CN101977914A - 用于治疗丙型肝炎的化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明披露了式(I)化合物及其盐和使用所述化合物的组合物和使用所述化合物的方法。所述化合物具有抗丙型肝炎病毒(HCV)的活性且可用于治疗感染HCV的那些患者。

Description

用于治疗丙型肝炎的化合物
对相关申请的交叉参考
本申请要求2008年3月27日提交的美国临时申请61/039976的优先权。
技术领域
本发明总体涉及新颖的式I化合物包括它们的盐，所述化合物具有抗丙型肝炎病毒(HCV)的活性且可用于治疗感染HCV的那些患者。本发明还涉及使用这些化合物的组合物和使用这些化合物的方法。
背景技术
丙型肝炎病毒(HCV)是主要的人类病原体，其在世界范围内感染估计一亿七千万人，大致是1型人类免疫缺陷病毒感染数量的5倍。这些HCV感染个体中相当大的部分发展成严重的进行性肝脏疾病，包括肝硬化和肝细胞癌(Lauer，G.M.；Walker，B.D.N.Engl.J.Med.2001，345，41-52)。
HCV是正链RNA病毒。基于对所推断氨基酸序列进行的比较和5’-非翻译区的广泛相似性，已经把HCV归类为黄病毒科中独立的属。黄病毒科的所有成员都具有包封的病毒体，其含有的正链RNA基因组通过翻译单一的连续的可读框而编码所有已知的病毒专属性蛋白质。
在整个HCV基因组的核苷酸和所编码的氨基酸序列中发现了相当程度的异质性。已经表征了至少6种主要的基因型，且已经描述了多于50种的亚型。HCV的主要基因型在世界范围内的分布是不同的，且HCV遗传异质性的临床重要性仍然是难以确定的，尽管对基因型对发病和治疗的可能影响行了大量的研究。
单链HCV RNA基因组的长度大约是9500个核苷酸，且具有单一的可读框(ORF)，其编码由大约3000个氨基酸组成的单一的大的多蛋白。在被感染的细胞中，这种多蛋白在多个位点被细胞蛋白酶和病毒蛋白酶裂解，从而产生结构蛋白和非结构(NS)蛋白。就HCV来说，成熟的非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的产生受到两种病毒蛋白酶的影响。认为第一种病毒蛋白酶是金属蛋白酶，且在NS2-NS3接合处进行裂解；第二种病毒蛋白酶是包含在NS3的N-末端区域内的丝氨酸蛋白酶(也称为NS3蛋白酶)，且介导NS3下游的所有随后裂解，既在NS3-NS4A裂解位点以顺式进行裂解，又在其余的NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位点以反式进行裂解。NS4A蛋白似乎具有多种功能，其充当NS3蛋白酶的辅因子，且可能有助于NS3及其它病毒复制酶组分的膜定位。NS3蛋白与NS4A形成复合物，这似乎是在所有位点进行加工活动由此提高蛋白质水解效率所必需的。NS3蛋白还显示出三磷酸核苷酶和RNA解旋酶活性。NS5B(也称为HCV聚合酶)是依赖于RNA的RNA聚合酶，在HCV的复制中涉及所述酶。在“Structural Analysis of the Hepatitis C Virus RNA Polymerasein Complex with Ribonucleotides”(Bressanelli；S.et al.，Journal of Virology2002，3482-3492)和Defrancesco and Rice，Clinics in Liver Disease 2003，7，211-242中描述了HCV NS5B蛋白。
目前，最有效的HCV疗法使用α-干扰素和利巴韦林的组合，其在40％的患者中产生持续的效果(Poynard，T.et al.Lancet 1998，352，1426-1432)。最新的临床结果证明，作为单一疗法，PEG化的α-干扰素优于未修饰的α-干扰素(Zeuzem，S.et al.N.Engl.J.Med.2000，343，1666-1672)。然而，即使就涉及PEG化α-干扰素和利巴韦林组合的实验性治疗方案而言，相当多的患者也没有出现病毒载量的持续减少。因此，就开发用于治疗HCV感染的更有效化合物而言，存在明显和迫切的需要。
本发明提供技术优点，例如所述化合物是新颖的并可有效抗丙型肝炎。此外，例如就所述化合物的作用机理、结合、抑制效力、靶标选择性、溶解度、安全性分布或生物利用度中的一项或多项而言，所述化合物提供用于药物用途的优点。
HCV NS5B抑制剂已经在美国专利7,473,688和7,399,758中披露。
发明内容
本发明涵盖式I化合物(包括可药用盐)和使用这些化合物的组合物及使用这些化合物的治疗方法。
本发明一个方面为式I化合物或其可药用盐：
其中
R1为CO2R5或CONR6R7；
R2为取代有1个Ar1的哌啶基团；
R3为氢、卤素、烷基、烯基、羟基、苄基氧基或烷氧基；
R4为环烷基；
R5为氢或烷基；
R6为氢、烷基、烷基SO2、环烷基SO2、卤代烷基SO2、(R8)(R9)NSO2或(R10)SO2；
R7为氢或烷基；
R8为氢或烷基；
R9为氢或烷基；
R10为氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、N-(烷基)哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、高哌啶基或高吗啉基；
Ar1为吡咯基、噻吩基、呋喃基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、吲哚基、羟吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑基、苯并咪唑酮基、苯并噁唑基、苯并噻唑基或苯并三唑基，且Ar1取代有0-2个取代基，所述取代基选自卤素、烷基、环烷基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羧基、烷氧基羰基、呋喃基和苯基，其中所述苯基取代有卤素、烷基或烷氧基取代基中的0-2个；及
X不存在或者X为键或亚甲基。
本发明另一个方面为式I化合物或其可药用盐，其中R1为CONR6R7；R2为取代有1个Ar1的哌啶基团；R3为烷氧基；R4为环烷基；R6为烷基SO2或(R8)(R9)NSO2；R7为氢；R8为烷基；R9为烷基；Ar1为吡唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并咪唑酮基或苯并噁唑基，且Ar1取代有0-2个取代基，所述取代基选自卤素、烷基、氨基、烷氧基羰基、呋喃基和苯基，其中所述苯基取代有卤素或烷氧基取代基中的0-2个；及X为键或亚甲基。
本发明另一个方面为式I化合物或其可药用盐，其中R1为CONR6R7；R2为取代有1个Ar1的哌啶基团；R3为甲氧基；R4为环己基；R6为异丙基SO2或(二甲基氨基)SO2；R7为氢；Ar1为(呋喃基)吡唑基、(乙基羧基)噁唑基、噻唑基、(甲基)三唑基、(二甲基)三唑基、(甲基)噁二唑基、(乙基)噁二唑基、(丙基)噁二唑基、(异丙基)噁二唑基、(苯基)噁二唑基、(氨基)噻二唑基、吲哚基、苯并呋喃基、氟苯并异噁唑基、(甲基)苯并咪唑基、(苯基)吡唑基、(氯苯基)吡唑基、(甲氧基苯基)吡唑基、苯并咪唑酮基或苯并噁唑基；及X为键或亚甲基。
本发明另一个方面为式I化合物，其中R1为CONR6R7；R6为烷基SO2、环烷基SO2、卤代烷基SO2、(R8)(R9)NSO2或(R10)SO2；及R7为氢。
本发明另一个方面为式I化合物，其中R3为氢。
本发明另一个方面为式I化合物，其中R3为甲氧基。
本发明另一个方面为式I化合物，其中R4为环己基。
本发明另一个方面为式I化合物，其中R6为(R8)(R9)NSO2或(R10)SO2。
本发明另一个方面为式I化合物，其中Ar1为吡唑基、噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并咪唑酮基或苯并噁唑基，且Ar1取代有0-2个取代基，所述取代基选自卤素、烷基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羧基、烷氧基羰基、呋喃基和苯基，其中所述苯基取代有卤素、烷基或烷氧基取代基中的0-2个。
本发明另一个方面为式I化合物，其中Ar1为吡唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并咪唑酮基或苯并噁唑基，且Ar1取代有0-2个取代基，所述取代基选自卤素、烷基、氨基、烷氧基羰基、呋喃基和苯基，其中所述苯基取代有卤素或烷氧基取代基中的0-2个。
本发明另一个方面为式I化合物，其中Ar1为(呋喃基)吡唑基、(乙基羧基)噁唑基、噻唑基、(甲基)三唑基、(二甲基)三唑基、(甲基)噁二唑基、(乙基)噁二唑基、(丙基)噁二唑基、(异丙基)噁二唑基、(苯基)噁二唑基、(氨基)噻二唑基、吲哚基、苯并呋喃基、氟苯并异噁唑基、(甲基)苯并咪唑基、(苯基)吡唑基、(氯苯基)吡唑基、(甲氧基苯基)吡唑基、苯并咪唑酮基或苯并噁唑基。
本发明另一个方面为式I化合物，其中X不存在。
本发明另一个方面为式I化合物，其中X为键。
本发明另一个方面为式I化合物，其中X为亚甲基。
本发明另一个方面为式I化合物，其具有如下立体化学：
Figure BPA00001229922600051
本发明另一个方面为式I化合物，其具有如下立体化学：
对于式I化合物，任何变量(包括R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、Ar1和X)的任何范围可独立与任何其它变量的范围一起使用。因此，本发明包括所述不同方面的组合。
除非另有说明，这些术语具有下述意义。“烷基”的意思是由1至6个碳所组成的直链或支链烷基。“烯基”的意思是由2至6个碳所组成且具有至少一个双键的直链或支链烷基。“炔基”的意思是由2至6个碳所组成且具有至少一个叁键的直链或支链烷基。“环烷基”的意思是由3至7个碳所组成的单环环系。“卤代烷基”与“卤代烷氧基”包括所有卤化异构体，从单卤素取代的烷基至全卤素取代的烷基。具有烃部分的术语(例如烷氧基)包括就所述烃部分而言的直链和支链异构体。括号与多重括号术语意在向本领域技术人员阐明键合关系。例如，如((R)烷基)那样的术语指进一步被取代基R取代的烷基取代基。
本发明包括所述化合物的所有可药用盐形式。可药用盐为其中抗衡离子不会显著地助长化合物的生理活性或毒性且其本身作为药理等价物的那些可药用盐。这些盐可根据一般有机技术使用商购试剂来制备。一些阴离子盐形式包括醋酸盐、醋硬脂酸盐(acistrate)、苯磺酸盐、溴化物、氯化物、枸橼酸盐、富马酸盐、葡萄糖醛酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、碘化物、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐及昔萘酸盐(xinofoate)。一些阳离子盐形式包括铵盐、铝盐、苄星(benzathine)盐、铋盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺盐、锂盐、镁盐、葡甲胺盐、4-苯基环己胺盐、哌嗪盐、钾盐、钠盐、丁三醇胺(tromethamine)盐及锌盐。
本发明一些化合物具有不对称碳原子(参见例如下述化合物)。本发明包括所有立体异构形式，包括对映异构体与非对映异构体及立体异构体的混合物如外消旋体。一些立体异构体可使用本领域已知的方法来制备。所述化合物的立体异构混合物与相关中间体的立体异构混合物可根据本领域已知的方法来分离成单独的异构体。除非另有说明，当在以下方案和表格中描绘分子结构时使用的楔形线(wedge)和虚线(hash)仅意在表示相对立体化学，而不应该被解释为暗示绝对立体化学指定。
Figure BPA00001229922600061
合成方法
所述化合物可通过本领域已知的方法(包括如下所述的那些方法)来制备。一些试剂和中间体在本领域中是已知的。其它试剂和中间体可通过本领域已知的方法使用容易得到的原料来制备。用于描述化合物合成的变量(例如所编号的“R”取代基)仅意在说明如何制备所述化合物，而不应该与权利要求书中或说明书其它段落中所使用的变量相混淆。以下方法用于说明目的，而非意在限制本发明范围。
方案中所使用的缩写通常符合本领域中所使用的惯用意义。说明书和实施例中所使用的化学缩写如下定义：“NaHMDS”为二(三甲基甲硅烷基)氨基钠的缩写；“DMF”为N，N-二甲基甲酰胺的缩写；“MeOH”为甲醇的缩写；“NBS”为N-溴琥珀酰亚胺的缩写；“Ar”为芳基的缩写；“TFA”为三氟乙酸的缩写；“LAH”为氢化铝锂的缩写；“BOC”为叔丁氧羰基的缩写；“DMSO”为二甲基亚砜的缩写；“h”为小时的缩写；“rt”为室温或保留时间的缩写(根据上下文)；“min”为分钟的缩写；“EtOAc”为乙酸乙酯的缩写；“THF”为四氢呋喃的缩写；“EDTA”为乙二胺四乙酸的缩写；“Et2O”为乙醚的缩写；“DMAP”为4-二甲基氨基吡啶的缩写；“DCE”为1，2-二氯乙烷的缩写；“ACN”为乙腈的缩写；“DME”为1，2-二甲氧基乙烷的缩写；“HOBt”为1-羟基苯并三唑水合物的缩写；“DIEA”为二异丙基乙基胺的缩写；“Nf”为CF3(CF2)3SO2-的缩写；及“TMOF”为原甲酸三甲酯的缩写。
方案1显示了如何在核心结构上形成哌啶酰胺。制备取代的哌啶的方法是本领域已知的，且下面描述了一些实例。
方案1.
Figure BPA00001229922600071
生物学方法
当在以下HCV RdRp检测中测定时，所述化合物展现了对抗HCV NS5B的活性。
对HCV NS5B RdRp进行克隆、表达及纯化
将对HCV基因型1b的NS5B蛋白进行编码的cDNA克隆至pET21a表达载体中。将所述蛋白质表达成截掉C末端的18个氨基酸(the protein wasexpressed with an 18 amino acid C-terminal truncation)以提高溶解度。大肠杆菌感受态细胞系BL21(DE3)用于所述蛋白质的表达。使培养物在37℃生长约4小时，直到培养物达到600纳米处的光密度为2.0。使培养物冷却至20℃，并用1mM IPTG进行诱导。加入新鲜的氨苄青霉素至最终浓度为50微克/mL，并使细胞在20℃生长过夜。
使细胞沉淀(3升)溶解以供纯化，得到15-24mg经纯化的NS5B。溶胞缓冲剂由20mM Tris-HCl(pH 7.4)、500mM NaCl、0.5％Triton X-100、1mM DTT、1mM EDTA、20％甘油、0.5mg/mL溶菌酶、10mM MgCl2、15微克/mL脱氧核糖核酸酶I及完全TM蛋白酶抑制剂药片(Roche)所组成。加入溶胞缓冲剂后，使用组织匀浆器来使经冷冻的细胞沉淀重新悬浮。为了降低样品的粘度，使用与Branson超声波处理器相连的微尖头来使溶胞产物的等分液在冰上接受超声波处理。经超声波处理的溶胞产物在4℃以100,000×g离心1小时，并过滤经过0.2微米滤器单元(Corning)。
使用两个连续的色谱步骤来纯化蛋白质：肝素琼脂糖CL-6B和PolyU琼脂糖4B(Pharmacia)。色谱缓冲剂与溶胞缓冲剂相同，但不含有溶菌酶、脱氧核糖核酸酶I、MgCl2或蛋白酶抑制剂，且缓冲剂的NaCl浓度根据将蛋白质加载至色谱柱上的需要而调整。各色谱柱以NaCl梯度液洗脱，所述梯度液的长度在5至50个柱体积之间变化，这取决于色谱柱的类型。在最终色谱步骤后，所得到的酶纯度＞90％(基于SDS-PAGE分析)。将酶分成等分液，并贮存在-80℃。
标准HCV NS5B RdRp酶检测
在96孔板(Corning 3600)中在最终体积为60微升的情况下进行HCVRdRp基因型1b检测。检测缓冲剂由20mM Hepes(pH 7.5)、2.5mM KCl、2.5mMMgCl2、1mM DTT、1.6单位RNAse抑制剂(Promega N2515)、0.01mg/mLBSA(Sigma B6917)及2％甘油所组成。所有化合物在DMSO中连续稀释(3倍)并在水中进一步稀释以使DMSO在检测中的最终浓度为2％。HCVRdRp基因型1b酶在最终浓度为28nM时使用。聚A(polyA)模板在6nM时使用，且生物素化的寡dT12引物在最终浓度为180nM时使用。模板是商购得到的(Amersham 27-4110)。生物素化的引物由Sigma Genosys制备。3H-UTP在0.6μCi(0.29μM总UTP)时使用。通过加入酶来引发反应，在30℃孵育60分钟，并通过加入25微升含有SPA珠粒(4微克/微升，Amersham RPNQ 0007)的50mM EDTA来停止。在室温孵育＞1小时后，将板在Packard Top Count NXT上读取。
经修改的HCV NS5B RdRp酶检测
经修改的酶检测基本如就标准酶检测所描述的那样来进行，不同的是，将生物素化的寡dT12引物预捕获在链霉抗生物素(streptavidin)涂覆的SPA珠粒上，其方式是将引物与珠粒在检测缓冲剂中混合，并在室温孵育一小时。离心除去未结合的引物。使与引物结合的珠粒重新悬浮在20mM Hepes缓冲液(pH 7.5)中，并在引物的最终浓度为20nM及珠粒的最终浓度为0.67微克/微升时用于检测。检测中的加入顺序如下：将酶(1.75nM)加到经稀释的化合物中，接着加入模板(0.36nM)、3H-UTP(0.6μCi，0.29μM)及与引物结合的珠粒的混合物以引发反应，其中所给浓度为最终浓度。使反应在30℃进行4小时。
化合物的IC50值使用七种不同的[I]([I]为抑制浓度)来确定。使用方程式y＝A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))通过抑制作用来计算IC50值。
FRET检测制剂
在96孔细胞培养板中进行HCV FRET筛选检测。FRET肽(Anaspec，Inc.)(Taliani et al.，Anal.Biochem.1996，240，60-67)在其一端附近含有荧光供体即EDANS，且在另一端附近含有受体即DABCYL。通过供体与受体之间的分子间共振能量转移(RET)来使所述肽的荧光淬灭，但当NS3蛋白酶使所述肽裂解时，产物不再发生RET淬灭，且供体的荧光变得显而易见。检测试剂如下制备：得自Promega(#E153A)的5×细胞荧光素酶细胞培养物溶胞试剂(cell Luciferase cell culture lysis reagent)用dH2O稀释至1×，加入NaCl至最终为150mM，且将FRET肽自2mM储备液稀释至最终为20μM。
为了制备板，带有或不带有海紫罗兰属荧光素酶(Renilla luciferase)报告子基因的HCV复制子细胞用胰蛋白酶处理，并置于96孔板中，其中将经滴定的测试化合物加到第3列至第12列中；第1列和第2列含有对照化合物(HCV对照抑制剂)，且最底行含有仅带有DMSO的细胞。然后将板置于37℃的CO2培养箱中。
检测
加入上述测试化合物(FRET检测制剂)后，在不同时间将板取出，且向其中加入Alamar蓝色溶液(Trek Diagnostics，#00-100)以测量细胞毒性。在Cytoflour 4000仪器(PE Biosystems)中读取后，将板以PBS冲洗，然后通过向每个孔中加入30微升上述FRET肽检测试剂(FRET检测制剂)而用于FRET检测。接着，将板置于Cytoflour 4000仪器中，其已被设定成激发波长为340nm/发射波长为490nm，以自动模式历时高达20次循环，且板在动态模式中读取。典型地，在读取后使用终点分析的信号对噪声为至少三倍。或者，在Alamar蓝色读取后，将板以PBS冲洗，然后用于使用Promega Dual-Glo LuciferaseAssay System的荧光素酶检测或用于Promega EnduRen Live Cell Substrate检测。
通过对相对的HCV复制子抑制作用及相对的细胞毒性值进行定量而对化合物进行分析。为了计算细胞毒性值，将得自对照孔的平均Alamar蓝色荧光信号设定为100％无毒性。接着，将各化合物测试孔中的各个信号除以平均对照信号并乘以100％以确定细胞毒性百分比。为了计算HCV复制子抑制值，平均背景值得自在检测结束时含有最高量HCV对照抑制剂的两个孔。这些值类似于得自天然Huh-7细胞的那些值。然后将背景值从得自对照孔的平均信号中扣除，且将此值用作100％活性。接着，将各化合物测试孔中的各个信号除以背景扣除后的平均对照值并乘以100％以确定活性百分比。将EC50值计算成可使FRET或荧光素酶活性降低50％的浓度。针对化合物板所得到的两个值即细胞毒性百分比与活性百分比用于确定有待进一步分析的重要化合物。
化合物的代表性数据报道在表1中。
表1.
Figure BPA00001229922600101
Figure BPA00001229922600111
Figure BPA00001229922600121
Figure BPA00001229922600131
Figure BPA00001229922600141
Figure BPA00001229922600151
A＞0.5μM；B为0.002μM-0.5μM；C＜0.02μM，但没有确定确切值；
药物组合物和治疗方法
所述化合物展现出对抗HCV NS5B的活性，且可用于治疗HCV与HCV感染。因此，本发明另一个方面为一种组合物，其包含式I化合物或其可药用盐及可药用载体。
本发明另一个方面为式I化合物在制备用于治疗丙型肝炎的药物中的用途。
本发明另一个方面为一种组合物，其还包含具有抗HCV活性的化合物。
本发明另一个方面为一种组合物，其中具有抗HCV活性的化合物为干扰素。在本发明另一个方面，所述干扰素选自干扰素α2B、PEG化的(pegylated)干扰素α、同感干扰素(consensus interferon)、干扰素α2A及淋巴细胞样干扰素τ。
本发明另一个方面为一种组合物，其中具有抗HCV活性的化合物为环孢菌素。在本发明另一个方面，所述环孢菌素为环孢菌素A。
本发明另一个方面为一种组合物，其中具有抗HCV活性的化合物选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、可提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、Imiqimod、利巴韦林、5’-单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、金刚烷胺及金刚乙胺。
本发明另一个方面为一种组合物，其中具有抗HCV活性的化合物可有效抑制靶标的功能以治疗HCV感染，所述靶标选自HCV金属蛋白酶(HCVmetalloprotease)、HCV丝氨酸蛋白酶(HCV serine protease)、HCV聚合酶(HCVpolymerase)、HCV解螺旋酶(HCV helicase)、HCV NS4B蛋白(HCV NS4Bprotein)、HCV进入(HCV entry)、HCV组装(HCV assembly)、HCV释出(HCVegress)、HCV NS5A蛋白(HCV NS5A protein)、IMPDH及核苷类似物(nucleoside analog)。
本发明另一个方面为一种组合物，其包含式I化合物或其可药用盐、可药用载体、干扰素及利巴韦林。
本发明另一个方面为一种抑制HCV复制子(HCV replicon)功能的方法，其包括使HCV复制子与式I化合物或其可药用盐接触。
本发明另一个方面为一种抑制HCV NS5B蛋白功能的方法，其包括使HCV NS5B蛋白与式I化合物或其可药用盐接触。
本发明另一个方面为治疗患者中HCV感染的方法，其包括向所述患者给予治疗有效量的式I化合物或其可药用盐。在另一个实施方案中，所述化合物可有效抑制HCV复制子的功能。在另一个实施方案中，所述化合物可有效抑制HCV NS5B蛋白的功能。
本发明另一个方面为治疗患者中HCV感染的方法，其包括向所述患者给予治疗有效量的式I化合物或其可药用盐，且给予(之前、之后或同时)另一种具有抗HCV活性的化合物。
本发明另一个方面为其中其它具有抗HCV活性的化合物为干扰素的方法。
本发明另一个方面为其中所述干扰素选自干扰素α2B、PEG化的干扰素α、同感干扰素、干扰素α2A及淋巴细胞样干扰素τ的方法。
本发明另一个方面为其中其它具有抗HCV活性的化合物为环孢菌素的方法。
本发明另一个方面为其中所述环孢菌素为环孢菌素A的方法。
本发明另一个方面为其中其它具有抗HCV活性的化合物选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、可提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、Imiqimod、利巴韦林、5’-单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、金刚烷胺及金刚乙胺的方法。
本发明另一个方面为其中其它具有抗HCV活性的化合物可有效抑制靶标功能以治疗HCV感染的方法，所述靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCV NS5A蛋白、IMPDH及核苷类似物。
本发明另一个方面为其中其它具有抗HCV活性的化合物可有效抑制HCV生命循环中靶标的功能而非抑制HCV NS5B蛋白的功能的方法。
“治疗有效”的意思是提供有意义的患者益处所需要的药物量，如肝炎与HCV感染领域中的执业医师所理解的那样。治疗有效量是提供有意义的患者益处所需要的量。
“患者”的意思是被HCV病毒感染且适于治疗的人们，如肝炎与HCV感染领域中的执业医师所理解的那样。
“治疗”、“疗法”、“给药方案”、“HCV感染”及相关术语如肝炎与HCV感染领域中的执业医师所理解的那样来使用。
本发明化合物一般以药物组合物的形式来给予，所述组合物包含治疗有效量的化合物或其可药用盐及可药用载体，且可含有常规赋形剂。可药用载体为具有可接受安全性的常规已知载体。组合物涵盖所有常见的固体形式与液体形式，包括例如胶囊剂、片剂、锭剂与粉末剂及液体混悬剂、糖浆剂、酏剂及溶液剂。组合物使用一般制剂技术来制备，且常规赋形剂(诸如粘合剂与润湿剂)与媒介物(诸如水与醇)通常用于组合物。参见例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，PA，17th edition，1985。
固体组合物通常被配制成剂量单位，且每份剂量提供约1至1000毫克活性成份的组合物是优选的。剂量的一些实例为1毫克、10毫克、100毫克、250毫克、500毫克及1000毫克。通常，其它药物可按与临床上所使用的经典单位范围相似的单位范围存在。典型地，其为0.25-1000毫克/单位。
液体组合物通常在剂量单位范围内。通常，液体组合物的单位剂量范围可以是1-100毫克/毫升。剂量的一些实例为1毫克/毫升、10毫克/毫升、25毫克/毫升、50毫克/毫升及100毫克/毫升。通常，其它药物可按与临床上所使用的经典单位范围相似的单位范围存在。典型地，其为1-100毫克/毫升。
本发明涵盖所有常规给药模式，且口服方法与肠胃外方法是优选的。通常，给药方案可类似于临床上所使用的其它药物。典型地，每日剂量可以是每日1-100毫克/公斤体重。通常，口服方式需要较多的化合物，而肠胃外方式需要较少的化合物。然而，具体的给药方案可由医师通过合理的医药判断来确定。
本发明也涵盖在组合疗法中给予所述化合物的方法。即所述化合物可与可用于治疗肝炎及HCV感染的其它药物一起使用，但所述化合物与所述其它药物分开使用。在这些组合方法中，所述化合物通常可搭配其它药物而以每日1-100毫克/公斤体重的每日剂量来给予。其它药物一般可按治疗上所使用的量来给予。然而，具体的给药方案可由医师通过合理的医药判断来确定。
适于组合物及方法的化合物的一些实例列在表2中。
表2
Figure BPA00001229922600181
Figure BPA00001229922600191
Figure BPA00001229922600201
具体实施方式
方案中所使用的缩写通常符合本领域中所使用的惯用意义。说明书和实施例中所使用的化学缩写如下定义：“NaHMDS”为二(三甲基甲硅烷基)氨基钠的缩写；“DMF”为N，N-二甲基甲酰胺的缩写；“MeOH”为甲醇的缩写；“NBS”为N-溴琥珀酰亚胺的缩写；“Ar”为芳基的缩写；“TFA”为三氟乙酸的缩写；“LAH”为氢化铝锂的缩写；“BOC”为叔丁氧羰基的缩写；“DMSO”为二甲基亚砜的缩写；“h”为小时的缩写；“rt”为室温或保留时间的缩写(根据上下文)；“min”为分钟的缩写；“EtOAc”为乙酸乙酯的缩写；“THF”为四氢呋喃的缩写；“EDTA”为乙二胺四乙酸的缩写；“Et2O”为乙醚的缩写；“DMAP”为4-二甲基氨基吡啶的缩写；“DCE”为1，2-二氯乙烷的缩写；“ACN”为乙腈的缩写；“DME”为1，2-二甲氧基乙烷的缩写；“HOBt”为1-羟基苯并三唑水合物的缩写；“DIEA”为二异丙基乙基胺的缩写；“Nf”为CF3(CF2)3SO2-的缩写；及“TMOF”为原甲酸三甲酯的缩写。
本文所使用的缩写如下定义：“1×”为一次的缩写，“2×”为两次的缩写，“3×”为三次的缩写，“℃”为摄氏度的缩写，“eq”为当量的缩写，“g”为克的缩写，“mg”为毫克的缩写，“L”为升的缩写，“mL”为毫升的缩写，“μL”为微升的缩写，“N”为当量浓度(normal)的缩写，“M”为摩尔浓度的缩写，“mmol”为毫摩尔的缩写，“min”为分钟的缩写，“h”为小时的缩写，“rt”为室温的缩写，“RT”为保留时间的缩写，“atm”为大气压的缩写，“psi”为磅/平方英寸的缩写，“conc.”为浓缩物的缩写，“sat”或“sat’d”为“饱和的”的缩写，“MW”为分子量的缩写，“mp”为熔点的缩写，“ee”为对映异构体过量的缩写，“MS”或“Mass Spec”为质谱的缩写，“ESI”为电喷雾离子化质谱的缩写，“HR”为高分辨的缩写，“HRMS”为高分辨质谱的缩写，“LCMS”为液相色谱-质谱的缩写，“HPLC”为高压液相色谱的缩写，“RP HPLC”为反相HPLC的缩写，“TLC”或“tlc”为薄层色谱的缩写，“NMR”为核磁共振波谱的缩写，“1H”为质子的缩写，“δ”为delta的缩写，“s”为单峰的缩写，“d”为二重峰的缩写，“t”为三重峰的缩写，“q”为四重峰的缩写，“m”为多重峰的缩写，“br”为宽峰的缩写，“Hz”为赫兹的缩写，及“α”、“β”、“R”、“S”、“E”和“Z”是本领域技术人员熟悉的立体化学指定符号。
一般方法
在室温和氮气下向相应的酸(30mg)、杂芳基取代的哌啶(1.5当量)和2-(1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基异脲
Figure BPA00001229922600211
四氟硼酸盐(2当量)于DMF(1ml)中的混合物中加入N，N-二异丙基乙胺(3当量)。将混合物在室温搅拌约17小时。然后混合物用MeOH稀释并通过Shimadzu-VP制备性反相HPLC来纯化。
Figure BPA00001229922600212
8-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-1，1a，2，12b-四氢-11-甲氧基-1a-[[2-(噻唑-2-基)-哌啶-1-基]羰基]-环丙并[d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-5-甲酰胺
以与上述相似的方式通过外消旋酸8-环己基-5-[[[(二甲基氨基)磺酰基]氨基]羰基]-1，12b-二氢-11-甲氧基-环丙并[d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600214
-1a(2H)-甲酸与2-(哌啶-2-基)噻唑之间的偶联反应来制备标题化合物，其为TFA盐。通过Shimadzu-VP制备性反相HPLC使用下述分离方法来纯化：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝30，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝12分钟，流速＝30mL/min，柱：Xterra Prep MS C185μ30×50mm，馏分收集：9.59-10.15分钟。(在220nm进行UV检测)。通过使用Shimadzu-VP设备(在220nm进行UV检测)和Waters Micromass来进行LC/MS。HPLC方法：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Xterra MS C18S73.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝702.41，HPLCRt＝1.942分钟。HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-10mM NH4OAc，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-10mMNH4OAc，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝702.52，HPLC Rt＝1.492分钟。分析性HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-0.1％TFA，起始％B＝10，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝20分钟，流速＝1mL/min，柱：Waters Sunfire C-18，4.6×150mm，3.5μm，Rt＝12.47分钟；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm，3.5μm，Rt＝10.93分钟。
13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-6-[[2-(噻唑-2-基)-哌啶-1-基]羰基]-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酰胺
以与上述相似的方式通过不饱和酸13-环己基-10-[[[(二甲基氨基)磺酰基]氨基]羰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600223
-6-甲酸与2-(哌啶-2-基)噻唑之间的偶联反应来制备标题化合物，其为TFA盐。通过Shimadzu-VP制备性反相HPLC使用下述分离方法来纯化：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝30，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝12分钟，流速＝30mL/min，柱：Xterra Prep MS C185μ30×50mm，馏分收集：10.15-10.76分钟。(在220nm进行UV检测)。通过使用Shimadzu-VP设备(在220nm进行UV检测)和Waters Micromass来进行LC/MS。HPLC方法：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Xterra MS C18S73.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝688.38，HPLCRt＝1.957分钟。HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-10mM NH4OAc，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-10mM NH4OAc，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝688.49，HPLC Rt＝1.530分钟。分析性HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-0.1％TFA，起始％B＝10，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝20分钟，流速＝1mL/min，柱：Waters Sunfire C-18，4.6×150mm，3.5μm，Rt＝12.29分钟；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm，3.5μm，Rt＝10.94分钟。
Figure BPA00001229922600231
8-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-1，1a，2，12b-四氢-11-甲氧基-1a-[[2-[3-(1-甲基乙基)-1，2，4-噁二唑-5-基]-哌啶-1-基]羰基]-环丙并[d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600232
-5-甲酰胺
以与上述相似的方式通过外消旋酸与3-异丙基-5-(哌啶-2-基)-1，2，4-噁二唑之间的偶联反应来制备标题化合物，其为TFA盐。通过Shimadzu-VP制备性反相HPLC使用下述分离方法来纯化：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝30，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝12分钟，流速＝30mL/min，柱：Xterra Prep MS C185μ30×50mm，馏分收集：10.44-11.29分钟。(在220nm进行UV检测)。通过使用Shimadzu-VP设备(在220nm进行UV检测)和Waters Micromass来进行LC/MS。HPLC方法：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Xterra MS C 18S73.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝729.46，HPLCRt＝2.027分钟。HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-10mM NH4OAc，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-10mM NH4OAc，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝729.50，HPLCRt＝1.663分钟。分析性HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-0.1％TFA，起始％B＝10，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝20分钟，流速＝1mL/min，柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm，3.5μm，Rt＝11.35分钟。
Figure BPA00001229922600241
13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-6-[[2-[3-(1-甲基乙基)-1，2，4-噁二唑-5-基]-哌啶-1-基]羰基]-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600242
-10-甲酰胺
以与上述相似的方式通过不饱和酸与3-异丙基-5-(哌啶-2-基)-1，2，4-噁二唑之间的偶联反应来制备标题化合物，其为TFA盐。通过Shimadzu-VP制备性反相HPLC使用下述分离方法来纯化：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝30，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝12分钟，流速＝30mL/min，柱：Xterra Prep MS C185μ30×50mm，馏分收集：10.59-11.20分钟。(在220nm进行UV检测)。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.15(宽单峰，1H)，7.91(宽单峰，1H)，7.59(宽单峰，1H)，7.57(d，J＝8.5，1H)，7.16(宽二重峰，1H)，7.06(宽单峰，2H)，5.20(宽单峰，1H)，4.42(宽单峰，1H)，3.93(s，3H)，3.17(m，1H)，3.09(宽单峰，1H)，3.03(s，6H)，2.88(宽多重峰，2H)，2.35(宽单峰，1H)，2.21-1.88(重叠的宽多重峰，5H)，1.86-1.67(重叠的宽多重峰，3H)，1.67-1.16(重叠的宽多重峰，8H)，1.32(s，6H)。通过使用Shimadzu-VP设备(在220nm进行UV检测)和Waters Micromass来进行LC/MS。HPLC方法：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Xterra MS C18S73.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝715.41，HPLC Rt＝2.025分钟。HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-10mM NH4OAc，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-10mMNH4OAc，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝715.45，HPLC Rt＝1.657分钟。分析性HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-0.1％TFA，起始％B＝10，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝20分钟，流速＝1mL/min，Waters Sunfire C-18，4.6×150mm，3.5μm，Rt＝13.06分钟；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm，3.5μm，Rt＝11.38分钟。
8-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-1，1a，2，12b-四氢-11-甲氧基-1a-[[4-(3-甲基-1，2，4-噁二唑-5-基)-哌啶-1-基]羰基]-环丙并[d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600252
-5-甲酰胺
以与上述相似的方式通过外消旋酸与3-甲基-5-(哌啶-4-基)-1，2，4-噁二唑之间的偶联反应来制备标题化合物，其为TFA盐。通过Shimadzu-VP制备性反相HPLC使用下述分离方法来纯化：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝30，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝12分钟，流速＝30mL/min，柱：Xterra Prep MS C185μ30×50mm，馏分收集：9.37-9.97分钟。(在220nm进行UV检测)。1H NMR(500MHz，CD3OD，其为两种异构体约2∶1比例的混合物)δ8.10(s，0.5H)，7.96(s，1H)，7.91(d，J＝8.5，0.5H)，7.85(d，J＝8.0，1H)，7.62(dd，J＝8.5，1.5，0.5H)，7.52(d，J＝8.0，1H)，7.324(d，J＝8.5，0.5H)，7.315(d，J＝8.5，1H)，7.20(d，J＝2，1H)，7.18(d，J＝2，0.5H)，7.02(dd，J＝8.5，2.5，1H)，7.00(dd，0.5H)，5.09(宽二重峰，J＝15.5，1H)，4.84(d，0.5H)，4.13(d，J＝15，0.5H)，3.91(s，1.5H)，3.90(s，3H)，3.66(d，J＝15.5，1H)，3.34-3.23(重叠的多重峰，2.5H)，3.23-3.17(重叠的多重峰，0.5H)，3.11-2.90(重叠的多重峰，2.5H)，3.01(s，9H)，2.84(m，1H)，2.72(宽多重峰，1H)，2.65(宽多重峰，1H)，2.52(dd，J＝9.9，6.3，0.5H)，2.37(s，4.5H)，2.28-1.72(重叠的宽多重峰，14H)，1.62(宽二重峰，1.5H)，1.57-1.18(重叠的宽多重峰，9H)，1.07(dd，J＝9.9，6.0，0.5H)，0.18(t，J＝6.0，0.5H)。通过使用Shimadzu-VP设备(在220nm进行UV检测)和Waters Micromass来进行LC/MS。HPLC方法：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Xterra MS C18S73.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝701.46，HPLCRt＝1.870分钟。HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-10mM NH4OAc，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-10mMNH4OAc，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝701.46，HPLC Rt＝1.390分钟。通过使用Shimadzu-VP设备(在254nm和256nm进行UV检测)来进行分析性HPLC。分析性HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-0.1％TFA，起始％B＝10，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝20分钟，流速＝1mL/min，柱：Waters Sunfire C-18，4.6×150mm，3.5μm，Rt＝11.66分钟；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm，3.5μm，Rt＝10.40分钟。
13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-6-[[4-(3-甲基-1，2，4-噁二唑-5-基)-哌啶-1-基]羰基]-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600272
-10-甲酰胺
以与上述相似的方式通过不饱和酸与3-甲基-5-(哌啶-4-基)-1，2，4-噁二唑之间的偶联反应来制备标题化合物，其为TFA盐。通过Shimadzu-VP制备性反相HPLC使用下述分离方法来纯化：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝30，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝12分钟，流速＝30mL/min，柱：Xterra Prep MS C185μ30×50mm，馏分收集：9.48-10.08分钟。(在220nm进行UV检测)。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.12(s，1H)，7.91(d，J＝8.5，1H)，7.59(dd，J＝8.5，1.5，1H)，7.55(d，J＝8.5，1H)，7.15(dd，J＝8.5，2.5，1H)，7.10(s，1H)，6.98(s，1H)，5.13(宽多重峰，1H)，4.37(宽多重峰，1H)，3.93(s，3H)，3.27-3.07(重叠的多重峰，4H)，3.02(s，6H)，2.92-2.81(重叠的多重峰，2H)，2.35(s，3H)，2.21-1.67(重叠的宽多重峰，10H)，1.57-1.32(重叠的宽多重峰，3H)，1-24(宽多重峰，1H)。通过使用Shimadzu-VP设备(在220nm进行UV检测)和Waters Micromass来进行LC/MS。HPLC方法：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Xterra MS C18S73.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝687.42，HPLCRt＝1.882分钟。HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-10mM NH4OAc，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-10mMNH4OAc，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝687.40，HPLCRt＝1.440分钟。通过使用Shimadzu-VP设备(在254nm和256nm进行UV检测)来进行分析性HPLC。分析性HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-O.1％TFA，起始％B＝10，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝20分钟，流速＝1mL/min，柱：Waters Sunfire C-18，4.6×150mm，3.5μm，Rt＝11.62分钟；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm，3.5μm，Rt＝10.46分钟。
Figure BPA00001229922600281
8-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-1，1a，2，12b-四氢-11-甲氧基-1a-[[4-(4-甲基-4H-1，2，4-三唑-3-基)-哌啶-1-基]羰基]-环丙并[d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600282
-5-甲酰胺
以与上述相似的方式通过外消旋酸与4-(4-甲基-4H-1，2，4-三唑-3-基)哌啶(2HCl，H2O)之间的偶联反应来制备标题化合物，其为TFA盐。通过Shimadzu-VP制备性反相HPLC使用下述分离方法来纯化：溶剂A＝1O％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-1O％H2O-0.1％TFA，起始％B＝30，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝12分钟，流速＝30mL/min，柱：Xterra Prep MS C185μ30×50mm，馏分收集：9.23-9.83分钟。(在220nm进行UV检测)。通过使用Shimadzu-VP设备(在220nm进行UV检测)和Waters Micromass来进行LC/MS。HPLC方法：溶剂A＝1O％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-1O％H2O-O.1％TFA，起始％B＝O，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Xterra MS C18S73.O×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝700.46，HPLCRt＝1.707分钟。HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-1OmM NH4OAc，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-10mM NH4OAc，起始％B＝O，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Phenomenex Lina C185μm3.O×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝700.39，HPLC Rt＝1.283分钟。通过使用Shimadzu-VP设备(在254nm和256nm进行UV检测)来进行分析性HPLC。分析性HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-0.1％TFA，起始％B＝10，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝20分钟，流速＝1mL/min，柱：Waters Sunfire C-18，4.6×150mm，3.5μm，Rt＝8.49分钟；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm，3.5μm，Rt＝8.37分钟。
13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-6-[[4-(4-甲基-4H-1，2，4-三唑-3-基)-哌啶-1-基]羰基]-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600292
-10-甲酰胺
以与上述相似的方式通过不饱和酸与4-(4-甲基-4H-1，2，4-三唑-3-基)哌啶(2HCl，H2O)之间的偶联反应来制备标题化合物，其为TFA盐。通过Shimadzu-VP制备性反相HPLC使用下述分离方法来纯化：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝30，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝12分钟，流速＝30mL/min，柱：Xterra Prep MS C185μ30×50mm，馏分收集：9.34-9.94分钟。(在220nm进行UV检测)。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ9.22(s，1H)，8.12(s，1H)，7.91(d，J＝9，1H)，7.58(dd，J＝8.5，1.5，1H)，7.56(d，J＝9，1H)，7.16(dd，J＝8.5，2.5，1H)，7.10(d，J＝2.5，1H)，7.01(s，1H)，5.15(宽多重峰，1H)，4.38(宽多重峰，1H)，3.93(s，3H)，3.88(s，3H)，3.40-3.26(重叠的多重溶剂峰，2H)，3.14(重叠的多重峰，2H)，3.02(s，6H)，2.88(重叠的多重峰，2H)，2.21-1.88(重叠的多重峰，6H)，1.79(重叠的宽多重峰，4H)，1.45(重叠的宽多重峰，3H)，1.24(宽多重峰，1H)。通过使用Shimadzu-VP设备(在220nm进行UV检测)和Waters Micromass来进行LC/MS。HPLC方法：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Xterra MS C18S73.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝686.43，HPLCRt＝1.688分钟。HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-10mM NH4OAc，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-10mMNH4OAc，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝686.41，HPLC Rt＝1.282分钟。通过使用Shimadzu-VP设备(在254nm和256nm进行UV检测)来进行分析性HPLC。分析性HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-0.1％TFA，起始％B＝10，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝20分钟，流速＝1mL/min，柱：Waters Sunfire C-18，4.6×150mm，3.5μm，Rt＝8.28分钟；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm，3.5μm，Rt＝8.57分钟。
Figure BPA00001229922600301
8-环己基-1，1a，2，12b-四氢-11-甲氧基-N-[(1-甲基乙基)磺酰基]-1a-[[4-(3-甲基-1，2，4-噁二唑-5-基)-哌啶-1-基]羰基]-环丙并[d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600302
-5-甲酰胺
以与上述相似的方式通过8-环己基-1，12b-二氢-11-甲氧基-5-[[[(1-甲基乙基)磺酰基]氨基]羰基]-环丙并[d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600303
-1a(2H)-甲酸与3-甲基-5-(哌啶-4-基)-1，2，4-噁二唑之间的偶联反应来制备标题化合物，其为TFA盐。通过Shimadzu-VP制备性反相HPLC使用下述分离方法来纯化：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝30，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝12分钟，流速＝30mL/min，柱：Xterra Prep MS C185μ30×50mm，馏分收集：9.35-9.95分钟。(在220nm进行UV检测)。1HNMR(500MHz，CD3OD，其为两种异构体约2.5∶1比例的混合物)δ8.12(s，0.4H)，7.97(s，1H)，7.91(d，J＝8.5，0.4H)，7.85(d，J＝8.5，1H)，7.63(d，J＝9.0，0.4H)，7.53(d，J＝8.0，1H)，7.32(d，J＝8.5，0.4H)，7.31(d，J＝8.5，1H)，7.19(d，J＝2.5，1H)，7.18(d，J＝2.5，0.4H)，7.02(dd，J＝8.5，2.5，1H)，7.00(dd，0.4H)，5.07(宽二重峰，J＝15，1H)，4.80(d，0.4H)，4.12(d，J＝15，0.4H)，3.99(m，1.4H)，3.91(s，1.2H)，3.90(s，3H)，3.64(d，J＝15，1H)，3.42-3.30(重叠的多重峰，1.2H)，3.30-3.17(m，1H)，3.10(宽多重峰，1H)，2.98(m，1.4H)，2.91-2.69(重叠的多重峰，2.4H)，2.63(宽多重峰，1H)，2.53(dd，J＝9.9，6.3，0.4H)，2.38(s，4.2H)，2.27-1.74(重叠的多重峰，13H)，1.64(宽二重峰，1.4H)，1.56-1.37(重叠的多重峰，5.6H)，1.47-1.44(与多重峰重叠的单峰，8.4H)，1.36-1.19(重叠的多重峰，3H)，1.08(dd，J＝9.8，6.0，0.4H)，0.17(t，J＝6.0，0.4H)。通过使用Shimadzu-VP设备(在220nm进行UV检测)和Waters Micromass来进行LC/MS。HPLC方法：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Xterra MS C18S73.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝700.38，HPLCRt＝1.897分钟。HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-10mM NH4OAc，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-10mM NH4OAc，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝700.45，HPLCRt＝1.265分钟。通过使用Shimadzu-VP设备(在254nm和256nm进行UV检测)来进行分析性HPLC。分析性HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-0.1％TFA，起始％B＝10，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝20分钟，流速＝1mL/min，柱：Waters Sunfire C-18，4.6×150mm，3.5μm，Rt＝11.49分钟；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm，3.5μm，Rt＝10.30分钟。
Figure BPA00001229922600311
8-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-1，1a，2，12b-四氢-11-甲氧基-1a-[[4-(5-甲基-1，3，4-噁二唑-2-基)-哌啶-1-基]羰基]-环丙并[d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600321
-5-甲酰胺
以与上述相似的方式通过外消旋酸与2-甲基-5-(哌啶-4-基)-1，3，4-噁二唑之间的偶联反应来制备标题化合物，其为TFA盐。通过Shimadzu-VP制备性反相HPLC使用下述分离方法来纯化：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝30，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝12分钟，流速＝30mL/min，柱：Xterra Prep MS C185μ30×50mm，馏分收集：8.85-9.45分钟。(在220nm进行UV检测)。1H NMR(500MHz，CD3OD，其为两种异构体约2∶1比例的混合物)δ8.09(s，0.5H)，7.99(s，1H)，7.91(d，J＝8.5，0.5H)，7.87(d，J＝8.5，1H)，7.62(dd，0.5H)，7.55(dd，1H)，7.33(d，J＝8.5，0.5H)，7.32(d，J＝8.5，1H)，7.20(d，J＝2.5，1H)，7.19(d，J＝2.5，0.5H)，7.03(dd，J＝8.5，2.5，1H)，7.00(dd，J＝8.5，2.5，0.5H)，5.10(宽二重峰，J＝15，1H)，4.82(d，0.5H)，4.15(d，J＝15，0.5H)，3.92(s，1.5H)，3.90(s，3H)，3.67(d，J＝15，1H)，3.39-3.10(重叠的多重峰，3H)3.10-2.93(重叠的多重峰，2.5H)，3.00(s，9H)，2.91-2.80(重叠的多重峰，1.5H)，2.72(宽多重峰，0.5H)，2.65(宽多重峰，1H)，2.55(s，4.5H)，2.52(m，0.5H)，2.29-1.74(重叠的宽多重峰，14H)，1.63(宽二重峰，1.5H)，1.57-1.38(重叠的宽多重峰，5.5H)，1.38-1.19(重叠的宽多重峰，3.5H)，1.07(dd，J＝9.6，6.0，0.5H)，0.18(t，J＝6.0，0.5H)。通过使用Shimadzu-VP设备(在220nm进行UV检测)和Waters Micromass来进行LC/MS。HPLC方法：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Xterra MS C18S73.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝701.34，HPLC Rt＝1.842分钟。HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-10mM NH4OAc，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-10mMNH4OAc，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝4mL/min，柱：Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝701.40，HPLC Rt＝1.315分钟。通过使用Shimadzu-VP设备(在254nm和256nm进行UV检测)来进行分析性HPLC。分析性HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-0.1％TFA，起始％B＝10，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝20分钟，流速＝1mL/min，柱：Waters Sunfire C-18，4.6×150mm，3.5μm，Rt＝10.78分钟；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm，3.5μm，Rt＝9.65分钟。
Figure BPA00001229922600331
(1aR，12bS)-8-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-1，1a，2，12b-四氢-11-甲氧基-1a-[[4-(5-甲基-1，3，4-噁二唑-2-基)-哌啶-1-基]羰基]-环丙并[d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600332
-5-甲酰胺
以与上述相似的方式通过手性酸(1aR，12bS)-8-环己基-5-[[[(二甲基氨基)磺酰基]氨基]羰基]-1，12b-二氢-11-甲氧基-环丙并[d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600333
-1a(2H)-甲酸与2-甲基-5-(哌啶-4-基)-1，3，4-噁二唑之间的偶联反应来制备标题化合物，其为TFA盐。通过Shimadzu-VP制备性反相HPLC使用下述分离方法来纯化：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝30，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝12分钟，流速＝30mL/min，柱：Xterra Prep MS C185μ30×50mm，馏分收集：8.85-9.45分钟。(在220nm进行UV检测)。通过使用Shimadzu-VP设备(在220nm进行UV检测)和Waters Micromass来进行LC/MS。HPLC方法：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Xterra MS C18S73.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝701.34，HPLC Rt＝1.817分钟。HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-10mM NH4OAc，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-10mMNH4OAc，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝4mL/min，柱：Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝701.34，HPLC Rt＝1.345分钟。分析性HPLC方法：溶剂A＝5％MeOH-95％H2O-10mM NH4HCO3(pH＝9.5)，溶剂B＝95％MeOH-5％H2O-10mM NH4HCO3(pH＝9.5)，起始％B＝10，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝20分钟，流速＝1mL/min，柱：PhenomenexGemini，Rt＝10.89分钟；柱：Waters Xbridge Phe，Rt＝10.42分钟。旋光度[α]＝-66.64，c＝3.14mg/ml(MeOH)，589nm，50mm样品池。
1a-[[4-(5-氨基-1，3，4-噻二唑-2-基)-哌啶-1-基]羰基]-8-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-1，1a，2，12b-四氢-11-甲氧基-环丙并[d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600342
-5-甲酰胺
以与上述相似的方式通过外消旋酸与5-(哌啶-4-基)-1，3，4-噻二唑-2-胺之间的偶联反应来制备标题化合物，其为TFA盐。通过Shimadzu-VP制备性反相HPLC使用下述分离方法来纯化：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝30，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝12分钟，流速＝30mL/min，柱：Xterra Prep MS C185μ30×50mm，馏分收集：8.18-8.78分钟。(在220nm进行UV检测)。1H NMR(500MHz，CD3OD，其为两种异构体约2.5∶1比例的混合物)δ8.09(s，0.4H)，7.99(s，1H)，7.93(d，J＝8.5，0.4H)，7.89(d，J＝8.5，1H)，7.63(d，J＝7.0，0.4H)，7.56(d，J＝8.5，1H)，7.34(d，J＝8.5，1.4H)，7.21(d，J＝2.5，1H)，7.19(d，J＝2.5，0.4H)，7.04(dd，J＝8.5，2.5，1H)，7.02(dd，0.4H)，5.14(宽二重峰，1H)，4.94-4.83(与溶剂峰重叠的二重峰，0.4H)，4.17(d，J＝15，0.4H)，3.92(s，1.2H)，3.91(s，3H)，3.70(d，J＝15，1H)，3.36-3.27(重叠的多重峰，2.8H)，3.2(重叠的多重峰，1.4H)，3.06-2.95(重叠的多重峰，2H)，3.01(s，8.4H)，2.86(宽多重峰，0.4H)，2.67(宽多重峰，1.4H)，2.55(dd，J＝9.6，6.3，0.4H)，2.30-1.88(重叠的宽多重峰，8H)，1.88-1.74(重叠的宽多重峰，4H)，1.65(宽二重峰，1H)，1.58-1.37(重叠的宽多重峰，5H)，1.37-1.20(重叠的宽多重峰，5H)，1.08(dd，J＝9.9，6.0，0.4H)，0.22(t，J＝6.0，0.4H)。通过使用Shimadzu-VP设备(在220nm进行UV检测)和Waters Micromass来进行LC/MS。HPLC方法：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Xterra MS C18S73.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝718.28，HPLCRt＝1.715分钟。HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-10mM NH4OAc，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-10mM NH4OAc，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝4mL/min，柱：Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝718.38，HPLC Rt＝1.210分钟。通过使用Shimadzu-VP设备(在254nm和256nm进行LV检测)来进行分析性HPLC。分析性HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-0.1％TFA，起始％B＝10，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝20分钟，流速＝1mL/min，柱：Waters Sunfire C-18，4.6×150mm，3.5μm，Rt＝8.80分钟；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm，3.5μm，Rt＝8.52分钟。
Figure BPA00001229922600351
8-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-1a-[[4-(3，5-二甲基-4H-1，2，4-三唑-4-基)-哌啶-1-基]羰基]-1，1a，2，12b-四氢-11-甲氧基-环丙并[d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600352
-5-甲酰胺
以与上述相似的方式通过外消旋酸与3，5-二甲基-4-(哌啶-4-基)-4H-1，2，4-三唑之间的偶联反应来制备标题化合物，其为TFA盐。通过Shimadzu-VP制备性反相HPLC使用下述分离方法来纯化：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝30，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝12分钟，流速＝30mL/min，柱：Xterra Prep MS C185μ30×50mm，馏分收集：7.59-8.19分钟。(在220nm进行UV检测)。1H NMR(500MHz，CD3OD，其为两种异构体约2∶1比例的混合物)δ8.03(重叠的单峰，1.5H)，7.93(重叠的二重峰，1.5H)，7.59(重叠的双二重峰，1.5H)，7.34(d，J＝8.5，1.5H)，7.21(重叠的多重峰，1.5H)，7.04(dd，J＝8.5，2.5，1H)，7.01(dd，J＝8.5，2.5，0.5H)，5.16(d，J＝15，1H)，4.93(d，0.5H)，4.69(m，1H)，4.43(m，0.5H)，4.21(d，J＝15.5，0.5H)，3.92(s，1.5H)，3.91(s，3H)，3.69(d，J＝15.5，1H)，3.20(m，1H)，3.09-2.92(m，1H)，3.02(s，6H)，2.97(s，3H)，2.90-2.76(单峰和重叠的多重峰，5.5H)，2.76-2.41(宽单峰和重叠的多重峰，9H)，2.31(宽多重峰，1.5H)，2.25-1.88(重叠的宽多重峰，9H)，1.88(宽多重峰，4H)，1.63(宽二重峰，1H)，1.55-1.37(重叠的宽多重峰，5.5H)，1.37-1.18(重叠的宽多重峰，3.5H)，1.06(宽多重峰，0.5H)，0.21(t，J＝6.1，0.5H)。通过使用Shimadzu-VP设备(在220nm进行UV检测)和Waters Micromass来进行LC/MS。HPLC方法：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Xterra MS C18S73.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝714.46，HPLCRt＝1.675分钟。HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-10mM NH4OAc，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-10mM NH4OAc，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝4mL/min，柱：Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝714.47，HPLC Rt＝1.207min。通过使用Shimadzu-VP设备(在254nm和256nm进行UV检测)来进行分析性HPLC。分析性HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-0.1％TFA，起始％B＝10，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝20分钟，流速＝1mL/min，柱：Waters Sunfire C-18，4.6×150mm，3.5μm，Rt＝7.65分钟；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm，3.5μm，Rt＝8.31分钟。
Figure BPA00001229922600371
8-环己基-1，1a，2，12b-四氢-11-甲氧基-N-[(1-甲基乙基)磺酰基]-1a-[[4-(5-甲基-1，3，4-噁二唑-2-基)-哌啶-1-基]羰基]-环丙并[d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600372
-5-甲酰胺
以与上述相似的方式通过外消旋酸8-环己基-1，12b-二氢-11-甲氧基-5-[[[(1-甲基乙基)磺酰基]氨基]羰基]-环丙并[d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600373
-1a(2H)-甲酸与2-甲基-5-(哌啶-4-基)-1，3，4-噁二唑之间的偶联反应来制备标题化合物，其为TFA盐。通过Shimadzu-VP制备性反相HPLC使用下述分离方法来纯化：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝30，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝12分钟，流速＝30mL/min，柱：Xterra Prep MS C185μ30×50mm，馏分收集：8.68-9.91分钟。(在220nm进行UV检测)。1HNMR(500MHz，CD3OD，其为两种异构体约2∶1比例的混合物)δ8.10(s，0.5H)，7.99(s，1H)，7.92(d，J＝8.5，0.5H)，7.87(d，J＝8.5，1H)，7.63(dd，J＝8.5，1.5，0.5H)，7.56(d，J＝8.0，1H)，7.31(d，J＝8.5，1.5H)，7.19(d，J＝2.5，1H)，7.18(d，J＝2.5，0.5H)，7.02(dd，J＝8.5，2.5，1H)，6.99(dd，0.5H)，5.08(宽二重峰，J＝14.7，1H)，4.80(d，J＝14.7，0.5H)，4.13(d，J＝15，0.5H)，3.98(m，1.5H)，3.91(s，1.5H)，3.90(s，3H)，3.65(d，J＝15，1H)，3.38-3.23(重叠的多重峰，2H)，3.20(m，0.5H)，3.07(宽多重峰，1H)，2.98(m，1.5H)，2.92-2.67(重叠的多重峰，2.5H)，2.63(宽多重峰，1H)，2.53(m，0.5H)，2.56(s，4.5H)，2.29-1.86(重叠的多重峰，10H)，1.86-1.73(重叠的多重峰，4H)，1.63(宽二重峰，1.5H)，1.56-1.36(重叠的多重峰，5H)，1.44(与多重峰重叠的宽单峰，9H)，1.36-1.19(重叠的多重峰，4H)，1.06(dd，J＝9.9，6.0，0.5H)，0.18(t，J＝6.0，0.5H)。通过使用Shimadzu-VP设备(在220nm进行UV检测)和WatersMicromass来进行LC/MS。HPLC方法：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Xterra MS C18S73.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝700.34，HPLCRt＝1.837分钟。HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-10mM NH4OAc，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-10mM NH4OAc，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝4mL/min，柱：Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝700.46，HPLC Rt＝1.207分钟。通过使用Shimadzu-VP设备(在254nm和256nm进行UV检测)来进行分析性HPLC。分析性HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-0.1％TFA，起始％B＝10，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝20分钟，流速＝1mL/min，柱：Waters Sunfire C-18，4.6×150mm，3.5μm，Rt＝10.67分钟；柱：Waters Xbridge Phenyl柱4.6×150mm，3.5μm，Rt＝9.61分钟。
Figure BPA00001229922600381
8-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-1，1a，2，12b-四氢-11-甲氧基-1a-[[4-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)-哌啶-1-基]羰基]-环丙并[d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600382
-5-甲酰胺
以与上述相似的方式通过外消旋酸与2-苯基-5-(哌啶-4-基)-1，3，4-噁二唑之间的偶联反应来制备标题化合物，其为TFA盐。通过Shimadzu-VP制备性反相HPLC使用下述分离方法来纯化：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝30，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝12分钟，流速＝30mL/min，柱：Xterra Prep MS C185μ30×50mm，馏分收集：9.79-10.39分钟。(在220nm进行UV检测)。1H NMR(500MHz，CD3OD，其为两种异构体约2∶1比例的混合物)δ8.11(s，0.5H)，8.09-8.02(重叠的多重峰，3H)，7.99(s，1H)，7.90(d，J＝8.6，0.5H)，7.81(宽单峰，1H)，7.67-7.54(重叠的多重峰，5H)，7.50(宽二重峰，1H)，7.32(d，J＝8.5，0.5H)，7.31(d，J＝8.5，1H)，7.20(重叠的二重峰，1.5H)，7.02(dd，J＝8.7，2.5，1H)，6.99(dd，0.5H)，5.10(宽二重峰，J＝15，1H)，4.84(d，0.5H)，4.14(d，J＝15，0.5H)，3.91(s，1.5H)，3.90(s，3H)，3.66(d，J＝15，1H)，3.43(宽多重峰，1H)，3.39-3.30(重叠的多重峰，1H)，3.29(m，0.5H)，3.20，3.18，3.14(与1组宽多重峰重叠的2组多重逢，2H)，3.08-2.88(重叠的多重峰，1.5H)，2.96(宽单峰，9H)，2.83(重叠的多重峰，1.5H)，2.66(宽多重峰，1H)，2.55(dd，J＝9.9，6.3，0.5H)，2.40-2.21(重叠的宽多重峰，1.5H)，2.21-1.87(重叠的宽多重峰，10H)，1.87-1.72(重叠的宽多重峰，4H)，1.65(宽二重峰，1H)，1.57-1.17(重叠的多重峰，8H)，1.08(dd，J＝9.8，6.0，0.5H)，0.18(t，J＝6.0，0.5H)。通过使用Shimadzu-VP设备(在220nm进行UV检测)和Waters Micromass来进行LC/MS。HPLC方法：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Xterra MS C18S73.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝763.36，HPLCRt＝1.937分钟。HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-10mM NH4OAc，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-10mMNH4OAc，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝4mL/min，柱：Phenomenex Lina C185μm3.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝763.36，HPLCRt＝1.583分钟。通过使用Shimadzu-VP设备(在254nm和256nm进行UV检测)来进行分析性HPLC。分析性HPLC方法：溶剂A＝5％MeOH-95％H2O-10mM NH4HCO3(pH＝9.5)，溶剂B＝95％MeOH-5％H2O-10mM NH4HCO3(pH＝9.5)，起始％B＝10，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝20分钟，流速＝1mL/min，柱：PhenomenexGemini，Rt＝11.46分钟；柱：Waters Xbridge Phe，Rt＝10.34分钟。
Figure BPA00001229922600401
1a-[[4-(苯并噁唑-2-基)-哌啶-1-基]羰基]-8-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-1，1a，2，12b-四氢-11-甲氧基-环丙并[d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600402
-5-甲酰胺
以与上述相似的方式通过外消旋酸与2-(哌啶-4-基)苯并[d]噁唑之间的偶联反应来制备标题化合物，其为TFA盐。通过Shimadzu-VP制备性反相HPLC使用下述分离方法来纯化：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝30，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝12分钟，流速＝30mL/min，柱：Xterra Prep MS C185μ30×50mm，馏分收集：10.05-10.65分钟。(在220nm进行UV检测)。1HNMR(500MHz，CD3OD，其为两种异构体约2∶1比例的混合物)δ8.12(s，0.5H)，8.01(s，1H)，7.90(d，J＝8.5，0.5H)，7.79(宽单峰，1H)，7.67-7.59(重叠的多重峰，3.5H)，7.49(宽二重峰，1H)，7.38(重叠的多重峰，3H)，7.33(d，0.5H)，7.31(d，J＝8.5，1H)，7.19(重叠的二重峰，1.5H)，7.02(dd，J＝8.7，2.5，1H)，6.99(dd，0.5H)，5.11(宽二重峰，J＝14.6，1H)，4.84(d，0.5H)，4.14(d，J＝15，0.5H)，3.91(s，1.5H)，3.90(s，3H)，3.66(d，J＝15，1H)，3.40(m，0.5H)，3.37(m，0.5H)，3.20(m，0.5H)，3.14-3.03(重叠的宽多重峰，2H)，3.03-2.90(重叠的多重峰，1.5H)，2.96(宽单峰，9H)，2.84(重叠的多重峰，2H)，2.66(宽多重峰，1.5H)，2.54(dd，J＝9.9，6.3，0.5H)，2.37-2.21(重叠的宽多重峰，1.5H)，2.21-1.86(重叠的宽多重峰，9H)，1.86-1.70(重叠的宽多重峰，4H)，1.61(宽二重峰，1.5H)，1.56-1.17(重叠的多重峰，8.5H)，1.08(dd，J＝9.8，6.0，0.5H)，0.18(t，J＝6.0，0.5H)。通过使用Shimadzu-VP设备(在220nm进行UV检测)和Waters Micromass来进行LC/MS。HPLC方法：溶剂A＝10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝5mL/min，柱：Xterra MS C18S73.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝736.35，HPLCRt＝1.978分钟。HPLC方法：溶剂A＝5％MeCN-95％H2O-10mM NH4OAc，溶剂B＝95％MeCN-5％H2O-10mM NH4OAc，起始％B＝0，最终％B＝100，梯度时间＝2分钟，终止时间＝3分钟，流速＝4mL/min，柱：Phenomenex Lina C185μm 3.0×50mm；(ES+)m/z(M+H)+＝736.41，HPLC Rt＝1.622分钟。通过使用Shimadzu-VP设备(在254nm和256nm进行UV检测)来进行分析性HPLC。分析性HPLC方法：溶剂A＝5％MeOH-95％H2O-10mM NH4HCO3(pH＝9.5)，溶剂B＝95％MeOH-5％H2O-10mM NH4HCO3(pH＝9.5)，起始％B＝10，最终％B＝100，梯度时间＝10分钟，终止时间＝20分钟，流速＝1mL/min，柱：Phenomenex Gemini，Rt＝11.47分钟；柱：Waters Xbridge Phe，Rt＝10.28分钟。
下表显示了使用与上述相似的化学方法来制备的化合物，且使用下述方法来表征。纯化方法：Dionex LC；Chromeleon 6.70sp1LC软件；用于分析的HP 1100四元泵；用于制备的带有50mL/min头件的Varian prostar二元泵；Dionex UVD340U UV光谱仪；Sedex 75ELS检测仪；Thermo-FinnigenMSQ Surveyor Plus质谱仪。LC条件：柱：Phenomenex Gemini 21.2×250mm5μm C18；流动相：A＝水；B＝ACN；调节剂＝0.1％TFA/水。最终分析方法：MassLynx 4.0SP4LC-MS软件；CTC-Leap HTS-PAL自动进样器；Agilent1100二元泵；Agilent 1100光敏二极管阵列；Polymer Lab 2100ELS检测器(蒸发温度＝45℃且喷雾温度＝35℃)；与ESCi质谱仪相连的Waters zQ。LC条件：柱：Suppelco Ascentis C184.6×50mm 2.7微米；流动相：A＝水+10mMNH4OAc；B＝CAN。
Figure BPA00001229922600411
Figure BPA00001229922600421
Figure BPA00001229922600431
Figure BPA00001229922600441
以下化合物以与上述相似的方式来制备，且使用下述方法来表征。纯化方法：柱：Phenomenex Gemini 21.2×250mm 5μm C18；保护柱：PhenomenexGemini 21.2×10mm 5μm C18；溶剂A＝5∶95MeCN∶水；溶剂B＝95∶5MeCN∶水；调节剂＝10mM NH4OAc；流速＝20mL/min；％B＝30(0至5分钟)，30至95(5至23分钟)，95(23至27分钟)，95至30(27至27.5分钟)，30(27.5至30分钟)。分析方法：与ESCi质谱仪相连的Waters ZQ；HPLC保留时间以分钟计；溶剂A＝5∶95MeCN∶Water；溶剂B＝95∶5MeCN∶水；调节剂为10mMNH4OAc；柱：Supelco Ascentis 4.6×50mm 2.7μm C18；流速＝2mL/min；％B＝10至95(0至8分钟)，95(8至9分钟)，95至10(9至9.2分钟)，10(9.2至10分钟且3mL/min)。
Figure BPA00001229922600442
Figure BPA00001229922600451
8-环己基-1，1a，2，12b-四氢-11-甲氧基-1a-[[4-[5-(1-甲基乙基)-1，3，4-噁二唑-2-基]-哌啶-1-基]羰基]-N-[(1-甲基乙基)磺酰基]-环丙并[d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
Figure BPA00001229922600453
-5-甲酰胺
在0℃向酸(35.1mg、0.053mmol)于1，2-二氯乙烷(1mL)中的溶液中加入1，1’-羰基二咪唑(9.45mg、58.3μmol)。30分钟后，加入异丁酰肼(5.41mg、53μmol)。使偶联反应在0℃进行45分钟，然后一次性加入CBr4(35.2mg、106μmol)和Ph3P(三苯基膦)(27.8mg、106μmol)。将混合物在室温搅拌过夜。产物通过制备性HPLC来纯化。MH+＝728.7。
对于本领域技术人员显而易见的是，本发明不限于上述示例性实施例，且本发明可按其它具体形式来实施而不背离本发明基本属性。因此期望的是，所述实施例应该被视为是示例性而非限制性的，因此参考所附权利要求而非前述实施例，落在这些权利要求等同意义和范围内的所有变化都涵盖在这些权利要求中。

Claims (17)

1.式I化合物或其可药用盐：
Figure FPA00001229922500011
其中
R1为CO2R5或CONR6R7；
R2为取代有1个Ar1的哌啶基团；
R3为氢、卤素、烷基、烯基、羟基、苄基氧基或烷氧基；
R4为环烷基；
R5为氢或烷基；
R6为氢、烷基、烷基SO2、环烷基SO2、卤代烷基SO2、(R8)(R9)NSO2或(R10)SO2；
R7为氢或烷基；
R8为氢或烷基；
R9为氢或烷基；
R10为氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、N-(烷基)哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、高哌啶基或高吗啉基；
Ar1为吡咯基、噻吩基、呋喃基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、吲哚基、羟吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑基、苯并咪唑酮基、苯并噁唑基、苯并噻唑基或苯并三唑基，且Ar1取代有0-2个取代基，所述取代基选自卤素、烷基、环烷基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羧基、烷氧基羰基、呋喃基和苯基，其中所述苯基取代有卤素、烷基或烷氧基取代基中的0-2个；及
X不存在或者X为键或亚甲基。
2.权利要求1的化合物或其可药用盐，其中R1为CONR6R7；R2为取代有1个Ar1的哌啶基团；R3为烷氧基；R4为环烷基；R6为烷基SO2或(R8)(R9)NSO2；R7为氢；R8为烷基；R9为烷基；Ar1为吡唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并咪唑酮基或苯并噁唑基，且Ar1取代有0-2个取代基，所述取代基选自卤素、烷基、氨基、烷氧基羰基、呋喃基和苯基，其中所述苯基取代有卤素或烷氧基取代基中的0-2个；且X为键或亚甲基。
3.权利要求1的化合物或其可药用盐，其中R1为CONR6R7；R2为取代有1个Ar1的哌啶基团；R3为甲氧基；R4为环己基；R6为异丙基SO2或(二甲基氨基)SO2；R7为氢；Ar1为(呋喃基)吡唑基、(乙基羧基)噁唑基、噻唑基、(甲基)三唑基、(二甲基)三唑基、(甲基)噁二唑基、(乙基)噁二唑基、(丙基)噁二唑基、(异丙基)噁二唑基、(苯基)噁二唑基、(氨基)噻二唑基、吲哚基、苯并呋喃基、氟苯并异噁唑基、(甲基)苯并咪唑基、(苯基)吡唑基、(氯苯基)吡唑基、(甲氧基苯基)吡唑基、苯并咪唑酮基或苯并噁唑基；且X为键或亚甲基。
4.权利要求1的化合物，其中R1为CONR6R7；R6为烷基SO2、环烷基SO2、卤代烷基SO2、(R8)(R9)NSO2或(R10)SO2；及R7为氢。
5.权利要求1的化合物，其中R3为氢。
6.权利要求1的化合物，其中R3为甲氧基。
7.权利要求1的化合物，其中R4为环己基。
8.权利要求1的化合物，其中R6为(R8)(R9)NSO2或(R10)SO2。
9.权利要求1的化合物，其中Ar1为吡唑基、噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并咪唑酮基或苯并噁唑基、且Ar1取代有0-2个取代基，所述取代基选自卤素、烷基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羧基、烷氧基羰基、呋喃基和苯基，其中所述苯基取代有卤素、烷基或烷氧基取代基中的0-2个。
10.权利要求1的化合物，其中X为亚甲基。
11.权利要求1的化合物，其中X为键。
12.权利要求1的化合物，其具有如下立体化学：
Figure FPA00001229922500031
13.权利要求1的化合物或其可药用盐，所述化合物选自：
Figure FPA00001229922500032
Figure FPA00001229922500041
Figure FPA00001229922500051
14.一种组合物，其包含权利要求1的化合物或其可药用盐和可药用载体。
15.权利要求14的组合物，其还包含至少一种额外的对HCV具有治疗益处的化合物，其中所述化合物选自干扰素、环孢菌素、白细胞介素、HCV金属蛋白酶抑制剂、HCV丝氨酸蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV解螺旋酶抑制剂、HCV NS4B蛋白抑制剂、HCV进入抑制剂、HCV组装抑制剂、HCV释出抑制剂、HCV NS5A蛋白抑制剂、HCV NS5B蛋白抑制剂和HCV复制子抑制剂。
16.一种治疗丙型肝炎感染的方法，所述方法包括向患者给药治疗有效量的权利要求1的化合物。
17.权利要求16的方法，其还包括给药至少一种额外的对HCV具有治疗益处的化合物，其中所述化合物选自干扰素、环孢菌素、白细胞介素、HCV金属蛋白酶抑制剂、HCV丝氨酸蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV解螺旋酶抑制剂、HCV NS4B蛋白抑制剂、HCV进入抑制剂、HCV组装抑制剂、HCV释出抑制剂、HCVNS5A蛋白抑制剂、HCV NS5B蛋白抑制剂和HCV复制子抑制剂。
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PB01 Publication
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SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

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