CN101987192B

CN101987192B - 一种保肝护肝的中药组合物及其制备方法和质量控制方法

Info

Publication number: CN101987192B
Application number: CN2009103049339A
Authority: CN
Inventors: 邹节明
Original assignee: Guilin Jinke Health Products Co Ltd
Current assignee: Guilin Sanjin Health Industry Co Ltd
Priority date: 2009-07-29
Filing date: 2009-07-29
Publication date: 2012-01-25
Anticipated expiration: 2029-07-29
Also published as: CN101987192A

Abstract

本发明涉及一种保肝护肝的中药组合物及其制备方法和质量控制方法，该中药组合物包括如下中药原材料：葛根30～200重量份，枳惧果30～200重量份，绿茶叶10～100重量份，茵陈10～90重量份，积雪草10～90重量份，菊花10～90重量份，陈皮10～90重量份和干姜10～90重量份。本发明所提供的中药组合物不仅制备方法简单易行，而且其疗效显著，安全无毒副作用。

Description

一种保肝护肝的中药组合物及其制备方法和质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种保肝护肝的中药组合物及其制备方法和质量控制方法，属于中药制剂领域。

背景技术

肝脏是人体最大、最重要的解毒脏器，它对来自体外和机体自身代谢产生的毒素具有强大的防御解毒功能。日常生活中，化学性有害物质，会通过胃肠道、血液循环进入肝脏进行转化，因此，肝脏容易受到这些毒性物质的损害，造成化学性肝损伤。

这些化学毒物种类繁多，一般分为生产性和生活性两类。如从事有毒物质的生产及使用、工业三废(废气、废水、废渣)、农药；车辆废气、生活煤烟以及某些日用化学品(如酒精)等等。这些毒物防不胜防，在人群中普遍易感，因此，要十分警惕化学性肝损伤的发生。

一：酒精是肝脏的最大威胁，长期或间断性大量饮酒可引起肝损伤。酒精直接毒害肝细胞，影响其结构及功能，引起代谢紊乱，不能利用或无力贮存营养物质。中医学认为，“酒为火热之食，损伤肝阴”，即使是冰镇啤酒也是一样。很多人喜欢在夏天大量饮用冰镇啤酒来消暑，其实却如同“火上浇油”，不少肝病患者就是因为过度饮酒导致酒精性肝炎、脂肪肝，直至肝硬化。

二：污浊的环境损害肝脏空气污染、生活环境恶化是现代人都要面对的问题。特别是城市，空气流通速度缓慢，各种工业废气、汽车尾气等令空气中充满了各种各样的化学毒物，损伤肝脏和身体健康。而另一个需要特别关注的是封闭的办公环境。长时间呆在这样的环境中，对健康非常不利，因为封闭的空调房中不是自然风，空气污浊，损伤肝脏。

三：饮食不洁加重肝脏负担饮食不洁，病从口入。不卫生的食物不仅会刺激肠道，引起上吐下泻，还会加重肝脏负担。

四：熬夜使受损肝脏难以修复工作繁忙，生活不规律，经常熬夜，睡眠不足，这样都会引起肝脏血流相对不足，影响肝脏细胞的营养滋润，抵抗力下降。一些人原来已经受损的肝细胞将难于修复并加剧恶化。

化学性肝损伤主要是指来自于工作生活环境、食物、药品，尤其是大量饮酒等有害化学物质所致的肝损伤。这些化学物质主要包括无机毒物(如重金属、氰化物、氟化物等)、来自食物(包括酒精)、饮水与大气中的化学毒物、农药、药品等等。

化学性肝损伤的保健重在预防，除了尽量避免接触生活中的化学性毒物、医源性药物和过量喝酒外，有效的预防和保护途径为：通过抗氧化，保护肝细胞结构。脂质过氧化反应，是化学性肝损伤的特殊表现形式。化学毒物通过氧化反应破坏肝细胞膜，改变细胞的结构与功能，导致肝损伤。治疗化学性肝损伤通常应用肌醇、辅酶A、肝泰乐、GIK、肝乐等药物，这些均为肝损伤后的恢复治疗，达不到预防的作用。中医药强调“治未病”，未病先预防保护。

中药在保肝护肝中具有一定的贡献。申请号为200810181491.9的中国专利申请提供了一种解酒保肝茶，是选用菊花、枳椇子、葛花、葛根、陈皮、青茶为原料，按一定的比例炮制加工而成。本发明的解酒保肝茶能清热解毒，除妄热，用中药的有效成份综合酒精的毒性，将酒精毒性最大限度的在胃中综合溶解，使人饮酒后酒精毒性不至于进入小肠参于代谢而醉酒，从而达到在人体内还没有将酒毒吸收时，就能及时的将酒毒解除，达到保肝护肾的目的。但是否真正的具有保肝作用让人难以置信。

本发明人经深入研究，肯定中草药在治疗肝病上的一定贡献，据中医药理论指导，以广西民族药材资源为依托，提供了一种天然的保肝护肝的中药组合物，能够对肝的化学性损伤有很好的保护作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种保肝护肝的中药组合物，该中药组合物疗效显著，安全无毒副作用。

本发明的第二目的在于提供一种保肝护肝的中药组合物的制备方法，该方法简单易行。

本发明的第三目的在于提供本发明所述的中药组合物的质量控制方法。

为实现本发明的第一目的，本发明采用如下技术方案：

一种保肝护肝的中药组合物，其中，所述的中药组合物包括如下中药原材料：

葛根 30～200重量份

枳惧果 30～200重量份

绿茶叶 10～100重量份

茵陈 10～90重量份

积雪草 10～90重量份

菊花 10～90重量份

陈皮 10～90重量份

干姜 10～90重量份。

优选：

葛根 100～160重量份

枳惧果 100～160重量份

绿茶叶 20～60重量份

茵陈 20～50重量份

积雪草 20～50重量份

菊花 20～50重量份

陈皮 20～50重量份

干姜 20～50重量份。

更优选：

葛根 144重量份

枳惧果 144重量份

绿茶叶 48重量份

茵陈 32重量份

积雪草 32重量份

菊花 32重量份

陈皮 32重量份

干姜 32重量份。

本发明所述的中药组合物是上述8位中药原材料经预处理、加水煎煮和浓缩得到浸膏，再将所得的浸膏配以药学上可接受的辅料制成药学上可接受的液体制剂或者将所得的浸膏干燥后再配以药学上可接受的辅料制成药学上可接受的固体制剂。

本发明所述的中药组合物还包括维生素C、维生素B1或食用淀粉中的一种或几种。

上述维生素C的用量为每100g中药组合物中加入12.5g维生素C；维生素B1的用量为每100g中药组合物中加入2.5g维生素B1；食用淀粉的用量为每100g中药组合物中加入10g食用淀粉。

为实现本发明的第二目的，本发明采用如下技术方案：

本发明所提供的中药组合物的制备方法，其中，所述的制备方法包括如下步骤：

1)将上述8位中药原材料预处理后，备用；

2)将经预处理的8位中药原材料加水煎煮1～3次，每次0.5～2小时，合并煎液，滤过，滤液备用；

3)合并上述滤液，浓缩至相对密度在60℃时为1.10～1.30的浸膏；

4)将上步所得的浸膏配以药学上可接受的辅料制成药学上可接受的液体制剂；

或者将上步所得的浸膏干燥得干膏粉，再将干膏粉配以药学上可接受的辅料制成药学上可接受的固体制剂。

根据前述的制备方法，其中，所述的煎煮为煎煮2次，每次1小时。

根据前述的制备方法，其中，所述加水的加水量为第一次加4～12倍量的水，第二次加6～10倍量的水，第三次加6～10倍量的水。

根据前述的制备方法，其中，所述加水的加水量为第一次加10倍量的水，第二次加8倍量的水，第三次加8倍量的水。

根据前述的制备方法，其中，所述的中药组合物还包括加入维生素C、维生素B1或食用淀粉中的一种或几种。

根据前述制备方法，其中，所述的维生素C的用量为每100g中药组合物中加入12.5g维生素C，所述的维生素B1的用量为每100g中药组合物中加入2.5g维生素B1，所述的食用淀粉的用量为每100g中药组合物中加入10g食用淀粉。

为实现本发明的第三目的，本发明采用如下技术方案：

本发明所述的中药组合物的质量控制方法：

1)葛根、积雪草的薄层色谱鉴别：

取权利要求1-3任意一项所述的中药组合物5g，加乙醇60ml，超声处理20分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水20ml使溶解，加入已处理好的大孔吸附树脂柱，以1.5ml/min的流速，依次用水50ml、20％乙醇50ml、10％氢氧化钠溶液30ml、水60ml、60％乙醇50ml洗脱，收集20％乙醇和60％乙醇洗脱液，备用；

葛根的薄层色谱鉴别：取上述20％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述两种溶液各5-10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干；氨熏后置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

积雪草的薄层色谱鉴别：取上述60％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取积雪草甙对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述二种溶液5-10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶薄层板上，以氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

2)总黄酮的含量测定

供试品溶液的制备：取10粒权利要求1-3任意一项所述的中药组合物，研匀，称取约0.4g，精密加无水乙醇100ml，精密称定，冷浸1小时，超声处理30分钟，放冷，精密称定，用乙醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液50ml，挥干乙醇，残渣加水5-10ml使溶解，加至已处理好的聚酰胺柱上，静置2h，控制流速为1.5ml/min，依次用水50ml，50％乙醇100ml洗脱，弃去水洗脱液，收集50％乙醇洗脱液并定容至100ml，摇匀，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：精密称取80℃下真空干燥至恒重的葛根素对照品10mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，精密量取lml，置50ml量瓶中，再以无水乙醇稀释至刻度，配制成每1ml含葛根素0.002mg的溶液，作为对照品溶液；

测定法：精密吸取供试品溶液1.0ml，置25ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；另以随行试剂为空白，参照中国药典1995年版一部附录VA下的紫外分光光度法，在251nm波长处测定吸收度；

本发明所述的中药组合物100g总黄酮含量以葛根素C₂₁H₂₀O₉计算，不得少于750mg。

根据前述的质量控制方法，其中，所述中药组合物的药物有效成分中总黄酮的含量以葛根素计为450-750mg。

以下为本发明的详细描述：

本发明一方面提供一种保肝护肝的中药组合物，该中药组合物疗效显著，安全无毒副作用。

本发明所提供的中药组合物包括如下中药原材料：

葛根 30～200重量份

枳惧果 30～200重量份

绿茶叶 10～100重量份

茵陈 10～90重量份

积雪草 10～90重量份

菊花 10～90重量份

陈皮 10～90重量份

干姜 10～90重量份。

菊花，主要分白菊、黄菊、野菊。黄、白两菊，都有疏散风热、平肝明目、清热解毒的功效。白菊花味甘、清热力稍弱，长于平肝明目；黄菊花味苦，泄热力较强，常用于疏散风热；野菊花味甚苦，清热解毒的力量很强。野菊的茎、叶，功用与花相似，无论内服与外敷，都有功效。用菊花泡茶，气味芳香，可消暑、生津、祛风、润喉、养目、解酒。

葛根，别名：葛条、葛粉、甘葛、葛藤。性凉，味甘、辛。功能主治：解表退热，生津，透疹，升阳止泻。用于外感发热头痛、高血压颈项强痛、口渴、消渴、麻疹不透、热痢、泄泻。《本草纲目》载：葛根，性凉、气平、味甘，具清热、降火、排毒诸功效。现代医学研究表明：葛根中的异黄酮类化合物葛根对高血压、高血脂、高血糖和心脑血管疾病有一定的疗效。

陈皮，别名红橘、大红袍、川橘。性温，味苦、辛。具有理气健脾，燥湿化痰、解腻留香、降逆止呕的功效，用于胸脘胀满、食少吐泻、咳嗽多痰等症状的治疗。

枳惧果，性味甘、平，无毒。含多量葡萄糖及苹果酸钙。具有解酒止呕，止渴除烦，祛风通络，通利二便之功效，主治饮酒过度所致的胸膈烦热，头风，小腹拘急，口渴心烦，二便不利等病症。

申请号为200810181491.9的中国专利申请提供了一种以菊花、枳椇子、葛花、葛根、陈皮、青茶为原料的解酒保肝茶，其疗效并不能得到确证。

本发明人在肯定了菊花、枳椇果、葛根和陈皮在保肝护肝上具有一定贡献，在此基础上，据中医药理论指导，以广西民族药材资源为依托，经过大量的试验，又添加了绿茶叶、茵陈、积雪草和干姜四味中药材，提供了一种天然的保肝、护肝及保健的中药组合物，能够对肝的化学性损伤有很好的保护作用，其保肝护肝作用更加显著。

绿茶叶，茶叶约含250种化学成分，主要为嘌呤生物碱、多酚类化合物、多种维生素及矿物质。其中含茶多酚、茶色素及儿茶素等多酚类化合物均有显著的抗氧化作用，儿茶素对四氯化碳引起肝损伤有保护作用。此外，茶叶提取物有预防酒醉作用。

茵陈，为菊科植物菊的滨蒿的干燥地上部分。含香豆素类成分如6，7-二甲氧基香豆素、色原酮类如茵陈色原酮、黄酮类及绿原酸和咖啡酸等成分，具有清湿热、退黄疸的功能。茵陈及以茵陈为主要成分的复方制剂均能明显减轻四氯化碳造成的肝损害，并可增进食欲，增加胆汁流量。茵陈汤能非常显著地降低急性黄疸大白鼠的血清谷丙转氨酶(SGPT)和谷草转氨酶(SGOT)含量。这可能是茵陈保护了肝细胞膜的完整性，减少因细胞损伤而引起的SGPT和SGOT外漏的结果。茵陈中含有丰富的Zn、Mn等机体所必须的微量元素，这些微量元素参与酶的组成，调节酶的活性，直接参与机体的核酸、糖、脂肪、蛋白质代谢，因而有促进肝细胞再生，保护肝细胞膜的完整性和明显的护肝作用。茵陈汤能抑制β-葡萄糖醛酸酶的活性，从而使葡萄糖醛酸不被分解，加速其在肝脏中的解毒能力。

积雪草，为伞形科植物积雪草的干燥全草。具清热利湿，解毒消肿功能。常用于湿热黄疸症。积雪草主含积雪草甙和羟基积雪草甙等皂甙，皂甙有增加肝脏对有害物质的排泄作用。

干姜，为姜科植物的干燥根茎。有明显的抗氧化作用。能明显提高大脑组织的总抗氧化活性。姜提取物对提高肝脏SOD活性有十分明显的作用，并能降低肝脏中LPO的含量。此外，姜可凭其芳香、祛风、吸附的特性直接作用于胃肠道，引起胃蠕动增加，增加对毒素和酸的吸收。

本发明中药组合物并非几种同样疗效药物的简单堆砌，上述几味药材倘若按照本发明的中药组合物剂量单独服用，往往产生较强副作用。如茵陈用量过大可引起头昏、恶心、上腹饱胀、灼热感、腹泻、急性黄疸性肝炎、急性胆道感染，严重时出现心律不齐，甚至死亡。本发明人经过反复试验摸索，确定几种组分达到如上比例时，即可将副作用降到最低限度甚至消除，而治疗效果反而大幅度增强。

本发明所提供的中药组合物优选如下配比的中药原材料：

葛根 100～160重量份

枳惧果 100～160重量份

绿茶叶 20～60重量份

茵陈 20～50重量份

积雪草 20～50重量份

菊花 20～50重量份

陈皮 20～50重量份

干姜 20～50重量份。

更优选：

葛根 144重量份

枳惧果 144重量份

绿茶叶 48重量份

茵陈 32重量份

积雪草 32重量份

菊花 32重量份

陈皮 32重量份

干姜 32重量份。

本发明人经过大量的实验发现采用如上更优选的配比时，所述中药组合物的效果最佳。

本发明所述的固体制剂包括胶囊、颗粒、片剂、丸剂或膜剂等。

本发明所述的液体制剂包括口服液、糖浆、软胶囊或合剂等。

维生素C能阻止氧化活动，而氧化活动会导致胆固醇在血管里沉积下来，从而导致产生诸如心肌梗塞这样的疾病。维生素C可明显增强人的免疫系统功能，能清除体内的自由基，能明显保护肝线粒体铜超氧化物歧化酶活性，改善肝脂肪变性作用，对乙醇性肝损伤有良好的保护作用。

维生素B1能抑制胆碱酯酶的活性，缺乏时胆碱酯酶活性增强，乙酰胆碱水解加速，致神经冲动传导障碍，影响胃肠、心肌功能。

本发明中，向所得的药物有效成分中加入维生素C或维生素B1，其保肝护肝的效果更加显著。

本发明另一方面提供本发明所述的保肝护肝的中药组合物的制备方法，该方法简单易行。

本发明所提供的中药组合物的制备方法包括如下步骤：

1)将上述8位中药原材料预处理后，备用；

本发明采用中药学上常用的加水煎煮的方法来提取药物有效成分，方法简单易行。

本发明中，所述的煎煮为煎煮2次，每次1小时。

煎煮是中药常用的方法，但煎煮多少次、每次煎煮多长时间对药物是有一定的影响的。以多次煎比一次长时间煎熬为佳。煎药是药物中成分溶出的过程，因为生药浸入水溶液后，药物本身吸收了一部分水，药物中所含的生物硷盐类、甙类、有机酸及有机酸盐类、糖类、鞣质、蛋白质、色素、酶类等多种成分几乎都溶于水中，树脂与脂肪油虽不溶于水，但与其它成分一起，亦能部分溶解，因此造成了药材内外浓度差，有效成分从组织内向外渗出，当药材内外浓度相等，即处于平衡状态时，溶出停止。因溶出是一个动态平衡，若生药内部有效成分与其中浸液的比值等于生药外部有效成分与外部浸液的比值，此时药物成分就不能全部溶出，必须滤去药液再加新的溶媒水，使其重新建立浓度差，只有这样才有利于药材的成分继续溶出。

但煎煮次数过多并非是好事，因为有的药物有效成分经过长时间加热会使其分解、水解，在溶出的同时，也会破坏药效。而煎煮时间，应根据药物和疾病的性质，有效成分溶出的难易和用药情况而定。

本发明人根据大量的实验确定以煎煮2次、每次1小时为宜。

本发明中，所述加水的加水量为第一次加4～12倍量的水，第二次加6～10倍量的水，第三次加6～10倍量的水。

中药的煎煮常以水为溶媒，煎煮中药时所用的加水量直接关系到中药有效成分的溶出情况。按理论推算：加水量应为饮片吸水量、煎煮过程中蒸发量及煎煮后所需药量的总和。但在实际操作中很难准确掌握所需药量，因为它与药材质地、所含成分、煎煮时间等有关。本发明人经过大量的实验确定第一次加4～12倍量的水，第二次和第三次加6～10倍量的水为佳，又以第一次加10倍量的水，第二次加8倍量的水，第三次加8倍量的水为最佳。

本发明组合物制成颗粒剂的工艺如下：

将上述干膏粉加入糊精或其它粘合剂，充分混匀，置55-65℃干燥，粉碎；再与矫味剂(如甜菊素)充分混匀，制粒，干燥，即得。

本发明组合物制成片剂的工艺如下：

将上述干膏粉加入糊精或其它粘合剂，充分混匀，置55-65℃干燥，粉碎；也可根据需要加入矫味剂，加适量粘合剂(例如淀粉)混匀，制粒、干燥，再加入适量润滑剂(例如硬脂酸镁)、崩解剂(羧甲基淀粉钠)混匀，压片，还可根据需要进行包衣，即得。

本发明组合物制成胶囊剂的工艺如下：

将上述干膏粉加入糊精或其它粘合剂，充分混匀，干燥，粉碎；再与矫味剂(如甜菊素)、适量填充剂(如淀粉)混匀，干燥，装入胶囊，即得。

根据本领域常规技术，本发明的组合物也可制成口服液、糖浆、软胶囊或合剂等液体制剂，其工艺步骤均为常规操作，可视药材情况不同酌情改变工艺条件，其为本领域技术人员所公知。

本发明中，所述的制备方法还包括向所得的药物有效成分中加入维生素C、维生素B1或食用淀粉中的一种或几种。

本发明中，向所得的药物有效成分中加入维生素C或维生素B1，其保肝、护肝及保健的效果更加显著。

本发明中，所述的维生素C的用量为每100g成品中加入12.5g维生素C，所述的维生素B1的用量为每100g成品中加入2.5g维生素B1，所述的食用淀粉的用量为每100g成品中加入10g食用淀粉。

本发明的中药组合物中含有适量的维生素C或维生素B1或食用淀粉可增强该中药组合物的保肝、护肝及保健作用，但并非其用量越大越好。本发明人经过大量的试验发现每100g成品中加入12.5g维生素C，所述的维生素B1的用量为每100g成品中加入2.5g维生素B1，所述的食用淀粉的用量为每100g成品中加入10g食用淀粉，其中药组合物的疗效最佳。

本发明还提供本发明所述的中药组合物的质量控制方法，包括：

1)葛根、积雪草的薄层色谱鉴别：

取本发明所述的中药组合物5g，加乙醇60ml，超声处理20分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水20ml使溶解，加入已处理好的大孔吸附树脂柱，以1.5ml/min的流速，依次用水50ml、20％乙醇50ml、10％氢氧化钠溶液30ml、水60ml、60％乙醇50ml洗脱，收集20％乙醇和60％乙醇洗脱液，备用；

2)总黄酮的含量测定

供试品溶液的制备：取10粒本发明所述的中药组合物，研匀，称取约0.4g，精密加无水乙醇100ml，精密称定，冷浸1小时，超声处理30分钟，放冷，精密称定，用乙醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液50ml，挥干乙醇，残渣加水5-10ml使溶解，加至已处理好的聚酰胺柱上，静置2h，控制流速为1.5ml/min，依次用水50ml，50％乙醇100ml洗脱，弃去水洗脱液，收集50％乙醇洗脱液并定容至100ml，摇匀，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：精密称取80℃下真空干燥至恒重的葛根素对照品10mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，精密量取lml，置50ml量瓶中，再以无水乙醇稀释至刻度，配制成每lml含葛根素0.002mg的溶液，作为对照品溶液；

本发明药物按常规方法服用，其人体日推荐量是15-20mg/kg.bw。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

(1)本发明所提供的保肝护肝的中药组合物疗效显著，安全无毒副作用；

(2)本发明所提供的保肝护肝的中药组合物的制备方法简单易行；

(3)本发明所提供的保肝护肝的中药组合物的质量控制方法可控性强。

具体实施方式

以下为本发明的具体实施方式，所述的实施例是为了进一步描述本发明，而不是限制本发明。

[实施例1]胶囊剂

将葛根144g、枳惧果144g、绿茶叶48g、茵陈32g、积雪草32g、菊花32g、陈皮32g和干姜32g一起投入提取罐，加水煎煮2次，每次1小时，第一次加10倍量的水，第二次加8倍量的水，合并煎液，滤过，滤液备用；将滤液浓缩至相对密度为1.20(60℃)的浸膏，喷雾干燥，得干膏粉；加适量糊精按常规方法制粒、整粒、装胶囊，即得。

[实施例2]糖浆

将葛根30g、枳惧果200g、绿茶叶10g、茵陈90g、积雪草90g、菊花10g、陈皮33g和干姜33g一起投入提取罐，加水煎煮2次，每次1小时，第一次加10倍量的水，第二次加8倍量的水，合并煎液，滤过，滤液备用；将滤液浓缩至相对密度为1.20(60℃)的浸膏；向浸膏中加入适量的蔗糖和炼蜜混匀，滤过，加柠檬酸及防腐剂适量，混匀，加水至1000ml，混匀，分装，即得。

[实施例3]口服液

将葛根200g、枳惧果30g、绿茶叶33g、茵陈33g、积雪草10g、菊花90g、陈皮90g和干姜10g一起投入提取罐，加水煎煮3次，每次0.5小时，第一次加12倍量的水，第二次加6倍量的水，第三次加6倍量的水，合并煎液，滤过，滤液备用；将滤液浓缩至相对密度为1.10(60℃)的浸膏；测定总黄酮含量，加适量甜菊糖，搅匀，调节pH至适宜，滤过，加蒸馏水至全量，滤过，灌封，100℃流通蒸汽灭菌30min，包装，检验，即得。

[实施例4]颗粒剂

将葛根65g、枳惧果65g、绿茶叶100g、茵陈10g、积雪草66g、菊花90g、陈皮10g和干姜90g一起投入提取罐，加4倍量的水煎煮1次，煎煮2小时，煎液滤过，滤液备用；将滤液浓缩至相对密度为1.30(60℃)的浸膏，喷雾干燥得干膏粉；于干膏粉中加入适量的乳糖和硬脂酸镁，混匀后压片，将此片在摇摆式颗粒剂中破碎，整粒，得2-3号筛(20-50目)颗粒。用铝塑复合膜分装，即得。

[实施例5]丸剂

将葛根100g、枳惧果160g、绿茶叶20g、茵陈50g、积雪草50g、菊花50g、陈皮33g和干姜33g一起投入提取罐，加水煎煮2次，每次1小时，第一次加12倍量的水，第二次加10倍量的水，合并煎液，滤过，滤液备用；将滤液浓缩至相对密度为1.20(60℃)的浸膏，喷雾干燥得干膏粉；每100g干膏粉中加炼蜜100-110g制成大蜜丸，即得。

[实施例6]合剂

将葛根160g、枳惧果100g、绿茶叶60g、茵陈20g、积雪草28g、菊花28g、陈皮50g和干姜50g一起投入提取罐，加水煎煮2次，每次1小时，第一次加10倍量的水，第二次加8倍量的水，合并煎液，滤过，滤液备用；将滤液浓缩至相对密度为1.20(60℃)的浸膏，加适量蔗糖，煮沸使溶解，加适量苯甲酸钠和香兰素，加适量水，煮沸，滤过，加水至规定量，搅匀，灌装，即得。

[实施例7]片剂

将葛根153g、枳惧果155g、绿茶叶59g、茵陈49g、积雪草20g、菊花20g、陈皮20g和干姜20g一起投入提取罐，加水煎煮2次，每次1小时，第一次加10倍量的水，第二次加8倍量的水，合并煎液，滤过，滤液备用；将滤液浓缩至相对密度为1.20(60℃)的浸膏，喷雾干燥得干膏粉；向所得的干膏粉中加入适量的糊精，充分混匀，置55-65℃干燥粉碎；加适量淀粉和崩解剂羧甲基淀粉钠，混匀，制粒、干燥，再加入适量润滑剂硬脂酸镁，混匀，压片，即得。

[实施例8]膜剂

将葛根120g、枳惧果140g、绿茶叶45g、茵陈48g、积雪草30g、菊花30g、陈皮40g和干姜43g一起投入提取罐，加水煎煮2次，每次1小时，第一次加10倍量的水，第二次加8倍量的水，合并煎液，滤过，滤液备用；将滤液浓缩至相对密度为1.20(60℃)的浸膏；向浸膏中加入适当的药用辅料，按常规方法制成膜剂。

[实施例9]软胶囊

将葛根138g、枳惧果112g、绿茶叶35g、茵陈45g、积雪草35g、菊花45g、陈皮43g和干姜43g一起投入提取罐，加水煎煮2次，每次1小时，第一次加10倍量的水，第二次加8倍量的水，合并煎液，滤过，滤液备用；将滤液浓缩至相对密度为1.20(60℃)的浸膏；向所得浸膏中加入适当的药用辅料，按常规方法制成软胶囊。

[实施例10]胶囊剂

将葛根153g、枳惧果155g、绿茶叶59g、茵陈49g、积雪草20g、菊花20g、陈皮20g和干姜20g一起投入提取罐，加水煎煮2次，每次1小时，第一次加10倍量的水，第二次加8倍量的水，合并煎液，滤过，滤液备用；将滤液浓缩至相对密度为1.20(60℃)的浸膏，喷雾干燥得干膏粉；将上述干膏粉加入适量的糊精，充分混匀，于60℃下干燥，粉碎；再按照每100g干膏粉中加入维生素C12.5g的量加入维生素C混匀，于60℃下干燥，装入胶囊，即得。

[实施例10]胶囊剂

将葛根153g、枳惧果155g、绿茶叶59g、茵陈49g、积雪草20g、菊花20g、陈皮20g和干姜20g一起投入提取罐，加水煎煮2次，每次1小时，第一次加10倍量的水，第二次加8倍量的水，合并煎液，滤过，滤液备用；将滤液浓缩至相对密度为1.20(60℃)的浸膏，喷雾干燥得干膏粉；将上述干膏粉加入适量的糊精，充分混匀，于60℃下干燥，粉碎；再按照每100g干膏粉中加入12.5g维生素B1的量加入维生素B1混匀，于60℃下干燥，装入胶囊，即得。

试验例1

本发明的胶囊剂对化学性肝损伤保护作用试验

1、试验材料

1.1样品及处理：本发明胶囊由桂林金可保健食品有限公司生产。用蒸馏水将该样品配成试验所需浓度。

1.2试验动物：Wistar种雄性大鼠，广西中医药研究所动物室提供，体重191-258g。

1.3剂量选择：根据本发明胶囊的人体日推荐量(17.5mg/kg.bw)设83、250、500mg/kg.bw3个剂量组，另设一个空白对照组及四氯化碳(CCl4)肝损伤对照组(下称肝损组)。

1.4仪器与试剂：ECOM-F 6124型半自动生化分析仪、CCl₄、AST、ALT试剂盒(上海长征医学科学有限公司生产，批号：980969、981009)。

2、试验方法参考北京市卫生防疫站毒理科童英等人的方法。将大鼠50只随机分成5组，每组10只。三个试验组动物分别经灌胃给予83、250、500mg/kg.bw的本发明胶囊试验溶液，灌胃量为1.0ml/100g体重，每天一次，连续30天，每隔7天称体重一次，并根据体重调整灌胃量，自由进食和饮水。两个对照组除不给试验样品以外，其它条件与试验组相同。于试验的第30天将各组大鼠禁食16小时，然后除空白对照组外各组均按0.5ml/100g.bw的量用含1.8％四氯化碳的植物油溶液灌胃一次，之后试验组继续给药，直至处死。在给予四氯化碳后的24、48、72小时分别采血测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)，并于末次取血后处死大鼠，取肝脏进行病理组织学检查。结果以试验组肝脏组织病变减轻，两个转氨酶中任一项阳性即判定受试动物具有对化学性肝损伤保护作用。

2.1试验数据用方差分析进行统计处理。

3、试验结果

3.1本发明胶囊对大鼠体重及脏体比值的影响

实验前后的体重及增重量各组间差异不大，肝体比值差异也不大，经统计分析，差异均无显著性意义(P＞0.05)，见表1。表明本发明胶囊对大鼠生长发育无明显影响。

表1.本发明胶囊对大鼠体重增长的影响

剂量组(mg/kg.bw)	试验前(g)	试验末(g)	增重(g)	肝脏/体重比值(％)
					500	225.0±16.4	334.2±52.6	109.2±43.2	2.9±0.42
250	225.1±20.7	341.8±43.3	116.7±35.1	3.0±0.61
					83	224.8±17.1	326.5±29.2	101.7±32.4	3.0±0.22
空白对照组	225.3±16.1	324.5±44.5	99.2±37.1	2.9±0.30
					肝损对照组	225.7±22.7	339.0±50.3	113.3±31.8	3.0±0.22

注：各组间的差异无显著性意义(P＞0.05)。

3.2试验大鼠血清ALT、AST含量的测定结果

高、中、低剂量组的谷草转氨酶在给予CCl₄后24、48和72h均比肝损对照组低，差异有显著性意义，见表2，表明本发明胶囊对CCl4中毒引起的谷草转氨酶活性的升高有降低作用。试验组的谷丙转氨酶活性有降低趋势，但与肝损组的差异没有统计学意义(P＞0.05)，见表3。

表2.本发明胶囊对大鼠CCl₄中毒后不同时间的血清AST活性的影响(x±S)

表3.本发明胶囊对大鼠CCl₄中毒后不同时间的血清ALT活性的影响(x±S)

注：各组间的差异无显著性意义(P＞0.05)。

3.5病理组织学检查结果

结果见表4，试验组和肝损对照组大鼠均见到肝细胞肿胀、水样变性、气球样变性、脂肪变性和肝细胞坏死等病理组织学改变，但试验组病变发生频率和病变程度均比肝损对照组小，表明本发明胶囊对CCl₄中毒大鼠的肝脏有一定保护作用。

4、结果判定

根据上述结果分析，以83、250、500mg/kg.bw剂量的本发明胶囊给大鼠灌胃30天，能降低大鼠在CCl₄中毒后24和48小时血清中谷草转氨酶活性，对谷丙转氨酶活性升高也有降低趋势，并对肝脏组织起到一定程度的保护作用，表明本发明胶囊对CCl₄诱发的急性肝损伤具有保护作用。

表4.本发明胶囊护肝试验病理检查结果

试验例2

本发明中药组合物的质量控制方法

1葛根、积雪草的薄层色谱鉴别：

取发明胶囊剂的内容物5g，加乙醇60ml，超声处理20分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水20ml使溶解，加入已处理好的大孔吸附树脂柱[玻璃柱，Φ12mm，大孔树脂D101-DA201(1∶1)混合，湿法装柱，柱高12cm，先用水洗至中性]，以1.5ml/min的流速，依次用水50ml、20％乙醇50ml、10％氢氧化钠溶液30ml、水60ml、60％乙醇50ml洗脱，收集20％乙醇和60％乙醇洗脱液，备用。

1.1葛根的薄层色谱鉴别：取上述20％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各5-10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(7∶3∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干。氨熏后置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

1.2积雪草的薄层色谱鉴别：取上述60％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取积雪草甙对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述二种溶液5-10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶薄层板上，以氯仿-甲醇-水(7∶3∶0.5)为展开剂，展开，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2含量测定

2.1总黄酮：

[供试品溶液的制备]取10粒本发明胶囊剂的内容物，研匀，称取约0.4g，精密加无水乙醇100ml，精密称定，冷浸1小时，超声处理30分钟，放冷，精密称定，用乙醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液50ml，挥干乙醇，残渣加水5-10ml使溶解，加至已处理好的聚酰胺(14-30目)柱[玻璃柱，Φ12mm，湿法装柱，柱高20cm，先用水洗至中性]上，静置2h，控制流速为1.5ml/min，依次用水50ml，50％乙醇100ml洗脱，弃去水洗脱液，收集50％乙醇洗脱液并定容至100ml，摇匀，作为供试品溶液。

[对照品溶液的制备]精密称取80℃下真空干燥至恒重的葛根素对照品10mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，精密量取1ml，置50ml量瓶中，再以无水乙醇稀释至刻度，配制成每1ml含葛根素0.002mg的溶液，作为对照品溶液。

[测定法]精密吸取供试品溶液1.0ml，置25ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。另以随行试剂为空白，参照紫外分光光度法(中国药典1995年版一部附录VA)，在251nm波长处测定吸收度。

本发明胶囊100g总黄酮含量以葛根素(C₂₁H₂₀O₉)计算，不得少于750mg。

2.2维生素B1、维生素C：

取本发明的内容物2g，精密称定，置100ml量瓶中，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml的混合液适量，振摇使维生素C和维生素B1溶解并稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液，备用。

2.2.1维生素B1的含量测定：精密称取离心液50ml，置烧杯中，加盐酸2ml，煮沸，立即滴加硅钨酸试液2ml，继续煮沸2分钟，放冷，用80℃恒重的垂熔玻璃漏斗滤过，沉淀先用煮沸的盐酸溶液(1→20)20ml分次洗涤，再用水10ml洗涤1次，最后用丙酮洗涤2次，每次5ml，在80℃干燥至恒重，精密称定，所得沉淀物重量与0.1939相乘，即得供试量中所含有的维生素B1重量。

2.2.2维生素C的含量测定：精密量取离心液25ml，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液显蓝色并持续30秒不退。每1ml的碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的维生素C(C₆H₈O₆)。

比较例1

该比较例在于比较本发明中药组合物与200810181491.9的中药组合物对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用。

受试动物：健康小鼠，30只，体重20-25g，雌雄兼用，随机分为3组，每组10只。

供试品：氯化钠注射液，250ml；2.25g，山东长富洁晶药业有限公司；

本发明实施例1的胶囊；

200810181491.9的解酒保肝茶。

给药剂量：见表5，正常对照组及模型组给予氯化钠注射液。

实验方法：小鼠按体重随机分为正常对照组、模型组和各给药组，每组10只。正常对照组和模型组腹腔注射氯化钠注射液20ml/kg，各给药组按表5所示剂量给予，每次1次，连续7天。最后一次给药2h后，正常对照组腹腔注射橄榄油10ml/kg，其余各组均腹腔注射0.1％四氯化碳(CCl₄)橄榄油溶液10ml/kg。20h后断头处死动物，取血清，测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平。断头缺血后，肝组织作常规病理组织学检查。

实验结果：见表5。与正常对照组相比较，模型组小鼠血清ALT和AST水平急剧升高(p＜0.01)，病理组织学检查发现肝组织明显受损，并出现坏死，说明模型成功。与模型组和200810181491.9给药组相比较，本发明给药组小鼠血清ALT和AST水平均极显著降低(p＜0.01)，并且肝组织损伤显著减轻。

表5、本发明和200810181491.9的中药组合物对CCl₄肝损伤小鼠的作用的比较(x±S，n＝10)

组别	给药剂量	ALT(U/L)	AST(U/L)
				正常对照组	20ml/kg	151.73±11.62	144.25±10.22
模型组	20ml/kg	481.28±64.61^##	346.73±58.75^##
				200810181491.9	20mg/kg	312.1±81.2^**	285.1±20.46^**
本发明	20mg/kg	158.3±74.7^**	160.2±28.8^**

与正常对照组相比较：^##p＜0.01；与模型组相比较：^**p＜0.01。

结论：四氯化碳进入机体后主要在肝微粒体中发生脂质体氧化反应，引起肝细胞膜结构和功能的损害，使细胞内ALT、AST溢出，导致血中ALT、AST活性升高。肝损害区域越大，ALT、AST活性越高。本发明研究发现，与200810181491.9的解酒保肝茶相比较，本发明的中药组合物可显著降低小鼠血清中的ALT和AST水平，并减轻肝组织损伤，对中毒小鼠肝损伤具有显著保护作用，在抗急性肝损伤方面有显著疗效。

对本发明其它实施例的产品进行了同样的试验，其结果相似。

比较例2

该比较例在于比较本发明中药组合物与200810181491.9的中药组合物抗大鼠肝纤维化的作用。

受试动物：健康大鼠，30只，体重200-220g，雌雄兼用，随机分为3组，每组10只。

供试品：生理盐水，市购；

本发明实施例1的胶囊；

200810181491.9的解酒保肝茶。

给药剂量：见表6，正常对照组及模型组给予生理盐水。

实验方法：大鼠按体重随机分为正常对照组、肝纤维化模型组和各给药组，每组10只。肝纤维化模型组和各给药组大鼠腹腔注射小牛血清，0.5ml/次/只，每周2次，共12周，复制大鼠免疫性肝纤维化模型、各给药组在造模的同时按表6所示剂量用生理盐水稀释至所需浓度灌胃给药20ml/kg，每日1次，连续12周。给药12周末，所有动物禁食，不禁水，24h后以水合氯醛1ml腹腔注射麻醉，自前正中线暴露腹腔及胸腔，先用无菌注射器自心脏每只采血4ml，离心收取血清，测定透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平。同时取出大鼠肝脏，分别做HB染色及Masson胶原染色。

实验结果：(1)对血清肝纤维化指标的影响：见表6，与正常对照组相比较，模型组大鼠血清中的HA、LA浓度均显著升高(p＜0.01)。与模型组和200810181491.9组相比较，本发明给药组大鼠血清中的HA、LA浓度均显著降低(p＜0.01)。

(2)对脂质氧化的影响：见表2，与正常对照组相比较，模型组大鼠血清中的MDA浓度显著升高(p＜0.01)，SOD浓度显著下降(p＜0.01)。与模型组和200810181491.9组相比较，本发明给药组大鼠血清中的MDA浓度显著降低(p＜0.05)，SOD浓度显著升高(p＜0.05)。

表6、本发明和200810181491.9的中药组合物抗大鼠免疫性肝纤维化的作用的比较(x±S，n＝10)

组别	给药剂量	HA(ng/ml)	LN(ng/ml)	MDA(μmol/L)	SOD(μmol/L)
						正常对照组	20ml/kg	42.3±20.3	36.8±18.8	8.3±1.5	506.4±39.6
模型组	20ml/kg	157.3±58.6^##	96.4±21.5^##	17.0±2.0^##	345.1±31.5^##
						200810181491.9	18mg/kg	101.3±26.3^**	79.4±26.3^**	14.8±1.6^*	370.4±25.6^*
本发明	18mg/kg	78.6±24.7^**	48.5±23.6^**	10.6±1.8^*	399.5±26.7^*

与正常对照组相比较：^##p＜0.01；与模型组相比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01。

(3)对肝脏病理变化的影响：正常对照组大鼠肝组织结构正常，汇管区、肝窦结构清晰；Masson胶原染色未见纤维结构组织增生。肝纤维化模型组大鼠正常肝小叶结构破坏，肝组织广泛微泡样脂肪变性，少数细胞发生嗜酸性变和点状坏死；Masson胶原染色可见纤维结构组织增生，以汇管区明显，部分大鼠有较明显的假小叶形成，假小叶干细胞变性，干细胞排列紊乱，肝窦受压；中央静脉偏位或缺如，增生的纤维间可见灶状淋巴细胞浸润。本发明给药组和200810181491.9组也可见少量炎细胞浸润，但与200810181491.9组相比较，本发明给药组肝小叶结构破坏显著减轻，干细胞脂肪变性轻于模型组；Masson胶原染色大部分大鼠汇管区仅见结缔组织轻度增生。

结论：肝纤维化是各类肝实质性损害转向肝硬化共同的病理环节，与肝病的预后密切相关。现代医学认为通过减少胶原纤维的生成和增强其降解，肝纤维化的逆转是可能的。

HA是一种糖氨蛋白，与胶原、纤维粘连蛋白及层粘连蛋白等构成具有组织特异性的细胞外基质。LN是基膜中特有的一种非胶原糖蛋白，是基膜的主要成分，在细胞粘连、分化和基因表达中起重要作用。研究表明HA、LN是判断有无活动性肝纤维化的重要指标，其升高程度与肝纤维化程度呈正相关。本发明研究发现本发明给药组大鼠血清HA、LN浓度较肝纤维化病理模型组均显著降低。与模型组肝脏组织病理学改变相比，本发明给药组大鼠肝小叶结构破坏明显减轻，Masson胶原染色大部分大鼠汇管区仅见结缔组织轻度增生。

MDA是脂质过氧化的产物，其含量可反映脂质过氧化损伤程度。SOD是自由基清除剂，可抑制脂质过氧化反应。近年研究表明，超氧阴离子、MDA等可刺激成纤维细胞或储脂细胞胶原mRNA的表达和胶原的产生，氧化应激及脂质过氧化是引起干细胞损伤与肝星状细胞活性的重要机制。研究发现病理模型组血清MDA浓度显著增高，SOD浓度显著下降，表明脂质过氧化损伤在肝纤维化形成过程中的重要作用。与病理模型组相比较，本发明给药组血清MDA浓度降低、SOD浓度升高，具有显著的抗脂质过氧化损伤作用。

研究结果表明，本发明给药组具有显著的抗肝纤维化作用，对慢性肝损伤具有显著治疗作用。

Claims

1.一种保肝护肝的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物包括如下中药原材料：

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物包括如下中药原材料：

3.根据权利要求2所述的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物包括如下中药原材料：

4.根据权利要求1或2或3所述的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物是上述8位中药原材料经预处理、加水煎煮和浓缩得到浸膏，再将所得的浸膏配以药学上可接受的辅料制成药学上可接受的液体制剂或者将所得的浸膏干燥后再配以药学上可接受的辅料制成药学上可接受的固体制剂。

5.根据权利要求1或2或3所述的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物还包括维生素C、维生素B1或食用淀粉中的一种或几种。

6.根据权利要求5所述的中药组合物，其特征在于，所述的维生素C的用量为每100g中药组合物中加入12.5g维生素C，所述的维生素B1的用量为每100g中药组合物中加入2.5g维生素B1，所述的食用淀粉的用量为每100g中药组合物中加入10g食用淀粉。

7.权利要求1或2或3所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：

1)将上述8位中药原材料预处理后，备用；

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的煎煮为煎煮2次，每次1小时。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述加水的加水量为第一次加4～12倍量的水，第二次加6～10倍量的水，第三次加水煎煮也为6～10倍量的水。

10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述加水的加水量为第一次加10倍量的水，第二次加8倍量的水，第三次加8倍量的水。

11.权利要求1或2或3所述的中药组合物的检测方法，其特征在于，所述的检测方法包括：

1)葛根、积雪草的薄层色谱鉴别：

2)总黄酮的含量测定

对照品溶液的制备：精密称取80℃下真空干燥至恒重的葛根素对照品10mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，精密量取1ml，置50ml量瓶中，再以无水乙醇稀释至刻度，配制成每1ml含葛根素0.002mg的溶液，作为对照品溶液；

权利要求1或2或3所述的中药组合物100g总黄酮含量以葛根素C₂₁H₂₀O₉计算，不得少于750mg。

12.根据权利要求11所述的中药组合物的检测方法，其特征在于，所述中药组合物的药物有效成分中总黄酮的含量以葛根素计为450-750mg。