CN101984980B - 一种贯叶连翘提取物的提取方法、提取物和制药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种贯叶连翘提取物的制备方法,通过本发明的制备方法可以获得稳定的贯叶连翘提取物组合物,尤其是含金丝桃素和贯叶金丝桃素的组合物.进一步的本发明公开了稳定的贯叶连翘提取物组合物以及其在制备药物中的用途。
Description
技术领域
本发明公开了一种稳定的贯叶连翘提取物的组合物及其提取制备方法,进一步的是稳定的贯叶连翘中金丝桃素和贯叶金丝桃素提取物和提取制备方法,属于药物领域。
背景技术
贯叶连翘(又名贯叶金丝桃),学名为Hypericum perforatumL,是一种藤黄科金丝桃属植物,已有的药理和临床实验已经证明贯叶连翘的提取物能够有效的用于治疗抑郁和焦虑类精神系统疾病,在德国临床上已经用于治疗轻度、中度抑郁症。研究证实,贯叶连翘提取物中最主要的成分为金丝桃素和贯叶金丝桃素。
金丝桃素(Hypericin)具有抗病毒、抗肿瘤、抗抑郁等药学活性,分子量为504.4,是一种蓝黑色针状结晶,熔点为320℃,不溶于多数有机溶剂,易溶于碱性水溶液,在药学上其存在的主要问题是金丝桃素对光、氧气等常规环境均不稳定,易氧化变质。天然的金丝桃素主要提取于植物,例如贯叶连翘、赶山鞭、金丝桃等。
贯叶金丝桃素(Hyperforin)具有抗抑郁和抗菌作用,分子量为536.8,熔点为80℃。有研究证实贯叶金丝桃素在很低的浓度下(纳摩尔浓度水平)不但能抑制5-HT、DA等的再摄取,而且能诱导肾上腺素表达的负调控(Muller等,Hyperforin as a possbile antidepressant componet of hyperiamextracts,Life Sci 63(6):499-510)。贯叶金丝桃素存在的主要问题同样是对光、热、空气不稳定,容易氧化。
目前从贯叶连翘中提取贯叶金丝桃素和金丝桃素的方法有很多种,其中以乙醇作为溶剂的方法最为常见,通过把乙醇或者甲醇作为溶剂,多次回流提取,将提取液进行浓缩,从而得到含有金丝桃素和贯叶金丝桃素的浸膏。如上所述,由于贯叶金丝桃素和金丝桃素容易被氧化,此种常规提取方法提取获得的提取物很难长期保持稳定,通常在较短时间内,例如三个月,提取物就氧化变质,从而无法使用。
在上述方法的基础上,现有技术中进行了改进。如中国专利申请2006100789889在用乙醇提取的基础上加入了浓缩液用树脂柱进行洗脱从而获得高含量金丝桃素的制备方法。尽管该方法可以获得更多的金丝桃素,但是一方面该申请未能有效解决金丝桃素和贯叶金丝桃素的稳定性问题,另一方面吸附用的树脂柱因含有多种有机残留物在实际制药中受到药监局的严格限制,在工业上无法应用于大生产。中国专利96197288公开了一种适用于常规的贯叶连翘提取工艺的稳定剂:有机硫醇化合物、抗坏血酸,从而能够有效的防止贯叶金丝桃素的氧化,但是该方案并不能有效防止金丝桃素的氧化,因此效果不佳。
现有技术中的其它技术方案,如200410017828,公开了使用乙醇+高效液相色谱柱的提取方法;201010165482公开了使用催化酶提取的方法,这类技术方案都尚无法实现大规模工业化生产,并且也没有改善提取物和提取工艺的稳定性。
发明内容
本发明提供了一种贯叶连翘提取物组合物,含有金丝桃素和贯叶金丝桃素,其中的金丝桃素和贯叶金丝桃素,尤其是金丝桃素,长期保持稳定不被氧化;同时本发明提供了上述稳定的贯叶连翘提取物组合物的制备工艺,以及所述的贯叶连翘提取物组合物的制药用途。
在研究贯叶连翘提取工艺的研究中,申请人惊喜地发现,在常见的贯叶连翘提取工艺中在提取物的基础上加入本发明的稳定剂能够使所得的提取物保持长期稳定,不仅能保持贯叶金丝桃素的稳定,并且能保持金丝桃素的稳定,至少能稳定保持6个月;同时申请人发现,在常见的提取工艺中,向提取液中加入本发明的稳定剂同样能够达到提取物的长期稳定效果。
本发明的稳定的贯叶连翘提取物的组合物,含有金丝桃素和贯叶金丝桃素,包含稳定剂;所述稳定剂由第一抗氧化成分和第二抗氧化成分组成,其中第一抗氧化成分选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠或者二者的混合物;第二抗氧化成分选自甲硫氨酸、硫代甘油或者二者的混合物。
在本发明的稳定的贯叶连翘提取物组合物中,稳定剂的含量为0.01-10%,优选的其含量是1-5%,以质量计。
在所述的稳定剂中,第一抗氧化成分和第二抗氧化成分的比例可以是任意比例,优选的第一抗氧化成分和第二抗氧化成分的质量比是1∶0.2-2。
在上述基础上,组合物中还可以加入辅助稳定剂从而进一步改善组合物的稳定性,所述辅助稳定剂选自EDTA-2Na(乙二胺四乙酸二钠)、EDTA-CaNa(乙二胺四乙酸钙钠)或者二者的混合物。在本发明稳定的贯叶连翘提取物组合物中,辅助稳定剂的含量为0.01-5%,以质量计。
相应的,本发明提供了所述的贯叶连翘提取物组合物的制备方法,包含常见的提取工艺用于提取获得贯叶连翘提取物的步骤,这些提取方法通常是采用有机溶剂如乙醇、甲醇、丙醇、乙酸乙酯、正庚烷等或碱性无机溶剂如氢氧化钾溶液、氢氧化钠溶液、碳酸氢钠溶液、碳酸氢钾溶液、碳酸钠溶液、碳酸钾溶液等。例如通过将新鲜的或者干燥的贯叶连翘植物或药材用乙醇或甲醇或丙醇进行提取从而获得含有贯叶金丝桃素和金丝桃素的提取物;或者用氢氧化钠提取后用乙醇洗脱的方法进行提取。对于本领域技术人员而言,任何常见的用于提取获得包含贯叶金丝桃素和金丝桃素的提取物的提取方法都是可以用于本发明的。
在本发明的一个实施方案中,通过将稳定剂加入到贯叶连翘提取物提取液中从而获得稳定的含有本发明所述稳定剂的贯叶连翘提取物组合物。
在本发明的另一个实施方案中,通过将贯叶连翘提取物提取液蒸出溶剂后向其中加入本发明所述稳定剂从而获得稳定的含有本发明所述稳定剂的贯叶连翘提取物组合物。
在本发明的另一个实施方案中,通过将稳定剂加入到已经在用常规提取工艺获得的贯叶连翘提取物中从而获得稳定的含有本发明所述稳定剂的贯叶连翘提取物组合物。
如同本领域技术人员公知的,上述过程优选的在避光和无氧条件下进行,通常是在氮气等惰性保护气体的环境下进行。
贯叶连翘提取物在临床上用于治疗抑郁、焦虑等疾病是显而易见的,因此本发明还提供了所述的稳定的贯叶连翘提取物组合物在制备治疗抑郁、焦虑等疾病的药物中的应用。
在上述稳定的含有本发明所述稳定剂的贯叶连翘提取物组合物的基础上,可以加入常规的药物辅料从而制备成药剂成品。例如可以加入填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、包衣剂等制备成片剂、胶囊等剂型。对本领域技术人员而言,这些辅料和剂型等是公知的,根据生产和应用的需要可以选择合适的辅料制备成要求的剂型。
具体实施方式
在下述实施例中,申请人采用常见的贯叶连翘提取方法对制备稳定的贯叶连翘提取物进行了说明。需要指出的是,本发明中可以采用任何一种本领域可以应用的贯叶连翘提取方法。
实施例1
取1kg贯叶连翘,加入到1%KOH和8%NaHCO3的溶液3000ml中,浸泡并40℃温浸60分钟,并将所得滤液残渣用1.5%的NaHCO3的溶液1000ml40℃温浸60分钟。将所得滤液合并后45℃减压浓缩得到提取物,将所得提取物加入到500ml80%的乙醇溶液中,过滤,滤液减压浓缩除掉乙醇,重复两次,将所得浓缩液中加入1%的亚硫酸氢钠、1.5%的甲硫氨酸(以重量计),干燥后得到颗粒状贯叶连翘提取物30g,经测定其中金丝桃素含量为9.24%,贯叶金丝桃素含量为2.31%。
实施例2
取1000g贯叶连翘,用压榨机将其压制成压榨液410ml,向其中加入2%的焦亚硫酸钠和3%的硫代甘油,以质量计,将所得压榨液与压榨所产生的固体残渣混合,然后在避光条件下加入到500ml 65%的乙醇溶液中搅拌溶解50分钟,滤液浓缩除掉乙醇;重复三次,将所得浓缩液合并后干燥,所得干燥浸膏粉碎即得贯叶连翘提取物39g。经测定,其中金丝桃素含量为2.40%,贯叶金丝桃素含量为8.25%。
实施例3
取1000g贯叶连翘,用压榨机将其压制成压榨液410ml,向其中加入0.03%的焦亚硫酸钠、0.02%的亚硫酸氢钠、0.4%的甲硫氨酸、0.01%的硫代甘油,以质量计,将所得压榨液与压榨所产生的固体残渣混合,然后在避光和充氮气保护条件下加入到800ml正庚烷溶液中搅拌溶解30分钟,滤液浓缩除掉溶剂;重复三次,将所得浓缩液合并后干燥,所得干燥浸膏粉碎即得贯叶连翘提取物21g。经测定,其中金丝桃素含量为1.63%,贯叶金丝桃素含量为27.8%。
实施例4
取1000g贯叶连翘,粉碎后加入到18倍质量的95%乙醇溶液中40℃温浸提取60分钟,滤过,滤液减压回收溶剂;将所得浓缩液加入3%的亚硫酸氢钠、1%的甲硫氨酸、0.5%的EDTA-2Na,以质量计,然后用500ml乙酸乙酯和乙醇1∶1混合溶液进行萃取,萃取液回收溶剂后将所得浸膏干燥后粉碎,得提取物28g。经测定,其中金丝桃素含量1.16%,贯叶金丝桃素含量31.5%。
实施例5
取1000g贯叶连翘,用压榨机将其压制成压榨液410ml,向其中加入2%的焦亚硫酸钠、3%的硫代甘油和1%的EDTA-CaNa,以质量计,将所得压榨液与压榨所产生的固体残渣混合,然后在避光条件下加入到500ml 65%的乙醇溶液中搅拌溶解50分钟,滤液浓缩除掉乙醇;重复三次,将所得浓缩液合并后干燥,所得干燥浸膏粉碎即得贯叶连翘提取物39.8g。经测定,其中金丝桃素含量为2.23%,贯叶金丝桃素含量为8.51%。
实施例6
取1000g贯叶连翘碾碎后加入到3000ml的80%的乙醇中搅拌1小时至溶解,过滤,所得残渣溶解于1000ml的80%的乙醇中搅拌1小时至溶解然后过滤。两次所得滤液混合并加入0.01%的亚硫酸氢钠、0.05%的甲硫氨酸、0.01%的硫代甘油,以质量计,在氮气保护和避光条件下将所得混合滤液搅拌并采用减压浓缩的方法除掉乙醇并干燥,将所得浸膏粉碎,得到贯叶连翘提取物58.8g,经测定,其中金丝桃素含量为1.17%,贯叶金丝桃素含量为14.2%。
实施例7
取1000g贯叶连翘,粉碎后加入到10倍质量的95%乙醇溶液中提取,滤过,减压回收溶剂,将所得浓缩液用1000ml乙酸乙酯和乙醇1∶1混合溶液进行萃取,回收溶剂后将所得浸膏干燥后粉碎,得提取物28g。经测定,其中金丝桃素含量1.14%,贯叶金丝桃素含量31.5%。
将所得提取物取20g、加入1g亚硫酸氢钠、1g甲硫氨酸,58g乳糖、12g淀粉、微晶纤维素30g,混合均匀后进行制粒,灌装成胶囊1000粒。
实施例8
取1000g贯叶连翘,用压榨机将其压制成压榨液410ml,将所得压榨液与压榨所产生的固体残渣混合,然后在避光条件下加入到500ml 65%的乙醇溶液中搅拌溶解50分钟,滤液浓缩除掉乙醇;重复三次,将所得浓缩液合并后干燥,所得干燥浸膏粉碎即得贯叶连翘提取物39g。经测定,其中金丝桃素含量为2.42%,贯叶金丝桃素含量为8.22%。
取所得提取物20g,加入1g焦亚硫酸钠、0.5g甲硫氨酸、1g硫代甘油,58g乳糖、10g淀粉、微晶纤维素30g,混合均匀后进行制粒,再加入硬脂酸镁2g,混匀压片,包装成糖衣片或者薄膜衣片1000片。
对比实施例1
取1000g贯叶连翘碾碎后加入到3000ml的80%的乙醇中搅拌溶解1小时,过滤,将所得滤液蒸出乙醇;过滤所得残渣溶解于1000ml的80%的乙醇中搅拌溶解1小时然后过滤。两次所得滤液混合并加入0.1%的L-半胱氨酸,以质量计,在氮气保护和避光条件下将所得混合滤液搅拌并采用减压浓缩的方法除掉乙醇并干燥,将所得浸膏粉碎,得到贯叶连翘提取物58.2g,经测定,其中金丝桃素含量为1.21%,贯叶金丝桃素含量为14.5%。
对比实施例2
取1000g贯叶连翘碾碎后加入到3000ml的80%的乙醇中搅拌溶解1小时,过滤,将所得滤液蒸出乙醇;过滤所得残渣溶解于1000ml的80%的乙醇中搅拌溶解1小时然后过滤。两次所得滤液合并,在氮气保护和避光条件下将所得混合滤液搅拌并采用减压浓缩的方法除掉乙醇并干燥,将所得浸膏粉碎,得到贯叶连翘提取物58.2g,经测定,其中金丝桃素含量为1.17%,贯叶金丝桃素含量为14.1%。
对比实施例3
取1000g贯叶连翘碾碎后加入到3000ml的95%的乙醇中搅拌1小时至溶解,过滤,所得残渣溶解于1000ml的80%的乙醇中搅拌1小时至溶解然后过滤。两次所得滤液混合并加入0.8%的亚硫酸氢钠,以质量计,在氮气保护和避光条件下将所得混合滤液搅拌并采用减压浓缩的方法除掉乙醇并干燥,将所得浸膏粉碎,得到贯叶连翘提取物58.9g,经测定,其中金丝桃素含量为1.22%,贯叶金丝桃素含量为14.4%。
对比实施例4
取1000g贯叶连翘碾碎后加入到5000ml的85%的乙醇中搅拌1.5小时至溶解,过滤,所得残渣溶解于1000ml的80%的乙醇中搅拌1小时至溶解然后过滤。两次所得滤液混合并加入0.08%的甲硫氨酸,以质量计,在氮气保护和避光条件下将所得混合滤液搅拌并采用减压浓缩的方法除掉乙醇并干燥,将所得浸膏粉碎,得到贯叶连翘提取物58.9g,经测定,其中金丝桃素含量为1.23%,贯叶金丝桃素含量为14.8%。
取本发明实施例1-6的贯叶连翘提取物、实施例7、8的贯叶连翘提取物组合物制剂、对比实施例1、对比实施例2、对比实施例3、对比实施例4的贯叶连翘提取物,在室温避光的条件下,分别存放6个月,在放置过程中分别于1月、3月、6月测定其中的金丝桃素、贯叶金丝桃素的含量,所得结果如下表1、表2所示。
表1:不同实施例中贯叶金丝桃素含量变化
实施例7 | 31.5% | 31.5% | 31.4% | 31.3% |
实施例8 | 8.22% | 8.17% | 8.15% | 8.09% |
对比实施例1 | 14.5% | 14.4% | 14.0% | 13.8% |
对比实施例2 | 14.1% | 6.2% | 0% | 0% |
对比实施例3 | 14.4% | 13.2% | 12.1% | 10.9% |
对比实施例4 | 14.8% | 13.8% | 12.4% | 11.2% |
表2:不同实施例中金丝桃素含量变化
由表1、表2内容可知,本发明贯叶连翘提取物组合物中含有的第一抗氧化成分和第二抗氧化成分可以起到非常好的协同作用,可以有效的防止贯叶金丝桃素以及金丝桃素的氧化降解。现有技术中所用的稳定剂,例如L-半胱氨酸仅可以较好的防止贯叶金丝桃素的氧化降解,对防止金丝桃素的氧化降解效果较差。
从上表内容也可看出,单独的本发明的第一抗氧化组分或第二抗氧化组分并不能有效的防止金丝桃素和贯叶金丝桃素的氧化,这说明本发明中第一抗氧化成分和第二抗氧化成分具有明显的协同作用,从而起到显著的抗氧化作用。
取本发明实施例2、实施例5的贯叶连翘提取物,在室温避光的条件下,分别存放6个月,在放置过程中分别于1月、3月、6月测定其中的金丝桃素、贯叶金丝桃素的含量,所得结果如下表3、表4所示。
表3:不同提取物中贯叶金丝桃素含量变化
表4:不同提取物中金丝桃素含量变化
由表3、表4内容可知,在本发明贯叶连翘提取物中加入本发明所述的第一抗氧化成分和第二抗氧化成分的基础上进一步的加入辅助稳定剂,能够进一步提高提取物的稳定性。
Claims (8)
1.一种贯叶连翘提取物组合物,含有金丝桃素和贯叶金丝桃素以及稳定剂,所述稳定剂由第一抗氧化成分和第二抗氧化成分组成;第一抗氧化成分选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠或者二者的混合物;第二抗氧化成分选自甲硫氨酸、硫代甘油或者二者的混合物。
2.根据权利要求1的组合物,稳定剂的含量为0.01-10%,以质量计。
3.根据权利要求1的组合物,稳定剂的含量为1-5%,以质量计。
4.根据权利要求1的组合物,还包含辅助稳定剂,所述辅助稳定剂选自乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸钙钠或者二者的混合物。
5.根据权利要求4的组合物,辅助稳定剂的含量为0.01-5%,以质量计。
6.一种制备权利要求1中组合物的方法,包含常见的采用有机溶剂或碱性无机溶剂提取获得贯叶连翘提取物的步骤,和在提取过程中向提取液或向提取后的提取物或将提取物制备成药品时加入稳定剂的步骤,所述稳定剂由第一抗氧化成分和第二抗氧化成分组成;第一抗氧化成分选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠或者二者的混合物;第二抗氧化成分选自甲硫氨酸、硫代甘油或者二者的混合物。
7.根据权利要求6的方法,还包含向提取液或向提取后的提取物或将提取物制备成药品时加入辅助稳定剂的步骤,所述辅助稳定剂选自乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸钙钠或者二者的混合物。
8.根据权利要求1-5任一权利要求所述的组合物在制备治疗抑郁、焦虑疾病的药物中的应用。
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