CN100556916C - 水稻稻瘟病抗性基因Pi36及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一个水稻新抗性基因Pi36的核苷酸序列及其编码的氨基酸多肽序列与应用。该基因属于nonTIR-NBS-LRR抗性基因家族的成员，为一个组成型表达的基因。本发明还涉及了用该基因转化水稻或其它植物培育抗病品种以及根据该基因序列产生的分子标记在育种中的应用。

Description

水稻稻瘟病抗性基因Pi36及其应用

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种水稻稻瘟病抗性基因Pi36的分离克隆与应用。

背景技术

植物在生长的过程中，常常受到多种病原物的侵害，而植物则采取多种防御策略以保护自身，避免受其侵袭。植物中一个最重要的防御机理就是能够识别专性致病微生物的存在并启动自身的防御应答系统。植物对病原菌的识别由抗病基因所介导。因此，抗病基因产物结构的分析与研究，是了解植物抗病机制的基础，对于植物病害的预防和控制也具有重要的指导意义。

迄今，已经从3种单子叶植物和5种双子叶植物中分离了40多个抗病基因。对这些抗病基因的结构和产物的研究发现，虽然寄主植物不同，所拮抗的病原物也有真菌、细菌、病毒和线虫等差异，但抗病基因的结构和产物却有许多共同的结构特征，如C-端存在富亮氨酸重复序列(leucine-rich repeat，LRR)，N-端存在核苷酸结合位点(nucleotide binding site，NBS)，亮氨酸拉链(leucine zipper，LZ)，卷曲螺旋结构域(coiled-coil，CC)，跨膜结构域(transmembrane domain，TM)，蛋白激酶(protein kinase，PK)，以及果蝇Toll蛋白及哺乳动物白介素-1受体(Toll andinterleukin-1receptor，TIR)等。根据它们所编码蛋白的结构特征，可将抗病基因分为7类(Hammond-Kosack&Jones，1997；Dang1&Jones 2001；Iyer&McCouch2004)。

第一类，毒素还原酶类抗病基因。如玉米抗病基因Hm1，它是第1个被克隆的植物抗病基因，它负责对真菌Cochliobolus carbonum小种1的抗性。Hm1编码的解毒酶能钝化病原真菌所产生的HC毒素，而HC毒素是真菌C.carbonum小种1产生的致病因子，它决定该病菌只能感染玉米的某些基因型(Johal等，1992)。第二类，NBS-LRR类抗病基因。它们编码的蛋白近N端为NBS，而近C端则由LRR组成。如RPS2(Bent等，1994)、RPM1(Grant等，1995)、I2(Simon等，1998)、RPP5(Parker等，1997)、N(Dodd等，2001)、L6(Lawrence等，1995)、Mla1(Zhou等，2001)、Mla6(Halterman等，2001)；水稻的抗病基因如Xa1(Yoshimura等，1998)、Pib(Wang等，1999)、Pita(Bryan等，2000)等。第三类，PK类抗病基因。如番茄Pto基因，其产物是一个位于细胞内的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶，没有LRR结构域(Martin等，1993)。第四类，LRR-TM类抗病基因。番茄抗叶霉病不同生理小种的基因Cf-2(Dixon等，1996)、Cf-4(Thomas等，1997)、Cf-5(Dixon等，1998)、Cf-9(Jones等，1994)，以及甜菜抗胞囊线虫的基因Hs1^pro-1(Cai等，1997)等。第五类，LRR-TM-PK类抗病基因，以水稻抗白叶枯病基因Xa21(Song等，1995)为代表。第六类，以拟南芥的RPW8为代表，其编码的蛋白仅含有完整的CC和NBS结构域(Xiao等，2001)。第七类，以水稻的xa5基因为代表，其编码的蛋白为一个转录因子(TFIIAγ)(Iyer&McCouch，2004)。

编码NBS-LRR类抗病蛋白的抗病基因是植物抗病基因中最大的一类抗病基因，根据NBS-LRR类抗病蛋白N末端的结构特点，又可将该类基因分为两大类TIR-NBS-LRR(TNL)和CC-NBS-LRR(CNL)(Meyers等，1999；Pan等，2000；Cannon等，2002；Richly等，2002)。TNL类抗病基因主要发现在双子叶植物，至今还没在单子叶植物基因组中发现(Bai等，2002；Meyers等，2002)。目前在单子叶植物中鉴定到的抗病基因主要编码CNL类抗病蛋白，双子叶植物中也存在大量的CNL类抗病基因，相对而言，单子叶植物中的CNL类抗病基因比双子叶植物中的更丰富多样(Cannon等，2002)。

研究表明，NBS、CC、TIR结构域可能参与信号传导(Hammond-Kosack&Jones 1997)，尽管这类R蛋白不具有内在的激酶活性，但NBS可以激活激酶或G蛋白，NBS具有结合ATP或GTP以及水解酶活性(Traut，1994)。TIR结构可能参与植物抗病防卫反应下游的信号传导(Jones，1994)。最近的证据表明，亚麻的L族多样性选择也发生在TIR区域，这个区域与相应的LRR区域共进化形成特异性(Luck等，2000)。LRR结构域的功能主要涉及到蛋白质-蛋白质和与配体的相互作用(Jones&Jones，1996；Kajava，1998)，据推测是抗病基因产物直接和病原菌无毒基因编码的产物或间接产物相互作用的部位(Bent，1996；Baker等，1997)。Jia等(2000)通过酵母双杂交证明AVR-Pita编码的蛋白加工为一个176氨基酸的活性蛋白AVR-Pita₁₇₆小种特异性的激发子，传递到植物细胞质特异地与Pita受体的LRD区域结合，从而激活细胞内Pita介导的防卫反应。当Pita中的Ala变为Ser后Av-rPita₁₇₆不能与LRD结合，因而表现感病。这一结果直接证明了LRR结构域可能就是病原菌识别的区域；Pita与AvrPita的互作第一次从分子水平验证了水稻与稻瘟病菌的“基因对基因”关系。

水稻是世界上最重要的粮食作物之一，约有一半以上的人口以稻米为主食。由病原真菌Magnapothe grisea Barr.(无性态：Pyricularia grisea Sacc.)引起的稻瘟病是对水稻生产危害最严重的病害之一，每年都造成严重的粮食损失。从环境保护与农业的可持续发展的观点来看，抗病品种的育成与利用是防治稻瘟病最安全有效的方法。但是，由于稻瘟病菌群体的多样性及易变性，加之人们缺乏对抗性基因的有效利用，以及对抗性机理缺乏充分的了解，以致抗病品种的感病化问题不但没有得到解决，反而因有效抗源基因的缺乏和抗病品种的短命化而成为育种学家最为棘手的问题。因此，发掘、鉴定和克隆抗病基因并合理地应用于抗病育种计划已成为农业科研中优先解决的重要问题。

随着分子生物学的快速发展，迄今，至少有80多个水稻稻瘟病主效抗性基因已经被报道，其中60个已经被分子定位。目前，除了水稻的第3染色体上还没有被鉴定到稻瘟病主效抗性基因之外，其余的11条染色体上均被鉴定到有主效抗性基因位点，并且有的染色体上含有多个稻瘟病抗性位点，而且有些基因位点的抗性基因是成簇存在的。值得指出的是，在众多被成功定位的抗性基因中，只有抗性基因Pib和Pita两个抗性基因被成功地克隆，它们分别位于水稻的第2染色体和第12染色体上。本发明申请提出之前还没有水稻第8染色体上稻瘟病抗性基因被克隆的报道。

克隆抗病基因是对水稻抗性机理研究的前提，揭示水稻抗稻瘟病的分子机理可以更好地控制和降低稻瘟病菌对水稻的危害。同时，对克隆的抗病基因的修饰和改造，可以人为地控制和增加植物的抗病性，拓宽植物的抗谱。这些方面是采用常规植物育种和改良技术所不能达到的。

发明内容

本发明的目的是分离克隆水稻品种Q61中携带的一个稻瘟病抗性基因和包含调控这个基因的启动子的DNA片段。

本发明的另一个目的是提供上述稻瘟病抗性基因所编码的蛋白质。

本发明的另一个目的是提供上述含有上述抗性基因的载体。

本发明的另一个目的是提供上述载体转化的转基因植物。

本发明的另一个目的是提供上述蛋白质在制备抗稻瘟病菌药物中的应用。

本发明的进一步目的是提供上述抗性基因产生的分子标记及其在选育对稻瘟病具有抗病性的水稻中的应用。

本发明涉及分离和应用一种包含Pi36基因的DNA片段，该片段赋予植物对稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)所引起的病害产生特异性(专化性)的抗病反应。这一发明适用于对所有对该病原菌敏感的植物。这些植物包括单子叶植物和双子叶植物。其中，所述片段如序列表SEQ ID NO：1所示，或者基本上相当于SEQ ID NO：1所示的DNA序列，或者其功能相当于SEQ ID NO：1所示序列的亚片段。该DNA序列编码一种NBS-LRR类蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所列，结构如图6所示。本发明所示的DNA片段在水稻的叶片组织呈组成型表达。

所分离、克隆的Pi36抗性基因编码NBS-LRR蛋白。这种蛋白包含两个主要的结构域：NBS和LRR区域，其中NBS结构域含有保守的kinase 1a：GMGGLGKTT，kinase 2a：IVIDDIWDKP和kinase 3a：GSKILVTTRK。而该蛋白的C-末端为13个LRR重复，其亮氨酸含量为17.0％。Pi36基因中编码NBS或LRR的核苷酸片段可能具有独立的功能。将Pi36基因中编码不同结构域的片段与其他核酸片段重组，可构成嵌合基因或蛋白质，使之具有新的功能。对Pi36基因进行修饰或改造，可改变或增加基因的某种功能。例如，将该基因的LRR区域替换为其他抗性基因的结构域，或将该基因的NBS结构域进行定点突变，可能会导致基因抗性的丧失或基因的抗谱的改变。

本发明同样包括将Pi36抗性基因的主要结构部分有效地连接上合适的调节序列所形成的嵌合基因，以及在基因组中包含这种基因的植物和这种植物的种子。如这种基因可以是天然的或是嵌合的。例如，将包含该基因的片段和一个组成型表达的启动子连接，该启动子可以在任何条件下和细胞发育的任何时期表达。这种组成型表达的启动子包括花椰菜花叶病毒35S的启动子等。另一方面，也可以将该基因和一个组织特异性表达的启动子或发育时期特异性表达的启动子或精确环境诱导的启动子连接，这些启动子称之为诱导型启动子。这样，环境的改变，发育时期的不同都可以改变该基因的表达，同样，也可以将该基因的表达限定在某一个组织内，使由该基因诱导的抗病反应得到人为的控制。其中环境条件包含病原菌的攻击、厌氧条件和光等，组织和发育时期包括叶、果实、种子和花等。

根据本发明提供的Pi36基因序列信息(SEQ ID NO：1)，本领域技术人员可以通过以下方法容易地获得与Pi36等同的基因：(1)通过数据库检索获得；(2)以Pi36基因片段为探针筛选水稻或其它植物的基因组文库或cDNA文库获得；(3)根据Pi36基因序列信息设计寡核苷酸引物，用PCR扩增的方法从水稻或其它植物的基因组、mRNA和cDNA中获取；(4)在Pi36基因序列的基础上用基因工程方法改造获得；(5)用化学合成的方法获得该基因。

本发明提供的稻瘟病抗性基因Pi36具有重要的应用价值。应用之一是将所述的Pi36基因序列连接到任何一种植物转化载体，用任何一种转化方法将Pi36抗病基因导入水稻或其他植物细胞，可获得表达所述基因的转基因抗病品种，从而应用于生产。本发明所述的基因构建到植物转化载体中，可以对所述基因或其调控序列适当修饰，也可以在其转录起始密码子前用其它启动子取代所述基因原有的启动子，从而拓宽和增强植物对病原菌的抗性。

本发明提供的抗性基因的另一个应用是根据所述基因序列信息产生特异性的分子标记，包括但不限于SNP(单核苷酸多态)、SSR(简单序列重复多态)、RFLP(限制性内切酶长度多态)、CAP(切割扩增片段多态)。用这些标记可鉴定水稻或其它植物的抗性基因型，用于分子标记辅助选择育种，从而提高育种的选择效率。

本发明具有如下有益效果：将克隆的抗病基因转入感病的植物，有助于产生新的抗病植物。特别是可以用转化技术在植物中累加多个抗病基因，而不会产生传统育种技术中伴随出现的基因组中不良基因的连锁问题，并且可以缩短育种时间。抗病基因的克隆是克服传统育种中不能在植物种间转移抗病基因的问题的前提。另外，本发明能够进一步提供或应用利用上述DNA片段获得的抗病的转基因植株和相应的种子，以及用本发明的基因或基于该基因的重组体转化的植株或由这类植株获得的种子。可以用有性杂交的方式将本发明的基因转入其他的植株。

附图说明

图1为水稻稻瘟病抗性基因Pi36的图位克隆示意图；

图2.为水稻稻瘟病抗性基因Pi36的高解析度遗传图谱和电子物理图谱；

图3为水稻稻瘟病抗性基因Pi36的部分抗性转化体的选择标记潮霉素基因的PCR(3a)和Southern(3b)检测结果图；

图4为水稻稻瘟病抗性基因Pi36转化植株的抗性鉴定图；

图5为水稻稻瘟病抗性基因Pi36的基因结构图；

图6为水稻稻瘟病抗性基因Pi36编码的氨基酸多肽序列结构图；

图7为水稻稻瘟病抗性基因Pi36及其等位基因pi36表达特性的RT-PCR检测图；

图8为分子标记CRG3鉴定亲本和感病植株的Pi36位点基因型结果图；

其中，图2中A为Pi36位点的高解析度遗传图谱，水平线表示染色体区域，上方为标记/抗性基因，下方数字为标记间的遗传距离(cM)；B为Pi36位点区域的BAC/PAC克隆电子重叠群，水平线表示BAC/PAC克隆，垂直线表示连锁标记的着陆位置；C为Pi36位点的电子物理图谱，括号内数字为各标记位点的重组体数，水平线表示基因组区域，下方数字为标记间的物理距离(kb)。

图3中泳道1-8为抗性基因Pi36的转化苗的潮霉素抗性基因的PCR扩增产物；泳道9为载体pCAMBIA1300质粒的潮霉素抗性基因的PCR产物；泳道10为受体Q1063的非转化体；M为分子量标记DL2000；箭头所指为Hpt基因的部分片段760bp。

图5中绿色方盒表示抗性基因Pi36的外显子，带斜线的方盒分别为5’和3’非翻译区，直线则表示内含子。

图6中带下划线字母为组成推定NBS的6个区域；第590个氨基酸残基反映了Pi36抗感等位基因间蛋白序列的差别，在感病等位基因pi36中均为天冬氨酸；

下部分独立列出的氨基酸残基为C-末端LRR区域。

图7中A为抗病品种Q61在接种前以及接种后6、12、24、48、72h的基因表达情况；actin为内参照；B为感病品种Q13，即LTH，在接种前以及接种后6、12、24、48、72h的基因表达情况；actin为内参照。

图8中P1为抗病亲本Q61；P2为感病亲本爱知旭；S1-S5、S6和S7为F₂感病植株，基因pi36pi36；R1为F₂抗病植株，基因型为Pi36pi36；undigest：2个亲本酶切前的带型；M：分子量标记DL2000；箭头所指为标记CRG3。

具体实施方式

实施例1：水稻稻瘟病抗性基因Pi36的遗传分析及初步定位

如图1，本发明利用图位克隆法克隆了抗性基因Pi36。首先，为了发掘和鉴定稻瘟病新抗性基因，对籼稻抗病品种Q61与粳稻感病品种爱知旭以及丽江新团黑谷(Lijiangxintuanheigu，LTH)2个杂交组合由来的F₂群体(F₂-1和F₂-2)，接种对双亲品种表现分明的非亲和性/亲和性反应的菌株CHL39。结果表明，这2个F₂群体中抗病植株与感病植株的分离比符合3∶1。由此推断，Q61所表现的对接种菌株CHL39的抗性是由一对显性基因控制的。

为了快速地确定主效抗性基因的染色体位置，构建了由40个抗病个体和580个感病个体组成的F₂代作图群体，并利用随机扩增多态性DNA(randomamplified polymorphic DNA，RAPD)标记技术，结合基于混合群体分离分析法(bulked-segregant analysis，BSA)的隐性群体分析法(recessive-class analysis，RCA)，共筛选了1200个随机引物，得到了3个多态性好的标记，BA1126₅₅₀，BA253₄₅₀和OPP09₁₈₀₀。由于这3个标记均位于该位点的一侧，并且BA1126₅₅₀的重复性最好，所以，对该标记进行了克隆和测序。通过标记序列与测序品种日本晴的参考序列进行同源性比较，该标记被着陆到水稻第8染色体上。为了证实RAPD分析的结果，我们从公共数据库中引用了4个序列标签位点(sequencetagged site，STS)标记，S5014、C30376、E60275和C61344，以及3个微卫星(simple sequence repeats，SSR)标记，RM8018，RM1374和RM5647，利用580株高度感病的F₂个体进行了连锁分析。结果表明，该抗性基因位点被定位在第8染色体的短臂上，标记RM8018-RM5647之间5.8cM的区域。由于该区域与第8染色体上已定位的4个稻瘟病抗性基因的位置不同，因此，将这个新基因命名为Pi36。

实施例2：稻瘟病新抗性基因Pi36的精细定位及电子物理作图

为了精细地确定Pi36位点的位置，我们利用公共数据库中的参考序列，开发了5个多态性的标记，1个STS标记R36STS2和4个候选抗性基因(candidateresistance gene，CRG)标记，CRG1、CRG2、CRG3和CRG4，并对580株高度感病的F₂个体进行了连锁分析。结果表明，Pi36位点被精细定位在CRG2-RM5647之间0.6cM的区域，并且与标记CRG3和CRG4完全共分离。为了构建该位点的物理图谱，我们利用参考品种日本晴的细菌人工染色体(bacterialartificial chromosome，BAC)和P1介导的人工染色体(P1-derived artificialchromosome，PAC)克隆，通过生物信息学分析(bioinformatics analysis，BIA)，构建了该位点的电子物理图谱。结果表明，Pi36位点被物理定位在大约17kb的区域内。

实施例3：稻瘟病新抗性基因Pi36候选基因的预测注释及序列分析

为了确定Pi36的候选基因，我们利用日本晴的参考序列，通过3种基因预测软件RiceGAAS(http://ricegaas.dna.affrc.go.jp)、Gramene(http://143.48.220.116/resources/)和Softberry的FGENESH(http://www.softberry.com)对目的基因区域进行了基因预测及注释分析，初步确定了Pi36的候选抗性基因为Pi36-1、Pi36-2和Pi36-3，其中Pi36-3包括了Pi36-1和Pi36-2。因此，将Pi36-3通过以下的基因功能互补实验确认其功能。

实施例4：稻瘟病新抗性基因Pi36的转化与转化体的抗性鉴定

利用长片段PCR(long-range PCR，LR-PCR)技术扩增了一个含Pi36的16.0kb的片段并将其克隆至双元载体转化体系pCAMBIA1300，导入了农杆菌菌株EHA105。将高度感病品种Q1063成熟种子在诱导培养基上诱导愈伤组织。把含有目的基因转化载体的EHA105在YM琼脂培养基28℃培养1天，收集在含有100μmol/L的乙酰丁香酮的MB液体培养基。将水稻愈伤组织浸入菌液20分钟，吸干菌液后转移到MB琼脂培养基培养。转移愈伤组织至含有50mg/L潮霉素的培养基培养，每14天继代1次，继代2次。抗性筛选后，转入再生培养基分化出转化苗，获得了274株转化体。

用CRG标记CRG3对转化体进行了PCR-CAPS检测。本实验使用了2个引物，其中，引物CRG3F为：gctagcaagcatggagttcgt-3’，引物CRG3R为：3’-agcgggtaaggtagcataggt。PCR扩增的步骤为：94℃预变性4min；接下来是30个循环，循环程序如下：94℃变性30sec，60℃退火30sec，72℃延伸2min；最后72℃延伸7min，温度降到4℃即完成扩增。扩增产物用限制性内切酶HinfI进行酶切，体系为10×酶切缓冲液2μl，PCR产物8μl，限制性内切酶HinfI 10U，补加双蒸灭菌水至20μl。

同时，对转化植株进行了潮霉素基因的PCR和Southern blot鉴定(图3)。检测结果证明目基因片段已经导入这些转化体。抗性鉴定结果显示抗性基因Pi36在感病品种Q1063遗传背景下表现了与抗性基因供体Q61相同的抗性，表明抗性基因Pi36已经被成功地克隆了(图4)。

实施例5：Pi36基因的结构

采用移步法对Pi36的DNA序列进行了测定。利用5’和3’RACE反应，获得了Pi36的全长cDNA并对其进行了测序。序列表中的序列1和2分别是Pi36的DNA和cDNA序列。Pi36基因DNA长度为16.0kb，其全长cDNA为3963bp，含有一个3171bp的开放读码框，5’和3’非翻译区分别为65bp和726bp。通过比较基因组DNA和cDNA，发现该基因的开放读码框含有4个内含子和5个外显子，而3’非翻译区含有1个内含子(图5)。

实施例6：Pi36抗性蛋白的结构

Pi36基因编码的蛋白序列如序列表中SEQ ID NO：2所示。抗性基因Pi36编码1个由1056个氨基酸残基组成的蛋白多肽，分子量为120KD，等电点为6.61。利用COIL分析表明该蛋白多肽的第14-45个氨基酸残基有95％的可能性为CC(coil-coil)结构域。Pi36蛋白属于NBS-LRR蛋白，NBS结构域中保守的kinase 1a(GMGGLGKTT)位于该多肽的第206个氨基酸残基；kinase 2(IVIDDIWDKP)位于该多肽的第286个氨基酸残基；kinase 3a(GSKILVTTRK)位于该多肽的第310个氨基酸残基。而该蛋白的C-末端的581-921个氨基酸残基为13个LRR重复，其亮氨酸含量为17.0％。

数据库比较分析发现编码Pi36蛋白的核苷酸序列与大麦白粉病抗性基因Mla1和Mla6分别有40％和37％的同源性，与水稻稻瘟病抗性基因Pib、Pita和水稻白叶枯抗性基因Xa1分别具有30％、27％和24％的同源性。

实施例7：Pi36基因的表达特性分析

用RT-PCR对Pi36基因的表达模式进行了分析。从抗病品种Q61和感病品种LTH的叶片中提取总RNA，利用反转录试剂盒SuperScript^TM ReverseTranscriptase II进行反转录cDNA第一条链的合成。RT-PCR引物为R36RT F：CGAGCTGCTGAAGGAGAAGT；R36RT R：AGCTCATCCCTTGGCTCATC。PCR反应为：94℃预变性4min；接下来是35个循环，循环程序如下：94℃变性30sec，56℃退火30sec，72℃延伸1.5min；最后72℃延伸7min，温度降到4℃即完成扩增。

实验结果表明，抗性品种和感病品种的接种前后的叶片组织的RNA反转录模板均能扩增出特异的片段，说明Pi36及其等位基因pi36均能在叶片组织中表达，即属于组成型表达的基因(图7)。

实施例8：转化Pi36基因产生的抗性品种的应用

将Pi36基因克隆到植物转化载体pCAMBIA1300，导入农杆菌菌株EHA105，用于转化感病的水稻品种，获得了274株转化植株。将转化体产生的T₁种子进行播种、萌发和接种鉴定，发现其中有35个转化系(T₁)表现抗性分离，而且转化植株的抗性与Pi36基因共分离。这说明可以用Pi36基因转化水稻感病品种，用于生产。

实施例9：Pi36基因序列在分子标记辅助选择育种中的应用

利用本发明提供的Pi36基因序列信息可以产生分子标记，用于鉴定Pi36位点上具有的各种基因型即Pi36Pi36、Pi36pi36和pi36pi36的植株，可在分子标记辅助选择育种过程中加以应用。

水稻稻瘟病抗性基因Pi36及其应用序列表

SEQUENCE LISTING

<110>华南农业大学

<120>水稻稻瘟病抗性基因Pi36及其应用

<130>

<160>2

<170>PatentIn version 3.2

<210>1

<211>14450

<212>DNA

<213>稻属水稻(Orysa sativa L.)

<220>

<221>5’UTR

<222>(2489)..(2553)

<220>

<221>exon

<222>(2554)..(2972)

<220>

<221>gene

<222>(2554)..(11611)

<220>

<221>Intron

<222>(2973)..(3405)

<220>

<221>exon

<222>(3406)..(3834)

<220>

<221>Intron

<222>(3835)..(8904)

<220>

<221>exon

<222>(8905)..(10943)

<220>

<221>Intron

<222>(10944)..(11067)

<220>

<221>exon

<222>(11068)..(11334)

<220>

<221>Intron

<222>(11335)..(11593)

<220>

<221>exon

<222>(11594)..(11611)

<220>

<221>3’UTR

<222>(11612)..(11780)

<220>

<221>Intron

<222>(11781)..(11903)

<220>

<221>3’UTR

<222>(11904)..(12459)

<400>1

水稻稻瘟病抗性基因Pi36及其应用序列表

cttcgacacg caaacgtgca cacagccacc tatcgtgacc tcctcagcct ccacgcatcc    60

gtacgtcctc tagtgcagcc actaaactgt aagtccaagt tctaaattgt aaccgacttt   120

gtacatatat tcgatacaaa ctctaacaat atcttcacta accctatctt agccgaataa   180

caactaaaat tttttctatt caaacatagc taaaccatgg ttaacaaata caacaatcct   240

aacaaccaca taaggtaaca gttggaatcg aacgctatat tgttacaaca ctgatacatt   300

tgtcgtgcac aggtagcttg aaatttgcac aagtcacgaa tattgtcgtc aaacggagat   360

agaacaaatc ctgcaagaag ctctggtaca ctttaaaatg accgctctag tcctcaaaat   420

ccagagatct cctacaaagc aattttagga tacggctcgt ttaaattgta aaagatgtat   480

tgtgtaattt caacagactt gacgatgcac atgctgattt ttaagagctt accattgtcc   540

actttaatgc acctggacca cggtcggttt cacagttcgc cgcaccaacc ggttccggaa   600

ggtgagcgtg ctggctgctg agaagaaaaa tagcttccca acgtggcttc aattaggggg   660

tgtttaggag agagggactt accaaacacc cccttaatca acgtgtggct gtcttttcag   720

atgacccttt tcctaagccc tctctctcat ttttcacaag cacatttttc aaattgttaa   780

acggtgtatt tttttaaaaa aaaagtttat atactaaagt tgcttaaaaa attaaattaa   840

ttatttttta aaaaaatagc aaatgtttaa ttaattacgt tctattggac cgtttcggtt   900

ttcgtaggta ccatgcacct ccccatccga ctgtagcgaa catcttccca tccggctgta   960

gcgatcacac ccagagggtc tcatgtgacg cgttcgaggt ggagccaacg gcgtcttaca  1020

agttgagtaa cttgagtgat aaacacagta ttgcctacca cgcgttttga aacttaatta  1080

cacgtgtttt cgccctcttg ttatgttcat gctccaatgg aaacaaacaa atcggatata  1140

acacttcaat cctgaggcag gattttgtat gcaaaatggt actatactca gataaatggc  1200

tcatcaatta taatgatggg tttacaatta caaatgaaga tatttaagca acttaattta  1260

ttcattctag ttgcataggt ctagaactcg ttgcatttgg agtgagatgg agtaaatatt  1320

atttcacatt ttgtcaattc aaacatttac acgttttaat gttttttcga gaatggatgg  1380

cgtgagctcc gataagagta ctataagatt ataaaccagc tataaacata ttttaagaaa  1440

ataaaagagg agagataaga gcaacggatt ataaatttat agccagctgc agcatagact  1500

ccaagataca tgtgtgtatg ataggtgaga tcaaacatta atcatatagt acatgtttat  1560

agataactat tgtatgaatt gactttagaa gatttggagc caatagttga atatactact  1620

cccttctttc caaattaatc atcatgtaag aataggtaca acagcagatt attagccagc  1680

tataaacata ttttaatgag ataaaagatg agagagaaga gcagcaggct atagatctgt  1740

agccagctat aacacggact ccaagacgca atgggtgtat gacatgtggg accatatatt  1800

aatagtataa taagcaacta ttgtatgaat tggctattag atcggctata gatgaattgg  1860

agctagtagt gggctatact agtaaacttg ctctaataga atttaaaatt tttcaaattg  1920

gtcattatat aactgcatgg acacggattt catcggaata caattaatac agtatgagag  1980

aatatgtgta tgctagggtg taattgacat gaggttttaa ttgagtatag gagaatgtgt  2040

gtatgttgtc ttgattgatg tgatttaaat tgtcattggt cttggtgcat aaaattatac  2100

tccctccgtt ccataatata aggcacaact atttttttta tgttccataa tataaggcat  2160

acatgcatgt atacaattaa ttaggacatc ttctccatta aattattatt tttttaaatc  2220

attcactctc aagatctcta aatttattgg atgcatgcat gtattatatt tattaggatg  2280

水稻稻瘟病抗性基因Pi36及其应用序列表

atccaaatta gaaaataata ataattgttt cttgaaaaag tggttgtacc ttatattttg  2340

gaacatatgg agtatgatga ttaatttggg aaggagggag tattaaactt gctctaaccc  2400

aattgtgaca agtccattaa ttaacctatc agctagtagg ctagtagttg cacatatata  2460

caggagtgca atgtatctgc tcctacccag ctaccaaccc agcaatacca tccactcaac  2520

tcaagtcaag tcaaccacag ctagctagca agc atg gag ttc gtc act ggg gcg   2574

                                     Met Glu Phe Val Thr Gly Ala

                                     1               5

atg agt agc ctg atc ccc aag ctg ggc gag ctg ctg aag gag aag tac    2622

Met Ser Ser Leu Ile Pro Lys Leu Gly Glu Leu Leu Lys Glu Lys Tyr

        10                  15                  20

aat ctg cag aag aac ata agg ggg aag atc gag tct ctc  tcg gcg gag   2670

Asn Leu Gln Lys Asn Ile Arg Gly Lys Ile Glu Ser Leu Ser Ala Glu

    25                  30                  35

ctc cgg cga gcg caa gcc gtc ctc cgc atg gtc ggc gag gtg cca caa    2718

Leu Arg Arg Ala Gln Ala Val Leu Arg Met Val Gly Glu Val Pro Gln

40                  45                  50                  55

gac cag cag aac gag ctg gtg aag ctc tgg gcg agc gac ctc agg gag    2766

Asp Gln Gln Asn Glu Leu Val Lys Leu Trp Ala Ser Asp Leu Arg Glu

                60                  65                  70

gcg tcc tac gac atg gag gat atc atc gac gcc ttc ttg gtt cat gtc    2814

Ala Ser Tyr Asp Met Glu Asp Ile Ile Asp Ala Phe Leu Val His Val

            75                  80                  85

gac gac gat ggc ccc aag cca gcc gac cca cat gtg ctc agg cgc ctc    2862

Asp Asp Asp Gly Pro Lys Pro Ala Asp Pro His Val Leu Arg Arg Leu

        90                  95                  100

ggc aag cag gtg aag aaa ctg ttc aag aag acc aag cat cgc gtc acc    2910

Gly Lys Gln Val Lys Lys Leu Phe Lys Lys Thr Lys His Arg Val Thr

    105                 110                 115

atc gcg gac gca atc caa gaa atg gaa aag aag ctc ctg gag att gat    2958

Ile Ala Asp Ala Ile Gln Glu Met Glu Lys Lys Leu Leu Glu Ile Asp

120                 125                 130                 135

gca agg cat ggc ag gtatggaaaa tatttactcc ctccgtccca aaaaaaattc     3012

Ala Arg His Gly Arg

aatttctaag tttccgtatc caacatttga ttgtccgtct tatatgaaat ttttctatga  3072

ttagtatttt tattgttgtt agatgataaa acataaataa tactttatgc gtgcgtgatt  3132

tatcttttta ttttttttat aattttttca aataagacgg acggtcaaac gttgaacacg  3192

gaaacccaaa aattgagtta ttttaagacg aagggagtaa tatggaagaa atcttaataa  3252

tatgttgtat tatattgcat tatattgatc tgtcatgagg tacatacata tatagtacga  3312

gttatagctg atttatctca agaattctat ttcttgtagt cttacattcg tcatctcttg  3372

atgttgtctc ttgactctca tctattacta cag a tac cca gtt gat aac ata     3424

                                       Tyr Pro Val Asp Asn Ile

                                                       145

gtt atc cct gca cgt ccg acg cct att gat cct cgc atc cta aat att    3472

Val Ile Pro Ala Arg Pro Thr Pro Ile Asp Pro Arg Ile Leu Asn Ile

            150                 155                 160

gag aaa atg gca aac aat ctt gtt ggc att gat gag cca agg gat gag    3520

Glu Lys Met Ala Asn Asn Leu Val Gly Ile Asp Glu Pro Arg Asp Glu

        165                 170                 175

ctt att aag atg ttg tca caa cat gag cgt gac aac aat ctt aat acg    3568

Leu Ile Lys Met Leu Ser Gln His Glu Arg Asp Asn Asn Leu Asn Thr

水稻稻瘟病抗性基因Pi36及其应用序列表

    180                 185                 190

tcc aat agg aag aca aag ata gta tac gtc gtt gga atg ggt ggt ctg    3616

Ser Asn Arg Lys Thr Lys Ile Val Tyr Val Val Gly Met Gly Gly Leu

195                 200                 205                 210

ggc aaa acc acc ctt gcc aca gca gta tat gag aag att aaa gtg ggt    3664

Gly Lys Thr Thr Leu Ala Thr Ala Val Tyr Glu Lys Ile Lys Val Gly

                215                 220                 225

ttt cct ttg aat gct ttt gtt cca atc ggt caa aat cct aat atg aag    3712

Phe Pro Leu Asn Ala Phe Val Pro Ile Gly Gln Asn Pro Asn Met Lys

        230                 235                 240

gca atc ttg tgg aac att ctt cat cgc ctt ggc tcg gag aag tac ctg    3760

Ala Ile Leu Trp Asn Ile Leu His Arg Leu Gly Ser Glu Lys Tyr Leu

        245                 250                 255

aat tgt cca aat att gag atg ttg act gta cag gag ctc atc ggt gaa    3808

Asn Cys Pro Asn Ile Glu Met Leu Thr Val Gln Glu Leu Ile Gly Glu

    260                 265                 270

ctc aag caa ttc atc aag gga aag ag  gtatgaatat gacgacccac    3854

Leu Lys Gln Phe Ile Lys Gly Lys Ser

275                 280

caaatttgtt tttatatact acctcttttt cttaataaat cacgccattg acttttgaaa  3914

taacgtttga ccttcaaaaa tttagtgtaa atatgctcaa gtataagtca taccttaaag  3974

tttctttaat aataaaacaa gtcacaacaa aataaatagc atttatataa tttgtttgaa  4034

tatgactaat ggttaaacgt catatcaaaa gtcaacatct tctgttagaa tacagaggga  4094

gtatatgtcc ataacctatg ctaccttacc cgcttatgaa tgaatatttg cgctacacac  4154

aatcatagtc ttaaagctat ttaatttgtc tttgcgcttg ctatttgaaa aaaaaatgat  4214

gtacctcttt ttaatcgatc acagtaatag tccgggttta cccgttcttt aggctccact  4274

tacatcatga gcaagctaaa aatcgtgatc aagatattaa acctaaaatg accttgatgt  4334

cacctagagg ggtgtccatg gagcgactcc tcggacagcg aggagtggag acccctcccc  4394

gagtttgaag attcagccag ggggttagca gtgcaagacg atagaaaaag ccaaacagag  4454

aaaagatttg tggggcctga tctccccgcc aagcaaaagt caccagagtt tatacaggtt  4514

caagccaccc ggaggtgtaa caccctactc ccgtgttggt tttgttgttt ttcttatatc  4574

agcttagaac aagggatgcc tttttgggct acagacaaga agttctgatc caaaaaatcc  4634

aactcttcat ccgtagcttg tccccttcct tttatagatc aaggatgggc tcacaattct  4694

acaaatctac ttccttgtct tgtctatcag ctgtcttgtc aatgcctgtt ggttccctca  4754

cacagtcttc gagtaaccca ctgacatttg aagcttgcat tgcccccaag cacccgggct  4814

tctgtccgag acagctgggt cgtgccagca tgttcaccat gtggcgagtg gtgggcctgg  4874

tgagacccga cctgcctgaa acagcaccac ggtttcgttt ctacccgttt ggctaaatca  4934

ggcagcatgg ggcatgtgcg acacgtgtcc aagatgccac tggttctaat gactcagtga  4994

tggtgccttg tccacatcct ttcagctcca gactagctgg ggctccccca taaacctgtt  5054

taatttatgg cggagaggac tacttcacaa cagcccgtgg agcacgccca acaccccagc  5114

tggtcctgag gtcgcgccct tgcacattta tggagatagt  ttagctattc ttacacaagc 5174

ttcttgaaga tatcttagat aatatctaat gtttcgacag agacattcct ccttaatcaa  5234

gggacgtaac ctacatgcag acaaaggtga gcaagctaac aaggcaagca aaaggggata  5294

tcggcaaaag tagttaatgg gttttcacaa acaacaacta aactactagt tgcaccaaat  5354

水稻稻瘟病抗性基因Pi36及其应用序列表

agcaaaactg gaggagtgag agagagagat accaccggga ttcttgcaaa ctgatatgtt    5414

actgaatcta ctctccgttg aggagctcac aatgatatat atatatacat atatatatat    5474

atatatacat atatatacat atacatatat atatacatac atatacatac atacatacat    5534

acatacatac atacatacat atatacatac atacatacat acatacatac atacatacat    5594

acatacatac atacatacat acatacatac atacatacat acatacatac atacatacat    5654

acatacacac acacatacat acatacatac atacatacat acatacatat atatatacat    5714

acatacatac atacatacat acatacatac atacatacat acatacatac atatatatac    5774

atacatacat acatatatat atatacatac atacatatat gtatacatac atatatatat    5834

aatgtttcga cactcttcgt tgtagaggaa tgtaaaactc acaaggagta aggtgtgccc    5894

gggtcctagg acgaggccgg acataggcat acctcagttt atctcttaat catatgtctc    5954

caccctccac cccttgtaga aagtgtgacc tatgaagatt aaggtaagcc caggacccag    6014

gtcaaggccg tgtctgaggc aaaccttagc ttattcttct taagatgtat atcttgtagg    6074

tctctacgct cgtctacgta ggacttacaa ggactaaggt gagcccgaga cccaggacaa    6134

gacagggtcc gaggcatacc ttaggctaca ttcttaagat gtagatttta tacgtctcca    6194

cactcctctt ctcagagcaa tgtgtgactt gtgcggacta aggtgagccc gagacccagg    6254

ataaggccga gtctgaggca taccttagtt tattcccttt aagatgtaga tcttgtaggt    6314

ctctacgctc ctctcaccga gtctgaggca cacgttacat tcttaagatg tacttcagtg    6374

gacctgggtc ccgaagcgga actaggccta ggaccaacct tattactcag agttttaagt    6434

cgttgtactt ttgacatgca tcattccccc ttaatcaagg ggagtaacct acatgcagac    6494

aaaggtgggc ccgggaccaa ccaaggtggg tccctagtga cataacccta tttttaagga    6554

tggtttaagc atgccattta tcttatttat aattgttttg ctgggggaaa tgggtagcct    6614

aattcccatt tcaccgacaa ggggggtaaa taagcgttta taacttttat gtaaatgtgg    6674

aggctaaaca tttcagatat tccaaaatat ttttggatat tctaggatat tttcagatat    6734

tccgaaaatc tcaggttttc gagcaagcta acaaggcaag caaaggggat atcggcaaaa    6794

gtagttaatg ggtttgcaca aacaacgact aaactactag ctgcaccaaa tagcaaaact    6854

agaggagtga gagagagaga taccaccgag attgttgcaa actgatatgt tactgaatct    6914

acactccgtt gaggagttca caatgagcca agtcttttcc aaccctatcc tcgtgaagtt    6974

gcataaatgc actcatcttt tcattaaggg tatctcttcc ctttcagagg tgagatctga    7034

ccttcacaaa ctccctcggc acaccaccta caaatcgatg tctcgaggtc aactcctagc    7094

cgtccaggta tcctcaacca ccaagagtta caaatgcaac aaagatttct tggggatgaa    7154

tcgactgctc gacaaatctt cacgaaatca acaccaagca ctcaaataaa ctcaaatcaa    7214

ccactcacac atacacgaaa tccgagatgg aagatcggtg gagagtaggg atggcaattt    7274

gacccgattg tccgtttacc catgggtaaa aaccctaata gagttgggtt tgttctacat    7334

ttagtatcca tgggtttctt attgggtcaa aacctgtacc caatgggcaa gcgggcatgg    7394

gcatgggtac ccatgcccgc ttcgcccatt tacccgcgaa aaacaactga catgtgggcc    7454

ctcaatcaac ttaatataaa aagcaccatc taattctagg gttttcttcc tttcctccac    7514

agccgctact ccttctcttc ccctttcctc tacagctacc actcctcttc ctccacagac    7574

水稻稻瘟病抗性基因Pi36及其应用序列表

catagccacc actccaggct gccaaggcgc caggctgaca cgggacagcc ggacgagagg 7634

ggcgcgcaat tcgccaccac ctcccacctc cgctcgtcgc tggcggcccc accctccagc 7694

cgacgacttt catagcggcc acgggggagg gggggcaacc aaggaagctg cgaccgccgt 7754

cgccttctac cccgtctgcg ccgagctcct ctccaaccag tcgtcgatgt cctctagcca 7814

tcggccgcca gcccgccaca ccttcctcca gtcgcgcctc ccacctccgg tcgccgccgc 7874

ttcctccaga cgcgcctccc acctctggtt cccagatgtg acgggtaaac gggcatgcct 7934

gcgggcacat ggcgcctacg ggggacgggc attggaagtg ctccttgccc atcatgtagt 7994

aacgggcatg cccgcggaca tgaattacct cgcggacacg ggatgggtag tcactacccg 8054

tgcccgttgt gcccgactgc catccctagt ggaaagtaag aagtgagagg gcaaggctca 8114

aagtgaatct caaatcaaca caagcaaggg gcacaagaaa gcaatggagc gagcaatctt 8174

gacttggggt ggagggggtt atttataacc acaacctcaa atctgattgt tggaggcaaa 8234

tcaagattca actttttgaa aaattttgaa aaccattttt ggacaagtct gaaaaacaca 8294

agaaagcaat ttcatttgag caaccatttt ccgaatttcc aaaaaaattt cggaattatt 8354

ttcggaagtt gctacaatac ttttggaaat tccaaaaagt ataaattaca gcacaaactc 8414

agcaaaaaaa aggaaaaata acatttcaga aattctgaaa atatttcgaa aaaatctgaa 8474

atcaccagag agctttttca caaattttat cattttggaa attccaaaaa ccattttcgg 8534

aaaattctag aaaacaccaa aagatgtgtt ggccaccgcc gtcacgtgag catgtcacat 8594

ttgaactcat gacggaggag cacactgccc acttgtcagc gttatccctg tcactattct 8654

agtgcaccac tggttcctag ctacaagacc gtcgtgccca cacattatcc aaaagcacat 8714

gccaatgcat aggctaatga ataattaatt gcaatatctc acttttaatg catgtttatc 8774

tctcttatct agattttctt cggcactaaa aattattgct ccttcacata taaaaagaaa 8834

accacatctt attgatgact cgtaattttc agtgattggg gtgcttatac agttcttcta 8894

ctattctagg t ttt tta tcg tta tag atg aca tat ggg ata agc cat cat  8944

             Phe Leu Ser Leu    Met Thr Tyr Gly Ile Ser His His

                 285                     290                295

ggc aaa tac tcg aaa gtg gtt tac aag ata atg att acg gaa gta aaa     8992

Gly Lys Tyr Ser Lys Val Val Tyr Lys Ile Met Ile Thr Glu Val Lys

                300                 305                 310

tac ttg taa cta ctc gta aat ctg agg ttg caa caa tta tca gcg atg     9040

Tyr Leu     Leu Leu Val Asn Leu Arg Leu Gln Gln Leu Ser Ala Met

                315                 320                 325

tgt aca ata tga aac cac ttt ctc atg ata act cta aag aat tat tgt     9088

Cys Thr Ile     Asn His Phe Leu Met Ile Thr Leu Lys Asn Tyr Cys

                330                 335                 340

ata caa gaa ctg gta gtg aag gca aat ctc ttg aca gtt cat caa ctg     9136

Ile Gln Glu Leu Val Val Lys Ala Asn Leu Leu Thr Val His Gln Leu

                345                 350                 355

agg cat gtg aca aga ttt tga aga aat gtg ctg gtg tgc cat tag cta     9184

Arg His Val Thr Arg Phe     Arg Asn Val Leu Val Cys His     Leu

        360                 365                 370

tca tta cga tag cta gct tgt tgg cta gta gat cag gtc tgg act ggt     9232

Ser Leu Arg     Leu Ala Cys Trp Leu Val Asp Gln Val Trp Thr Gly

                375                 380                 385

ctg agg tgt aca gag cta ttg att ttg gag aag aag aca act atg aaa     9280

Leu Arg Cys Thr Glu Leu Leu Ile Leu Glu Lys Lys Thr Thr Met Lys

            390                 395                 400

水稻稻瘟病抗性基因Pi36及其应用序列表

tgg caa ata cta aaa gga tat tgt ctt tta gct act acg atc tgc ctt    9328

Trp Gln Ile Leu Lys Gly Tyr Cys Leu Leu Ala Thr Thr Ile Cys Leu

        405                 410                 415

cac att taa aga att gtt tgc tct atc taa gca tgt ttc cag aag att    9376

His Ile    Arg Ile Val Cys Ser Ile    Ala Cys Phe Gln Lys Ile

    420                 425                 430

ata aaa ttg aca aaa atc att tga tat gga tgt gga tag ctg aag gtt    9424

Ile Lys Leu Thr Lys Ile Ile Tyr Gly Cys Gly Leu Lys Val

        435                 440                 445

ttg tcc ctg aga aac aaa aca caa att tag gat tat atg agc ttg ggg    9472

Leu Ser Leu Arg Asn Lys Thr Gln Ile    Asp Tyr Met Ser Leu Gly

            450                 455                 460

aga gtt act tca atg agc tga taa ata gaa gca tga tcc agc caa ttg    9520

Arg Val Thr Ser Met Ser         Ile Glu Ala      Ser Ser Gln Leu

        465                             470

aga atg aat ttt ttg ggt gta tag aag gtt tgt cgt gtt cca tga tat    9568

Arg Met Asn Phe Leu Gly Val     Lys Val Cys Arg Val Pro     Tyr

475                 480                     485

ggt gct cga tct agc tcg ttc att gac aag tga aca aaa ctt tgt cac    9616

Gly Ala Arg Ser Ser Ser Phe Ile Asp Lys     Thr Lys Leu Cys His

    490                 495                     500

tgt att gga taa cga tga gca acg gaa acc tga aag cac caa tgc tcg    9664

Cys Ile Gly     Arg     Ala Thr Glu Thr     Lys His Gln Cys Ser

    505                         510                 515

tag gtt ggc cct gca ccg tac gag tat cac gag cta tcg att tgt taa    9712

Val Gly Pro Ala Pro Tyr Glu Tyr His Glu Leu Ser Ile Cys

            520                 525                 530

tat gga tat gaa gaa agt gag gtc att tgt tgc cac tga gtg caa taa    9760

Tyr Gly Tyr Glu Glu Ser Glu Val Ile Cys Cys His    Val Gln

                535                 540

tgg caa taa tag tgt ggc acc acc aag gtt cca agt ttt acg tgt gtt    9808

Trp Gln    Cys Gly Thr Thr Lys Val Pro Ser Phe Thr Cys Val

545                550                     555

gtc ctt gga caa atg taa tgg tat gga gga tta tta cat aga aag tat    9856

Val Leu Gly Gln Met     Trp Tyr Gly Gly Leu Leu His Arg Lys Tyr

    560                     565                 570

ttt gca gta tgc tgg aag gct ggg tca cct gag gtg cct cca gct ttc    9904

Phe Ala Val Cys Trp Lys Ala Gly Ser Pro Glu Val Pro Pro Ala Phe

    575                 580                 585

ctc aca cac aga gtt tca tag gct ccc taa aga att agg aga tct caa    9952

Leu Thr His Arg Val Ser    Ala Pro    Arg Ile Arg Arg Ser Gln

590                 595                           600

gtt tct aaa aat act gga ctt ggg tga ttg tgg cgg tac aat aga aga   10000

Val Ser Lys Asn Thr Gly Leu Gly Leu Trp Arg Tyr Asn Arg Arg

    605                 610                 615

gct gcc gga gga gtt ggg tct cct gac aca ttt gtt gtg tct acg tat   10048

Ala Ala Gly Gly Val Gly Ser Pro Asp Thr Phe Val Val Ser Thr Tyr

    620                 625                 630

tcc tcg cag att gga gat gtt gcc agc tgg ttt gat cgg aaa act gac   10096

Ser Ser Gln Ile Gly Asp Val Ala Ser Trp Phe Asp Arg Lys Thr Asp

635                 640                 645                 650

atc gct gca aga gct atg cat aag tct tat cga aga ggt cgc tgt aag   10144

Ile Ala Ala Arg Ala Met His Lys Ser Tyr Arg Arg Gly Arg Cys Lys

                655                 660                 665

gca ctt tgt gca gga gtt ggg caa cct cag aga act gag ggt gct cta   10192

Ala Leu Cys Ala Gly Val Gly Gln Pro Gln Arg Thr Glu Gly Ala Leu

水稻稻瘟病抗性基因Pi36及其应用序列表

            670                 675                 680

tgc caa aat tta tat agg gct gaa aga tga gag cat gca gag aga ttt    10240

Cys Gln Asn Leu Tyr Arg Ala Glu Arg     Glu His Ala Glu Arg Phe

        685                 690                 695

tct aca gtc ctt agg ctg tct aca taa ggt cca cac tat gaa tat ata    10288

Ser Thr Val Leu Arg Leu Ser Thr    Gly Pro His Tyr Glu Tyr Ile

        700                 705                 710

tag cat tga agt aag gga atg cac cag acc aga tgc agc agg ttc tgt    10336

His         Ser Lys Gly Met His Gln Thr Arg Cys Ser Arg Phe Cys

                715                 720                 725

gtc ctg tcc tcg gct ctg gca gct gtc att gcc atg cat caa gtt ttt    10384

Val Leu Ser Ser Ala Leu Ala Ala Val Ile Ala Met His Gln Val Phe

            730                 735                 740

tag cct acc tgt gtg gat taa ctc atc aac tct tgg ttg cct ctc gca    10432

Pro Thr Cys Val Asp Leu Ile Asn Ser Trp Leu Pro Leu Ala

        745                 750                 755

tct aga cgt gaa agt aca ggt tgt gag aga gca gga cat gga aac cct    10480

Ser Arg Arg Glu Ser Thr Gly Cys Glu Arg Ala Gly His Gly Asn Pro

            760                 765                 770

tgg aag gct ccc aat gct ctg tta cct caa att gga ttc cca ata tac    10528

Trp Lys Ala Pro Asn Ala Leu Leu Pro Gln Ile Gly Phe Pro Ile Tyr

        775                 780                 785

cag gct aat aag cat taa gaa gcc tgc tga tga tgg cta ctt cca aaa    10576

Gln Ala Asn Lys His    Glu Ala Cys Trp Leu Leu Pro Lys

    790                    795                 800

att gag att ctt taa aac tcc tea ttc att tgt ccg gtt tga tct tca    10624

Ile Glu Ile Leu     Asn Ser Ser Phe Ile Cys Pro Val    Ser Ser

            805                     810                    815

tgg ttg cga gtc cag cag tgg agc atc tag ctt cat gcc aag act tga    10672

Trp Leu Arg Val Gln Gln Trp Ser Ile     Leu His Ala Lys Thr

                820                     825

aca cat tga att cag tgt cga tgt tcg gtt cct aaa aga tgc agc aga    10720

Thr His     Ile Gln Cys Arg Cys Ser Val Pro Lys Arg Cys Ser Arg

830                     835                 840

cct gca tgc tgg tct taa caa cct gct tgc agg ctt caa tga ctt tgg    10768

Pro Ala Cys Trp Ser     Gln Pro Ala Cys Arg Leu Gln     Leu Trp

845                     850                 855

aag aac ttc gct caa gag tgt cga cgc tag gat cca ctg caa gga tgc    10816

Lys Asn Phe Ala Gln Glu Cys Arg Arg     Asp Pro Leu Gln Gly Cys

    860                 865                     870

cct tgc tgc gga ggt gca gga agc cga ggt ggc att ggc aaa tgc agc    10864

Pro Cys Cys Gly Gly Ala Gly Ser Arg Gly Gly Ile Gly Lys Cys Ser

    875                 880                 885

aca cgg cca tcc caa ccg tcc agt cct tcg aac tga tat ggc ata tga    10912

Thr Arg Pro Ser Gln Pro Ser Ser Pro Ser Asn     Tyr Gly Ile

890                 895                 900

gag gat gat gcg ctc acc tga tga cga taa g gtacgtgtat gcacagtacg    10963

Glu Asp Asp Ala Leu Thr         Arg

    905                         910

taatgtactt agatcatttc aatcgatttt ccttatgctg gttttctgcc tacatatata  11023

aaatctgatc ttaattattt cttgtgctta tatatatttt tcag cc aac aag ctg    11078

                                                 Ala Asn Lys Leu

gtc cga tca aaa att ttt tga gat aca tgt cta tcc gtc gtc gaa tga    11126

Val Arg Ser Lys Ile Phe     Asp Thr Cys Leu Ser Val Val Glu

915                 920                     925

水稻稻瘟病抗性基因Pi36及其应用序列表

cca tca tcg tta cct tag cta cct ccg gtt gtt gaa gaa gcc acg cct   11174

Pro Ser Ser Leu Pro     Leu Pro Pro Val Val Glu Glu Ala Thr Pro

    930                     935                 940

gga gaa gct tat agt caa cat ata tgt gtc caa gga tgg tat ggt tgg   11222

Gly Glu Ala Tyr Ser Gln His Ile Cys Val Gln Gly Trp Tyr Gly Trp

    945                 950                 955

gga tgt gga tga agc tgt ggc agc tgc gag gaa cgt agt cga cca tca   11270

Gly Cys Gly     Ser Cys Gly Ser Cys Glu Glu Arg Ser Arg Pro Ser

960                     965                 970

tat caa cca tcc aac act tga gat aaa tag aat gga aga aag tat ttc   11318

Tyr Gln Pro Ser Asn Thr     Asp Lys     Asn Gly Arg Lys Tyr Phe

975                 980                         985

tga cca aca tca aca g gcaagatata tctctcttct tgagctcgtc cccaatattg 11374

    Pro Thr Ser Thr

        990

tactacagag aaacccagtt aatttgtaac accaaccatc acattctgaa tcatgtttgc 11434

cttttaattg tttttatgca tactctacat gagagtgcta tatatatttt gtttcacttg 11494

cagttgctca tagtcatttc acaagataca tatgcatggt ggtagactgc taaaactata 11554

gttcatccta acatagcatt attttttgac tgtttctag gt  ccc tga aaa taa    11607

                                           Gly Pro     Lys

                                                       995

ttg a gtggcaagct gttcatttga aggttaagat tggcacagtg atggcacaat      11661

Leu

attaatgaat ccgagccaga ctagacggga agctgtcata gcattgacta atctgtaatc 11721

cgatttcaaa atgcaggata ttcggatcaa tttcctcata tgtcgtctac tcttttactg 11781

taagtatgac actttatctt ttatctcatt tatgtatctt tcgtaagtgg cacagtaata 11841

aggtgacatc ccattgttat tcccacacgt ttgtaaccaa attctttaat aattgagtgc 11901

agttctggtg catgtttgat tctctgcatt tggtccaagc agaggttaca gcacattatc 11961

aacggagaaa ataactgaaa aaaggtgatg ataaacagaa tattatgggt gctgtagcat 12021

aattgactct gcacctgatc accctcctca tgggttggta agcacaacag cttgccatct 12081

tattgctgta caatcttttg tgaatgatga taggtgtaat tggatatgtg tgctggagaa 12141

aaaatgctca atccaagtga caaattgcgc acttgttttg atctttaatt ccctttcaga 12201

gtgatctact ctaaggacaa tcttggatca cccttggatg aaaaacttaa ggattggatg 12261

ttggacattt tacctttgat aggcctaaaa acttcatgta tatattatat ccaaactaga 12321

ggttataagt gtgttttggc tatgtgcatc atagctatgc aaatgccggg agtatgctca 12381

acatagttgt atcgcctcat tgtaattgac tgcgttcaat aaaatcttcc attatctaaa 12441

aaatggaaag cttcaatcca ccaacagagt catggccaca tgattccctc attggacacc 12501

gaaagattca aagaaagcag acttcaggct gtaaaattgt ttgtgaaaac cttcatgttg 12561

catgaatgca agagtgacct tgaatatgtt gcttaatttt tcagattatg tgtttcacat 12621

tttctaattt agtatactgt gaagtttgcg ggggaatgta tagatttagt tgatgaattc 12681

agtagagcaa acacaaagta caggtacaaa acaataacat gatgggattc agatctcaga 12741

aggtgcacag attcgtaact gtgaacctac agaggcacaa tgcaacaaca ggtcaccaaa 12801

taatatctca actgagtaac aactaaaaat cattttactt gaacaacttg cccaaataga 12861

水稻稻瘟病抗性基因Pi36及其应用序列表

gtcatcaaaa ggagaaataa caacttgccc aagaataaga aaatctgatc caccttaaga  12921

tgaccaccct agtcatcaaa atccacatca cttacaaaac agatttagga tcataaccat  12981

caacaacttc aataacgtaa ctggtggcct aggttgtaaa agaaaacatt gaaatatgag  13041

tcatggaatt ccaattcaaa agacttgagt gtgcaaatgc tgaaattaag atgctcaaca  13101

ttctcagcca ttttggggat ggattttgat ttgagggaga ggattaataa tggaaaataa  13161

gatcttcaca atgatgtgga ctcttctatc gccttgtggg caaatgattt tgattttcct  13221

atgcttttca cagttaactg ctgccctgtt ccttcgcatg tgggatctaa atctgcagta  13281

gcatttgcag aattggtgtc gtgatcatag gcataagctc catgctggta aaatgaacaa  13341

ggaaacagtt aaactcaatt catgagaaga aaagaaacag caatgtggag agggggagat  13401

ataccgaacc ttgacaagat gcagggaaag tttctctatg ttaggtgagt gccgaagcaa  13461

gtacagtagt ggatagcagc catcactaaa aaaccactca ccaagtgcca aactcgttag  13521

attgctgaat atcccacacc ttggaagatc acgtagtaat accttttgga ccacctgccc  13581

acaagtttta aactccaaag atgttaaaga taggaatata taaacaacaa ataagagcaa  13641

ttgtaattta aagcatttag cttacatctt cgtagataga tgaagacatc aagtgcaatc  13701

ttgcagcgtt tgaaagagca ctgagaatag tgcagtcaac atcagaatgt ccaaaagaga  13761

acctattaag ggtaaactga agctgattcc actgatgata tgtctaggag ccgaagattt  13821

ctgtttgcaa tctcctctac atgcaggcag ataaggtttg gcatatttat cacaagatgc  13881

tgaaaacctt ctgggtcatc ttgagttcta tctgcagctg taatggtcag aatcttcaat  13941

gtagcagagc aaaacatggt ggccttgatg gcacaatgtc tcaactccag atgcagtagc  14001

tccgggcaac cagaaaagag tttctcgaca aaacggttat caatagaaaa tttgcaaagg  14061

tatacactct tcaagtgcaa ggaagtgaag gggacaggat atccatctac agaaaggagc  14121

ttgccatcac aataattgag tatgccgaga gttttaacgt tgcacctaag ggcatggcag  14181

acccatggat ggatgtcaga ataatcaagg gaatcatcag agctgtcata ggaggtatgg  14241

atacagaaca tatccaacag ggcacagctg cgctgcagga gcaaattgtc aacaaacttc  14301

ttaaaatgtt tcactgtaat gaagttgcac gaatcaacat tgaggtatcc cacagatgcc  14361

cagacgttct gccacctccg agatagcaca caagtctgca cagcctcctt cgctgttagg  14421

aatgtcatga catggtgcaa aagttcgtc                                    14450

<210>2

<211>1056

<212>NBS-LRR

<213>稻属水稻(Orysa sativa L.)

<400>2

Met Glu Phe Val Thr Gly Ala Met Ser Ser Leu Ile Pro Lys Leu

                  5              10                      15

Gly Glu Leu Leu Lys Glu Lys Tyr Asn Leu Gln Lys Asn Ile Arg

                 20                  25                  30

Gly Lys Ile Glu Ser Leu Ser Ala Glu Leu Arg Arg Ala Gln Ala

                 35                  40                  45

Val Leu Arg Met Val Gly Glu Val Pro Gln Asp Gln Gln Asn Glu

                 50                  55                  60

Leu Val Lys Leu Trp Ala Ser Asp Leu Arg Glu Ala Ser Tyr Asp

水稻稻瘟病抗性基因Pi36及其应用序列表

                 65                  70                  75

Met Glu Asp Ile Ile Asp Ala Phe Leu Val His Val Asp Asp Asp

                80                  85                  90

Gly Pro Lys Pro Ala Asp Pro His Val Leu Arg Arg Leu Gly Lys

                95                 100                 105

Gln Val Lys Lys Leu Phe Lys Lys Thr Lys His Arg Val Thr Ile

              110                 115                 120

Ala Asp Ala Ile Gln Glu Met Glu Lys Lys Leu Leu Glu Ile Asp

                125                 130                 135

AlaArg His Gly Arg Tyr Pro Val Asp Asn Ile Val Ile Pro Ala

              140                 145                 150

Arg Pro Thr Pro Ile Asp Pro Arg Ile Leu Asn Ile Glu Lys Met

              155                 160                 165

Ala Asn Asn Leu Val Gly Ile Asp Glu Pro Arg Asp Glu Leu Ile

               170                 175                 180

Lys Met Leu Ser Gln His Glu Arg Asp Asn Asn Leu Asn Thr Ser

                185                 190                 195

Asn Arg Lys Thr Lys Ile Val Tyr Val Val Gly Met Gly Gly Leu

                200                 205                 210

Gly Lys Thr Thr Leu Ala Thr Ala Val Tyr Glu Lys Ile Lys Val

                215                 220                 225

Gly Phe Pro Leu Asn Ala Phe Val Pro Ile Gly Gln Asn Pro Asn

                230                 235                 240

Met Lys Ala Ile Leu Trp Asn Ile Leu His Arg Leu Gly Ser Glu

                245                 250                 255

Lys Tyr Leu Asn Cys Pro Asn Ile Glu Met Leu Thr Val Gln Glu

               260                 265                 270

Leu Ile Gly Glu Leu Lys Gln Phe Ile Lys Gly Lys Arg Phe Phe

                275                 280                 285

Ile Val Ile Asp Asp Ile Trp Asp Lys Pro Ser Trp Gln Ile Leu

                290                 295                 300

Glu Ser Gly Leu Gln Asp Asn Asp Tyr Gly Ser Lys Ile Leu Val

                305                 310                 315

Thr Thr Arg Lys Ser Glu Val Ala Thr Ile Ile Ser Asp Val Tyr

                320                 325                 330

Asn Met Lys Pro Leu Ser His Asp Asn Ser Lys Glu Leu Leu Tyr

                335                 340                 345

Thr Arg Thr Gly Ser Glu Gly Lys Ser Leu Asp Ser Ser Ser Thr

                350                 355                 360

Glu Ala Cys Asp Lys Ile Leu Lys Lys Cys Ala Gly Val Pro Leu

                365                 370                 375

Ala Ile Ile Thr Ile Ala Ser Leu Leu Ala Ser Arg Ser Gly Leu

                380                 385                 390

Asp Trp Ser Glu Val Tyr Arg Ala Ile Asp Phe Gly Glu Glu Asp

                395                 400                 405

Asn Tyr Glu Met Ala Asn Thr Lys Arg Ile Leu Ser Phe Ser Tyr

                410                 415                 420

Tyr Asp Leu Pro Ser His Leu Lys Asn Cys Leu Leu Tyr Leu Ser

                425                 430                 435

Met Phe Pro Glu Asp Tyr Lys Ile Asp Lys Asn His Leu Ile Trp

                440                 445                 450

Met Trp Ile Ala Glu Gly Phe Val Pro Glu Lys Gln Asn Thr Asn

                455                 460                 465

Leu Gly Leu Tyr Glu Leu Gly Glu Ser Tyr Phe Asn Glu Leu Ile

                470                 475                 480

Asn Arg Ser Met Ile Gln Pro Ile Glu Asn Glu Phe Phe Gly Cys

                485                 490                 495

Ile Glu Gly Cys Arg Val His Asp Met Val Leu Asp Leu Ala Arg

                500                 505                 510

Ser Leu Thr Ser Glu Gln Asn Phe Val Thr Val Leu Asp Asn Asp

                515                 520                 525

Glu Gln Arg Lys Pro Glu Ser Thr Asn Ala Arg Arg Leu Ala Leu

                530                 535                 540

His Arg Thr Ser Ile Thr Ser Tyr Arg Phe Val Asn Met Asp Met

                545                 550                 555

Lys Lys Val Arg Ser Phe Val Ala Thr Glu Cys Asn Asn Gly Asn

                560                 565                 570

Asn Ser Val Ala Pro Pro Arg Phe Gln Val Leu Arg Val Leu Ser

                575                 580                 585

Leu Asp Lys Cys Ser Gly Met Glu Asp Tyr Tyr Ile Glu Ser Ile

                590                 595                 600

Leu Gln Tyr Ala Gly Arg Leu Gly His Leu Arg Cys Leu Gln Leu

                605                 610                 615

Ser Ser His Thr Glu Phe His Arg Leu Pro Lys Glu Leu Gly Asp

                620                 625                 630

水稻稻瘟病抗性基因Pi36及其应用序列表

Leu Lys Phe Leu Lys Ile Leu Asp Leu Gly Asp Cys Gly Gly Thr

                635                 640                 645

Ile Glu Glu Leu Pro Glu Glu Leu Gly Leu Leu Thr His Leu Leu

                650                 655                 660

Cys Leu Arg Ile Pro Arg Arg Leu Glu Met Leu Pro Ala Gly Leu

                665                 670                 675

Ile Gly Lys Leu Thr Ser Leu Gln Glu Leu Cys Ile Ser Leu Ile

                680                 685                 690

Glu Glu Val Ala Val Arg His Phe Val Gln Glu Leu Gly Asn Leu

                695                 700                 705

Arg Glu Leu Arg Val Leu Tyr Ala Lys Ile Tyr Ile Gly Leu Lys

                710                 715                 720

Asp Glu Ser Met Gln Arg Asp Phe Leu Gln Ser Leu Gly Cys Leu

                725                 730                 735

His Lys Val His Thr Met Asn Ile Tyr Ser Ile Glu Val Arg Glu

                740                 745                 750

Cys Thr Arg Pro Asp Ala Ala Gly Ser Val Ser Cys Pro Arg Leu

                755                 760                 765

Trp Gln Leu Ser Leu Pro Cys Ile Lys Phe Phe Ser Leu Pro Val

                770                 775                 780

Trp Ile Asn Ser Ser Thr Leu Gly Cys Leu Ser His Leu Asp Val

                785                 790                 795

Lys Val Gln Val Val Arg Glu Gln Asp Met Glu Thr Leu Gly Arg

                800                 805                 810

Leu Pro Met Leu Cys Tyr Leu Lys Leu Asp Ser Gln Tyr Thr Arg

                815                 820                 825

Leu Ile Ser Ile Lys Lys Pro Ala Asp Asp Gly Tyr Phe Gln Lys

                830                 835                 840

Leu Arg Phe Phe Lys Thr Pro His Ser Phe Val Arg Phe Asp Leu

                845                 850                 855

His Gly Cys Glu Ser Ser Ser Gly Ala Ser Ser Phe Met Pro Arg

                860                 865                 870

Leu Glu His Ile Glu Phe Ser Val Asp Val Arg Phe Leu Lys Asp

                875                 880                 885

Ala Ala Asp Leu His Ala Gly Leu Asn Asn Leu Leu Ala Gly Phe

                890                 895                 900

Asn Asp Phe Gly Arg Thr Ser Leu Lys Ser Val Asp Ala Arg Ile

                905                 910                 915

His Cys Lys Asp Ala Leu Ala Ala Glu Val Gln Glu Ala Glu Val

                920                 925                 930

Ala Leu Ala Asn Ala Ala His Gly His Pro Asn Arg Pro Val Leu

                935                 940                 945

Arg Thr Asp Met Ala Tyr Glu Arg Met Met Arg Ser Pro Asp Asp

               950                 955                 960

Asp Lys Pro Thr Ser Trp Ser Asp Gln Lys Phe Phe Glu Val His

              965                 970                 975

Val Tyr Pro Ser Ser Asn Asp His His Arg Tyr Leu Ser Tyr Leu

                980                 985                 990

Arg Leu Leu Lys Lys Pro Arg Leu Glu Lys Leu Ile Val Asn Ile

                995                1000                1005

Tyr Val Ser Lys Asp Gly Met Val Gly Asp Val Asp Glu Ala Val

               1010                1015                1020

Ala Ala Ala Arg Asn Val Val Asp His His Ile Asn His Pro Thr

              1025                 1030                1035

Leu Glu Ile Asn Arg Met Glu Glu Ser Ile Ser Asp Gln His Gln

               1040               1045                 1050

Gln Val Pro Glu Asn Asn

              1055

Claims (4)

1、一种水稻稻瘟病抗性基因Pi36编码的蛋白质，其特征是其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2、编码权利要求1所述蛋白质的水稻稻瘟病抗性基因Pi36的核苷酸序列。

3、根据权利要求2所述的水稻稻瘟病抗性基因Pi36，其核苷酸序列如SEQID NO：1所示。

4、一种含有权利要求2或3所述基因的载体。

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