CN102858777B - 治疗丙型肝炎的吡唑并哒嗪衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供式I的化合物包括其盐以及使用所述化合物的组合物和方法。所述化合物具有抗丙型肝炎病毒(HCV)的活性且可用于治疗感染HCV的患者。

Description

治疗丙型肝炎的吡唑并哒嗪衍生物
对相关申请的交叉参考
本申请要求2010年2月25日提交的美国临时专利申请61/308,084的权益。
技术领域
本发明大体上涉及新的式I的化合物包括其盐，其具有抗丙型肝炎病毒(HCV)的活性且用于治疗感染HCV的患者。本发明还涉及使用这些化合物的组合物和方法。
背景技术
HCV是主要的人类病原体，其在世界范围内感染约一亿七千万人—大致是1型人类免疫缺陷病毒感染数量的5倍。这些HCV感染个体中相当大的部分发展成严重的进行性肝脏疾病，包括肝硬化和肝细胞癌(Lauer，G.M.；Walker,B.D.N.Engl.J.Med.2001,345,41-52)。
HCV是正链RNA病毒。基于对所推断氨基酸序列进行的比较和5’-非翻译区的广泛类似性，已经将HCV归类为黄病毒科(Flaviviridae family)中独立的属。黄病毒科的所有成员都具有包封的病毒体(enveloped virion)，其含有的正链RNA基因组通过翻译单一的连续的可读框而编码所有已知的病毒专属性蛋白质。
在整个HCV基因组的核苷酸序列和所编码的氨基酸序列中发现了相当程度的异质性。已经表征了至少6种主要的基因型，且在世界范围内已经描述了多于50种的亚型。HCV的主要基因型在世界范围内的分布不同，尽管进行了基因型对发病和治疗的可能影响的许多研究，然而HCV的遗传异质性的临床显著性仍然是难以确定的。
单链HCV RNA基因组的长度为约9500个核苷酸，且具有单一的可读框(ORF)，其编码由约3000个氨基酸组成的单一的大的多蛋白。在被感染的细胞中，这种多蛋白在多个位点被细胞蛋白酶和病毒蛋白酶裂解，从而产生结构蛋白和非结构(NS)蛋白。就HCV而言，成熟的非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的产生受到两种病毒蛋白酶的影响。认为第一种病毒蛋白酶为金属蛋白酶且在NS2-NS3接合处进行裂解；第二种病毒蛋白酶是包含在NS3(本申请也称为NS3蛋白酶)的N-端区域内的丝氨酸蛋白酶，且介导NS3下游的所有随后裂解，既在NS3-NS4A裂解位点以顺式进行裂解，又在其余的NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位点以反式进行裂解。NS4A蛋白似乎具有多种功能，其充当NS3蛋白酶的辅因子，且有助于NS3及其它病毒复制酶组分的膜定位。NS3-NS4A形成复合物是导致增加的蛋白质水解事件的效能的适当的蛋白酶活性所必须的。NS3蛋白还显示出三磷酸核苷酶和RNA解螺旋酶活性。NS5B(本申请也称为HCV聚合酶)是RNA依赖性的RNA聚合酶，其牵涉在HCV的复制中。HCV NS5B蛋白描述于“Structural Analysis of the Hepatitis C Virus RNA Polymerase inComplex with Ribonucleotides(Bressanelli；S.et al.,Journal of Virology2002,3482-3492；and Defrancesco and Rice,Clinics in Liver Disease 2003,7,211-242中。
目前，最有效的HCV疗法使用α-干扰素和利巴韦林的组合，其在40%的患者中产生持续的效果(Poynard,T.et al.Lancet 1998,352,1426-1432)。最新的临床结果证明，作为单一疗法，PEG化的α-干扰素优于未修饰的α-干扰素(Zeuzem,S.et al.N.Engl.J.Med.2000,343,1666-1672)。然而，即使就涉及PEG化α-干扰素和利巴韦林组合的实验性治疗方案而言，相当多的患者也没有出现病毒载量的持续减少。因此，就开发用于治疗HCV感染的有效化合物而言，存在明显和重要的需要。
HCV-796(一种HCV NS5B抑制剂)显示出在患者中降低HCV RNA水平的能力。当用所述化合物作为单一药物进行治疗时，病毒RNA水平在服药期间短暂降低，然后反弹，但当与形式为干扰素和利巴韦林的护理标准品组合时，所述水平较大幅下降。该化合物的开发由于在长期组合给药方案中观察到肝脏毒性而中止。美国专利7,265,152及相应的PCT专利申请WO2004/041201A2描述了HCV-796类的化合物。
本发明提供技术优点，例如所述化合物是新颖的且可有效抗丙型肝炎。另外，所述化合物例如在以下一个或多个方面提供针对药物用途的优点：其作用机制、结合、抑制效力、靶标选择性、溶解度、安全性或生物利用度。
发明内容
本发明的一方面为式I的化合物或其药用盐
其中：
R1为卤素、烷基、环烷基、烷氧基、二氧代噻嗪基、(R5)(R6)N、吡啶基或苯基，其中所述吡啶基或苯基取代有选自下述的1-2个取代基：烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、((R7)(R8)N)烷基、羟基、烷氧基、(R7)(R8)N、羧基、烷氧基羰基和CON(R16)(R17)，且其中所述吡啶基或苯基还取代有卤素、烷基、烷氧基、吡啶基、苯基、卤代苯基、(卤素)(CON(R7)(R8))苯基或(烷氧基)(CON(R7)(R8))苯基取代基中的0-2个；
R2为氢、卤素、烷基、环烷基、烷氧基或(R5)(R6)N；
R3为氰基、烷氧基羰基、(环烷基)氧基羰基、(烷基磺酰基)氨基羰基、CON(R11)(R12)、(R13)(R14)NCONH、三唑基、噻唑基或四唑基；
R4为取代有卤素、烷氧基、苯氧基或卤代苯氧基取代基中的0-2个的苯基；
R5为氢、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、苄基、烷基羰基、卤代烷基羰基、苯基羰基、(烷氧基苯基)羰基、烷基磺酰基、苯基磺酰基、(烷氧基苯基)磺酰基或(卤代烷氧基苯基)磺酰基；
R6为氢、烷基、羟基烷基或烷氧基烷基；
或R5和R6与它们所连接的氮一起形成二氧代噻嗪基；
R7为氢或烷基；
R8为氢或烷基；
R9为氢或烷基；
R10为氢或烷基；
或R9和R10一起形成亚乙基、亚丙基、亚丁基或亚戊基，且取代有0-2个氟原子；
R11为氢或烷基；
R12为氢或烷基；
或R11和R12与它们所连接的氮一起形成氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基；
R13为氢或烷基；
R14为氢或烷基；
或R13和R14与它们连接的氮一起形成氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基；
R15为烷基或环烷基；
R16为氢、烷基、
R17为氢或烷基；
R18为氢、卤素、烷基或烷氧基；且
Ar1为异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基或苯基；且取代有卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、(R7)(R8)N或苯基取代基中的0-3个。
本发明的另一方面为式I的化合物或其药用盐，其中：
R1为吡啶基或苯基且取代有选自下述的1个取代基：羧基、烷氧基羰基和CON(R16)(R17)，且还取代有卤素、烷基或烷氧基取代基中的0-2个；
R2为氢、卤素、烷基、环烷基、烷氧基或(R5)(R6)N；
R3为CON(R11)(R12)；
R4为取代有卤素、烷氧基、苯氧基或卤代苯氧基取代基中的0-2个的苯基；
R9为氢或烷基；
R10为氢或烷基；
或R9和R10一起形成亚乙基、亚丙基、亚丁基或亚戊基；
R11为氢或烷基；
R12为氢或烷基；
或R11和R12与它们所连接的氮一起形成氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基；
R16为氢、烷基或
R17为氢或烷基；
R18为氢；且
Ar1为异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基或苯基；且取代有卤素、烷基、卤代烷基或烷氧基取代基中的0-3个。
本发明的另一方面为式I的化合物或其药用盐，其中：
R1为取代有1个CON(R16)(R17)取代基且还取代有卤素、烷基或烷氧基取代基中的0-2个的苯基；
R2为氢；
R3为CON(R11)(R12)；
R4为取代有卤素、烷氧基、苯氧基或卤代苯氧基取代基中的0-2个的苯基；
R9为氢或烷基；
R10为氢或烷基；
或R9和R10一起形成亚乙基、亚丙基、亚丁基或亚戊基；
R11为氢或烷基；
R12为氢或烷基；
或R11和R12与它们所连接的氮一起形成氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基；
R16为
R17为氢或烷基；且
Ar1为异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基或苯基；且取代有卤素、烷基、卤代烷基或烷氧基取代基中的0-3个。
本发明的另一方面为式I的化合物或其药用盐，其中R1为取代有1个CON(R16)(R17)取代基且还取代有卤素、烷基或烷氧基取代基中的0-2个的苯基；R2为氢；R3为CON(R11)(R12)；R4为取代有卤素、烷氧基、苯氧基或卤代苯氧基取代基中的0-2个的苯基；R9和R10一起形成亚乙基；R11为烷基；R12为氢；R16为R17为氢；且Ar1为异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基或苯基。
本发明的另一方面为式I的化合物或其药用盐，其中R1为取代有1个CON(R16)(R17)取代基和1个烷基取代基以及0-1个烷氧基取代基的苯基；R2为氢；R3为CONHMe；R4为一氟苯基；R16为R9和R10一起形成亚乙基；R17为氢；且Ar1为嘧啶基或苯基。
本发明的另一方面为式I的化合物，其中R1为吡啶基或苯基且取代有选自下述的1-2个取代基：烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、((R7)(R8)N)烷基、羟基、烷氧基、(R7)(R8)N、羧基、烷氧基羰基和CON(R16)(R17)，且其中所述苯基或吡啶基还取代有卤素、烷基、烷氧基、吡啶基、苯基、卤代苯基、(卤素)(CON(R7)(R8))苯基或(烷氧基)(CON(R7)(R8))苯基取代基中的0-2个。
本发明的另一方面为式I的化合物，其中R1为苯基且取代有1个CON(R16)(R17)取代基且还取代有卤素、烷基、烷氧基、吡啶基、苯基、卤代苯基、(卤素)(CON(R7)(R8))苯基或(烷氧基)(CON(R7)(R8))苯基取代基中的0-2个。
本发明的另一方面为式I的化合物，其中R1为苯基且取代有1个CON(R16)(R17)取代基且还取代有卤素、烷基或烷氧基取代基中的0-2个。
本发明的另一方面为式I的化合物，其中R3为CON(R11)(R12)。
本发明的另一方面为式I的化合物，其中R3为CON(H)(烷基)。
本发明的另一方面为式I的化合物，其中R4为卤代苯基。
本发明的另一方面为式I的化合物，其中R4为苯基或一氟苯基。
本发明的另一方面为式I的化合物，其中Ar1为苯基。
本发明的另一方面为式Ia的化合物
任何变量(包括R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18或Ar1)的任何范围可独立与任何其它变量的范围一起使用。
除非另有说明，这些术语具有下述意义。“烷基”是指由1至6个碳构成的直链或支链烷基。“烯基”是指由2至6个碳构成且具有至少一个双键的直链或支链烷基。“环烷基”是指由3至7个碳构成的单环环系。“羟基烷基”、“烷氧基”和涉及取代烷基部分的其它术语包括就所述烷基部分而言的由1至6个碳原子构成的直链和支链异构体。“卤素”包括被卤素取代的取代基中的所有卤代异构体，从单卤素取代至全卤素取代，例如“卤代烷基”和“卤代烷氧基”、“卤代苯基”、“卤代苯氧基”。“芳基”包括碳环芳族取代基和杂环芳族取代基。括号和多重括号术语意在向本领域技术人员阐明键合关系。例如，诸如((R)烷基)那样的术语是指进一步被取代基R取代的烷基取代基。通过化学图示来说明其键合在多环系统(例如二环环系)上的可变位置处的取代基意在键合至其在图示中所依附的环。例如，式IV中的取代基R1和R2意在键合至式IV中的苯环而非键合至噻吩环。
亚乙基是指乙烷二基或-CH2CH2-；亚丙基是指丙烷二基或-CH2CH2CH2-；亚丁基是指丁烷二基或-CH2CH2CH2CH2-；亚戊基是指戊烷二基或-CH2CH2CH2CH2CH2-。
二氧代噻嗪基是指
本发明包括所述化合物的所有药用盐形式。药用盐为那些药用盐，其中抗衡离子不会显著影响所述化合物的生理学活性或毒性且其本身作为药理学等价物。这些盐可根据一般有机技术使用商购试剂来制备。一些阴离子盐形式包括乙酸盐、醋硬脂酸盐、苯磺酸盐、溴化物、樟脑磺酸盐、氯化物、枸橼酸盐、富马酸盐、葡萄糖醛酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、碘化物、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐及昔萘酸盐。一些阳离子盐形式包括铵盐、铝盐、苄星盐、铋盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺盐、锂盐、镁盐、葡甲胺盐、4-苯基环己基胺盐、哌嗪盐、钾盐、钠盐、丁三醇胺盐及锌盐。
本发明一些化合物具有不对称碳原子(参见例如以下结构)。本发明包括所有立体异构形式，包括对映异构体和非对映异构体及立体异构体的混合物诸如外消旋体。一些立体异构体可使用本领域已知的方法来制备。所述化合物的立体异构体混合物及相关中间体的立体异构体混合物可根据本领域公知的方法来分离成单独的异构体。当在以下方案和表格中描绘分子结构时使用的楔形线和虚线仅意在表示相对立体化学，而不应该被解释为暗示绝对立体化学指定。
本发明意在包括出现在本发明化合物中的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子数但质量数不同的那些原子。例如但不限于此，氢的同位素包括氘和氚。碳的同位素包括13C和14C。经同位素标记的本发明化合物通常可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与本申请所述相似的方法使用经同位素标记的适当试剂代替未经标记的所用相应试剂来制备。上述化合物可具有多种潜在用途，例如在确定生物学活性中作为标准品和试剂。在同位素是稳定的情况下，上述化合物可具有使生物学性质、药理学性质或药物代谢动力学性质得以有利改变的潜力。
合成方法
所述化合物可通过本领域已知的方法(包括如下所述的那些方法及在本领域技术范围内的变体)来制备。一些试剂和中间体是本领域已知的。其它试剂和中间体可通过本领域已知的方法使用容易得到的原料来制备。用于描述化合物合成的变量(例如所编号的“R”取代基)仅意在说明如何制备所述化合物，而不应该与权利要求书中或说明书其它段落中使用的变量相混淆。以下方法出于说明性目的，而非意在限制本发明范围。
所述化合物可通过本领域已知的方法(包括如下所述的那些方法及在本领域技术范围内的变体)来制备。一些试剂和中间体是本领域已知的。其它试剂和中间体可通过本领域已知的方法使用可商购得到的原料来制备。用于描述化合物合成的变量(例如所编号的“R”取代基)仅意在说明如何制备所述化合物，而不应该与权利要求书中或说明书其它段落中使用的变量相混淆。以下方法出于说明性目的，而非意在限制本发明范围。
方案中使用的缩写通常符合本领域中使用的惯用意义。说明书和实施例中使用的化学缩写如下定义：“NaHMDS”为二(三甲基甲硅烷基)氨基钠；“DMF”为N,N-二甲基甲酰胺；“MeOH”为甲醇；“NBS”为N-溴琥珀酰亚胺；“Ar”为芳基；“TFA”为三氟乙酸；“LAH”为氢化铝锂；“BOC”为叔丁氧羰基；“DMSO”为二甲基亚砜；“h”为小时；“rt”为室温或保留时间(根据上下文)；“min”为分钟；“EtOAc”为乙酸乙酯；“THF”为四氢呋喃；“EDTA”为乙二胺四乙酸；“Et2O”为乙醚；“DMAP”为4-二甲基氨基吡啶；“DCE”为1,2-二氯乙烷；“ACN”为乙腈；“DME”为1,2-二甲氧基乙烷；“HOBt”为1-羟基苯并三唑水合物；“DIEA”为二异丙基乙基胺；“Nf”为CF3(CF2)3SO2-；及“TMOF”为原甲酸三甲酯。
如在方案1所显示，本发明的一些化合物可通过如下制备：用适当的哒嗪进行氨化，然后用适当官能化的乙炔进行环化。如在试验部分所述，对保护基团进行标准脱除，这提供了产物。用于其它碳-碳键形成反应的其它偶联配体、技术和条件是本领域中已知的。可通过本领域已知的方法将酸和酯转化为酰胺。
方案1.
生物学方法
当在以下HCV RdRp测定中测定时，所述化合物展现出抗HCV NS5B的活性。
对HCV NS5B RdRp进行克隆、表达及纯化
将对HCV基因型1b的NS5B蛋白进行编码的cDNA克隆至pET21a表达载体中。将所述蛋白质表达成截掉C末端的18个氨基酸(the protein wasexpressed with an 18amino acid C-terminal truncation)以提高溶解度。大肠杆菌感受态细胞系BL21(DE3)用于所述蛋白质的表达。使培养物在37℃生长约4小时直到培养物达到在600纳米处的光密度为2.0。将培养物冷却至20℃并用1mM IPTG进行诱导。添加新鲜的氨苄青霉素至最终浓度为50微克/毫升并使细胞在20℃生长过夜。
对细胞沉淀(3升)进行细胞溶解以供纯化，得到15-24mg经纯化的NS5B。溶胞缓冲剂包含20mM Tris-HCl(pH 7.4)、500mM NaCl、0.5%TritonX-100、1mM DTT、1mM EDTA、20%甘油、0.5mg/mL溶菌酶、10mM MgCl2、15μg/mL脱氧核糖核酸酶I及完全TM蛋白酶抑制剂药片(Roche)。添加溶胞缓冲液后，经冷冻的细胞沉淀使用组织匀浆器来重新混悬。为了降低样品的粘度，使用与Branson超声波处理器相连的微尖头使溶胞产物的等分液在冰上接受超声波处理。经超声波处理的溶胞产物在4℃以100,000×g离心1小时并过滤通过0.2微米滤器单元(Corning)。
所述蛋白质使用三个连续的色谱步骤来纯化：肝素琼脂糖CL-6B、polyU琼脂糖4B及Hitrap SP琼脂糖(Pharmacia)。色谱缓冲液与溶胞缓冲液相同，但不含有溶菌酶、脱氧核糖核酸酶I、MgCl2或蛋白酶抑制剂且缓冲液中的NaCl浓度根据将蛋白质加载至色谱柱上的需要而调整。色谱柱各自以NaCl梯度液洗脱，所述梯度液的长度为5至50倍柱体积，这取决于色谱柱的类型。在最终色谱步骤后，所得到的酶纯度>90%(基于SDS-PAGE分析)。将酶分成等分液并贮存在-80℃。
标准HCV NS5B RdRp酶测定
在96孔板(Costar 3912)中在最终体积为60微升的情况下进行HCVRdRp基因型1b测定。测定缓冲液包含20mM Hepes(pH 7.5)、2.5mM KCl、2.5mM MgCl2、1mM DTT、1.6单位RNAse抑制剂(Promega N2515)、0.1毫克/毫升BSA(Promega R3961)及2%甘油。将所有化合物在DMSO中连续稀释(3倍)并在水中进一步稀释以使DMSO在测定中的最终浓度为2%。HCVRdRp基因型1b酶在最终浓度为28nM时使用。polyA模板在6nM时使用且生物素化的寡dT12引物在最终浓度为180nM时使用。模板是商购得到的(Amersham 27-4110)。生物素化的引物由Sigma Genosys制备。3H-UTP在0.6μCi(0.29μM总UTP)时使用。反应通过添加酶来引发，在30℃孵育60分钟并通过添加25微升含有SPA珠子(4微克/毫升)(Amersham RPNQ 0007)的50mM EDTA来停止。在室温孵育>1小时后，将板在Packard Top Count NXT上读取。
经修饰的HCV NS5B RdRp酶测定
经修饰的酶测定基本如就标准酶测定所述那样来进行，不同的是，生物素化的寡dT12引物如下预捕获在经链霉抗生物素涂覆的SPA珠子上：将引物与珠子在测定缓冲剂中混合并在室温孵育1小时。离心除去未结合的引物。将与引物结合的珠子重新混悬在20mM Hepes缓冲液(pH 7.5)中并在引物的最终浓度为20nM及珠子的最终浓度为0.67微克/微升时用于测定。测定中的添加顺序如下：将酶(14nM)添加至经稀释的化合物中，接着添加模板(0.2nM)、3H-UTP(0.6μCi,0.29μM)及与引物结合的珠子的混合物以引发反应，其中所给浓度为最终浓度。使反应在30℃进行4小时。
化合物的IC50值使用七种不同的[I]来确定。IC50值使用方程式y=A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))通过抑制作用来计算。
FRET测定制剂
96孔细胞培养板用于进行HCV FRET筛选测定。FRET肽(Anaspec,Inc.)(Taliani et al.,Anal.Biochem.1996,240,60-67)在其一端附近含有荧光供体即EDANS且在另一端附近含有受体即DABCYL。所述肽的荧光通过供体和受体之间的分子间共振能量转移(RET)来淬灭，但当NS3蛋白酶使所述肽裂解时，产物不再发生RET淬灭且供体的荧光变得显而易见。测定试剂如下制备：得自Promega(#E153A)的5×细胞荧光素酶细胞培养物溶胞试剂用dH2O稀释至1×，添加NaCl至最终为150mM且将FRET肽由2mM储备液稀释至最终为20μM。
为了制备板，带有或不带有海紫罗兰属荧光素酶(Renilla luciferase)报告子基因的HCV复制子细胞用胰蛋白酶处理并置于96孔板的每个孔中，其中将经滴定的测试化合物添加至第3列至第12列中；第1列和第2列含有对照化合物(HCV蛋白酶抑制剂)且最底行含有细胞而不含有化合物。然后将板置于37℃的CO2培养箱中。
测定
添加上述测试化合物(FRET测定制剂)后，在不同时间将板取出且向每个孔中添加Alamar蓝色溶液(Trek Diagnostics,#00-100)以测量细胞毒性。在Cytoflour 4000仪器(PE Biosystems)中读取后，板用PBS洗涤，然后通过向每个孔中添加30微升上述FRET肽测定试剂(FRET测定制剂)而用于FRET测定。然后将板置于Cytoflour 4000仪器中，其已被设定成激发波长为340nm/发射波长为490nm，以自动模式运行20次循环且板在动态模式中读取。典型地，读取后使用终点分析的信号对噪声为至少三倍。可选择地，进行Alamar蓝色读取后，板用PBS洗涤，添加不带有酚红的50微升DMEM(高葡萄糖)，然后板用于荧光素酶测定(使用Promega Dual-Glo荧光素酶测定系统)。
通过对相对的HCV复制子抑制作用及相对的细胞毒性值进行定量而对化合物进行分析。为了计算细胞毒性值，将得自对照孔的平均Alamar蓝色荧光信号设定为100%无毒性。然后将各个化合物测试孔中的各个信号除以平均对照信号并乘以100%以确定细胞毒性百分比。为了计算HCV复制子抑制值，平均背景值得自在测定结束时含有最高量HCV蛋白酶抑制剂的两个孔。这些值类似于得自天然Huh-7细胞的那些值。
然后将背景值从得自对照孔的平均信号中扣除且该值用作100%活性。然后将各个化合物测试孔中的各个信号除以背景扣除后的平均对照值并乘以100%以确定活性百分比。将针对蛋白酶抑制剂滴定的EC50值计算成使FRET或荧光素酶活性降低50%的浓度。针对化合物板得到的两个值即细胞毒性百分比和活性百分比用于确定有待进一步分析的重要化合物。
HCV复制子荧光素酶报告子测定
开发HCV复制子荧光素酶测定以监测本发明化合物对HCV病毒复制的抑制作用。复制子荧光素酶报告子测定的使用最初由Krieger等人(KriegerN,Lohmann V，and Bartenschlager R,J.Virol.75(10):4614-4624(2001))描述。使组成性表达HCV复制子的HUH-7细胞在含有10%胎牛血清(FCS)(Sigma)和1毫克/毫升G418(Gibco-BRL)的达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)(Gibco-BRL)中生长。将化合物在DMSO中以3倍连续稀释用于二十点滴定，然后转移至无菌384孔组织培养处理板(Corning目录号3571)中。然后板用50微升细胞(在含有4%FCS的DMEM中)以3.0×103个细胞/孔的密度接种(DMSO的最终浓度为0.5%)。在37℃孵育3天后，细胞的海紫罗兰属荧光素酶活性使用EnduRen作为底物(Promega目录号E6485)来分析。将EnduRen底物在DMEM中稀释，然后添加至板中至最终浓度为7.5μM。将板在37℃孵育2小时，然后立即通过Viewlux Imager(PerkinElmer)使用发光程序来读取30秒。为了评价化合物的细胞毒性，CC50值通过用Cell Titer-Blue(Promega目录号G8082)对含有EnduRen的板进行倍增来得到。将3微升Cell-Titer Blue添加至每个孔中并在37℃孵育8小时。每个孔的荧光信号使用Viewlux Imager来读取，其中激发波长为525/10纳米且发射波长为598/10纳米。
化合物的代表性数据示于表1中。
表1.
如果没有输入数据时，使用下面的解释：A为0.002或更小至0.25μM；B>0.25μM且<1.0μM；C为1.0μM至10.0μM；D>0.67μM，但未确定确切值；E>10.0μM；F>0.4μM，但未确定确切值；G>1.39μM，但未确定确切值；H>0.62μM，但未确定确切值；I>4μM，但未确定确切值；J>3.7μM，但未确定确切值；K>1.23μM，但未确定确切值；L>4.17μM，但未确定确切值；M>0.5μM，但未确定确切值。
药物组合物和治疗方法
所述化合物展现抗HCV NS5B的活性且可用于治疗HCV和HCV感染。因此，本发明另一个方面为一种组合物，其包含本发明化合物或其药用盐及药用载体。
本发明的另一方面为一种组合物，其还包含具有抗HCV活性的化合物。
本发明的另一方面为一种组合物，其中所述具有抗HCV活性的化合物为干扰素。在本发明的另一方面，所述干扰素选自干扰素α2B、PEG化的干扰素α、同感干扰素、干扰素α2A及淋巴细胞样干扰素τ。
本发明的另一方面为一种组合物，其中所述具有抗HCV活性的化合物为环孢菌素。在本发明的另一方面，所述环孢菌素为环孢菌素A。
本发明的另一方面为一种组合物，其中所述具有抗HCV活性的化合物选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、可提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、Imiqimod、利巴韦林、5’-单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、金刚烷胺及金刚乙胺。
本发明的另一方面为一种组合物，其中所述具有抗HCV活性的化合物可有效抑制靶标的功能以治疗HCV感染，所述靶标选自HCV金属蛋白酶(HCV metalloprotease)、HCV丝氨酸蛋白酶(HCV serine protease)、HCV聚合酶(HCV polymerase)、HCV解螺旋酶(HCV helicase)、HCV NS4B蛋白(HCVNS4B protein)、HCV进入(HCV entry)、HCV组装(HCV assembly)、HCV释出(HCV egress)、HCV NS5A蛋白(HCV NS5A protein)、IMPDH及核苷类似物(nucleo side analog)。
本发明的另一方面为一种组合物，其包含本发明化合物或其药用盐、药用载体、干扰素及利巴韦林。
本发明的另一方面为抑制HCV复制子(HCV replicon)功能的方法，所述方法包括使所述HCV复制子与本发明化合物或其药用盐接触。
本发明的另一方面为抑制HCV NS5B蛋白功能的方法，所述方法包括使所述HCV NS5B蛋白与本发明化合物或其药用盐接触。
本发明的另一方面为在患者中治疗HCV感染的方法，所述方法包括向所述患者给药治疗有效量的本发明化合物或其药用盐。在另一个实施方案中，所述化合物可有效抑制HCV复制子的功能。在另一个实施方案中，所述化合物可有效抑制HCV NS5B蛋白的功能。
本发明的另一方面为在患者中治疗HCV感染的方法，所述方法包括向所述患者给药治疗有效量的本发明化合物或其药用盐且给药(之前、之后或同时)其它具有抗HCV活性的化合物。
本发明的另一方面为其中所述其它具有抗HCV活性的化合物为干扰素的方法。
本发明的另一方面为其中所述干扰素选自干扰素α2B、PEG化的干扰素α、同感干扰素、干扰素α2A及淋巴细胞样干扰素τ的方法。
本发明的另一方面为其中所述其它具有抗HCV活性的化合物为环孢菌素的方法。
本发明的另一方面为其中所述环孢菌素为环孢菌素A的方法。
本发明的另一方面为其中所述其它具有抗HCV活性的化合物选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、可提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、Imiqimod、利巴韦林、5’-单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、金刚烷胺及金刚乙胺的方法。
本发明的另一方面为其中所述其它具有抗HCV活性的化合物可有效抑制靶标功能以治疗HCV感染的方法，所述靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCV NS5A蛋白、IMPDH及核苷类似物。
本发明的另一方面为其中所述其它具有抗HCV活性的化合物可有效抑制HCV生命循环中靶标的功能而非抑制HCV NS5B蛋白的功能的方法。
“治疗有效”是指提供有意义的患者益处所需要的药物量，如肝炎和HCV感染领域中的执业医师所理解的那样。
“患者”是指被HCV病毒感染且适于治疗的人们，如肝炎和HCV感染领域中的执业医师所理解的那样。
“治疗”、“疗法”、“给药方案”、“HCV感染”及相关术语如肝炎和HCV感染领域中的执业医师所理解的那样来使用。
本发明化合物一般以药物组合物的形式来给药，所述药物组合物包含治疗有效量的化合物或其药用盐及药用载体且可含有常规赋形剂。药用载体为具有可接受安全性的常规已知载体。组合物涵盖所有常见的固体形式和液体形式，包括例如胶囊剂、片剂、锭剂和粉末剂及液体混悬剂、糖浆剂、酏剂和溶液剂。组合物使用一般制剂技术来制备且常规赋形剂(诸如粘合剂和润湿剂)和媒介物(诸如水和醇)通常用于组合物。参见例如Remington’sPharmaceutical Sciences,Mack Publishing Company,Easton,PA,17th edition,1985。
固体组合物通常被配制成剂量单位且每份剂量提供约1至1000毫克活性成份的组合物是优选的。剂量的一些实例为1毫克、10毫克、100毫克、250毫克、500毫克及1000毫克。通常，其它药物将以与临床上所使用的经典单位范围相似的单位范围存在。典型地，其为0.25-1000毫克/单位。
液体组合物通常在剂量单位范围内。通常，液体组合物的单位剂量范围将为1-100毫克/毫升。剂量的一些实例为1毫克/毫升、10毫克/毫升、25毫克/毫升、50毫克/毫升及100毫克/毫升。通常，其它药物将以与临床上所使用的经典单位范围相似的单位范围存在。典型地，其为1-100毫克/毫升。
本发明涵盖所有常规给药模式且口服方法和胃肠外方法是优选的。通常，给药方案将类似于临床上所使用的其它药物。典型地，每日剂量将为每日1-100毫克/千克体重。通常，口服方法需要较多的化合物，而胃肠外方法需要较少的化合物。然而，具体的给药方案将由医师通过合理的医药判断来确定。
本发明也涵盖在组合疗法中给药所述化合物的方法。即所述化合物可与可用于治疗肝炎和HCV感染的其它药物联用，但所述化合物与所述其它药物分开使用。在这些组合方法中，所述化合物通常将搭配其它药物而以每日1-100毫克/千克体重的每日剂量来给药。其它药物通常将以治疗上所使用的量来给药。然而，具体的给药方案将由医师通过合理的医药判断来确定。
适于组合物及方法的化合物的一些实例示于表2中。
表2.
具体实施方式
中间体1
3-(4-氟苯基)-N-甲基丙炔酰胺
N-甲基丙炔酰胺的制备描述于WO1998022429A1,Preparation 2(第27页)中，其用于制备该中间体。3-(4-氟苯基)-N-甲基丙炔酰胺可根据以下方法类似地制备：J.Org.Chem.Vol.63,No.15,1998,5050-5058中用于制备3-(3-氟苯基)-N-甲基丙炔酰胺或3-(2,5-二氟苯基)-N-甲基丙炔酰胺的方法，或Organic Letters vol 7,No.21,2005,4753supplementary info page 1中用于使4-氟碘苯与TMS乙炔偶联的方法。由此可将可商购得到的1-氟-4-碘苯、N-甲基丙炔酰胺、Pd(PPh3)2Cl2、碘化亚铜(I)和三乙胺混合并加热，后处理后得到预期产物。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 7.45-7.54(m,2H),6.99-7.11(m,2H),6.02(宽单峰,1H),2.93(d,J＝5.02Hz,3H)。LCMS保留时间：1.405分钟。LC数据记录于配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0x 50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上，使用检测器波长为220nM的SPD-10AV UV-Vis检测器。洗脱条件采用：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，以及分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mMTFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用电喷射模式的用于LC的质谱平台(Micromass Platform)来确定。m/z 178(MH+)。
中间体2
3-(4-氟苯基)丙炔酰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯
向含有3-(4-氟苯基)-N-甲基丙炔酰胺(10.0g,56mmol)、一缩二碳酸二叔丁酯(13.5g,62mmol)和THF(282mL)的溶液中加入一份二甲基氨基吡啶(0.69g,5.6mmol)。将溶液保持1小时，浓缩以除去所有溶剂并在硅胶上纯化(0-80%乙酸乙酯/己烷，60分钟梯度)得到白色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 7.59(dd,J＝9.03,5.27Hz,2H),7.08(t,J＝8.78Hz,2H),3.23(s,3H),1.54-1.61(m,9H)。LCMS保留时间：2.397分钟。LC数据记录于配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0x 50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上，使用检测器波长为220nM的SPD-10AV UV-Vis检测器。洗脱条件采用：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，以及分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用电喷射模式的用于LC的质谱平台来确定。m/z300(MNa+)。
中间体3
4-甲基-3-(哒嗪-4-基)苯甲酸
在氮气气氛下向含有4-溴哒嗪(0.10g,0.63mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸(0.18g,0.69mmol)、碳酸钠(0.27g,2.52mmol)、二噁烷(5.2mL)和水(1.01mL)的脱气的混合物中加入一份四(三苯基膦)钯(0)(0.02g,0.02mmol)。将混合物在快速搅拌的同时在95°C搅拌4小时，冷却至室温并过滤。将过滤出的溶液用1N HCl (5.0mL)酸化至低于pH 4。将所得的沉淀物经过滤回收，用水(3x3.0mL)洗涤并空气干燥。将所得的褐色固体混悬于正戊烷(4mL)中，搅拌20分钟，经过滤回收并空气干燥得到4-甲基-3-(哒嗪-4-基)苯甲酸，其为褐色固体，其无需进一步纯化即可使用。LCMS：保留时间：1.325分钟。LC数据记录于配备有Sunfire,5微米,C18,3.0x50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上，使用检测器波长为220nM的SPD-10AV UV-Vis检测器。洗脱条件采用：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，以及分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用电喷射模式的用于LC的质谱平台来确定。m/z 215(MH+)。
中间体4
4-甲基-N-(1-苯基环丙基)-3-(哒嗪-4-基)苯甲酰胺
向含有2-苯基环丙胺盐酸盐(0.13g,0.76mmol)、二异丙基乙基胺(0.88mL,5.0mmol)、4-甲基-3-(哒嗪-4-基)苯甲酸(0.14g,0.63mmol)和DMF(4.2mL)的溶液中加入一份HATU(0.48g,1.3mmol)。将溶液在室温保持40分钟，并浓缩为残留物。将由此得到的残留物在硅胶上纯化(0-8%甲醇/二氯甲烷，45分钟梯度)得到4-甲基-N-(1-苯基环丙基)-3-(哒嗪-4-基)苯甲酰胺。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δppm 9.22-9.28(m,1H),9.18(d,J＝1.22Hz,1H),7.75-7.85(m,1H),7.70(d,J＝1.83Hz,1H),7.51(dd,J＝5.19,2.44Hz,1H),7.37-7.42(m,1H),7.23-7.33(m,5H),7.15-7.21(m,2H),3.70(dt,J＝13.12,6.56Hz,3H),3.17(q,J＝7.32Hz,3H),2.30-2.40(m,3H)。LCMS保留时间：1.655分钟。LC数据记录于配备有Sunfire,5微米,C18,3.0x50mm柱的ShimadzuLC-10AS液相色谱仪上，使用检测器波长为220nM的SPD-10AV UV-Vis检测器。洗脱条件采用：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，以及分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%CH3CN/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%CH3CN/10mM TFA。MS数据使用电喷射模式的用于LC的质谱平台来确定。m/z 330(MH+)。
中间体5和中间体6
2-(4-氟苯基)-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨基甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯和2-(4-氟苯基)-4-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨基甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯
部分A:向含有4-甲基-N-(1-苯基环丙基)-3-(哒嗪-4-基)苯甲酰胺(0.21g,0.55mmol)和二氯甲烷(4mL)的冷却(0°C冰浴)的溶液中快速逐滴加入O-(2,4,6-三甲苯基磺酰基)羟基胺(0.23g,0.58mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液。将溶液在0°C保持5分钟，由冷却浴中移去并在环境温度保持45分钟。将溶液浓缩为泡沫状物并在搅拌的同时混悬于正戊烷(5mL)中且保持20分钟。过滤收集固体并空气干燥得到1-氨基-4-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨基甲酰基)苯基)哒嗪-1-鎓2,4,6-三甲基苯磺酸盐，其为黄色粉末状物(345MH+)。
部分B:将在部分A中由此得到的产物混悬于THF(3.7mL)中。加入3-(4-氟苯基)丙炔酰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.19g,0.69mmol)并将混悬液冷却至-78°C(干冰/丙酮浴)。历时5分钟逐滴加入DBU(0.17g,1.14mmol)在THF(2mL)中的溶液。将混合物留置在冰浴中并在环境温度保持20小时。将混合物浓缩。在硅胶上纯化(30-100%乙酸乙酯/己烷，60分钟梯度)得到2-(4-氟苯基)-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨基甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯和2-(4-氟苯基)-4-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨基甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-b]哒嗪-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯，其为分开的区域异构体。2-(4-氟苯基)-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨基甲酰基)苯基)吡唑并[1，5-b]哒嗪-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯：1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.35(d,J＝2.26Hz,1H),8.12(d,J＝2.51Hz,1H),7.70-7.83(m,4H),7.42(d,J＝8.03Hz,1H),7.28-7.37(m,5H),7.13-7.24(m,3H),6.91(s,1H),3.29(s,3H),2.40(s,3H),1.40(d,J＝6.27Hz,4H),1.10(s,9H)。LCMS保留时间：2.731分钟。LC数据记录于配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0x50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上，使用检测器波长为220nM的SPD-10AV UV-Vis检测器。洗脱条件采用：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，以及分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mMTFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用电喷射模式的用于LC的质谱平台来确定。m/z 620(MH+)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.68(d,J＝2.51Hz,1H),8.43(d,J＝2.26Hz,1H),7.85(dd,J＝7.91,1.88Hz,1H),7.72-7.81(m,3H),7.45(d,J＝8.03Hz,1H),7.28-7.36(m,5H),7.16-7.27(m,3H),5.90(d,J＝4.52Hz,1H),2.90(d,J＝5.02Hz,3H),2.43(s,3H),1.42(s,2H),1.35-1.41(m,2H)。2-(4-氟苯基)-4-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨基甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯：1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.41(t,J＝5.14Hz,1H),7.79-7.92(m,3H),7.46-7.58(m,2H),7.41(d,J＝8.03Hz,1H),7.28-7.39(m,4H),7.10-7.23(m,3H),6.88-6.97(m,1H),2.59(s,1H),2.49(s,2H),2.39(s,1H),2.12(s,2H),1.30-1.43(m,4H),0.96-1.06(m,9H)。LCMS保留时间：2.616分钟。LC数据记录于配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0x50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上，使用检测器波长为220nM的SPD-10AVUV-Vis检测器。洗脱条件采用：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，以及分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用电喷射模式的用于LC的质谱平台来确定。m/z 620(MH+)。
实施例1
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨基甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-3-甲酰胺.
在室温向含有2-(4-氟苯基)-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨基甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.044g,0.065mmol)和二氯甲烷(4mL)的溶液中加入TFA(0.41mL,5.3mmol)。将溶液保持15分钟并浓缩。将所得的残留物使用制备性HPLC纯化(Waters-Xbridge,50x100mm,5微米,C18柱；0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)得到2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨基甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间：12.6分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 8.68(d,J＝2.51Hz,1H),8.43(d,J＝2.26Hz,1H),7.85(dd,J＝7.91,1.88Hz,1H),7.72-7.81(m,3H),7.45(d,J＝8.03Hz,1H),7.28-7.36(m,5H),7.16-7.27(m,3H),5.90(d,J＝4.52Hz,1H),2.90(d,J＝5.02Hz,3H),2.43(s,3H),1.42(s,2H),1.35-1.41(m,2H)。LCMS保留时间：2.310分钟。LC数据记录于配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0x50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上，使用检测器波长为220nM的SPD-10AV UV-Vis检测器。洗脱条件采用：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，以及分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用电喷射模式的用于LC的质谱平台来确定。m/z520(MH+)。
实施例2
2-(4-氟苯基)-N-甲基-4-(2-甲基-5-（1-苯基环丙基氨基甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-3-甲酰胺
在室温向含有2-(4-氟苯基)-4-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨基甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-3-羰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.054g,0.087mmol)和二氯甲烷(4mL)的溶液中加入TFA(0.54mL,7.6mmol)。将溶液保持15分钟并浓缩。将所得的残留物使用制备性HPLC纯化(Waters-Xbridge,50x100mm,5微米,C18柱；0.1M乙酸铵,10-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)得到2-(4-氟苯基)-N-甲基-4-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨基甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间：11.8分钟。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.92(s,1H),8.63(d,J＝4.52Hz,1H),7.98(d,J＝4.77Hz,1H),7.88-7.95(m,2H),7.85(dd,J＝7.91,1.63Hz,1H),7.82(s,1H),7.47(d,J＝8.28Hz,1H),7.34(t,J＝8.91Hz,2H),7.19-7.31(m,5H),7.11-7.19(m,1H),2.23(s,3H),2.08(d,J＝4.52Hz,3H),1.21-1.34(m,4H)。LCMS保留时间：2.188分钟。LC数据记录于配备有Phenomenex-Luna,10微米,C18,3.0x 50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上，使用检测器波长为220nM的SPD-10AV UV-Vis检测器。洗脱条件采用：流速为4mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为3分钟，保持时间为1分钟，以及分析时间为4分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用电喷射模式的用于LC的质谱平台来确定。m/z 520(MH+)。
中间体7
2-甲氧基-4-甲基-5-(哒嗪-4-基)苯甲酸甲酯
将含有4-溴哒嗪氢溴酸盐(0.20g,0.83mmol)、碳酸铯(1.1g,3.3mmol)和4-甲氧基-5-(甲氧基羰基)-2-甲基苯基硼酸(0.22g,1.0mmol)的混合物用二噁烷(8.3mL)处理。在搅拌的同时使氮气鼓泡通过混合物达15分钟。中止搅拌并加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.38g,0.04mmol)，接着加入三环己基膦(0.04g,0.13mmol)在甲苯(0.15mL)中的溶液。重新开始搅拌并将混合物在氮气下在80°C加热105分钟。将反应混合物冷却至RT，过滤并浓缩为残留物。将残留物在硅胶上纯化(5-100%乙酸乙酯/己烷)得到2-甲氧基-4-甲基-5-(哒嗪-4-基)苯甲酸甲酯，其为灰白色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.32-9.14(m,2H),7.75(s,1H),7.46(dd,J＝5.0,2.3Hz,1H),6.95(s,1H),3.98(s,3H),3.90(s,3H),2.39(s,3H)。LCMS保留时间：2.805分钟。LC数据记录于配备有Phenomenex-Luna,3微米,C18,2.0x50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上，使用检测器波长为220nM的SPD-10AV UV-Vis检测器。洗脱条件采用：流速为0.8mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，以及分析时间为5分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用电喷射模式的用于LC的质谱平台来确定。m/z259(MH+)。
中间体8和中间体9
5-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基甲酰基)-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸甲酯和5-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基甲酰基)-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-4-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸甲酯
部分A:向含有2-甲氧基-4-甲基-5-(哒嗪-4-基)苯甲酸甲酯(0.16g,0.66mmol)和二氯甲烷(3mL)的冷却(0°C冰浴)的溶液中快速逐滴加入O-(2,4,6-三甲苯基磺酰基)羟基胺(0.32g,0.90mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液。将溶液在0°C保持5分钟，由冷却浴中移去并在环境温度保持5小时。将溶液浓缩得到1-氨基-4-(4-甲氧基-5-(甲氧基羰基)-2-甲基苯基)哒嗪-1-鎓2,4,6-三甲基苯磺酸盐，其为泡沫状物(274MH+)。
部分B:将在部分A由此得到的产物混悬于THF(2.0mL)中。加入3-(4-氟苯基)丙炔酰基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.17g,0.60mmol)并将混悬液冷却至-78°C(干冰/丙酮浴)。历时2分钟逐滴加入DBU(0.27g,1.8mmol)在THF(1.0mL)中的溶液。将混合物在冷却浴中留置20分钟，然后由冷却浴移去并在环境温度保持20小时。将混合物过滤并浓缩。在硅胶上纯化(20-80%乙酸乙酯/己烷，60分钟梯度)得到5-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基甲酰基)-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸甲酯和5-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基甲酰基)-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-4-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸甲酯，其为分开的区域异构体。
5-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基甲酰基)-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸甲酯：1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.35(d,J＝2.3Hz,1H),8.10(d,J＝2.5Hz,1H),7.82-7.73(m,3H),7.17(t,J＝8.7Hz,2H),6.95(s,1H),5.31(s,2H),3.99(s,3H),3.93-3.89(m,3H),3.28(s,3H),2.42(s,3H),1.10(s,10H)。LCMS保留时间：4.360分钟。LC数据记录于配备有Phenomenex-Luna,3微米,C18,2.0x50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上，使用检测器波长为220nM的SPD-10AV UV-Vis检测器。洗脱条件采用：流速为0.8mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，以及分析时间为5分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用电喷射模式的用于LC的质谱平台来确定。m/z 549(MH+)。
5-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基甲酰基)-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-4-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸甲酯：1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.37(d,J＝4.8Hz,1H),7.72(dd,J＝9.0,5.3Hz,2H),7.66(s,1H),7.11(t,J＝8.8Hz,2H),6.96(s,1H),6.91(d,J＝4.5Hz,1H),3.99(s,3H),3.82(s,2H),2.82(s,2H),2.30-2.26(m,3H),1.04(s,9H)。LCMS保留时间：4.086分钟。LC数据记录于配备有Phenomenex-Luna,3微米,C18,2.0x 50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上，使用检测器波长为220nM的SPD-10AV UV-Vis检测器。洗脱条件采用：流速为0.8mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，以及分析时间为5分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用电喷射模式的用于LC的质谱平台来确定。m/z 549(MH+)。
中间体10
5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨基甲酰基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸甲酯
在室温向含有5-(3-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基甲酰基)-2-(4-氟苯基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸甲酯(0.75g,0.13mmol)和二氯甲烷(3mL)的溶液中加入TFA(0.2mL,2.7mmol)。将溶液保持15分钟并浓缩干燥得到5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨基甲酰基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸甲酯，其为灰白色固体，其无需进一步纯化即可使用。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ8.63(d,J＝2.3Hz,1H),8.45(d,J＝2.3Hz,1H),7.85(s,1H),7.80-7.69(m,2H),7.33-7.25(m,2H),6.98(s,1H),5.97(宽单峰,1H),3.99(s,3H),3.96-3.85(m,3H),2.92(d,J＝5.0Hz,3H),2.45(s,3H)。LCMS保留时间：3.758分钟。LC数据记录于配备有Phenomenex-Luna,3微米,C18,2.0x 50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上，使用检测器波长为220nM的SPD-10AV UV-Vis检测器。洗脱条件采用：流速为0.8mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，以及分析时间为5分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用电喷射模式的用于LC的质谱平台来确定。m/z 449(MH+)。
中间体11
5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨基甲酰基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸
向含有5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨基甲酰基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸甲酯(0.061g,0.14mmol)和二噁烷(0.7mL)的溶液中加入氢氧化钠水溶液(0.7mL,2.0M)。将混合物在室温搅拌2小时。将溶液用HCl水溶液(1.5mL,1.0N)调节为低于pH 4。沉淀得到5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨基甲酰基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸，其为褐色固体。将其过滤，用水(3x 4mL)洗涤并空气干燥。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.66(d,J＝2.5Hz,1H),8.38(d,J＝2.5Hz,1H),8.16(s,1H),7.83-7.73(m,2H),7.29-7.22(m,2H),7.05(s,1H),5.68(宽单峰,1H),4.17(s,3H),2.89(d,J＝5.0Hz,3H),2.48(s,3H)。LCMS保留时间：3.508分钟。LC数据记录于配备有Phenomenex-Luna,3微米,C18,2.0x50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上，使用检测器波长为220nM的SPD-10AV UV-Vis检测器。洗脱条件采用：流速为0.8mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，以及分析时间为5分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用电喷射模式的用于LC的质谱平台来确定。m/z 435(MH+)。
实施例3
2-(4-氟苯基)-5-(4-甲氧基-2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨基甲酰基)苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-b]哒嗪-3-甲酰胺
向含有1-苯基环丙胺盐酸盐(0.008g,0.05mmol)、二异丙基乙基胺(0.05mL,0.28mmol)、5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨基甲酰基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸(0.015g,0.04mmol)和DMF(0.23mL)的溶液中加入一份HATU(0.026g,0.07mmol)。将溶液在室温保持1小时。将产物使用制备性HPLC纯化(Waters-Xbridge,50x100mm,5微米,C18柱；0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)得到2-(4-氟苯基)-5-(4-甲氧基-2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨基甲酰基)苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-b]哒嗪-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间：12.6分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.61(d,J＝2.5Hz,1H),8.43-8.36(m,2H),8.19(s,1H),7.83-7.72(m,2H),7.35-7.29(m,4H),7.27-7.15(m,3H),6.97(s,1H),5.65(宽单峰,1H),4.07(s,3H),2.88(d,J＝4.8Hz,3H),2.45(s,3H),1.40(s,4H)。LCMS保留时间：2.230分钟。LC数据记录于配备有Phenomenex-Luna,3微米,C18,2.0x 50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上，使用检测器波长为220nM的SPD-10AV UV-Vis检测器。洗脱条件采用：流速为1.0mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，以及分析时间为3分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mM TFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用电喷射模式的用于LC的质谱平台来确定。m/z550(MH+)。
实施例4
2-(4-氟苯基)-5-(4-甲氧基-2-甲基-5-(1-(嘧啶-2-基)环丙基氨基甲酰基)苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-b]哒嗪-3-甲酰胺
向含有1-(嘧啶-2-基)环丙胺盐酸盐(0.008g,0.05mmol)、二异丙基乙基胺(0.05mL,0.28mmol)、5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基氨基甲酰基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-5-基)-2-甲氧基-4-甲基苯甲酸(0.015g,0.04mmol)和DMF(0.23mL)的溶液中加入一份HATU(0.026g,0.07mmol)。将溶液在室温保持1小时。将产物使用制备性HPLC纯化(Waters-Xbridge,50x 100mm,5微米,C18柱；0.1M乙酸铵,0-100%B(B=5%H2O/CH3CN)/A(A=95%H2O/CH3CN),15分钟梯度)得到2-(4-氟苯基)-5-(4-甲氧基-2-甲基-5-(1-(嘧啶-2-基)环丙基氨基甲酰基)苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-b]哒嗪-3-甲酰胺，其为白色固体。制备性HPLC保留时间：10.5分钟。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.72-8.58(m,4H),8.41(d,J＝2.3Hz,1H),8.23(s,1H),7.83-7.74(m,2H),7.26-7.20(m,1H),7.10-7.03(m,1H),6.98(s,1H),5.66(宽单峰,1H),4.09(s,3H),2.88(d,J＝4.8Hz,3H),2.46(s,3H),1.88-1.81(m,2H),1.59-1.52(m,2H)。LCMS保留时间：2.057分钟。LC数据记录于配备有Phenomenex-Luna,3微米,C18,2.0x 50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上，使用检测器波长为220nM的SPD-10AV UV-Vis检测器。洗脱条件采用：流速为1.0mL/min，梯度为100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B，梯度时间为2分钟，保持时间为1分钟，以及分析时间为3分钟，其中溶剂A为10%甲醇/90%H2O/10mMTFA且溶剂B为10%H2O/90%甲醇/10mM TFA。MS数据使用电喷射模式的用于LC的质谱平台来确定。m/z 552(MH+)。
本领域技术人员应该理解的是，本发明不限于上述示例性实施例，且在不背离本发明基本属性的情况下本发明可按其它具体形式来实施。因此，应该理解的是，所述实施例在各个方面都应该被视为示例性而非限制性，应该参考所附权利要求书而非上述实施例，且因此落入权利要求书的等价意义和范围内的所有变化形式都应该包括在本发明范围内。

Claims (7)

1.式I的化合物或其药用盐
其中：
R1为苯基且取代有1个CON(R16)(R17)取代基，且还取代有烷基或烷氧基取代基中的0-2个；
R2为氢；
R3为CON(R11)(R12)；
R4为卤代苯基；
R9和R10一起形成亚乙基；
R11为氢或烷基；
R12为氢或烷基；
R16为
R17为氢；
R18为氢；且
Ar1为嘧啶基或苯基；
其中所述烷基或烷氧基由1至6个碳构成。
2.权利要求1的化合物或其药用盐，其中R1为取代有1个CON(R16)(R17)取代基和1个烷基取代基以及0-1个烷氧基取代基的苯基；R2为氢；R3为CONHMe；R4为一氟苯基；R16为R9和R10一起形成亚乙基；R17为氢；且Ar1为嘧啶基或苯基。
3.权利要求1的化合物，其中R3为CON(H)(烷基)。
4.权利要求1的化合物，其中R4为一氟苯基。
5.权利要求1的化合物或其药用盐，选自：
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨基甲酰基)苯基)吡唑并[1,5-b]哒嗪-3-甲酰胺；
2-(4-氟苯基)-5-(4-甲氧基-2-甲基-5-(1-苯基环丙基氨基甲酰基)苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-b]哒嗪-3-甲酰胺；和
2-(4-氟苯基)-5-(4-甲氧基-2-甲基-5-(1-(嘧啶-2-基)环丙基氨基甲酰基)苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-b]哒嗪-3-甲酰胺。
6.组合物，包含权利要求1的化合物或其药用盐以及药用载体。
7.权利要求1的化合物在制备用于治疗丙型肝炎感染的药物中的用途。
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WO2013033900A1 (en) 2011-09-08 2013-03-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Tetracyclic heterocycle compounds and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
WO2013033901A1 (en) 2011-09-08 2013-03-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Heterocyclic-substituted benzofuran derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
WO2013033899A1 (en) 2011-09-08 2013-03-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Substituted benzofuran compounds and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
US9303020B2 (en) 2012-02-08 2016-04-05 Bristol-Myers Squibb Company Compounds for the treatment of hepatitis C

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005112640A2 (en) * 2004-05-13 2005-12-01 Viropharma Incorporated Compounds, compositions and methods for treatment and prophylaxis of hepatitis c viral infections and associated diseases
US7265152B2 (en) * 2002-11-01 2007-09-04 Viropharma Incorporated Benzofuran compounds, compositions and methods for treatment and prophylaxis of hepatitis C viral infections and associated diseases
CN101263156A (zh) * 2005-07-25 2008-09-10 因特蒙公司 C型肝炎病毒复制的新颖大环抑制剂
WO2010030538A2 (en) * 2008-09-11 2010-03-18 Bristol-Myers Squibb Company Compounds for the treatment of hepatitis c

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS57123181A (en) 1981-01-23 1982-07-31 Mitsubishi Paper Mills Ltd Preparation of pyrazolo (1,5-a) pyridine derivative
US5917038A (en) 1996-11-22 1999-06-29 Eli Lilly And Company Process of preparing substituted acrylamides
PE20020506A1 (es) 2000-08-22 2002-07-09 Glaxo Group Ltd Derivados de pirazol fusionados como inhibidores de la proteina cinasa
US20050107400A1 (en) 2001-03-30 2005-05-19 Boyd Leslie F. Use of pyrazolopyridines as therapeutic compounds
US7868037B2 (en) 2004-07-14 2011-01-11 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating hepatitis C
AR058586A1 (es) * 2005-12-22 2008-02-13 Smithkline Beecham Corp Compuesto de 2-carboxitiofeno, formulacion farmaceutica que lo comprende, su uso para la preparacion de un medicamento y combinacion de dicho compuesto con otro agente terapeuticamente activo
GB0707000D0 (en) 2007-04-12 2007-05-30 Istituto Di Ricerche D Biolog Antiviral agents
AU2009214194B2 (en) 2008-02-14 2012-05-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Heterocyclic antiviral compounds
WO2009137493A1 (en) 2008-05-05 2009-11-12 Wyeth 2-substituted benzofuran compounds to treat infection with hepatitis c virus
WO2009137500A1 (en) 2008-05-05 2009-11-12 Wyeth 6-substituted benzofuran compounds to treat infection with hepatitis c virus
US7994171B2 (en) 2008-09-11 2011-08-09 Bristol-Myers Squibb Company Compounds for the treatment of hepatitis C
US8048887B2 (en) * 2008-09-11 2011-11-01 Bristol-Myers Squibb Company Compounds for the treatment of hepatitis C
US20110031301A1 (en) 2009-08-06 2011-02-10 Segletes David S Joining of Electrical Generator Components
TW201138786A (en) 2010-02-19 2011-11-16 Glaxo Group Ltd Therapeutic compounds
AR080433A1 (es) 2010-03-02 2012-04-11 Merck Sharp & Dohme Derivados de benzofurancarboxamidas utiles para tratar o prevenir infecciones por vhc y composiciones farmaceuticas que los contienen.
WO2011106929A1 (en) 2010-03-02 2011-09-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Inhibitors of hepatitis c virus ns5b polymerase

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7265152B2 (en) * 2002-11-01 2007-09-04 Viropharma Incorporated Benzofuran compounds, compositions and methods for treatment and prophylaxis of hepatitis C viral infections and associated diseases
WO2005112640A2 (en) * 2004-05-13 2005-12-01 Viropharma Incorporated Compounds, compositions and methods for treatment and prophylaxis of hepatitis c viral infections and associated diseases
CN101263156A (zh) * 2005-07-25 2008-09-10 因特蒙公司 C型肝炎病毒复制的新颖大环抑制剂
WO2010030538A2 (en) * 2008-09-11 2010-03-18 Bristol-Myers Squibb Company Compounds for the treatment of hepatitis c

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张娜,等.GSK-3抑制剂研究进展.《化学进展》.2007,第19卷(第4期),第614-623页. *

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Publication number Publication date
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