa L.)

<220>

<221>5’UTR

<222>(1)..(133)

<220>

<221>CDS

<222>(134)..(1126)，(1290)..(3364)

<220>

<221>3’UTR

<222>(3365)..(3647)

<400>2

cattttcccc ccttatccat gggcaggaca cggaaattct cagcaggttc gcgcttgatc 60

tgaactgtct gtggctcata ctctcttgtg cttgcaacag ctgaaagttg cagtgagaag 120

tacagagaac aagatggagt tggtggtagg tgcttccgaa gccaccatga aatctctctt 180

gggcaagctg ggcaatcttc tagcccagga gtatgctctc atcagcggta tccgtggtga 240

catccagtac atcaatgacg agcttgccag catgcaggcc ttcctccgtg atctcagcaa 300

cgtgccagag ggtcacagtc atggccaccg gatgaaggac tggatgaagc agatccgaga 360

catcgcctat gatgttgagg actgtatcga tgactttgcc caccgcctcc ctcaggattc 420

catcagcgat gccaaatggt ccttcctact cacaaaaatc tatgaactat ggacatggtg 480

gccacgtcgt gtgattgctt ccaacattgc ccaactcaag gtacgggcac aacagatcgc 540

agatcgacgt agtagatacg gagtgaacaa cccagaacac cttgacagta gcagcagtgc 600

caggacccgt gctgtcaatt acgaaattgc tgagtatcag gtcacaagcc ctcagatcat 660

tggtataaag gagcctgtgg ggatgaagac ggtcatggag gagcttgagg tttggttaac 720

taatcctcaa gctgaaaatg ggcaagctgt tctgtccata gtcggttttg gaggtgtggg 780

aaagactacc attgccacag cattgtacag aaaagtcagt gataaatttc agtgccgggc 840

atcagtagct gtgtctcaga actatgacca aggcaaagtc ctcaatagta ttctgagtca 900

agtcagcaat caggagcagg gcagcagcac aacaattagt gagaaaaaga acctcacctc 960

aggcgctaag agcatgttga agacagccct gtcactgctc agaggtaatt gtatatgtca 1020

gccagaaaat gatggaaacc ctgataatac accaatcagg ctgcaggaaa caacggacga 1080

tgatcaaaac cccagaaaac tggaacagct cctggccgaa aagaggtacc tttttttgta 1140

aataaaattg ctttgcttat ctgtaaatta acttactcat cccactctaa atctaatgtt 1200

tatttccttc tatacacagc acaactccat cttttgaatg ggttttattt ttctcacttg 1260

tgctcatttt ttttttatca tctctgcagt tatatcctct tgattgatga catttggtct 1320

gccgaaacat gggagagtat cagatcgatt ttgcctaaaa ataataaagg cggtagaata 1380

atagtgacta caagatttca agctgttggt tcaacatgct cccctcttga aactgatcgt 1440

ttgcatacag ttgattttct caccgatgac gagtcccaaa acttattcaa tacaagtatt 1500

tgtgaatcaa agataagaaa agatagcaac aaagtagacg agcaagtccc tgaggaaata 1560

tggaaaatat gtgggggatt gcctttggcc atagtcacca tggctggtct tgtcgcctgc 1620

aacccaagga aagcctgctg cgattggagt aaactttgca aatcattatt tccagagcaa 1680

gaaactcctc ttaccctcga tggtgttaca aggatactgg attgttgtta caatgatttg 1740

cctgcggatc tgaagacttg cttattgtac ttgagtatat ttccgaaggg ttggaaaatt 1800

agtaggaaac gtttgtcccg gcgatggata gctgaaggtt ttgctaatga gaagcaaggg 1860

ttaacccagg aaagagttgc agaggcatac tttaatcaac tcacaagaag gaacttagta 1920

cgtcccatgg agcatggcag caatgggaag gtaaaaacgt ttcaagttca tgacatggtt 1980

cttgaataca tcatgtccaa atcaatcgaa gagaatttta ttactgtggt tggtggacac 2040

tggcagatga ctgcaccaag caataaagtc cgtcgactgt cgatgcaaag cagtggatcc 2100

aatcgtggaa gttcaacaaa aggcctgaac ttggctcaag tgagatcact gacggtgttt 2160

gggaacctga accatatgcc attccattca ttcaactatg ggataataca ggtgctggat 2220

cttgaggact ggaagggttt gaaagagaga catatgacgg agatatgtca aatgctttta 2280

ctcaagtatt tgagcatccg acgaacagaa atttccaaaa ttccctccaa gattcagaaa 2340

cttgagtact tggaaactct tgacataagg gagacatatg tcagggacct gcctaagtca 2400

atagtccagc taaaacggat cattagcata cttggaggga ataaaaacac acggaagggg 2460

ctgaggttgc ctcaagaaaa aagtaagaag ccaattaaaa acccgtcgcc tcaaggaaaa 2520

acaaaggagc ccgcaaagaa aggattctta tcccaagaaa aaggtaaagg cgcaatgaaa 2580

gcactccgtg tactgtcagg gattgagatt gttgaggaat catcagaagt agctgcaggc 2640

cttcatcagt tgacagggct aaggaagctt gccatataca agctcaatat aacaaagggt 2700

ggtgatacct tcaaacaatt acagtcctcc attgagtacc ttggcagctg tggtctgcag 2760

actctggcca tcaatgatga gaattctgaa tttatcaact cactgggcga catgcccgcg 2820

cctccaagat atcttgtcgc ccttgagctg tctggcaagt tggagaagct acccaagtgg 2880

atcaccagca tcactactct caacaagcta accatatctg taacagttct taggactgaa 2940

actttggaga tcctccacat tttaccttca ttgttttccc tcaccttcgc cttttcactt 3000

agtgcagcga agcaggatca ggacataata aaggacatcc ttgagaataa taaattggac 3060

agtgatgggg aaatcgtcat tccagctgaa ggattcaaga gtcttaagct gcttcgcttc 3120

tttgcacctt tagtgccgaa gctcagcttt ttggacaaga atgcaatgcc agcactcgaa 3180

atcattgaaa tgcggtttaa agacttcgaa ggtctatttg gcatcgaaat ccttgaaaat 3240

ctccgtgagg tgcatctcaa agttagtgat ggggcagaag caataaccaa gttccttgta 3300

aatgatttga aggttaatac tgagaaacca aaagtatttg ttgatggcat cgtcactgca 3360

tgagaagtaa aattgctgca aatcggagaa cttaccaatc atctgaggct tcccctctat 3420

tattactctc ttagaatata ttgttattat tgctcacctt gcaaaataaa atagggatgg 3480

catagcatat tgctacaacg taccatggtt ccatcatagt tgatttcact tgtcattaca 3540

gtgtctgttc agttgtgttt tctattaata aaagggagat ctccgcaaga aaccattatt 3600

atacttatat tcggttattg aactctataa atgatgggat tgctatattt atggtgccac 3660

aatttccatg agtgcggtat ttttttttct agcagttggc tggtgttaag atttgtgctg 3720

ccattgctcc tctattattg gtgcccaaaa ttacgctttg cactatgttc acagttgtaa 3780

aacttaccta aatttcgtgt attagtactg taatgttgtg attttcgcgt ccagttatat 3840

ttttttcttt gccagaagtt tgatttcaag gtatatctgg taagcttcag ccggattcgt 3900

taagttttta gtttaatcag ctaaactttt aacagtatgc atgcactagt ttctcccgtt 3960

atcttatcca atataattaa tgggctaatt ggatctatgc cattacaaac atggcaagat 4020

tcagaaaaat gctactacaa tttgtctatt catagctgtg ctagtgaaat tttacaaaat 4080

tggaaccgtg ctattgatat cacgttttcc atccatcttt tctttttttt ccttttcttc 4140

tttatcccgt cttcttcccg caccgacgag aggcgagtgg cggcgggacc ggcaagcgat 4200

ggcaggacct cggcagccct gggtgggcga gtgagggaga gctctcccaa gtgtctgcga 4260

agctctcatc ttcgttttcc tcatccccac tttgctcctc ttccactact gctgttgaag 4320

ctagcggccc tctctcacca gatctgggcg gagctcaagc gaggcgccac caccgacgat 4380

ggagcttcgc gtggacccca cagcctcacc cgattgccat ccctcctacc ctcatcactc 4440

catctccaag cccaaatccc acctccccca ccggctcctc ctcctcagcc cctgccgtgg 4500

cagccgaggc caccgatggg ccaaccctca acatcgtctc gaagcagctc cgcgcactgt 4560

ggaagaagca caaccaaatc ctccagatgg aggagtcgct cactggcggg aggaagctga 4620

acaaggagca ggaggaggtg ctccgatcca agcccatcgt catcgcgctc attgatgagc 4680

tcgagcggat gcgtgccctg ctcgccgacg ccctcgccga ggagctctcc tcctgccccg 4740

ccccttccct atctgtcact ccctcctcct ccacctcctc cggcgctgat ttgtccgtca 4800

aggatctcct cacgctcatc tacttcggct ccctcttcga cgtcaagtcg cagatcgagt 4860

tcgtcaccac catgctcgca cgctaaggag ctagactgat gcatcaccta cgactatgtc 4920

cgtccttgcc gcagcacgac ttgctacggt cccgcctcac gccccgtcgc tcgccggtcc 4980

cgccgccact tgcttctcat cggtgcggga agaagatggg agaaagaagg aagaaaacgg 5040

gaaaaaaaag agatggatga aaaacgtgac agcaatagca cggttccaat ttcgtaaaat 5100

ttcaatggca ccgctacgaa tagaagaatt gtagtagcat ttttctgaat caacatattt 5160

gtaatggcat ggatccaata aaccccaaat ttattttatg ccaatacaaa tattggcaac 5220

tggtgtcatt aacgtataaa tgggtcgcct acataaaacc ttccgcgtcc ttcttggttg 5280

aacaggtaat taattgcaac cattttctga aaaaattgac tggaagtctg aaaccgtccc 5340

tgctactccc tgaatgcttt agttcaatct ctatgaagct ccatccaaac aaaatctcca 5400

gatgatattt cattaaaaac atcatgtcca gaactgtcca gtatccaaga atggctatga 5460

tcttttctga attctggact cgggacttat attacatgta tcaaatccag ttattttctg 5520

gagctacacc agatgaaatc accaagtaaa acaattatat aaggatggtg agttgttaat 5580

taattacagc tttgatagac cactctgttt gttaatgcct gacaagagtt cacaaagaaa 5640

aaaatacaca ggattacaaa actttttaga tactatctga tgtgtgttaa ttctctcaaa 5700

tactatgtac ctgaacaaac aagagagaac atgttgtgaa ttgtgatctc ctcatgcgag 5760

tgacctgaaa ctctctacag ggtcagactc ctcaagcatc actgcagcct ggaaacaatc 5820

agcagcatca ttgatcctcc catcattcct gtgaactctc cctaaatgaa gccaagccat 5880

cctgttcgta ggctcaattc tcagtgcatc agagaggaag catctcgctg cagggagata 5940

ccttgaccct tgcttgcaga gaagtgcacc aatggccacc ttggatggaa catgctctag 6000

ctctatcgag aatgcgttga cgtaggcagc cagtgcctcc ttgttctgat ctcgcgcctc 6060

gagcatgaaa cctgaactta tagcatccac gagtcagatt ttgatgttga attcagttga 6120

atgcagagaa ttgtcatgtt agtgttacat agaagtggtg aaagttcaag tttagttgag 6180

ttgatcacct tctgcatgca ttgttgcagc cgagtaggat tttagggctc tagccttctg 6240

cagacatatc tcagcgtctc tccagattga gagactggag tacaggtttg caagtccttg 6300

ccatatttca aactcactta cactgtcatt ctgtccct 6338

<210>3

<211>1142

<212>PRT

<213>稻属水稻(Orysa sativa L.)

<400>3

Met Glu Ala Ala Ala Met Ala Val Thr Ala Ala Thr Gly Ala Leu Ala

1 5 10 15

Pro Val Leu Val Lys Leu Ala Ala Leu Leu Asp Asp Gly Glu Cys Asn

20 25 30

Leu Leu Glu Gly Ser Arg Ser Asp Ala Glu Phe Ile Arg Ser Glu Leu

35 40 45

Glu Ala Val His Ser Leu Leu Thr Pro Asn Ile Leu Gly Arg Met Gly

50 55 60

Asp Asp Asp Ala Ala Cys Lys Asp Gly Leu Ile Ala Glu Val Arg Glu

65 70 75 80

Leu Ser Tyr Asp Leu Asp Asp Ala Val Asp Asp Phe Leu Glu Leu Asn

85 90 95

Phe Glu Gln Arg Arg Ser Ala Ser Pro Phe Gly Glu Leu Lys Ala Arg

100 105 110

Val Glu Glu His Val Ser Asn Arg Phe Ser Asp Trp Lys Leu Pro Ala

115 120 125

Ala Ser Leu Pro Pro Ser Ser Val His Arg Arg Ala Gly Leu Pro Pro

130 135 140

Pro Asp Ala Glu Leu Val Gly Met Asp Lys Arg Met Glu Glu Leu Thr

145 150 155 160

Lys Leu Leu Glu Gln Gly Ser Asn Asp Ala Ser Arg Trp Arg Lys Arg

165 170 175

Lys Pro His Phe Pro Leu Arg Lys Thr Gly Leu Lys Gln Lys Ile Val

180 185 190

Ile Lys Val Ala Met Glu Gly Asn Asn Cys Arg Ser Lys Ala Met Ala

195 200 205

Leu Val Ala Ser Thr Gly Gly Val Asp Ser Val Ala Leu Val Gly Asp

210 215 220

Leu Arg Asp Lys Ile Glu Val Val Gly Tyr Gly Ile Asp Pro Ile Lys

225 230 235 240

Leu Ile Ser Ala Leu Arg Lys Lys Val Gly Asp Ala Glu Leu Leu Gln

245 250 255

Val Ser Gln Ala Lys Lys Asp Val Lys Glu Thr Thr Pro Met Leu Ala

260 265 270

Pro Val Lys Ser Ile Cys Glu Phe His Lys Val Lys Thr Val Cys Ile

275 280 285

Leu Gly Leu Pro Gly Gly Gly Lys Thr Thr Val Ala Arg Glu Leu Tyr

290 295 300

Asp Ala Leu Gly Thr His Phe Pro Cys Arg Val Phe Val Ser Val Ser

305 310 315 320

Pro Ser Ser Ser Pro Ser Pro Asn Leu Thr Lys Thr Leu Ala Asp Ile

325 330 335

Phe Ala Gln Ala Gln Leu Gly Val Thr Asp Thr Leu Ser Thr Ser Tyr

340 345 350

Gly Gly Ser Gly Thr Gly Arg Ala Leu Gln Gln His Leu Ile Asp Asn

355 360 365

Ile Ser Ala Phe Leu Leu Asn Lys Lys Tyr Leu Ile Val Ile Asp Asp

370 375 380

Ile Trp His Trp Glu Glu Trp Glu Val Ile Arg Lys Ser Ile Pro Lys

385 390 395 400

Asn Asp Leu Gly Gly Arg Ile Ile Met Thr Thr Arg Leu Asn Ser Ile

405 410 415

Ala Gly Lys Cys His Thr Asp Asp Asn Asp Val Phe Val Tyr Glu Val

420 425 430

Gly Asp Leu Asp Asn Asn Asp Ala Leu Ser Leu Ser Trp Gly Ile Ala

435 440 445

Thr Lys Ser Gly Ala Gly Asn Arg Ile Gly Thr Gly Glu Asp Ser Pro

450 455 460

Cys Tyr Asp Ile Val Asn Met Cys Tyr Gly Met Pro Leu Ala Leu Ile

465 470 475 480

Trp Leu Ser Ser Ala Leu Val Gly Glu Ile Glu Glu Leu Gly Gly Ala

485 490 495

Glu Val Lys Lys Cys Arg Asp Leu Arg His Ile Glu Asp Gly Ile Leu

500 505 510

Asp Ile Pro Ser Leu Gln Pro Leu Ala Glu Ser Leu Cys Leu Gly Tyr

515 520 525

Asn His Leu Pro Leu Tyr Leu Arg Thr Leu Leu Leu Tyr Cys Ser Ala

530 535 540

Tyr His Trp Ser Asn Arg Ile Glu Arg Gly Arg Leu Val Arg Arg Trp

545 550 555 560

Ile Ala Glu Gly Phe Val Ser Glu Glu Lys Glu Ala Glu Gly Tyr Phe

565 570 575

Gly Glu Leu Ile Asn Arg Gly Trp Ile Thr Gln His Gly Asp Asn Asn

580 585 590

Ser Tyr Asn Tyr Tyr Glu Ile His Pro Val Met Leu Ala Phe Leu Arg

595 600 605

Cys Lys Ser Lys Glu Tyr Asn Phe Leu Thr Cys Leu Gly Leu Gly Ser

610 615 620

Asp Thr Ser Thr Ser Ala Ser Ser Pro Arg Leu Ile Arg Arg Leu Ser

625 630 635 640

Leu Gln Gly Gly Tyr Pro Val Asp Cys Leu Ser Ser Met Ser Met Asp

645 650 655

Val Ser His Thr Cys Ser Leu Val Val Leu Gly Asp Val Ala Arg Pro

660 665 670

Lys Gly Ile Pro Phe Tyr Met Phe Lys Arg Leu Arg Val Leu Asp Leu

675 680 685

Glu Asp Asn Lys Asp Ile Gln Asp Ser His Leu Gln Gly Ile Cys Glu

690 695 700

Gln Leu Ser Leu Arg Val Arg Tyr Leu Gly Leu Lys Gly Thr Arg Ile

705 710 715 720

Arg Lys Leu Pro Gln Glu Met Arg Lys Leu Lys His Leu Glu Ile Leu

725 730 735

Tyr Val Gly Ser Thr Arg Ile Ser Glu Leu Pro Gln Glu Ile Gly Glu

740 745 750

Leu Lys His Leu Arg Ile Leu Asp Val Arg Asn Thr Asp Ile Thr Glu

755 760 765

Leu Pro Leu Gln Ile Arg Glu Leu Gln His Leu His Thr Leu Asp Val

770 775 780

Arg Asn Thr Pro Ile Ser Glu Leu Pro Pro Gln Val Gly Lys Leu Gln

785 790 795 800

Asn Leu Lys Ile Met Cys Val Arg Ser Thr Gly Val Arg Glu Leu Pro

805 810 815

Lys Glu Ile Gly Glu Leu Asn His Leu Gln Thr Leu Asp Val Arg Asn

820 825 830

Thr Arg Val Arg Glu Leu Pro Trp Gln Ala Gly Gln Ile Ser Gln Ser

835 840 845

Leu Arg Val Leu Ala Gly Asp Ser Gly Asp Gly Val Arg Leu Pro Glu

850 855 860

Gly Val Cys Glu Ala Leu Ile Asn Gly Ile Pro Gly Ala Thr Arg Ala

865 870 875 880

Lys Cys Arg Glu Val Leu Ser Ile Ala Ile Ile Asp Arg Phe Gly Pro

885 890 895

Pro Leu Val Gly Ile Phe Lys Val Pro Gly Ser His Met Arg Ile Pro

900 905 910

Lys Met Ile Lys Asp His Phe Arg Val Leu Ser Cys Leu Asp Ile Arg

915 920 925

Leu Cys His Lys Leu Glu Asp Asp Asp Gln Lys Phe Leu Ala Glu Met

930 935 940

Pro Asn Leu Gln Thr Leu Val Leu Arg Phe Glu Ala Leu Pro Arg Gln

945 950 955 960

Pro Ile Thr Ile Asn Gly Thr Gly Phe Gln Met Leu Glu Ser Phe Arg

965 970 975

Val Asp Ser Arg Val Pro Arg Ile Ala Phe His Glu Asp Ala Met Pro

980 985 990

Asn Leu Lys Leu Leu Glu Phe Lys Phe Tyr Ala Gly Pro Ala Ser Asn

995 1000 1005

Asp Ala Ile Gly Ile Thr Asn Leu Lys Ser Leu Gln Lys Val Val

1010 1015 1020

Phe Arg Cys Ser Pro Trp Tyr Lys Ser Asp Ala Pro Gly Ile Ser

1025 1030 1035

Ala Thr Ile Asp Val Val Lys Lys Glu Ala Glu Glu His Pro Asn

1040 1045 1050

Arg Pro Ile Thr Leu Leu Ile Asn Ala Gly Tyr Lys Glu Ile Ser

1055 1060 1065

Thr Glu Ser His Gly Ser Ser Glu Asn Ile Ala Gly Ser Ser Gly

1070 1075 1080

Ile Asp Thr Glu Pro Ala Gln Ala Gln His Asp Asn Leu Pro Ala

1085 1090 1095

Val Arg Asp Asp Tyr Lys Gly Lys Gly Ile Leu Leu Asp Gly Arg

1100 1105 1110

Cys Pro Thr Cys Gly Arg Ala Thr Lys Ile Glu Glu Glu Thr Gln

1115 1120 1125

Asp Arg Val Ala Asp Ile Glu Ile Gln Thr Glu Thr Thr Ser

1130 1135 1140

<210>4

<211>1021

<212>PRT

<213>稻属水稻(Orysa sativa L.)

<400>4

Met Glu Leu Val Val Gly Ala Ser Glu Ala Thr Met Lys Ser Leu Leu

1 5 10 15

Gly Lys Leu Gly Asn Leu Leu Ala Gln Glu Tyr Ala Leu Ile Ser Gly

20 25 30

Ile Arg Gly Asp Ile Gln Tyr Ile Asn Asp Glu Leu Ala Ser Met Gln

35 40 45

Ala Phe Leu Arg Asp Leu Ser Asn Val Pro Glu Gly His Ser His Gly

50 55 60

His Arg Met Lys Asp Trp Met Lys Gln Ile Arg Asp Ile Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Val Glu Asp Cys Ile Asp Asp Phe Ala His Arg Leu Pro Gln Asp Ser

85 90 95

Ile Ser Asp Ala Lys Trp Ser Phe Leu Leu Thr Lys Ile Tyr Glu Leu

100 105 110

Trp Thr Trp Trp Pro Arg Arg Val Ile Ala Ser Asn Ile Ala Gln Leu

115 120 125

Lys Val Arg Ala Gln Gln Ile Ala Asp Arg Arg Ser Arg Tyr Gly Val

130 135 140

Asn Asn Pro Glu His Leu Asp Ser Ser Ser Ser Ala Arg Thr Arg Ala

145 150 155 160

Val Asn Tyr Glu Ile Ala Glu Tyr Gln Val Thr Ser Pro Gln Ile Ile

165 170 175

Gly Ile Lys Glu Pro Val Gly Met Lys Thr Val Met Glu Glu Leu Glu

180 185 190

Val Trp Leu Thr Asn Pro Gln Ala Glu Asn Gly Gln Ala Val Leu Ser

195 200 205

Ile Val Gly Phe Gly Gly Val Gly Lys Thr Thr Ile Ala Thr Ala Leu

210 215 220

Tyr Arg Lys Val Ser Asp Lys Phe Gln Cys Arg Ala Ser Val Ala Val

225 230 235 240

Ser Gln Asn Tyr Asp Gln Gly Lys Val Leu Asn Ser Ile Leu Ser Gln

245 250 255

Val Ser Asn Gln Glu Gln Gly Ser Ser Thr Thr Ile Ser Glu Lys Lys

260 265 270

Asn Leu Thr Ser Gly Ala Lys Ser Met Leu Lys Thr Ala Leu Ser Leu

275 280 285

Leu Arg Gly Asn Cys Ile Cys Gln Pro Glu Asn Asp Gly Asn Pro Asp

290 295 300

Asn Thr Pro Ile Arg Leu Gln Glu Thr Thr Asp Asp Asp Gln Asn Pro

305 310 315 320

Arg Lys Leu Glu Gln Leu Leu Ala Glu Lys Ser Tyr Ile Leu Leu Ile

325 330 335

Asp Asp Ile Trp Ser Ala Glu Thr Trp Glu Ser Ile Arg Ser Ile Leu

340 345 350

Pro Lys Asn Asn Lys Gly Gly Arg Ile Ile Val Thr Thr Arg Phe Gln

355 360 365

Ala Val Gly Ser Thr Cys Ser Pro Leu Glu Thr Asp Arg Leu His Thr

370 375 380

Val Asp Phe Leu Thr Asp Asp Glu Ser Gln Asn Leu Phe Asn Thr Ser

385 390 395 400

Ile Cys Glu Ser Lys Ile Arg Lys Asp Ser Asn Lys Val Asp Glu Gln

405 410 415

Val Pro Glu Glu Ile Trp Lys Ile Cys Gly Gly Leu Pro Leu Ala Ile

420 425 430

Val Thr Met Ala Gly Leu Val Ala Cys Asn Pro Arg Lys Ala Cys Cys

435 440 445

Asp Trp Ser Lys Leu Cys Lys Ser Leu Phe Pro Glu Gln Glu Thr Pro

450 455 460

Leu Thr Leu Asp Gly Val Thr Arg Ile Leu Asp Cys Cys Tyr Asn Asp

465 470 475 480

Leu Pro Ala Asp Leu Lys Thr Cys Leu Leu Tyr Leu Ser Ile Phe Pro

485 490 495

Lys Gly Trp Lys Ile Ser Arg Lys Arg Leu Ser Arg Arg Trp Ile Ala

500 505 510

Glu Gly Phe Ala Asn Glu Lys Gln Gly Leu Thr Gln Glu Arg Val Ala

515 520 525

Glu Ala Tyr Phe Asn Gln Leu Thr Arg Arg Asn Leu Val Arg Pro Met

530 535 540

Glu His Gly Ser Asn Gly Lys Val Lys Thr Phe Gln Val His Asp Met

545 550 555 560

Val Leu Glu Tyr Ile Met Ser Lys Ser Ile Glu Glu Asn Phe Ile Thr

565 570 575

Val Val Gly Gly His Trp Gln Met Thr Ala Pro Ser Asn Lys Val Arg

580 585 590

Arg Leu Ser Met Gln Ser Ser Gly Ser Asn Arg Gly Ser Ser Thr Lys

595 600 605

Gly Leu Asn Leu Ala Gln Val Arg Ser Leu Thr Val Phe Gly Asn Leu

610 615 620

Asn His Met Pro Phe His Ser Phe Asn Tyr Gly Ile Ile Gln Val Leu

625 630 635 640

Asp Leu Glu Asp Trp Lys Gly Leu Lys Glu Arg His Met Thr Glu Ile

645 650 655

Cys Gln Met Leu Leu Leu Lys Tyr Leu Ser Ile Arg Arg Thr Glu Ile

660 665 670

Ser Lys Ile Pro Ser Lys Ile Gln Lys Leu Glu Tyr Leu Glu Thr Leu

675 680 685

Asp Ile Arg Glu Thr Tyr Val Arg Asp Leu Pro Lys Ser Ile Val Gln

690 695 700

Leu Lys Arg Ile Ile Ser Ile Leu Gly Gly Asn Lys Asn Thr Arg Lys

705 710 715 720

Gly Leu Arg Leu Pro Gln Glu Lys Ser Lys Lys Pro Ile Lys Asn Pro

725 730 735

Ser Pro Gln Gly Lys Thr Lys Glu Pro Ala Lys Lys Gly Phe Leu Ser

740 745 750

Gln Glu Lys Gly Lys Gly Ala Met Lys Ala Leu Arg Val Leu Ser Gly

755 760 765

Ile Glu Ile Val Glu Glu Ser Ser Glu Val Ala Ala Gly Leu His Gln

770 775 780

Leu Thr Gly Leu Arg Lys Leu Ala Ile Tyr Lys Leu Asn Ile Thr Lys

785 790 795 800

Gly Gly Asp Thr Phe Lys Gln Leu Gln Ser Ser Ile Glu Tyr Leu Gly

805 810 815

Ser Cys Gly Leu Gln Thr Leu Ala Ile Asn Asp Glu Asn Ser Glu Phe

820 825 830

Ile Asn Ser Leu Gly Asp Met Pro Ala Pro Pro Arg Tyr Leu Val Ala

835 840 845

Leu Glu Leu Ser Gly Lys Leu Glu Lys Leu Pro Lys Trp Ile Thr Ser

850 855 860

Ile Thr Thr Leu Asn Lys Leu Thr Ile Ser Val Thr Val Leu Arg Thr

865 870 875 880

Glu Thr Leu Glu Ile Leu His Ile Leu Pro Ser Leu Phe Ser Leu Thr

885 890 895

Phe Ala Phe Ser Leu Ser Ala Ala Lys Gln Asp Gln Asp Ile Ile Lys

900 905 910

Asp Ile Leu Glu Asn Asn Lys Leu Asp Ser Asp Gly Glu Ile Val Ile

915 920 925

Pro Ala Glu Gly Phe Lys Ser Leu Lys Leu Leu Arg Phe Phe Ala Pro

930 935 940

Leu Val Pro Lys Leu Ser Phe Leu Asp Lys Asn Ala Met Pro Ala Leu

945 950 955 960

Glu Ile Ile Glu Met Arg Phe Lys Asp Phe Glu Gly Leu Phe Gly Ile

965 970 975

Glu Ile Leu Glu Asn Leu Arg Glu Val His Leu Lys Val Ser Asp Gly

980 985 990

Ala Glu Ala Ile Thr Lys Phe Leu Val Asn Asp Leu Lys Val Asn Thr

995 1000 1005

Glu Lys Pro Lys Val Phe Val Asp Gly Ile Val Thr Ala

1010 1015 1020

<210>5

<211>9380

<212>DNA

<213>稻属水稻(Orysa sativa L.)

<220>

<221>promoter

<222>(1)..(1211)

<220>

<221>5’UTR

<222>(1212)..(1345)

<220>

<221>CDS

<222>(1346)..(1909)，(2060)..(2628)，(5397)..(7693)

<220>

<221>3’UTR

<222>(7694)..(7883)

<400>5

gggggggaca gcggcgcggt gggaagattg gggccttggg ggtgaggctt ttgggcggag 60

gccaataata ctgcactgca ttcgcagact cgttgactga ctcgtggtca tgccgtttct 120

ccctaatatt tcctccgtcc tttaatataa tattaaattc tttaacatta tacttgtact 180

actccctcca ttataaaata taagtcataa ccacccctaa cccaaacacc aagaaaataa 240

ttattattat cttgtagttt agaacatcct aataaataca atgcatgcat ccaatagaat 300

cagagaacat gagtgtagag gatgttaaaa aataataatt taataaaaaa gaggtcatag 360

ttaattgcct atatgcatgc atgccttata ttatgaaaca tctaagaaaa gtggttgtgc 420

cttatattat ggaatagagg gagtcctatt taaccattta tcttatttta aaaaaattat 480

gcaaataata aaaataaaaa gttgtgctta aaagatttta gataataaaa taagtaaaag 540

aaaattaaat aataattttc aaactttttt ttaataaaac gaaggatcgt actccctcca 600

ttctaaattg atctacgtat tttataggta caccaagacc aagaaaaact aataactctt 660

tcatattata tttactctaa caacaaactc aatgcatgca tcatccccaa tatttcctag 720

ccaatagcaa atcaagatat tgcatgtggg ttataaatac ttgtgtgcat ggaagcatgc 780

atcaatgtcc atttactcca atgcacacaa ataacgaata gacttaataa atgaacacaa 840

atatatagat catttaggaa taacctaaaa aaactatata tagatcaatt tagaatgaag 900

ggagtacaaa gtaaaatgtt aaaatccctt atactagaga acaaaggaac taattatgtg 960

aaagcagttc tctaacccat tgcgagagga ccgagaaaaa taccaccact ttaagagcag 1020

ttacaatagc aggctataag ccaactgcaa acatatttta aggagataaa taaggagaga 1080

gaagggtagc gggctataga tttgtagcca actgtagcac agactccaag acgcagtgtg 1140

tgtatgacag gtgggaccag gtattaatag tatagtactt gtatgaataa gctattagat 1200

tggctataaa taaattgaag ctactagttg gctatactgt taaccttgct ctaattacac 1260

tcggagtcgg agagtcagga ggtgagagag tagcactcaa cgcaaaaggg catcggccga 1320

gccgccgatc gaggcgcgag tagggatgga ggcggctgcc atggccgtaa ccgcagccac 1380

gggggccttg gcgcccgtgc tagtgaagct ggccgctttg ctggacgacg gggagtgcaa 1440

tcttctggag gggagccgga gcgacgcaga gttcatcaga tccgagctgg aggccgttca 1500

ttctctcctc accccaaata tcttggggag gatgggggat gacgatgcgg cgtgcaagga 1560

tggcttgatt gcggaggtcc gggagctgtc ctacgacctg gatgatgccg tcgacgactt 1620

cttggagctc aatttcgagc agcgaagaag cgcaagccct ttcggtgagc tcaaggcaag 1680

agttgaggag catgtctcca atcgcttctc tgactggaag ctaccggcgg cgagccttcc 1740

gccgtcgtcg gtacaccgcc gagctggctt gccgccacca gatgcagagc tggtggggat 1800

ggacaaacgt atggaagagc tcaccaaatt gctggaacaa gggagcaatg atgcttcacg 1860

atggcgcaag cgaaaaccgc atttcccgct cagaaaaaca gggctaaagg tacggttgga 1920

tctcgattct tcacaaatat agcttcctcc gatagcagtg ccaatgaatt tgtttacttc 1980

tctcttgatt ctttaatttg gaagtactgt ataacaaaca tggagggatc gtcatttaac 2040

ttaatttttt ttgttgcagc aaaaaatcgt gatcaaggtt gccatggagg gcaataattg 2100

ccgttcaaaa gcaatggctt tagttgcgag cactggagga gtggactcgg ttgcgctcgt 2160

aggtgatcta agagacaaga tagaggtggt cggttatggc attgacccca tcaagctgat 2220

ctccgcgctc cggaagaagg tgggcgatgc ggagttgctg caggtcagcc aagcaaaaaa 2280

agatgtgaag gagacgacgc cgatgcttgc gccggtgaaa tccatatgtg aatttcacaa 2340

ggtcaaaaca gtttgcatcc ttggattgcc aggtggaggc aaaacaacgg ttgccagaga 2400

attatatgac gccttgggaa cgcacttccc atgccgggtt ttcgtgtcag tctctccaag 2460

ttctagtccc agtcccaatc tcacaaagac tcttgcagac attttcgctc aagcacaact 2520

aggagtaacc gatacactta gcacaccata tggtgggagt gggaccggga gagctcttca 2580

acaacacctc atcgacaaca tatcagcttt cctcctcaac aaaaagtaag caatatctta 2640

tatctcttat ctagcttgtc cttaatccgg cttcccaaat taaagtgaac aggctatatg 2700

tccatataat gttgggtttt ttttttctgt cctcgatgag gtatatatca agatatgcca 2760

aacttttttt aattagcgtt actttattct acctagtaaa tagatacaga aatggggcag 2820

gcccctcctt tgtgacaggc caatggtttt atgatgtgga aacaactccc ttatcactga 2880

agctcttgct attactcgtg atggtactga tcttgcaaag gcttgcagta tttgtaaatc 2940

cacagggagt ggtcatcttt ttttttttaa gataatgaat agaaatctgg cctctatata 3000

gaaagccaaa ggttacacaa gtgcatacac tccaaatctc aaagctgaga aacacgaaaa 3060

acaaacgacc aaaaagaaaa gacgataaga ttaagtttca agcttttcct ccttgcttca 3120

gaaaacaggg aaatgcagag ctagcccgct cttcccctgc catgccctct cactgccatt 3180

gcaactacca caaaagctcc cctgtttcgc cgtgagcgaa gggaggggat ggaactagtc 3240

tgctgctttg ttgtcgccaa gcactggttt catgctgccc aaacaaccta tgccccgcta 3300

gcgataacga gtctgttgcc gccatgctgt tgtcgctgga gagcacttgt cgctgctcag 3360

ctatgtgtta agtaagctac taacaatctc tccattctct tgtagactgc ttataaaaga 3420

ttgtacttca actttttatt aatgaaatag agttcctgcc ttacaacaac aagaacgaga 3480

gagagagaga gagccaatat cacgagttag cactgtgaag acttcctgac tgttatgtct 3540

tcaagaacag tataaaagca tttgccacta taaaaatatg atagccctca agatcattaa 3600

aaatatgtca tgttctttta ccttcataac aaccagtatc acaaatatga aaacatttaa 3660

aggaaaatca gtatttgcca tttatgtaaa gaaaaactag actagaactc tgggctttta 3720

ttttagtgca cactgtatac atgtgtgttc tttgacgtat atacttgata ttttttcaaa 3780

aacttttggg ggcatatctg taacccatgc cccatgcatc caaagtagta gtgagacaac 3840

tttcgtatca atggacatgt ggcattaaat ttaatcccaa tatttgttct ctcgaagtcc 3900

tgaacatata attggacaaa attatataat ttaattaggc caattgagcc atatatacac 3960

acactataag aaacttctac aaaacaaaca ttcgctcctt ttaggttttg accagtctat 4020

acatgaacca gccaacggtg tgctggtctg actataaatg tttttttaga gagtaaaggc 4080

accttccagt acctctctcg aggacagtaa aaacacccat gctttaaggt tatgaacaac 4140

aaagcataga acaaccacaa gaaaaaaaaa caactagaac aagttctgga actagttagg 4200

gattcgggaa gccattgctt gctggcttgg gacaagctat gcctgccatt ggactatggt 4260

ggagactggg cataaaggat ctcaatctct tggagattgg cctatgtcct aggtggccat 4320

ggctgactgc aaggagatat atttcttgca acggaaattt tcattgcaaa agctgaaaat 4380

cgttgcgata tgtacctatt gtgacataat tgaatccatt gggagccgta gcaataaatc 4440

ccgtggtaat aggctattgc aatgattttc cgatggttgc ataaaaaggt gctattacaa 4500

tggttttgca ttgctattgc aacaacttga tatgtcatag gtatttattg caacagtttg 4560

taccatgctg caataagatt tcgcaacaca gacctattca ttaaatagcc tatttccaca 4620

cattcatttt tgtggcaata attcagtgcg acaagcatgt tctatagcta taacctgatg 4680

caacgggtta gacttgttgc agtaacttat tagcacattt aattttttac taaatttata 4740

ttgattcaac tatttcaaca tcattcaata cagtaaatac tggaaaatgc aagcaatctc 4800

caaaaattca ccaataagag aaacgaatta aatcatatac acaattattt cacaccgtac 4860

agtgcactta agtgtaggaa atataatgct atatacattt ccaaccctca atacaggttc 4920

tgtaaataat gaaaagaaac atcaatttga tttcttgacc ggtccctctg agacacacag 4980

tgctttcctc agcaacatcg ttgccgatct atgtaacttg taaactcctt gtgcttaata 5040

aattctggcc agggttactt cagcctgcat ggcgaaaaaa aagaacttgt tagggagatc 5100

gcaaacaaat gttagctgcc ccatttcttc tctactgacc ataaaagctc taggatcagg 5160

tcatgaaaac aatgccgtca gaccggaaat actcaagatt cagaacacga ctcctaggaa 5220

ctgcaagttt aaatttcaac aaaagcaaaa tacaaccaga tgacaaacta atatatatca 5280

gctgactgtt catctcaagt ggactcacat ctgtgaaatt gttagttcta tgcatatatg 5340

ctaatgtaat actaatatgc tattgaggct tattactctt ctcgactttt ataggtatct 5400

cattgtaatc gatgacattt ggcattggga agaatgggaa gtcatcagaa agtccattcc 5460

caagaatgat ctgggtggta gaataatcat gactactcgt cttaattcaa tagctgggaa 5520

gtgccacact gatgacaatg atgtttttgt ctacgaagtt ggggatctag ataataatga 5580

tgctttgtcg ttgtcttggg ggatagcaac aaagtctggg gcaggcaaca ggatcggaac 5640

tggagaggat agtccatgct atgatattgt gaacatgtgt tatggtatgc ctttagcact 5700

tatttggctg tcgtcagcat tggttggaga gatagaagaa ttaggtggtg ctgaagtgaa 5760

aaaatgtagg gatttgagac acatagagga tggtattttg gacatcccat ccttacaacc 5820

attggcggag agtttatgcc ttggttataa ccatcttcct ctttatctga ggactttgtt 5880

gttgtactgt agtgcatacc attggtctaa cagaatcgaa aggggtcgtc tggtcaggag 5940

gtggattgcg gaaggatttg tgtcggaaga gaaagaagca gaaggttact ttggcgagct 6000

tattaacaga ggatggatta cgcagcacgg agacaacaac agttataatt actatgagat 6060

ccaccccgtg atgctggcct tcctgagatg caagtccaag gagtacaatt ttttaacatg 6120

cttgggtctg ggatctgata ctagtactag tgcatcctcc ccaaggttga ttcgccggct 6180

gtctcttcag ggggggtatc cagtggactg cttgtcaagc atgagtatgg atgtgtcaca 6240

cacttgcagc cttgtcgtcc ttggtgacgt ggcgcgaccc aagggaatcc ccttctatat 6300

gtttaagcgc ttgcgagtgt tggaccttga agataataag gatatacagg attctcatct 6360

gcagggcata tgtgaacagt taagcctcag agtgaggtac cttggtctca agggaacgcg 6420

gatccgaaag ctccctcagg agatgaggaa gctgaagcat ttggagattt tgtatgtggg 6480

gagcactcgg atcagtgaac ttccgcaaga gattggagag ctgaagcatc tgcggattct 6540

ggacgtgaga aacacggaca tcactgagct cccactgcag atacgggagc tgcagcatct 6600

gcacactctg gacgtgagga acactccaat cagtgagctc ccgccgcagg ttggcaagct 6660

gcagaatctc aagattatgt gcgtgaggag cactggggtt agggagctcc caaaggagat 6720

tggggagctg aatcatctac agactctgga cgtgagaaac acgagggtga gagagctgcc 6780

atggcaagct ggccagatct cccaatcgtt gcgcgtgctt gccggtgaca gtggcgatgg 6840

cgtgcggttg cccgaaggcg tctgcgaagc tctgatcaac ggtattccag gggctacgcg 6900

tgcaaaatgc agggaggttc tgtccatcgc gatcatcgat cgtttcggac ctccccttgt 6960

tgggatattc aaagttcccg gcagtcatat gcgtatcccg aagatgatca aagaccactt 7020

ccgcgttctt tcttgcctag acatcaggct ctgccacaag cttgaggatg atgaccaaaa 7080

gttcctcgcc gagatgccca acctgcagac gctcgtgctg aggttcgagg ccctaccaag 7140

acaacccata accatcaacg gcacaggctt ccagatgctg gagagcttcc gtgtcgacag 7200

ccgggtgcca aggatagcct tccatgaaga cgccatgccc aacctcaagc ttctcgagtt 7260

caagttctac gccggcccag caagcaacga tgccatcggc atcaccaacc tgaagagcct 7320

ccaaaaggtg gtctttcggt gctcgccatg gtacaagagc gacgcccctg gcatcagcgc 7380

caccattgac gtcgtgaaga aagaagccga ggagcatccc aaccggccga tcaccctcct 7440

catcaatgct gggtataagg agatatcaac tgagtcacac gggagcagtg aaaacattgc 7500

gggcagcagt gggatcgata ctgagcctgc acaggcacag catgataatc tccctgctgt 7560

tcgagatgac tacaagggaa aagggattct tcttgatggc aggtgtccta cctgcggccg 7620

agcgactaaa attgaagagg aaacccaaga tcgagtagca gatattgaaa ttcaaacaga 7680

aactactagc tagctagtac cgctgtctaa ttttatttgt attaaatact ctccttcatg 7740

taatactcta agtccccgct caatttttct tgcctccgca actctacatg atactcaaaa 7800

ctgatttctt acctcccttt gattgtagaa aaaacatggg aagtttggag gatttcaatc 7860

ctatgaaaag gactttgaga aacaaattac ggaatcctat cttttccttt aaaagatata 7920

taatagaaaa tcctatagag atttttatag gaaagttaac aaaagcctca atcttatgga 7980

gaattcctgt gtttatttgc atagaggaaa gtgagactca cctaatcagg ggcggttcta 8040

gtgggtggtc caggtgatcc ctggaccacc ctaaaatttg gcccacgaga accgcccccc 8100

ccccctcctc ctcccggggt tggtcgaaac cagaaaaaag gccactgagc taagctaggg 8160

ttagggagag gtgtagccat gaactagcca cagcagcacg catcgctggc tgccgcctcc 8220

gcctctgcgt cagcgccagc gtgccgtctc cccggctctc gactctgcct ccgcctccgc 8280

cttggcgccg atgcgtcgcc tcctcggctc ccgcttctac ctcagcgcca gcgtgccgcc 8340

tccgccttag cgccgcctcc tcgcctcctc ccttccccga ctcctccagt cccccactcc 8400

tgtcggttgc tatcgtcggc gggcggcgac caacgcctac aagccaacta cggctgcctg 8460

ggcaagccgg cggccacccc cgcccctgga aagggaaaac attgccattc cacaggcggc 8520

gccaggtccc ctttctctct agctttcttg ttgctcagca aagttcaaag gtcagtagac 8580

atttcttgtt ggttttttgc aatgttgccc tatgcagtag tgagtagtca gtactcagta 8640

gtagtgctag tgaaaaattt ctgccttgag tgtagtgaaa agcaagctga gaaatagcat 8700

gtgtgacaaa ttattaaatg atggtttaat cacatctatt gagcgggtta ttttctctca 8760

agttagcaaa gaagacatta tgcataattt catgtctata tatgaacgga gagtagaaaa 8820

gaagtagggt tttgtaatct tctacttatc tattataaga tatttgaatg attatgttct 8880

aactttcgta acttcaaatt tagatgttgg ttttaagcaa gttgtgatgt tgtgagatat 8940

attgctacat ttcaattata tttttattat ttttgacaca tttggcttga atttgtaaca 9000

atgtgacaat ttggagcatc aagtaggact acccgacgat tcatgaaacc aatgtgccga 9060

tatttagcgg ttcttaatca tactgaggta agaaggcaac attttgcaaa agtagaattt 9120

cttcatgaaa atcaggctta tagctttaat gttcacaaac tagctaagtt tccttgtacc 9180

ttagaggagg ggcatcatgt tcgattctca aatactcctt gtaatctaag taggaatgta 9240

aataatttgg ttgttaatga ataaaatgcc agaattttat tctaaaagaa tatgtaattc 9300

aaattaatat tattctagat gtatcttgaa tagcccatta gcactggacc agtctttcaa 9360

gttgggtcag tggtcggtac 9380

<210>6

<211>8695

<212>DNA

<213>稻属水稻(Orysa sativa L.)

<220>

<221>promoter

<222>(1)..(2357)

<220>

<221>5’UTR

<222>(2358)..(2490)

<220>

<221>CDS

<222>(2491)..(3482)，(3647)..(5720)

<220>

<221>3’UTR

<222>(5721)..(6003)

<400>6

ctactctctc acctcctgac tctccgactc cgagtgtaat tagagcaagg ttaacagtat 60

agccaactag tagcttcaat ttatttatag ccaatctaat agcttattca tacaagtact 120

atactattaa tacctggtcc cacctgtcat acacacactg cgtcttggag tctgtgctac 180

agttggctac aaatctatag cccgctaccc ttctctctcc ttatttatct ccttaaaata 240

tgtttgcagt tggcttatag cctgctattg taactgctct taaagtggtg gtatttttct 300

cggtcctctc gcaatgggtt agagaactgc tttcacataa ttagttcctt tgttctctag 360

tataagggat tttaacattt tactttgtac tcccttcatt ctaaattgat ctatatatag 420

tttttttagg ttattcctaa atgatctata tatttgtgtt catttattaa gtctattcgt 480

tatttgtgtg cattggagta aatggacatt gatgcatgct tccatgcaca caagtattta 540

taacccacat gcaatatctt gatttgctat tggctaggaa atattgggga tgatgcatgc 600

attgagtttg ttgttagagt aaatataata tgaaagagtt attagttttt cttggtcttg 660

gtgtacctat aaaatacgta gatcaattta gaatggaggg agtacgatcc ttcgttttat 720

taaaaaaaag tttgaaaatt attatttaat tttcttttac ttattttatt atctaaaatc 780

ttttaagcac aactttttat ttttattatt tgcataattt ttttaaaata agataaatgg 840

ttaaatagga ctccctctat tccataatat aaggcacaac cacttttctt agatgtttca 900

taatataagg catgcatgca tataggcaat taactatgac ctctttttta ttaaattatt 960

attttttaac atcctctaca ctcatgttct ctgattctat tggatgcatg cattgtattt 1020

attaggatgt tctaaactac aagataataa taattatttt cttggtgttt gggttagggg 1080

tggttatgac ttatatttta taatggaggg agtagtacaa gtataatgtt aaagaattta 1140

atattatatt aaaggacgga ggaaatatta gggagaaacg gcatgaccac gagtcagtca 1200

acgagtctgc gaatgcagtg cagtattatt ggcctccgcc caaaagcctc acccccaagg 1260

ccccaatctt cccaccgcgc cgctgtcccc ccctccgacg gcggccacca tatcccccaa 1320

tcttcctccc gttggtcgct ggctggcctg gccagctctg gtcggaggag ggttcagttc 1380

catgggtgcg ccccctgccc atccctccac ttctactttc gtcttgagat ctcgccgttt 1440

ctgatctcct tgccatggca accagttgat ttggctgcca agatcgtccg tgctttgcaa 1500

aggtgaacaa tctttttctt cttgggcttt cactttgttg tgttaataga ctcagcgccg 1560

tcgcaacttg caaataaaaa ggttcagatc ggaaaatgga aataccgtac acagtagtct 1620

atagagaatc gactagtatt tcctgactgt aagtaaggaa gttgtaggta ccatgttctg 1680

atgattatct ttgaagcttg gagggggaca aaaagttggg agagaaacaa gaatgtattt 1740

gttcacttga ttgggggcag taggtaaaat ctcagcgtta ggaatttgca cctctttatt 1800

aagtttgact aaatttatag aaaaaaatta gcaacactta aaacaccaaa ttagtttcat 1860

tgaatccaac attgaatata ttttgataat atgtttactt tgtgtccaaa atgttactat 1920

atttttctat aaatttgatc aaatttcaat aagtttgact agaaaaaaaa gtcaaaccga 1980

cttataatat gaatataaat ggagggagta gattataaat tatctttatt ataatacttt 2040

gagtgtacaa acgaatgaat aaagtttaca aagttgaaaa gttattttta aatactattc 2100

cgataaacct gtatatagag aacttgtgaa aaaaaacacc gtttgaaatg tgtctgtgat 2160

aatctataag aggaacgggg cctaaatata ttcctttttt cctacgaaaa tgcaagaagt 2220

attgcctaat atattgatag agctgaagtt ttaaagtaaa atgaaacatt tgcatgaggc 2280

agcactggac aaaaagcgct tgtgaaaaaa atatgttcca aatattatta attcattcat 2340

ggtatggtct ttattttcat tttcccccct tatccatggg caggacacgg aaattctcag 2400

caggttcgcg cttgatctga actgtctgtg gctcatactc tcttgtgctt gcaacagctg 2460

aaagttgcag tgagaagtac agagaacaag atggagttgg tggtaggtgc ttccgaagcc 2520

accatgaaat ctctcttggg caagctgggc aatcttctag cccaggagta tgctctcatc 2580

agcggtatcc gtggtgacat ccagtacatc aatgacgagc ttgccagcat gcaggccttc 2640

ctccgtgatc tcagcaacgt gccagagggt cacagtcatg gccaccggat gaaggactgg 2700

atgaagcaga tccgagacat cgcctatgat gttgaggact gtatcgatga ctttgcccac 2760

cgcctccctc aggattccat cagcgatgcc aaatggtcct tcctactcac aaaaatctat 2820

gaactatgga catggtggcc acgtcgtgtg attgcttcca acattgccca actcaaggta 2880

cgggcacaac agatcgcaga tcgacgtagt agatacggag tgaacaaccc agaacacctt 2940

gacagtagca gcagtgccag gacccgtgct gtcaattacg aaattgctga gtatcaggtc 3000

acaagccctc agatcattgg tataaaggag cctgtgggga tgaagacggt catggaggag 3060

cttgaggttt ggttaactaa tcctcaagct gaaaatgggc aagctgttct gtccatagtc 3120

ggttttggag gtgtgggaaa gactaccatt gccacagcat tgtacagaaa agtcagtgat 3180

aaatttcagt gccgggcatc agtagctgtg tctcagaact atgaccaagg caaagtcctc 3240

aatagtattc tgagtcaagt cagcaatcag gagcagggca gcagcacaac aattagtgag 3300

aaaaagaacc tcacctcagg cgctaagagc atgttgaaga cagccctgtc actgctcaga 3360

ggtaattgta tatgtcagcc agaaaatgat ggaaaccctg ataatacacc aatcaggctg 3420

caggaaacaa cggacgatga tcaaaacccc agaaaactgg aacagctcct ggccgaaaag 3480

aggtaccttt ttttgtaaat aaaattgctt tgcttatctg taaattaact tactcatccc 3540

actctaaatc taatgtttat ttccttctat acacagcaca actccatctt ttgaatgggt 3600

tttatttttc tcacttgtgc tcattttttt tttatcatct ctgcagttat atcctcttga 3660

ttgatgacat ttggtctgcc gaaacatggg agagtatcag atcgattttg cctaaaaata 3720

ataaaggcgg tagaataata gtgactacaa gatttcaagc tgttggttca acatgctccc 3780

ctcttgaaac tgatcgtttg catacagttg attttctcac cgatgacgag tcccaaaact 3840

tattcaatac aagtatttgt gaatcaaaga taagaaaaga tagcaacaaa gtagacgagc 3900

aagtccctga ggaaatatgg aaaatatgtg ggggattgcc tttggccata gtcaccatgg 3960

ctggtcttgt cgcctgcaac ccaaggaaag cctgctgcga ttggagtaaa ctttgcaaat 4020

cattatttcc agagcaagaa actcctctta ccctcgatgg tgttacaagg atactggatt 4080

gttgttacaa tgatttgcct gcggatctga agacttgctt attgtacttg agtatatttc 4140

cgaagggttg gaaaattagt aggaaacgtt tgtcccggcg atggatagct gaaggttttg 4200

ctaatgagaa gcaagggtta acccaggaaa gagttgcaga ggcatacttt aatcaactca 4260

caagaaggaa cttagtacgt cccatggagc atggcagcaa tgggaaggta aaaacgtttc 4320

aagttcatga catggttctt gaatacatca tgtccaaatc aatcgaagag aattttatta 4380

ctgtggttgg tggacactgg cagatgactg caccaagcaa taaagtccgt cgactgtcga 4440

tgcaaagcag tggatccaat cgtggaagtt caacaaaagg cctgaacttg gctcaagtga 4500

gatcactgac ggtgtttggg aacctgaacc atatgccatt ccattcattc aactatggga 4560

taatacaggt gctggatctt gaggactgga agggtttgaa agagagacat atgacggaga 4620

tatgtcaaat gcttttactc aagtatttga gcatccgacg aacagaaatt tccaaaattc 4680

cctccaagat tcagaaactt gagtacttgg aaactcttga cataagggag acatatgtca 4740

gggacctgcc taagtcaata gtccagctaa aacggatcat tagcatactt ggagggaata 4800

aaaacacacg gaaggggctg aggttgcctc aagaaaaaag taagaagcca attaaaaacc 4860

cgtcgcctca aggaaaaaca aaggagcccg caaagaaagg attcttatcc caagaaaaag 4920

gtaaaggcgc aatgaaagca ctccgtgtac tgtcagggat tgagattgtt gaggaatcat 4980

cagaagtagc tgcaggcctt catcagttga cagggctaag gaagcttgcc atatacaagc 5040

tcaatataac aaagggtggt gataccttca aacaattaca gtcctccatt gagtaccttg 5100

gcagctgtgg tctgcagact ctggccatca atgatgagaa ttctgaattt atcaactcac 5160

tgggcgacat gcccgcgcct ccaagatatc ttgtcgccct tgagctgtct ggcaagttgg 5220

agaagctacc caagtggatc accagcatca ctactctcaa caagctaacc atatctgtaa 5280

cagttcttag gactgaaact ttggagatcc tccacatttt accttcattg ttttccctca 5340

ccttcgcctt ttcacttagt gcagcgaagc aggatcagga cataataaag gacatccttg 5400

agaataataa attggacagt gatggggaaa tcgtcattcc agctgaagga ttcaagagtc 5460

ttaagctgct tcgcttcttt gcacctttag tgccgaagct cagctttttg gacaagaatg 5520

caatgccagc actcgaaatc attgaaatgc ggtttaaaga cttcgaaggt ctatttggca 5580

tcgaaatcct tgaaaatctc cgtgaggtgc atctcaaagt tagtgatggg gcagaagcaa 5640

taaccaagtt ccttgtaaat gatttgaagg ttaatactga gaaaccaaaa gtatttgttg 5700

atggcatcgt cactgcatga gaagtaaaat tgctgcaaat cggagaactt accaatcatc 5760

tgaggcttcc cctctattat tactctctta gaatatattg ttattattgc tcaccttgca 5820

aaataaaata gggatggcat agcatattgc tacaacgtac catggttcca tcatagttga 5880

tttcacttgt cattacagtg tctgttcagt tgtgttttct attaataaaa gggagatctc 5940

cgcaagaaac cattattata cttatattcg gttattgaac tctataaatg atgggattgc 6000

tatatttatg gtgccacaat ttccatgagt gcggtatttt tttttctagc agttggctgg 6060

tgttaagatt tgtgctgcca ttgctcctct attattggtg cccaaaatta cgctttgcac 6120

tatgttcaca gttgtaaaac ttacctaaat ttcgtgtatt agtactgtaa tgttgtgatt 6180

ttcgcgtcca gttatatttt tttctttgcc agaagtttga tttcaaggta tatctggtaa 6240

gcttcagccg gattcgttaa gtttttagtt taatcagcta aacttttaac agtatgcatg 6300

cactagtttc tcccgttatc ttatccaata taattaatgg gctaattgga tctatgccat 6360

tacaaacatg gcaagattca gaaaaatgct actacaattt gtctattcat agctgtgcta 6420

gtgaaatttt acaaaattgg aaccgtgcta ttgatatcac gttttccatc catcttttct 6480

tttttttcct tttcttcttt atcccgtctt cttcccgcac cgacgagagg cgagtggcgg 6540

cgggaccggc aagcgatggc aggacctcgg cagccctggg tgggcgagtg agggagagct 6600

ctcccaagtg tctgcgaagc tctcatcttc gttttcctca tccccacttt gctcctcttc 6660

cactactgct gttgaagcta gcggccctct ctcaccagat ctgggcggag ctcaagcgag 6720

gcgccaccac cgacgatgga gcttcgcgtg gaccccacag cctcacccga ttgccatccc 6780

tcctaccctc atcactccat ctccaagccc aaatcccacc tcccccaccg gctcctcctc 6840

ctcagcccct gccgtggcag ccgaggccac cgatgggcca accctcaaca tcgtctcgaa 6900

gcagctccgc gcactgtgga agaagcacaa ccaaatcctc cagatggagg agtcgctcac 6960

tggcgggagg aagctgaaca aggagcagga ggaggtgctc cgatccaagc ccatcgtcat 7020

cgcgctcatt gatgagctcg agcggatgcg tgccctgctc gccgacgccc tcgccgagga 7080

gctctcctcc tgccccgccc cttccctatc tgtcactccc tcctcctcca cctcctccgg 7140

cgctgatttg tccgtcaagg atctcctcac gctcatctac ttcggctccc tcttcgacgt 7200

caagtcgcag atcgagttcg tcaccaccat gctcgcacgc taaggagcta gactgatgca 7260

tcacctacga ctatgtccgt ccttgccgca gcacgacttg ctacggtccc gcctcacgcc 7320

ccgtcgctcg ccggtcccgc cgccacttgc ttctcatcgg tgcgggaaga agatgggaga 7380

aagaaggaag aaaacgggaa aaaaaagaga tggatgaaaa acgtgacagc aatagcacgg 7440

ttccaatttc gtaaaatttc aatggcaccg ctacgaatag aagaattgta gtagcatttt 7500

tctgaatcaa catatttgta atggcatgga tccaataaac cccaaattta ttttatgcca 7560

atacaaatat tggcaactgg tgtcattaac gtataaatgg gtcgcctaca taaaaccttc 7620

cgcgtccttc ttggttgaac aggtaattaa ttgcaaccat tttctgaaaa aattgactgg 7680

aagtctgaaa ccgtccctgc tactccctga atgctttagt tcaatctcta tgaagctcca 7740

tccaaacaaa atctccagat gatatttcat taaaaacatc atgtccagaa ctgtccagta 7800

tccaagaatg gctatgatct tttctgaatt ctggactcgg gacttatatt acatgtatca 7860

aatccagtta ttttctggag ctacaccaga tgaaatcacc aagtaaaaca attatataag 7920

gatggtgagt tgttaattaa ttacagcttt gatagaccac tctgtttgtt aatgcctgac 7980

aagagttcac aaagaaaaaa atacacagga ttacaaaact ttttagatac tatctgatgt 8040

gtgttaattc tctcaaatac tatgtacctg aacaaacaag agagaacatg ttgtgaattg 8100

tgatctcctc atgcgagtga cctgaaactc tctacagggt cagactcctc aagcatcact 8160

gcagcctgga aacaatcagc agcatcattg atcctcccat cattcctgtg aactctccct 8220

aaatgaagcc aagccatcct gttcgtaggc tcaattctca gtgcatcaga gaggaagcat 8280

ctcgctgcag ggagatacct tgacccttgc ttgcagagaa gtgcaccaat ggccaccttg 8340

gatggaacat gctctagctc tatcgagaat gcgttgacgt aggcagccag tgcctccttg 8400

ttctgatctc gcgcctcgag catgaaacct gaacttatag catccacgag tcagattttg 8460

atgttgaatt cagttgaatg cagagaattg tcatgttagt gttacataga agtggtgaaa 8520

gttcaagttt agttgagttg atcaccttct gcatgcattg ttgcagccga gtaggatttt 8580

agggctctag ccttctgcag acatatctca gcgtctctcc agattgagag actggagtac 8640

aggtttgcaa gtccttgcca tatttcaaac tcacttacac tgtcattctg tccct 8695

<210>7

<211>40

<212>DNA

<213>人工序列

<400>7

ttttggcgcg ccgccagtgt ccaccaacca cagtaataaa 40

<210>8

<211>40

<212>DNA

<213>人工序列

<400>8

ttttggcgcg ccgaacagcc tgaggaagca gaacatcgtc 40

<210>9

<211>42

<212>DNA

<213>人工序列

<400>9

ttttggcgcg ccgcaagatc agtaccatca cgagtaatag ca 42

<210>10

<211>42

<212>DNA

<213>人工序列

<400>10

ttttggcgcg ccagggacag aatgacagtg taagtgagtt tg 42

<210>11

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<400>11

gaagctctga tcaacggtat tcc 23

<210>12

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<400>12

tctttgatca tcttcgggat acg 23

<210>13

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<400>13

tgaacttcca cgattggatc cac 23

<210>14

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<400>14

acatggttct tgaatacatc atgtc 25

<210>15

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<400>15

agctgttctg tccatagtcg g 21

<210>16

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<400>16

gatgcccggc actgaaattg 20

<210>17

<211>12

<212>PRT

<213>稻属水稻(Orysa sativa L.)

<400>17

Gly Leu Pro Gly Gly Gly Lys Thr Thr Val Ala Arg

1 5 10

<210>18

<211>12

<212>PRT

<213>稻属水稻(Orysa sativa L.)

<400>18

Asn Lys Lys Tyr Leu Ile Val Ile Asp Asp Ile Trp

1 5 10

<210>19

<211>15

<212>PRT

<213>稻属水稻(Orysa sativa L.)

<400>19

Asp Leu Gly Gly Arg Ile Ile Met Thr Thr Arg Leu Asn Ser Ile

1 5 10 15

<210>20

<211>20

<212>PRT

<213>稻属水稻(Orysa sativa L.)

<400>20

Glu Asp Ser Pro Cyc Tyr Asp Ile Val Asn Met Cys Tyr Gly Met Pro Leu Ala Leu Ile

1 5 10 15

<210>21

<211>16

<212>PRT

<213>稻属水稻(Orysa sativa L.)

<400>21

Val Leu Ser Ile Val Gly Phe Gly Gly Val Gly Lys Thr Thr Ile Ala

1 5 10 15

<210>22

<211>18

<212>PRT

<213>稻属水稻(Orysa sativa L.)

<400>22

Leu Glu Gln Leu Leu Ala Glu Lys Ser Tyr Ile Leu Leu Ile Asp Asp Ile Trp

1 5 10 15

<210>23

<211>13

<212>PRT

<213>稻属水稻(Orysa sativa L.)

<400>22

Gly Gly Arg Ile Ile Val Thr Thr Arg Phe Gln Ala Val

1 5 10

<210>24

<211>20

<212>PRT

<213>稻属水稻(Orysa sativa L.)

<400>24

Glu Gln Val Pro Glu Glu Ile Trp Lys Ile Cys Gly Gly Leu Pro Leu Ala Ile Val

1 5 10 15

<210>25

<211>13

<212>PRT

<213>稻属水稻(Orysa sativa L.)

<400>25

Cys Leu Leu Tyr Leu Ser Ile Phe Pro Lys Gly Trp Lys

1 5 10

<210>26

<211>13

<212>PRT

<213>稻属水稻(Orysa sativa L.)

<400>26

Lys Thr Phe Gln Val His Asp Met Val Leu Glu Tyr Ile

1 5 10

Claims

1.稻瘟病抗性基因Pik-h，其至少编码a)和b)所述氨基酸序列中的一种，其中

a)SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；

b)SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。

2.如权利要求1所述的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ IDNO.2所示。

3.权利要求1或2所述基因的cDNA序列。

4.权利要求1或2所述基因编码的蛋白。

5.由权利要求1或2所述基因或权利要求3所述cDNA与启动子构建的表达盒。

6.含有权利要求1或2所述基因或权利要求3所述cDNA的表达载体。

7.权利要求1或2所述基因、权利要求3所述cDNA、权利要求4所述蛋白、权利要求5所述表达盒或权利要求6所述表达载体在制备转基因植物中的应用。

8.权利要求1或2所述基因、权利要求3所述cDNA、权利要求4所述蛋白、权利要求5所述表达盒或权利要求6所述表达载体在提高水稻抗稻瘟病中的应用。

9.根据权利要求1或2的所述基因产生的分子标记。

10.权利要求9所述的分子标记在水稻抗稻瘟病的辅助育种中的应用。