CN101985453B - 一种4-氨基吡啶衍生物及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

一种4-氨基吡啶衍生物及其制备方法与应用，涉及一种化合物。提供一种条件温和、成本较低的4-氨基吡啶衍生物及其制备方法与应用。在N₂保护条件下，在Ph₃P和C₂Cl₆中加入CH₂Cl₂，冷却得反应液A；在DiPP-氨基酸和4-AP中加入四氢呋喃，注入缚酸剂，溶解后将四氢呋喃溶液加到反应液A中，冰盐浴条件下反应得反应液B，滤去白色固体，减压浓缩除去有机溶剂，加入水，用HCl调节pH＝2～3，用二氯甲烷萃取有机物，弃去有机相，水相用NaOH调pH＝10～11，乙酸乙酯萃取，有机相用无水Mg₂SO₄干燥，过滤，减压浓缩得到粗产物，常压柱层析，即得产物。对海洋生物毒素TTX中毒具有明显解毒作用。

Description

一种4-氨基吡啶衍生物及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及一种化合物，尤其是涉及一种4-氨基吡啶衍生物化合物及其制备方法与应用。 

背景技术

近年来的研究发现，海洋生物毒素河豚毒素(Tetrototoxin，TTX)中毒是我国食用水产品中毒的一个主要原因。在我国，使用水产品引起的中毒事件中有相当一部分是由河豚毒素引起。但是，目前临床上对TTX中毒尚无特效药，主要采取综合对症治疗措施，早期可催吐、洗胃，用2％碳酸氢钠中和胃内毒素。 

4-氨基吡啶(4-AP)是近年深受重视的离子通道抑制剂，它对传出神经的各类突触传递均有易化作用，其机制是通过促进神经肌肉传输，进而调节离子通道的电导率，促使中枢乙酰胆碱酯酶(AchE)从神经末段的释放，兴奋正常动物的呼吸，升高血压和加快心率。由于4-AP的上述药理学特性使它有可能被发展为一种有效抑制TTX毒素中毒的解毒剂药物([3]Chang F.T.C.，Spriggs D.L.，Benton，B.J.，Keller S.A.，Capacio B.R.Fundamental and Applied Toxicology 1997，38，75-88；[4]Chen H.M.，Lin C.H，Wang T.M.Toxicology and Applied Pharmacology1996，141，44-48)，而且有文献报道了4-AP对石房蛤毒素STX中毒小鼠的恢复可以达到70％。 

但是，4-AP本身又有毒性，当它的给药剂量超过2mg/kg/h时，动物实验会表现出比如肌肉抽搐，昏厥，痉挛等诸多的副反应([5]Chang F.T.C，Robert M.，Capacio B.R.Toxican，1996，34，671-690；[6]洪专，易瑞灶，许晨，杨志文，张扬扬，河豚毒素中毒机理与临床救治探讨，中国海洋药物，2004，3，49-53)。所以，为了减少4-AP的这些缺点，对4-AP母体进行化学修饰和改造就显得非常有意义。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种条件温和、成本较低的4-氨基吡啶衍生物及其制备方法与应用。 

所述4-氨基吡啶衍生物为(O，O)-二异丙基磷酰化氨基酸-吡啶-4-氨基甲酰酯化合物的简称，(O，O)-二异丙基磷酰化氨基酸-吡啶-4-氨基甲酰酯化合物的结构式如下： 

其中，R¹为-CH₃(A1)，-CH₂CH(CH₃)₂(A2)，-CH(CH₃)CH₂CH₃(A3)，-CH₂CH₂CH₂-(A4)，-CH(CH₃)₂(A5)，-CH₂Ph(A6)。 

(O，O)-二异丙基磷酰化氨基酸-吡啶-4-氨基甲酰酯包括：(O，O)-二异丙基磷酰化丙氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯、(O，O)-二异丙基磷酰化亮氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯、(O，O)-二异丙基磷酰化异亮氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯、(O，O)-二异丙基磷酰化脯氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯、(O，O)-二异丙基磷酰化缬氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯、(O，O)-二异丙基磷酰化苯丙氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯等六种4-氨基吡啶衍生物。 

所述4-氨基吡啶衍生物的制备方法，包括以下步骤： 

1)在N₂保护条件下，在Ph₃P和C₂Cl₆中加入CH₂Cl₂，冷却，得反应液A； 

在步骤1)中，所述Ph₃P和C₂Cl₆按摩尔比为1∶(1～1.3)，所述冷却，可冰浴冷却至-4～-8℃。 

2)在DiPP-氨基酸和4-AP中加入四氢呋喃(THF)，同时注入缚酸剂，溶解后，将四氢呋喃溶液加到反应液A中，冰盐浴条件下反应，得反应液B； 

在步骤2)中，所述DiPP-氨基酸和4-AP按摩尔比为1∶(1～1.1)，所述三乙胺与DiPP-氨基酸的摩尔比为1∶(3～4)；所述冰盐浴的温度可为-10～-15℃，所述反应的时间可为12～24h；所述DiPP-氨基酸可选自DiPP-丙氨酸，DiPP-亮氨酸，DiPP-异亮氨酸，DiPP-脯氨酸，DiPP-缬氨酸，DiPP-苯丙氨酸等中的一种；所述缚酸剂可选自三乙胺，二乙胺，六氢吡啶等中的一种。 

3)将反应液B滤去白色固体，减压浓缩除去有机溶剂，加入水，用HCl调节pH＝2～3，用二氯甲烷萃取有机物，弃去有机相，水相用NaOH调pH＝10～11，乙酸乙酯萃取，有机相用无水Mg₂SO₄干燥，过滤，减压浓缩得到粗产物，常压柱层析，即得产物。 

在步骤3)中，所述将反应液B滤去白色固体，可采用砂芯漏斗滤去白色固体物。 

用本发明的方法制备的(O，O)-二异丙基磷酰化氨基酸-吡啶-4-氨基甲酰酯(4-氨基吡啶衍生物)，是一种全新结构的具有TTX解毒活性的化合物，通过这个制备方法合成不同R¹取代基的4-氨基吡啶衍生物，并进行活性实验，得到了满意的结果，尤其具有良好的生物活性，对海洋生物毒素TTX中毒具有明显解毒作用，因此本发明所述4-氨基吡啶衍生物可用于制备一种含4-氨基吡啶子结构的TTX解毒剂前药。 

附图说明

图1为化合物A1的HPLC高效液相色谱图。 

图2为化合物A1的ESI质谱图。 

图3为化合物A1的¹H NMR氢谱图。 

图4为化合物A1的¹³C NMR碳谱图。 

图5为化合物A1的³¹P NMR磷谱图。 

图6为化合物A1的红外光谱图。 

具体实施方式

以下实施例将结合附图对本发明作进一步的说明。 

实施例1：制备(O，O)-二异丙基磷酰化丙氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯化合物(A1)化合物(A1)的结构式为： 

化合物的合成步骤如下： 

1、在N₂保护条件下，将1.50mmol(0.39g)Ph₃P和1.65mmol(0.39g)C₂Cl₆25mL装入圆底烧瓶中，并加入10mL CH₂Cl₂，冰浴冷却至-4～-8℃，反应30min，待用。 

2、称取1mmol DiPP-丙氨酸(0.253g)和1mmol 4-AP(0.094g)于50mL圆底烧瓶中，加入15mL四氢呋喃(THF)，同时注入三乙胺(0.8mL)让它们完全溶解，将THF溶液慢慢滴加到上述Ph₃P和C₂Cl₆的反应液中。冰盐浴-10～-15℃条件下，反应24h。 

3、反应液显悬浊状，砂芯漏斗滤去白色固体，减压浓缩除去有机溶剂，加入30mL水，用1M HCl调节pH＝2～3，二氯甲烷萃取有机物，弃去有机相。水相用4％NaOH调pH＝10～11，乙酸乙酯萃取2次，有机相用无水Mg₂SO₄干燥4～5h，过滤，减压浓缩得到粗产物，常压柱层析，即得产物A10.27g(产率：84％)。 

化合物的主要物理及化学性质如下： 

m.p.117.8～119.5℃； 

³¹P NMR(CDCl₃，δ：ppm)：4.92； 

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，δ：ppm)：10.14(br，1H，NH)，8.47(d，J＝6Hz，2H，PyH)，7.61(d，J＝6Hz，2H，PyH)，4.61-4.58(m，2H，2OCH(CH₃)₂)，4.09-4.06(m，1H，CH)，3.96(br，1H，NH)，1.49(t，J＝4Hz，3H，CH₃)，1.33-1.31(m，12H，2OCH(CH ₃)₂)； 

¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，δ：ppm)：173.1(C＝O)，150.5，145.9，113.6，110.1(Py)，71.7(OCH(CH₃)₂)，51.9(CH)，24.0(OCH(CH₃)₂)，20.9(CH₃)； 

IR(KBr)v(cm^-1)：3310(N-H)，2979，1703(C＝O)，1595，1524(芳环骨架振动)，1221(P＝O)，998，837(P-O-C)； 

MS m/z[M+H]⁺330，[M+Na]⁺352，189，301； 

HRMS(TOF-MS)exact mass calcd for[C₁₄H₂₄N₃O₄P+H]⁺requires 330.1577，Found330.1574. 

实施例2：制备(O，O)-二异丙基磷酰化亮氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯化合物(A2) 

化合物(A2)的结构式为： 

化合物的合成步骤如下： 

1、在N₂保护条件下，将1.50mmol(0.39g)Ph₃P和1.65mmol(0.39g)C₂Cl₆25mL装入圆底烧瓶中，并加入10mL CH₂Cl₂，冰浴冷却至-4～-8℃，反应30min，待用。 

2、称取1mmol DiPP-亮氨酸(0.295g)和1mmol 4-AP(0.094g)于50mL圆底烧瓶中，加入15mL四氢呋喃(THF)，同时注入三乙胺(0.8mL)让它们完全溶解，将THF溶液慢慢滴加到上述Ph₃P和C₂Cl₆的反应液中。冰盐浴-10～-15℃条件下，反应24h。 

3、反应液显悬浊状，砂芯漏斗滤去白色固体，减压浓缩除去有机溶剂，加入30mL水，用1M HCl调节pH＝2～3，二氯甲烷萃取有机物，弃去有机相。水相用4％NaOH调pH＝10～11，乙酸乙酯萃取2次，有机相用无水Mg₂SO₄干燥4～5h，过滤，减压浓缩得到粗产物，常压柱层析，即得产物A20.27g(产率：73％)。 

化合物的主要物理及化学性质如下： 

m.p.198.2～200.4℃； 

³¹P NMR(CDCl₃，δ：ppm)：4.92； 

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，δ：ppm)：10.04(br，1H，NH)，8.49(d，J＝5Hz，2H，PyH)，7.63(d，J＝5Hz，2H，PyH)，4.55-4.63(m，2H，2OCH(CH₃)₂)，3.90-3.95(m，2H，CHCH ₂ )，1.78-1.82(m，1H，CHCH₂)，1.68-1.69(m，1H，CHNH)，1.58-1.61(m，1H，CH(CH)₃)，1.27-1.33(m，12H，2OCH(CH ₃)₂)，0.93-0.96(m，6H，CH(CH ₃)₂)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，δ：ppm)：173.4(C＝O)，150.5，145.6，113.7(Py)，72.1(OCH(CH₃)₂)，71.9(OCH(CH₃)₂)，55.3(NHCH)，43.4(CH₂CH)，24.7(CH(CH₃)₂)，23.8(OCH(CH₃)₂)，21.9(CH(CH₃)₂)； 

IR(KBr)v(cm^-1)：3264(N-H)，2977，1690(C＝O)，1594，1531(芳环骨架振动)，1222(P＝O)，990，835(P-O-C)； 

MS m/z[M+H]⁺372，[M+Na]⁺394，205，239； 

HRMS(TOF-MS)exact mass calcd for[C₁₇H₃₁N₃O₄P+H]⁺requires 372.2047，Found372.2062. 

实施例3：制备(O，O)-二异丙基磷酰化异亮氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯化合物(A3) 

化合物(A3)的结构式为： 

化合物的合成步骤如下： 

1、在N₂保护条件下，将1.50mmol(0.39g)Ph₃P和1.65mmol(0.39g)C₂Cl₆25mL装入圆底烧瓶中，并加入10mL CH₂Cl₂，冰浴冷却至-4～-8℃，反应30min，待用。 

2、称取1mmol DiPP-异亮氨酸(0.295g)和1mmol 4-AP(0.094g)于50mL圆底烧瓶中，加入15mL四氢呋喃(THF)，同时注入三乙胺(0.8mL)让它们完全溶解，将THF溶液慢慢滴加到上述Ph₃P和C₂Cl₆的反应液中。冰盐浴-10～-15℃条件下，反应24h。 

3、反应液显悬浊状，砂芯漏斗滤去白色固体，减压浓缩除去有机溶剂，加入30mL水，用1M HCl调节pH＝2～3，二氯甲烷萃取有机物，弃去有机相。水相用4％NaOH调pH＝10～11，乙酸乙酯萃取2次，有机相用无水Mg₂SO₄干燥4～5h，过滤，减压浓缩得到粗产物，常压柱层析，即得产物A30.30g(产率：81％)。 

化合物的主要物理及化学性质如下： 

m.p.195.7～198.1℃； 

³¹P NMR(CDCl₃，δ：ppm)：4.97； 

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，δ：ppm)：10.08(br，1H，NH)，8.48-8.46(d，J＝5Hz，2H，PyH)，7.64-7.62(d，J＝5Hz，2H，PyH)，4.52-4.62(m，2H，2OCH(CH₃)₂)，4.00(br，1H，NH)，3.73-3.78(m，1H，CH)，1.83-1.85(m，1H，CHaHbCH₃)，1.68-1.70(m，1H，CHaHbCH₃)，1.15-1.19(m，1H，CHCH₃)，1.27-1.32(m，12H，2OCH(CH ₃)₂)，0.97-0.98(m，3H，CHCH ₃)，0.91-0.88(m，3H，CH₂CH ₃)； 

¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，δ：ppm)：172.8(C＝O)，150.4，145.6，113.8，(Py)，72.0(OCH(CH₃)₂)，71.6(OCH(CH₃)₂)，61.5(CH)，38.7(CHCH₃)，24.8(CH₂CH₃)，23.7(OCH(CH₃)₂)，15.5(CHCH₃)，11.2(CH₂ CH₃)； 

IR(KBr)v(cm^-1)：3256(N-H)，2979，1686(C＝O)，1595，1534(芳环骨架振动)，1224(P＝O)，998，832(P-O-C)； 

MS m/z[M+H]⁺372，[M+Na]⁺394，239，301； 

HRMS(TOF-MS)exact mass calcd for[C₁₇H₃₁N₃O₄P+H]⁺requires 372.2047，Found 372.2047. 

实施例4：制备(O，O)-二异丙基磷酰化脯氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯化合物(A4) 

化合物(A4)的结构式为： 

化合物的合成步骤如下： 

1、在N₂保护条件下，将1.50mmol(0.39g)Ph₃P和1.65mmol(0.39g)C₂Cl₆25mL装入圆底烧瓶中，并加入10mL CH₂Cl₂，冰浴冷却至-4～-8℃，反应30min，待用。 

2、称取1mmol DiPP-脯氨酸(0.279g)和1mmol 4-AP(0.094g)于50mL圆底烧瓶中，加入15mL四氢呋喃(THF)，同时注入三乙胺(0.8mL)让它们完全溶解，将THF溶液慢慢滴加到上述Ph₃P和C₂Cl₆的反应液中。冰盐浴-10～-15℃条件下，反应24h。 

3、反应液显悬浊状，砂芯漏斗滤去白色固体，减压浓缩除去有机溶剂，加入30mL水，用1M HCl调节pH＝2～3，二氯甲烷萃取有机物，弃去有机相。水相用4％NaOH调pH＝10～11，乙酸乙酯萃取2次，有机相用无水Mg₂SO₄干燥4～5h，过滤，减压浓缩得到粗产物，常压柱层析，即得产物A40.25g(产率：70％)。 

化合物的主要物理及化学性质如下： 

m.p.88.7～90.8℃； 

³¹P NMR(CDCl₃，δ：ppm)：7.36； 

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，δ：ppm)：10.15(br，1H，NH)，8.44(d，J＝5Hz，2H，PyH)，7.50(d，J＝5Hz，2H，PyH)，4.59-4.64(m，2H，2OCH(CH₃)₂)，4.26-4.30(m，1H，CHCH₂)，3.18-3.22(m，2H，CH ₂CH₂)，2.48(br，1H，CH₂CHaHb)，1.91-1.99(m，3H，CH ₂CHaHb)，1.26-1.36(m，12H，2OCH(CH ₃)₂)； 

¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，δ：ppm)：171.8(C＝O)，150.5，145.4，113.4(Py)，71.9(OCH(CH₃)₂)，71.8(OCH(CH₃)₂)，61.6(CH₂)，47.8(CHCH₂)，28.8(CH₂CH₂)25.8(CH₂ CH₂)，23.9(OCH(CH₃)₂)，23.6(OCH(CH₃)₂)； 

IR(KBr)v(cm^-1)：3260(N-H)，2977，1708(C＝O)，1598，1520(芳环骨架振动)，1236(P＝O)，981，826(P-O-C)； 

MS m/z[M+H]⁺356，189，239，301； 

HRMS(TOF-MS)exact mass calcd for[C₁₆H₂₆N₃O₄P+H]⁺requires 356.1734，Found356.1727. 

实施例5：制备(O，O)-二异丙基磷酰化缬氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯化合物(A5) 

化合物(A5)的结构式为： 

化合物的合成步骤如下： 

1、在N₂保护条件下，将1.50mmol(0.39g)Ph₃P和1.65mmol(0.39g)C₂Cl₆25mL装入圆底烧瓶中，并加入10mL CH₂Cl₂，冰浴冷却至-4～-8℃，反应30min，待用。 

2、称取1mmol DiPP-缬氨酸(0.281g)和1mmol 4-AP(0.094g)于50mL圆底烧瓶中，加入15mL四氢呋喃(THF)，同时注入三乙胺(0.8mL)让它们完全溶解，将THF溶液慢慢滴加到上述Ph₃P和C₂Cl₆的反应液中。冰盐浴-10～-15℃条件下，反应24h。 

3、反应液显悬浊状，砂芯漏斗滤去白色固体，减压浓缩除去有机溶剂，加入30mL水，用1M HCl调节pH＝2～3，二氯甲烷萃取有机物，弃去有机相。水相用4％NaOH调pH＝10～11，乙酸乙酯萃取2次，有机相用无水Mg₂SO₄干燥4～5h，过滤，减压浓缩得到粗产物，常压柱层析，即得产物A50.26g(产率：73％)。 

化合物的主要物理及化学性质如下： 

m.p.177.6～182.0℃； 

³¹P NMR(CDCl₃，δ：ppm)：3.49； 

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，δ：ppm)：10.32(br，1H，NH)，8.47-8.48(d，J＝5Hz，2H，PyH)，7.69-7.70(d，J＝5Hz，2H，PyH)，4.52-4.62(m，2H，2OCH(CH₃)₂)，4.02-4.04(m，1H，CHNH)，3.69-3.74(m，1H，CHNH)，2.05-2.13(m，1H，CH(CH₃)₂)，1.21-1.34(m，12H，2OCH(CH ₃)₂)，1.03-1.01(m，6H，CH(CH ₃ )₂)； 

¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，δ：ppm)：173.0(C＝O)，149.6，141.8，113.9(Py)，71.9(OCH(CH₃)₂)，71.7(OCH(CH₃)₂)，62.4(CH)，32.0(CH(CH₃)₂)，23.76(OCH(CH₃)₂)，19.37CH(CH₃)₂，18.19(CH(CH₃)₂)； 

IR(KBr)v(cm^-1)：3260(N-H)，2979，1688(C＝O)，1594，1535(芳环骨架振动)，1224(P＝O)，999，831(P-O-C)； 

MS m/z[M+H]⁺358，[M+Na]⁺380，301； 

HRMS(TOF-MS)exact mass calcd for[C₁₆H₂₈N₃O₄P+H]⁺requires 358.1890，Found358.1898. 

实施例6：制备(O，O)-二异丙基磷酰化苯丙氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯化合物(A6)化合物(A6)的结构式为： 

化合物的合成步骤如下： 

1、在N₂保护条件下，将1.50mmol(0.39g)Ph₃P和1.65mmol(0.39g)C₂Cl₆25mL装入圆底烧瓶中，并加入10mL CH₂Cl₂，冰浴冷却至-4～-8℃，反应30min，待用。 

2、称取1mmol DiPP-苯丙氨酸(0.329g)和1mmol 4-AP(0.094g)于50mL圆底烧瓶中，加入15mL四氢呋喃(THF)，同时注入三乙胺(0.8mL)让它们完全溶解，将THF溶液慢慢滴加到上述Ph₃P和C₂Cl₆的反应液中。冰盐浴-10～-15℃条件下，反应24h。 

3、反应液显悬浊状，砂芯漏斗滤去白色固体，减压浓缩除去有机溶剂，加入3O mL水，用1M HCl调节pH＝2～3，二氯甲烷萃取有机物，弃去有机相。水相用4％NaOH调pH＝10～11，乙酸乙酯萃取2次，有机相用无水Mg₂SO₄干燥4～5h，过滤，减压浓缩得到粗产物，常压柱层析，即得产物A60.33g(产率：81％)。 

化合物的主要物理及化学性质如下： 

m.p.197.9～201.1℃； 

³¹P NMR(CDCl₃，δ：ppm)：5.29； 

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，δ：ppm)：9.40(br，1H，NH)，8.45-8.50(d，J＝5Hz，2H，PyH)，7.50-7.51(d，J＝5Hz，2H，PyH)，7.17-7.30(m，5H，PhH)，4.41-4.50(m，2H，2OCH(CH₃)₂)，4.14-4.20(m，1H，CH)，3.12-3.18(m，2H，CH₂)，1.78(br，1H，NH)，1.16-1.31(m，12H，2OCH(CH ₃)₂)； 

¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，δ：ppm)：171.8(C＝O)，150.7，144.9，113.6(Py)，136.2，129.5，128.8，127.2(Ph)，72.1(OCH(CH₃)₂)，72.0(OCH(CH₃)₂)，57.6(CH)，39.4(CHCH₂)，23.7(OCH(CH₃)₂)； 

IR(KBr)v(cm^-1)：3273(N-H)，2980，1691(C＝O)，1596，1535(芳环骨架振动)，1224(P＝O)，991，836(P-O-C)； 

MS m/z[M+H]⁺406，[M+Na]⁺428，301，189； 

HRMS(TOF-MS)exact mass calcd for[C₂₀H₂₈N₃O₄P+H]⁺requires 406.1890，Found406.1899. 

(O，O)-二异丙基磷酰化氨基酸-吡啶-4-氨基甲酰酯化合物对TTX中毒小鼠解毒或延长生 存时间的应用，应用效果如下： 

TTX毒素和解毒剂药物溶液在使用前几min配制使用。注射用TTX溶液是从储备液的TTX(1μg/mL in 0.03％乙酸；本实验室自制)配制而成。TTX毒素的给药剂量是0.45μg/mL(腹腔注射0.5mL)。4-AP以及所合成的4-AP衍生物解毒剂的剂量是0.75mg/kg和1.5mg/kg(腹腔注射0.5mL)。36只昆明种实验小鼠从厦门大学医学院购置，动物单独关在带有食物和铺垫的塑料篮子里。 

活性实验过程中，以活体小鼠为对象，将36只小鼠分成6组，每组6只，每组小鼠都腹腔注射致死量的TTX毒素(0.45μg/mL，注射0.5mL)，实验小鼠从中毒到死亡的过程中，各组的小鼠基本表现出相同的症状，死亡前会强烈抽搐，跳跃，最后呼吸衰竭死亡，记录死亡时间作为活性筛选的依据。 

实验小鼠在致死剂量TTX(0.45μg/mL，注射0.5mL)作用下，腹腔注射4-AP和所合成的A1～A6化合物(0.75mg/kg)，小鼠存活的时间(单位：s)如表1所示。 

表1 

以下给出(O，O)-二异丙基磷酰化丙氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯化合物毒性的测试。 

考察了经过修饰的4-氨基吡啶衍生物----(O，O)-二异丙基磷酰化丙氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯(A1)的毒性，我们设计以下实验，实验小鼠在亚致死量TTX(0.20μg/kg)作用下，腹腔注射4-AP(1.5mg/kg，0.5mL)和合成的(O，O)-二异丙基磷酰化丙氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯化合物(A1)(1.5mg/kg，0.5mL)，观察小鼠的死亡时间。表2给出毒性实验，小鼠存活的时间(单位：s)，从表2可以看出，在亚致死剂量的TTX作用下，腹腔注射4-AP(1.5mg/kg，0.5mL)的小鼠，其死亡率达到67％，说明达到一定计量的4-氨基吡啶具有相当的毒性，但是经过修饰的化合物A1在同样剂量的TTX下并没有出现死亡小鼠，即修饰过的4-氨基吡啶衍生物其毒性下降了。 

表2 

Claims (9)

1.一种4-氨基吡啶衍生物，其特征在于为化合物A1、A2、A3、A4、A5、A6；所述A1的结构式为：

A2的结构式为：

A3的结构式为：

A4的结构式为：

A5的结构式为：

A6的结构式为：

其中，所述A1为(O,O)-二异丙基磷酰化丙氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯，A2为(O,O)-二异丙基磷酰化亮氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯，A3为(O,O)-二异丙基磷酰化异亮氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯，A4为(O,O)-二异丙基磷酰化脯氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯，A5为(O,O)-二异丙基磷酰化缬氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯，A6为(O,O)-二异丙基磷酰化苯丙氨酸-吡啶-4-氨基甲酰酯。 

2.如权利要求1所述的一种4-氨基吡啶衍生物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）在N₂保护条件下，在Ph₃P和C₂Cl₆中加入CH₂Cl₂，冷却，得反应液A；

2）在DiPP-氨基酸和4-AP中加入四氢呋喃，同时注入缚酸剂，溶解后，将四氢呋喃溶液加到反应液A中，冰盐浴条件下反应，得反应液B；

3）将反应液B滤去白色固体，减压浓缩除去有机溶剂，加入水，用HCl调节pH=2～3，用二氯甲烷萃取有机物，弃去有机相，水相用NaOH调pH=10～11，乙酸乙酯萃取，有机相用无水MgSO₄干燥，过滤，减压浓缩得到粗产物，常压柱层析，即得产物。

3.如权利要求2所述的一种4-氨基吡啶衍生物的制备方法，其特征在于在步骤1）中，所述Ph₃P和C₂Cl₆按摩尔比为1∶（1～1.3）。

4.如权利要求2所述的一种4-氨基吡啶衍生物的制备方法，其特征在于在步骤1）中，所述冷却，是冰浴冷却至-4～-8℃。

5.如权利要求2所述的一种4-氨基吡啶衍生物的制备方法，其特征在于在步骤2）中，所述DiPP-氨基酸和4-AP按摩尔比为1∶（1～1.1）。

6.如权利要求2所述的一种4-氨基吡啶衍生物的制备方法，其特征在于在步骤2）中，所述缚酸剂选用三乙胺，所述三乙胺与DiPP-氨基酸的摩尔比为1∶（3～4）。

7.如权利要求2所述的一种4-氨基吡啶衍生物的制备方法，其特征在于在步骤2）中，所述冰盐浴的温度为-10～-15℃，所述反应的时间为12～24h。

8.如权利要求2所述的一种4-氨基吡啶衍生物的制备方法，其特征在于在步骤2）中，所述DiPP-氨基酸选自DiPP-丙氨酸，DiPP-亮氨酸，DiPP-异亮氨酸，DiPP-脯氨酸，DiPP-缬氨酸，DiPP-苯丙氨酸中的一种；所述缚酸剂选自三乙胺，二乙胺，六氢吡啶中的一种。

9.如权利要求1所述的一种4-氨基吡啶衍生物在制备一种含4-氨基吡啶子结构的TTX解毒剂前药的应用。 

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