BRPI0621197A2

BRPI0621197A2 - polinucleotìdeo isolado, construção de dna recombinante, método para alteração da resistência mecánica do caule de uma planta, plantas e métodos de avaliação da resistência mecánica do caule em uma planta

Info

Publication number: BRPI0621197A2
Application number: BRPI0621197-6A
Authority: BR
Inventors: Singh Dhugga Kanwarpal
Original assignee: Pioneer Hi-Bred International
Priority date: 2006-02-03
Filing date: 2006-02-03
Publication date: 2011-12-06
Also published as: CN101379190A; CA2635964A1; EP1987149A1; AU2006337212A1; WO2007089244A1

Abstract

POLINUCLEOTìDEO ISOLADO, CONSTRUçãO DE DNA RECOMBINANTE, MéTODO PARA ALTERAçãO DA RESISTêNCIA MECáNICA DO CAULE DE UMA PLANTA, PLANTAS E MéTODOS DE AVALIAçãO DA RESISTêNCIA MECáNICA DO CAULE EM UMA PLANTA. A invenção refere-se aos polinucleotídeos isolados que codificam a família dos polipeptídeos "similares ao caule frágil 2" (BRITTLE STALK 2-Iike) (Bk2L). A invenção também refere-se à construção de um gene quimérico que codifica todo ou uma porção de um polipeptídeo Bk2L, na orientação sense ou antisense, em que a expressão do gene quimérico resulta na produção de níveis alterados do polipeptídeo Bk2L em uma célula hospedeira transformada.

Description

"POLINUCLEOTÍDEO ISOLADO, CONSTRUÇÃO DE DNA RECOMBINANTE, MÉTODO PARA ALTERAÇÃO DA RESISTÊNCIA MECÂNICA DO CAULE DE UMA PLANTA, PLANTAS E MÉTODOS DE AVALIAÇÃO DA RESISTÊNCIA MECÂNICA DO CAULE EM UMA PLANTA"

Campo Da Invenção

O campo da invenção refere-se à biologia molecular vegetal, e em específico aos genes "similares ao caule frágil 2" (BRITTLE STALK 2-like), polipeptídeos "similares ao caule frágil 2" (BRITTLE STALK 2-like), e usos destes.

Antecedentes Da Invenção

O crescimento primário vegetal é principalmente dirigido por um alargamento das células, que ocorre através da produção irreversível da parede celular até a pressão osmótica dentro da célula. Embora a divisão celular seja necessária para a produção de novas células, o crescimento resulta na expansão destas células, e não simplesmente na sua divisão. Microfibrilas de celulose, que estão inseridas em uma matriz de hemicelulose e lignina na parede celular, são os principais determinantes da resistência à tensão (Appenzeller et ai, Cellulose 11:287-299 (2004)). A célula usualmente se expande ao longo do eixo perpendicular à orientação das microfibrilas. Por exemplo, a deposição radial das microfibrilas favorece a expansão celular ao longo do eixo longitudinal.

A parede secundária difere da parede primária por ser mais rica em celulose e Iignina e sua deposição começa no final da expansão celular. A modulação da síntese da parede celular primária tem aplicações na alteração da taxa de crescimento e tamanho (estatura) de uma planta, enquanto que parede secundária pode ser útil na melhora do acúmulo de biomassa e resistência do tecido (Appenzeller et al., Cellulose 11:287-299 (2004)).

A celulose em geral é o maior componente da parede em células vegetais maduras que formam os tecidos vegetativos. A estrutura paracristalina da celulose que resulta da energia de minimização pela formação de pontes de hidrogênios inter-cadeias e intra-cadeias faz desta uma das moléculas orgânicas mais fortes mecanicamente conhecidas, com base na densidade. É natural então que a celulose seja a determinante primária de resistência nos tecidos estruturais.

A resistência mecânica vegetal é um das mais importantes características agronômicas. Mutantes vegetais defeituosos na resistência do caule foram isolados e caracterizados. Mutantes de cevada com colmo frágil (brittle culm) (bc) foram inicialmente descritas com base nas propriedades físicas dos colmos, que têm uma redução de 80% na quantidade de celulose e um decréscimo de duas vezes na resistência ao rompimento em comparação às plantas tipo selvagem (Kokubo et al, Plant Physiol. 97:509-514 (1991)). Mutantes de arroz com colmo frágil 1 (brittle culm 1) (bc1) mostram uma redução na espessura da parede celular e no conteúdo de celulose (Qian et al, Chi. Sci. Bull. 46:2082-20851(2001)). Li et al. descreveu a identificação do arroz com COLMO FRÁGIL (BC1), um gene que codifica uma proteína similar à COBRA (The Plant Cell 15 (9):2020-2031 (2003)). Suas descobertas indicam que as funções do BC1 na regulação da biossíntese das paredes celulares primárias fornecem a resistência mecânica essencial para plantas de arroz.

Os caules do milho mutante caule frágil 2 (brittle stalk 2) (bk2) exibem uma resistência mecânica dramaticamente reduzida em comparação aos seus equivalentes tipo selvagem (Langham, MNL 14:21-22 (1940)). Mutantes bk2 do milho têm caule e folhas muito frágeis e que se rompem facilmente. O principal componente químico deficiente no mutante de caule é a celulose. Consequentemente, a resistência mecânica do caule parece ser inicialmente dependente da quantidade de celulose em uma unidade de comprimento do caule abaixo da espiga.

Além disso, os genes que codificam as subunidades catalíticas da celulose sintase (CesA) foram envolvidos na síntese da parede celular e estão representados por uma ampla família de plantas. Dez genes foram identificados em Arabidopsis após sequenciamento completo do genoma e doze genes foram isolados do milho pelo sequenciamento EST (patentes US 6.803.498 e US 6.930.225). Três dos genes CesA de cada Arabidopsis e de milho foram relatados como construtores da parede secundária, enquanto que o restante aparentemente constrói a parede primária (Taylor et ai, Prot. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 100:1450-1455 (2003)). Mutações nos três dos genes CesA de Arabidopsis resultou no xilema rompido e resistência mecânica reduzida do pedúnculo similar ao caule. Quando genes CesA relatados do arroz foram mutados, os colmos tornaram-se frágeis indicando o papel destes genes na formação da parede secundária. Em cada caso, a resistência mecânica reduzida foi correlacionada com a diminuição do conteúdo de celulose.

Em geral, mutações nos genes CesA envolvidos na má-formação da parede primária causam alterações fenotípicas severas, enquanto que aqueles genes formadores da parede secundária não alteram o fenótipo visual tanto quanto afetam a resistência mecânica (Appenzeller et ai, Cellulose 11:287-299 (2004)).

Como a resistência insuficiente do caule é o principal problema no cultivo do milho, é desejável fornecer composições e métodos para manipular da concentração de celulose na parede celular e com isso alterar a resistência do caule da planta e/ou qualidade para sustentação melhorada ou qualidade de silagem.

Descrição Resumida Da Invenção

A presente invenção inclui:

Em uma realização, um polinucleotídeo isolado que compreende (a) uma seqüência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo associado com a resistência mecânica do caule, em que dito polipeptídeo tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro entre 80% e 100%, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NOs:16 ou 18, ou (b) um complemento da seqüência de nucleotídeo, em que o complemento e a seqüência de nucleotídeo consistem do mesmo número de nucleotídeos e são 100% complementares.

Em outra realização, um método para alteração (preferencialmente aumento) da resistência mecânica do caule de uma planta que compreende (a) introdução da construção de um DNA recombinante em uma célula vegetal capaz de se regenerar para produzir células vegetais transformadas, dita construção de DNA recombinante compreendendo um promotor que é funcional em uma planta, operacionalmente ligado a (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs:4, 6,8, 10, 12, 14, 16 e 18, ou (ii) um complemento completo de dito polinucleotídeo (a)(i); e (b) regeneração de uma planta transgênica a partir de dita célula vegetal transformada, em que dita planta transgênica compreende em seu genoma dita construção de DNA recombinante e em que dita planta transgênica exibe uma alteração (preferencialmente aumento) na resistência mecânica do caule, quando comparada a uma planta controle que não compreende dita construção de DNA recombinante. O método pode ainda compreender (c) obtenção de uma planta da progênie derivada de dita planta transgênica, em que dita planta da progênie compreende em seu genoma a construção de DNA recombinante.

Em outra realização, um método de avaliação da resistência mecânica do caule em uma planta que compreende (a) introdução de uma construção de DNA recombinante em uma célula vegetal capaz de se regenerar para produzir células vegetais transformadas, dita construção de DNA recombinante compreendendo u m promotor que é funcional em uma planta, operacionalmente ligado a (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18, ou (ii) um complemento completo do dito polinucleotídeo de (a)(i); (b) regeneração de uma planta transgênica a partir da dita célula vegetal transformada e (c) avaliação da dita planta transgênica para dita resistência mecânica do caule. O método pode ainda compreender (d) obtenção de uma planta da progênie derivada de dita planta transgênica; e (e) avaliação de dita planta da progênie para resistência mecânica do caule.

Em outra realização, um método de avaliação da resistência mecânica do caule em uma planta que compreende (a) introdução de uma construção de um DNA recombinante em uma célula vegetal capaz de se regenerar para produzir células vegetais transformadas, dita construção de DNA recombinante compreendendo u m promotor que é funcional em uma planta, operacionalmente ligado a (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18, ou (ii) um complemento completo do dito polinucleotídeo de (a)(i); (b) regeneração de uma planta transgênica a partir da dita célula vegetal transformada; (c) obtenção de uma planta da progênie derivada da dita planta transgênica; e (d) avaliação da dita planta da progênie para resistência mecânica do caule.

-A presente invenção também inclui:

Em uma realização, uma planta que compreende em seu genoma: (a) uma primeira construção de DNA recombinante que compreende pelo menos um promotor que é funcional em uma planta, operacionalmente ligado a pelo menos um de um primeiro polinucleotídeo isolado, selecionado do grupo que consiste de (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 6 0% de identidade de seqüência, baseado no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 e 17; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (a)(i) ou (a)(ii); e (b) uma segunda construção de DNA recombinante que compreende pelo menos um promotor que é funcional em uma planta, operacionalmente ligado a pelo menos um de um segundo polinucleotídeo isolado selecionado do grupo que consiste de (iv) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40 e 42; (v) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, baseado no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39 e 41; e (vi) um complemento completo do polinucleotídeo de (b)(iv) ou (b)(v).

Em outra realização, uma planta compreendendo em seu genoma pelo menos uma seqüência reguladora operacionalmente ligada a: (a) pelo menos um polinucleotídeo isolado, selecionado do grupo que consiste de (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, baseado no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 e 17; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (a)(i) ou (a)(ii); e (b) pelo menos um polinucleotídeo isolado, selecionado do grupo que consiste de (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, baseado no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40 e 42; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, baseado no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39 e 41; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (b)(i) ou (b)(ii), e em que dita planta exibe aumento de conteúdo de celulose na parede celular ou aumento da taxa de crescimento quando comparado a uma planta controle que não compreende pelo menos uma dita seqüência reguladora operacionalmente ligada a ditos (a) e (b).

Em outra realização, uma planta que compreende em seu genoma uma construção de DNA para supressão que compreende um promotor funcional em uma planta, operacionalmente ligado a (a) toda ou parte de (i) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 50% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18, ou (ii) um complemento completo da seqüência de ácido nucléico de (a)(i); ou (b) uma região derivada de toda ou parte da fita sense ou fita antisense de um gene alvo de interesse, ou qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, dita região contendo uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 50% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada a toda ou parte de dita fita sense ou fita antisense a partir da qual dita região é derivada, e em que dito gene alvo de interesse codifica um polipeptídeo selecionado do grupo que consiste de Bk2, Bk2L1, Bk2L3, Bk2L4; Bk2L5, Bk2L6, Bk2L7, Bk2L8 e Bk2L9, e em que dita planta exibe resistência mecânica do caule reduzida quando comparada a uma planta controle que não compreende dita construção de DNA para supressão.

Em outra realização, uma planta que compreende em seu genoma uma construção de DNA para supressão que compreende um promotor funcional em uma planta, operacionalmente ligado a (a) todo ou parte de (i) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 50% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparado à SEQ ID NO: 6, ou (ii) um complemento completo da seqüência de ácido nucléico de (a)(i); ou (b) uma região derivada de toda ou parte de uma fita sense ou fita antisense de um gene alvo de interesse, dita região contendo uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 50% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à dita toda ou parte de uma fita sense ou fita antisense a partir da qual dita região é derivada, e em que dito gene alvo de interesse codifica um polipeptídeo Bk2L3, e em que dita planta exibe altura reduzida e/ou tamanho de órgão reduzido quando comparada a uma planta controle que não compreende dita construção de DNA para supressão.

Em outra realização, uma planta que compreende em seu genoma uma construção de DNA para supressão que compreende um promotor funcional operacionalmente ligado a (a) todo ou parte de (i) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 50% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparado à SEQ ID NO: 10, ou (ii) um complemento completo da seqüência de ácido nucléico de (a)(i); ou (b) uma região derivada de toda ou parte da fita sense ou fita antisense de um gene alvo de interesse, dita região contendo uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 5 0% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à dita toda ou parte de uma fita sense ou fita antisense a partir da qual dita região é derivada, e em que dito gene alvo de interesse codifica um polipeptídeo Bk2L5, e em que dita planta exibe esterilidade masculina quando comparada a uma planta controle que não compreende dita construção de DNA para supressão.

Breve Descrição Das Figuras E Lista De Seqüências

A invenção pode ser melhor entendida a partir da descrição detalhada a seguir, dos desenhos anexos e da Lista de Seqüências, que formam uma parte deste pedido.

Figuras 1A-1F mostram um alinhamento Clustal V, usando-se parâmetros padrões, das seqüências de aminoácidos das proteínas Bk2 e similares a Bk2 apresentados nas SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18.

Figura 2 mostra uma tabela que apresenta uma comparação da porcentagem de identidade (e porcentagem de divergência na metade triangular inferior), usando-se o método de alinhamento Clustal V, entre as nove seqüências de aminoácidos mostradas nas FIGs. 1A-1F.

Figura 3 mostra a análise da expressão gênica Solexa MPSS™ do gene Bk2. Figura 4 mostra a correlação dos padrões de expressão do gene Bk2 com membros da família de genes CesA.

Figuras 5A-5B mostram a correlação entre o nível de expressão de todos os diferentes genes Bk2 e CesA do milho como estudado a partir de Solexa MPSS™.

Figura 6 mostra a análise filogenética das proteínas Bk2L do milho, proteínas BCI L do arroz e proteínas COBL de Arabidopsis (números de acesso NCBI estão entre parênteses). Os números ao longo das ramificações são os valores de iniciação obtidos a partir de uma busca investigativa sobre 5.000 replicações. Os valores de iniciação apenas para os grupos monofiléticos que foram suportados por mais de 50% do tempo são mostrados. Os comprimentos das ramificações são proporcionais às diferenças deduzidas de aminoácidos.

SEQ ID NO:1 é a seqüência de nucleotídeo com 1784 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 89 a 1438) do gene BRITTLE STALK 2 (Bk2) de milho, ladeada por regiões adicionais não traduzidas (UTR) 5' (nucleotídeos 1 a 88) e 3' (nucleotídeos 1439 a 1784) para esta região ORF.

SEQ ID NO:2 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo BRITTLE STALK 2 (Bk2) de milho derivada a partir a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID ΝΟ.Ί.

SEQ ID NO:3 é a seqüência de nucleotídeo com 3152 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 586 a 2586) do gene BRITTLE STALK 2-Like1 (Bk2L1) de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 1 a 585) e 3' (nucleotídeos 2587 a 3152) para esta região ORF.

SEQ ID NO:4 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo BRITTLE STALK 2-Like1(Bk2L1) de milho derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO:3. SEQ ID NO:5 é a seqüência de nucleotídeo com 2094 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 281 a 1624) do gene BRITTLE STALK 2-Like3 (Bk2L3) de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 1 a 280) e 3' (nucleotídeos 1625 a 2094) para esta região ORF.

SEQ ID NO:6 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo BRITTLE STALK 2-Like3 (Bk2L3) de milho derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO:5.

SEQ ID NO:7 é a seqüência de nucleotídeo com 2102 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 281 a 1672) do gene BRITTLE STALK 2-Like4 (Bk2L4) de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 1 a 325) e 3' (nucleotídeos 1673 a 2102) para esta região ORF.

SEQ ID NO:8 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo BRITTLE STALK 2-Like4 (Bk2L4) de milho, derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO:7.

SEQ ID NO:9 é a seqüência de nucleotídeo com 2422 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 216 a 2249) do gene BRITTLE STALK 2-Like5 (Bk2L5) de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 1 a 215) e 3' (nucleotídeos 2250 a 2422) para esta região ORF.

SEQ ID NO: 10 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo BRITTLE STALK 2-Like5 (Bk2L5) de milho, derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO:9.

SEQ ID NO:11 é a seqüência de nucleotídeo com 1845 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 586 a 1564) do gene BRITTLE STALK 2-Like6 (Bk2L6) de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 1 a 183) e 3' (nucleotídeos 1564 a 1845) para esta região ORF. SEQ ID NO: 12 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo BRITTLE STALK 2-Like6 (Bk2L6) de milho, derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO:11.

SEQ ID NO: 13 é a seqüência de nucleotídeo com 1644 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 85 a 1425) do gene BRITTLE STALK 2-Like7 (Bk2L7) de milho, ladeada por regiões adicionais: UTR regiões 5' (nucleotídeos 1 a 84) e 3' (nucleotídeos 1426 a 1644) para esta região ORF.

SEQ ID N0:14 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo BRITTLE STALK 2-Like7 (Bk2L7) de milho, derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO: 13.

SEQ ID NO: 15 é a seqüência de nucleotídeo com 2108 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 144 a 2105) do gene BRITTLE STALK 2-Like8 (Bk2L8) de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 1 a 143) e 3' (nucleotídeos 2106 a 2108) para esta região ORF.

SEQ ID NO: 16 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo BRITTLE STALK 2-Like8 (Bk2L8) de milho, derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO: 15.

SEQ ID NO: 17 é a seqüência de nucleotídeo com 1335 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 1 a 1332) do gene BRITTLE STALK 2-Like9 (Bk2L9) de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 0) e 3' (nucleotídeos 1963 a 1965) para esta região ORF.

SEQ ID NO:18 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo BRITTLE STALK 2-Like9 (Bk2L9) de milho, derivada a partir da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO:17.

SEQ ID NO: 19 é a seqüência de nucleotídeo com 3780 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 201 a 3428) do gene CesA1 de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 1 a 200) e 3' (nucleotídeos 3429 a 3780) para esta região ORF.

SEQ ID NO:20 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo CesA1 de milho, derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO: 19.

SEQ ID NO:21 é a seqüência de nucleotídeo com 3725 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 179 a 3403) do gene CesA2 de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 1 a 178) e 3' (nucleotídeos 3403 a 3725) para esta região ORF.

SEQ ID NO:22 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo CesA2 de milho derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO:21.

SEQ ID NO:23 é a seqüência de nucleotídeo com 2830 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 3 a 2468) do gene CesA3 de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 1 a 2) e 3' (nucleotídeos 2469 a 2830) para esta região ORF.

SEQ ID NO:24 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo CesA3 de milho, derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO:23.

SEQ ID NO:25 é a seqüência de nucleotídeo com 3773 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 338 a 3571) do gene CesA4 de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 1 a 337) e 3' (nucleotídeos 3572 a 3773) para esta região ORF.

SEQ ID NO:26 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo CesA4 de milho, derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO:25.

SEQ ID NO:27 é a seqüência de nucleotídeo com 3704 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 272 a 3502) do gene CesA5 de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 1 a 271) e 3' (nucleotídeos 3503 a 3704) para esta região ORF.

SEQ ID NO:28 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo CesA5 de milho, derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO:27.

SEQ ID NO:29 é a seqüência de nucleotídeo com 3568 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 63 a 3242) do gene CesA6 de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 1 a 62) e 3' (nucleotídeos 3243 a 3568) para esta região ORF.

SEQ ID N0:30 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo CesA6 de milho, derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO:29.

SEQ ID NO:31 é a seqüência de nucleotídeo com 3969 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 144 a 3404) do gene CesA 7 de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 1 a 143) e 3' (nucleotídeos 3405) para esta região ORF.

SEQ ID NO:32 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo CesA7 de milho, derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO:31.

SEQ ID NO:33 é a seqüência de nucleotídeo com 3813 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 215 a 3499) do gene CesA8 de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 1 a 124) e 3' (nucleotídeos 3500 a 3813) para esta região ORF.

SEQ ID NO:34 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo CesA8 de milho, derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO:33.

SEQ ID NO:35 é a seqüência de nucleotídeo com 3799 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 238 a 3477) do gene CesA9 de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 1 a 237) e 3' (nucleotídeos 3478 a 3799) para esta região ORF.

SEQ ID NO:36 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo CesA9 de milho, derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO:35.

SEQ ID NO:37 é a seqüência de nucleotídeo com 3470 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 29 a 3265) do gene CesA10de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 1 a 28) e 3' (nucleotídeos 3266 a 3470) para esta região ORF.

SEQ ID NO:38 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo CesAIO de milho, derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO:37.

SEQ ID NO:39 é a seqüência de nucleotídeo com 3231 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 21 a 3044) do gene CesA11 de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 1 a 20) e 3' (nucleotídeos 3405 a 3231) para esta região ORF.

SEQ ID N0:40 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo CesA11 de milho, derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO:39.

SEQ ID NO:41 é a seqüência de nucleotídeo com 3028 pb que contém o quadro aberto de leitura (ORF) (nucleotídeos 52 a 2835) do gene CesA10 de milho, ladeada por regiões 5' UTR adicionais (nucleotídeos 1 a 51) e 3' (nucleotídeos 2836 a 3028) para esta região ORF.

SEQ ID NO:42 é a seqüência de aminoácidos deduzida de um polipeptídeo CesAI2 de milho, derivada a partir do ORF da seqüência de nucleotídeo apresentada na SEQ ID NO:41.

A Lista de Seqüências contém um código de letras para caracteres da seqüência de nucleotídeo e códigos triplos para aminoácidos conforme definido nos padrões IUPAC-IUBMB descritos em Nucleic Acids Research 13:3021-3030 (1985) e no Biochemical Joumal 219(2):345-373 (1984) que são incorporados ao presente como referência. Os símbolos e formatos usados para dados de seqüências de nucleotídeos e aminoácidos cumprem com as regras estabelecidas em 37 C.F.R. §1.822. A descrição das seqüências e listagem de seqüências anexas relativas a este pedido cumprem com as regras dirigidas a divulgações de seqüências de nucleotídeos e/ou aminoácidos em pedidos de patentes conforme estabelecido no 37 C.F.R. §1.821-1.825.

Descrição Detalhada Da Invenção

Todas as patentes, pedidos de patentes e publicações citadas por todo pedido são integralmente incorporadas pelo presente como referência.

Como usado no presente pedido e nas reivindicações anexas, as formas singulares "um", "uma" e "o/a" incluem os respectivos plurais, a menos que o contexto claramente dite de outra forma. Dessa forma, por exemplo, referindo-se a "uma planta" deve-se incluir uma pluralidade de tais plantas e referindo-se a "uma célula" deve-se incluir uma ou mais células e equivalentes destas conhecidas pelos técnicos no assunto, e assim por diante.

No contexto desta divulgação, vários termos serão utilizados.

"Transgênico" inclui qualquer célula, linhagem celular, calo, tecido, planta ou parte de plantas, cujo genoma destas tenha sido alterado pela presença de um ácido nucléico heterólogo, como uma construção de DNA recombinante, incluindo aqueles transgênicos inicialmente alterados, bem como aqueles criados por cruzamento sexual ou propagação assexuada a partir do transgênico inicial. O termo "transgênico" como usado no presente pedido não inclui a alteração do genoma (cromossomal ou extra-cromossomal) por métodos de geração convencional de plantas ou por eventos que ocorrem naturalmente como fertilização cruzada aleatória, infecção viral não- recombinante, transformação bacteriana não-recombinante, transposição não- recombinante ou mutação espontânea.

"Genoma" como aplicado a células vegetais inclui não apenas o DNA cromossomal encontrado dentro do núcleo, mas também DNA de organelas encontrado dentro de componentes subcelulares da célula (por exemplo, mitocondrial, plastidial).

"Planta" refere-se a plantas inteiras, órgãos vegetais, tecidos vegetais, sementes, células vegetais e progênie das mesmas. Células vegetais incluem, sem limitação, células de sementes, culturas em suspensão, embriões, regiões meristemáticas, tecidos de caule, folhas, raízes, ramos, gametófitos, esporófitos, pólen e microesporos.

"Progênie" compreende qualquer geração subsequente de uma planta.

"Planta transgênica" refere-se a uma planta que compreende em seu genoma um polinucleotídeo heterólogo. Preferencialmente, o polinucleotídeo heterólogo está integrado de forma estável dentro do genoma, de forma que o polinucleotídeo possa ser transferido para sucessivas gerações. O polinucleotídeo heterólogo pode ser integrado no genoma individualmente ou como parte de uma construção de DNA recombinante.

"Heterólogo" em relação à seqüência significa uma seqüência que se origina a partir de uma outra espécie, ou se for da mesma espécie, está substancialmente modificada a partir de sua forma nativa na composição e/ou Iocus genômico pela intervenção humana premeditada.

"Polinucleotídeo", "seqüência de ácido nucléico", "seqüência de nucleotídeo" ou "fragmento de ácido nucléico" são usados alternadamente e é um polímero de RNA ou DNA de fita simples ou dupla, que opcionalmente contém bases de nucleotídeos sintéticas, não naturais ou alteradas. Nucleotídeos (usualmente encontrados na forma 5-monofosfato) são designados por uma única uma letra, como a seguir: "A" para adenilato ou desoxiadenilato (para RNA ou DNA1 respectivamente), "C" para citidilato ou desoxicitidilato, "G" para guanilato ou desoxiguanilato, "U" para uridilato, "T" para desoxitimidilato, "R" para purinas (A ou G), "Y" para pirimidinas (C ou T), "K" para G ou Τ, Ή" para A ou C ou Τ, "I" parar inosina, e "N" para qualquer nucleotídeo.

"Polipeptídeo", "peptídeo", "seqüência de aminoácidos" e "proteína" são usados alternadamente no presente pedido para se referir a um polímero de resíduos de aminoácidos. Os termos se aplicam aos polímeros de aminoácidos nos quais um ou mais resíduos de aminoácidos sejam análogos químicos artificiais de um aminoácido de ocorrência natural, bem como polímeros de aminoácidos de ocorrência natural. Os termos "polipeptídeo", "peptídeo", "seqüência de aminoácidos" e "proteína" são estão também modificações que incluem, mas não estão limitadas a, glicosilação, ligações lipídicas, sulfatação, carboxilação gama de resíduos de ácido glutâmico, hidroxilação e ADP-ribosilação.

"RNA mensageiro (mRNA)" refere-se ao RNA que está sem íntrons e que pode ser traduzido em proteínas pela célula.

"cDNA" refere-se a um DNA que é complementar e sintetizado a partir de um molde de RNA usando-se a enzima transcriptase reversa. O cDNA pode ser de fita simples ou convertido para a forma de fita dupla usando-se o fragmento Klenow da DNA polimerase I.

Proteína "madura" refere-se a um polipeptídeo processado pós- tradução (isto é, aquele em que quaisquer pré ou pró-peptídeos presentes no produto de tradução primária tenham sido removidos).

Proteína "precursora" refere-se ao produto primário de tradução do mRNA (isto é, com pré e pró-peptídeos ainda presentes). Pré e pró- peptídeos podem ser, mas não estão limitados aos sinais de localização intracelular. "Isolado" refere-se aos materiais, como moléculas de ácido nucléico e/ou proteínas que estão essencialmente livres, ou de outra forma removidos, dos componentes que normalmente os acompanham ou com os quais interagem em um ambiente natural. Polinucleotídeos isolados podem ser purificados a partir de uma célula hospedeira na qual eles ocorrem naturalmente. Métodos convencionais para purificação de ácido nucléico conhecidos pelos técnicos no assunto podem ser usados para se obter polinucleotídeos isolados. O termo também inclui polinucleotídeos recombinantes e polinucleotídeos sintetizados quimicamente.

O termo "recombinante" refere-se a uma combinação artificial de dois segmentos separados de outra forma, por exemplo, por síntese química ou por manipulação de segmentos isolados de ácidos nucléicos por técnicas de engenharia genética. "Recombinante" também se refere a uma célula ou vetor, que foi modificado pela introdução de um ácido nucléico heterólogo ou uma célula derivada a partir de uma célula modificada, mas não inclui a alteração da célula ou vetor por eventos de ocorrência natural (por exemplo, mutação espontânea, transformação/transdução/transposição natural) como aquela que ocorre sem intervenção humana premeditada.

"Construção de DNA recombinante" refere-se a uma combinação de fragmentos de ácido nucléico que não são normalmente encontrados na natureza. Consequentemente, uma construção de DNA pode compreender seqüências reguladoras e seqüências codificadoras que são derivadas de diferentes fontes, ou seqüências reguladoras e seqüências codificadoras derivadas da mesma fonte, mas organizadas de uma maneira diferente daquela normalmente encontrada na natureza.

"Seqüências reguladoras" referem-se às seqüências de nucleotídeos localizadas a montante (seqüências não codificadoras 5'), dentro, ou a jusante (seqüências não codificadoras 3') de uma seqüência codificadora, e que influencia a transcrição, processamento ou estabilidade do RNA1 ou tradução da seqüência codificadora associada. Seqüências reguladoras podem incluir, mas não estão limitados a: promotores, seqüências líder de tradução, íntrons e seqüências de reconhecimento de poliadenilação.

"Promotor" refere-se a um fragmento de ácido nucléico capaz de controlar a transcrição de outro fragmento de ácido nucléico.

"Promotor funcional em uma planta" é um promotor capaz de controlar a transcrição em células vegetais, sendo ou não sua origem de uma célula vegetal.

O termo "operacionalmente ligado" refere-se à associação de fragmentos de ácido nucléico com um único fragmento, de forma que a função de um seja regulada pelo outro. Por exemplo, um promotor está operacionalmente ligado com um fragmento de ácido nucléico quando este é capaz de regular a transcrição deste fragmento de ácido nucléico.

"Expressão" refere-se à produção de um produto funcional. Por exemplo, a expressão de um fragmento de ácido nucléico pode se referir à transcrição do fragmento de ácido nucléico (por exemplo, transcrição que resulta no mRNA ou RNA funcional) e/ou tradução do mRNA em um precursor ou proteína madura.

"Fenótipo" significa características detectáveis de uma célula ou organismo.

"Introduzido" no contexto de inserção de um ácido nucléico isolado (por exemplo, uma construção de DNA recombinante) em uma célula, significa "transfecção" ou "transformação" ou "transdução" e refere-se à incorporação de um fragmento de ácido nucléico (por exemplo, uma construção de DNA recombinante) em uma célula eucarionte ou procarionte onde o fragmento de ácido nucléico pode ser incorporado no genoma da célula (tal como DNA cromossomal, plasmidial, plastidial ou mitocondrial), convertido em um replicon autônomo ou expresso de modo transitório (tal como mRNA transfectado).

Uma "célula transformada" é qualquer célula na qual um fragmento de ácido nucléico (tal como uma construção de DNA recombinante) foi introduzido.

"Transformação" como usada no presente pedido refere-se tanto à transformação estável como transformação transitória.

"Transformação estável" refere-se à introdução de um fragmento de ácido nucléico no genoma de um organismo hospedeiro, resultando em herança geneticamente estável. Uma vez transformado de forma estável, o fragmento de ácido nucléico está integrado de forma estável no genoma do organismo hospedeiro e de qualquer geração subsequente.

"Transformação transitória" refere-se à introdução de um fragmento de ácido nucléico no núcleo, ou organela contendo DNA de um organismo hospedeiro resultando em expressão gênica sem herança geneticamente estável.

"Alelo" é uma das várias formas alternativas de um gene que ocupa um dado Iocus em um cromossomo. Diferentes alelos de um gene diferem em sua seqüência do DNA. Quando todos os alelos presentes em um dado Iocus em um par de cromossomos homólogos em uma planta diplóide são os mesmos, essa planta é homozigota para esse locus. Quando todos os alelos presentes em um dado locus em um par de cromossomos homólogos em uma planta diplóide são diferentes, essa planta é heterozigota para esse locus. Se um transgene está presente em um dos cromossomos dos pares de cromossomos homólogos em uma planta diplóide, essa planta é hemizigota para esse locus.

"Contígua" refere-se a uma seqüência de nucleotídeo montada a partir de duas ou mais seqüências de nucleotídeo que compartilham regiões comuns ou sobrepostas da seqüência homóloga. Por exemplo, as seqüências de nucleotídeos de dois ou mais fragmentos de ácido nucléico podem ser comparadas e alinhadas a fim de identificar seqüências comuns ou sobrepostas. Onde existem seqüências comuns ou sobrepostas entre dois ou mais fragmentos de ácido nucléico, as seqüências (e então seus fragmentos correspondentes de ácido nucléico) podem ser montadas em uma única seqüência contígua de nucleotídeo.

"Degeneração de códon" refere-se à divergência no código genético que permite variação da seqüência de nucleotídeo sem afetar a seqüência de aminoácidos de um polipeptídeo codificado. Consequentemente, a atual invenção relaciona-se a qualquer fragmento de ácido nucléico que compreende uma seqüência de nucleotídeo que codifica toda ou uma porção substancial das seqüências de aminoácidos apresentadas no presente pedido. O técnico no assunto está bem informado sobre a "preferência de uso de códon" exibida por uma célula hospedeira específica no uso dos códons de nucleotídeos para especificar um dado aminoácido. Portanto, na síntese de um fragmento de ácido nucléico para melhorar a expressão em uma célula hospedeira, é desejável criar o fragmento de ácido nucléico de forma que sua freqüência de uso de códon se aproxime da freqüência preferida de uso de códon da célula hospedeira.

"Fragmentos sintéticos de ácido nucléico" podem ser montados a partir de blocos de construção de oligonucleotídeos quimicamente sintetizados usando-se procedimentos conhecidos pelos técnicos no assunto. Estes blocos de construção são ligados e anelados para formar fragmentos maiores de ácido nucléico que podem então ser enzimaticamente montados para construir o fragmento inteiro de ácido nucléico desejado. "Quimicamente sintetizado", com relação a um fragmento de ácido nucléico, significa que os nucleotídeos componentes foram montados ín vitro. A síntese química manual de fragmentos de ácido nucléico pode ser realizada usando-se procedimentos bem estabelecidos, ou pode ser realizada síntese química automatizada usando-se uma das diversas máquinas disponíveis comercialmente. Consequentemente, os fragmentos de ácido nucléico podem ser adaptados para a expressão gênica ideal, com base na otimização da seqüência de ácido nucléico para que reflita a preferência de uso de códon da célula hospedeira. O técnico no assunto avalia a possibilidade de expressão gênica bem sucedida se o uso do códon é induzido para o uso desses códons preferidos pelo hospedeiro. A determinação de códons preferidos pode estar baseada em uma análise de genes derivados da célula hospedeira quando a informação sobre a seqüência está disponível.

O termo "amplificado" significa que a construção de múltiplas cópias de uma seqüência de ácido nucléico ou múltiplas cópias complementares à seqüência de ácido nucléico utiliza pelo menos uma das seqüências de ácido nucléico como molde. Os sistemas de amplificação incluem o sistema de reação em cadeia da polimerase (PCR)1 sistema de reação em cadeia da Iigase (LCR), amplificação com base na seqüência de ácido nucléico (NASBA, Cangene1 Mississauga1 Ontario), sistemas Q-Beta Replicase1 sistema de amplificação com base na transcrição (TAS)1 e amplificação por deslocamento da fita (SDA). Ver1 por exemplo, Diagnostic Molecular Microbiology: Principies and Applications, D. H. Persing et ai, Ed., American Society for Microbiology, Washington, D.C. (1993). O produto da amplificação é denominado um amplicon.

O termo "localização cromossômica" refere-se ao comprimento de um cromossomo que pode ser medido pela referência ao segmento linear do DNA que este compreende. A localização cromossômica pode ser definida pela referência de duas seqüências únicas de DNA, isto é, marcadores.

O termo "marcador" refere-se a um Iocus em um cromossomo que serve para identificar uma posição única no cromossomo. Um "marcador polimórfico" refere-se a um marcador que aparece em múltiplas formas (alelos), de modo que diferentes formas do marcador, quando presentes em um par homólogo, permitem a transmissão de cada um dos cromossomos nesse par a ser seguida. Um genótipo pode ser definido pelo uso de um ou de uma pluralidade de marcadores.

Alinhamentos de seqüência e cálculos de porcentagem de identidade podem ser determinados usando-se uma variedade de métodos de comparação criados para detectar seqüências homólogas, incluindo, mas não limitado ao programa MegAlign™ do conjunto de computação de bioinformática da LASARGENE (DNASTAR Inc., Madison, Wl). A menos que estabelecido de outra forma, o alinhamento múltiplo das seqüências fornecidas no presente pedido foi realizado usando-se o método de alinhamento Clustal V (Higgins e Sharp (1989) CABIOS. 5:151-153) com parâmetros padrão (PENALIDADE PARA GAP=10, PENALIDADE POR EXTENSÃO DE GAP=I 0). Parâmetros padrão para alinhamentos de pares e cálculo de porcentagem de identidade de seqüências de proteína usando-se o método Clustal V são KTUPLE=I; PENALIDADE PARA GAP=3, JANELA=5 E DIAGONAIS SALVAS=5. Para ácidos nucléicos estes parâmetros são KTUPLE=2, PENALIDADE PARA GAP=5, JANELA=4 e DIAGONAIS SALVAS=4. Após o alinhamento das seqüências usando-se o programa Clustal V, é possível se obter uma "porcentagem de identidade" e valores de "divergência" visualizando a tabela de "distância das seqüências" no mesmo programa; a menos que estabelecido de outra forma, as porcentagens de identidade e divergências de seqüências fornecidas e reivindicadas no presente pedido foram calculadas desta maneira.

A menos que estabelecido de outra forma, valores de identidade/similaridade de seqüência "BLAST" fornecidos no presente pedido referem-se aos valores obtidos usando-se o conjunto de programas BLAST 2.0 que utiliza parâmetros padrão (Altschul et ai, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 (1997)). O programa para realização da análise BLAST está publicamente disponível, tal como por meio do National Center for Biotechnology Information. Este algoritmo envolve inicialmente a identificação de pares de seqüência com alta pontuação (HSPs) pela identificação de códigos curtos de comprimento W na seqüência pesquisada, que são tanto compatíveis como satisfazem alguma pontuação T mínima avaliada positivamente quando alinhada com um código do mesmo comprimento em uma seqüência do banco de dados. T é chamado de pontuação mínima de código de vizinhança (Altschul et ai, acima) Estes códigos de vizinhança inicial de sucesso atuam como uma origem para a iniciação de buscas para encontrar HSPs mais longas contidas nestes. Estes códigos de sucesso são então ampliados em ambas as direções ao longo de cada seqüência até o máximo de pontuação acumulada que possa alcançada. Pontuações acumuladas são calculadas usando-se, para seqüências de nucleotídeos, os parâmetros M (pontuação de recompensa para um par de resíduos compatíveis; sempre > 0) e N (pontuação de penalidade para resíduos incompatíveis; sempre < 0) Para seqüências de aminoácidos, uma matriz de pontuação é utilizada para calcular a pontuação acumulada. A extensão dos códigos de sucesso em cada direção é interrompida quando: a pontuação de alinhamento acumulada fica abaixo da quantidade X do valor máximo atingido; a pontuação acumulada chega a zero ou abaixo, devido ao acúmulo de um ou mais alinhamentos de resíduos com pontuação negativa; ou o final da seqüência é alcançado. Os parâmetros W, T e X de algoritmo BLAST determinam a sensibilidade e velocidade do alinhamento. O programa BLASTN (para seqüência de nucleotídeos) utiliza como padrão u m comprimento de código (W) 11, uma expectativa (E) de 10, um corte de 100, M = 5, N = 4, e uma comparação de ambas as fitas. Para seqüências de aminoácidos, o programa BLASTP utiliza como padrão um comprimento de código (W) 3, uma expectativa (E) de 10, e a matriz de pontuação BLOSUM62 (ver Henikoff & Henikoff, Proc. NatL Acad. Sei. USA 89:10915 (1989)).

Como usado no presente pedido, "qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100%" significa 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%".

Como usado no presente pedido, "qualquer número inteiro a partir de 61 % até, e incluindo 100%" significa 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%.

Como usado no presente pedido, "qualquer número inteiro a partir de 81 % até, e incluindo 100%" significa 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%.

Como usado no presente pedido, "80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de seqüência, ou qualquer outro número inteiro entre 80% e 100% significa 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%.

Técnicas padrão de DNA recombinante e de biologia molecular usadas no presente pedido são bem conhecidas na técnica e estão descritas de forma mais completa em Sambrook, J., Fritsch, E.F. e Maniatis, T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual·, Cold Spring Harbor Laboratory Press: C old Spring Harbor, 1989 (em seguida "Sambrook").

Mudando agora para realizações preferidas:

Realizações preferidas incluem construções de DNA recombinante de polinucleotídeos e polipeptídeos isolados (como plantas ou sementes) que compreendem estas construções de DNA recombinante, e métodos que utilizam estas construções de DNA recombinante.

POLINUCLEOTÍDEOS E POLIPEPTÍDEOS ISOLADOS PREFERIDOS

A presente invenção inclui os seguintes polinucleotídeos e polipeptídeos isolados preferidos:

Em uma realização preferida, um polinucleotídeo isolado compreende (a) uma seqüência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo associado com a resistência mecânica do caule, em que dito polipeptídeo tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de seqüência, ou qualquer outro número inteiro entre 80% e 100%, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 ou 18, ou (b) um complemento da seqüência de nucleotídeo de (a), em que o complemento e a seqüência de nucleotídeo consistem do mesmo número de nucleotídeos e são 100% complementares (isto é, um complemento completo da seqüência de nucleotídeo de (a)). Preferencialmente, o polipeptídeo está associado com a resistência mecânica do caule do milho, e a seqüência de aminoácidos do polipeptídeo é comparada à SEQ ID NOs: 16 ou 18.

Em outra realização preferida, um polinucleotídeo isolado compreende (a) uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 61% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs:1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 e 17, ou (b) um complemento completo de dita seqüência de ácido nucléico de (a).

Em outra realização preferida, um polipeptídeo isolado associado com a resistência mecânica do caule compreende uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de seqüência, ou qualquer outro número inteiro entre 80% e 100%, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 ou 18.

Diversos métodos podem ser usados para medir a resistência mecânica do caule de plantas. Preferencialmente, a resistência mecânica pode ser medida com um sistema de teste eletromecânico. No caso da resistência mecânica do milho, em um método preferido, os entrenós abaixo da espiga podem ser submetidos a um teste de flexão com três pontos usando-se um Instron, Modelo 4411 (Instron Corporation, 100 Royall Street, Canton, Massachusetts 02021), com uma amplitude de 200 mm entre os pontos de ancoragem e uma velocidade de 200 mm/minuto do terceiro ponto anexo a uma célula carregada; a carga necessária para romper o entrenó pode ser usada como uma medida de resistência mecânica (a seguir "teste de flexão com três pontos"). A resistência ao rompimento do entrenó mostrou ser altamente correlacionada com a quantidade de celulose por unidade de comprimento do caule do milho (ver pedido de patente US 2004068767 A1, incorporado ao presente como referência).

Um polipeptídeo está "associado com a resistência mecânica do milho", visto que a ausência do polipeptídeo em uma planta resulta na redução da resistência mecânica da planta quando comparada a uma planta controle que expressa o polipeptídeo.

Um polipeptídeo está "associado com a resistência mecânica do caule", visto que a ausência do polipeptídeo em uma planta de milho resulta na redução da resistência mecânica do caule da planta de milho quando comparada a uma planta de milho controle que expressa o polipeptídeo.

Entende-se então, conforme os técnicos no assunto irão avaliar, que a invenção engloba mais do que seqüências exemplares específicas. Alterações em um fragmento de ácido nucléico que resulta na produção de um aminoácido equivalente quimicamente em um dado sítio, mas que não afeta as propriedades funcionais do polipeptídeo codificado são bem conhecidas na técnica. Por exemplo, um códon para o aminoácido alanina, um aminoácido hidrofóbico, pode ser substituído por um códon que codifica outro resíduo menos hidrofóbico, como glicina, ou um resíduo mais hidrofóbico, como valina, Ieucina ou isoleucina. De maneira similar, espera-se que as alterações que resultam na substituição de um resíduo carregado negativamente por outro resíduo, como ácido aspártico por ácido glutâmico, ou um resíduo carregado positivamente por outro resíduo, como lisina por arginina, possam também gerar um produto equivalente de forma funcional. Espera-se que as trocas nos nucleotídeos que resultam na alteração das porções N-terminal e C-terminal da molécula polipeptídica não alterem a atividade do polipeptídeo. Cada uma das modificações propostas está dentro da rotina dos técnicos no assunto, conforme determinação da retenção da atividade biológica dos produtos codificados. Construções De DNA Recombinante Preferidas E Construções De DNA Para

Supressão

A presente invenção também inclui uma construção de DNA recombinante que compreende pelo menos um polinucleotídeo operacionalmente ligado a pelo menos uma seqüência reguladora (por exemplo, preferencialmente, um promotor que é funcional em dita planta), em que dito polinucleotídeo compreende qualquer polinucleotídeo isolado da presente invenção.

Em uma realização preferida, uma construção de DNA recombinante compreende um promotor que é funcional em uma planta, operacionalmente ligado a (a) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81 % até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18, ou (b) um complemento completo de dito polinucleotídeo de (a).

Em outra realização preferida, uma construção de DNA recombinante compreende um promotor que é funcional em uma planta, operacionalmente ligado a (a) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 61 % até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 e 17, ou (b) um complemento completo de dito polinucleotídeo de (a).

A presente invenção também inclui uma construção de DNA para supressão.

Em uma realização preferida, uma construção de DNA para supressão compreende um promotor funcional em uma planta, operacionalmente ligado a (a) toda ou parte de (i) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 50% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18, ou (ii) um complemento completo da seqüência de ácido nucléico de (a)(i); ou (b) uma região derivada de toda ou parte da fita sense ou fita antisense de um gene alvo de interesse, dita região tendo uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 50% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada a toda ou parte de dita fita sense ou fita antisense a partir da qual dita região é derivada, e em que dito gene alvo de interesse codifica um polipeptídeo selecionado do grupo que consiste de Bk2, Bk2L1, Bk2L3, Bk2L4; Bk2L5, Bk2L6, Bk2L7, Bk2L8 e Bk2L9.

"Construção de DNA para supressão" é uma construção de DNA recombinante que quando transformada ou integrada de forma estável no genoma da planta, resulta no "silenciamento" de um gene alvo na planta. O gene alvo pode ser endógeno ou transgênico para a planta. "Silenciamento" quando usado no presente pedido com relação ao gene alvo, geralmente refere-se à supressão dos níveis de mRNA ou proteína/enzima expressa pelo gene alvo, e/ou o nível da atividade enzimática ou funcionalidade da proteína. O termo "supressão" inclui baixar, reduzir, descer, diminuir, inibir, eliminar e prevenir. "Silenciamento" ou "silenciamento do gene" não especifica mecanismos e inclui, mas não está limitado a, supressão antisense, co-supressão, supressão viral, supressão de grampo (hairpin), supressão de alça de haste (stem-loop), abordagens baseadas em RNAi e abordagens baseadas mRNA pequenos.

Uma construção de DNA para supressão pode compreender uma região derivada de um gene alvo de interesse e pode compreender toda ou parte de uma seqüência de ácido nucléico da fita sense (ou fita antisense) do gene alvo de interesse. Dependendo da abordagem a ser utilizada, a região pode ser 100% idêntica ou menos (por exemplo, pelo menos identidade de 50% ou qualquer número inteiro entre 51% e 100%) para toda ou parte da fita sense (ou fita antisense) do gene de interesse.

As construções de DNA para supressão são bem conhecidas na técnica e são facilmente construídas, uma vez que o gene alvo de interesse é selecionado, e inclui, sem limitação, construções para co-supressão, construções antisense, construções de supressão viral, construções de supressão de grampo, construções de supressão de alça de haste, construções para produzir RNA de fita dupla, e de modo geral, construções de RNAi (RNA de interferência), construções de RNA pequeno como siRNA (RNA de interferência curto) e construções de miRNA (micro RNA). "Inibição antisense" refere-se à produção de RNA transcrito antisense capaz de suprimir a expressão da proteína alvo.

"RNA antisense" refere-se a um RNA transcrito que é complementar a todo ou parte de um transcrito primário alvo ou mRNA, e que bloqueia a expressão de um fragmento de ácido nucléico isolado (patente US 5.107.065). A complementaridade de um RNA antisense pode ser com qualquer parte do gene transcrito específico, isto é, na seqüência não codificadora 5', seqüência não codificadora 3', íntrons ou seqüência codificadora.

"Co-supressão" refere-se à produção de RNA transcrito sense capaz de suprimir a expressão da proteína alvo. RNA "sense" refere-se ao RNA transcrito que inclui o mRNA e pode ser traduzido em proteína dentro de uma célula ou in vitro. Construções de co-supressão em plantas foram previamente designadas pelo foco na superexpressão de uma seqüência de ácido nucléico que possui homologia com um mRNA nativo na orientação sense, que resulta na redução de todo RNA que possui homologia com a seqüência (Vaucheret et al. (1998) Plant J. 16:651-659 e Gura (2000) Nature 404:804-808).

Outra variação descreve o uso de seqüências virais de plantas para dirigir a supressão das seqüências próximas que codificam mRNA (publicação PCT documento WO 98/36083, publicado em 20 de agosto de 1998).

Trabalhos recentes descreveram o uso de estruturas do tipo "grampo" que incorporam todo, ou parte de um mRNA que codifica a seqüência em uma orientação complementar que resulta em uma estrutura potencial do tipo "alça de haste" para o RNA expresso (publicação PCT documento WO 99/153050, publicado em 21 de outubro 1999). Neste caso a haste é formada por polinucleotídeos que correspondem ao gene de interesse inserido tanto na orientação sense como antisense em relação ao promotor e a alça é formada por alguns polinucleotídeos do gene de interesse, que não têm um complemento na construção. Isto aumenta a freqüência de co-supressão ou silenciamento nas plantas transgênicas recuperadas. Para revisão de supressão de grampo ver Wesley, S.V. et al. (2003) Methods in Molecular Biology, Plant Functional Genomics: Methods and Protocols 236:273-286.

Uma construção onde a haste é formada por pelo menos 30 nucleotídeos a partir de um gene a ser suprimido e a alça é formada por uma seqüência aleatória de nucleotídeo foi também utilizada de forma efetiva para supressão (documento WO 99/61632 publicado em 2 de dezembro de 1999).

O uso de seqüências poli-T e poli-A para gerar a haste na estrutura alça de haste foi também descrita (documento WO 02/00894 publicado em 3 de janeiro de 2002).

Ainda outra variação inclui o uso de repetições sintéticas para promover a formação de uma haste na estrutura alça de haste. Organismos transgênicos preparados com tais fragmentos de DNA recombinante mostraram ter níveis reduzidos da proteína codificada pelo fragmento de nucleotídeo que forma a alça, conforme descrito na publicação PCT documento WO 02/00904, publicado em 3 de janeiro de2002.

Interferência por RNA refere-se ao processo do silenciamento do gene pós-transcrição específico da seqüência em animais, mediado por RNAs curtos de interferência (siRNAs) (Fire et al., Nature 391:806 1998). O processo correspondente em plantas é comumente chamado de silenciamento gênico em nível de pós-transcrição (PTGS) ou silenciamento por RNA e também é chamado de repressão nos fungos. O processo de silenciamento gênico em nível de pós-transcrição é conhecido como um mecanismo de defesa celular conservado evolutivamente, usado para prevenir a expressão de genes exógenos e comumente compartilhado por diversos vegetais e filos (Fire et al., Trends Genet. 15:358 1999). Tal proteção da expressão do gene exógeno pode ter evoluído em resposta à produção de RNAs de fita dupla (dsRNAs) derivados da infecção viral ou da integração aleatória de elementos transposon no genoma hospedeiro via uma resposta celular que especificamente destrói o RNA de fita simples do RNA genômico viral. A presença de dsRNA nas células acionam a resposta do RNAi através de um mecanismo que ainda tem que ser descrito completamente.

A presença de dsRNAs longos nas células estimula a atividade de uma enzima ribonuclease Ill chamada de dicer. A dicer está envolvida no processo do dsRNA em pedaços curtos de dsRNA conhecido como RNAs curtos de interferência (siRNAs) (Berstein et ai, Nature 409:363 (2001)). RNAs curtos de interferência derivados da atividade da dicer têm tipicamente aproximadamente 21 até cerca de 23 nucleotídeos em comprimento e compreendem cerca de 19 pares de duplex (Elbashir et ai, Genes Dev. 15:188 (2001)). A dicer também foi envolvida na retirada dos nucleotídeos 21 e 22 dos RNAs temporários (stRNAs) a partir do RNA precursor da estrutura conservada que está envolvida no controle da tradução (Hutvagner et al., Science 293:834

(2001)). A resposta do RNAi também caracteriza um complexo de endonuclease, comumente chamado de complexo de silenciamento induzido por RNA (RISC), que media a clivagem do RNA de fita simples que tem complementaridade com a fita antisense do siRNA duplex. A clivagem do RNA alvo ocorre no meio da região complementar à fita antisense do siRNA duplex (Elbashir etal., Genes Dev. 15:188 (2001)). Além disso, o RNA de interferência pode também envolver o silenciamento do gene mediado pelo RNA pequeno (por exemplo, miRNA), aparentemente através de mecanismos celulares que regulam a estrutura da cromatina, e com isso prevenindo a transcrição de seqüências do gene alvo (ver, por exemplo, Allshire1 Science 297:1818-1819 (2002); Volpe et ai., Science 297:1833-1837 (2002); Jenuwein, Science 297:2215-2218 (2002); e Hall etal., Science 297:2232-2237 (2002)). Como tal, moléculas de miRNA da invenção podem ser usadas para mediar o silenciamento do gene via interação com RNA transcritos ou alternativamente pela interação com seqüências gênicas específicas, em que tal interação resulta no silenciamento do gene tanto em nível de transcrição como pós- transcrição.

O RNAi foi estudado em uma variedade de sistemas. Fire et al (Nature 391:806 (1998)) foram os primeiros a observar RNAi em C. elegans. Wianny e Goetz (Nature Cell Biol. 2:70 (1999)) descrevem o RNAi mediado por dsRNA em embriões de camundongo. Hammond et ai (Nature 404:293 (2000)) descrevem o RNAi em células de Drosophila transfectadas com dsRNA. Elbashir et al., (Nature 411:494 (2001)) descrevem o RNAi induzido pela introdução RNAs duplex de 21 nucleotídeos sintéticos em células de mamíferos cultivadas, incluindo rim embrionário humano e células HeLa.

RNAs pequenos desempenham um papel importante no controle da expressão gênica. A regulação de muitos processos do desenvolvimento, incluindo floração, é controlada por RNAs pequenos. Agora é possível elaborar alterações na expressão gênica nos genes de plantas pelo uso de construções transgênicas que produzem RNAs pequenos na planta.

RNAs pequenos parecem funcionar com base no pareamento do RNA complementar ou seqüências alvo de DNA. Quando ligados ao RNA, os RNAs pequenos acionam tanto a clivagem do RNA como inibição da tradução da seqüência alvo. Quando ligados às seqüências alvo do DNA, sabe-se que os RNAs pequenos podem mediar a metilação do DNA da seqüência alvo. A conseqüência destes eventos, apesar dos mecanismos específicos, é que a expressão gênica é inibida.

Sabe-se que a complementaridade de seqüência entre RNAs pequenos e seus RNAs alvos ajuda a determinar qual mecanismo, clivagem do RNA ou inibição da tradução, é empregado. Acredita-se que os siRNAs, que são perfeitamente complementares com seus alvos, trabalham por clivagem do RNA. Alguns miRNAs têm complementaridade perfeita ou quase perfeita em relação aos seus alvos, e a clivagem do RNA foi demonstrada por pelo menos alguns destes miRNAs Outros miRNAs têm diversos erros em relação aos seus alvos, e aparentemente inibem seus alvos no nível da tradução. Novamente, sem se prender a uma teoria específica no mecanismo de ação, uma regra geral está surgindo, de que a complementaridade perfeita ou quase perfeita causa a clivagem do RNA, enquanto que a inibição da tradução é favorecida quando o duplex miRNA/alvo contém muitas incompatibilidades. A exceção aparente para esta é o microRNA 172 (miR172) em plantas. Um dos alvos do miR172 é APETALA2 (AP2), e embora o miR172 compartilhe complementaridade quase perfeita com AP2, este parece causar inibição da tradução do AP2 ao invés da clivagem do RNA.

MicroRNAs (miRNAs) são RNAs não codificadores com aproximadamente 19 até cerca de 24 nucleotídeos (nt) em comprimento, que foram identificados tanto em animais como em plantas (Lagos-Quintana et ai, Science 294:853-858 (2001), Lagos-Quintana et al., Curr. Bioi 12:735-739 (2002); Lau et ai, Science 294:858-862 (2001); Lee e Ambros, Science 294:862-864 (2001); Llave et ai, Plant Cell 14:1605-1619 (2002); Mourelatos et ai, Genes. Dev. 16:720-728 (2002); Park et al., Curr. Biol. 12:1484-1495 (2002); Reinhart et ai, Genes. Dev. 16:1616-1626 (2002)). Eles são processados a partir de precursores transcritos mais longos que variam de tamanho com aproximadamente 70 a 200 nt, e estes precursores transcritos têm a habilidade para formar estruturas de grampo estáveis. Em animais, a enzima envolvida no processo de precursores de miRNA é chamada Dicer, uma proteína similar à RNAse Ill (Grishok et al., Cell 106:23-34 2001; Hutvagner et al., Science 293:834-838 (2001); Ketting et ai, Genes. Dev. 15:2654-2659 (2001)). Plantas também têm uma enzima similar à Dicer, DCL1 (anteriormente denominada CARPEL FACTORY/SHORT INTEGUMENTS1/ SUSPENS0R1), e recentes evidências indicam que esta, assim como a Dicer, está envolvida no processo de precursores de grampos para gerar miRNAs maduros (Park et ai, Curr. Biol. 12:1484-1495 (2002); Reinhart et ai, Genes. Dev. 16:1616-1626 (2002)). Além disso, se torna claro a partir de recentes trabalhos que pelo menos alguns precursores de grampo do miRNA originam transcritos poliadenilados mais longos, e diversos miRNAs diferentes e grampos associados podem estar presentes em um único transcrito (Lagos- Quintana et ai, Science 294:853-858 (2001); Lee et ai, EMBO J 21:4663-4670 2002). Um trabalho recente também examinou a seleção da fita de miRNA a partir do produto dsRNA que surge do processo de grampo pela DICER (Schwartz, et ai Cell 115:199-208 (2003)). Parece que a estabilidade (isto é, conteúdo G:C vs. A:U, e/ou incompatibilidades) das duas terminações dos dsRNA processados afeta a seleção da fita, com baixa estabilidade e sendo mais fácil de desatar pela atividade de uma helicase. A extremidade 5' da fita na terminação com baixa estabilidade é incorporada ao complexo RISC, enquanto a outra fita é degradada.

MicroRNAs parecem regular os genes alvo pela ligação de seqüências complementares localizadas nos transcritos produzidos por estes genes. No caso de lin-4 e let-7, os sítios-alvo estão localizados nas UTRs 3' dos mRNAs alvo (Lee et al., Cell 75:843-854 (1993); Wightman et al., Cell 75:855-862 (1993); Reinhart et al., Nature 403:901-906 (2000); Slack et ai, Moi Cell 5:659- 669 (2000)), e existem diversas incompatibilidades entre miRNAs lin-4 e let-7 e seus sítios-alvo. A ligação do miRNA lin-4 ou let-7 parece causar a infra-regulação dos níveis estabelecidos como estáveis da proteína codificada pelo mRNA alvo sem afetar o próprio transcrito (Olsen e Ambros, Dev. Biol. 216:671-680 (1999)). Por outro lado, evidências recentes sugerem que os miRNAs podem, em alguns casos, causar clivagem específica do RNA do transcrito alvo no sítio alvo, e esta etapa de clivagem parece exigir 100% de complementaridade entre o miRNA e o transcrito alvo (Hutvagner e Zamore1 Science 297:2056-2060 (2002); Llave et al., Plant Cell 14:1605-1619 (2002)). Parece provável que os miRNAs possam entrar em pelo menos duas vias de regulação do gene alvo: infra-regulação da proteína quando a complementaridade alvo é <100%, e clivagem do RNA quando a complementaridade alvo é 100%. MicroRNAs que entram na via de clivagem do RNA são análogos aos RNAs curtos de interferência com 21 a 25 nt (siRNAs) gerados durante a interferência do RNA (RNAi) em animais e silenciamento gênico em nível de pós-transcrição (PTGS) em plantas (Hamilton e Baulcombe (1999); Hammond et al., (2000); Zamore et ai, (2000); Elbashir et ai, (2001)), e provavelmente são incorporados em um complexo de silenciamento induzido por RNA (RISC) que é similar ou idêntico àquele visto para o RNAi.

A identificação dos alvos de miRNAs com bioinformática foi bem sucedida em animais, e isto é provavelmente devido ao fato de que os miRNAs de animais têm um grau baixo de complementaridade com seus alvos. Por outro lado, as abordagens de bioinformática foram bem sucedidas quando usadas para prever alvos para miRNAs de plantas (Llave et al., Plant Cell 14:1605-1619 (2002); Park et al., Curr. Biol. 12:1484-1495 (2002); Rhoades et al., Cell 110:513-520 (2002)), e assim parece que os miRNAs de plantas tiveram uma complementaridade geral maior com os supostos alvos do que com os miRNAs de animais. A maioria destes transcritos-alvo previstos de miRNAs de plantas codificam membros das famílias do fator de transcrição envolvidos no padrão do desenvolvimento ou diferenciação celular vegetal.

ELEMENTOS REGULADORES PREFERIDOS DE CONSTRUCOES DE DNA RECOMBINANTE E CONSTRUCOES DE DNA PARA SUPRESSAO

Uma variedade de promotores pode ser usada na construção de DNA recombinante e construção de DNA para supressão da presente invenção. Os promotores podem ser selecionados com base no resultado desejado, e podem incluir promotores constitutivos, específicos ao tecido, induzíveis ou outros promotores para expressão no organismo hospedeiro.

A expressão constitutiva de alto nível do gene candidato sob o controle do promotor 35S pode ter efeitos pleiotrópicos. No entanto, a expressão específica ao tecido e/ou específica ao estresse pode eliminar efeitos indesejáveis, mas manter a habilidade para aumentar a tolerância à aridez. Esta influência pode ser observada em Arabidopsis (Kasuga et ai, Nature Biotechnoi 17:287-91 (1999)). Como tal, a eficácia do gene candidato pode ser testada quando dirigido por diferentes promotores.

Promotores constitutivos adequados para uso em uma célula hospedeira vegetal incluem, por exemplo, o promotor central do promotor Rsyn7 e outros promotores constitutivos divulgados no documento WO 99143838 e patente US 6.072.050; o promotor central CaMV 35S (Odell et ai, Nature 313:810-812 (1985)); actina do arroz (McEIroy et al., Plant Ce112:163- 171 (1990)); ubiquitina (Christensen et al.,Plant Mol. Biol. 12:619-632 (1989) e Christensen et al., Plant Moi Bioi 18:675-689 (1992)); pEMU (Last et ai, Theor. Appi Genet. 81:581-588 (1991)); MAS (Velten et ai, EMBO J. 3:2723- 2730 (1984)); promotor ALS (patente US 5.659.026), e similares. Outros promotores constitutivos incluem, por exemplo, aqueles discutidos nas patentes US 5.608.149, US 5.608.144, US 5.604.121, US 5.569.597, US 5.466.785, US 5.399.680, US 5.268.463, US 5.608.142 e US 6.177.611.

Na escolha do promotor para uso nos métodos da invenção, pode ser desejável o uso de um promotor específico do tecido ou regulado de maneira desenvolvida. Um promotor específico do tecido ou regulado de maneira desenvolvida é uma seqüência de DNA que regula a expressão de uma seqüência de DNA seletivamente nas células/tecidos de uma planta crítica para o desenvolvimento do cabelo do milho, conjuntos de sementes, ou ambos, e limita a expressão de tal seqüência de DNA até o período do desenvolvimento. Qualquer promotor identificável pode ser usado nos métodos da presente invenção que ocasione a expressão temporal e espacial desejada.

Um promotor específico de caule preferido é o gene S2A específico do caule de alfafa (Abrahams et al., Plant MoL Biol. 27:513-528 (1995)).

Promotores que são específicos de sementes ou embriões e podem ser úteis na invenção incluem inibidor de tripsina Kunitz da soja (Kti3, Jofuku e Goldberg, Plant Cell 1:1079-1093 (1989)), patatina (tubérculos de batata) (Rocha-Sosa et al, EMBO J. 8:23-29 (1989)), convicilina, vicilina e legumina (cotilédones de ervilha) (Rerie, W.G., et al. Mol. Gen. Genet. 259:149- 157 (1991); Newbigin, E.J., et al., Planta 180:461-470 (1990); Higgins, T.J.V., et al., Plant. Moi Biol. 11:683-695 (1988)), zeína (endosperma do milho) (Schemthaner, J.P., et al., EMBO J. 7:1249-1255 (1988)), faseolina (cotilédone do feijão) (Segupta-Gopalan, C., et al, Proc. Nati Acad. Sei. U.S.A. 82:3320- 3324 (1985)), fito-hemaglutinina (cotilédone do feijão) (Voelker, T. et al., EMBO J. 6:3571-3577 (1987)), B-conglicinina e glicinina (cotilédone da soja) (Chen, Z- L, et al, 29 EMBO J. 7:297- 302 (1988)), glutelina (endosperma do arroz), hordeína (endosperma da cevada) (Marris, C., et al., Plant Mol. Biol. 10:359- 366 (1988)), glutenina e gliadina (endosperma do trigo) (Colot, V., et al, EMBO J. 6:3559-3564 (1987)), e esporamina (raiz tuberosa da batata doce) (Hattori, T., et al, PIantMoL Biol. 14:595-604 (1990)). Promotores de genes específicos de sementes operacionalmente ligados às regiões codificadores heterólogas em construções de gene quimérico mantêm seu padrão de expressão temporal e espacial nas plantas transgênicas. Tais exemplos incluem promotor do gene da proteína de armazenamento de semente 2S de Arabidopsis thaliana para expressar peptídeos encefalina em sementes de Arabidopsis e Brassica napus (Vanderkerckhove et al, Bio/Technology 7:L929-932 (1989)), promotores de lectina de feijão e beta-faseolina de feijão para expressar Iuciferase (Riggs et al., Plant Sei. 63:47-57 (1989)), e promotores glutenina do trigo para expressar cloranfenicol acetil transferase (Colot et al., EMBO J. 6:3559- 3564 (1987)). Promotores induzidos seletivamente expressam uma seqüência de DNA operacionalmente ligada em resposta à presença de um estímulo endógeno ou exógeno, por exemplo, pelos compostos químicos (indutores químicos) ou em resposta aos sinais ambientais, hormonais, químicos e/ou de desenvolvimento. Promotores induzidos ou regulados incluem, por exemplo, promotores regulados pela luz, calor, estresse, enchente ou aridez, fito- hormônio, ferimentos ou compostos químicos como etanol, jasmonatos, ácido salicílico ou protetores.

Promotores que são regulados pelo estresse incluem os seguintes: (1) o promotor RD29A (Kasuga et ai, Nature Biotechnol. 17:287-291 (1991)); (2) promotor da cevada, B22E; a expressão de B22E é específica para o pedúnculo no desenvolvimento dos grãos de milho ("Primary Structure of a Novel Barley Gene Differentially Expressed in Immature Aleurone Layers" Klemsdae, S.S. et ai, Mol. Gen. Genet. 228(1/2):9-16 (1991)); e 3) promotor do milho, Zag2 ("Identification and molecular characterization of ZAG1, the maize homolog of the Arabidopsis floral homeotic gene AGAMOUS", Schmidt, R.J. et al., Plant Cell 5(7):729-737 (1993)). Os transcritos Zag2 podem ser detectados 5 dias antes da polinização até 7 a 8 DAP1 e dirigir a expressão no carpelo de desenvolvimento de inflorescências femininas e Ciml que é específico aos núcleos de desenvolvimento dos grãos de milho. O transcrito Ciml é detectado 4 a 5 dias antes da polinização até 6 a 8 DAP. Outros promotores úteis incluem qualquer promotor derivado a partir de um gene cuja expressão está maternalmente associada com o desenvolvimento de flósculos femininos.

Promotores podem ser derivados em sua totalidade de um gene nativo, ou compostos de diferentes elementos derivados de diferentes promotores encontrados na natureza, ou até compreender segmentos de DNA sintético. Os técnicos no assunto entendem que diferentes promotores podem dirigir a expressão de um gene em diferentes tecidos ou tipos celulares, em diferentes estágios do desenvolvimento, ou em resposta a diferentes condições ambientais. É ainda reconhecido que, já que em muitos casos os limites exatos das seqüências reguladoras não foram completamente definidos, fragmentos de DNA com alguma variação podem ter atividade idêntica à do promotor.

Promotores que induzem um gene a se expressar na maioria dos tipos celulares são comumente denominados "promotores constitutivos". Novos promotores de diversos tipos, úteis nas células vegetais, estão constantemente sendo descobertos; vários exemplos podem ser encontrados na compilação por Okamuro, J. K., e Goldberg, R. B. Biochemistry of Plants 15:1-82 (1989).

Promotores particularmente preferidos podem incluir: promotor do gene S2A específico do caule da alfafa, RIP2, ml_IP15, ZmCORI, Rab17, CaMV 35S, RD29A, SAM sintetase, ubiquitina, CaMV 19S, nos, Adh1 sacarose sintase, R-alelo, ou promotor celular da raiz. Outros promotores preferidos incluem qualquer um dos CesAI 0, CesA11, e promotores CesAI 2 divulgados na Publicação De Patente dos Estados Unidos US2005/0086712A1, que é integralmente incorporada ao presente como referência.

Construções de DNA recombinante e construções de DNA para supressão da presente invenção podem também incluir outras seqüências reguladoras, incluindo, mas não limitado a, sequências-líder de tradução, íntrons e seqüências de reconhecimento para poliadenilação. Em outra realização preferida da presente invenção, uma construção de DNA recombinante da presente invenção compreende ainda um enhancer ou silenciador.

Uma seqüência de íntron pode ser adicionada à região 5' não traduzida ou à seqüência codificadora da seqüência codificadora parcial para aumentar a quantidade de mensagem madura que se acumula no citosol. A inclusão de um íntron removível na unidade e transcrição tanto nas construções para expressão em vegetais como em animais mostraram aumentar a expressão gênica em ambos, mRNA e proteínas, em níveis de até 1000 vezes. Buchman e Berg, Mol. Cell Bioi 8:4395-4405 (1988); Callis et ai, Genes Dev. 1:1183-1200 (1987). Tal aumento de íntron de expressão gênica é tipicamente maior quando colocado perto da extremidade 5' da unidade de transcrição. O uso de íntrons do milho, íntrons Adhl-S 1, 2 e 6, o íntron Bronze-1 é conhecido na técnica. Ver de forma geral, The Maize Handbook, Capítulo 116, Freeling e Walbot, Eds., Springer, Nova York (1994).

Se a expressão do polipeptídeo é desejada, é geralmente desejável incluir uma região da extremidade 3' de uma região codificadora de polinucleotídeo. A região de poliadenilação pode ser derivada do gene natural, a partir e uma variedade de genes de outras plantas, ou a partir do T-DNA. A seqüência da extremidade 3' a ser adicionada pode ser derivada, por exemplo, dos genes da nopalina sintase ou octopina sintase, ou alternativamente de outro gene vegetal, ou menos preferencialmente de qualquer outro gene de eucarionte.

Uma seqüência líder de tradução é uma seqüência de DNA localizada entre a seqüência do promotor de um gene e a seqüência codificadora. A seqüência líder de tradução está presente no mRNA completamente processado a montante da seqüência iniciadora da tradução. A seqüência líder de tradução pode afetar o processo do transcrito primário para mRNA, estabilidade ou tradução eficiente do mRNA. Exemplos de seqüências líder de tradução foram descritos (Turner, R. e Foster, G. D., Molecular Biotechnoi 3:225 (1995)).

Qualquer planta pode ser selecionada para a identificação de seqüências reguladoras e genes a serem usados para criar as construções de DNA recombinante e construção de DNA para supressão da presente invenção. Exemplos de alvos vegetais adequados para o isolamento de genes e seqüências reguladoras podem incluir, mas não estão limitados a, alfalfa, maçã, damasco, Arabidopsis, alcachofra, rúcula, aspargo, abacate, banana, cevada, feijões, beterraba, amora silvestre, mirtilo, brócolis, couve de Bruxelas, repolho, canola, melão, cenoura, mandioca, rícino, couve-flor, salsão, cereja, chicória, coentro, cítricos, clementinas, trevo, coco, café, milho, algodão, amora, pepino, coníferas, berinjela, endívia, escarola, eucalipto, erva-doce, figos, alho, cabaça, uva, toronja, melão doce, nabo mexicano, kiwi, alface, alho-poró, limão, limão-galego, pinheiro Loblolly, linho, manga, melão, cogumelo, nectarina, noz, aveia, óleo de palma, óleo de semente de colza, quiabo, oliveira, cebola, laranja, planta ornamental, palma, papaia, salsa, pastinaca, ervilha, pêssego, amendoim, pimenta, caqui, pinheiro, abacaxi, banana-da-terra, ameixa, romã, álamo, batata, abóbora, marmelo, pinheiro radiata, rabanete, rábano, semente de colza, framboesa, arroz, centeio, sorgo, pinheiro do Sul, soja, espinafre, abobrinha, morango, beterraba doce, cana-de- açúcar, girassol, batata doce, liquidambar, tangerina, chá, tabaco, tomate, triticale, turfa, nabo, vinha, melancia, trigo, inhame e abobrinha. Plantas particularmente preferidas para a identificação de seqüências reguladoras são Arabidopsis, milho, trigo, soja e algodão.

Em outra realização preferida da presente invenção, uma construção de DNA recombinante da presente invenção compreende ainda um enhancer.

Composições Preferidas

Uma composição preferida da presente invenção é uma planta que compreende em seu genoma qualquer uma das construções de DNA recombinante da presente invenção (como aquela construção preferida discutida acima).

Outra composição preferida é uma planta cujo genoma compreende uma disrupção (por exemplo, uma inserção como um elemento transponível, ou mutação na seqüência) em pelo menos um gene (que pode ser heterólogo ou endógeno para o genoma) selecionado do grupo que consiste de Bk2, Bk2L1, Bk2L3, Bk2L4, Bk2L5, Bk2L6, Bk2L7, Bk2L8 e Bk2L9.

Ainda outra composição preferida é uma planta cujo genoma compreende outra construção de DNA recombinante como discutido abaixo (por exemplo, construções que envolvem seqüências de ácido nucléico e seqüências de aminoácidos relacionadas às SEQ ID NOs: 20 a 42)

Composições preferidas também incluem qualquer progênie da planta, e qualquer semente obtida a partir desta planta ou de sua progênie. Progênie inclui gerações subsequentes obtidas pela autopolinização ou cruzamento de uma planta. A progênie também inclui híbridos e isogênicos.

Preferencialmente, nas safras propagadas de sementes híbridas, as plantas transgênicas podem ser propagadas por autocruzamento para produzir uma planta isogênica homozigota. A planta isogênica produz sementes que contêm a construção de DNA recombinante recém introduzida. As sementes podem ser cultivadas para produzir plantas que conteriam a construção de DNA recombinante em seu genoma e exibiriam o(s) fenótipo(s) associado(s) conforme descrito no presente pedido, ou usadas em um programa de melhoramento genético para produzir sementes híbridas que possam ser cultivadas para produzir plantas que conteriam a construção de DNA recombinante e exibiriam o(s) fenótipo(s) associado(s) conforme descrito no presente pedido. Preferencialmente, as sementes são de milho.

Preferencialmente, a planta é uma monocotiledônea ou dicotiledônea, mais preferencialmente uma planta de milho ou soja, até mais preferencialmente uma planta de milho, como uma planta de milho híbrido ou uma planta isogênica de milho. A planta pode ser também girassol, sorgo, canola, trigo, alfafa, algodão, arroz, cevada ou painço.

Preferencialmente, qualquer construção de DNA é integrada de forma estável no genoma da planta.

Realizações particularmente preferidas incluem: 1. Uma planta (preferencialmente milho) que compreende em seu genoma uma construção de DNA recombinante que compreende pelo menos um elemento regulador operacionalmente ligado a (a) uma seqüência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo associado com a resistência mecânica do caule, em que dito polipeptídeo tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de seqüência, ou qualquer outro número inteiro entre 80% e 100%, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 16 ou 18, ou (b) um complemento da seqüência de nucleotídeo, em que o complemento e a seqüência de nucleotídeo consistem do mesmo número de nucleotídeos e são 100% complementares (isto é, um complemento completo da seqüência de nucleotídeo de (a)). Preferencialmente, pelo menos um elemento regulador é um promotor funcional na planta.

2. Uma planta (preferencialmente milho) que compreende em seu genoma (a) uma primeira construção de DNA recombinante que compreende pelo menos um promotor que é funcional em uma planta, operacionalmente ligado a pelo menos um de um primeiro polinucleotídeo isolado, selecionado do grupo que consiste de (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 61% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 e 17; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (a)(i) ou (a)(ii); e (b) uma segunda construção de DNA recombinante que compreende pelo menos um promotor que é funcional em uma planta, operacionalmente ligado a pelo menos um segundo polinucleotídeo isolado, selecionado do grupo que consiste de (iv) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40 e 42; (v) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 61% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39 e 41; e (vi) um complemento completo do polinucleotídeo de (b)(iv) ou (b)(v). Preferencialmente, a planta exibe um aumento no conteúdo de celulose da parede celular e/ou aumento da taxa de crescimento quando comparada a uma planta controle que não compreende dita primeira construção de DNA recombinante e dita segunda construção de DNA recombinante.

3. Uma planta (preferencialmente milho) que compreende em seu genoma pelo menos uma seqüência reguladora, operacionalmente ligada a (a) pelo menos um polinucleotídeo isolado, selecionado do grupo que consiste de (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 61% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 e 17; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (a)(i) ou (a)(ii); e (b) pelo menos um polinucleotídeo isolado selecionado do grupo que consiste de (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40 e 42; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 61% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39 e 41; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (b)(i) ou (b)(ii). Preferencialmente, a planta exibe um aumento no conteúdo de celulose da parede celular e/ou aumento da taxa de crescimento quando comparada a uma planta controle que não compreende pelo menos uma dita seqüência reguladora, operacionalmente ligada a ditos (a) e (b).

4. Uma planta (preferencialmente milho) que compreende em seu genoma pelo menos uma seqüência reguladora, operacionalmente ligada a (a) pelo menos um polinucleotídeo isolado, selecionado do grupo que consiste de (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 2; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 61% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 1 e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (a)(i) ou (a)(ii); e (b) pelo menos um polinucleotídeo isolado selecionado do grupo que consiste de (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 38, 40 e 42; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 61% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 37, 39 e 41; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (b)(i) ou (b)(ii). Preferencialmente, a planta exibe um aumento no conteúdo de celulose da parede quando comparada a uma planta controle que não compreende pelo menos uma dita seqüência reguladora, operacionalmente ligada a ditos (a) e (b).

5. Uma planta (preferencialmente milho) que compreende em seu genoma pelo menos uma seqüência reguladora, operacionalmente ligada a (a) pelo menos um polinucleotídeo isolado, selecionado do grupo que consiste de (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 6; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 61% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 5 e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (a)(i) ou (a)(ii); e (b) pelo menos um polinucleotídeo isolado selecionado do grupo que consiste de (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 20, 32 e 34; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 61% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 19, 31 e 33; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (b)(i) ou (b)(ii). Preferencialmente, a planta exibe um aumento na taxa de crescimento quando comparada a uma planta controle que não compreende pelo menos uma dita seqüência reguladora, operacionalmente ligada a ditos (a) e (b).

6. Uma planta (preferencialmente milho) que compreende em seu genoma pelo menos uma seqüência reguladora operacionalmente ligada a pelo menos dois polinucleotídeos selecionados do grupo que consiste de (a) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18; (b) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 61% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 e 17; e (c) um complemento completo do polinucleotídeo de (a)(i) ou (a)(ii); e (b) pelo menos um polinucleotídeo de (a) ou (b).

7. Uma planta (preferencialmente milho) que compreende em seu genoma uma construção de DNA para supressão que compreende um promotor funcional operacionalmente ligado a (a) toda ou parte de (i) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 50% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, e 18, ou (ii) um complemento completo da seqüência de ácido nucléico de (a)(i); ou (b) uma região derivada de toda ou parte da fita sense ou antisense de um gene alvo de interesse, dita região que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 50% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada a toda ou parte de uma fita sense ou fita antisense a partir da qual dita região é derivada, e em que dito gene alvo de interesse codifica um polipeptídeo selecionado do grupo que consiste de BK2, Bk2L1, Bk2L3, Bk2L4, Bk2L5, Bk2L6, Bk2L7, Bk2L8 e Bk2L9. Preferencialmente, a planta exibe resistência mecânica do caule reduzida quando comparada a uma planta controle que não compreende dita construção de DNA para supressão. Preferencialmente, a construção de DNA para supressão compreende uma construção para co-supressão, construção antisense, construção para supressão viral, construção para supressão de grampo, construção para supressão de alça de haste, construção para produção de RNA de fita dupla, construção de RNAi1 ou construção de RNA pequeno (por exemplo, uma construção de siRNA ou uma construção de miRNA).

8. Uma planta (preferencialmente milho) cujo genoma compreende uma disrupção de pelo menos um gene que codifica um polipeptídeo selecionado do grupo que consiste de BK2, Bk2L1, Bk2L3, Bk2L4, Bk2L5, Bk2L6, Bk2L7, Bk2L8 e Bk2L9. Preferencialmente, a disrupção resulta em dita planta exibindo resistência mecânica do caule reduzida quando comparada a uma planta controle que não compreende dita disrupção. Preferencialmente, a disrupção compreende uma inserção, como um elemento transponível ou mutação na seqüência.

9. Uma planta (preferencialmente milho) que compreende em seu genoma uma construção de DNA para supressão que compreende um promotor funcional operacionalmente ligado a (a) toda ou parte de (i) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 50% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 6, ou (ii) um complemento completo da seqüência de ácido nucléico de (a)(i); ou (b) uma região derivada de toda ou parte da fita sense ou antisense de um gene alvo de interesse, dita região que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 50% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada a toda ou parte de uma fita sense ou fita antisense a partir da qual dita região é derivada, e em que dito gene alvo de interesse codifica um polipeptídeo Bk2L3. Preferencialmente, a planta exibe altura e/ou tamanho de órgão reduzido quando comparada a uma planta controle que não compreende dita construção de DNA para supressão. Preferencialmente, a construção de DNA para supressão compreende uma construção para co-supressão, construção antisense, construção para supressão viral, construção para supressão de grampo, construção para supressão de alça de haste, construção para produção de RNA de fita dupla, construção de RNAi, ou construção de RNA pequeno (por exemplo, uma construção de siRNA ou uma construção de miRNA).

10. Uma planta (preferencialmente milho) cujo genoma compreende uma disrupção de pelo menos um gene que codifica um polipeptídeo BK2L3. Preferencialmente, dita disrupção resulta em dita planta que exibe altura e/ou tamanho de órgão reduzido quando comparada a uma planta controle que não compreende dita disrupção. Preferencialmente, a disrupção compreende uma inserção, como um elemento transponível ou mutação na seqüência.

11. Uma planta (preferencialmente milho) que compreende em seu genoma uma construção de DNA para supressão que compreende um promotor funcional operacionalmente ligado a (a) toda ou parte de (i) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 50% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 10, ou (ii) um complemento completo da seqüência de ácido nucléico de (a)(i); ou (b) uma região derivada de toda ou parte da fita sense ou antisense de um gene alvo de interesse, dita região tendo uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 50% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada a toda ou parte de uma fita sense ou fita antisense a partir da qual dita região é derivada, e em que dito gene alvo de interesse codifica um polipeptídeo Bk2L5. Preferencialmente, a planta exibe esterilidade masculina quando comparada a uma planta controle que não compreende dita construção de DNA para supressão. Preferencialmente, a construção de DNA para supressão compreende uma construção para co-supressão, construção antisense, construção para supressão viral, construção para supressão de grampo, construção para supressão de alça de haste, construção para produção de RNA de fita dupla, construção de RNAi, ou construção de RNA pequeno (por exemplo, uma construção de siRNA ou uma construção de miRNA).

12. Uma planta (preferencialmente milho) cujo genoma compreende uma disrupção de pelo menos um gene que codifica um polipeptídeo B2KL5. Preferencialmente, a disrupção resulta em dita planta que exibe esterilidade masculina quando comparada a uma planta controle que não compreende dita disrupção. Preferencialmente, a disrupção compreende uma inserção, como um elemento transponível ou mutação na seqüência.

13. Qualquer progênie das plantas acima, quaisquer sementes das plantas acima, quaisquer sementes de progênie das plantas acima, e células de qualquer uma das plantas e progênies acima.

Um técnico no assunto reconheceria facilmente um controle adequado ou planta referência para uso como comparação ou medida relativa a uma planta que compreende em seu genoma uma construção de DNA recombinante (ou construção de DNA para supressão). Por exemplo, a título de explicações não limitantes:

- Progênie de uma planta transformada que é hemizigota em relação a uma construção de DNA recombinante (ou construção de DNA para supressão), de forma que a progênie seja segregada tanto nas plantas que compreendem como não compreendem a construção de DNA recombinante: progênie que compreende a construção de DNA recombinante (ou construção de DNA para supressão) seria tipicamente avaliada em relação à progênie que não compreende a construção de DNA recombinante (ou construção de DNA para supressão).

- Introgressão de uma construção de DNA recombinante (ou construção de DNA para supressão) na linhagem isogênica, como no milho, ou em uma variedade, como na soja: a linhagem que sofreu introgressão seria tipicamente avaliada em relação à isogênica parental ou linhagem de variedade.

- Duas linhagens híbridas, onde a primeira linhagem híbrida é produzida a partir de duas linhagens isogênicas parentais, e a segunda linhagem híbrida é produzida a partir das mesmas duas linhagens isogênicas parentais, exceto que uma das linhagens parentais contém uma construção de DNA recombinante (ou construção de DNA para supressão): a segunda linhagem híbrida seria tipicamente avaliada em relação à primeira linhagem híbrida.

- Uma planta que compreende uma construção de DNA recombinante (ou construção de DNA para supressão) em seu genoma (ou uma planta que compreende uma disrupção de um gene em seu genoma): a planta pode ser avaliada em relação a uma planta controle que não compreende a construção de DNA recombinante (ou construção de DNA para supressão) em seu genoma (ou a uma planta controle que não compreende a disrupção) mas tem, de outra forma, um antecedente genético comparável ao da planta (por exemplo, compartilham pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de seqüência do material genético do núcleo comparado à planta que compreende a construção de DNA recombinante ou construção de DNA para supressão ou disrupção). Existem muitas técnicas laboratoriais disponíveis para análise, comparação e caracterização de antecedentes genéticos de plantas; entre estes estão Eletroforese de Isozima, Polimorfimos de Comprimento de Fragmento de Restrição (RFLPs), DNAs Polimórficos Amplificados Aleatoriamente (RAPDs), Reação em Cadeia da Polimerase com Primers Arbitrários (AP-PCR)1 Impressão Digital da Amplificação do DNA (DAF)1 Regiões Amplificadas de Seqüências Caracterizadas (SCARs), Polimorfismos de Comprimento de Fragmento Amplificado (AFLPs)1 e Repetições de Seqüências Simples (SSRs) que também são denominadas microssatélites.

A introdução de construções de DNA recombinante da presente invenção nas plantas pode ser realizada por qualquer técnica adequada, incluindo mas não limitado a absorção direta de DNA1 tratamento químico, eletroporação, microinjeção, fusão celular, infecção, transferência de DNA mediada por vetor, bombardeamento, ou transformação mediada por Agrobacterium. Quando se deseja integrar ao genoma construções de DNA recombinante múltiplas ou agrupadas ou polinucleotídeos isolados (por exemplo, para efetuar a co- expressão de dois ou mais polinucleotídeos isolados), os polinucleotídeos isolados individuais podem ser introduzidos nas linhagens parentais e cruzados através de técnicas de cruzamento tradicionais para fornecer a combinação desejada ou agrupamento nas plantas de progênie subsequente.

Técnicas preferidas são apresentadas abaixo no Exemplo 3 para a transformação de células vegetais de milho e no Exemplo 8 para a transformação de células vegetais de soja.

Outros métodos preferidos para transformação de dicotiledôneas, inicialmente pelo uso Agrobacterium tumefaciens, e obtenção de plantas transgênicas incluem aquelas publicadas para algodão (patentes US 5.004.863, US 5.159.135, US 5.518. 908); soja (patentes US 5.569.834 e US 5.416.011, McCabe et. at.,BioITechnoIogy 6:923 (1988), Christou et al., Plant Physiol. 87:671-674 (1988)); Brassica (patente US 5.463.174); amendoim (Cheng et ai, Plant Cell Rep. 15:653 657 (1996), McKently et al., Plant Cell Rep. 14:699 703 (1995)); papaia; e ervilha (Grant et ai, Plant Cell Rep. 15:254 258, (1995)).

As transformações de monocotiledôneas usando-se eletroporação, bombardeamento de partículas e Agrobacterium foram também relatadas e estão incluídos como métodos preferidos, por exemplo, transformação e regeneração vegetal conforme alcançada em aspargo (Bytebier et ai, Proc. Nati Acad. Sei. (USA) 84:5354, (1987)); cevada (Wan e Lemaux1 Plant Physiol 104:37 (1994)); Zea mays (Rhodes et al., Science 240:204 (1988), Gordon-Kamm et ai, Plant Cell 2:603 618 (1990), Fromm et al., BioITechnoIogy 8:833 (1990), Koziel et al., BioITechnoIogy 11: 194, (1993), Armstrong et al., Crop Science 35:550 557 (1995)); aveia (Somers et ai, BioITechnoIogy 10: 15 89 (1992)); orchard-grass (Horn et al., Plant Cell Rep. 7:469 (1988)); arroz (Toriyama et ai, TheorAppi Genet. 205:34, (1986); Part et ai, PlantMol. Bioi 32:1135 1148, (1996); Abedinia et ai, Aust. J. Plant Physiol. 24:133 141 (1997); Zhang e Wu, Theor. Appi Genet. 76:835 (1988); Zhang et ai Plant Cell Rep. 7:379, (1988); Battraw e Hall1 Plant Sei. 86:191 202 (1992); Christou et ai, BioITechnoIogy 9:957 (1991)); centeio (De Ia Pena et al., Nature 325:274 (1987)); cana-de-açúcar (Bower e Birch, Plant J. 2:409 (1992)); Festuca alta (Wang et al., BioITechnoIogy 10:691 (1992)), e trigo (Vasil et ai, BioITechnoIogy 10:667 (1992); patente US 5.631.152).

Existem vários métodos para a regeneração de plantas a partir de tecidos vegetais. O método específico de regeneração irá depender do tecido vegetal inicial e da espécie de planta a ser regenerada.

A regeneração, desenvolvimento e cultivo das plantas a partir da transformação de protoplastos de uma única planta ou a partir de vários explantes, são bem conhecidos na técnica (Weissbach e Weissbach1 em: Methods for Plant Molecular Biology, (Eds.), Academic Press1 Inc. San Diego, CA, (1988)). Estes processos de regeneração e crescimento tipicamente incluem as etapas de seleção de células transformadas e cultivo daquelas células individualizadas através de estágios usuais do desenvolvimento embrionário por meio do estágio da plantinha enraizada. Embriões transgênicos e sementes são regenerados de maneira similar. Os ramos enraizados transgênicos resultantes são posteriormente plantados em um meio de crescimento vegetal apropriado, tal como solo.

O desenvolvimento ou regeneração das plantas que contêm o fragmento de ácido nucléico externo ou exógeno isolado que codifica uma proteína de interesse é bem conhecido na técnica. Preferencialmente, as plantas regeneradas são autopolinizadas para fornecer plantas transgênicas homozigotas. De outra forma, o pólen obtido a partir da plantas regeneradas é cruzado com plantas desenvolvidas por sementes de linhagens importantes do ponto de vista agronômico. Ao contrário, o pólen das plantas destas linhagens importantes é usado para polinizar plantas regeneradas. Uma planta transgênica da presente invenção que contém um polipeptídeo desejado é cultivada usando-se métodos conhecidos pelos técnicos no assunto. Testes para detectar proteínas podem ser realizados por eletroforese em gel de poliacrilamida-SDS ou testes imunológicos. Testes para detectar níveis de substratos ou produtos de enzimas podem ser realizados usando-se cromatografia gasosa ou cromatografia líquida para separação e UV ou espectrometria visível ou espectrometria de massa para detecção, ou similares. A determinação dos níveis de mRNA da enzima de interesse pode ser realizada usando-se a técnica "manchas de Northern" (northem-blotting) ou técnicas de RT-PCR. Uma vez que as plantas tenham sido regeneradas, e o homozigoto de plantas da progênie para o transgene tenha sido obtido, as plantas terão um fenótipo estável que será observado nas sementes similares nas gerações posteriores. Métodos Preferidos

A presente invenção também inclui métodos para alterar a resistência mecânica do caule em uma planta; métodos para avaliar a resistência mecânica do caule em uma planta; métodos para avaliar o conteúdo de celulose em uma planta; métodos para alterar o conteúdo de celulose na parede celular e/ou taxa de crescimento em uma planta, métodos para conferir esterilidade masculina em uma planta, e métodos para reduzir a altura de uma planta e/ou tamanho do órgão em uma planta.

Preferencialmente, a planta é uma monocotiledônea ou dicotiledônea, mais preferivelmente uma planta de milho ou soja, até mais preferencialmente uma planta de milho. A planta pode ser também girassol, sorgo, canola, trigo, alfafa, algodão, arroz, cevada ou painço.

Um método preferido para alteração (preferencialmente aumento) da resistência mecânica de uma planta compreende (a) introdução de uma construção de DNA recombinante em uma célula vegetal capaz de se regenerar para produzir uma célula vegetal transformada, uma construção de DNA recombinante que compreende pelo menos um elemento regulador (preferencialmente um promotor que é funcional em uma planta) operacionalmente ligado a (i) uma seqüência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo associado com a resistência mecânica do caule, em que dito polipeptídeo tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de seqüência, ou qualquer outro número inteiro entre 80% e 100%, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 ou 18, ou (ii) um complemento da seqüência de nucleotídeo, em que o complemento e a seqüência de nucleotídeo consistem do mesmo número de nucleotídeos e são 100% complementares; e (b) regeneração de uma planta transgênica a partir de dita célula vegetal transformada, em que dita planta transgênica compreende em seu genoma dita construção de DNA recombinante e em que dita planta transgênica exibe uma alteração (preferencialmente um aumento) na resistência mecânica do caule, quando comparada a uma planta controle que não compreende dita construção de DNA recombinante.

Um método preferido de avaliação da resistência mecânica do caule em uma planta compreende (a) introdução de um DNA recombinante em uma célula vegetal capaz de se regenerar para produzir células vegetais transformadas, dita construção de DNA recombinante que compreende um promotor que é funcional em uma planta, operacionalmente ligado a (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18, ou (ii) um complemento completo de dito polinucleotídeo de (a)(i); e (b) regeneração de uma planta transgênica a partir de dita célula vegetal transformada; e (c) avaliação de dita planta transgênica para resistência mecânica do caule. Este método pode ainda compreender (d) obtenção de uma planta da progênie derivada de dita planta transgênica; e (e) avaliação de dita planta da progênie para resistência mecânica do caule.

Outro método preferido de avaliação da resistência mecânica do caule em uma planta compreende (a) introdução de uma construção de um DNA recombinante em uma célula vegetal capaz de se regenerar para produzir células vegetais transformadas, dita construção de DNA recombinante que compreende um promotor que é funcional em uma planta, operacionalmente ligado a (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18, ou (b) um complemento completo de dito polinucleotídeo de (a)(i); e (b) regeneração de uma planta transgênica a partir de dita célula vegetal transformada; (c) obtenção de uma planta da progênie derivada de dita planta transgênica; e (d) avaliação de dita planta da progênie para resistência mecânica do caule.

Um método preferido de avaliação do conteúdo de celulose em uma planta compreende (a) introdução de um DNA recombinante em uma célula vegetal capaz de se regenerar para produzir células vegetais transformadas, dita construção de DNA recombinante que compreende um polinucleotídeo operacionalmente ligado a um promotor funcional em uma planta, em que dito polinucleotídeo codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18, (b) regeneração de uma planta transgênica a partir de dita célula vegetal transformada; e (c) avaliação de dita planta transgênica para conteúdo de celulose. Este método pode ainda compreender (d) obtenção de uma planta da progênie derivada de dita planta transgênica; e (e) avaliação de dita planta da progênie para conteúdo de celulose.

Outro método preferido de avaliação do conteúdo de celulose em uma planta compreende (a) introdução de um DNA recombinante em uma célula vegetal capaz de se regenerar para produzir células vegetais transformadas, dita construção de DNA recombinante compreendendo um polinucleotídeo operacionalmente ligado a um promotor funcional em uma planta, em que dito polinucleotídeo codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18, (b) regeneração de uma planta transgênica a partir de dita célula vegetal transformada; (c) obtenção de uma planta da progênie derivada de dita planta transgênica; e (d) avaliação de dita planta da progênie para conteúdo de celulose.

Um método preferido para seleção de uma planta com conteúdo de celulose alterado compreende (a) obtenção de qualquer planta da presente invenção (como qualquer uma das realizações preferidas discutidas acima; (b) avaliação da planta obtida na etapa (a) para conteúdo de celulose; e (c) seleção da planta avaliada da etapa (b) quando seu conteúdo de celulose é alterado quando comparada a uma planta controle. Preferencialmente, a planta avaliada é selecionada quando seu conteúdo de celulose é aumentado, ainda mais preferencialmente, quando seu conteúdo de celulose é de pelo menos 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, ou 60% e/ou quando seu conteúdo de matéria seca de celulose é de pelo menos 100 mg/cm, 200 mg/cm, 300 mg/cm, 400 mg/cm ou 500 mg/cm. Métodos preferidos para medir o conteúdo de celulose são apresentados no Exemplo 10.

Um método preferido para alteração (preferencialmente aumento) do conteúdo de celulose da parede celular e/ou para alteração (preferencialmente aumento) da taxa de crescimento em uma planta compreende integração de uma ou mais construções de DNA recombinante (por exemplo, através de técnicas transgênicas ou uma combinação de técnicas transgênicas e cruzamento tradicional) ao genoma de uma planta de forma que seja obtida a co-expressão de (a) pelo menos um polinucleotídeo isolado, selecionado do grupo que consiste de (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 61% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 e 17; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (a)(i) ou (a)(ii); e (b) pelo menos um polinucleotídeo isolado selecionado do grupo que consiste de (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 81% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40 e 42; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 61% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39 e 41; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (b)(i) ou (b)(ii).

Preferencialmente, um método para aumentar o conteúdo de celulose da parede celular em uma planta compreende integrar ao genoma de uma planta uma ou mais construções de DNA recombinante de forma que seja obtida a co-expressão de (a) pelo menos um polinucleotídeo isolado, selecionado do grupo que consiste de (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 2; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 61% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 1 e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (a)(i) ou (a)(ii); e (b) pelo menos um polinucleotídeo isolado selecionado do grupo que consiste de (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 38, 40 e 42; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 61 % até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 37, 39 e 41; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (b)(i) ou (b)(ii).

Preferencialmente, um método para aumentar a taxa de crescimento de uma planta compreende integrar ao genoma de uma planta uma ou mais construções de DNA recombinante de forma que seja obtida a co-expressão de (a) pelo menos um polinucleotídeo isolado, selecionado do grupo que consiste de (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 6; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 61% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 5 e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (a)(i) ou (a)(ii); e (b) pelo menos um polinucleotídeo isolado selecionado do grupo que consiste de (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 81% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 20, 32 e 34; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 61 % até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 19, 31 e 33; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (b)(i) ou (b)(ii).

Um método preferido para conferir esterilidade masculina em uma planta compreende: (a) introdução de uma construção de DNA para supressão, em uma célula vegetal capaz de se regenerar, que compreende um promotor funcional em uma planta operacionalmente ligado a (i) toda ou parte de (A) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 50% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 10, ou (B) um complemento completo da seqüência de ácido nucléico de (i)(A); ou (ii) uma região derivada de toda ou parte da fita sense ou fita antisense de um gene alvo de interesse, dita região tendo uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 50% de identidade de seqüência, dita região que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 50% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada a toda ou parte de uma fita sense ou fita antisense a partir da qual dita região é derivada, e em que dito gene alvo de interesse codifica um polipeptideo Bk2L5; e (b) regeneração de uma planta transgênica a partir de dita célula vegetal transformada, em que dita planta transgênica compreende em seu genoma dita construção de DNA para supressão e em que dita planta transgênica exibe altura reduzida e/ou tamanho de órgão reduzido quando comparada a uma planta controle que não compreende dita construção de DNA para supressão. O método pode ainda compreender: (c) obtenção de uma planta da progênie derivada de dita planta transgênica, em que dita planta da progênie compreende em seu genoma a construção de DNA para supressão.

Um método preferido de redução do tamanho da planta e/ou redução do tamanho do órgão em uma planta compreende: (a) introdução de uma construção de DNA para supressão, em uma célula vegetal capaz de se regenerar, que compreende um promotor funcional em uma planta operacionalmente ligado a (i) toda ou parte de (A) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptideo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 50% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 6, ou (B) um complemento completo da seqüência de ácido nucléico de (i)(A); ou (ii) uma região derivada de toda ou parte da fita sense ou fita antisense de um gene alvo de interesse, dita região que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 50% de identidade de seqüência, dita região que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 50% de identidade de seqüência, ou qualquer número inteiro a partir de 51% até, e incluindo 100% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada a toda ou parte de uma fita sense ou fita antisense a partir da qual dita região é derivada, e em que dito gene alvo de interesse codifica um polipeptídeo Bk2L3; e (b) regeneração de uma planta transgênica a partir de dita célula vegetal transformada, em que dita planta transgênica compreende em seu genoma dita construção de DNA para supressão e em que dita planta transgênica exibe altura reduzida e/ou tamanho de órgão reduzido quando comparada a uma planta controle que não compreende dita construção de DNA para supressão. O método pode ainda compreender: (c) obtenção de uma planta da progênie derivada de dita planta transgênica, em que dita planta da progênie compreende em seu genoma a construção de DNA para supressão.

Os ácidos nucléicos e proteínas isolados e quaisquer realizações da presente invenção podem ser usados sobre uma ampla variedade de plantas, particularmente monocotiledôneas como as espécies da família das gramíneas incluindo Sorghum bicolor e Zea mays. Os ácidos nucléicos e proteínas isoladas da presente invenção podem também ser usados em espécies do gênero: Cucurbita, Rosa, Vitis, Juglans, Fragaria, Lotus, Medicago, Onobrychis, Trífolium, Trigonella, Vigna, Citrus, Linum, Geranium, Manihot, Daucus, Arabidopsis, Brassical Raphanus, Sinapis, Atropa, Capsicum, Datura, Hyoscyamus, Lycopersicon, Nicotiana, Solanum, Petunia, Digitalis, Majorana, Ciahorium, Helianthus, Lactuca, Bromus, Asparagus1 Antirrhinum, Heterocallis, Nemesis, Pelargonium, Panieum, Pennisetum, Ranunculus, Senecio, Salpiglossis, Cucumis, Browaalia, GIycine, Pisum, Phaseolus, Lolium, Oryza, Avena, Hordeum, Secale, Tríticum, Bambusa, Dendrocalamus e Melocanna. Exemplos

A presente invenção é ainda ilustrada pelos seguintes Exemplos, em que partes e porcentagens são mostradas por peso e graus estão em Celsius, a menos que estabelecido de outra forma. Deve-se entender que estes Exemplos, enquanto indicando realizações preferidas da invenção, são fornecidos somente a título ilustrativo. A partir das discussões acima e destes Exemplos, o técnico no assunto pode averiguar as características essenciais desta invenção, e sem se afastar do espírito e escopo desta, pode fazer várias mudanças e modificações da invenção para adaptá-la a vários usos e condições. Dessa forma, várias modificações da invenção além daquelas mostradas e descritas no presente serão aparentes para os técnicos no assunto a partir da descrição disposta acima. Tais modificações também têm a intenção de serem incluídas dentro do escopo das reivindicações anexas.

Exemplo 1

Caracterização Do cDNA De Milho Que Codifica As Proteínas Bk2-Like O fenótipo brittle stalk 2 (bk2) do milho foi primeiramente relatado em 1940 (Langham, MNL 14:21-22 (1940)), e mapeado por fenótipo para o chr9L entre os marcadores umc95 e bnl7.13, ao redor da região de 100 centiMorgan (Howell et ai., MNL 65:52-53 (1991)). Antes disso, o clone csc1c.pk005.k4:fis (SEQ ID NO:1) mostrou codificar o polipeptídeo BRITTLE STALK 2 (SEQ ID NO:2) (Pedido de Patente Internacional No PCT/US 2005/035450, que reivindica prioridade para o pedido provisório US 60/615.868, depositado em 6 de outubro de 2004, cujo teor é integralmente incorporado ao presente como referência). Também foram divulgados outros dois membros da família de genes Bk2 (SEQ ID NOs:7 e 8 e SEQ ID NOs:13 e 14). Na atual divulgação estes genes foram chamados Bk2-like (Bk2L). A busca por seqüências adicionais de cDNA de milho homólogas em nível de ácido nucléico e aminoácidos à seqüência do milho BRITTLE STALK.2 (Bk2) (SEQ ID NO:1) foi conduzida utilizando-se um algoritmo BLASTN ou TBLASTN fornecido pelo Centro Nacional de Informação em Biotecnologia (NCBI) em oposição a diversas bases de dados, incluindo, mas não limitado à base interna de dados de propriedade da DuPont (Basic Local Alignment Search Tool; Altschul et ai, J. Mol. Biol. 215:403-410 (1993); Altschul et ai, Nucleic Aeids Res. 25:3389-3402 (1997)) e Genomie Survey Sequences (GSS) do milho e montagens genômicas TIGR do milho (The TlGR Gene Index Databases1 The Institute for Genomic Research, Rockville, MD 20850; Quackenbush et al.t J. Nueleie Aeids Res. 28(1): 141-145 (2000)). Seis novos membros da família de genes Bk2 foram isolados (Bk2LI, Bk2L3, Bk2L5, Bk2L6, Bk2L8 e Bk2L9). A Tabela 1 mostra todas as proteínas Bk2-like divulgadas na atual especificação, além da própria Bk2.

Tabela I

Proteínas Brittle Stalk 2-Like

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As Figuras. 1A-1F mostram um alinhamento Clustal V das seqüências de aminoácidos relatadas na Tabela 1, usando-se parâmetros padrão. A Figura. 2 é uma tabela que apresenta uma comparação da porcentagem de identidade (e porcentagem de divergência na metade triangular inferior), usando-se o método de alinhamento Clustal V, entre as nove seqüências de aminoácidos mostradas nas FIGs. 1A-1F.

A possível função do polipeptídeo codificado por cada cDNA foi também identificada pela condução de buscas BLAST (Basic Local Alignment Search Tool; Altschul1 S. F., et ai, J. Mol. Bioi 215:403-410 (1993)) dos ESTs em oposição aos bancos de dados públicos. As buscas foram conduzidas por semelhança a seqüências contidas no banco de dados "nr" BLAST (que compreende todas as traduções não-redundantes de CDS do GenBank1 seqüências derivadas do banco de dados de proteínas com estrutura tridimensional Brookhaven, o último grande lançamento de banco de dados de seqüências protéicas SWISS-PROT, e os bancos de dados EMBL e DDBJ). As seqüências foram analisadas por similaridade usando-se o algoritmo BLASTN fornecido pelo Centro Nacional de Informação em Biotecnologia (NCBI). As seqüências de DNA foram traduzidas em todos os quadros de leitura e comparadas por similaridade a todas as seqüências de proteínas publicamente disponíveis contidas na base de dados "nr", usando-se o algoritmo BLASTX (Gish, W. e States, D. J., Nature Genetics 3:266-272 (1993)) fornecido pelo NCBI. Estão apresentados na Tabela 2 os resultados das "Pontuações" obtidas para as seqüências de aminoácidos de todas as proteínas Bk2-like codificadas por todas as inserções de cDNA que compreendem os clones de cDNA indicados. Os dados na Tabela 2 também mostram os resultados obtidos para o cálculo da porcentagem de identidade das seqüências de aminoácidos apresentadas nas SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18, com as seqüências identificadas na coluna de N0. de Identificação Geral do NCBI. Tabela 2

Resultados De BLAST Para Seqüências De Codificação De polipeptídeos homólogos À proteína bk2-Like

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A figura 6 mostra a análise filogenética das proteínas Bk2L do milho, proteínas BC1L do arroz e proteínas COBL de Arabidopsis (os números de acesso NCBI estão entre parênteses). Os números ao longo das ramificações são os valores de iniciação obtidos a partir de uma busca investigativa sobre 5.000 replicações. Os valores de iniciação apenas para os grupos monofiléticos que foram suportados por mais de 50% do tempo são mostrados. Os comprimentos das ramificações são proporcionais às diferenças deduzidas de aminoácidos. Exemplo 2

Análise Da Expressão Gênica Das Proteínas Bk2-Like

A especificidade tecidual da expressão da família de genes Bk2-like divulgada na Tabela 1 foi examinada usando-se a tecnologia de Sequenciamento Massivo de Assinatura Paralela (MPSS™) da Solexa (ver Tabela 3) (Brenner et ai, Nat. Biotechnol. 18:630-634 (2000); Brenner et ai, Proc. Nati Acad. Sei. U.S.A. 97:1665-1670 (2000)). A MPSS™ envolve a geração de dezessete "caracteres" (tags), de assinatura a partir de amostras de mRNA transcritas reversamente. As tags são sequenciadas simultaneamente e designadas aos genes ou ESTs. À abundância dessas tags é atribuída um valor que é normalizado em partes por milhão (ppm), permitindo assim a expressão de tags, ou abundância de tags, que será comparada entre diferentes tecidos. Dessa forma, a plataforma MPSS™ pode ser usada para determinar o padrão de expressão de um gene específico e seu nível de expressão em diferentes tecidos. Os números são as médias sobre as diversas bibliotecas para cada tecido relacionado na segunda coluna.

Tabela 3

Expressão Em PPM Da Família De Genes Bk2 No Milho

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O Bk2 (Tabela 3, coluna 3 e FIG. 3) é expresso na casca, folha, raiz, caule e em feixes vasculares isolados, mas não nos tecidos dos grãos, meristema, pólen ou seda. Este padrão de expressão é consistente com o papel do gene Bk2 na formação da parede secundária uma vez que todos os tecidos que o expressam contêm pelo menos algumas células lignificadas. A análise do coeficiente de correlação do nível de expressão de Bk2 com os níveis de expressão dos doze genes CesA do milho é apresentada na FIG. 4 (ver também FIG. 5A, coluna 2). O padrão de expressão do gene Bk2 é bastante similar àquele dos genes CesA anteriormente divulgados formadores da parede secundária, CesA10, 11 e 12 (ver Figura 5 da patente US 6.930.225, concedida em 16 de agosto de 2005, cujo teor é integralmente incorporado ao presente como referência). Mais especificamente, Bk2 mostra um coeficiente de correlação mais alto, aproximadamente maior do que 0,8; com cada um dos genes CesA10, 11 e 12 do milho do que com qualquer outro gene nesta classe. Uma vez que os três genes CesA também são co-expressos, é provável que suas proteínas correspondentes formem um complexo funcional juntamente com a proteína Bk2. A Tabela 4 lista todas as proteínas CesA de formação da parede primária e secundária conhecidas até hoje (patente US 6.930.225, acima; patente US 6.803.498, concedida em 12 de outubro de 2004, cujo teor é integralmente incorporado ao presente como referência). Os genes CesA10, 11 e 12 do milho e seus ortólogos de Arabidopsis e arroz foram envolvidos na formação da parede secundária (Tanaka et ai., Plant Physioi. 133:73-83 (2003); Taylor et ai, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100:1450-1455 (2003); Appenzeller et ai, Cellulose 11:287-299 (2004)). A co-expressão dos genes Bk2 e CesA de formação da parede secundária suportam um papel par Bk2 na formação da parede secundária no milho.

Tabela 4

Proteínas CesA De Formação De Parede Primária E Secundária

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Outro gene Bk2L que mostra a expressão correlacionada com genes CesA é o Bk2L3. O padrão de expressão de Bk2L3 é bastante similar ao dos genes CesA anteriormente relatados como envolvidos na formação da parede primária (Holland et ai, Plant Physiol. 123:1313-1323 (2000); Dhugga, Curr. Opin. Plant Biol. 4:488-493 (2001); Appenzeller et al., Cellulose 11:287-299 (2004)). Três genes específicos, CesA1, 7 e 8 parecem prováveis na formação do complexo celulose sintase funcional para a formação da parede primária. A expressão do gene Bk2L3 está altamente correlacionada a estes três genes CesA sendo provável que, análogo ao complexo celulose sintase na parede secundária que consiste de três proteínas CesA e uma proteína Bk2, essas quatro proteínas possam formar um complexo celulose sintase funcional para a formação da parede primária.

Bk2L5 é expresso apenas no pólen. Certa expressão na seda muito provavelmente resulta do crescimento do tubo polínico através deste. Bk2L8 parece ser preferido pelas folhas e Bk2L6 é específico do endosperma.

A correlação entre os níveis de expressão de todos os diferentes genes Bk2 e CesA do milho, conforme estudos com MPSS™ da Solexa está mostrada nas FIGs. 5A e 5B.

EXEMPLO 3

EXEMPLO PROGNOSTICO AUMENTO DA REISTENCIA DO CAULE POR ENGENHARIA GENETICA PELA SUPEREXPRESSAO DOS GENES BK2-LIKE DO MILHO SOB UM PROMOTOR FORTE, ESPECIFICO DO CAULE

Um transgene quimérico é construído para superexpressar diretamente o gene/polipeptídeo Bk2 de forma específica para um tecido. O transgene construído compreende um cDNA de milho que codifica Bk2L3 e/ou Bk2L6 (por exemplo, SEQ ID NO:5 ou SEQ ID NO:11), operacionalmente ligado ao promotor do gene S2A específico do caule de aIfafa (Abrahams et ai, Plant Moi Biol. 27:513-528 (1995)). O DNA contendo o ORF de Bk2L3 ou Bk2L6 é, então, ligado ao promotor S2A na extremidade 5' e ao terminador pinll na extremidade 3' para produzir um cassete de expressão como ilustrado na Figura 3. A construção é então ligada a um cassete marcador selecionável contendo um gene de barreira dirigido pelo promotor CaMV 35S e um terminador pinll. Estima-se que um técnico no assunto possa empregar diferentes promotores, seqüências da extremidade 5' e/ou seqüências da extremidade 3' para alcançar resultados de expressão comparáveis. Plantas de milho transgênicas são produzidas pela transformação de embriões imaturos de milho com este cassete de expressão usando-se o método de transformação baseado em Agrobacterium de Zhao (patente US 5.981.840, emitida em 9 de novembro de 1999; cujo teor está incorporado ao presente como referência). Enquanto o método abaixo é descrito para a transformação das plantas de milho com o cassete de expressão Bk2L3 (ou Bk2L6) do promotor S2A, os técnicos no assunto reconhecem que este método pode ser usado para produzir plantas de milho transformadas com qualquer estrutura de nucleotídeo ou cassete de expressão que compreenda um promotor ligado ao gene Bk2L3 (ou Bk2L6) do milho para expressão em uma planta.

Embriões imaturos são isolados do milho e colocados em contato com uma suspensão de Agrobacterium, de modo que as bactérias são capazes de transferir o cassete de expressão Bk2L3 (ou Bk2L6) do promotor S2A (ilustrado acima) para pelo menos uma célula de pelo menos um dos embriões imaturos (etapa 1: etapa de infecção). Nesta etapa, os embriões imaturos são imersos em uma suspensão de Agrobacterium para o início da inoculação. Os embriões são co- cultivados por algum tempo com Agrobacterium (etapa 2: etapa de co- cultivo). Os embriões imaturos são cultivados em meio sólido após o passo de infecção. Após este período de co-cultivo, uma etapa opcional de "repouso" é incluída. Nesta etapa de repouso, os embriões são incubados na presença de pelo menos um antibiótico conhecido como inibidor do crescimento de Agrobacterium sem a adição de um agente seletivo para as plantas transformantes (etapa 3: etapa de repouso). Os embriões imaturos são cultivados em meio sólido com antibiótico, mas sem um agente de seleção, para eliminação de Agrohacterium e uma fase de repouso para as células infectadas. Depois, os embriões inoculados são cultivados em meio contendo um agente de seleção e calos transformados de crescimento são recuperados (etapa 4: etapa de seleção). Preferencialmente, os embriões imaturos são cultivados em meio sólido com um agente seletivo, resultando no crescimento seletivo de células transformadas. Os calos resultantes são então regenerados em plantas pela cultura dos brotos em meio sólido seletivo (etapa 5: etapa de regeneração).

Exemplo 4 Exemplo Prognóstico Aumento Da Resistência Do Caule Por Engenharia Genética Pela Expressão Transgênica Dos Genes Bk2-Like Do Milho Com Um Elemento Enhancer Na Região Do Promotor Sob Um Promotor Forte. Específico De Caule

A expressão do gene Bk2L3 (ou Bk2L6) é aumentada pela colocação de um elemento enhancer heterólogo na região do promotor do gene nativo Bk2L3 (ou Bk2L6). É contsruído um cassete de expressão que compreende um elemento enhancer como CaMV 35S ligado ao promotor nativo de Bk2L3 (ou Bk2L6) e ao cDNA completo. Plantas transgênicas de milho podem ser produzidas pela transformação de embriões imaturos com este cassete de expressão conforme descrito no Exemplo 3. EXEMPLO 5

EXEMPLO PROGNOSTICO AUMENTO DA RESISTENCIA DO CAULE POR ENGENHARIA GENETTICA PELA

Enquanto os genes formadores da parede secundária afetam principalmente a resistência mecânica dos tecidos da planta e não o fenótipo morfológico, os genes formadores da parede primária podem afetar a taxa de crescimento da planta e, assim, sua modulação pode ser empregada para aumentar a taxa de crescimento. Já foi demonstrado anteriormente que os genes CesAI, 7 e 8 do milho são co-expressos em diversos tecidos, sugerindo que possam formar um complexo enzimático funcional. O Bk2L3 é co-expresso com estes três genes CesA1 sugerindo fortemente que as proteínas resultantes de todos estes quatro genes formam um complexo enzimático funcional. A superexpressão simultânea destes quatro genes como uma única construção multigênica ou como construções separadas contendo combinações diferentes destes genes no milho, dirigida por promotores diferentes, preferencialmente pelos promotores de genes cuja expressão completa está associada ao alongamento celular, podem ser empregadas para produzir plantas transgênicas com taxa de crescimento aumentada. Qualquer um dos genes Bk2L pode também ser usado em combinação com os três genes CesA mencionados, conforme descrito acima, para produzir plantas transgênicas com taxa de crescimento aumentada.

EXEMPLO 6

EXEMPLO PROGNOSTICO

AUMENTO DA RESISTENCIA DO CAULE POR ENGENHARIA GENETTICA PELA SUPEREXPRESSAO DOS GENES BK2-LIKE E CESA DO MILHO

Além de contribuir para a resistência mecânica, a parede secundária responde pela maior parte da biomassa nas plantas. Enquanto a resistência mecânica apresenta aplicações na redução do armazenamento da colheita, a qualidade e a quantidade de biomassa são importantes para muitas outras aplicações, incluindo a produção de etanol. O gene Bk2, junto com os genes CesAIO, 11 e 12 do milho, oferecem um caminho para aumentar a taxa de celulose na parede celular.

A eficiência da produção de etanol está diretamente relacionada à quantidade de celulose na biomassa. A substituição de Iignina por celulose também é útil na digestibilidade da ensilagem.

O gene Bk2 pode ser co-expresso com os genes CesAIO, 11 e 12, conforme descrito no Exemplo 5, para os genes formadores da parede primária mas sob o controle de promotores específicos da parede secundária para produzir plantas transgênicas com resistência do caule melhorada e melhor qualidade de biomassa.

Exemplo 7 Exemplo Prognóstico

Infra-Regulacão Por Engenharia Genética Dos Genes Bk2-Uke Do Milho Uma vez que os genes CesA formadores da parede primária contribuem para a expansão celular, sua infra-regulação limitada pode ser empregada para reduzir a altura da planta ou o tamanho do órgão. Em específico, a expressão do gene Bk2L3 está altamente correlacionada com os genes CesA formadores da parede primária. Enquanto a superexpressão de todos os membros de um complexo enzimático funcional pode ser necessária para aumentar a atividade enzimática, a infra-regulação de apenas um membro pode ser suficiente para reduzir a atividade. A infra-regulação de Bk2L3, por exemplo (e/ou Bk2L5 para esterilidade masculina), pode ser alcançada com qualquer tecnologia de co-supressão, RNAi, RNA antisense ou micro RNA que resulta em plantas transgênicas anãs. A redução da altura tem aplicações em algumas culturas nas quais o índice de colheita é baixo e precisa ser aumentado. Variedades modernas de trigo e arroz, por exemplo, são consideravelmente mais baixas do que as variedades antigas. A capacidade de reduzir a altura das plantas foi a principal causa da revolução verde em cada uma destas culturas.

Exemplo 8

Exemplo Prognóstico Expressão De Construções De DNA Recombinante Em Células De Dicotiledôneas Sob Um Promotor Forte, Específico De Caule

Um cassete de expressão composto pelo promotor do gene S2A específico do caule da alfafa (Abrahams et al., Plant Moi Biol. 27:513- 528 (1995)) como primer 5' do fragmento de cDNA pode ser construído e utilizado para a expressão dos atuais polipeptídeos na soja transformada. O terminador pinll pode ser colocado como primer 3' no fragmento de cDNA. Tal construção pode ser usada para superexpressar os genes BWl- like. Entende-se que um técnico no assunto poderia empregar diferentes promotores e/ou seqüências como primer na extremidade 3' para alcançar resultados comparáveis de expressão.

O fragmento de cDNA deste gene pode ser gerado por reação em cadeia da polimerase (PCR) do clone de cDNA usando-se primers de oligonucleotídeos apropriados. Os sítios de clonagem podem ser incorporados aos oligonucleotídeos para produzir a orientação adequada do fragmento de DNA quando inserido no vetor de expressão. A amplificação é então realizada conforme descrito acima e o fragmento isolado é inserido em um vetor pUC18 que carrega o cassete de expressão da semente.

Os embriões de soja podem então ser transformados com o vetor de expressão incluindo seqüências que codificam os atuais polipeptídeos. Para induzir embriões somáticos, cotilédones com 3 a 5 mm de comprimento, dissecados da superfície esterilizada de sementes imaturas de cultivar A2872 de soja, podem ser cultivados com ou sem luz a 26°C em meio Agar apropriado, por 6 a 10 semanas. Embriões somáticos que produzem embriões secundários são então excisados e colocados em meio líquido adequado. Após repetir seleção para os agrupamentos de embriões somáticos que se multiplicaram como embriões de estágio globular inicial, as suspensões são mantidas como descrito abaixo.

Culturas embriogênicas de soja em suspensão podem ser mantidas em 35 mL de meio líquido em um misturador rotatório, a 150 rpm e 26 °C, com luzes fluorescentes sob uma escala de 16:8 horas dia/noite. As culturas são subclonadas a cada duas semanas por inoculação de aproximadamente 35 mg de tecido em 35 mL de meio líquido.

As culturas embriogênicas de soja em suspensão podem então ser transformadas pelo método de bombardeamento de partículas (Klein et al. (1987) Nature (London) 327:70-73, patente US 4.945.050). Um instrumento Biolistic™ PDS1000/HE da DuPont (aperfeiçoado com hélio) pode ser usado para estas transformações.

O gene marcador de escolha que pode ser usado para facilitar a transformação da soja é um gene quimérico composto pelo promotor 35S do vírus mosaico da couve-flor (Odell et al. (1985) Nature 313:810-812), o gene da higromicina fosfotransferase do plasmídeo pJR225 (de E. coli; Gritz et al. (1983) Gene 25:179-188) e a região 3' do gene da nopalina sintase do T-DNA do plasmídeo Ti de Agrobacterium tumefaciens.

O cassete de expressão da semente que compreende a região 5' da faseolina, o fragmento que codifica os atuais polipeptídeos e a região 3' da faseolina podem ser isolados como um fragmento de restrição. Este fragmento pode então ser inserido em um único sítio de restrição do vetor que carrega o gene marcador. A 50 μL de uma suspensão de 1 μm de partículas de ouro a 60 mg/mL são adicionados (nesta ordem): 5μL de DNA (120 μL de espermidina (0,1 M) e 50 μL de CaCl2 (2,5 Μ). A preparação de partículas é então agitada por três minutos, rodada em uma centrífuga pequena por 10 segundos e o sobrenadante é removido. As partículas revestidas de DNA são então lavadas uma vez em 400 μl de etanol a 70% e então resuspensas em 40 μl de etanol anidro. A suspensão DNA/partículas pode ser sonicada três vezes, por um segundo cada vez. Cinco μL das partículas revestidas de DNA são então carregadas em cada disco macroportador.

Aproximadamente 300 a 400 mg de uma cultura em suspensão de duas semanas é colocada em uma placa de petri de 60x15 mm e o líquido residual é removido do tecido com uma pipeta. Para cada experimento de transformação, aproximadamente 5 a 10 placas de tecido são normalmente bombardeadas. A pressão de ruptura da membrana é ajustada para 7.58 x 106 Pa (1100 psi) e a câmara é evacuada a uma pressão de 9,48 x 104 Pa (28 polegadas de mercúrio). O tecido é colocado a aproximadamente 9 cm (3,5 polegadas) da tela de retenção e bombardeado três vezes. Após o bombardeamento, o tecido pode ser dividido ao meio, colocado de volta no líquido e cultivado conforme descrito acima.

Cinco a sete dias após o bombardeamento, o meio líquido pode ser trocado por meio fresco, e onze a doze dias após o bombardeamento, por meio fresco contendo 50 mg/mL de higromicina. Este meio seletivo pode ser renovado semanalmente. Sete a oito semanas após o bombardeamento pode- se observar o tecido verde transformado crescendo a partir de agrupamentos embriogênicos necróticos não transformados. O tecido verde isolado é removido e inoculado em frascos individuais para gerar culturas em suspensão embriogênicas transformadas, propagadas por clonagem. Cada nova linhagem pode ser tratada como um evento de transformação independente. Estas suspensões podem então ser subcultivadas e mantidas como agrupamentos de embriões imaturos ou regenerados nas plantas inteiras, através da maturação e germinação de embriões somáticos individuais.

Exemplo 9

Exemplo Prognóstico

Expressão De Construções De DNA Recombinante Em Células

Microbianas Sob Um Promotor Forte. Específico Do Caule

Os cDNAs (SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 ou 17) que codificam os atuais polipeptídeos BRITTLE STALK 2-like podem ser inseridos no vetor de expressão pBT430 de E. coli T7. Este vetor é um derivado do pET-3a (Rosenberg et ai (1987) Gene 56:125-135) que emprega o sistema promotor T7/RNA polimerase do bacteriófago T7. O plasmídeo pBT430 é construído primeiramente pela destruição dos sítios EcoRI e Hindlll no pET-3a, em suas posições originais. Um oligonucleotídeo adaptador contendo os sítios EcoRI e Hind Ill é inserido no sítio BamHI do pET-3a. Isto cria pET- 3aM com sítios de clonagem adicionais exclusivos para a inserção de genes no vetor de expressão. Depois, o sítio Ndel na posição de iniciação da tradução é convertido em um sítio Ncol usando-se mutagênese dirigida por oligonucleotídeo. A seqüência de DNA de pET-3aM nessa região, 5'- CATATGG, é convertida em 5-CCCATGG no pBT430.

O plasmídeo de DNA contendo um cDNA pode ser adequadamente digerido para liberar um fragmento de ácido nucléico que codifica a proteína. Este fragmento pode então ser purificado em um gel de agarose a 1 % com baixo ponto de fusão. O tampão e a agarose contêm 10 pg/ml de brometo de etídio para visualização do fragmento de DNA. O fragmento pode então ser purificado a partir da digestão do gel de agarose com GELase™ (Epicentre Technologies, Madison, Wl) de acordo com as instruções do fabricante, precipitado com etanol, desidratado e resuspenso em 20 μl de água. Oligonucleotídeos adaptadores apropriados podem ser ligados ao fragmento utilizando-se T4 DNA Iigase (New England Biolabs (NEB), Beverly, MA). O fragmento contendo os adaptadores ligados pode ser purificado do excesso de adaptadores com o uso de agarose com baixo ponto de fusão, como descrito acima. O vetor pBT430 é digerido, desfosforilado com fosfatase alcalina (NEB) e desproteinado com fenol/clorofórmio, como descrito acima. O vetor preparado pBT430 e o fragmento podem então ser ligados a 16 0C por 15 horas seguido pela transformação em células eletrocompetentes DH5 (GIBCO BRL). Os transformantes podem ser selecionados em placas com Agar contendo meio LB e 100 pg/mL de ampicilina. Os transformantes contendo o gene que codifica os atuais polipeptídeos são então selecionados quanto à orientação correta com relação ao promotor T7 através da análise de enzima de restrição.

Para alto nível de expressão, um clone de plasmídeo com ò cDNA inserido na orientação correta em relação ao promotor T7 pode ser transformado em uma linhagem de E. coli BL21(DE3) (Studier et al. (1986) J. Moi Biol. 189:113-130). As culturas são mantidas em meio LB contendo ampicilina (100 mg/L) a 25 °C. Uma densidade óptica a 600 nm de aproximadamente 1 IPTG (isopropilztio-3-galactosídeo, o indutor), pode ser adicionada até uma concentração final de 0,4 mM e a incubação pode ser continuada por 3h a 25 °C. As células são então colhidas por centrifugação e recolocadas em suspensão em 50 pL de 50 mM de Tris-HCI em pH 8,0 contendo 0,1 mM de DTT e 0,2 mM de fluoreto de fenil metilsulfonila. Uma pequena quantidade de esferas de vidro de 1 mm pode ser adicionada e a mistura sonicada 3 vezes por cerca de 5 segundos cada vez, em um sonicador com microssonda. A mistura é centrifugada e a concentração protéica do sobrenadante é determinada. Uma pg de proteína da fração solúvel da cultura pode ser separada por eletroforese em gel de SDS- poliacrilamida. Os géis podem ser observados por bandas protéicas migrando nos pesos moleculares esperados. Exemplo 10

Características Do Tecido Do Caule Do Milho Tipo Selvagem IBkZs E Do Mutante De Caule Frágil Do Milho Ibk2-Ref)

O suprimento de milho contendo o alelo de referência bk2 (bk2-ref) foi obtido da Maize Genetics COOP Stock Center (USDA/ARS & Crop Sciences/UIUC, S-123 Turner Hall, 1102 S. Goodwin Avenue, Urbana, IL 61801-4798). Três plantas desenvolvidas em estufa, cada uma dos tipos bk2- refA)k2-refe a planta-irmã selvagem, Bk2/bk2-ref, ambas derivadas de sementes obtidas da mesma espiga autofecundada, foram avaliadas para as diferentes características aproximadamente duas semanas após a floração. Três entrenós abaixo da espiga (entrenós 3, 4 e 5, numerados a partir do nó da espiga) foram submetidos a um teste de flexão com três pontos usando-se um dispositivo eletromecânico Instron1 modelo 4411 (Instron Corp., Canton, MA). A amplitude entre os pontos de ancoragem foi de 20 cm. A bigorna foi movida verticalmente em uma velocidade constante de 20 cm/min em oposição à zona internodal aproximadamente 3 cm acima do nó em um caule colocado horizontalmente até que se dobrasse ou rompesse. A carga máxima para quebrar o caule foi usada como medida de resistência para diferenciar entrenós e caules.

A matéria seca total foi medida na porção do caule abaixo do nó da espiga. Os conteúdos de matéria seca estrutural e celulose foram determinados em duplicata em cada uma das três plantas a partir do terceiro e quarto entrenós abaixo do nó da espiga através da fervura do material do caule em pó, duas vezes, com tampão (25 mM de MOPS, pH 7) por 30 minutos. O material restante foi colocado em suspensão em metanol/clorofórmio (3/1, v/v) por 1 hora, desidratado e pesado. A celulose cristalizada foi determinada pelo método de Updegraff (Updegraff, Anal. Biochem. 32:120-124 (1969)). Resumidamente, o material do caule triturado foi colocado em banho de água fervente em uma mistura de 8:2:1 de ácido acético, água e ácido nítrico por 1 hora, o material cristalizado foi lavado três vezes com água e depois com etanol a 95%, seguido por desidratação em um Speedvac. O teor de Iignina Klason foi determinado através da incubação de material do caule triturado com 72% (p/p) de ácido sulfúrico por 1 hora, e duas lavagens com uma diluição de 1:20 de ácido sulfúrico a 72% em água, aquecida a 65 0C por 30 minutos, lavagem com água, uma vez, e secagem do resíduo a 80 0C durante a noite. A composição de açúcares foi determinada como descrito em (Appenzeller et al., Cellulose 11:287-299 (2004)).

Em resumo, a redução da resistência mecânica do tecido do caule foi altamente correlacionada à redução da quantidade de celulose e a uma deposição desigual de material na parede secundária, nas fibras do esclerênquima subepidérmico e perivascular. A quantidade mais baixa de celulose e as paredes mais finas da planta mutante refletiram no conteúdo reduzido de matéria seca por unidade de comprimento do caule.

TABELA 5

MEDIDA DA COMPOSICAO DO CAULE E RESISTENCIA MECANICA

<table>table see original document page 87</column></row><table> Listagem de Seqüência

<110> Pioneer Hi-Bred International, Inc.

<120> Família do Gene Bittle Stalk-2 e Métodos e Usos Relacionados <130> BB-1565 <160> 42

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1 <211> 1784 <212> DNA <213> Zea mays

<400> 1

gatcggagct tgtgctgcta ctgctactat accagcgcta gctagcagca gccgccggcc 60

ggctcgcgca agctaaggaa gggtcgacat gacgatgggg ctccgcgtcc gcgactcctc 120

cgcgctgctg gctctggccg tcgcgctcgc ctgctgctcc gttgcagtgg tggcctacga 180

ccccctggac ccgaacggca acatcaccat caagtgggac gtgatctcgt ggacgcccga 240

cgggtacgtg gcgatggtga cgatgagcaa ctaccagatg taccggcaca tcatggcgcc 300

cgggtggacg ttggggtggt cgtgggccaa gaaggaggtg atctggtcca tcgtgggggc 360

gcaggccacg gagcaggggg actgctccaa gttcaagggc ggcatcccgc actgctgcaa 420

gcgcaccccg gccgtggtgg acctcctccc gggggtgccc tacaaccagc agatcgccaa 480

ctgctgcaag gccggcgtgg tgtcggcgta cgggcaggac ccggcggggt ccgtctccgc 540

gttccaggtc tccgtcggcc tggccggtac caccaacaag acggtgaagc tgcccaggaa 600

cttcacgctc atggggcccg ggctgggcta cacctgcggg cccgccgccg tggtgccgtc 660

caccgtgtac tggacgcccg accaccggcg ccggacgcag gcgctcatga cgtggacggt 720

gacctgcacc tactcgcagc agctggcgtc ccggtacccg tcctgctgcg tctccttctc 780

ctccttctac aacagcacca tcgtgccgtg cgcccggtgc gcgtgcggct gcggcggcca 840

cggcggccac gcgggtccgg gcggctgcat cgagggggac tccaagcgcg cgctgtcggc 900

cggggtgaac acgccgcgca aggacggcca ggcgctgctg cagtgcacgc cgcacatgtg 960

ccccatccgg gtgcactggc acgtcaagct caactacaag gactactggc gcgccaagat 1020

cgccatcacc aactacaact acaggatgaa ctacacgcag tggacgctgg tggcgcagca 1080

ccccaacctg gacaacgtca ccgaggtctt cagcttccag tacaagccgc tgcaaccata 1140 cgggagcatc aatgacactg gcatgttcta cgggctcaag ttctacaacg actttctcat 1200

ggaggccggc ccgttcggca acgtgcagtc ggaggtgctc atgcgcaagg acgcaaggac 1260

cttcaccttc agcatgggct gggcgttccc gcgcaagatc tacttcaacg gcgacgagtg 1320

caagatgccg ccgccggact cctaccccta cctgcccaac gccgcgcccg tcgtcgcctc 1380

gcagctggtc ctgtccgccg ccgcctcggc gttcctactg ttgctgctcc tggtggcatg 1440

accgtgaccg aaccaagggc aaggcctccg ttttgttttc ccgtctcgtc ccgtgggcag 1500

ggagcagact tcagtaggca gggcatttta tttggttttt ttgccaagga ttcaacactt 1560

gggttttcgt cagaggaaaa ctgtcgtgta tgtagtgtga gttgcaggtc gtcggatccc 1620

cacgtacaag acaatctttg gatctagaat atgcaaaacg tgaatcagca cgccaggatc 1680

atcgtctcct acaagattgg cagaaaaaaa atctcatgat gagtgatgtg tcaacagacc 1740

tatatatatg tgataatcac tggtttcaaa aaaaaaaaaa aaaa 1784

<210> 2

<211> 450

<212> PRT

<213> Zea mays

<400> 2

Met Thr Met Cly Leu Arg Val Arg Asp Ser Ser Ala Leu Leu Ala Leu 15 10 15

Ala Val Ala Leu Ala Cys Cys Ser Val Ala Val Val Ala Tyr Asp Pro 20 25 30

Leu Asp Pro Asn Gly Asn Ile Thr Ile Lys Trp Asp Val Ile Ser Trp 35 40 45

Thr Pro Asp Gly Tyr Val Ala Met Val Thr Met Ser Asn Tyr Gln Met 50 55 60

Tyr Arg His Ile Met Ala Pro Gly Trp Thr Leu Cly Trp Ser Trp Ala 65 70 75 80

Lys Lys Glu Val Ile Trp Ser Ile Val Gly Ala Gln Ala Thr Glu Gln 85 90 95

Gly Asp Cys Ser Lys Phe Lys Cly Gly Ile Pro His Cys Cys Lys Arg 100 105 110 Thr Pro Ala Val Val Asp Leu Leu Pro Cly Val Pro Tyr Asn Gln Gln 115 120 125

Ile Ala Asn Cys Cys Lys Ala Gly Val Val Ser Ala Tyr Gly Gln Asp 130 135 140

Pro Ala Gly Ser Val Ser Ala Phe Gln Val Ser Val Gly Leu Ala Gly 145 150 155 160

Thr Thr Asn Lys Thr Val Lys Leu Pro Arg Asn Phe Thr Leu Met Gly 165 170 175

Pro Gly Leu Gly Tyr Thr Cys Gly Pro Ala Ala Val Val Pro Ser Thr 180 185 190

Val Tyr Trp Thr Pro Asp His Arg Arg Arg Thr Gln Ala Leu Met Thr 195 200 205

Trp Thr Val Thr Cys Thr Tyr Ser Gln Gln Leu Ala Ser Arg Tyr Pro 210 215 220

Ser Cys Cys Val Ser Phe Ser Ser Phe Tyr Asn Ser Thr Ile Val Pro 225 230 235 240

Cys Ala Arg Cys Ala Cys Gly Cys Gly Gly His Gly Gly His Ala Gly 245 250 255

Pro Gly Gly Cys Ile Glu Gly Asp Ser Lys Arg Ala Leu Ser Ala Gly 260 265 270

Val Asn Thr Pro Arg Lys Asp Gly Gln Ala Leu Leu Gln Cys Thr Pro 275 280 285

His Met Cys Pro Ile Arg Val His Trp His Val Lys Leu Asn Tyr Lys 290 295 300

Asp Tyr Trp Arg Ala Lys Ile Ala Ile Thr Asn Tyr Asn Tyr Arg Met 305 310 315 320

Asn Tyr Thr Gln Trp Thr Leu Val Ala Gln His Pro Asn Leu Asp Asn 325 330 335 Val Thr Glu Val Phe Ser Phe Gln Tyr Lys Pro Leu Gln Pro Tyr Gly 340 345 350

Ser Ile Asn Asp Thr Gly Met Phe Tyr Gly Leu Lys Phe Tyr Asn Asp 355 360 365

Phe Leu Met Glu Ala Gly Pro Phe Gly Asn Val Gln Ser Glu Val Leu 370 375 380

Met Arg Lys Asp Ala Arg Thr Phe Thr Phe Ser Met Gly Trp Ala Phe 385 390 395 400

Pro Arg Lys Ile Tyr Phe Asn Gly Asp Glu Cys Lys Met Pro Pro Pro 405 410 415

Asp Ser Tyr Pro Tyr Leu Pro Asn Ala Ala Pro Val Val Ala Ser Gln 420 425 430

Leu Val Leu Ser Ala Ala Ala Ser Ala Phe Leu Leu Leu Leu Leu Leu 435 440 445

Val Ala 450

<210> 3

<211> 3152

<212> DNA

<213> Zea mays

<400> 3

cctgaacctc tcctcggcac atgcgcgggc cccactttac aagcgacagt agccccatcc 60

gcagccgtgc acgctagaat cggacggctt gccgcgcatc tcgcccgtcc gcggcgccgc 120

tgcccgaacc gaaccctacc gtttcaacca ggcgccgcct ctccgcgtcc gctgagtcac 180

tgcctcctgg gcccggaccc acacgcccct cgtcaatcaa catcaactca cgctcctcat 240

catccctcca ctggaaactg gaccccctcg tcgtctcgtc tcttttcctg ccggcgtcga 300

ttcccactcc gttttgttaa aaaccgatcg ttttctccat ttctttgtag ggactagtaa 360

tagatagaca gcagagggag agacgacagg cgtagctagc accagcactc aagctactac 420

gcacgcacgc cgccgctccc ccagttcaaa cccaccaccc cttccccctt catcttcctt 480

tcccagctgt gcacgcgctt tccgatcgct tcatctacct cgccaccgcg cttccgccca 540 gccccagtca ccagtccacc gcgcccgcgc ccccgatcca gcgatatggc tggctccgta 600

gctccccacg ctgtggtcct cggtcttctc ctgctcgcgg ggctcgcggc ggcgcagagg 660

gcgacgacgc cggctgcggc ggcccccgcg cccgaccccg gctgcaacgg catccagctg 720

acctacaact tcgtggaccg caccaagatc cggcccttcg tcagcgacaa gaacaagcag 780

ccctacgcct tccgcgccaa cgtcaccgtg ctcaactccg gcacccgccc gctcaagtcc 840

tgggcggcac tcgtcacatt cggctacggc gagatcctcg tcggcgtcga cggcgccgtg 900

ctcacgggcg gcggcgacct gccgtacaac accacggagg acgccggcaa cgccacctcg 960

ttctccgggt acccgcatac agacctcctc acgcccatcg ccaccgccgg ggacctgtcg 1020

cagatccagg cctccgtcgg catcgtcggc acgctcttcg ccgggcccgg cccgttcgtg 1080

ccgctcccca ccgcgctgtc gctggacgac ccggcctacg cgtgcccggc ggcgaccaac 1140

gtcactgctc gggtgctgtc cacgtgctgc gtcctcacgc cggaggccga ggccaacgcc 1200

actgccatcg acgccaacac caccgacccg accaaggatt tcctgccgcg cggcaccggc 1260

gacctcgtca tcacctacga tgtgctccag gcctacccct ccagctacct tgcgctcgtc 1Β20

acgctcgaga acaacgccaa gctcggccgc ctcgacaact ggcggctgtc gtgggagtgg 1380

cggcgtgggg agttcatcta ctcaatgaaa ggagctcacc catcagaggt ggacacctcg 1440

ggctgtatct gtggggcgcc tgggcagtac taccagagcc ttgatttttc gcaggtgctc 1500

aattgtgacc gcaagccggt gatccttgac ctgcccctgt cccggtacaa cgacactcag 1560

attgggaaga ttgacaattg ctgcaggaat gggacaatct tgcccaagtc catggacgag 1620

gcacagtcga aatctgcgtt ccagatgcaa gttttcaaga tgccaccaga cctgaaccgg 1680

actaagctgt tcccccctgc taatttcaag atcgtgggtg catcatcgct gaacccggac 1740

tatgcctgtg gccagccggt gcctgtcagc ccaaccgcgt tcccagaccc gagcgggctt 1800

gactcgacga cgcttgctgt ggcaacatgg caggtggtgt gcaacattac cacgacaaag 1860

ggggccaagc ccaagtgttg tgtgaccttc tcggcgtact acaacgactc agtgatcccc 1920

tgcagcacct gcgcttgtgg gtgccctgca aacaggcgag ggccaacgtg cagcaccacc 1980

gcacaatcca tgctgctgcc accggaggcg ctgcttgtgc cattcgacaa ccggtcacag 2040

aaggcgttgg cgtgggctga gctgaagcat tacaatgtgc cccggccgat gccttgcggt 2100

gacttttgtg gcgtgagcat caattggcat gtctcaacgg actacaacaa gggctggagc 2160

gctcgggtga cattgttcaa ctgggaggat gtcgacatgg ccaattggtt tgctgccatc 2220 gtcatggaca aggcgtatga cggctttgag aaggcttact cgttcaacgg caccgcagtg 2280

ggcaagaaca cgatctttat gcagggtctg gaggggctta attacctggt gaagcagacc 2340

aacatgagtg ggtccgacta ccttgttcct ggcaagcaac agtcagtcct ctcattcacc 2400

aagaagctga ccccggggtt aaatgttgtt gctggagatg gcttcccaac aaaggtcttc 2460

ttcaatggcg acgaatgcgc tatgccacag agaattccga tcagcactgg attcagcacc 2520

cgtctcagca gtggccttgc tctggttccg ttccttgttg cttcggcttt cctattgctc 2580

cagcaatgat ccacgggact ccaattcttt gattctttca ggtggtttgg tcgatgccat 2640

ttgtaagaaa gcctcttttt tttgtttctg tgattgcttt agtagattct acttagctgc 2700

tgtatgttag tcagatgaag cagcagctgt gaaacagtat gaatacttgg atagtgagag 2760

aaaaagtgag gaagcatttg ttgcgggttt gcaacattgg ttcctcgttc taatggcatt 2820

tacgaattgt ctcatgttct gtctgtcata cagaatttac tctgtgaatc cgttcatgtc 2880

ttgtttttgt ttgtttggtc acaaattcag gccttgtttg gttcctttag attgagtccg 2940

tggaatggtt tctagttcga atggtttact aatatgtgta accttaatga ggtggaatgg 3000

ttcctgggtc gaatcatggt tagctgaacg gaccgtcaaa ctgattggaa agggatcgaa 3060

ggggattaaa gacggatgag gggaatttga cttgttaggg atttagttcc ctcgttcttc 3120

tccaatcccc cttagatttg agatccgaat tc 3152

<210> 4

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<212> PRT

<213> Zea mays

<400> 4

Met Ala Gly Ser Val Ala Pro His Ala Val Val Leu Gly Leu Leu Leu 15 10 15

Leu Ala Gly Leu Ala Ala Ala Gln Arg Ala Thr Thr Pro Ala Ala Ala 20 25 30

Ala Pro Ala Pro Asp Pro Gly Cys Asn Gly Ile Gln Leu Thr Tyr Asn 35 40 45

Phe Val Asp Arg Thr Lys Ile Arg Pro Phe Val Ser Asp Lys Asn Lys 50 55 60 Gln Pro Tyr Ala Phe Arg Ala Asn Val Thr Val Leu Asn Ser Gly Thr 65 70 75 80

Arg Pro Leu Lys Ser Trp Ala Ala Leu Val Thr Phe Gly Tyr Gly Glu 85 90 95

Ile Leu Val Gly Val Asp Gly Ala Val Leu Thr Gly Gly Gly Asp Leu 100 105 110

Pro Tyr Asn Thr Thr Glu Asp Ala Gly Asn Ala Thr Ser Phe Ser Gly 115 120 125

Tyr Pro His Thr Asp Leu Leu Thr Pro Ile Ala Thr Ala Gly Asp Leu 130 135 140

Ser Gln Ile Gln Ala Ser Val Gly Ile Val Gly Thr Leu Phe Ala Gly 145 150 155 160

Pro Gly Pro Phe Val Pro Leu Pro Thr Ala Leu Ser Leu Asp Asp Pro 165 170 175

Ala Tyr Ala Cys Pro Ala Ala Thr Asn Val Thr Ala Arg Val Leu Ser 180 185 190

Thr Cys Cys Val Leu Thr Pro Glu Ala Glu Ala Asn Ala Thr Ala Ile 195 200 205

Asp Ala Asn Thr Thr Asp Pro Thr Lys Asp Phe Leu Pro Arg Gly Thr 210 215 220

Gly Asp Leu Val Ile Thr Tyr Asp Val Leu Gln Ala Tyr Pro Ser Ser 225 230 235 240

Tyr Leu Ala Leu Val Thr Leu Glu Asn Asn Ala Lys Leu Gly Arg Leu 245 250 255

Asp Asn Trp Arg Leu Ser Trp Glu Trp Arg Arg Gly Glu Phe Ile Tyr 260 265 270

Ser Met Lys Gly Ala His Pro Ser Glu Val Asp Thr Ser Gly Cys Ile 275 280 285 Cys Gly Ala Pro Gly Gln Tyr Tyr Gln Ser Leu Asp Phe Ser Gln Val 290 295 300

Leu Asn Cys Asp Arg Lys Pro Val Ile Leu Asp Leu Pro Leu Ser Arg 305 310 315 320

Tyr Asn Asp Thr Gln Ile Gly Lys Ile Asp Asn Cys Cys Arg Asn Gly 325 330 335

Thr Ile Leu Pro Lys Ser Met Asp Glu Ala Gln Ser Lys Ser Ala Phe 340 345 350

Gln Met Gln Val Phe Lys Met Pro Pro Asp Leu Asn Arg Thr Lys Leu 355 360 365

Phe Pro Pro Ala Asn Phe Lys Ile Val Gly Ala Ser Ser Leu Asn Pro 370 375 380

Asp Tyr Ala Cys Gly Gln Pro Val Pro Val Ser Pro Thr Ala Phe Pro 385 390 395 400

Asp Pro Ser Gly Leu Asp Ser Thr Thr Leu Ala Val Ala Thr Trp Gln 405 410 415

Val Val Cys Asn Ile Thr Thr Thr Lys Gly Ala Lys Pro Lys Cys Cys 420 425 430

Val Thr Phe Ser Ala Tyr Tyr Asn Asp Ser Val Ile Pro Cys Ser Thr 435 440 445

Cys Ala Cys Gly Cys Pro Ala Asn Arg Arg Gly Pro Thr Cys Ser Thr 450 455 460

Thr Ala Gln Ser Met Leu Leu Pro Pro Glu Ala Leu Leu Val Pro Phe 465 470 475 480

Asp Asn Arg Ser Gln Lys Ala Leu Ala Trp Ala Glu Leu Lys His Tyr 485 490 495

Asn Val Pro Arg Pro Met Pro Cys Gly Asp Phe Cys Gly Val Ser Ile 500 505 510 Asn Trp His Val Ser Thr Asp Tyr Asri Lys Gly Trp Ser Ala Arg Val 515 520 525

Thr Leu Phe Asn Trp Glu Asp Val Asp Met Ala Asn Trp Phe Ala Ala 530 535 540

Ile Val Met Asp Lys Ala Tyr Asp Gly Phe Glu Lys Ala Tyr Ser Phe 545 550 555 560

Asn Gly Thr Ala Val Gly Lys Asn Thr Ile Phe Met Gln Gly Leu Glu 565 570 575

Gly Leu Asn Tyr Leu Val Lys Gln Thr Asn Met Ser Gly Ser Asp Tyr 580 585 590

Leu Val Pro Gly Lys Gln Gln Ser Val Leu Ser Phe Thr Lys Lys Leu 595 600 605

Thr Pro Gly Leu Asn Val Val Ala Gly Asp Gly Phe Pro Thr Lys Val 610 615 620

Phe Phe Asn Gly Asp Glu Cys Ala Met Pro Gln Arg Ile Pro Ile Ser 625 630 635 640

Thr Gly Phe Ser Thr Arg Leu Ser Ser Gly Leu Ala Leu Val Pro Phe

645

650

655

Leu Val Ala Ser Ala Phe Leu Leu Leu Gln Gln 660 665

<210> 5

<211> 2094

<212> DNA

<213> Zea mays

<220>

<221> misc_feature

<222> (2087)..(2089)

<223> η é a, c, g, ou t

<400> 5

ctcgtgctgc tgcttccgct gcagtaaaat acggggaaga ggaggggagg gagacgcggc 60

cgctgcctgc cgcacatgct ttaagtccca ctccccacct ccccagatct ccgccctcct 120 ccccaccgcc cccattcctc ccctcggccg caaccgtagc cgccgcacta cggagcaaga 180

tcgtcgggta gacggacggg cgggcgggcg ggcgcggctc tgtatctatc tgtcggtggg 240

agaccgcgtg tgtcggttag gcggcgggtg gcaaggaaga atggcggcga gcggcagatc 300

cgtcgcgtgc tgtgccgccg cgctgctcgc ggccgcgttg ctcctctccg caccgactgc 360

aacagaggct tatgattcgc tggatccaaa tggcaacatc accataaaat gggatatcat 420

gcagtggact cctgatggat atgtcgctgt tgtcacaatg tttaattatc aacaatttcg 480

gcatatcggc gcacctggtt ggcagcttgg gtggacatgg gcaaagaagg aggttatatg 540

gtcaatggtt ggggctcaga ccactgaaca gggcgactgc tcaaagttca agagcagccc 600

accccattgc tgcaagaaag atccaacaat tgtcgattta cttccaggca ctccatacaa 660

catgcaaatt gccaattgct gcaaggcagg agttgtaaat acctttaacc aggacccagc 720

aaatgctgct tcctccttcc agatcagtgt tggtcttgct ggaactacca ataaaactgt 780

taaggtgccc aggaacttca ctcttaagac tccaggccct gggtacacat gtgggcgtgc 840

cattgttggc aggcctacga agtttttcac cgcggacggg cgcagggcaa cccaagctct 900

aatgacatgg aatgtgacct gcacatattc ccaatttctt gctcagaaga ctccatcctg 960

ctgtgtatct ctatcatcgt tttataatga cacaattgtg aactgcccaa catgctcatg 1020

tggctgccag aacccaagtg ggtcaaactg tgtgaatgag gattcaccta atctacaagc 1080

tgcaattgat ggccctggca aatggactgg tcagcccctt gtacaatgca cttcccacat 1140

gtgcccgata agaatccact ggcatgtgaa gctcaactac aaggattact ggagagtgaa 1200

aatcactatc acaaacttca acttccgcat gaattacacg cagtggaact tagtagccca 1260

gcatccaaac tttgataata tcactcagtt gttcagcttc aactacaaac cacttactcc 1320

atatggtggt ggcataaatg atacggcaat gttctggggt gtaaaattct acaatgatct 1380

gctgatgcaa gccggcaaac ttgggaatgt gcaatcagag ctgcttctcc gcaaggactc 1440

ccggactttc actttcgaaa agggatgggc cttcccacgc cgagtttact tcaatggtga 1500

taattgtgtc atgccatctc ctgaaaatta tccatggctg ccgaatgcaa gccctctaac 1560

aaaaccattg gcactcccat tcttggtatt ctgggttgcc ttggctgctc tgttggctta 1620

tgcatgatta gtgggatcaa gaggtttagc aagtttcaag ttgatgtcag attccatgag 1680

gtgcactgca acaagtcatt tgttcattca attccatggt tgcacagaaa agatgaggcg 1740

atgccaagaa aaagtcgata tgtctatgtg tttaagttaa agggccaaaa tgtatttctt 1800 gtttggtata taacagccct acaacacttt ggtgaactta gttactgcag attaggtaat 1860

tacagttgca ccttttgtat tttatagcaa acccagaatt tttcattgga ttctacgact 1920

gcccctcttg tagtaaatgc aaggcttccc tgatactcct gtttaaagat ttgtggattg 1980

ggtgagacaa tggtgattga gataactaag ttctggggtc ttgatccatt tgmwgctggr 2040

aagawtattg atctaaattg ctaaaaaaaa acctcgtgcc gaattcnnng cctc 2094

<210> 6

<211> 448

<212> PRT

<213> Zea mays

<400> 6

Met Ala Ala Ser Cly Arg Ser Val Ala Cys Cys Ala Ala Ala Leu Leu 15 10 15

Ala Ala Ala Leu Leu Leu Ser Ala Pro Thr Ala Thr Clu Ala Tyr Asp 20 25 30

Ser Leu Asp Pro Asn Gly Asn Ile Thr Ile Lys Trp Asp Ile Met Cln 35 40 45

Trp Thr Pro Asp Gly Tyr Val Ala Val Val Thr Met Phe Asn Tyr Gln 50 55 60

Gln Phe Arg His Ile Cly Ala Pro Gly Trp Gln Leu Gly Trp Thr Trp 65 70 75 80

Ala Lys Lys Glu Val Ile Trp Ser Met Val Gly Ala Gln Thr Thr Glu 85 90 95

Gln Gly Asp Cys Ser Lys Phe Lys Ser Ser Pro Pro His Cys Cys Lys 100 105 110

Lys Asp Pro Thr Ile Val Asp Leu Leu Pro Gly Thr Pro Tyr Asn Met 115 120 125

Gln Ile Ala Asn Cys Cys Lys Ala Gly Val Val Asn Thr Phe Asn Gln 130 135 140

Asp Pro Ala Asn Ala Ala Ser Ser Phe Gln Ile Ser Val Gly Leu Ala 145 150 155 160 Gly Thr Thr Asri Lys Thr Val Lys Val Pro Arg Asn Phe Thr Leu Lys 165 170 175

Thr Pro Cly Pro Gly Tyr Thr Cys Gly Arg Ala Ile Val Gly Arg Pro 180 185 190

Thr Lys Phe Phe Thr Ala Asp Gly Arg Arg Ala Thr Gln Ala Leu Met 195 200 205

Thr Trp Asn Val Thr Cys Thr Tyr Ser Cln Phe Leu Ala Gln Lys Thr 210 215 220

Pro Ser Cys Cys Val Ser Leu Ser Ser Phe Tyr Asn Asp Thr Ile Val 225 230 235 240

Asn Cys Pro Thr Cys Ser Cys Gly Cys Gln Asn Pro Ser Gly Ser Asn 245 250 255

Cys Val Asn Glu Asp Ser Pro Asn Leu Gln Ala Ala Ile Asp Gly Pro 260 265 270

Gly Lys Trp Thr Gly Gln Pro Leu Val Gln Cys Thr Ser His Met Cys 275 280 285

Pro Ile Arg Ile His Trp His Val Lys Leu Asn Tyr Lys Asp Tyr Trp 290 295 300

Arg Val Lys Ile Thr Ile Thr Asn Phe Asn Phe Arg Met Asn Tyr Thr 305 310 315 320

Gln Trp Asn Leu Val Ala Gln His Pro Asn Phe Asp Asn Ile Thr Gln 325 330 335

Leu Phe Ser Phe Asn Tyr Lys Pro Leu Thr Pro Tyr Gly Gly Gly Ile 340 345 350

Asn Asp Thr Ala Met Phe Trp Gly Val Lys Phe Tyr Asn Asp Leu Leu 355 360 365

Met Gln Ala Gly Lys Leu Gly Asn Val Gln Ser Glu Leu Leu Leu Arg 370 375 380 Lys Asp Ser Arg Thr Phe Thr Phe Clu Lys Gly Trp Ala Phe Pro Arg

385

390

395

400

Arg Val Tyr Phe Asn Gly Asp Asn Cys Val Met Pro Ser Pro Glu Asn

405

410

415

Tyr Pro Trp Leu Pro Asn Ala Ser Pro Leu Thr Lys Pro Leu Ala Leu

420

425

430

Pro Phe Leu Val Phe Trp Val Ala Leu Ala Ala Leu Leu Ala Tyr Ala

435

440

445

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<400> 7

ggaaagcagc gctgcggagc agagtgtgtc gcttcgctgt aaaaacaggg gagagggaga 60

cgcgcccgct gccagtgcct gccgcacacg cgtttagcgt ttaagttcca ctcctcgccg 120

ccccagatct ccgccctcct caccactgcc cctcattccc cggcgcccag cacccggcgg 180

ccgcaaccgc cgcagtccgg agcaagatcg gcgggtagac ggacggacgg acgggcgaca 240

ggcgggcggg cgcggctctg tctgtatcta tctgttggtg ggagaccggt tgtgtcggtt 300

aggcggcggc gggtgggaag gaagaatggc ggcgggcggc agatccatcg cgtgctttgc 360

cgccgtgctg ctcgcggccg cgctgctcct ctccgcaccg accaccacag aggcctacga 420

ttcgctggat ccaaacggca acatcactat aaaatgggat atcatgcagt ggactcctga 480

cggatatgtc gctgttgtca caatgttcaa ttatcaacaa tttcggcaca tcggggcacc 540

tggatggcag cttgggtgga catgggcaaa aaaggaggtt atatggtcaa tggttggggc 600

tcagaccact gaacagggtg actgctcaaa gttcaagggc aacacccccc attgctgcaa 660

gaaagatcca acaattgttg atttacttcc aggcactcca tacaacatgc aaattgccaa 720

ttgctgcaag gcaggagtta taaatacctt taaccaggac ccagcaaatg ctgcttcctc 780

cttccagatc agtgttggtc ttgctggaac taccaataaa actgttaagg tgccgaagaa 840

tttcactctt aagactccag gccctgggta cacatgtggg cgtgctattg ttggcaggcc 900

aacgaagttt ttctctgcag atgggcgcag ggtaacccaa gctctaatga catggaatgt 960

gacctgcaca tattcccaat ttcttgctca gaagactcca tcctgctgtg tatctctctc 1020 atcattttat aatgacacaa ttgtgaactg cccgacatgc tcatgtggct gccagaaccc 1080

aagtgggtca aactgtgtga acgaggattc acctaatcta caagccgcaa ttgatggtcc 1140

tggtaaatgg actggccagc ctcttgtaca atgcacttct cacatgtgcc caataagaat 1200

ccactggcat gtgaagctca actacaagga atactggaga gtgaaaatca ctatcacgaa 1260

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taatatcact cagttgttca gcttcaacta caaaccactt actccatatg ggggtggcat 1380

aaatgatacg gcaatgttct ggggtgtaaa gttctacaat gatttgctga tgcaagccgg 1440

caaacttggg aatgtgcaat cagaactgct tctccgcaag gactcacgga ctttcacatt 1500

cgaaaaggga tgggccttcc cacgccgagt gtacttcaat ggtgataatt gtgtcatgcc 1560

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actcccactc ttgatattct gggttgcctt ggctgttctg ttggcttatg catgatgagt 1680

gggatcaaga tgtttagcaa gcttcaagtt gatgtcggat tccatgaggt gcactgcaac 1740

gggatattta ttcattcaat tccatagcgg cacaggagag atgaggcgaa gccaagaaaa 1800

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tagtatatag cagctctaca acactttggt gaacttagtt actgcaaatt aggcaattac 1920

agttgcacct tttgtatttt atagcaaacc cagacttcta ttggattcta tgactgcccc 1980

tcttgtagta aacgcaaggc ttcactggta ctcctgttta aagattggtc aaatagaaga 2040

gacgacggtg attgtcaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2100

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<210> 8

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<212> PRT

<213> Zea mays

<400> 8

Met Ala Ala Gly Gly Arg Ser Ile Ala Cys Phe Ala Ala Val Leu Leu 15 10 15

Ala Ala Ala Leu Leu Leu Ser Ala Pro Thr Thr Thr Glu Ala Tyr Asp 20 25 30

Ser Leu Asp Pro Asn Gly Asn Ile Thr Ile Lys Trp Asp Ile Met Gln 35 40 45 Trp Thr Pro Asp Gly Tyr Val Ala Val Val Thr Met Phe Asn Tyr Gln 50 55 60

Gln Phe Arg His Ile Gly Ala Pro Gly Trp Gln Leu Gly Trp Thr Trp 65 70 75 80

Ala Lys Lys Glu Val Ile Trp Ser Met Val Gly Ala Gln Thr Thr Glu 85 90 95

Gln Gly Asp Cys Ser Lys Phe Lys Gly Asn Thr Pro His Cys Cys Lys 100 105 110

Lys Asp Pro Thr Ile Val Asp Leu Leu Pro Gly Thr Pro Tyr Asn Met 115 120 125

Gln Ile Ala Asn Cys Cys Lys Ala Gly Val Ile Asn Thr Phe Asn Gln IBO 135 140

Asp Pro Ala Asn Ala Ala Ser Ser Phe Gln Ile Ser Val Gly Leu Ala 145 150 155 160

Gly Thr Thr Asn Lys Thr Val Lys Val Pro Lys Asn Phe Thr Leu Lys 165 170 175

Thr Pro Gly Pro Gly Tyr Thr Cys Gly Arg Ala Ile Val Gly Arg Pro 180 185 190

Thr Lys Phe Phe Ser Ala Asp Gly Arg Arg Val Thr Gln Ala Leu Met 195 200 205

Thr Trp Asn Val Thr Cys Thr Tyr Ser Gln Phe Leu Ala Gln Lys Thr 210 215 220

Pro Ser Cys Cys Val Ser Leu Ser Ser Phe Tyr Asn Asp Thr Ile Val 225 230 235 240

Asn Cys Pro Thr Cys Ser Cys Gly Cys Gln Asn Pro Ser Gly Ser Asn 245 250 255

Cys Val Asn Glu Asp Ser Pro Asn Leu Gln Ala Ala Ile Asp Gly Pro 260 265 270 Gly Lys Trp Thr Gly Gln Pro Leu Val Gln Cys Thr Ser His Met Cys 275 280 285

Pro Ile Arg Ile His Trp His Val Lys Leu Asn Tyr Lys Glu Tyr Trp 290 295 300

Arg Val Lys Ile Thr Ile Thr Asn Phe Asn Phe Arg Met Asn Tyr Thr 305 310 315 320

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Leu Phe Ser Phe Asn Tyr Lys Pro Leu Thr Pro Tyr Gly Gly Gly Ile 340 345 350

Asn Asp Thr Ala Met Phe Trp Gly Val Lys Phe Tyr Asn Asp Leu Leu 355 360 365

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Arg Val Tyr Phe Asn Gly Asp Asn Cys Val Met Pro Ser Pro Glu Asn 405 410 415

Tyr Pro Trp Leu Pro Asn Ala Ser Pro Leu Thr Lys Gln Ala Leu Thr 420 425 430

Leu Pro Leu Leu Ile Phe Trp Val Ala Leu Ala Val Leu Leu Ala Tyr 435 440 445

Ala

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<212> DNA

<213> Zea mays

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tcgagcgagg gagccacatt cttgcttcca ttgttcgctc aaacgcttgg tagctcgatc 180

ggcgccgttg ttcttgggcc ggccggtcga gccgaatggt catggcagcg ccagtgccgc 240

tccggcggcg gcgggcgctc ctggtggtag cgacgttact cgccgtggtc accgcggcga BOO

tggcgcagga ctataaagat ggtggcggcg acgactacga ggaggacgag aagaagaagc Β60

cgcagttcaa ggcgcaggag gcgtgcaacg gcgtgttcct gacgtacacg ttcatggagc 420

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tccagcacaa ggagatcctc gtgtccgtcg gcggcgccgt gctgctcgac ggctccgacc 600

tccccgccaa cgtgtccggt ggcgccacct ttgcgggata cccaatggcc gacctcctca 660

actccatcga gacggcgggc gagccgtccc tgatcgagag caagattgag atcaccggca 720

cccaattcgg cgtgaaggcc cccgggaagc ccatgcccaa gaccatcaag ttgaccaacc 780

ccgtgggctt ccggtgcccc gcccccaacc acaaagacag cgtgatgtac gtgtgctgcg 840

tcaaggaccg caagttcaag gcgaagaagg ctaacagcac gcggtaccag acacggcgga 900

aagcggacct gacgttcgcc tacgacgtgc tgcaggccaa caccaacaac taccaggtgc 960

aggtgaccat cgacaactgg agccccatca gccggctgga caactggaac ctcacctggg 1020

agtggaagcg cggcgagttc atctacagca tgaagggcgc ctacacgctg ctcaaggaag 1080

gccccgcctg catctacagc cccgcagcgg gctactacaa ggacatggac ttcacccccg 1140

tctacaactg cgagaagcgg cccgtcatcg tggacctccc gccggagcgg gagaaggacg 1200

acgccgtcgg gaacctcccc ttctgctgca agaacggcac gctgctgccg cccaccatgg 1260

acccgtccaa gtcgcgggcc atgttccaga tgcaggtgta caagctgccg ccggacctga 1Β20

accgcacggc gctgtacccg ccgcagaact ggaagatctc cggcaagctc aacccgcagt 1380

acgcgtgcgg gccgcccgtc cgcgtgagcc cccaggagtt cccggacccg acgggtctca 1440

tgtcgaccac ccccgccgtg gcgtcgtggc aggtggcgtg caacatcacg cggcccaaga 1500

agcgcgcctc caagtgctgc gtctccttct ccgcctacta caacgactcc gtggtgccgt 1560

gcaacacctg cgcctgcggc tgcggcgacg acaccgcgac gtgcgacccg gacaagcgcg 1620

ccatgctgct gccaccggag gcgctgctcg tcccgttcga caaccggtcg gccaaggcac 1680

gggcgtgggc caagatcaag cactggcggg tgcccaaccc catgccgtgc agcgacaact 1740 gcggcgtcag catcaactgg cacgtcatca acaactacaa gtccggctgg tcggcgcgca 1800

tgaccatctt caactggcag gactacacct tcaaggattg gtttgccgca gtgaccatgg 1860

gcagccactt cagcggctac gagaacgtct actccttcaa cggcacgcgg atgggcgccc 1920

ccttcaacaa caccatcttc atgcaggggg tgccgggcct cgcttacctc gagcccatca 1980

ccgacgcgaa gacgacatcg gaacccaggc ttcccggcaa gcagcagtcg gtcatctcgt 2040

tcaccaggaa agacgcgccc aatgtcaaca ttcccagagg ggaaggcttc cccaagagga 2100

tctacttcga cggcgaggag tgcgcgctcc cggataggat acccaaggtg tcgagcgcgc 2160

gccggcgggc tgggaccgcg agcctgggtc agatagccat ggcggcggcg ctcgtgatga 2220

ttgtggcgct agtggattcc ttgtgcctat gatgactgaa aacttctttg gttcatagag 2280

gatttgactg acctagcgcg ctgcatttgt tgaacacttc attcattaac taggtacgtg 2340

cccgtgcgtt gctacggaag taaaaaaata gcgtacaaaa tatatacgaa gcgaaaaaca 2400

tcactatgat agtaaaaatc gt 2422

<210> 10 <211> 678 <212> PRT <213> Zea mays

<400> 10

Met Val Met Ala Ala Pro Val Pro Leu Arg Arg Arg Arg Ala Leu Leu

15 10 15

Val Val Ala Thr Leu Leu Ala Val Val Thr Ala Ala Met Ala Gln Asp

20

25

30

Tyr Lys Asp Gly Gly Gly Asp Asp Tyr Glu Glu Asp Glu Lys Lys Lys

35

40

45

Pro Gln Phe Lys Ala Gln Glu Ala Cys Asn Gly Val Phe Leu Thr Tyr

50

55

60

Thr Phe Met Glu Arg Ala Lys Glu Tyr Pro His Leu Lys Lys Ala Ala

65

70

75

80

Ala Gln Pro Tyr Ala Phe Lys Ala Thr Ala Thr Val Leu Asn Thr Met 85 90 95 Thr Clu Asp Leu Lys Ala Trp Gln Met Phe Val Gly Phe Gln His Lys 100 105 110

Glu Ile Leu Val Ser Val Gly Gly Ala Val Leu Leu Asp Gly Ser Asp 115 120 125

Leu Pro Ala Asn Val Ser Gly Gly Ala Thr Phe Ala Gly Tyr Pro Met 130 135 140

Ala Asp Leu Leu Asn Ser Ile Glu Thr Ala Gly Glu Pro Ser Leu Ile 145 150 155 160

Glu Ser Lys Ile Glu Ile Thr Gly Thr Gln Phe Gly Val Lys Ala Pro 165 170 175

Gly Lys Pro Met Pro Lys Thr Ile Lys Leu Thr Asn Pro Val Gly Phe 180 185 190

Arg Cys Pro Ala Pro Asn His Lys Asp Ser Val Met Tyr Val Cys Cys 195 200 205

Val Lys Asp Arg Lys Phe Lys Ala Lys Lys Ala Asn Ser Thr Arg Tyr 210 215 220

Gln Thr Arg Arg Lys Ala Asp Leu Thr Phe Ala Tyr Asp Val Leu Gln 225 230 235 240

Ala Asn Thr Asn Asn Tyr Gln Val Gln Val Thr Ile Asp Asn Trp Ser 245 250 255

Pro Ile Ser Arg Leu Asp Asn Trp Asn Leu Thr Trp Glu Trp Lys Arg 260 265 270

Gly Glu Phe Ile Tyr Ser Met Lys Gly Ala Tyr Thr Leu Leu Lys Glu 275 280 285

Gly Pro Ala Cys Ile Tyr Ser Pro Ala Ala Cly Tyr Tyr Lys Asp Met 290 295 300

Asp Phe Thr Pro Val Tyr Asn Cys Glu Lys Arg Pro Val Ile Val Asp 305 310 315 320 Leu Pro Pro Glu Arg Glu Lys Asp Asp Ala Val Gly Asn Leu Pro Phe 325 330 335

Cys Cys Lys Asn Gly Thr Leu Leu Pro Pro Thr Met Asp Pro Ser Lys 340 345 350

Ser Arg Ala Met Phe Gln Met Gln Val Tyr Lys Leu Pro Pro Asp Leu 355 360 365

Asn Arg Thr Ala Leu Tyr Pro Pro Gln Asn Trp Lys Ile Ser Gly Lys 370 375 380

Leu Asn Pro Gln Tyr Ala Cys Gly Pro Pro Val Arg Val Ser Pro Gln 385 390 395 400

Glu Phe Pro Asp Pro Thr Gly Leu Met Ser Thr Thr Pro Ala Val Ala 405 410 415

Ser Trp Gln Val Ala Cys Asn Ile Thr Arg Pro Lys Lys Arg Ala Ser 420 425 430

Lys Cys Cys Val Ser Phe Ser Ala Tyr Tyr Asn Asp Ser Val Val Pro 435 440 445

Cys Asn Thr Cys Ala Cys Gly Cys Gly Asp Asp Thr Ala Thr Cys Asp 450 455 460

Pro Asp Lys Arg Ala Met Leu Leu Pro Pro Glu Ala Leu Leu Val Pro 465 470 475 480

Phe Asp Asn Arg Ser Ala Lys Ala Arg Ala Trp Ala Lys Ile Lys His 485 490 495

Trp Arg Val Pro Asn Pro Met Pro Cys Ser Asp Asn Cys Gly Val Ser 500 505 510

Ile Asn Trp His Val Ile Asn Asn Tyr Lys Ser Gly Trp Ser Ala Arg 515 520 525

Met Thr Ile Phe Asn Trp Gln Asp Tyr Thr Phe Lys Asp Trp Phe Ala 530 535 540 Ala Val Thr Met Cly Ser His Phe Ser Cly Tyr Clu Asn Val Tyr Ser 545 550 555 560

Phe Asn Gly Thr Arg Met Gly Ala Pro Phe Asn Asn Thr Ile Phe Met 565 570 575

Gln Gly Val Pro Gly Leu Ala Tyr Leu Glu Pro Ile Thr Asp Ala Lys 580 585 590

Thr Thr Ser Glu Pro Arg Leu Pro Cly Lys Cln Cln Ser Val Ile Ser 595 600 605

Phe Thr Arg Lys Asp Ala Pro Asn Val Asn Ile Pro Arg Gly Glu Gly 610 615 620

Phe Pro Lys Arg Ile Tyr Phe Asp Gly Glu Glu Cys Ala Leu Pro Asp 625 630 635 640

Arg Ile Pro Lys Val Ser Ser Ala Arg Arg Arg Ala Gly Thr Ala Ser 645 650 655

Leu Gly Gln Ile Ala Met Ala Ala Ala Leu Val Met Ile Val Ala Leu 660 665 670

Val Asp Ser Leu Cys Leu 675

<210> 11 <211> 1845 <212> DNA <213> Zea mays <400> 11 agaagagaga ggggaaagtt gcttctctct ctgacccgcc cactccctcc ttccctgctc 60 cggtcgcact ccgtagttcc tccgcgcact tacgtacagc agacagacac gagatcgagt 120 ggtacagggc ccgccagaaa cctcacgagc tagctgggtt cctgccgcgc cgccgatcca 180 cgcatggcgc cgccgccgct cctgcccgcg cgcttcgtcg ccgcctccgt cgcgctgctc 240 gccgtcgcct tctcctcctc tctaacgcgt ccgtcaggtg catacgatcc gctcgatccg 300 aacgggaaca taacaatcaa gtgggacgtg atacagtgga ctgcggatgg ctatgtggcc 360 gtcgtttcgc tatacaacta ccagcagtac cgccacatcc aggcgccgcc ggggtggagg 420 ctaggctggg tgtgggcgaa gaaggaggtg atctgggcga tgaccggcgg ccaggccacc 480

gagcagggcg actgctccag gttcaaggcc agcgtcctcc cccactgctg caggagggac 540

ccggaggtgg tggacctgct gcccgggact ccctacaaca cgcagaccgc caactgctgc 600

aggggaggag tgctcgcctc gtgggcgcag gaccctagcg acgccgtcgc ctcgttccag 660

gtcagcgttg ggcaggctgg gtccaccaac aggaccgtca aggtgcccag gaacttcacc 720

ctgctggcgc ctggtcccgg gtacacctgc ggagccgcca agcttgtcaa gcctaccaag 780

ttcatgtctc aggatggcag gagatcaact caagcgcaca tgacctggaa cgtgacgtgc 840

acgtactccc agttccttgc ccagagatct ccaacctgct gtgtctcgct ctcgtcgttc 900

tacaacgaca ccattgttag ctgcccagca tgctcctgcg gctgccagaa caacaacagc 960

agtagcaccg ccgcgccagg aagctgcgta gagggtagta gaaggtcgcc ctatctggct 1020

tccgtcgtca acgatcctag caagaacagc ttggcgccgc tagtccagtg cacctcacac 1080

atgtgcccgg taagggtgca ctggcacgtc aaggtcagct acaaggagta ctggagggtg 1140

aagatcacgg tcaccaactt caactaccgg atgaactact cgcagtggaa cctggtcgcg 1200

cagcacccca acttcgacaa cctcaccacc attttcagct tcaactacag acctctcaac 1260

ccctacggag tgatcaacga cacggcgatg ctatggggca tcaagtacta caacgatctg 1320

ctcatgacgg ccgggccaga cgggaacgtg cagtccgagc ttctgttccg gaaggagccg 1380

tccacgttca ccttccacaa aggatgggcc ttccccaggc gagtctactt caacggagac 1440

aactgcgtga tgccgccgcc ggacgcctac ccgtggctgc ccaacgccgc ctcgccgcgg 1500

ctgtcgcctt cgcttctcct cccgctcgtt gcggctgctt ggacagcatt cgcagtcctt 1560

tcgtgatggg cccatatgcg tagggaaggc aaggcaaggc acacaatgtc ccatgacaag 1620

ttctgacctg attcagcgtt gttgcttgct gctgatcatt agtcgatctg ttgcgaagtt 1680

ttatttggtg tcttgaatct tgattcagga acaggttcag atgtgcattc acgtactacc 1740

aagcatgtac attcccaata cttgtaaatt tctgcaaaga ctgactggca agtgacagta 1800

gaaataatct gtttctctct ccgcatcagg aaagtttcgg ctcaa 1845

<210> 12 <211> 460 <212> PRT <213> Zea mays <400> 12

Met Ala Pro Pro Pro Leu Leu Pro Ala Arg Phe Val Ala Ala Ser Val 15 10 15

Ala Leu Leu Ala Val Ala Phe Ser Ser Ser Leu Thr Arg Pro Ser Gly 20 25 30

Ala Tyr Asp Pro Leu Asp Pro Asn Gly Asn Ile Thr Ile Lys Trp Asp 35 40 45

Val Ile Gln Trp Thr Ala Asp Gly Tyr Val Ala Val Val Ser Leu Tyr 50 55 60

Asn Tyr Gln Gln Tyr Arg His Ile Gln Ala Pro Pro Gly Trp Arg Leu 65 70 75 80

Gly Trp Val Trp Ala Lys Lys Glu Val Ile Trp Ala Met Thr Gly Gly 85 90 95

Gln Ala Thr Glu Gln Gly Asp Cys Ser Arg Phe Lys Ala Ser Val Leu 100 105 110

Pro His Cys Cys Arg Arg Asp Pro Glu Val Val Asp Leu Leu Pro Gly 115 120 125

Thr Pro Tyr Asn Thr Gln Thr Ala Asn Cys Cys Arg Gly Gly Val Leu 130 135 140

Ala Ser Trp Ala Gln Asp Pro Ser Asp Ala Val Ala Ser Phe Gln Val 145 150 155 160

Ser Val Gly Gln Ala Gly Ser Thr Asn Arg Thr Val Lys Val Pro Arg 165 170 175

Asn Phe Thr Leu Leu Ala Pro Gly Pro Gly Tyr Thr Cys Gly Ala Ala 180 185 190

Lys Leu Val Lys Pro Thr Lys Phe Met Ser Gln Asp Gly Arg Arg Ser 195 200 205 Thr Gln Ala His Met Thr Trp Asn Val Thr Cys Thr Tyr Ser Gln Phe 210 215 220

Leu Ala Gln Arg Ser Pro Thr Cys Cys Val Ser Leu Ser Ser Phe Tyr 225 230 235 240

Asn Asp Thr Ile Val Ser Cys Pro Ala Cys Ser Cys Gly Cys Gln Asn 245 250 255

Asn Asn Ser Ser Ser Thr Ala Ala Pro Gly Ser Cys Val Glu Gly Ser 260 265 270

Arg Arg Ser Pro Tyr Leu Ala Ser Val Val Asn Asp Pro Ser Lys Asn 275 280 285

Ser Leu Ala Pro Leu Val Gln Cys Thr Ser His Met Cys Pro Val Arg 290 295 300

Val His Trp His Val Lys Val Ser Tyr Lys Glu Tyr Trp Arg Val Lys 305 310 315 320

Ile Thr Val Thr Asn Phe Asn Tyr Arg Met Asn Tyr Ser Gln Trp Asn 325 330 335

Leu Val Ala Gln His Pro Asn Phe Asp Asn Leu Thr Thr Ile Phe Ser 340 345 350

Phe Asn Tyr Arg Pro Leu Asn Pro Tyr Gly Val Ile Asn Asp Thr Ala 355 360 365

Met Leu Trp Gly Ile Lys Tyr Tyr Asn Asp Leu Leu Met Thr Ala Gly 370 375 380

Pro Asp Gly Asn Val Gln Ser Glu Leu Leu Phe Arg Lys Glu Pro Ser 385 390 395 400

Thr Phe Thr Phe His Lys Gly Trp Ala Phe Pro Arg Arg Val Tyr Phe 405 410 415

Asn Gly Asp Asn Cys Val Met Pro Pro Pro Asp Ala Tyr Pro Trp Leu 420 425 430 Pro Asn Ala Ala Ser Pro Arg Leu Ser Pro Ser Leu Leu Leu Pro Leu 435 440 445

Val Ala Ala Ala Trp Thr Ala Phe Ala Val Leu Ser

450 455 460

<210> 13 <211> 1644 <212> DNA <213> Zea mays

<400> 13

tgcacgcccg atactgctag ccaaggccaa gccagtgcag gcgcggtggt gtgtgttgtt 60

ctcgtcgcgc actcgccggc agcgatggag ccccgccgct ccgtgctgct cctggccctc 120

gccgtcgccg ccgcgctctc cgtcgcagtg gcttacgacc cgttggaccc gaacgggaac 180

attaccatca agtgggacat catgtcgtgg acgcccgacg gctatgtcgc ggtggtgacc 240

atcaacaact tccagacgta ccggcagatc acggcgccgg ggtggacggt ggggtggacg 300

tgggcgaagc gggaggtgat ctggtccatg gtgggcgcgc aggccacgga gcagggcgac 360

tgctcccgct tcaaggccaa catcccgcac tgctgcaagc gcaccccggc cgtcgtcgac 420

ctgctccccg gcgtgcccta caaccagcag atcgccaact gctgccgcgg cggcgtcgtc 480

agcgcctacg gccaggaccc ggccaccgcc gtcgccgcgt tccaggtcag cgtcggccag 540

gccggcacca ccaaccgcac cgtcaaggtg cccaagaact tcacgctgct ggggccgggg 600

ccaggataca cctgcggccc cggcaaggtc gtcccctcca ccgtcttcct cacgcccgac 660

cgccgacgca agacacaagc cctcatgacg tggaacgtga cgtgcaccta ctcgcagcac 720

ctggcgtcca agtacccctc ctgctgcgtc tccttctcct ccttctacaa cgacaccatc 780

gtgccctgcg ccaagtgcgc ctgcggctgc gagcacaaga cctgcgtcca gggcgactcg 840

aagcggctgg cggtgacggg gaagcacgcg cacacggcgg cggcggtgcg cgggcagcac 900

cgggacaagg aggcgccgct gctgcagtgc acgacgcaca tgtgccccgt gcgcgtgcac 960

tggcacgtca agctcaacta caaggagtac tggcgcgcca agatcgccat caccaacttc 1020

aactaccaca tgaactacac gcagtggacg ctcgtcgcgc agcaccccaa cctcgacaac 1080

atcaccgagg tcttcagctt cggctacaag cccgtcgtct cctatggatc catcaatgac 1140

acggccatgt tctacgggct caagtacttc aacgaccacc tgatgcaggc ggggccgtac 1200

gggaacgtgc agtcggaggt gctcatgcgc aaggacgcca gcaccttcac cttcaggcag 1260 ggctgggcct tcccgcgcaa ggtctacttc aacggcgacg agtgccagat gccgccgccg 1320

gacgcctacc cctacttgcc caactccgcg ccgccgacag ccgcggcgtc gctgggcggc 1380

gcagcggcag cggccgtcgt ggtgctcttg ggcatgatcg tggcatgaga aaacacggga 1440

catcgatcga cctagtgcta ggaccggcac aggggaatgg aaaaaagacg ttgctttctt 1500

ctgtagatag agagaccaga gacctcggtt tgggtttcag gaatggtttg gaactttgga 1560

tgtttttctt tcagtgtaga tggacaagcc atgattttgc aaggaaaatt aacatgtgca 1620

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaa 1644

<210> 14

<211> 447

<212> PRT

<213> Zea mays

<400> 14

Met Clu Pro Arg Arg Ser Val Leu Leu Leu Ala Leu Ala Val Ala Ala 1 5 10 15

Ala Leu Ser Val Ala Val Ala Tyr Asp Pro Leu Asp Pro Asn Gly Asn 20 25 30

Ile Thr Ile Lys Trp Asp Ile Met Ser Trp Thr Pro Asp Gly Tyr Val 35 40 45

Ala Val Val Thr Ile Asn Asn Phe Gln Thr Tyr Arg Gln Ile Thr Ala 50 55 60

Pro Gly Trp Thr Val Gly Trp Thr Trp Ala Lys Arg Glu Val Ile Trp 65 70 75 80

Ser Met Val Gly Ala Gln Ala Thr Glu Gln Gly Asp Cys Ser Arg Phe 85 90 95

Lys Ala Asn Ile Pro His Cys Cys Lys Arg Thr Pro Ala Val Val Asp 100 105 110

Leu Leu Pro Gly Val Pro Tyr Asn Gln Gln Ile Ala Asn Cys Cys Arg 115 120 125

Gly Gly Val Val Ser Ala Tyr Gly Gln Asp Pro Ala Thr Ala Val Ala 130 135 140 Ala Phe Gln Val Ser Val Gly Gln Ala Gly Thr Thr Asn Arg Thr Val 145 150 155 160

Lys Val Pro Lys Asn Phe Thr Leu Leu Gly Pro Gly Pro Gly Tyr Thr 165 170 175

Cys Gly Pro Gly Lys Val Val Pro Ser Thr Val Phe Leu Thr Pro Asp 180 185 190

Arg Arg Arg Lys Thr Gln Ala Leu Met Thr Trp Asn Val Thr Cys Thr 195 200 205

Tyr Ser Gln His Leu Ala Ser Lys Tyr Pro Ser Cys Cys Val Ser Phe 210 215 220

Ser Ser Phe Tyr Asn Asp Thr Ile Val Pro Cys Ala Lys Cys Ala Cys 225 230 235 240

Gly Cys Glu His Lys Thr Cys Val Gln Gly Asp Ser Lys Arg Leu Ala 245 250 255

Val Thr Gly Lys His Ala His Thr Ala Ala Ala Val Arg Gly Gln His 260 265 270

Arg Asp Lys Glu Ala Pro Leu Leu Gln Cys Thr Thr His Met Cys Pro 275 280 285

Val Arg Val His Trp His Val Lys Leu Asn Tyr Lys Glu Tyr Trp Arg 290 295 300

Ala Lys Ile Ala Ile Thr Asn Phe Asn Tyr His Met Asn Tyr Thr Gln 305 310 315 320

Trp Thr Leu Val Ala Gln His Pro Asn Leu Asp Asn Ile Thr Glu Val 325 330 335

Phe Ser Phe Gly Tyr Lys Pro Val Val Ser Tyr Gly Ser Ile Asn Asp 340 345 350

Thr Ala Met Phe Tyr Gly Leu Lys Tyr Phe Asn Asp His Leu Met Gln 355 360 365 Ala Cly Pro Tyr Cly Asn Val Gln Ser Glu Val Leu Met Arg Lys Asp

Ala Ser Thr Phe Thr Phe Arg Gln Gly Trp Ala Phe Pro Arg Lys Val

Tyr Phe Asn Gly Asp Glu Cys Gln Met Pro Pro Pro Asp Ala Tyr Pro

Tyr Leu Pro Asn Ser Ala Pro Pro Thr Ala Ala Ala Ser Leu Gly Gly

Ala Ala Ala Ala Ala Val Val Val Leu Leu Gly Met Ile Val Ala

<210> 15 <211> 2108 <212> DNA

<213> Zea mays

<400> 15

tcttcgtctt cgtgtcatcg tgcgtgtgtg cgcttggacg gaaacggcct ctcatcctcc 60

gacgacccag actcgatcca ctcaccacca ccggcttatt cgtttatacg gaaacagatt 120

cagcttctgt gcctgcttca gccatggcca tgctgcccgt cgtcgtccgc atggccgcca 180

tgcccttcat cttccttgtg ctcctcgcgc acaccgcctc ggcacagccc gacgccggct 240

gcaacgggat cctcctcacc tacacgctgc agcgccggga caagatcagg cctcacgtgg 300

cggcgcccaa ctcccagccc tactccttca gcgccagcgc caccgtcgtc aacgccggca 360

cccgcccgct acgctcctgg gcgctgctgc tcaccttcgt gcacggcgag atcctcgtct 420

ccgtcgacgg ggccgtgctc acctcgggcg ccgccctgcc ctacaacacc acggcggggg 480

acgccgccgg caggcccacg cccacgtcct tcaccgggta cccgcagacg gacctcctca 540

ccccgatcgc cacggccggg gaccccgcca agacacaggc cacggtcagc ctcgtaggca 600

cgctcttcgc cgggccggag ccctacgtcc cgctcccctc gtttctctcg ctcgccgacc 660

cttcctacac ctgcccgccg gccaccaacg ccacgtcgtc gccgacgaac ctcaccacct 720

gctgcgtgtt cacggcgggt ggggacccca ccggcggcct ggtggagagt ggcttcctcc 780

cgcgccgcac cggcgacctg gtcatcacct acgacgtgct ccagtcgtac gacaccacct 840

acctagcgct cgtcacgctg gagaacgacg cgctgctcgg ccgcctcgac gcctggcagc 900 tgtcgtggag gtgggagcac ggggagttca tcagctccat gcgaggcgcc tacccgcggg 960

aggtggacac ggccgaatgc ctctacggtc cccagggcca gtactacaag gacctcgact 1020

tctccaaggc ggtgctcaac tgcgaccgca ggcccgtcgt ccacgacctg ccgccgtcgc 1080

gggccaacga cacggagatc ggccggatcg accactgctg ccggaacggc accatcctgc 1140

ccaagtccat ggacgtcgcg cgctccaagt cggcgttcca gatggtggtg tacaagatgc 1200

cgcccgacct caaccggacc aagctctacc cgcccacagg gttcaacgtc accggcgccg 1260

cgtccgcgct gaacccggag tacgcgtgcg acccacccat ctcggtgagc ccgtcggagt 1320

acccggaccc cagcgggctc acgtcgatca cggtggccgt ggcgacgtgg caggtggtgt 1380

gcaacatcac cacgtcgccc aagaagccgc ccaggtgctg cgtctccttc tcctccttct 1440

acaacgagtc ggtggtcccc tgccggacgt gcgcgtgcgg ctgcccctcg tccgcgccga 1500

cctgcagcac cacggcgccg gcgatgctgc tgccgccgca ggcgctgctc atgccgttcg 1560

accggcgggc cagcgaggcg ctcgagtggg cggaccagaa gcacctcggc gtgcccaaac 1620

ccatgccctg cggcgacttc tgcggcgtca gcgtcaactg gcacgtcgcc accgacrtca 1680

ccggaggatg gagcgcgcgc ctcacgctct tcaactggga cggcacggac atgccggact 1740

ggttcacggc catcgtcatg gacaaggcgt acgacggctt cgaacaggcc tactccttca 1800

acgccacggg cgtcgggaac agcaccatct tcgtcagggg cgcccagggc ctcaacttcc 1860

tgctcgggga gaggaacatg agcggcgtag attacccggt gcccgggaag cagcagtccg 1920

tcttctcctt caccaagaag aagacccccg gcatcgacat catcgccggg gacggcttcc 1980

cgtccaaggt cttcttcaac ggcgacgagt gcgccatgcc attgaggatt ccgagccagg 2040

ggaccagtgt cgtcgtccct atgcagctgt gtttgcttgt ttccgctttc atgttattgc 2100

tgctgtaa 2108

<210> 16 <211> 654 <212> PRT <213> Zea mays

<400> 16

Met Ala Met Leu Pro Val Val Val Arg Met Ala Ala Met Pro Phe Ile 1 5 10 15

Phe Leu Val Leu Leu Ala His Thr Ala Ser Ala Gln Pro Asp Ala Gly 20 25 30 Cys Asn Cly Ile Leu Leu Thr Tyr Thr Leu Gln Arg Arg Asp Lys Ile 35 40 45

Arg Pro His Val Ala Ala Pro Asn Ser Gln Pro Tyr Ser Phe Ser Ala 50 55 60

Ser Ala Thr Val Val Asn Ala Gly Thr Arg Pro Leu Arg Ser Trp Ala 65 70 75 80

Leu Leu Leu Thr Phe Val His Gly Glu Ile Leu Val Ser Val Asp Gly 85 90 95

Ala Val Leu Thr Ser Gly Ala Ala Leu Pro Tyr Asn Thr Thr Ala Gly 100 105 110

Asp Ala Ala Gly Arg Pro Thr Pro Thr Ser Phe Thr Gly Tyr Pro Gln 115 120 125

Thr Asp Leu Leu Thr Pro Ile Ala Thr Ala Gly Asp Pro Ala Lys Thr 130 135 140

Cln Ala Thr Val Ser Leu Val Gly Thr Leu Phe Ala Gly Pro Glu Pro 145 150 155 160

Tyr Val Pro Leu Pro Ser Phe Leu Ser Leu Ala Asp Pro Ser Tyr Thr 165 170 175

Cys Pro Pro Ala Thr Asn Ala Thr Ser Ser Pro Thr Asn Leu Thr Thr 180 185 190

Cys Cys Val Phe Thr Ala Gly Gly Asp Pro Thr Gly Gly Leu Val Glu 195 200 205

Ser Gly Phe Leu Pro Arg Arg Thr Gly Asp Leu Val Ile Thr Tyr Asp 210 215 220

Val Leu Gln Ser Tyr Asp Thr Thr Tyr Leu Ala Leu Val Thr Leu Glu 225 230 235 240

Asn Asp Ala Leu Leu Gly Arg Leu Asp Ala Trp Gln Leu Ser Trp Arg 245 250 255 Trp Glu His Gly Glu Phe Ile Ser Ser Met Arg Gly Ala Tyr Pro Arg 260 265 270

Glu Val Asp Thr Ala Glu Cys Leu Tyr Gly Pro Gln Gly Gln Tyr Tyr 275 280 285

Lys Asp Leu Asp Phe Ser Lys Ala Val Leu Asn Cys Asp Arg Arg Pro 290 295 BOO

Val Val His Asp Leu Pro Pro Ser Arg Ala Asn Asp Thr Glu Ile Gly 305 310 315 320

Arg Ile Asp His Cys Cys Arg Asn Gly Thr Ile Leu Pro Lys Ser Met 325 330 335

Asp Val Ala Arg Ser Lys Ser Ala Phe Gln Met Val Val Tyr Lys Met 340 345 350

Pro Pro Asp Leu Asn Arg Thr Lys Leu Tyr Pro Pro Thr Gly Phe Asn 355 360 365

Val Thr Gly Ala Ala Ser Ala Leu Asn Pro Glu Tyr Ala Cys Asp Pro 370 375 380

Pro Ile Ser Val Ser Pro Ser Glu Tyr Pro Asp Pro Ser Gly Leu Thr 385 390 395 400

Ser Ile Thr Val Ala Val Ala Thr Trp Gln Val Val Cys Asn Ile Thr 405 410 415

Thr Ser Pro Lys Lys Pro Pro Arg Cys Cys Val Ser Phe Ser Ser Phe 420 425 430

Tyr Asn Glu Ser Val Val Pro Cys Arg Thr Cys Ala Cys Gly Cys Pro 435 440 445

Ser Ser Ala Pro Thr Cys Ser Thr Thr Ala Pro Ala Met Leu Leu Pro 450 455 460

Pro Gln Ala Leu Leu Met Pro Phe Asp Arg Arg Ala Ser Glu Ala Leu 465 470 475 480 Clu Trp Ala Asp Gln Lys His Leu Cly Val Pro Lys Pro Met Pro Cys 485 490 495

Gly Asp Phe Cys Gly Val Ser Val Asn Trp His Val Ala Thr Asp Phe 500 505 510

Thr Cly Gly Trp Ser Ala Arg Leu Thr Leu Phe Asn Trp Asp Gly Thr 515 520 525

Asp Met Pro Asp Trp Phe Thr Ala Ile Val Met Asp Lys Ala Tyr Asp 530 535 540

Cly Phe Glu Cln Ala Tyr Ser Phe Asn Ala Thr Gly Val Gly Asn Ser 545 550 555 560

Thr Ile Phe Val Arg Cly Ala Gln Gly Leu Asn Phe Leu Leu Gly Glu 565 570 575

Arg Asn Met Ser Gly Val Asp Tyr Pro Val Pro Gly Lys Gln Gln Ser 580 585 590

Val Phe Ser Phe Thr Lys Lys Lys Thr Pro Gly Ile Asp Ile Ile Ala 595 600 605

Gly Asp Gly Phe Pro Ser Lys Val Phe Phe Asn Gly Asp Glu Cys Ala 610 615 620

Met Pro Leu Arg Ile Pro Ser Gln Gly Thr Ser Val Val Val Pro Met 625 630 635 640

Gln Leu Cys Leu Leu Val Ser Ala Phe Met Leu Leu Leu Leu 645 650

<210> 17

<211> 1335

<212> DNA

<213> Zea mays

<400> 17

atggggcgct tcgtcttcgt cctgctaatc ctgatgtgct gttcctcctc ccgattcaca 60

ggtgcctacg accccataga tccgaacggg aacatcacga tcgtctggga ttttcagagt 120

ctcgacgtcg cgggcatgac cccgtacacg gtcatggtga gcatccacaa ctaccagatg 180 taccgacaca tcgagcgtcc ggggtggcgg ctgagctgga gctgggccgg caaggaggtc 240

atctggagca cgacgggcgc ggagacgacg gagcagggcg actgctcccg cgtcggcagc 300

gggggcagcc gcccgcattg ctgccagaag cggcccgtca tggtggacct gccgcctggc 360

acgccgtaca acatgcaggt cgccaactgc tgccggggcg gcgtgctgtc gtctctcgtc 420

cagagcgacc tgacgtccgc cgccgcgttc cagatggtgg tcggcgagtt cgccctcgcc 480

agggacagcg gcggcaagga gcccgagaag ccgtggcagt tcgacatggg cgtgccgggg 540

tacacctgca gcaacgcgac cacggtggcc ccgaccagga tcaaggtcga caagaaccgc 600

tacgtccagg cgctccagga tcgagctgaa ctccgtgcag tgacatggca ggtgacctgc 660

tcgtactcgc agtaccgggc gtcggcggcg ccgtcgtgct gcgtctccat gacgaccttc 720

tacagcgaga cgatcgtaga ttgcccgcgg tgcagctgcg gctgccaagg gtccccaccg 780

tcgccacaat gcgtcagcgt cgatcaacaa caaccatggt tgccggccgt cggcgacgac 840

gagccgtcgt cggcgccgat cgtctggtgc tccgagcaca tgtgcccgat ccgggtgcac 900

tggcacgtga agacgaacta ccgcaagtac tggcgggtga aggtgacggt gtccaactac 960

aacctggcga ggaactacag cgactggaac ctggtgctgc agcaccccaa cctgcggagc 1020

ctgacgcagc tgttcagctt caactacagg cctctcgtcg agtacggcgc ctacaacgac 1080

acggggatgt tctgggggtt acgttactac aacgagatgc tgctgcagga cgggaacgtg 1140

cagtcggaga tgatcctgga gaaggagagc gacttcacct attccggtgg ctgggcgttc 1200

ccgcggaggg tctacttcaa cggccaagag tgcgtcatgc cgccggcgga ccagtacccc 1260

gtactgccca acggagcctc ggctttgcgg gggcattttt gcttcctgct gctactcttc 1320

ttcgttgtgg tgtag 1335

<210> 18 <211> 444 <212> PRT <213> Zea mays

<400> 18

Met Cly Arg Phe Val Phe Val Leu Leu Ile Leu Met Cys Cys Ser Ser 1 5 10 15

Ser Arg Phe Thr Gly Ala Tyr Asp Pro Ile Asp Pro Asn Gly Asn Ile 20 25 30 Thr Ile Val Trp Asp Phe Cln Ser Leu Asp Val Ala Gly Met Thr Pro 35 40 45

Tyr Thr Val Met Val Ser Ile His Asn Tyr Cln Met Tyr Arg His Ile 50 55 60

Clu Arg Pro Gly Trp Arg Leu Ser Trp Ser Trp Ala Gly Lys Glu Val 65 70 75 80

Ile Trp Ser Thr Thr Gly Ala Glu Thr Thr Glu Gln Gly Asp Cys Ser 85 90 95

Arg Val Gly Ser Gly Gly Ser Arg Pro His Cys Cys Gln Lys Arg Pro 100 105 110

Val Met Val Asp Leu Pro Pro Gly Thr Pro Tyr Asn Met Gln Val Ala 115 120 125

Asn Cys Cys Arg Cly Gly Val Leu Ser Ser Leu Val Gln Ser Asp Leu 130 135 140

Thr Ser Ala Ala Ala Phe Gln Met Val Val Gly Glu Phe Ala Leu Ala 145 150 155 160

Arg Asp Ser Gly Gly Lys Glu Pro Glu Lys Pro Trp Gln Phe Asp Met 165 170 175

Gly Val Pro Gly Tyr Thr Cys Ser Asn Ala Thr Thr Val Ala Pro Thr 180 185 190

Arg Ile Lys Val Asp Lys Asn Arg Tyr Val Cln Ala Leu Gln Asp Arg 195 200 205

Ala Glu Leu Arg Ala Val Thr Trp Gln Val Thr Cys Ser Tyr Ser Gln 210 215 220

Tyr Arg Ala Ser Ala Ala Pro Ser Cys Cys Val Ser Met Thr Thr Phe 225 230 235 240

Tyr Ser Glu Thr Ile Val Asp Cys Pro Arg Cys Ser Cys Gly Cys Gln 245 250 255 Gly Ser Pro Pro Ser Pro Gln Cys Val Ser Val Asp Gln Gln Gln Pro 260 265 270

Trp Leu Pro Ala Val Gly Asp Asp Glu Pro Ser Ser Ala Pro Ile Val 275 280 285

Trp Cys Ser Glu His Met Cys Pro Ile Arg Val His Trp His Val Lys 290 295 300

Thr Asn Tyr Arg Lys Tyr Trp Arg Val Lys Val Thr Val Ser Asn Tyr 305 310 315 320

Asn Leu Ala Arg Asn Tyr Ser Asp Trp Asn Leu Val Leu Gln His Pro 325 330 335

Asn Leu Arg Ser Leu Thr Gln Leu Phe Ser Phe Asn Tyr Arg Pro Leu 340 345 350

Val Glu Tyr Gly Ala Tyr Asn Asp Thr Gly Met Phe Trp Gly Leu Arg 355 360 365

Tyr Tyr Asn Glu Met Leu Leu Gln Asp Gly Asn Val Gln Ser Glu Met 370 375 380

Ile Leu Glu Lys Glu Ser Asp Phe Thr Tyr Ser Gly Gly Trp Ala Phe 385 390 395 400

Pro Arg Arg Val Tyr Phe Asn Gly Gln Glu Cys Val Met Pro Pro Ala 405 410 415

Asp Gln Tyr Pro Val Leu Pro Asn Gly Ala Ser Ala Leu Arg Gly His 420 425 430

Phe Cys Phe Leu Leu Leu Leu Phe Phe Val Val Val 435 440

<210> 19

<211> 3780

<212> DNA

<213> Zea mays

<400> 19

gtcgacccac gcgtccgcag cagcagaagc actgcgcggc attgcagcga tcgagcggga ggaatttggg gcatggtggt cgccaacgcc gctcggatct agaggcccgc acgggccgat 120

tggtctccgc ccgcctcgtc ggtgttggtg tcgttggcgt gtggagccgt ctcggtggga 180

gcagcgggga gggagcggag atggcggcca acaaggggat ggtggcgggc tcgcacaacc 240

gcaacgagtt cgtcatgatc cgccacgacg gcgatgtgcc gggctcggct aagcccacaa BOO

agagtgcgaa tggacaggtc tgccagattt gcggtgactc tgtgggtgtt tcagccactg 360

gtgatgtctt tgttgcctgc aatgagtgtg ccttccctgt ctgccgccca tgctatgagt 420

atgagcgcaa ggaggggaac caatgctgcc cccagtgcaa gactagatac aagagacaga 480

aaggtagccc tcgagttcat ggtgatgagg atgaggaaga tgttgatgac ctagacaatg 540

aattcaacta caagcaaggc agtgggaaag gcccagagtg gcaactgcaa ggagatgatg 600

ctgatctgtc ttcatctgct cgccatgagc cacatcatcg gattccacgc ctgacaagcg 660

gtcaacagat atctggagag attcctgatg cttcccctga ccgtcattct atccgcagtc 720

caacatcgag ctatgttgat ccaagcgtcc cagttcctgt gaggattgtg gacccctcga 780

aggacttgaa ttcctatggg cttaatagtg ttgactggaa ggaaagagtt gagagctgga 840

gggttaaaca ggacaaaaat atgatgcaag tgactaataa atatccagag gctagaggag 900

gagacatgga ggggactggc tcaaatggag aagatatgca aatggttgat gatgcacggc 960

tacctttgag ccgtatcgtg ccaatttcct caaaccagct caacctttac cgggtagtga 1020

tcattctccg tcttatcatc ctgtgcttct tcttccagta tcgtgtcagt catccagtgc 1080

gtgatgctta tggattatgg ctagtatctg ttatctgcga ggtctggttt gccttgtctt 1140

ggcttctaga tcagttccca aaatggtatc caatcaaccg tgagacatat cttgacaggc 1200

ttgcattgag gtatgataga gagggagagc catcacagct ggctcccatt gatgtcttcg 1260

tcagtacagt ggatccattg aaggaacctc cactgatcac agccaacact gttttgtcca 1320

ttctttctgt ggattaccct gttgacaaag tgtcatgcta tgtttctgat gatggttcag 1380

ctatgctgac ttttgagtct ctctcagaaa ccgcagaatt tgctagaaag tgggttccct 1440

tttgtaagaa gcacaatatt gaaccaagag ctccagaatt ttactttgct caaaaaatag 1500

attacctgaa ggacaaaatt caaccttcat ttgttaagga aagacgcgca atgaagaggg 1560

agtatgaaga attcaaagta agaatcaatg cccttgttgc caaagcacag aaagtgcctg 1620

aagaggggtg gaccatggct gatggaactg catggcctgg gaataatcct agggaccatc 1680

ctggcatgat tcaggttttc ttggggcaca gtggtgggct cgacactgat ggaaatgagt 1740 taccacgtct tgtctatgtc tctcgtgaaa agagaccagg ctttcagcat cacaagaagg 1800

ctggtgcaat gaatgcgctg attcgtgtat ctgctgtgct gacaaatggt gcctatcttc 1860

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tcatgatgga tccggctcta ggaaggaaaa cttgttatgt acaatttcca cagagatttg 1980

atggcattga cttgcacgat cgatatgcta atcggaacat agttttcttt gatatcaaca 2040

tgaaaggtct ggatggcatt cagggtccag tttacgtggg aacaggatgc tgtttcaata 2100

gacaggcttt gtatggatac gatcctgttt tgactgaagc tgatctggag ccaaacattg 2160

ttattaagag ctgctgtggt agaaggaaga aaaagaacaa gagttatatg gatagtcaaa 2220

gccgtattat gaagagaaca gaatcttcag ctcccatctt caatatggaa gacatcgaag 2280

agggtattga aggttacgag gatgaaaggt cagtgcttat gtcccagagg aaattggaga 2340

aacgctttgg tcagtctcct attttcattg catccacctt tatgacacaa ggtggcatac 2400

caccttcaac aaacccagct tctctactaa aggaagctat ccatgtcatc agttgtggat 2460

atgaggacaa aactgaatgg ggaaaagaga ttggctggat ctatggttca gtaacggagg 2520

atattctgac tgggtttaaa atgcatgcaa ggggctggca atcaatctac tgcatgccac 2580

cacgaccttg tttcaagggt tctgcaccaa tcaatctttc cgatcgtctt aatcaggtgc 2640

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caatcacatc cattccgctt attgcctatt gtgtgcttcc cgctatctgc ctccttacca 2820

ataaatttat cattcctgag attagcaatt atgctgggat gttcttcatt cttcttttcg 2880

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ggtggagaaa tgagcagttt tgggttattg gtggcacctc tgcccatctc ttcgcagtgt 3000

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catctgatga ggatggcgac tttgctgagc tatatgtgtt caagtggacc agtttgctca 3120

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ccattaacag tggctaccaa tcctggggtc cgctctttgg aaagctgttc ttctcgatct 3240

gggtgatcct ccatctctac cccttcctca agggtctcat gggaaggcag aaccgcacac 3300

caacaatcgt cattgtctgg tccatccttc ttgcatctat cttctccttg ctgtgggtga 3360

agatcgatcc tttcatctcc ccgacacaga aagctgctgc cttggggcaa tgtggcgtca 3420 actgctgatc gagacagtga ctcttatttg aagaggctca atcaagatct gccccctcgt 3480

gtaaatacct gaggaggcta gatgggaatt ccttttgttg taggtgagga tggatttgca 3540

tctaagttat gcctctgttc attagcttct tccgtgccgg tgctgctgcg gactaagaat 3600

cacggagcct ttctaccttc catgtagcgc cagccagcag cgtaagatgt gaattttgaa 3660

gttttgttat gcgtgcagtt tattgtttta gagtaaatta tcatttgttt gtgggaactg 3720

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<210> 20

<211> 1075

<212> PRT

<213> Zea mays

<400> 20

Met Ala Ala Asn Lys Gly Met Val Ala Gly Ser His Asn Arg Asn Glu 15 10 15

Phe Val Met Ile Arg His Asp Gly Asp Val Pro Gly Ser Ala Lys Pro 20 25 30

Thr Lys Ser Ala Asn Gly Gln Val Cys Gln Ile Cys Gly Asp Ser Val 35 40 45

Gly Val Ser Ala Thr Gly Asp Val Phe Val Ala Cys Asn Glu Cys Ala 50 55 60

Phe Pro Val Cys Arg Pro Cys Tyr Glu Tyr Glu Arg Lys Glu Gly Asn 65 70 75 80

Gln Cys Cys Pro Gln Cys Lys Thr Arg Tyr Lys Arg Gln Lys Gly Ser 85 90 95

Pro Arg Val His Gly Asp Glu Asp Glu Glu Asp Val Asp Asp Leu Asp 100 105 110

Asn Glu Phe Asn Tyr Lys Gln Gly Ser Gly Lys Gly Pro Glu Trp Gln 115 120 125

Leu Gln Gly Asp Asp Ala Asp Leu Ser Ser Ser Ala Arg His Glu Pro 130 135 140 His His Arg Ile Pro Arg Leu Thr Ser Gly Gln Gln Ile Ser Gly Glu 145 150 155 160

Ile Pro Asp Ala Ser Pro Asp Arg His Ser Ile Arg Ser Pro Thr Ser 165 170 175

Ser Tyr Val Asp Pro Ser Val Pro Val Pro Val Arg Ile Val Asp Pro 180 185 190

Ser Lys Asp Leu Asn Ser Tyr Gly Leu Asn Ser Val Asp Trp Lys Glu 195 200 205

Arg Val Glu Ser Trp Arg Val Lys Gln Asp Lys Asn Met Met Gln Val 210 215 220

Thr Asn Lys Tyr Pro Glu Ala Arg Gly Gly Asp Met Glu Gly Thr Gly 225 230 235 240

Ser Asn Gly Glu Asp Met Gln Met Val Asp Asp Ala Arg Leu Pro Leu 245 250 255

Ser Arg Ile Val Pro Ile Ser Ser Asn Gln Leu Asn Leu Tyr Arg Val 260 265 270

Val Ile Ile Leu Arg Leu Ile Ile Leu Cys Phe Phe Phe Gln Tyr Arg 275 280 285

Val Ser His Pro Val Arg Asp Ala Tyr Gly Leu Trp Leu Val Ser Val 290 295 300

Ile Cys Glu Val Trp Phe Ala Leu Ser Trp Leu Leu Asp Gln Phe Pro 305 310 315 320

Lys Trp Tyr Pro Ile Asn Arg Glu Thr Tyr Leu Asp Arg Leu Ala Leu 325 330 335

Arg Tyr Asp Arg Glu Gly Glu Pro Ser Gln Leu Ala Pro Ile Asp Val 340 345 350

Phe Val Ser Thr Val Asp Pro Leu Lys Glu Pro Pro Leu Ile Thr Ala 355 360 365 Asn Thr Val Leu Ser Ile Leu Ser Val Asp Tyr Pro Val Asp Lys Val 370 375 380

Ser Cys Tyr Val Ser Asp Asp Gly Ser Ala Met Leu Thr Phe Glu Ser 385 390 395 400

Leu Ser Glu Thr Ala Glu Phe Ala Arg Lys Trp Val Pro Phe Cys Lys 405 410 415

Lys His Asn Ile Glu Pro Arg Ala Pro Glu Phe Tyr Phe Ala Gln Lys 420 425 430

Ile Asp Tyr Leu Lys Asp Lys Ile Gln Pro Ser Phe Val Lys Glu Arg 435 440 445

Arg Ala Met Lys Arg Glu Tyr Glu Glu Phe Lys Val Arg Ile Asn Ala 450 455 460

Leu Val Ala Lys Ala Gln Lys Val Pro Glu Glu Gly Trp Thr Met Ala 465 470 475 480

Asp Gly Thr Ala Trp Pro Gly Asn Asn Pro Arg Asp His Pro Gly Met 485 490 495

Ile Gln Val Phe Leu Gly His Ser Gly Gly Leu Asp Thr Asp Gly Asn 500 505 510

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Gln His His Lys Lys Ala Gly Ala Met Asn Ala Leu Ile Arg Val Ser 530 535 540

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Asp Pro Ala Leu Gly Arg Lys Thr Cys Tyr Val Gln Phe Pro Gln Arg 580 585 590 Phe Asp Gly Ile Asp Leu His Asp Arg Tyr Ala Asn Arg Asn Ile Val 595 600 605

Phe Phe Asp Ile Asn Met Lys Cly Leu Asp Gly Ile Gln Gly Pro Val 610 615 620

Tyr Val Gly Thr Gly Cys Cys Phe Asn Arg Gln Ala Leu Tyr Gly Tyr 625 630 635 640

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Phe Ala Thr Gly Ile Leu Glu Leu Arg Trp Ser Gly Val Gly Ile Glu 900 905 910

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Lys Ile Asp Pro Phe Ile Ser Pro

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<400> 21

gcagcagcag caccaccact gcgcggcatt gcagcgagca agcgggaggg atctggggca 60

tggtggcggt cgctgccgct gccgctcgga tctagagggc cgcacgggct gattgccctc 120

cgccggcctc gtcggtgtcg gtggagtgtg aatcggtgtg tgtaggagga gcgcggagat 180

ggcggccaac aaggggatgg tggcaggctc tcacaaccgc aacgagttcg tcatgatccg 240

ccacgacggc gacgcgcctg tcccggctaa gcccacgaag agtgcgaatg ggcaggtctg 300

ccagatttgt ggcgacactg ttggcgtttc agccactggt gatgtctttg ttgcctgcaa 360

tgagtgtgcc ttccctgtct gccgcccttg ctatgagtac gagcgcaagg aagggaacca 420

atgctgccct cagtgcaaga ctagatacaa gagacagaaa ggtagccctc gagttcatgg 480

tgatgatgag gaggaagatg ttgatgacct ggacaatgaa ttcaactata agcaaggcaa 540

tgggaagggc ccagagtggc agcttcaagg agatgacgct gatctgtctt catctgctcg 600

ccatgaccca caccatcgga ttccacgcct tacaagtgga caacagatat ctggagagat 660

ccctgatgca tcccctgacc gtcattctat ccgcagtcca acatcgagct atgttgatcc 720

aagcgttcca gttcctgtga ggattgtgga cccctcgaag gacttgaatt cctatgggct 780

taatagtgtt gactggaagg aaagagttga gagctggagg gttaaacagg acaaaaatat 840

gttgcaagtg actaataaat atccagaggc tagaggagac atggagggga ctggctcaaa 900

tggagaagat atgcaaatgg ttgatgatgc acgcctacct ttgagccgca ttgtgccaat 960

ttcctcaaac cagctcaacc tttaccggat agtaatcatt ctccgtctta tcatcctgtg 1020

cttcttcttc caatatcgta tcagtcatcc agtgcgtaat gcttatggat tgtggctagt 1080

atctgttatc tgtgaggtct ggtttgcctt gtcctggctt ctagatcagt tcccaaaatg 1140 gtatccaatc aaccgtgaga catatctcga caggcttgca ttgaggtatg atagagaggg 1200

agagccatca cagctggctc ccattgatgt ctttgtcagt acagtggatc cattgaagga 1260

acctccactg atcacagcca acactgtttt gtccattctt gctgtggatt accctgttga 1320

caaagtgtca tgctatgttt ctgatgatgg ctcagctatg ctgacttttg agtctctctc 1380

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ttcatttgtt aaggaaagac gagcaatgaa gagagagtat gaagaattca aaataagaat 1560

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aactgcttgg cctgggaata accctaggga ccatcctggc atgattcagg tgttcttggg 1680

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gaaaacttgt tatgtacaat ttccacaaag atttgatggc attgacttgc acgatcgata 1980

tgctaatagg aacatagtct tctttgatat caacatgaaa ggtctagatg gcattcaggg 2040

tccagtctat gtgggaacag gatgctgttt caataggcag gctttgtatg gatatgatcc 2100

tgttttgact gaagctgatc tggaacctaa cattgttgtt aagagctgct gtggtagaag 2160

gaagagaaag aacaagagtt atatggatag tcaaagccgt attatgaaga gaacagaatc 2220

ttcagctccc atctttaaca tggaagacat cgaggagggt attgaaggtt atgaggatga 2280

aaggtcagtg cttatgtccc agaggaaatt ggagaaacgc tttggtcagt ctccaatctt 2340

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actgaaggaa gctatccatg ttatcagctg tgggtacgag gacaaaactg aatggggaaa 2460

agagattggc tggatctatg gttcagttac agaggatatt ctgactgggt ttaaaatgca 2520

tgcaagaggc tggcaatcaa tctactgcat gccaccacga ccttgtttca agggttctgc 2580

accaatcaat ctttctgatc gtcttaatca ggtgctccgt tgggctcttg ggtcagtgga 2640

aattctgctt agcagacatt gtcctatatg gtatggctac aatgggcgat tgaagctttt 2700

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ctattgtgtg cttcctgcta tctgtcttct taccaataaa tttatcattc ctgagattag 2820 taattatgct ggaatgttct tcattcttct ttttgcctcc attttcgcaa ctggtatatt 2880

ggagctcaga tggagtggtg ttggcattga agattggtgg agaaatgagc agttttgggt 2940

tattggtggc acctctgccc atctcttcgc ggtgttccag ggtctgctga aagtgttggc 3000

tgggattgat accaacttca cagttacctc aaaggcatct gatgaggatg gcgactttgc 3060

tgagctatat gtgttcaagt ggaccagttt gctcatccct ccgaccactg ttcttgtcat 3120

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gggtccgctc tttggaaagc tgttcttctc gatctgggtg atcctccatc tctacccctt 3240

cctcaagggt ctcatgggca ggcagaaccg cacgccaaca atcgtcatcg tttggtccat 3300

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taaaa 3725

<210> 22

<211> 1074

<212> PRT

<213> Zea mays

<400> 22

Met Ala Ala Asn Lys Gly Met Val Ala Gly Ser His Asn Arg Asn Glu 1 5 10 15

Phe Val Met Ile Arg His Asp Gly Asp Ala Pro Val Pro Ala Lys Pro 20 25 30

Thr Lys Ser Ala Asn Gly Gln Val Cys Gln Ile Cys Gly Asp Thr Val 35 40 45

Gly Val Ser Ala Thr Gly Asp Val Phe Val Ala Cys Asn Glu Cys Ala 50 55 60 Phe Pro Val Cys Arg Pro Cys Tyr Glu Tyr Glu Arg Lys Glu Gly Asn 65 70 75 80

Gln Cys Cys Pro Gln Cys Lys Thr Arg Tyr Lys Arg Gln Lys Gly Ser 85 90 95

Pro Arg Val His Gly Asp Asp Glu Glu Glu Asp Val Asp Asp Leu Asp 100 105 110

Asn Glu Phe Asn Tyr Lys Gln Gly Asn Gly Lys Gly Pro Glu Trp Gln 115 120 125

Leu Gln Gly Asp Asp Ala Asp Leu Ser Ser Ser Ala Arg His Asp Pro 130 135 140

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Ile Pro Asp Ala Ser Pro Asp Arg His Ser Ile Arg Ser Pro Thr Ser 165 170 175

Ser Tyr Val Asp Pro Ser Val Pro Val Pro Val Arg Ile Val Asp Pro 180 185 190

Ser Lys Asp Leu Asn Ser Tyr Gly Leu Asn Ser Val Asp Trp Lys Glu 195 200 205

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Thr Asn Lys Tyr Pro Glu Ala Arg Gly Asp Met Glu Gly Thr Gly Ser 225 230 235 240

Asn Gly Glu Asp Met Gln Met Val Asp Asp Ala Arg Leu Pro Leu Ser 245 250 255

Arg Ile Val Pro Ile Ser Ser Asn Gln Leu Asn Leu Tyr Arg Ile Val 260 265 270

Ile Ile Leu Arg Leu Ile Ile Leu Cys Phe Phe Phe Gln Tyr Arg Ile 275 280 285 Ser His Pro Val Arg Asn Ala Tyr Cly Leu Trp Leu Val Ser Val Ile 290 295 300

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Val Ser Thr Val Asp Pro Leu Lys Glu Pro Pro Leu Ile Thr Ala Asn 355 360 365

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Asp Tyr Leu Lys Asp Lys Ile Gln Pro Ser Phe Val Lys Glu Arg Arg 435 440 445

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Gln Val Phe Leu Gly His Ser Gly Gly Leu Asp Thr Asp Gly Asn Glu 500 505 510 Leu Pro Arg Leu Val Tyr Val Ser Arg Glu Lys Arg Pro Gly Phe Cln 515 520 525

His His Lys Lys Ala Gly Ala Met Asn Ala Leu Ile Arg Val Ser Ala 530 535 540

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Pro Ala Leu Gly Arg Lys Thr Cys Tyr Val Gln Phe Pro Gln Arg Phe 580 585 590

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Pro Val Leu Thr Glu Ala Asp Leu Glu Pro Asn Ile Val Val Lys Ser 645 650 655

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Thr Asn Phe Thr Val Thr Ser Lys Ala Ser Asp Glu Asp Gly Asp Phe 945 950 955 960 Ala Glu Leu Tyr Val Phe Lys Trp Thr Ser Leu Leu Ile Pro Pro Thr 965 970 975

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<210> 23

<211> 2830

<212> DNA

<213> Zea mays

<220>

<221> misc_feature

<222> (2809)..(2809)

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<220>

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<222> (2818)..(2818)

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<222> (2824)..(2824)

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<400> 23

tacctctaag tcgcatagtt ccgatatctc caaacgagct taacctttat cggatcgtga 60

ttgttctccg gcttatcatc ctatgtttct tctttcaata tcgtataact catccagtgg 120

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attacctaaa ggacaaaata caaccttctt ttgtgaaaga aaggcgggct atgaagaggg 600

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tgaagggtct agatggcatt caaggacctg tttatgtggg aacaggatgc tgtttcaata 1140

ggcaggcctt gtatggctat gatcctgtat tgacagaagc tgatttggag cctaacatta 1200

tcattaaaag ttgctgtggc ggaagaaaaa agaaggacaa gagctatatt gattccaaaa 1260

accgtgatat gaagagaaca gaatcttcgg ctcccatctt caacatggaa gatatagaag 1320 agggatttga aggttacgag gatgaaaggt cactgcttat gtctcagaag agcttggaga 1380

aacgctttgg ccagtctcca atttttattg catccacctt tatgactcaa ggtggcatac 1440

ccccttcaac aaacccaggt tccctgctaa aggaagctat acatgtcatt agttgtggat 1500

atgaggataa aacagaatgg gggaaagaga tcggatggat atatggctct gttactgaag 1560

atattttaac tggtttcaag atgcatgcaa gaggttggat atccatctac tgcatgccac 1620

ttcggccttg cttcaagggt tctgctccaa ttaatctttc tgatcgtctc aaccaagtgt 1680

tacgctgggc tcttggttca gttgaaattc tacttagcag acactgtcct atctggtatg 1740

gttacaatgg aaggctaaag cttctggaga gactggcata catcaacacc attgtttatc 1800

caattacatc tatcccacta gtagcatact gcgtccttcc tgctatctgt ttactcacca 1860

acaaatttat tattcctgcg attagcaatt atgctggggc gttcttcatc ctgctttttg 1920

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gggtgatcct ccacctctac cctttcctga agggtctcat ggggaagcag aaccgcacac 2340

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tcgtttaagt tcactctact gcatttgggg tgggcagcat gaaactttgt caacttatgt 2640

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agtactgatt gagctgtttg gtcaatgaca ttgagggatt ctctctctng aaattaanac 2820

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<210> 24 <211> 821 <212> PRT <21Β> Zea mays

<400> 24

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Arg Ile Val Ile Val Leu Arg Leu Ile Ile Leu Cys Phe Phe Phe Gln 20 25 30

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Cys Lys Lys His Asn Ile Glu Pro Arg Ala Pro Glu Phe Tyr Phe Ala 165 170 175

Arg Lys Ile Asp Tyr Leu Lys Asp Lys Ile Gln Pro Ser Phe Val Lys 180 185 190

Glu Arg Arg Ala Met Lys Arg Glu Cys Glu Glu Phe Lys Val Arg Ile 195 200 205 Asp Ala Leu Val Ala Lys Ala Gln Lys Ile Pro Glu Glu Gly Trp Thr 210 215 220

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Asp Ser Lys Asn Arg Asp Met Lys Arg Thr Glu Ser Ser Ala Pro Ile 420 425 430 Phe Asn Met Glu Asp Ile Clu Glu Gly Phe Glu Gly Tyr Glu Asp Glu 435 440 445

Arg Ser Leu Leu Met Ser Gln Lys Ser Leu Glu Lys Arg Phe Gly Gln 450 455 460

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Pro Ala Ile Ser Asn Tyr Ala Gly Ala Phe Phe Ile Leu Leu Phe Ala 625 630 635 640

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Ser Ala His Leu Phe Ala Val Phe Gln Gly Leu Leu Lys Val Leu Ala 675 680 685

Gly Ile Asp Thr Asn Phe Thr Val Thr Ser Lys Ala Thr Asp Asp Asp 690 695 700

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Gly Lys Leu Phe Phe Ala Ile Trp Val Ile Leu His Leu Tyr Pro Phe 755 760 765

Leu Lys Gly Leu Met Gly Lys Gln Asn Arg Thr Pro Thr Ile Val Ile 770 775 780

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<212> DNA

<213> Zea mays

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tgtgcttacc aatggacaat acatgttgaa tcttgattgt gatcactaca ttaacaacag 2040

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ggatacccag acgtgtggca tcaactgcta gggaagtgga aggtttgtac tttgtagaaa

cggaggaata ccacgtgcca tctgttgtct gttaagttat atatatataa gcagcaagtg

gcgttattta cagctacgta cagaccagtg gatattgttt accacaaagt tttacttgtg

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<210> 26

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<212> PRT

<213> Zea mays

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aactttttaa gaaaaaggaa aatcaagccc ctgcatatgc tcttggtgaa attgatgaag 2100

ccgctccagg agctgaaaat gaaaaggcta gtattgtaaa tcaacagaag ttggaaaaga 2160

aatttggcca gtcttcagtt tttgttgcat ccacacttct tgagaatggt ggaaccctga 2220 agagtgccag tccagcttct cttctgaagg aagctataca tgtcatcagt tgtggatatg 2280

aagacaaaac aggctgggga aaagatattg gttggattta tggatcagtc acagaagata 2340

ttcttactgg gtttaagatg cactgccatg gttggcggtc aatttactgc atacctaaac 2400

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atggtggtgg actaaagttc ctggaaaggt tttcgtacat taactccatc gtataccctt 2580

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tcgtccatct ttacccgttc ctcaagggtc tggttgggag gcagaacagg acgccaacga 3120

ttgtcattgt ctggtccatc ctcctggctt cgatcttctc gctgctttgg gtccggatcg 3180

acccgttcct tgcgaaggat gatggtcccc tgttggagga gtgtggtctg gattgcaact 3240

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ttttgtgccc atatttcttt actcaatttt tgtccctctg tagattgaaa caaggggtga 3360

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agcctcgtga gtgcaatatt gggcaaaccg gaggttgcgg caaccttgtg cagttcgtcc 3480

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aaaaaaaaaa aaaaaaaagg gcggccgc 3568

<210> 30 <211> 1059 <212> PRT <213> Zea mays

<400> 30

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Asn Glu Phe Asn Trp Ser Asp Lys His Asp Ser Gln Tyr Leu Ala Glu 85 90 95

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Ala Arg Gln Pro Leu Ser Arg Lys Ile Pro Leu Pro Ser Ser Gln Ile 225 230 235 240 Asn Pro Tyr Arg Met Ile Ile Ile Ile Arg Leu Val Val Leu Cys Phe 245 250 255

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Pro Val Asp Lys Val Ser Cys Tyr Val Ser Asp Asp Cly Ala Ala Met 355 360 365

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Asp Asp Trp Trp Arg Asn Glu Gln Phe Trp Val Ile Gly Gly Val Ser 900 905 910 Ser His Leu Phe Ala Val Phe Cln Gly Leu Leu Lys Val Ile Ala Gly 915 920 925

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<400> 31

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caatgtgttt tatgatggac cctttactag gaaagaaggt ttgctatgta cagttccctc 1920 aaagatttga tgggattgat cgccatgacc gatatgctaa ccggaatgtt gtcttttttg 1980

atatcaacat gaaaggtttg gatggtattc agggtccaat ttatgttggt actggatgtg 2040

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<400> 32

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Met Met Asp Pro Leu Leu Gly Lys Lys Val Cys Tyr Val Gln Phe Pro 580 585 590 Gln Arg Phe Asp Gly Ile Asp Arg His Asp Arg Tyr Ala Asn Arg Asn 595 600 605

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agtccctata tcatcaagcc gaattaatcc ctacaggatg attatcgtta tccggttggt 1080

ggttttgggt ttcttcttcc actaccgagt gatgcatccg gcgaaagatg catttgcatt 1140

gtggctcata tctgtaatct gtgaaatctg gtttgcgatg tcctggattc ttgatcagtt 1200

cccaaagtgg cttccaatcg agagagagac ttacctggac cgtttgtcac taaggtttga 1260

caaggaaggt caaccctctc agcttgctcc aatcgacttc tttgtcagta cggttgatcc 1320

cacaaaggaa cctcccttgg tcacagcgaa cactgtcctt tccatccttt ctgtggatta 1380

tccggttgag aaggtctcct gctatgtttc tgatgatggt gctgcaatgc ttacgtttga 1440

agcattgtct gaaacatctg aatttgcaaa gaaatgggtt cctttcagca aaaagtttaa 1500

tatcgagcct cgtgctcctg agtggtactt ccaacagaag atagactacc tgaaagacaa 1560

ggttgctgct tcatttgtta gggagaggag ggcgatgaag agagaatacg aggaattcaa 1620

ggtaaggatc aatgccttgg ttgcaaaagc ccaaaaggtt cctgaggaag gatggacaat 1680

gcaagatgga agcccctggc ctggaaacaa cgtacgcgat catcctggaa tgattcaggt 1740 attccttggc caaagtggcg gtcgtgatgt ggaaggaaat gagttgcctc gcctggttta 1800

tgtctcgaga gaaaagaggc caggttataa ccatcacaag aaggctggtg ccatgaatgc 1860

actggtccgt gtctctgctg tcttatcaaa tgctgcatac ctattgaact tggactgtga 1920

tcactacatc aacaatagca aggccataaa agaggctatg tgtttcatga tggatccttt 1980

ggtggggaag aaagtgtgct atgtacagtt ccctcagagg tttgatggta ttgacaaaaa 2040

tgatcgatac gctaacagga acgttgtctt ttttgacatc aacatgaaag gtttggacgg 2100

tattcaagga cccatttatg tgggtactgg atgtgttttc agacggcagg cactgtatgg 2160

ttatgatgct cctaaaacga agaagccacc atcaagaact tgcaactgct ggcccaagtg 2220

gtgcctctct tgctgctgca gcaggaacaa gaataaaaag aagactacaa aaccaaagac 2280

ggagaagaag aaaagattat ttttcaagaa agcagaaaac ccatctcctg catatgcttt 2340

gggtgaaatt gatgaaggtg ctccaggtgc tgatatcgag aaggccggaa tcgtaaatca 2400

acagaaacta gagaagaaat ttgggcagtc ttctgttttt gtcgcatcaa cacttcttga 2460

gaacggaggg accctgaaga gcgcaagtcc agcttctctt ctgaaggaag ctatacatgt 2520

tatcagctgc ggctacgaag acaagaccga ctggggaaaa gagattggct ggatttacgg 2580

atcgatcaca gaggatatct tgactggatt taagatgcac tgccatggct ggcggtctat 2640 ttactgcatc ccgaagcggc ctgcattcaa aggttctgcg cctctgaacc tttccgaccg 2700

tcttcaccag gtccttcgct gggcccttgg gtccgtcgaa attttcttca gcaagcactg 2760

cccactttgg tacggatacg gcggcgggct aaaattcctg gaaaggtttt cttatatcaa 2820

ctccatcgtt tatccctgga cgtccattcc tctcctggct tactgtacct tgcctgccat 2880

ctgcctgctc acggggaagt ttatcacacc agagcttacc aatgtcgcca gtatctggtt 2940

catggcactt ttcatctgca tctccgtgac cggcatcctg gaaatgaggt ggagtggcgt 3000

ggccatcgac gactggtgga ggaacgagca gttctgggtc atcggaggcg tttcggcgca 3060

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caccctgctg atacccccga ccacgctcct cctgctgaac ttcatcgggg tggtggccgg 3240

gatctcgaac gcgatcaaca acgggtacga gtcgtggggc cccctgttcg ggaagctctt 3300

cttcgccttc tgggtgatcg tccacctgta cccgttcctc aagggtctgg tggggaggca 3360

gaacaggacg ccgacgatcg tcatcgtctg gtccatcctg ctggcctcga tcttctcgct 3420

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ttacgcctga ttttttgttg ttgttgttgt tggaattctt tgctgtagat agaaaccaca 3600

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tgagtaaatt aaaagtttta aagttataca gtgatgcaca ttccagtgcc cagtgtattc 3720

cctttttaca gtctgtatat tagcgacaaa ggacatattg gttaggagtt tgattctttt 3780

gtaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 3813

<210> 34 <211> 1094 <212> PRT <213> Zea mays

<400> 34

Met Glu Ala Ser Ala Cly Leu Val Ala Gly Ser His Asn Arg Asn Glu 15 10 15

Leu Val Val Ile Arg Arg Asp Arg Glu Ser Gly Ala Ala Gly Gly Gly 20 25 30 Ala Ala Arg Arg Ala Glu Ala Pro Cys Cln Ile Cys Gly Asp Glu Val 35 40 45

Gly Val Gly Phe Asp Gly Glu Pro Phe Val Ala Cys Asn Glu Cys Ala 50 55 60

Phe Pro Val Cys Arg Ala Cys Tyr Glu Tyr Glu Arg Arg Glu Gly Ser 65 70 75 80

Gln Ala Cys Pro Gln Cys Arg Thr Arg Tyr Lys Arg Leu Lys Gly Cys 85 90 95

Pro Arg Val Ala Gly Asp Glu Glu Glu Asp Gly Val Asp Asp Leu Glu 100 105 110

Gly Glu Phe Gly Leu Gln Asp Gly Ala Ala His Glu Asp Asp Pro Gln 115 120 125

Tyr Val Ala Glu Ser Met Leu Arg Ala Gln Met Ser Tyr Gly Arg Gly 130 135 140

Gly Asp Ala His Pro Gly Phe Ser Pro Val Pro Asn Val Pro Leu Leu 145 150 155 160

Thr Asn Gly Gln Met Val Asp Asp Ile Pro Pro Glu Gln His Ala Leu 165 170 175

Val Pro Ser Tyr Met Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Lys Arg Ile His 180 185 190

Pro Leu Pro Phe Ala Asp Pro Asn Leu Pro Val Gln Pro Arg Ser Met 195 200 205

Asp Pro Ser Lys Asp Leu Ala Ala Tyr Gly Tyr Gly Ser Val Ala Trp 210 215 220

Lys Glu Arg Met Glu Gly Trp Lys Gln Lys Gln Glu Arg Leu Gln His 225 230 235 240

Val Arg Ser Glu Gly Gly Gly Asp Trp Asp Gly Asp Asp Ala Asp Leu 245 250 255 Pro Leu Met Asp Clu Ala Arg Cln Pro Leu Ser Arg Lys Val Pro Ile 260 265 270

Ser Ser Ser Arg Ile Asn Pro Tyr Arg Met Ile Ile Val Ile Arg Leu 275 280 285

Val Val Leu Gly Phe Phe Phe His Tyr Arg Val Met His Pro Ala Lys 290 295 300

Asp Ala Phe Ala Leu Trp Leu Ile Ser Val Ile Cys Glu Ile Trp Phe 305 310 315 320

Ala Met Ser Trp Ile Leu Asp Cln Phe Pro Lys Trp Leu Pro Ile Glu 325 330 335

Arg Clu Thr Tyr Leu Asp Arg Leu Ser Leu Arg Phe Asp Lys Glu Gly 340 345 350

Gln Pro Ser Gln Leu Ala Pro Ile Asp Phe Phe Val Ser Thr Val Asp 355 360 365

Pro Thr Lys Glu Pro Pro Leu Val Thr Ala Asn Thr Val Leu Ser Ile 370 375 380

Leu Ser Val Asp Tyr Pro Val Glu Lys Val Ser Cys Tyr Val Ser Asp 385 390 395 400

Asp Gly Ala Ala Met Leu Thr Phe Glu Ala Leu Ser Glu Thr Ser Glu 405 410 415

Phe Ala Lys Lys Trp Val Pro Phe Ser Lys Lys Phe Asn Ile Glu Pro 420 425 430

Arg Ala Pro Glu Trp Tyr Phe Gln Gln Lys Ile Asp Tyr Leu Lys Asp 435 440 445

Lys Val Ala Ala Ser Phe Val Arg Glu Arg Arg Ala Met Lys Arg Glu 450 455 460

Tyr Glu Glu Phe Lys Val Arg Ile Asn Ala Leu Val Ala Lys Ala Gln 465 470 475 480 Lys Val Pro Glu Glu Gly Trp Thr Met Gln Asp Gly Ser Pro Trp Pro 485 490 495

Gly Asn Asn Val Arg Asp His Pro Gly Met Ile Gln Val Phe Leu Gly 500 505 510

Gln Ser Gly Gly Arg Asp Val Glu Gly Asn Glu Leu Pro Arg Leu Val 515 520 525

Tyr Val Ser Arg Glu Lys Arg Pro Gly Tyr Asn His His Lys Lys Ala 530 535 540

Gly Ala Met Asn Ala Leu Val Arg Val Ser Ala Val Leu Ser Asn Ala 545 550 555 560

Ala Tyr Leu Leu Asn Leu Asp Cys Asp His Tyr Ile Asn Asn Ser Lys 565 570 575

Ala Ile Lys Glu Ala Met Cys Phe Met Met Asp Pro Leu Val Gly Lys 580 585 590

Lys Val Cys Tyr Val Gln Phe Pro Gln Arg Phe Asp Gly Ile Asp Lys 595 600 605

Asn Asp Arg Tyr Ala Asn Arg Asn Val Val Phe Phe Asp Ile Asn Met 610 615 620

Lys Gly Leu Asp Gly Ile Gln Gly Pro Ile Tyr Val Gly Thr Gly Cys 625 630 635 640

Val Phe Arg Arg Gln Ala Leu Tyr Gly Tyr Asp Ala Pro Lys Thr Lys 645 650 655

Lys Pro Pro Ser Arg Thr Cys Asn Cys Trp Pro Lys Trp Cys Leu Ser 660 665 670

Cys Cys Cys Ser Arg Asn Lys Asn Lys Lys Lys Thr Thr Lys Pro Lys 675 680 685

Thr Glu Lys Lys Lys Arg Leu Phe Phe Lys Lys Ala Glu Asn Pro Ser 690 695 700 Pro Ala Tyr Ala Leu Gly Glu Ile Asp Glu Gly Ala Pro Gly Ala Asp 705 710 715 720

Ile Glu Lys Ala Gly Ile Val Asn Gln Gln Lys Leu Glu Lys Lys Phe 725 730 735

Gly Gln Ser Ser Val Phe Val Ala Ser Thr Leu Leu Glu Asn Gly Gly 740 745 750

Thr Leu Lys Ser Ala Ser Pro Ala Ser Leu Leu Lys Glu Ala Ile His 755 760 765

Val Ile Ser Cys Gly Tyr Glu Asp Lys Thr Asp Trp Gly Lys Glu Ile 770 775 780

Gly Trp Ile Tyr Gly Ser Ile Thr Glu Asp Ile Leu Thr Gly Phe Lys 785 790 795 800

Met His Cys His Gly Trp Arg Ser Ile Tyr Cys Ile Pro Lys Arg Pro 805 810 815

Ala Phe Lys Gly Ser Ala Pro Leu Asn Leu Ser Asp Arg Leu His Gln 820 825 830

Val Leu Arg Trp Ala Leu Gly Ser Val Glu Ile Phe Phe Ser Lys His 835 840 845

Cys Pro Leu Trp Tyr Gly Tyr Gly Gly Gly Leu Lys Phe Leu Glu Arg 850 855 860

Phe Ser Tyr Ile Asn Ser Ile Val Tyr Pro Trp Thr Ser Ile Pro Leu 865 870 875 880

Leu Ala Tyr Cys Thr Leu Pro Ala Ile Cys Leu Leu Thr Gly Lys Phe 885 890 895

Ile Thr Pro Glu Leu Thr Asn Val Ala Ser Ile Trp Phe Met Ala Leu 900 905 910

Phe Ile Cys Ile Ser Val Thr Gly Ile Leu Glu Met Arg Trp Ser Gly 915 920 925 Val Ala Ile Asp Asp Trp Trp Arg Asn Glu Gln Phe Trp Val Ile Gly 930 935 940

Gly Val Ser Ala His Leu Phe Ala Val Phe Gln Gly Leu Leu Lys Val 945 950 955 960

Phe Ala Gly Ile Asp Thr Ser Phe Thr Val Thr Ser Lys Ala Gly Asp 965 970 975

Asp Glu Glu Phe Ser Glu Leu Tyr Thr Phe Lys Trp Thr Thr Leu Leu 980 985 990

Ile Pro Pro Thr Thr Leu Leu Leu Leu Asn Phe Ile Gly Val Val Ala 995 1000 1005

Gly Ile Ser Asn Ala Ile Asn Asn Gly Tyr Glu Ser Trp Gly Pro 1010 1015 1020

Leu Phe Gly Lys Leu Phe Phe Ala Phe Trp Val Ile Val His Leu 1025 1030 1035

Tyr Pro Phe Leu Lys Gly Leu Val Gly Arg Gln Asn Arg Thr Pro 1040 1045 1050

Thr Ile Val Ile Val Trp Ser Ile Leu Leu Ala Ser Ile Phe Ser 105 5 1060 1065

Leu Leu Trp Val Arg Val Asp Pro Phe Leu Ala Lys Ser Asn Gly 1070 1075 1080

Pro Leu Leu Glu Glu Cys Gly Leu Asp Cys Asn 1085 1090

<210> 35

<211> 3799

<212> DNA

<213> Zea mays

<220>

<221> misc_feature

<222> (3757)..(3757)

<223> η é a, c, g, ou t <220>

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<222> (3775)..(3775)

<223> η é a, c, g, ou t

<220>

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<222> (3777)..(3777)

<223> π é a, c, g, ou t

<220>

<221> misc_feature

<222> (3782)..(3782)

<223> η é a, c, g, ou t

<400> 35

caactcacgt tgccgcggct tcctccatcg

cctccctagt ccctcctccc ccccgcatac

gcgggagatg cggtgctgat ccgtgcccct

gtcgcttcgg ctctgcctag gccagctcct

gagggcgacg cggacggcgt gaagtcgggg

tgcggcgatg gcgtgggcac tacggcggag

gggttcccgg tgtgccgccc ctgctacgag

ccccagtgca aaaacaagta caagcgccac

ggagacgata ctgatgccga tgatgctagc

gaccagaagc agaagattgc tgacaggatg

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ggtgagatcc ctcggggata catcccgtca

cctggtgctt cccctgacca tcatatgatg

ccatttccct atatgaatca ttcatcaaat

aatgttgcct ggaaagagag ggttgatggc

cccatgacga atggcacaag cattgctccc

gcatcaactg attacaacat ggaagatgcc

tctaggaaag ttccacttcc ttcctccagg

cgattgattg ttctaagcat cttcttgcac

tacccactgt ggcttctatc tgttatatgt

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taccggatca caaatcctgt gcgtaatgca 1140

gagatctggt ttgctctttc ctggatattg 1200 gatcagtttc caaagtggtt tccaatcaac cgcgagactt accttgatag actcgcatta 1260

aggtatgacc gggaaggtga gccatctcag ttggctgctg ttgacatttt tgtcagtact 1320

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gtggactatc ctgtggataa ggtctcttgc tatgtatctg atgatggagc tgctatgctg 1440

acatttgatg cactagctga gacttcagag tttgctagaa aatgggtgcc atttgttaag 1500

aagtacaaca ttgaacctag agctcctgaa tggtacttct cccagaaaat tgattacttg 1560

aaggacaaag tgcacccttc atttgttaaa gaccgccggg ccatgaagag agaatatgaa 1620

gaattcaaaa ttagggtaaa tggccttgtt gctaaggcac aaaaagtccc tgaggaagga 1680

tggatcatgc aagatggcac accatggcca ggaaacaata ccagggacca tcctggaatg 1740

attcaggttt tccttggtca cagtggtggt cttgatactg agggtaatga gctaccccgt 1800

ttggtctatg tttctcgtga aaaacgtcct ggattccagc atcacaagaa agctggtgcc 1860

atgaatgctc ttgtccgcgt ctcagctgtg cttaccaatg gacaatacat gttgaatctt 1920

gattgtgatc actacatcaa caacagtaag gctctcaggg aagctatgtg cttccttatg 1980

gatcctaacc taggaaggag tgtctgctat gttcagtttc cccagaggtt cgatggtatt 2040

gataggaatg atcgatatgc caacaggaac accgtgtttt tcgatattaa cttgagaggt 2100

cttgatggca tccaaggacc agtttatgtg ggcactggct gtgttttcaa cagaacagct 2160

ctatatggtt atgagccccc aattaagcaa aagaagggtg gtttcttgtc atcactatgt 2220

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gctggatttg atgatgagaa atcacttctt atgtctcaaa tgagcttgga gaagagattt 2400

ggccaatctg cagcttttgt tgcgtccact ctgatggaat atggtggtgt tcctcagtct 2460

gcgactccag aatctcttct gaaagaagct atccatgtca taagttgtgg ctacgaggac 2520

aagattgaat ggggaactga gattgggtgg atctatggtt ctgtgacgga agatattctc 2580

actgggttca agatgcacgc acgaggctgg cggtcgatct actgcatgcc taagcggccg 2640

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tccctcccgc tcctcattta ctgtatcctg cctgccatct gcctgctcac ggggaagttc 2880 atcatcccag agatcagcaa cttcgctagt atctggttca tctctctctt catctcgatc 2940

ttcgccacgg gtatcctgga gatgaggtgg agcggcgtgg gcatcgacga gtggtggagg 3000 aacgagcagt tctgggtcat cggaggcatc tccgcccacc tcttcgccgt cttccagggc 3060

ctcctcaagg tgcttgccgg catcgacacc aacttcaccg tcacctccaa ggcctcggat 3120 gaagacggcg acttcgcgga gctgtacatg ttcaagtgga cgacacttct gatcccgccc 3180

accaccatcc tgatcatcaa cctggtcggc gttgttgccg gcatctccta cgccatcaac 3240

agcgggtacc agtcgtgggg tccgctcttc ggcaagctct tcttcgcctt ctgggtgatc 3300

gttcacctgt acccgttcct caagggtctc atgggtcggc agaaccgcac cccgaccatc 3360

gtggttgtct gggcgatcct gctggcgtcg atcttctcct tgctgtgggt tcgcatcgat 3420

ccgttcacca accgcgtcac tggcccggat actcgaacgt gtggcatcaa ctgctaggga 3480

ggtggaaggt ttgtagaaac agagagatac cacgaatgtg ccgctgccac aaattgtctg 3540

ttagtaagtt atataggcag gtggcgttat ttacagctac gtacacacaa ggggatactc 3600

cgtttatcac tggtgtgcat tcttttgttg atataagtta ctatatatac gtattgcttc 3660

tactttgtgg agagtggctg acaggaccag ttttgtaatg ttatgaacag caaagaaata 3720

agttagtttc caaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaanaaa aaaaaaaaaa aaaananaaa 3780

anaaaaaaaa aaaaacccc 3799

<210> 36 <211> 1079 <212> PRT <213> Zea mays

<400> 36

Met Clu Gly Asp Ala Asp Gly Val Lys Ser Gly Arg Arg Gly Gly Gly

15 10 15

Gln Val Cys Gln Ile Cys Gly Asp Gly Val Gly Thr Thr Ala Glu Gly

20 25 30

Asp Val Phe Thr Ala Cys Asp Val Cys Gly Phe Pro Val Cys Arg Pro

35 40 45

Cys Tyr Glu Tyr Glu Arg Lys Asp Gly Thr Gln Ala Cys Pro Gln Cys 50 55 60 Lys Asn Lys Tyr Lys Arg His Lys Cly Ser Pro Ala Ile Arg Gly Glu 65 70 75 80

Glu Gly Asp Asp Thr Asp Ala Asp Asp Ala Ser Asp Phe Asn Tyr Pro 85 90 95

Ala Ser Gly Asn Asp Asp Gln Lys Gln Lys Ile Ala Asp Arg Met Arg 100 105 110

Ser Trp Arg Met Asn Ala Gly Gly Ser Gly Asp Val Gly Arg Pro Lys 115 120 125

Tyr Asp Ser Gly Glu Ile Gly Leu Thr Lys Tyr Asp Ser Gly Glu Ile IBO 135 140

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Ile Gly Arg Arg Ala Pro Phe Pro Tyr Met Asn His Ser Ser Asn Pro 180 185 190

Ser Arg Glu Phe Ser Gly Ser Val Gly Asn Val Ala Trp Lys Glu Arg 195 200 205

Val Asp Gly Trp Lys Met Lys Gln Asp Lys Gly Thr Ile Pro Met Thr 210 215 220

Asn Gly Thr Ser Ile Ala Pro Ser Glu Gly Arg Gly Val Gly Asp Ile 225 230 235 240

Asp Ala Ser Thr Asp Tyr Asn Met Glu Asp Ala Leu Leu Asn Asp Glu 245 250 255

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Asn Pro Tyr Arg Met Val Ile Val Leu Arg Leu Ile Val Leu Ser Ile 275 280 285 Phe Leu His Tyr Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Asn Ala Tyr Pro Leu 290 295 300

Trp Leu Leu Ser Val Ile Cys Glu Ile Trp Phe Ala Leu Ser Trp Ile 305 310 315 320

Leu Asp Cln Phe Pro Lys Trp Phe Pro Ile Asn Arg Clu Thr Tyr Leu 325 330 335

Asp Arg Leu Ala Leu Arg Tyr Asp Arg Glu Gly Glu Pro Ser Gln Leu 340 345 350

Ala Ala Val Asp Ile Phe Val Ser Thr Val Asp Pro Met Lys Glu Pro 355 360 365

Pro Leu Val Thr Ala Asn Thr Val Leu Ser Ile Leu Ala Val Asp Tyr 370 375 380

Pro Val Asp Lys Val Ser Cys Tyr Val Ser Asp Asp Cly Ala Ala Met 385 390 395 400

Leu Thr Phe Asp Ala Leu Ala Glu Thr Ser Glu Phe Ala Arg Lys Trp 405 410 415

Val Pro Phe Val Lys Lys Tyr Asn Ile Glu Pro Arg Ala Pro Glu Trp 420 425 430

Tyr Phe Ser Gln Lys Ile Asp Tyr Leu Lys Asp Lys Val His Pro Ser 435 440 445

Phe Val Lys Asp Arg Arg Ala Met Lys Arg Glu Tyr Glu Glu Phe Lys 450 455 460

Ile Arg Val Asn Gly Leu Val Ala Lys Ala Gln Lys Val Pro Glu Glu 465 470 475 480

Gly Trp Ile Met Gln Asp Gly Thr Pro Trp Pro Gly Asn Asn Thr Arg 485 490 495

Asp His Pro Gly Met Ile Gln Val Phe Leu Gly His Ser Gly Gly Leu 500 505 510 Asp Thr Glu Cly Asn Glu Leu Pro Arg Leu Val Tyr Val Ser Arg Glu 515 520 525

Lys Arg Pro Gly Phe Gln His His Lys Lys Ala Gly Ala Met Asn Ala 530 535 540

Leu Val Arg Val Ser Ala Val Leu Thr Asn Gly Gln Tyr Met Leu Asn 545 550 555 560

Leu Asp Cys Asp His Tyr Ile Asn Asn Ser Lys Ala Leu Arg Glu Ala 565 570 575

Met Cys Phe Leu Met Asp Pro Asn Leu Gly Arg Ser Val Cys Tyr Val 580 585 590

Gln Phe Pro Gln Arg Phe Asp Gly Ile Asp Arg Asn Asp Arg Tyr Ala 595 600 605 -

Asn Arg Asn Thr Val Phe Phe Asp Ile Asn Leu Arg Gly Leu Asp Gly 610 615 620

Ile Gln Gly Pro Val Tyr Val Gly Thr Gly Cys Val Phe Asn Arg Thr 625 630 635 640

Ala Leu Tyr Gly Tyr Glu Pro Pro Ile Lys Gln Lys Lys Gly Gly Phe 645 650 655

Leu Ser Ser Leu Cys Gly Gly Arg Lys Lys Gly Ser Lys Ser Lys Lys 660 665 670

Gly Ser Asp Lys Lys Lys Ser Gln Lys His Val Asp Ser Ser Val Pro 675 680 685

Val Phe Asn Leu Glu Asp Ile Glu Glu Gly Val Glu Gly Ala Gly Phe 690 695 700

Asp Asp Glu Lys Ser Leu Leu Met Ser Gln Met Ser Leu Glu Lys Arg 705 710 715 720

Phe Gly Gln Ser Ala Ala Phe Val Ala Ser Thr Leu Met Glu Tyr Gly 725 730 735 Gly Val Pro Cln Ser Ala Thr Pro Glu Ser Leu Leu Lys Glu Ala Ile 740 745 750

His Val Ile Ser Cys Gly Tyr Glu Asp Lys Ile Glu Trp Gly Thr Glu 755 760 765

Ile Gly Trp Ile Tyr Gly Ser Val Thr Glu Asp Ile Leu Thr Gly Phe 770 775 780

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Pro Ala Phe Lys Gly Ser Ala Pro Ile Asn Leu Ser Asp Arg Leu Asn 805 810 815

Gln Val Leu Arg Trp Ala Leu Gly Ser Val Glu Ile Leu Phe Ser Arg 820 825 830

His Cys Pro Leu Trp Tyr Gly Tyr Gly Gly Arg Leu Lys Phe Leu Glu 835 840 845

Arg Phe Ala Tyr Ile Asn Thr Thr Ile Tyr Pro Leu Thr Ser Leu Pro 850 855 860

Leu Leu Ile Tyr Cys Ile Leu Pro Ala Ile Cys Leu Leu Thr Gly Lys 865 870 875 880

Phe Ile Ile Pro Glu Ile Ser Asn Phe Ala Ser Ile Trp Phe Ile Ser 885 890 895

Leu Phe Ile Ser Ile Phe Ala Thr Gly Ile Leu Glu Met Arg Trp Ser 900 905 910

Gly Val Gly Ile Asp Glu Trp Trp Arg Asn Glu Gln Phe Trp Val Ile 915 920 925

Gly Gly Ile Ser Ala His Leu Phe Ala Val Phe Gln Gly Leu Leu Lys 930 935 940

Val Leu Ala Gly Ile Asp Thr Asn Phe Thr Val Thr Ser Lys Ala Ser 945 950 955 960 Asp Clu Asp Gly Asp Phe Ala Glu Leu Tyr Met Phe Lys Trp Thr Thr

Leu Leu Ile Pro Pro Thr Thr Ile Leu Ile Ile Asn Leu Val Gly Val

Val Ala Gly Ile Ser Tyr Ala Ile Asn Ser Gly Tyr Gln Ser Trp Gly

Pro Leu Phe Gly Lys Leu Phe Phe Ala Phe Trp Val Ile Val His

Leu Tyr Pro Phe Leu Lys Gly Leu Met Gly Arg Gln Asn Arg Thr

Pro Thr Ile Val Val Val Trp Ala Ile Leu Leu Ala Ser Ile Phe

Ser Leu Leu Trp Val Arg Ile Asp Pro Phe Thr Asn Arg Val Thr

Gly Pro Asp Thr Arg Thr Cys Gly Ile Asn Cys

<210> 37

<211> 3470

<212> DNA

<213> Zea mays

<400> 37

gcccccggtc gatcgctcgg caatcggcat ggacgccggc tcggtcaccg gtggcctcgc 60

cgcgggctcg cacatgcggg acgagctgca tgtcatgcgc gcccgcgagg agccgaacgc 120

caaggtccgg agcgccgacg tgaagacgtg ccgcgtgtgc gccgacgagg tcgggacgcg 180

ggaggacggg cagcccttcg tggcgtgcgc cgagtgcggc ttccccgtct gccggccctg 240

ctacgagtac gagcgcagcg agggcacgca gtgctgcccg cagtgcaaca cccgctacaa 300

gcgccagaaa gggtgcccga gggtggaagg ggacgaggag gagggcccgg agatggacga 360

cttcgaggac gagttccccg ccaagagccc caagaagcct cacgagcctg tcgcgttcga 420

cgtctactcg gagaacggcg agcacccggc gcagaaatgg cggacgggtg gccagacgct 480 gtcgtccttc accggaagcg tcgccgggaa ggacctggag gcggagaggg agatggaggg 540

gagcatggag tggaaggacc ggatcgacaa gtggaagacc aagcaggaga agaggggcaa 600

gctcaaccac gacgacagcg acgacgacga cgacaagaac gaagacgagt acatgctgct 660

tgccgaggcc cgacagccgc tgtggcgcaa ggttccgatc ccgtcgagca tgatcaaccc 720

gtaccgcatc gtcatcgtgc tccgcctggt ggtgctctgc ttcttcctca agttccggat 780

cacgacgccc gccacggacg ccgtgcctct gtggctggcg tccgtcatct gcgagctctg 840

gttcgccttc tcctggatcc tggaccagct gccaaagtgg gcgccggtga cgcgggagac 900

gtacctggac cgcctggcgc tgcggtacga ccgtgagggc gaggcgtgcc ggctgtcccc 960

catcgacttc ttcgtcagca cggtggaccc gctcaaggag ccgcccatca tcaccgccaa 1020

caccgtgctg tccatcctcg ccgtcgacta ccccgtggac cgcgtcagct gctacgtctc 1080

cgacgacggc gcgtccatgc tgctcttcga cgcgctgtcc gagaccgccg agttcgcgcg 1140

ccgctgggtg cccttctgca agaagttcgc cgtggagccg cgcgccccgg agttctactt 1200

ctcgcagaag atcgactacc tcaaggacaa ggtgcagccg acgttcgtca aggagcgccg 1260

cgccatgaag agggagtacg aggagttcaa ggtgcgcatc aacgcgctgg tggccaaggc 1Β20

gcagaagaag cccgaggagg ggtgggtcat gcaggacggc acgccgtggc ccgggaacaa 1380

cacgcgcgac cacccgggta tgatccaggt ctacctcggc aaccagggcg cgctggacgt 1440

ggagggccac gagctgccgc gcctcgtcta cgtgtcccgt gagaagcgcc ccgggtacaa 1500

ccaccacaag aaggcgggcg ccatgaacgc gctggtgcgc gtctccgccg tgctcaccaa 1560

cgcgcccttc atcctcaacc tcgactgcga ccactacgtc aacaacagca aggccgtgcg 1620

cgaggccatg tgcttcctca tggacccgca gctggggaag aagctctgct acgtccagtt 1680

cccgcagcgc ttcgatggca tcgatcgcca cgaccgatac gccaaccgca acgtcgtctt 1740

cttcgacatc aacatgaagg ggctggacgg catccagggc ccggtgtacg tcggcacggg 1800

gtgcgtgttc aaccgccagg cgctgtacgg ctacgacccg ccgcggcccg agaagcggcc 1860

caagatgacg tgcgactgct ggccgtcgtg gtgctgctgc tgctgctgct tcggcggcgg 1920

caagcgcggc aaggcgcgca aggacaagaa gggcgacggc ggcgaggagc cgcgccgggg 1980

cctgctcggc ttctacagga agcggagcaa gaaggacaag ctcggcggcg ggtcggtggc 2040

cggcagcaag aagggcggcg ggctgtacaa gaagcaccag cgcgcgttcg agctggagga 2100

gatcgaggag gggctggagg ggtacgacga gctggagcgc tcctcgctca tgtcgcagaa 2160 gagcttcgag aagcggttcg gccagtcgcc cggcggcctg ccgcagggcg ccgccgccga cgtcatcagc tgcggatacg aggagaagac tgggtcggtg acagaggata tcctgacggg cgtgtactgc acgccgacac ggccggcgtt tcgtctccac caggtgctgc gctgggcgct ctgcccgctc cggtacgcct acggcggccg caacaccatc gtgtacccct tcacctccat cgtctgcctg ctcaccggca agttcatcat gttcatcgcg ctcttcctgt ccatcatcgc ggtgagcatc gaggactggt ggcgcaacga gcatctcttc gccgtgttcc agggcttcct caccgtcacc tccaaggcgg ccggcgacga caagtggacc accctgctgg tgccccccac cgtggccggc gtgtccgacg ccgtcaacaa caagctcttc ttctccttct gggtcatcgt ggggaggcag aaccggacgc ccaccatcgt cttctcgctc gtctgggtca ggatcgaccc caagccatgc ggagtcgagt gctgagctca gccgccgtgc gtttggacat acaggcactt ttttaatttt gtacaagatt tgtgatcgag gaactgtgat ggaattcact caaattaatg

<210> 38

<211> 1078

<212> PRT

<213> Zea mays

<400> 38

cgtgttcatc gcctccacgc tcgtcgagga 2220

ccccgccgcg ctcatcaagg aggccatcca 2280

cgagtggggc aaggagattg ggtggatcta 2340

gttcaagatg cactgccggg ggtggaagtc 2400

caaggggtcg gcgcccatca acttgtctga 2460

ggggtccgtg gagatcttca tgagccgcca 2520

gctcaagtgg ctggagcgct tcgcctacac 2580

cccgctcctc gcctactgca ccatccccgc 2640

tcccacgctg aacaacctcg ccagcatctg 2700

gacgagcgtc ctggagctgc ggtggagcgg 2760

gcagttctgg gtcatcggcg gcgtgtccgc 2820

caaggttctg ggcggcgtgg acaccagctt 2880

ggccgacgcc ttcggggacc tctacctctt 2940

cacgctcatc atcatcaaca tggtgggcat 3000

cggctacggc tcctggggcc cgctcttcgg 3060

ccacctctac ccgttcctca aggggctcat 3120

cgtgctctgg tccatcctcc tcgcctccat 3180

gtttatcccg aaggccaagg gccccatcct 3240

cctagctacc ttcttgttgc atgtacggac 3300

ttgggccagg ctactcatgt tcgacttttt 3360

tgactgagtg agacagagtg ttgggtgtaa 3420

gacatttttt ttcttcaaaa 3470

Met Asp Ala Cly Ser Val Thr Gly Gly Leu Ala Ala Gly Ser His Met 15 10 15 Arg Asp Glu Leu His Val Met Arg Ala Arg Glu Glu Pro Asn Ala Lys 20 25 30

Val Arg Ser Ala Asp Val Lys Thr Cys Arg Val Cys Ala Asp Glu Val 35 40 45

Gly Thr Arg Glu Asp Gly Gln Pro Phe Val Ala Cys Ala Glu Cys Gly 50 55 60

Phe Pro Val Cys Arg Pro Cys Tyr Glu Tyr Glu Arg Ser Glu Gly Thr 65 70 75 80

Gln Cys Cys Pro Gln Cys Asn Thr Arg Tyr Lys Arg Gln Lys Gly Cys 85 90 95

Pro Arg Val Glu Gly Asp Glu Glu Glu Gly Pro Glu Met Asp Asp Phe 100 105 110

Glu Asp Glu Phe Pro Ala Lys Ser Pro Lys Lys Pro His Glu Pro Val 115 120 125

Ala Phe Asp Val Tyr Ser Glu Asn Gly Glu His Pro Ala Gln Lys Trp 130 135 140

Arg Thr Gly Gly Gln Thr Leu Ser Ser Phe Thr Gly Ser Val Ala Gly 145 150 155 160

Lys Asp Leu Glu Ala Glu Arg Glu Met Glu Gly Ser Met Glu Trp Lys 165 170 175

Asp Arg Ile Asp Lys Trp Lys Thr Lys Gln Glu Lys Arg Gly Lys Leu 180 185 190

Asn His Asp Asp Ser Asp Asp Asp Asp Asp Lys Asn Glu Asp Glu Tyr 195 200 205

Met Leu Leu Ala Glu Ala Arg Gln Pro Leu Trp Arg Lys Val Pro Ile 210 215 220

Pro Ser Ser Met Ile Asn Pro Tyr Arg Ile Val Ile Val Leu Arg Leu 225 230 235 240 Val Val Leu Cys Phe Phe Leu Lys Phe Arg Ile Thr Thr Pro Ala Thr 245 250 255

Asp Ala Val Pro Leu Trp Leu Ala Ser Val Ile Cys Glu Leu Trp Phe 260 265 270

Ala Phe Ser Trp Ile Leu Asp Gln Leu Pro Lys Trp Ala Pro Val Thr 275 280 285

Arg Glu Thr Tyr Leu Asp Arg Leu Ala Leu Arg Tyr Asp Arg Glu Gly 290 295 BOO

Glu Ala Cys Arg Leu Ser Pro Ile Asp Phe Phe Val Ser Thr Val Asp 305 310 315 320

Pro Leu Lys Glu Pro Pro Ile Ile Thr Ala Asn Thr Val Leu Ser Ile 325 330 335

Leu Ala Val Asp Tyr Pro Val Asp Arg Val Ser Cys Tyr Val Ser Asp 340 345 350

Asp Gly Ala Ser Met Leu Leu Phe Asp Ala Leu Ser Glu Thr Ala Glu 355 360 365

Phe Ala Arg Arg Trp Val Pro Phe Cys Lys Lys Phe Ala Val Glu Pro 370 375 380

Arg Ala Pro Glu Phe Tyr Phe Ser Gln Lys Ile Asp Tyr Leu Lys Asp 385 390 395 400

Lys Val Gln Pro Thr Phe Val Lys Glu Arg Arg Ala Met Lys Arg Glu 405 410 415

Tyr Glu Glu Phe Lys Val Arg Ile Asn Ala Leu Val Ala Lys Ala Gln 420 425 430

Lys Lys Pro Glu Glu Gly Trp Val Met Gln Asp Gly Thr Pro Trp Pro 435 440 445

Gly Asn Asn Thr Arg Asp His Pro Gly Met Ile Gln Val Tyr Leu Gly 450 455 460 Asn Gln Gly Ala Leu Asp Val Glu Gly His Glu Leu Pro Arg Leu Val 465 470 475 480

Tyr Val Ser Arg Glu Lys Arg Pro Gly Tyr Asn His His Lys Lys Ala 485 490 495

Gly Ala Met Asn Ala Leu Val Arg Val Ser Ala Val Leu Thr Asn Ala 500 505 510

Pro Phe Ile Leu Asn Leu Asp Cys Asp His Tyr Val Asn Asn Ser Lys 515 520 525

Ala Val Arg Glu Ala Met Cys Phe Leu Met Asp Pro Gln Leu Gly Lys 530 535 540

Lys Leu Cys Tyr Val Gln Phe Pro Gln Arg Phe Asp Gly Ile Asp Arg 545 550 555 560

His Asp Arg Tyr Ala Asn Arg Asn Val Val Phe Phe Asp Ile Asn Met 565 570 575

Lys Gly Leu Asp Gly Ile Gln Gly Pro Val Tyr Val Gly Thr Gly Cys 580 585 590

Val Phe Asn Arg Gln Ala Leu Tyr Gly Tyr Asp Pro Pro Arg Pro Glu 595 600 605

Lys Arg Pro Lys Met Thr Cys Asp Cys Trp Pro Ser Trp Cys Cys Cys 610 615 620

Cys Cys Cys Phe Gly Gly Gly Lys Arg Gly Lys Ala Arg Lys Asp Lys 625 630 635 640

Lys Gly Asp Gly Gly Glu Glu Pro Arg Arg Gly Leu Leu Gly Phe Tyr 645 650 655

Arg Lys Arg Ser Lys Lys Asp Lys Leu Gly Gly Gly Ser Val Ala Gly 660 665 670

Ser Lys Lys Gly Gly Gly Leu Tyr Lys Lys His Gln Arg Ala Phe Glu 675 680 685 Leu Clu Glu Ile Clu Glu Gly Leu Clu Gly Tyr Asp Glu Leu Glu Arg 690 695 700

Ser Ser Leu Met Ser Gln Lys Ser Phe Glu Lys Arg Phe Gly Gln Ser 705 710 715 720

Pro Val Phe Ile Ala Ser Thr Leu Val Glu Asp Gly Gly Leu Pro Gln 725 730 735

Gly Ala Ala Ala Asp Pro Ala Ala Leu Ile Lys Glu Ala Ile His Val 740 745 750

Ile Ser Cys Gly Tyr Glu Glu Lys Thr Glu Trp Gly Lys Glu Ile Gly 755 760 765

Trp Ile Tyr Gly Ser Val Thr Glu Asp Ile Leu Thr Gly Phe Lys Met 770 775 780

His Cys Arg Gly Trp Lys Ser Val Tyr Cys Thr Pro Thr Arg Pro Ala 785 790 795 800

Phe Lys Gly Ser Ala Pro Ile Asn Leu Ser Asp Arg Leu His Gln Val 805 810 815

Leu Arg Trp Ala Leu Gly Ser Val Glu Ile Phe Met Ser Arg His Cys 820 825 830

Pro Leu Arg Tyr Ala Tyr Gly Gly Arg Leu Lys Trp Leu Glu Arg Phe 835 840 845

Ala Tyr Thr Asn Thr Ile Val Tyr Pro Phe Thr Ser Ile Pro Leu Leu 850 855 860

Ala Tyr Cys Thr Ile Pro Ala Val Cys Leu Leu Thr Gly Lys Phe Ile 865 870 875 880

Ile Pro Thr Leu Asn Asn Leu Ala Ser Ile Trp Phe Ile Ala Leu Phe 885 890 895

Leu Ser Ile Ile Ala Thr Ser Val Leu Glu Leu Arg Trp Ser Gly Val 900 905 910 Ser Ile Glu Asp Trp Trp Arg Asn Clu Cln Phe Trp Val Ile Gly Gly 915 920 925

Val Ser Ala His Leu Phe Ala Val Phe Gln Cly Phe Leu Lys Val Leu 9B0 935 940

Gly Gly Val Asp Thr Ser Phe Thr Val Thr Ser Lys Ala Ala Gly Asp 945 950 955 960

Glu Ala Asp Ala Phe Gly Asp Leu Tyr Leu Phe Lys Trp Thr Thr Leu 965 970 975

Leu Val Pro Pro Thr Thr Leu Ile Ile Ile Asn Met Val Gly Ile Val 980 985 990

Ala Gly Val Ser Asp Ala Val Asn Asn Gly Tyr Gly Ser Trp Gly Pro 995 1000 1005

Leu Phe Gly Lys Leu Phe Phe Ser Phe Trp Val Ile Val His Leu 1010 1015 1020

Tyr Pro Phe Leu Lys Gly Leu Met Gly Arg Gln Asn Arg Thr Pro 1025 1030 1035

Thr Ile Val Val Leu Trp Ser Ile Leu Leu Ala Ser Ile Phe Ser 1040 1045 1050

Leu Val Trp Val Arg Ile Asp Pro Phe Ile Pro Lys Ala Lys Gly 105 5 1060 1065

Pro Ile Leu Lys Pro Cys Cly Val Clu Cys 1070 1075

<210> 39

<211> 3231

<212> DNA

<213> Zea mays

<400> 39

ccacgcgtcc gggaggggcc atgatggagt cggcggcggc ccagtcctgc gcggcgtgcg 60

gggacgacgc gcgcgctgcc tgccgcgcgt gcagctacgc gctctgcagg gcgtgcctcg 120

acgaggacgc cgccgagggc cgcaccacat gcgcgcgctg cggàggggac tacgccgcta 180 tcaacccagc gcgcgccagc gagggaaccg aggcggagga ggaggtggtg gagaaccacc 240

acaccgccgg tggcctgcgt gagagggtca ccatgggcag ccacctcaat gatcgccagg 300

atgaagtaag ccacgccagg accatgagca gcttgtcggg aattggtagt gaattgaatg 360

atgaatctgg taagcccatc tggaagaaca gggtggagag ttggaaggaa aagaagaatg 420

agaagaaagc ctcggccaaa aagactgcag ctaaagcaca gcctccgcct gtcgaagaac 480

agatcatgga tgaaaaagac ttgacagatg catatgagcc actctcccgg gtcatcccaa 540

tatcaaagaa caagctcaca ccttacagag cagtgatcat tatgcggtta attgttcttg 600

ggctcttctt tcactaccgt atcaccaatc ctgttaacag tgcctttggt ctctggatga 660

catcagttat atgtgagatc tggtttggtt tctcctggat attggatcaa ttcccgaagt 720

ggtatcctat caatcgtgag acttatgttg ataggctgat tgcacgatat ggagatggtg 780

aagaatctgg gttagcacct gtagatttct ttgtcagtac agtggatcca ttgaaagagc 840

ctccactaat cactgcaaac actgtgctgt ctattcttgc tgtggactat cccgttgaga 900

agatctcatg ctatgtatct gatgatggtt ctgctatgct cacatttgaa tcgctcgcag 960

agactgcaga atatgctaga aagtgggtgc cgttttgcaa gaagtacgcc attgagccac 1020

gagctcctga gttctacttc tcacagaaaa ttgactactt gaaggacaag atacacccat 1080

cttttgtcaa ggagcgtagg gctatgaaga gagactatga agagtacaag gtgaggataa 1140

atgctttggt tgccaaggct caaaagacac ctgatgaagg ctggatcatg caagacggta 1200

caccatggcc tgggaacaat cctcgtgacc accctggcat gatccaggtt ttcctgggtg 1260

agactggtgc acgggacttt gatggaaatg aacttcctcg gttagtgtat gtgtcaagag 1320

agaaaagacc aggctaccaa caccacaaga aggcaggggc tatgaatgct ctggtccgag 1380

tgtctgctgt tctgacaaat gccccttaca ttcttaatct tgattgtgat cactatgtta 1440

acaacagcaa agctgttcgt gaagcaatgt gcttcatgat ggaccctact gttggcagag 1500

atgtctgcta tgtacaattc ccccagaggt tcgatggcat tgatcgcagt gatcgatatg 1560

ccaataggaa cgttgtgttc tttgatgtta atatgaaagg acttgatggc ctccaaggcc 1620

cagtttatgt gggaactggt tgttgtttca ataggcaagc actttatggt tatgggcctc 1680

catctctgcc cgcacttcca aagtcttcga tttgttcctg gtgttgctgc tgctgtccca 1740

agaaaaaggt tgaaagaagt gagagggaaa tcaacagaga ctctcggcga gaagacctcg 1800

agtctgccat ttttaacctt cgcgaaattg acaactacga tgagtacgag aggtccatgc 1860 tcatctctca gatgagcttc gagaagtctt ttgggctgtc ctcggtcttt attgaatcga 1920

cccttatgga gaatgggggc gtccctgaat ctgcaaaccc atctacccta attaaagaag 1980

ccattcatgt cattagctgt ggatatgaag agaaaactga atggggaaaa gagattggct 2040

ggatctatgg ttcagttaca gaggatattc tgactgggtt taagatgcac tgccgtggct 2100

ggagatccat ctactgcatg ccggtgagac ctgcattcaa gggatcagcc ccaatcaatc 2160

tttccgatcg tcttcaccaa gttctccggt gggctcttgt ttctgtcgag atcttcttca 2220

gtcggcactg cccgctgtgg tacggttacg gtggcggccg tctgaaatgg ctccagaggc 2280

tctcctacat caacaccatc gtgtacccgt tcacttctct tcctctcgtt gcctactgtt 2340

gcctgcctgc catttgcctg ctcacaggaa agttcattat acctacgctg tccaacgctg 2400

caacgatatg gtttcttggc ctcttcatgt ccatcatcgt gacgagcgtg ttggagctgc 2460

ggtggagtgg catcgggatc gaggactggt ggcgcaacga gcagttctgg gtcatcggag 2520

gcgtgtccgc gcacctgttc gccgtgttcc agggtatcct caagatgatt gccgggctgg 2580

acaccaactt cacggtcacg gcaaaggcca cggacgacac tgagttcggg gagctgtacc 2640

tgttcaagtg gacgacggtg ctgatcccgc ccacaagcat cctggtgctg aacctggtgg 2700

gcgtggtggc tgggttctcg gccgcgctca acagcggcta cgagtcctgg ggcccgctct 2760

tcggtaaggt gttcttcgcc atgtgggtga tcatgcacct gtacccgttc ctcaagggtc 2820

tcatgggccg ccagaaccgc acgccgacca tcgtggtgct ctggtccgtc ctcctcgcct 2880

ccgtcttctc cctcctgtgg gtcaagatcg acccattcgt tggaggaacc gagaccgtca 2940

acaccaacaa ctgcaacaca catctgctga ttcaccatcg gtcagctgct gtcgtgccgc 3000

ggcggacgtg tttctggtgt tgcaaacgtg ggttgcctgc ctgatgcggg tctcctctgt 3060

ctatctcgca tctgggcttt tgccccagga tctgaagcgg gtggtgtagg ttagctttat 3120

tttgcgtcca agtgttgatt gatgttgtct gtgttatgaa aagttttggt ggtgaaacct 3180

gaaatgttaa aattcggctc aattgtgaga aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa a 3231

<210> 40 <211> 1007 <212> PRT <213> Zea mays

<400> 40

Met Met Glu Ser Ala Ala Ala Gln Ser Cys Ala Ala Cys Gly Asp Asp 1 5 10 15 Ala Arg Ala Ala Cys Arg Ala Cys Ser Tyr Ala Leu Cys Arg Ala Cys 20 25 30

Leu Asp Glu Asp Ala Ala Glu Gly Arg Thr Thr Cys Ala Arg Cys Gly 35 40 45

Gly Asp Tyr Ala Ala Ile Asn Pro Ala Arg Ala Ser Glu Gly Thr Glu 50 55 60

Ala Glu Glu Glu Val Val Glu Asn His His Thr Ala Gly Gly Leu Arg 65 70 75 80

Glu Arg Val Thr Met Gly Ser His Leu Asn Asp Arg Gln Asp Glu Val 85 90 95

Ser His Ala Arg Thr Met Ser Ser Leu Ser Gly Ile Gly Ser Glu Leu 100 105 110

Asn Asp Glu Ser Gly Lys Pro Ile Trp Lys Asn Arg Val Glu Ser Trp 115 120 125

Lys Glu Lys Lys Asn Glu Lys Lys Ala Ser Ala Lys Lys Thr Ala Ala 130 135 140

Lys Ala Gln Pro Pro Pro Val Glu Glu Gln Ile Met Asp Glu Lys Asp 145 150 155 160

Leu Thr Asp Ala Tyr Glu Pro Leu Ser Arg Val Ile Pro Ile Ser Lys 165 170 175

Asn Lys Leu Thr Pro Tyr Arg Ala Val Ile Ile Met Arg Leu Ile Val 180 185 190

Leu Gly Leu Phe Phe His Tyr Arg Ile Thr Asn Pro Val Asn Ser Ala 195 200 205

Phe Gly Leu Trp Met Thr Ser Val Ile Cys Glu Ile Trp Phe Gly Phe 210 215 220

Ser Trp Ile Leu Asp Gln Phe Pro Lys Trp Tyr Pro Ile Asn Arg Glu 225 230 235 240 Thr Tyr Val Asp Arg Leu Ile Ala Arg Tyr Cly Asp Cly Glu Clu Ser 245 250 255

Gly Leu Ala Pro Val Asp Phe Phe Val Ser Thr Val Asp Pro Leu Lys 260 265 270

Glu Pro Pro Leu Ile Thr Ala Asn Thr Val Leu Ser Ile Leu Ala Val 275 280 285

Asp Tyr Pro Val Glu Lys Ile Ser Cys Tyr Val Ser Asp Asp Gly Ser 290 295 300

Ala Met Leu Thr Phe Glu Ser Leu Ala Glu Thr Ala Glu Tyr Ala Arg 305 310 315 320

Lys Trp Val Pro Phe Cys Lys Lys Tyr Ala Ile Glu Pro Arg Ala Pro 325 330 335

Glu Phe Tyr Phe Ser Cln Lys Ile Asp Tyr Leu Lys Asp Lys Ile His 340 345 350

Pro Ser Phe Val Lys Glu Arg Arg Ala Met Lys Arg Asp Tyr Glu Glu 355 360 365

Tyr Lys Val Arg Ile Asn Ala Leu Val Ala Lys Ala Gln Lys Thr Pro 370 375 380

Asp Glu Gly Trp Ile Met Gln Asp Gly Thr Pro Trp Pro Gly Asn Asn 385 390 395 400

Pro Arg Asp His Pro Cly Met Ile Cln Val Phe Leu Cly Glu Thr Cly 405 410 415

Ala Arg Asp Phe Asp Gly Asn Glu Leu Pro Arg Leu Val Tyr Val Ser 420 425 430

Arg Glu Lys Arg Pro Gly Tyr Gln His His Lys Lys Ala Gly Ala Met 435 440 445

Asn Ala Leu Val Arg Val Ser Ala Val Leu Thr Asn Ala Pro Tyr Ile 450 455 460 Leu Asn Leu Asp Cys Asp His Tyr Val Asn Asn Ser Lys Ala Val Arg 465 470 475 480

Glu Ala Met Cys Phe Met Met Asp Pro Thr Val Cly Arg Asp Val Cys 485 490 495

Tyr Val Gln Phe Pro Cln Arg Phe Asp Gly Ile Asp Arg Ser Asp Arg 500 505 510

Tyr Ala Asn Arg Asn Val Val Phe Phe Asp Val Asn Met Lys Gly Leu 515 520 525

Asp Gly Leu Gln Gly Pro Val Tyr Val Gly Thr Gly Cys Cys Phe Asn 530 535 540

Arg Gln Ala Leu Tyr Gly Tyr Gly Pro Pro Ser Leu Pro Ala Leu Pro 545 550 555 560

Lys Ser Ser Ile Cys Ser Trp Cys Cys Cys Cys Cys Pro Lys Lys Lys 565 570 575

Val Glu Arg Ser Glu Arg Glu Ile Asn Arg Asp Ser Arg Arg Glu Asp 580 585 590

Leu Glu Ser Ala Ile Phe Asn Leu Arg Glu Ile Asp Asn Tyr Asp Glu 595 600 605

Tyr Glu Arg Ser Met Leu Ile Ser Gln Met Ser Phe Glu Lys Ser Phe 610 615 620

Gly Leu Ser Ser Val Phe Ile Glu Ser Thr Leu Met Glu Asn Gly Gly 625 630 635 640

Val Pro Glu Ser Ala Asn Pro Ser Thr Leu Ile Lys Glu Ala Ile His 645 650 655

Val Ile Ser Cys Gly Tyr Glu Glu Lys Thr Glu Trp Gly Lys Glu Ile 660 665 670

Gly Trp Ile Tyr Gly Ser Val Thr Glu Asp Ile Leu Thr Gly Phe Lys 675 680 685 Met His Cys Arg Cly Trp Arg Ser Ile Tyr Cys Met Pro Val Arg Pro 690 695 700

Ala Phe Lys Cly Ser Ala Pro Ile Asn Leu Ser Asp Arg Leu His Gln 705 710 715 720

Val Leu Arg Trp Ala Leu Val Ser Val Glu Ile Phe Phe Ser Arg His 725 730 735

Cys Pro Leu Trp Tyr Gly Tyr Gly Gly Cly Arg Leu Lys Trp Leu Gln 740 745 750

Arg Leu Ser Tyr Ile Asn Thr Ile Val Tyr Pro Phe Thr Ser Leu Pro 755 760 765

Leu Val Ala Tyr Cys Cys Leu Pro Ala Ile Cys Leu Leu Thr Gly Lys 770 775 780

Phe Ile Ile Pro Thr Leu Ser Asn Ala Ala Thr Ile Trp Phe Leu Gly 785 790 795 800

Leu Phe Met Ser Ile Ile Val Thr Ser Val Leu Glu Leu Arg Trp Ser 805 810 815

Gly Ile Gly Ile Glu Asp Trp Trp Arg Asn Glu Gln Phe Trp Val Ile 820 825 830

Gly Gly Val Ser Ala His Leu Phe Ala Val Phe Gln Gly Ile Leu Lys 835 840 845

Met Ile Ala Gly Leu Asp Thr Asn Phe Thr Val Thr Ala Lys Ala Thr 850 855 860

Asp Asp Thr Glu Phe Gly Glu Leu Tyr Leu Phe Lys Trp Thr Thr Val 865 870 875 880

Leu Ile Pro Pro Thr Ser Ile Leu Val Leu Asn Leu Val Gly Val Val 885 890 895

Ala Gly Phe Ser Ala Ala Leu Asn Ser Gly Tyr Glu Ser Trp Gly Pro 900 905 910 Leu Phe Cly Lys Val Phe Phe Ala Met Trp Val Ile Met His Leu Tyr

Pro Phe Leu Lys Gly Leu Met Gly Arg Gln Asn Arg Thr Pro Thr Ile

Val Val Leu Trp Ser Val Leu Leu Ala Ser Val Phe Ser Leu Leu Trp

Val Lys Ile Asp Pro Phe Val Gly Gly Thr Glu Thr Val Asn Thr Asn

Asn Cys Asn Thr His Leu Leu Ile His His Arg Ser Ala Ala Val Val

Pro Arg Arg Thr Cys Phe Trp Cys Cys Lys Arg Gly Leu Pro Ala

<210> 41 <211> 3028 <212> DNA <213> Zea mays

<400> 41

cacgagttca acatcgacga cgagaatcag cagaggcagc tggagggcaa catgcagaac 60

agccagatca ccgaggcgat gctgcacggc aggatgagct acgggagggg ccccgacgac 120

ggcgacggca acaacacccc gcagatcccg cccatcatca ccggctcccg ctccgtgccg 180

gtgagcggtg agtttccgat taccaacggg tatggccacg gcgaggtctc gtcttccctg 240

cacaagcgca tccatccgta ccctgtgtct gagccaggga gtgccaagtg ggacgagaag 300

aaagaagtga gctggaagga gaggatggac gactggaagt ccaagcaggg catcctcggc 360

ggcggcgccg atcccgaaga catggacgcc gacgtggcac tgaacgacga ggcgaggcag 420

ccgctgtcga ggaaggtgtc gatcgcgtcg agcaaggtga acccgtaccg gatggtgatc 480

gtggtgcgtc tcgttgtgct cgccttcttc ctccggtacc gtatcctgca ccccgtcccg 540

gacgccatcg ggctgtggct cgtctccatc atctgcgaga tctggttcgc catctcctgg 600

atcctcgacc agttccccaa gtggttcccc atcgaccgcg agacgtacct cgaccgcctc 660

tccctcaggt acgagaggga aggggagccg tcgctgctgt cggcggtgga cctgttcgtg 720 agcacggtgg acccgctcaa ggagccgccg ctggtgaccg ccaacaccgt gctctccatc 780

ctcgccgtag actaccccgt ggacaaggtc tcctgctacg tctccgacga cggcgcgtcg 840

atgctgacgt tcgagtcgct gtcggagacg gccgagttcg cgcgcaagtg ggtgcccttc 900

tgcaagaagt tcggcatcga gccccgcgcc ccggagttct acttctcgct caaggtcgac 960

tacctcaagg acaaggtgca gcccaccttc gtgcaggagc gccgcgccat gaagagagag 1020

tatgaggagt tcaaggtccg gatcaacgcg ctggtggcca aggccatgaa ggtgccggca 1080

gaggggtgga tcatgaagga cggcacgccg tggcccggga acaacacccg cgaccacccc 1140

ggcatgatcc aggtgttcct gggccacagc ggcggccacg acaccgaggg caacgagctg 1200

ccccgcctcg tgtacgtctc ccgtgagaag cgcccgggat tccagcacca caagaaggcc 1260

ggcgccatga acgctctgat tcgcgtctcc gccgtgctga ccaacgcgcc attcatgctc 1320

aacttggact gtgatcacta catcaacaac agcaaggcca tccgggaggc catgtgcttc 1380

ctcatggacc ctcaggtcgg ccggaaggtc tgctacgttc agttcccgca gaggttcgac 1440

ggcatcgacg tgcacgaccg atacgctaac aggaacaccg tcttcttcga catcaacatg 1500

aaggggctgg acggcatcca aggcccggtg tacgtcggga cagggtgcgt gttccggcgc 1560

caggcgctct acggctacaa ccctcccaag ggacccaaga ggcccaagat ggtgacctgc 1620

gactgctgcc cgtgcttcgg ccgcaagaag cggaaacacg ccaaggacgg gctgccggag 1680

ggcaccgctg atatgggagt agatagcgac aaggagatgc tcatgtccca catgaacttc 1740

gagaagcggt tcgggcagtc cgcggcgttc gtcacgtcga cgctgatgga ggaaggcggc 1800

gtccctcctt cgtcgagccc cgccgcgctc ctcaaggagg ccatccatgt catcagctgc 1860

ggctacgagg acaagaccga ctgggggctg gagctggggt ggatctacgg gtcgatcacg 1920

gaggacatcc tgacggggtt caagatgcac tgccgcgggt ggcgctccgt gtactgcatg 1980

ccgaagcggg cggcgttcaa ggggtcggcg ccgatcaatc tatcggaccg tctcaaccag 2040

gtgctccggt gggcgctggg gtccgtcgag atcttcttca gccggcacag ccccctgctg 2100

tacggctaca agaacggcaa cctcaagtgg ctggagcgct tcgcctacat caacaccacc 2160

atctacccct tcacctcgct cccgctgctc gcctactgca ccctccccgc cgtctgcctc 2220

ctcaccggca agttcatcat gccgtcgatt agcacgttcg ccagcctctt cttcatcgcc 2280

ctcttcatgt ccatcttcgc gacgggcatc ctggagatgc ggtggagcgg ggtgagcatc 2340

gaggagtggt ggaggaacga gcagttctgg gtcatcggcg gcgtgtccgc gcatctcttc 2400 gccgtcgtgc agggcctgct caaggtcctc gccgggatcg acaccaactt caccgtcacc 2460

tccaaggcca ccggcgacga ggacgacgag ttcgccgagc tctacgcctt caagtggacc 2520

acgctcctca tcccgcccac cacgctgctc atcattaacg tcatcggcgt cgtggccggc 2580

atctccgacg ccatcaacaa cgggtaccag tcctgggggc ccctcttcgg caagctcttc 2640

ttcgccttct gggtcatcgt ccacctctac ccgttcctca aggggctcat ggggcgccag 2700

aacaggacgc ccaccgttgt tgtcatctgg tccattctgc tggcctccat cttctccctg 2760

ctctgggtca ggatcgaccc tttcatcgtc aggaccaagg gcccggacgt caggcagtgt 2820

ggcatcaatt gctgagctgt ttattaaggt tcaaaattct ggagcttgtg catagggaga 2880

aaaaaacaat ttagaaattt tgtaaggttg ttgtgtctgt aatgttatgg tacccagaat 2940

tgtcggacga ggaattgaac aaaggacaag gtttgattgt taaatggcaa aaaaaaaaaa 3000

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaa 3028

<210> 42

<211> 927

<212> PRT

<213> Zea mays

<400> 42

Met Gln Asn Ser Gln Ile Thr Glu Ala Met Leu His Gly Arg Met Ser 15 10 15

Tyr Gly Arg Gly Pro Asp Asp Gly Asp Gly Asn Asn Thr Pro Gln Ile 20 25 30

Pro Pro Ile Ile Thr Gly Ser Arg Ser Val Pro Val Ser Gly Glu Phe 35 40 45

Pro Ile Thr Asn Gly Tyr Gly His Gly Glu Val Ser Ser Ser Leu His 50 55 60

Lys Arg Ile His Pro Tyr Pro Val Ser Glu Pro Gly Ser Ala Lys Trp 65 70 75 80

Asp Glu Lys Lys Gl u Val Ser Trp Lys Glu Arg Met Asp Asp Trp Lys 85 90 95

Ser Lys Gln Gly Ile Leu Gly Gly Gly Ala Asp Pro Glu Asp Met Asp 100 105 110 Ala Asp Val Ala Leu Asn Asp Glu Ala Arg Cln Pro Leu Ser Arg Lys 115 120 125

Val Ser Ile Ala Ser Ser Lys Val Asn Pro Tyr Arg Met Val Ile Val 130 135 140

Val Arg Leu Val Val Leu Ala Phe Phe Leu Arg Tyr Arg Ile Leu His 145 150 155 160

Pro Val Pro Asp Ala Ile Gly Leu Trp Leu Val Ser Ile Ile Cys Clu 165 170 175

Ile Trp Phe Ala Ile Ser Trp Ile Leu Asp Gln Phe Pro Lys Trp Phe 180 185 190

Pro Ile Asp Arg Glu Thr Tyr Leu Asp Arg Leu Ser Leu Arg Tyr Glu 195 200 205

Arg Glu Gly Glu Pro Ser Leu Leu Ser Ala Val Asp Leu Phe Val Ser 210 215 220

Thr Val Asp Pro Leu Lys Glu Pro Pro Leu Val Thr Ala Asn Thr Val 225 230 235 240

Leu Ser Ile Leu Ala Val Asp Tyr Pro Val Asp Lys Val Ser Cys Tyr 245 250 255

Val Ser Asp Asp Gly Ala Ser Met Leu Thr Phe Glu Ser Leu Ser Glu 260 265 270

Thr Ala Glu Phe Ala Arg Lys Trp Val Pro Phe Cys Lys Lys Phe Gly 275 280 285

Ile Glu Pro Arg Ala Pro Glu Phe Tyr Phe Ser Leu Lys Val Asp Tyr 290 295 300

Leu Lys Asp Lys Val Gln Pro Thr Phe Val Gln Glu Arg Arg Ala Met 305 310 315 320

Lys Arg Glu Tyr Glu Glu Phe Lys Val Arg Ile Asn Ala Leu Val Ala 325 330 335 Lys Ala Met Lys Val Pro Ala Clu Cly Trp Ile Met Lys Asp Gly Thr 340 345 350

Pro Trp Pro Gly Asn Asn Thr Arg Asp His Pro Gly Met Ile Cln Val 355 360 365

Phe Leu Gly His Ser Gly Gly His Asp Thr Glu Gly Asn Glu Leu Pro 370 375 380

Arg Leu Val Tyr Val Ser Arg Glu Lys Arg Pro Gly Phe Gln His His 385 390 395 400

Lys Lys Ala Gly Ala Met Asn Ala Leu Ile Arg Val Ser Ala Val Leu 405 410 415

Thr Asn Ala Pro Phe Met Leu Asn Leu Asp Cys Asp His Tyr Ile Asn 420 425 430

Asn Ser Lys Ala Ile Arg Glu Ala Met Cys Phe Leu Met Asp Pro Gln 435 440 445

Val Gly Arg Lys Val Cys Tyr Val Gln Phe Pro Gln Arg Phe Asp Gly 450 455 460

Ile Asp Val His Asp Arg Tyr Ala Asn Arg Asn Thr Val Phe Phe Asp 465 470 475 480

Ile Asn Met Lys Gly Leu Asp Gly Ile Gln Gly Pro Val Tyr Val Gly 485 490 495

Thr Cly Cys Val Phe Arg Arg Gln Ala Leu Tyr Gly Tyr Asn Pro Pro 500 505 510

Lys Gly Pro Lys Arg Pro Lys Met Val Thr Cys Asp Cys Cys Pro Cys 515 520 525

Phe Gly Arg Lys Lys Arg Lys His Ala Lys Asp Gly Leu Pro Glu Gly 530 535 540

Thr Ala Asp Met Gly Val Asp Ser Asp Lys Glu Met Leu Met Ser His 545 550 555 560 Met Asn Phe Glu Lys Arg Phe Gly Gln Ser Ala Ala Phe Val Thr Ser 565 570 575

Thr Leu Met Glu Glu Gly Gly Val Pro Pro Ser Ser Ser Pro Ala Ala 580 585 590

Leu Leu Lys Glu Ala Ile His Val Ile Ser Cys Gly Tyr Glu Asp Lys 595 600 605

Thr Asp Trp Gly Leu Glu Leu Gly Trp Ile Tyr Gly Ser Ile Thr Glu 610 615 620

Asp Ile Leu Thr Gly Phe Lys Met His Cys Arg Gly Trp Arg Ser Val 625 630 635 640

Tyr Cys Met Pro Lys Arg Ala Ala Phe Lys Gly Ser Ala Pro Ile Asn 645 650 655

Leu Ser Asp Arg Leu Asn Gln Val Leu Arg Trp Ala Leu Gly Ser Val 660 665 670

Glu Ile Phe Phe Ser Arg His Ser Pro Leu Leu Tyr Gly Tyr Lys Asn 675 680 685

Gly Asn Leu Lys Trp Leu Glu Arg Phe Ala Tyr Ile Asn Thr Thr Ile 690 695 700

Tyr Pro Phe Thr Ser Leu Pro Leu Leu Ala Tyr Cys Thr Leu Pro Ala 705 710 715 720

Val Cys Leu Leu Thr Gly Lys Phe Ile Met Pro Ser Ile Ser Thr Phe 725 730 735

Ala Ser Leu Phe Phe Ile Ala Leu Phe Met Ser Ile Phe Ala Thr Gly 740 745 750

Ile Leu Glu Met Arg Trp Ser Gly Val Ser Ile Glu Glu Trp Trp Arg 755 760 765

Asn Glu Gln Phe Trp Val Ile Gly Gly Val Ser Ala His Leu Phe Ala 770 775 780 Val Val Gln Gly Leu Leu Lys Val Leu Ala Gly Ile Asp Thr Asn Phe 785 790 795 800

Thr Val Thr Ser Lys Ala Thr Gly Asp Glu Asp Asp Glu Phe Ala Glu 805 810 815

Leu Tyr Ala Phe Lys Trp Thr Thr Leu Leu Ile Pro Pro Thr Thr Leu 820 825 8B0

Leu Ile Ile Asn Val Ile Gly Val Val Ala Gly Ile Ser Asp Ala Ile 835 840 845

Asn Asn Gly Tyr Gln Ser Trp Gly Pro Leu Phe Gly Lys Leu Phe Phe 850 855 860

Ala Phe Trp Val Ile Val His Leu Tyr Pro Phe Leu Lys Gly Leu Met 865 870 875 880

Gly Arg Gln Asn Arg Thr Pro Thr Val Val Val Ile Trp Ser Ile Leu 885 890 895

Leu Ala Ser Ile Phe Ser Leu Leu Trp Val Arg Ile Asp Pro Phe Ile 900 905 910

Val Arg Thr Lys Gly Pro Asp Val Arg Gln Cys Gly Ile Asn Cys 915 920 925

Claims

1. POLINUCLEOTÍDEO ISOLADO, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma seqüência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo associado com a resistência mecânica do caule, em que dito polipeptídeo tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80%, 85%, -90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de seqüência, ou qualquer outro número inteiro entre 80% e 100%, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 16 ou 18; ou (b) um complemento da seqüência de nucleotídeo, em que o complemento e a seqüência de nucleotídeo consistem do mesmo número de nucleotídeos e são 100% complementares.

2. CONSTRUÇÃO DE DNA RECOMBINANTE, caracterizada pelo fato de que compreende o polinucleotídeo conforme descrito na reivindicação 1, operacionalmente ligado a um promotor que é funcional em uma planta.

3. MÉTODO PARA ALTERAÇÃO DA RESISTÊNCIA MECÂNICA DO CAULE DE UMA PLANTA, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) introdução de uma construção de DNA recombinante em uma célula vegetal capaz de se regenerar, conforme descrito na reivindicação 2, para produzir uma célula vegetal transformada; e (b) regeneração de uma planta transgênica a partir de dita célula vegetal transformada, em que dita planta transgênica compreende em seu genoma dita construção de DNA recombinante e em que dita planta transgênica exibe uma alteração na resistência mecânica do caule, quando comparada a uma planta controle que não compreende dita construção de DNA recombinante.

4. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que ainda compreende (c) obtenção de uma planta da progênie derivada de dita planta transgênica, em que dita planta da progênie compreende em seu genoma a construção de DNA recombinante.

5. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a planta transgênica exibe um aumento na resistência mecânica do caule.

6. PLANTA, caracterizada pelo fato de que compreende em seu genoma a construção de DNA recombinante, conforme descrito na reivindicação 2.

7. POLINUCLEOTÍDEO ISOLADO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que dita resistência mecânica do caule é medida pelo teste de flexão com três pontos.

8. MÉTODO DE AVALIAÇÃO DA RESISTÊNCIA MECÂNICA DO CAULE EM UMA PLANTA, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) introdução de uma construção de DNA recombinante em uma célula vegetal capaz de se regenerar para produzir células vegetais transformadas, dita construção de DNA recombinante compreendendo um promotor que é funcional em uma planta, operacionalmente ligado a (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 4, 6, 8, -10, 12, 14, 16 e 18, ou (ii) um complemento completo do dito polinucleotídeo de (a)(i); (b) regeneração de uma planta transgênica a partir da dita célula vegetal transformada; e (c) avaliação da dita planta transgênica para a resistência mecânica do caule.

9. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que ainda compreende: (d) obtenção de uma planta da progênie derivada da dita planta transgênica; e (e) avaliação da dita planta da progênie para a resistência mecânica do caule.

10. MÉTODO DE AVALIAÇÃO DA RESISTÊNCIA MECÂNICA DO CAULE EM UMA PLANTA, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) introdução de uma construção de DNA recombinante em uma célula vegetal capaz de se regenerar para produzir células vegetais transformadas, dita construção de DNA recombinante compreendendo um promotor que é funcional em uma planta, operacionalmente ligado a (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 4, 6, 8, 10, -12, 14, 16 e 18, ou (ii) um complemento completo do dito polinucleotídeo de (a)(i); (b) regeneração de uma planta transgênica a partir da dita célula vegetal transformada; (c) obtenção de uma planta da progênie derivada da dita planta transgênica; e (d) avaliação da dita planta da progênie para a resistência mecânica do caule.

11. PLANTA, caracterizada pelo fato de que compreende em seu genoma: (a) uma primeira construção de DNA recombinante que compreende pelo menos um promotor que é funcional em uma planta, operacionalmente ligado a pelo menos um de um primeiro polinucleotídeo isolado selecionado do grupo que consiste de: (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nuclêico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 1, 3, 5, - 7, 9, 11, 13, 15e 17; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (a)(i) ou (a)(ii); e (b) uma segunda construção de DNA recombinante que compreende pelo menos um promotor que é funcional em uma planta, operacionalmente ligado a pelo menos um de um segundo polinucleotídeo isolado selecionado do grupo que consiste de: (iv) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, e 42; (v) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nuclêico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 21, 23, - 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37; 39 e 41; e (vi) um complemento completo do polinucleotídeo de (b)(iv) ou (b)(v). e em que dita planta exibe um aumento no conteúdo de celulose da parede celular ou aumento da taxa de crescimento quando comparada a uma planta controle que não compreende dita primeira construção de DNA recombinante e dita segunda construção de DNA recombinante.

12. PLANTA, caracterizada pelo fato de que compreende em seu genoma pelo menos uma seqüência reguladora operacionalmente ligada a: (a) pelo menos um polinucleotídeo isolado selecionado do grupo que consiste de: (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 1, 3, 5, -7, 9, 11, 13, 15e 17; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (a)(i) ou (a)(ii); e (b) pelo menos um polinucleotídeo isolado selecionado do grupo que consiste de: (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, e 42; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 21, 23, -25, 27, 29, 31, 33, 35, 37; 39 e 41; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (b)(i) ou (b)(ii), e em que dita planta exibe um aumento no conteúdo de celulose da parede celular ou aumento da taxa de crescimento quando comparada a uma planta controle que não compreende dita pelo menos uma seqüência reguladora operacionalmente ligada a ditos (a) e (b).

13. PLANTA, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que: (a) dito pelo menos um polinucleotídeo é selecionado do grupo que consiste de: (i um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 2; (ii) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 1; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (a)(i) ou (a)(ii); e (b) dito pelo menos um polinucleotídeo isolado é selecionado do grupo que consiste de: (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 38, 40 e 42; (ii) um polinucleotídeo que tem seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 37; 39 e 41; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (b)(i) ou (b)(ii), e em que dita planta exibe um aumento no conteúdo de celulose da parede celular quando comparada a uma planta controle que não compreende dita pelo menos uma seqüência reguladora operacionalmente ligada a ditos (a) e (b).

14. PLANTA, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que: a) dito pelo menos um polinucleotídeo é selecionado do grupo que consiste de: (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 6; (ii) um polinucleotídeo que tem seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 5; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (a)(i) ou (a)(ii); e (b) dito pelo menos um polinucleotídeo isolado é selecionado do grupo que consiste de: (i) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 20, 32 e 34; (ii) um polinucleotídeo que tem seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 19; 31 e 33; e (iii) um complemento completo do polinucleotídeo de (b)(i) ou (b)(ii), e em que dita planta exibe um aumento na taxa de crescimento quando comparada a uma planta controle que não compreende dita pelo menos uma seqüência reguladora operacionalmente ligada a ditos (a) e (b).

15. PLANTA, caracterizada pelo fato de que compreende em seu genoma pelo menos uma seqüência reguladora operacionalmente ligada a pelo menos dois polinucleotídeos isolados selecionados do grupo que consiste de: (a) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18; (b) um polinucleotídeo que tem uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 60% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 1, 3, 5, -7, 9, 11, 13, 15e 17; e (c) um complemento completo do polinucleotídeo de (a) ou (b).

16. PLANTA, caracterizada pelo fato de que compreende em seu genoma: uma construção de DNA para supressão que compreende um promotor funcional em uma planta, operacionalmente ligado a: (a) toda ou parte de (i) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 50% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada às SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 e 18, ou (ii) um complemento completo da seqüência de ácido nucléico de (a)(i); ou (b) uma região derivada de toda ou parte da fita sense ou fita antisense de um gene alvo de interesse, dita região contendo uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 50% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada a toda ou parte de dita fita sense ou fita antisense a partir da qual dita região é derivada, e em que dito gene alvo de interesse codifica um polipeptídeo selecionado do grupo que consiste de Bk2, Bk2L1, Bk2L3, Bk2L4; Bk2L5, Bk2L6, Bk2L7, Bk2L8 e Bk2L9, e em que dita planta exibe resistência mecânica do caule reduzida quando comparada a uma planta controle que não compreende dita construção de DNA para supressão.

17. PLANTA, de acordo com a reivindicação 16, caracterizada pelo fato de que dita construção de DNA para supressão compreende uma construção para co-supressão, construção antisense, construção para supressão viral, construção para supressão de grampo (hairpin), construção para supressão de alça de haste (stem-loop), construção para produção de RNA de fita dupla, construção de RNAi1 ou construção de RNA pequeno.

18. PLANTA, caracterizada pelo fato de que compreende em seu genoma: uma construção de DNA para supressão que compreende um promotor funcional em uma planta, operacionalmente ligado a: (a) toda ou parte de (i) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 50% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 6, ou (ii) um complemento completo da seqüência de ácido nucléico de (a)(i); ou (b) uma região derivada de toda ou parte de uma fita sense ou fita antisense de um gene alvo de interesse, dita região que contendo uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 50% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada a dita toda ou parte de uma fita sense ou fita antisense a partir da qual dita região é derivada, e em que dito gene alvo de interesse codifica um polipeptídeo Bk2L3, e em que dita planta exibe altura e/ou tamanho de órgão reduzido quando comparada a uma planta controle que não compreende dita construção de DNA para supressão.

19. PLANTA, caracterizada pelo fato de que compreende em seu genoma: uma construção de DNA para supressão que compreende um promotor funcional em uma planta, operacionalmente ligado a: (a) toda ou parte de (i) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptídeo que tem uma seqüência de aminoácidos com pelo menos 50% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada à SEQ ID NO: 10, ou (ii) um complemento completo da seqüência de ácido nucléico de (a)(i); ou (b) uma região derivada de toda ou parte da fita sense ou fita antisense de um gene alvo de interesse, dita região contendo uma seqüência de ácido nucléico com pelo menos 50% de identidade de seqüência, com base no método de alinhamento Clustal V, quando comparada a dita toda ou parte de uma fita sense ou fita antisense a partir da qual dita região é derivada, e em que dito gene alvo de interesse codifica um polipeptídeo Bk2L5, e em que dita planta exibe esterilidade masculina quando comparada a uma planta controle que não compreende dita construção de DNA para supressão.