CN101973898B - 2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇衍生物及其应用 - Google Patents

2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇衍生物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于药物化学领域，公开了2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇衍生物及其应用。本发明2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇衍生物及其应用具有式(1)所示的结构，
Figure DSA00000263804700011
其中，R1、R2、R3独立的选自H或酰基；R4选自亚甲基、羰基、
Figure DSA00000263804700012
R5为反式4-甲基环己基。本发明化合物可用于制备治疗肺损伤、肺纤维化的药物和/或免疫抑制剂类药物，为治疗肺损伤和器官移植产生的排斥反应提供了一种更加有效、更加安全的可选药物。

Description

2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇衍生物及其应用
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体涉及2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇衍生物及其应用。
背景技术
2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇(简称FTY720)(2-amino-2-(2-[4-octyl-phenyl]ethyl)-1，3-propanediol hydrochloride)是一个新型免疫抑制剂，为子囊菌亚门(ascomycete)赤僵菌(Isaria sinclarii)发酵菌丝体天然提取物的化学合成的类似物，其化学结构类似于神经鞘氨醇(sphingosine)和神经酰胺(ceramide)，从结构上区别于FK506(普乐可复)，环孢霉素A，以及雷帕霉素等真菌多肽。FTY720可以明显延长动物异体皮肤、心脏、肝脏、肾脏的移植存活时间，并且毒副作用相对少见。该药显示对多发性硬化疗效显著，预期近期可通过FDA批准以该适应症上市。FTY720治疗其他自身免疫性疾病动物模型有效的报道多见，如自身免疫性糖尿病小鼠模型，实验性自身免疫性色素膜-视网膜炎，自身免疫性甲状腺炎大鼠，实验性变应性脑脊髓膜炎，佐剂性关节炎模型大鼠，以及MRL/lpr狼疮动物模型。但FTY720也有许多问题有待解决，特别是对神经系统具有较大的毒副作用。
发明内容
本发明的目的是提供一类活性更高的2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇(FTY720)衍生物：2-(反式4-甲基环己基)甲酰基苯乙基-2-氨基丙二醇及其类似物。
本发明的另一目的是提供涉及该2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇衍生物的应用。
本发明的技术方案如下：
2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇衍生物，结构如式(1)所示：
Figure BSA00000263805000011
其中，R1、R2、R3独立的选自H或酰基；R4选自亚甲基、羰基、R5为反式4-甲基环己基。
其中所述R1、R2、R3优选独立的选自H或C1～C4的酰基，进一步优选独立的选自H或乙酰基。
所述的2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇衍生物优选如下化合物：结构式如(A-1)所示的2-(反式4-甲基环己基)甲酰基苯乙基-2-氨基丙二醇，结构式如(A-2)所示的2-(反式4-甲基环己基)甲酰基苯乙基-2-乙酰氨基丙二醇二乙酸酯、结构式如(A-3)所示的2-(反式4-甲基环己基)甲基苯乙基-2-氨基丙二醇、结构式如(A-4)所示的2-(反式4-甲基环己基)羟甲基苯乙基-2-氨基丙二醇或结构式如(A-5)所示的2-(反式4-甲基环己基)羟肟基苯乙基-2-氨基丙二醇，
Figure BSA00000263805000022
本发明化合物的设计思想：
1.2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇(FTY720)的一个显著特点是其结构由1个亲水部分(氨基醇)和1个亲脂部分(碳链)所组成，而两性分子是这类化合物产生毒性和特殊理化性质的主要原因，因此，在新化合物设计中保留这两部分是必需的。
2.2-氨基2-取代-1，3-丙二醇不同化合物的作用功效主要依赖于侧链烷烃中苯环的位置；季碳和苯环之间的最佳碳链长度是两个碳原子，苯环上取代位置以对位为宜，因此，保留苯环是必需的，且以对位为取代。
3.烷基链的长短变化仅对毒性有影响，当季碳和苯环之间的最佳碳链长度是两个碳原子，烷基链长度为8个碳原子时，活性最明显。
基于以上构效关系的分析，我们着手对苯环对位的取代基进行改造，根据生物电子等排原理，我们将FTY720中苯环4位上的直碳链换为同碳原子数的取代环链，之后，再在该碳链的苄位上增加羟基，羰基，肟基，得到本发明新的化合物。
本发明化合物制备路线如下：
Figure BSA00000263805000031
其中，R为反式4-甲基环己基，即
Figure BSA00000263805000032
本发明所述的2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇衍生物具有免疫抑制和预防和/或治疗肺纤维化的作用，可在制备治疗肺损伤的药物中的应用。可以经口服或静脉注射两个途径给药，两种用途给药剂量均在.0.2～10mg/kg体重。
本发明的化合物加上适量的常规药用辅料，如淀粉，甲基或羧甲基纤维素，水，聚乙烯吡洛烷酮和pvpp等，按照常规的制剂工艺制成片剂或注射剂。
本品                10～500g
辅料                适量
制成            1000片或支
本发明的有益效果：本发明基于对FTY720的构效分析，成功合成了包括2-(反式4-甲基环己基)甲酰基苯乙基-2-氨基丙二醇在内的一系列2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇衍生物。本发明化合物能够抑制肺纤维化相关基因如VEGF、α-SMA、IL-1β、I型胶原的表达，改善H.E染色的肺部纤维化病理、减少Mason纤维染色、减少TGF-β和α-SMA的生成，对博来霉素诱导的炎症性肺损伤、坏死性胰腺炎引起的急性肺损伤均可起到保护作用，疗效显著优于FTY720，而且本发明化合物A-1较之FTY720能显著延长BLM诱导的肺纤维化模型小鼠的生存时间。本发明可同时作用于静息淋巴和已激活的淋巴，对器官移植的排斥反应不仅有良好的预防效果，同时还有治疗作用。在不同器官移植时，本发明化合物较之FTY720具有更优越的免疫抑制作用。因此，本发明可用于制备治疗肺损伤和/或肺纤维化的药物和/或免疫抑制剂类药物，为治疗肺损伤、肺纤维化和器官移植产生的排斥反应提供了一种更加有效、更加安全的可选药物。
附图说明
图1小鼠生存曲线图。
图2小鼠肺部纤维化HE染色结果。
A为正常组(未经博来霉素造模的健康小鼠)肺部纤维化HE染色图；B为博来霉素造模小鼠第7日肺部纤维化HE染色图；C为博来霉素造模小鼠第28日肺部纤维化HE染色图；D为博来霉素造模小鼠经FTY720治疗第28日肺部纤维化HE染色图；E为博来霉素造模小鼠经本发明化合物治疗第28日肺部纤维化HE染色图。
图3小鼠肺部纤维化Masson染色结果。
A为正常组(未经博来霉素造模的健康小鼠)肺部纤维化Masson染色图；B为博来霉素造模小鼠第7日肺部纤维化Masson染色图；C为博来霉素造模小鼠第28日肺部纤维化Masson染色图；D为博来霉素造模小鼠经FTY720治疗第28日肺部纤维化Masson染色图；E为博来霉素造模小鼠经本发明化合物治疗第28日肺部纤维化Masson染色图。
图4小鼠肺部纤维化TGF-β免疫组化染色结果。
A为正常组(未经博来霉素造模的健康小鼠)肺部纤维化TGF-β免疫组化染色图；B为博来霉素造模小鼠第7日肺部纤维化TGF-β免疫组化染色图；C为博来霉素造模小鼠第28日肺部纤维化TGF-β免疫组化染色图；D为博来霉素造模小鼠经FTY720治疗第28日肺部纤维化TGF-β免疫组化染色图；E为博来霉素造模小鼠经本发明化合物治疗第28日肺部纤维化TGF-β免疫组化染色图。
图5小鼠肺部纤维化α-SMA免疫组化染色结果。
A为正常组(未经博来霉素造模的健康小鼠)肺部纤维化α-SMA免疫组化染色图；B为博来霉素造模小鼠第7日肺部纤维化α-SMA免疫组化染色图；C为博来霉素造模小鼠第28日肺部纤维化α-SMA免疫组化染色图；D为博来霉素造模小鼠经FTY720治疗第28日肺部纤维化α-SMA免疫组化染色图；E为博来霉素造模小鼠经本发明化合物治疗第28日肺部纤维化α-SMA免疫组化染色图。
图6FTY720、本发明化合物对纤维化相关的基因表达的影响。
A为FTY720、本发明化合物为对α-SMA基因表达的影响；B为FTY720、本发明化合物对VEGF基因表达的影响；C为FTY720、本发明化合物对I型胶原基因表达的影响；D为FTY720、本发明化合物对IL-1β基因表达的影响。
具体实施方式
实施例1
2-苯乙醇甲磺酸酯(B-1)的制备
将2-苯乙醇(100.0g，0.82mol)、三乙胺(102.0g，1.0mol)和二氯甲烷(500mL)投入反应瓶中，在5℃左右(0～10℃)滴加甲磺酰氯(119.0g，1.14mol)，滴毕0～10℃反应3h；将反应混合物倒入水中，分出有机相，有机相用水洗至中性，用无水硫酸镁干燥，浓缩，得B-1(155.8g，95.0％)。
2-苯基碘乙烷(B-2)的制备
将正丁酮(500mLl)，碘化钠(157.0g，2.85mol)和B-1(125.0g，0.38mol)，加入反应瓶中，室温反应5h，回收正丁酮，将浓缩物缓慢倒入冰水混合物中，弃去水层，固体溶于二氯甲烷中，水洗，有机相用无水硫酸镁干燥，浓缩，得B-2(83.8g，95.0％)，GC-MS(m/z)：232(M+)，51，77，105，127。
2-乙酰氨基2-(2-苯基乙基)丙二酸二乙酯(B-3)的制备
将无水乙醇(800mL)投入反应瓶中，分批缓慢加入金属钠(20.0g，0.87mol)，待金属钠全部反应后，在60℃～65℃温度下，加入乙酰氨基丙二酸二乙酯(172.0g，0.8mol)，反应1h，加入B-2(65.0g，0.28mol)，反应7h，回收乙醇，浓缩物溶于二氯甲烷中，水洗至中性，有机相用无水硫酸镁干燥，浓缩，结晶，得B-3(62.9g，70.0％)，熔点112.4℃～112.8℃，GC-MS(m/z)：276(M-45)，91，143，171，217，276。
2-乙酰氨基2-(2-苯基乙基)-1，3-丙二醇(B-4)的制备
将四氢呋喃(400mL)，硼氢化锂(12.0g，0.56mol)投入反应瓶中，回流反应1h，降至室温，加入B-3(44.9g，0.14mol)，回流反应6h，缓慢滴加饱和氯化铵溶液，滴毕，分出有机相，水洗至中性，无水硫酸镁干燥，浓缩，得B-4(24.9g，75.0％)。GC-MS(m/z)：219(M+)，73，91，115，129，146，188。
2-乙酰氨基2-(2-苯基乙基)-1，3-丙二醇二乙酸酯(B-5)的制备
依次将吡啶(300mL)，醋酐(250.0g，2.45mol)和B-4(33.2g，0.14mol)投入反应瓶中，45℃下反应10h，将反应物倒入水中，弃去水相，溶于二氯甲烷中，水洗至中性，干燥，浓缩，结晶，得B-5(22.5g，50.0％)，熔点106.5℃～108.3℃。GC-MS(m/z)：321(M+)，97，129，146，157，164，188，206，248，261。
2-乙酰氨基2-[2-(4-对甲基环己基甲酰基苯基)乙基]-1，3-丙二醇二乙酸酯(A-2)的制备
0℃～5℃，依次将对甲基环己基甲酰氯(340.0g，2.12mol)，三氯化铝(555.4g，4.16mol)和二氯甲烷(250mL)投入反应瓶中，搅拌反应0.5h后，缓慢滴加B-5(166.9g，0.52mol)的溶液，滴加完毕，室温反应8h，将反应混合物慢慢倒入5％的盐酸冰水溶液中，分出有机层，用饱和氯化钠溶液洗至中性，无水硫酸镁干燥，浓缩，结晶，得A-2(69.4g，30.0％)。
A-2：
白色结晶：mp：108.5～110.5℃。
IR(KBr，υ，cm-1)：
3310.47，2945.03，1749.63，1558.33，1246.10，1223.65，1040.31。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)(δ，ppm)：
7.88(d，J＝8.0Hz，2H，ArH)，7.71(s，1H，NH)，7.32(d，J＝8.0Hz，2H，ArH)，4.28(d，J＝10.8Hz，2H，0-CH2)，4.18(d，J＝10.8Hz，2H，0-CH2)，3.36(s，1H，羰基α位-CH)，2.59(t，J＝8.4Hz，2H，苄基α位-CH2)，2.03～1.99(m，9H，CH3×3)，1.792～1.716(m，2H，CH2)，1.65(s，H，CH)，1.40～1.30(m，8H，环己基-CH2)，0.91(d，J＝6.8Hz，3H，CH3)。
13CNMR(400MHz，DMSO-d6)(δ，ppm)：202.99，170.30，147.75，133.90，128.86，128.51，125.99，63.41，44.33，42.42，34.09，32.61，31.98，29.26，26.87，23.52，22.74，20.84。
MS(FAB M/Z)：444(M+-1).
2-氨基2-[2-(4-对甲基环己基甲酰基苯基)乙基]-1，3-丙二醇(A-1)的制备
将氢氧化锂(17.0g，0.4mol)和甲醇(200mL)投入反应瓶中，加入A-2(20.0g，0.046mol)，回流8h，减压蒸除甲醇，结晶，得A-1(7.3g，50.0％)。
A-1：
白色结晶，mp：133.5～135.5℃。
IR(KBr，υ，cm-1)：
3349.82，3290.12，2945.03，1670.18，1019.89。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)(δ，ppm)：
7.86(d，J＝8.0Hz，2H，ArH)，7.32(d，J＝8.0Hz，2H，ArH)，4.49(s，2H，NH2)，3.25(t，4H，O-CH2)，2.69～2.65(m，2H，苄基CH2)，1.798～1.714(m，2H，CH2)，1.54～1.49，1.37～1.31，1.14～1.11(9H，环己基)，0.91(d，J＝6.4Hz，3H，-CH3)。
13CNMR(400MHz，DMSO-d6)(δ，ppm)：202.99，149.42，133.60，128.77，128.42，65.56，55.66，44.33，36.59，34.11，31.99，29.30，29.26，22.73。
MS(FAB M/Z)：320(M++1)。
实施例2本发明化合物对肺纤维化模型的治疗效应
2.1博来霉素致小鼠肺纤维化模型的建立
8-12周龄C57Bl/6小鼠，SPF级层流架无菌饮食喂养，经气管软骨环间隙向心端注射0.05-0.075units(2-3units/kg体重)博来霉素(以下简称BLM，购自Gensia SicorPharmaceuticals)，注射时体位直立，注射后旋转体位以保证博来霉素在肺内均匀分布。
2.2生存曲线测定
将BLM造模成功的小鼠分为三组，A-1组和FTY720组分别从第二天开始给予本发明化合物2-(反式4-甲基环己基)甲酰基苯乙基-2-氨基丙二醇(A-1)1mg/kg和FTY7200.5mg/kg，每天尾静脉注射一次。未处理组不给药。
给药后小鼠生存曲线见图1，由图1可看出本发明化合物A-1能显著延长BLM造模的肺纤维化小鼠的生存时间，在28d时的生存率可达90％，而FTY720则只有33％左右，未处理组完全死亡。这说明本发明化合物A-1较之FTY720能显著延长BLM诱导的肺纤维化模型小鼠的生存时间。
2.3对肺部纤维化的病理改变
将BLM造模成功的小鼠分为三组，A-1组和FTY720组分别从第二天开始给予本发明化合物2-(反式4-甲基环己基)甲酰基苯乙基-2-氨基丙二醇(A-1)1mg/kg和FTY7200.5mg/kg，每天尾静脉注射一次。未处理组不给药。另设立未经博来霉素造模的健康小鼠作为正常组。
各组小鼠右下肺组织常规固定后，经固定后，常规石蜡包埋，制成病理切片。
2.3.1.HE染色
切片在二甲苯中脱蜡5～10分钟。移入二甲苯和纯酒精(1∶1)混合液中5分钟左右(如经二次二甲苯脱蜡，此步可略)。入100％、95％、85％、70％酒精，各级为2～5分钟。最后经蒸馏水转入染液。苏木精染液染色5～15分钟。水洗玻片上多余染液，0.5～1％盐酸酒精(70％酒精配制)分色片刻。镜检控制，直至细胞核及核内染色质清晰为止，约数10秒钟。流水冲洗15～30分钟，或者在碳酸锂饱和液中短时间碱化或蓝化，即细胞核呈蓝色，蒸馏水短洗。0.1～0.5％伊红染液染色1～5分钟，若着色困难，可在每100毫升染液中加入1～2滴冰醋酸，使易着色且不易脱色。依次经70％、85％、95％、100％酒精脱水，各级为2～3分钟，在95％以下浓度的酒精中伊红易脱色，应适当缩短时间。二甲苯透明(二次)，共约10分钟。封片：擦去切片周围多余二甲苯，切勿干涸，迅速滴加适量中性树胶，再加盖玻片封固。光镜下观察，结果见图2
2.3.2Masson染色
切片脱蜡至水，1％高锰酸钾氧化切片5min，水洗，草酸漂白1min。再水洗，蒸馏水洗，天青石蓝染5min水洗，摔去余液不用水洗，滴染Mayer氏苏木素3-5min，流水冲洗5-10min。丽春红苦味酸饱和液染5min，1％醋酸水溶液洗，1％磷钼酸分化切片约5min，蒸馏水洗，1％淡绿或者甲苯胺蓝滴染30s，1％醋酸水溶液洗切片，95％酒精分化，无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。光镜下观察，结果见图3
2.3.3TGF-β、α-SMA免疫组化染色
切片脱蜡和水化后，用PBS(pH7.4)冲洗三次，每次3min。如果有必要，每张切片加1滴过氧化氢液室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗3x3min。除去PBS液，每张切片加1滴或50μl的抗α-SMA抗体、或抗TGF-β抗体(DAKO公司)，室温下孵育90分钟。PBS冲洗3x5min。除去PBS液，每张切片1∶10000的兔抗大鼠-辣根过氧化物酶(DAKO公司)50μl，室温下孵育40分钟。PBS冲洗3x3min。除去PBS液，每张切片加1滴或50μl新鲜配制的DAB或AEC溶液，显微镜下观察3-5分钟。自来水冲洗，苏木素复染，用0.1％HCl分化，自来水冲洗，PBS返蓝，中性树胶封固，封片。光镜下观察，结果见图5。
病理结果显示FTY720和本发明化合物A-1均能有效地改善H.E染色的肺部纤维化病理、减少Mason纤维染色、减少TGF-β和α-SMA的生成，且本发明化合物A-1效果较之FTY720更为显著，提示本发明化合物A-1对治疗BLM诱导的肺纤维化模型有效。
2.4对肺纤维化相关的基因表达的影响
使用Syber green dye I法检测小鼠VEGFA、α-SMA、I型胶原和IL-1β的mRNA水平，结果见图6。试剂PrimeScript RT reagent Kit Perfect Real time购自(Takara(code：DRR037A)。仪器使用ABI PRISM 7900HT。
引物序列：VEGF正向引物：SEQ ID NO.1；VEGF反向引物SEQID NO.2。α-SMA正向引物：SEQ ID NO.3；α-SMA反向引物：SEQ ID NO.4；IL-1β正向引物：SEQ ID NO.5；IL-1β反向引物：SEQ ID NO.6；I型胶原正向引物：SEQ ID NO.7；I型胶原反向引物：SEQ ID NO.8。
50mg小鼠肺组织，按Trizol法抽提mRNA后，逆转录成为cDNA。SYBR Premix Ex Taq(2x)10ul，PCR正向引物0.8ul，PCR反向引物0.8ul(50mg/ml)，ROX Reference dye0.4ul，RT反应液2ul，ddH2O 6ul配至20ul反应体系。反应过程：95.0℃变性30秒，95.0℃ 5秒60.0℃ 34秒，95.0℃ 15秒，40个循环；后60.0℃ 1分，95.0℃ 15秒。
结果显示：与未经造模的正常组小鼠相比，经BLM处理以后小鼠的α-SMA、VEGFA、IL-1β、I型胶原基因的mRNA水平显著升高，但Fty720和本发明化合物A-1均能显著下调上述基因的mRNA水平，而本发明化合物A-1在下调上述基因的mRNA水平方面的活性较之Fty720更强。
实施例3本发明化合物免疫抑制效果考察
实验方法：
将WKAH大鼠的心脏移植到ACI大鼠的颈部，形成心脏移植模型。受试动物分为两组，一组口投本发明化合物A-1，称为实验组，另一组口投FTY720，称为对照组。两组均从移植当日起连续15日给药；口投药物第一日即移植当日计为第0日，口投药物第二日即移植后的第1天依次计为第1日，以此类推，口投药物第15日计为第14日。实验结果显示，本发明化合物组随着用量的增加移植心脏在受者中的生存日数得到相应的延长，尽管用量很大也没有发现副作用。而对照组大鼠在实验剂量范围内其生存日数不受剂量影响。且各剂量的实验组大鼠的生存日数较之对照组大鼠的生存日数显著延长，表明本发明化合物较之FTY720有更好的免疫抑制效果。
对大鼠做肝脏移植，受试动物分为两组，一组口投本发明化合物A-1，称为实验组，另一组口投FTY720，称为对照组。两组均从移植次日开始连续14d给药。结果显示，本发明化合物较之FTY720能显著延长受者的生存日数，表明本发明化合物较之FTY720有更好的免疫抑制效果。
对大鼠做小肠移植，受试动物分为两组，一组口投本发明化合物A-1，称为实验组，另一组口投FTY720，称为对照组。两组均从移植当日起连续15日给药；口投药物第一日即移植当日计为第0日，口投药物第二日即移植后的第1天依次计为第1日，以此类推，口投药物第15日计为第14日。结果显示，本发明化合物较之FTY720能显著延长受者的生存日数，表明本发明化合物较之FTY720有更好的免疫抑制效果。
对Beagle犬做肾脏移植，受试动物分为两组，一组口投本发明化合物A-1，称为实验组，另一组口投FTY720，称为对照组。两组均从移植当日起每日给药，直至两组动物的生存日数出现显著不同。本发明化合物A-1较之FTY720能明显延长受试狗的生存日数，表明本发明化合物对大动物也同样有抑制排斥反应的效果。
表1总结了本发明化合物A-1与FTY720的不同用量对不同动物的不同器官移植时，所得到的免疫抑制的实验结果。
表1
Figure BSA00000263805000111
从上表看出，实验组本发明化合物在不同器官移植时，免疫抑制的作用均优于对照组FTY720。
本发明实施例部分所用动物均由江苏省实验动物中心提供。
Figure ISA00000263805200011
Figure ISA00000263805200012
Figure ISA00000263805200021
Figure ISA00000263805200031

Claims (4)

1.2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇衍生物，结构如式（1）所示：
其中，R1、R2、R3独立的选自H或乙酰基；R4选自羰基；R5为反式4-甲基环己基。
2.根据权利要求1所述的2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇衍生物，其特征在于所述的2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇衍生物为：结构式如（A-1）所示的2-（反式4-甲基环己基）甲酰基苯乙基-2-氨基丙二醇，结构式如（A-2）所示的2-（反式4-甲基环己基）甲酰基苯乙基-2-乙酰氨基丙二醇二乙酸酯，
Figure FDA00002617466700012
3.权利要求1所述的2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇衍生物在制备治疗肺损伤和/或肺纤维化的药物中的应用。
4.权利要求1所述的2-对辛基苯乙基-2-氨基丙二醇衍生物在制备免疫抑制剂药物中的应用。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1708293A (zh) * 2002-09-24 2005-12-14 诺瓦提斯公司 治疗脱髓鞘疾病的鞘氨醇－1－磷酸受体激动剂
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN1708293A (zh) * 2002-09-24 2005-12-14 诺瓦提斯公司 治疗脱髓鞘疾病的鞘氨醇－1－磷酸受体激动剂
CN101674819A (zh) * 2007-05-04 2010-03-17 诺瓦提斯公司 S1p受体调节剂的用途
CN101820916A (zh) * 2007-10-12 2010-09-01 诺瓦提斯公司 包含鞘氨醇1磷酸(s1p)受体调节剂的组合物

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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免疫抑制剂FTY720及其类似物;恽亚军等;《药学进展》;20081231;第32卷(第7期);第309-313页 *
恽亚军等.免疫抑制剂FTY720及其类似物.《药学进展》.2008,第32卷(第7期),第309-313页.

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