CN101991715B - 一种白木香果皮提取物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种白木香果皮提取物及其制备方法和用途。以白木香果皮为原料，将其粉碎，加入水、乙醇、乙醇水溶液、乙酸乙酯、三氯甲烷或石油醚作为溶剂，经回流提取、超声提取或冷浸提取，得提取液，提取液经减压浓缩干燥或冷冻干燥，而制得白木香果皮提取物。该白木香果皮提取物，具有广谱抗菌活性，因此可应用于食品防腐剂和制备抗细菌或真菌药物。本发明的白木香果皮提取物，其制备方法简单，成本低，原料丰富。因此本发明的实现，提高了白木香的利用率和经济效益。
Description
技术领域：
本发明属于植物、中药和天然药物领域，具体涉及一种白木香果皮提取物及其制备方法和用途。
背景技术：
全世界瑞香科(Thymelaeaceae)沉香属(Aquilaria)植物有15种以上，大多分布在印度、马来西亚、越南等地，我国沉香属植物只有1种，即白木香[Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg]，它是我国特有的珍稀濒危药用植物，主要分布于广东、广西、海南、福建等地区，其树脂习惯上称为国产沉香、土沉香或莞香。白木香用途广泛，药用价值很高，具有行气止痛、温中止呕、纳气平喘之功效，主治气逆喘息、呕吐、呃逆、心腹疼痛、大肠虚闭、腰膝虚冷等症。传统中医药对白木香的应用，主要集中在于，以其茎、干生产沉香，但由于天然结香和人工结香都比较困难且结香周期过长，取材后对树木的损伤极大，以致对白木香资源的利用率很低。因此，研究白木香其他组织用途是提高该植物资源利用率和经济效益的有效途径。目前白木香其他组织的开发主要集中在叶子及种子的挥发油成分的提取和应用，对其果实资源的开发利用却很少，只报道过有关白木香果实及提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，而有关白木香果皮在抗菌作用方面的药理活性均未见报道。
白木香主要分布于热带、亚热带地区，是一种喜温、喜湿的药用植物，是我国生产珍贵中药沉香的唯一植物资源。近年来，随着人工种植的白木香越来越多，其果皮资源也越来越丰富，为进一步开发和利用白木香这一珍稀的药用资源奠定了物质基础。
发明内容：
本发明的第一个目的是提供一种具有抗细菌和真菌作用的白木香果皮提取物及其制备方法。
本发明的白木香果皮提取物是通过以下方法制备的，包括以下步骤：
以白木香果皮为原料，将其粉碎，加入水、乙醇、乙醇水溶液、乙酸乙酯、三氯甲烷或石油醚作为溶剂，经回流提取、超声提取或冷浸提取，得提取液，提取液经减压浓缩干燥或冷冻干燥，而制得白木香果皮提取物。
本发明通过实验发现，以三氯甲烷作为溶剂，通过冷浸提取获得提取液，提取液经减压浓缩干燥或冷冻干燥，制得白木香果皮提取物。所制得的白木香果皮提取物，在同等用量的情况下，相比于以三氯甲烷作为溶剂，通过回流提取或超声提取得到的白木香果皮提取物，其抗菌作用最强。
所述的回流提取优选是在60～80℃下回流进行提取。在此温度下进行回流提取，提取效率高，并且不会破坏抗菌物质。进一步优选，所述的回流提取是采用水进行回流提取获得提取液，再在提取液中加入乙酸乙酯进行萃取，萃取液经减压浓缩干燥或冰冻干燥而获得白木香果皮提取物。
所述的超声提取优选是在超声波频率为40KHz下超声提取，在该频率下超声提取，提取效率高。
本发明通过实验证实，本发明的白木香果皮提取物对细菌，如金黄色葡萄球菌Staphyloccocus aureus、铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa和枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis，以及真菌，如绿色木霉Trichoderma roseum、黑曲霉Aspergillus niger和黄曲霉Aspergillus flavus，具有抑菌活性。
因此本发明的第二个目的是提供了本发明的白木香果皮提取物在食品防腐剂和制备抗细菌和真菌药物中的应用。
利用本发明的方法制备的白木香果皮提取物，具有广谱抗菌活性，因此可应用于食品防腐剂和制备抗细菌或真菌药物。本发明的白木香果皮提取物，其制备方法简单，成本低，原料丰富。因此本发明的实现，提高了白木香的利用率和经济效益。
具体实施方式：
以下是对本发明的进一步说明，而不是对本发明限制。
实施例1：采用冷浸提取法：
取白木香果皮3g，将其粉碎，加入三氯甲烷200ml，在室温下冷浸24h，过滤，在滤渣中再加入三氯甲烷200ml，在室温下冷浸24h，过滤，合并两次的滤液，减压浓缩干燥，得白木香果皮提取物。
实施例2：采用回流提取法：
取白木香果皮5g，将其粉碎，然后加入石油醚100ml，在60℃下回流提取2h，过滤，然后在滤渣中再加入石油醚100ml，在60℃下回流提取2h，过滤，合并滤液，减压浓缩至干燥，得白木香果皮提取物。
实施例3：采用超声提取法：
取白木香果皮5g，将其粉碎，然后加入体积分数为70％的乙醇水溶液100ml，在频率为40KHZ下超声30min，过滤，再在滤渣中加入体积分数为70％的乙醇水溶液100ml，在频率为40KHZ下超声30min，过滤，合并滤液，减压浓缩至干燥，得白木香果皮提取物。
实施例4：采用溶剂萃取法提取：
取白木香果皮5g，将其粉碎，然后加入水100ml，80℃下回流提取2次，每次2h，过滤，合并滤液，滤液加入乙酸乙酯100ml萃取，萃取3次，萃取液减压浓缩至干，得白木香果皮提取物。
实施例5：采用回流提取法：
取白木香果皮5g，将其粉碎，然后加入乙酸乙酯100ml，在60℃下回流提取2h，过滤，然后再在滤渣中加入乙酸乙酯100ml，在60℃下回流提取2h，过滤，合并滤液，减压浓缩至干燥，得白木香果皮提取物。
一、抗菌活性实验
以实施例1-5中的提取方法提取获得的白木香果皮提取物，按以下的测定方法进行体外抗细菌、真菌活性测定，其结果如表1、表2所示。
1、对细菌抗菌活性的测定
a.白木香果皮提取物的稀释：
将实施1-5例中制得的白木香果皮提取物分别用DMSO(二甲基亚砜)溶解，用生理盐水稀释，配成浓度为50mg/ml的白木香果皮提取物稀释液；
b.菌液的稀释：
测试菌为：金黄色葡萄球菌Staphyloccocus aureus、铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。
将液体发酵获得的上述细菌菌液用生理盐水分别稀释至106cfu/ml的浓度；
c.抗菌活性的测定：
吸取浓度为106cfu/ml的细菌菌液200μl均匀涂布于含有LB培养基平板中，贴上直径为6mm的滤纸片，分别在滤纸片上滴加浓度为50mg/ml的白木香果皮提取物稀释液10μl，以DMSO代替白木香果皮提取物稀释液作空白对照组，以20μg/ml浓度的硫酸卡那霉素代替白木香果皮提取物稀释液作阳性对照组，37℃恒温箱中培养24h，然后测量抑菌圈直径，计算抑菌环宽度，抑菌环宽度＝(处理组抑菌圈直径-空白对照组抑菌圈直径)/2。以抑菌环宽度大小来评价抗菌活性。其结果如表1所示。
表1：白木香果皮提取物对细菌的抗菌作用(
n＝3)
2、对真菌抗菌活性的测定
a.白木香果皮提取物的稀释：
将实施1-5例中制得的白木香果皮提取物分别用DMSO(二甲基亚砜)溶解，用生理盐水配成浓度为50mg/ml的白木香果皮提取物稀释液。
b.抗菌活性的测定：
本测试的真菌为绿色木霉Trichoderma roseum、黑曲霉Aspergillus niger和黄曲霉Aspergillus flavus。
吸取100μl浓度为50mg/ml的白木香果皮提取物稀释液均匀涂布于含PDA培养基平板中，以DMSO代替白木香果皮提取物稀释液作空白对照组，以20μg/ml浓度的制霉菌素代替白木香果皮提取物稀释液作阳性对照组，在平板中央接入一直径为4mm的真菌菌块，26℃恒温箱中培养72h，测量真菌菌块的生长直径，按公式计算抗菌率：抗菌率(％)＝(空白对照组平均纯生长量-处理组平均纯生长量)/空白对照组平均纯生长量×100％。其结果如表2所示。
表2：白木香果皮提取物对真菌菌的抗菌作用(
n＝3)
由上述白木香果皮提取物的体外抗菌活性结果可以表明，本发明的白木香果皮提取物具有广谱的抗细菌和真菌活性，因此可应用于食品防腐剂和制备抗细菌或真菌药物。
二、提取方式的抗菌活性效果比较
以三氯甲烷为溶剂，采用冷浸、回流、超声提取方式获得的白木香果皮提取物，将提取物用DMSO溶解，用生理盐水稀释成浓度为50mg/ml，按以上抗菌活性的测定方法进行体外抗细菌、真菌活性测定，其结果如表3、表4所示。
a.冷浸提取：
取白木香果皮3g，将其粉碎，加入三氯甲烷200ml，在室温下冷浸24h，过滤，再在滤渣中加入三氯甲烷200ml，在室温下冷浸24h，过滤，合并两次的滤液，减压浓缩干燥，得白木香果皮提取物。
b.回流提取：
取白木香果皮5g，将其粉碎，然后加入三氯甲烷100ml，在60℃下回流提取2h，过滤，然后再在滤渣中加入三氯甲烷100ml，在60℃下回流提取2h，过滤，合并滤液，减压浓缩至干燥，得白木香果皮提取物。
c.超声提取：
取白木香果皮5g，将其粉碎，然后加入三氯甲烷100ml，在频率为40KHZ下超声30min，过滤，再在滤渣中加入三氯甲烷100ml，在频率为40KHZ下超声30min，过滤，合并滤液，减压浓缩至干燥，得白木香果皮提取物。
表3：白木香果皮提取物对细菌的抗菌作用(
n＝3)
表4：白木香果皮提取物对真菌的抗菌作用(
n＝3)
综合一和二的实验结果，以三氯甲烷作为溶剂，通过冷浸提取获得提取液，提取液经减压浓缩干燥或冷冻干燥，制得白木香果皮提取物。所制得的白木香果皮提取物，在同等用量的情况下，相比于以三氯甲烷作为溶剂，通过回流提取或超声提取得到的白木香果皮提取物，其抗菌作用最强。
Claims (4)
1.白木香果皮提取物在制备抗真菌药物中的应用，所述的白木香果皮提取物是通过以下方法制备的：以白木香果皮为原料，将其粉碎，加入水、乙醇、乙醇水溶液、乙酸乙酯、三氯甲烷或石油醚作为溶剂，经回流提取、超声提取或冷浸提取，得提取液，提取液经减压浓缩干燥或冷冻干燥，而制得白木香果皮提取物。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的回流提取是在60～80℃下进行回流提取。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的回流提取是采用水进行回流提取，获得提取液，然后再在提取液中加入乙酸乙酯进行萃取，萃取液经减压浓缩干燥或冰冻干燥而获得白木香果皮提取物。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的超声提取是在超声波频率为40KHz下超声提取。
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