JP6556621B2 - テトラヒドロ−イソフムロン誘導体、作成および使用方法 - Google Patents

テトラヒドロ−イソフムロン誘導体、作成および使用方法 Download PDF

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Description

優先権主張
本出願は、２０１２年７月９日に出願された米国特許仮出願第６１／６６９，４４１号に対する優先権を主張するものであり、その開示内容が参照によりその全体において本願に組み込まれる。
ホップ(Humulus lupulus L.)は、数世紀にわたり医薬用途で使用されており、近年は酒造産業で使用されている植物である。ホップは、アルファ酸（フムロン）およびベータ酸（ルプロン）の両方を含む。アルファ酸／フムロンは次の全体構造を持つ。
Figure 0006556621
アルファ酸の３つの主要なタイプは、フムロン（Ｒ＝ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、コフムロン（Ｒ＝ＣＨ（ＣＨ３）２）およびアドフムロン（Ｒ＝ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）である。ホップには、より一般的でない２つのアルファ酸、プレフムロンおよびポストフムロンも存在する。アルファ酸は、熱によるアルファ酸の異性化によってシスまたはトランスイソ−アルファ酸／イソフムロンに変換されてよく、これらのイソ−アルファ酸は順次、水素化によってシスまたはトランス還元型イソ−アルファ酸に変換されてよい。還元型イソ−アルファ酸の３つの主要なタイプは、ジヒドロ−（ρ−としても知られる）、テトラヒドロ−およびヘキサヒドロ−イソ−アルファ酸（それぞれＲＩＡＡ、ＴＨＩＡＡおよびＨＩＡＡ）である。
ホップから誘導されるいくつかの化合物は、抗炎症作用を持つことが分かっている（Hall 2008、Desai 2009、Tripp 2009、Konda 2010）。ＴＨＩＡＡ抽出物は、炎症を抑制し（Desai 2009）、コラーゲンにより関節炎を誘発させたマウスモデルにおいて関節炎の症状を低減し（Konda 2010）、高脂肪性食物により代謝性エンドトキシン血症を誘発させたモデルにおいて、グルコース恒常性を改善する（Everard 2012）することが示されている。各ケースにおいて、ＴＨＩＡＡ化合物は、置換１，３−シクロペンタジオンモチーフを用いた。
アルファ酸およびその誘導体の立体化学的配置を同定する初期の試みは不正確で、アルファ酸（元来（−）の旋光度を持つ）から始まり異性化アルファ酸まで続いた。アルファ酸は、当初６Ｒコンフィグレーションであるとされたが、現在は６Ｓであることが知られている。適当な立体化学的配置は、米国特許公開第２０１２／０１０８６７１号で同定され、Ｘ線結晶構造解析テータに基づくＴＨＩＡＡの立体化学的配置、シス３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペント−２−エン−１−オン（「ＫＤＴ５００」、システトラヒドロイソフムロンとしても知られる）が開示された。ＫＤＴ５００には２つの鏡像異性体があり、（＋）−（４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペント−２−エン−１−オン（「（＋）−ＫＤＴ５００」）および（−）−（４Ｒ，５Ｓ）−３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペント−２−エン−１−オン（「（−）−ＫＤＴ５００」）である。（＋）−ＫＤＴ５００および（−）−ＫＤＴ５００の構造は、化学式ＩＩおよびＩＩＩにそれぞれ示される。
Figure 0006556621
Figure 0006556621
 米国特許公開第２０１２／０１０８６７１号には、ＫＤＴ５００およびそのカリウム塩ＫＤＴ５０１の精製ならびに特性評価について記載されている。主にシス型ジアステレオマーを含む濃縮ＴＨＩＡＡ抽出物は、ホップの加工で得られ、向流クロマトグラフィー（ＣＣＣ）を用いて精製され、単離された（＋）−ＫＤＴ５００は、１当量のカリウム塩（例えばＫＯＨ）との反応によって（＋）−ＫＤＴ５０１に変換される。
Figure 0006556621
（＋）−ＫＤＴ５０１は、抗炎症および抗糖尿病効果の両方を示すことが分かった。
本明細書のいくつかの実施形態では、新規ＴＨＩＡＡ誘導体ならびに鏡像異性的に純粋鏡像異性的に純粋な組成物およびこれらの誘導体を含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＴＨＩＡＡ誘導体は、ＫＤＴ１００、ＫＤＴ７００、ＫＤＴ０００５、ＫＤＴ００１７、ＫＤＴ００２０、ＫＤＴ００２４、ＫＤＴ００３３、ＫＤＴ００３４、ＫＤＴ００３５、ＫＤＴ００３６、ＫＤＴ００３７、ＫＤＴ００３８、ＫＤＴ００３９、ＫＤＴ００４０、ＫＤＴ０００１／２、ＫＤＴ００４１、ＫＤＴ００４２およびＫＤＴ００４３またはその塩もしくは結晶から選択される。いくつかの実施形態において、本明細書で開示されるＴＨＩＡＡ誘導体の塩は、無機塩でも有機塩でもよく、カリウム、アルミニウム、カルシウム、銅、グアニジン、鉄、リチウム、マグネシウム、ナトリウム、亜鉛、シンコニジン、シンコニンおよびジエタノールアミン塩を含むがこれらに限定されない。
本明細書のいくつかの実施形態では、本明細書で開示される新規ＴＨＩＡＡ誘導体の合成方法が提供される。いくつかの実施形態において、これらの合成方法は、本明細書に示されるアシル化、エナミン、オキシムおよび還元プロトコルのうち１つ以上を利用する。
本明細書のいくつかの実施形態では、選択的にまたはＰＰＡＲαと組み合わせてＰＰＡＲγを活性化する方法、および本明細書で提供されるＴＨＩＡＡ誘導体またはその組成物のうち１つ以上を用いた、１つ以上の炎症マーカーのレベルをインビトロまたはインビボで低減する方法、が提供される。いくつかの実施形態において、この組成物は、ＴＨＩＡＡ誘導体および１つ以上の薬学的に許容される担体を含む、実質的に鏡像異性的に純粋な医薬組成物である。いくつかの実施形態において、これらの方法は、ＰＰＡＲγ活性の減少に関連した状態を治療するために、その必要のある対象において、用いられる。
本明細書のいくつかの実施形態では、その必要のある対象に、治療上有効な量の本明細書で提供される１つ以上のＴＨＩＡＡ誘導体またはその組成物を投与することによって、炎症を抑制する、炎症に関連した状態を治療する、選択的にまたはＰＰＡＲαと組み合わせてＰＰＡＲγを活性化する、ＰＰＡＲγ調節官能性の状態を治療する、または１つ以上の炎症マーカーのレベルを低減する方法が提供される。これらの実施形態のいくつかにおいて、これらの誘導体は、本明細書で提供される実質的に鏡像異性的に純粋な医薬組成物を用いて投与される。いくつかの実施形態において、ＰＰＡＲγ調節反応性の状態とは、ＩＩ型糖尿病、肥満、高インスリン血症、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、自己免疫疾患または増殖性疾患である。同様に、いくつかの実施形態において、炎症に関連した状態は、糖尿病である。
以下の本発明の記述は、単に本発明の様々な実施形態を説明することを意図するものである。したがって、議論される特定の修正は、本発明の範囲の限定と解釈されるべきではない。様々な同等物、変更および修正が本発明の範囲から外れずに行われうることは当業者にとって明らかであり、そのような等価な実施形態は本明細書に含まれることが理解される。
本明細書に開示されるように、ＴＨＩＡＡ誘導体の新規なセットは合成され、炎症状態および糖尿病を治療する能力について分析された。これら誘導体を表１にまとめる。本明細書のいくつかの実施形態では、塩の結晶を包含する、これらＴＨＩＡＡ誘導体ならびにその塩および結晶が提供さる。本明細書では、実質的に鏡像異性的に純粋な組成物を包含する、これら誘導体ならびにその塩および結晶を含む組成物も提供される。
表１： ＴＨＩＡＡ誘導体：
Figure 0006556621
Figure 0006556621
Figure 0006556621
Figure 0006556621
本明細書で開示のＴＨＩＡＡ誘導体は、シスＴＨＩＡＡをアシル化、エナミン、オキシムおよび還元プロトコルにより修飾することによって合成された。シスＴＨＩＡＡは化学式ＩＶに示される構造をもつ。
Figure 0006556621
本明細書のいくつかの実施形態では、化学式Ｖ（エステル）および化学式ＶＩ（カーボネート）で示される一般構造を持つＴＨＩＡＡ誘導体を生成するためのアシル化プロトコルならびにこのプロトコルにより生成された化合物が提供される。
Figure 0006556621
Figure 0006556621
 本明細書で提供されるアシル化プロトコルは、元となる（parent）ＴＨＩＡＡ化合物（各種Ｒ１基をもつ３級アルコール）と塩化アシルもしくは無水物を反応させ、エステル（Ｒ２）を得る、またはクロロギ酸アルキルと反応させカーボネート（Ｒ３）を得ることを含む。このプロトコルにより、異なるＲ１、Ｒ２およびＲ３基を持つＴＨＩＡＡ誘導体の合成が可能になる。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、イソプロピル、イソブチルおよびｓｅｃ−ブチルから選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ２は、任意のアルキルまたはアリール基から選択され、置換または分岐されたアルキルおよびアリールを含む。いくつかの実施形態において、Ｒ３は、３級アルキル以外の任意のアルキル基から選択される。
以下の実施例１〜８に示されるように、化合物ＫＤＴ００３３、ＫＤＴ００３４、ＫＤＴ００３５、ＫＤＴ００３６、ＫＤＴ００３７、ＫＤＴ００４１、ＫＤＴ００４２およびＫＤＴ００４３は、本明細書で提供されるようにアシル化プロトコルによって合成された。テトラヒドロイソフムロン（ｎ−またはｃｏ−）を適切な溶媒（ジクロロメタンまたはクロロホルム）に溶解したのち過剰のピリジン（５当量）を加え、次いで過剰の塩化アシルまたは無水物（３当量）を加えた。反応は室温下に維持し、ＨＰＬＣで監視した。開始物質が消費されてから（一般的に塩化物で３０〜６０分、無水物で１２〜２４時間）、メタノールを加え過剰の塩化物をクエンチし、潜在的な第二のアシル基をエノール化トリケトンから除去した。少なくとも一時間の後、反応混合物を蒸発させ、残渣をｔＢｕＯＭｅに溶解し、１規定のＨＣｌ（２回）および塩水（１回）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。残渣をＨＰＬＣ（Ｃ１８逆相、４０％アセトニトリル、水、０．０５％ＴＦＡ）または向流クロマトグラフィー（ＣＣＣ）で精製しエステル（ＫＤＴ００３３、ＫＤＴ００３４、ＫＤＴ００３６、ＫＤＴ００４１、ＫＤＴ００４２、ＫＤＴ００４３）を得た。同じ手順をクロロギ酸アルキルを用いて行いカーボネート（ＫＤＴ００３５、ＫＤＴ００３７）を得た。
本明細書のいくつかの実施形態では、化学式ＶＩＩで示される一般構造を持つＴＨＩＡＡ誘導体を生成するためのエナミンプロトコルならびにこのプロトコルにより生成された化合物が提供される。
Figure 0006556621
本明細書で提供されるエナミンプロトコルは、元となるＴＨＩＡＡ化合物（各種Ｒ１基をもつ３級アルコール）と１級アミンを反応させることを含む。このプロトコルにより、異なるＲ４基を持つＴＨＩＡＡ誘導体の合成が可能になる。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、イソプロピル、イソブチルおよびｓｅｃ−ブチルから選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ４は、任意のアルキルまたはアリール基から選択され、置換または分岐されたアルキルおよびアリールを含む。
以下の実施例９〜１１に示されるように、化合物ＫＤＴ００１７、ＫＤＴ００２０、およびＫＤＴ００２４は、本明細書で提供されるようにエナミンプロトコルによって合成された。システトラヒドロイソフムロン（ｎ−またはｃｏ−）を適切な溶媒（メタノールまたはエタノール）に溶解し、過剰の１級アミン（５当量）を加えた。反応は室温〜５０℃下に維持し、ＨＰＬＣで監視した。開始物質がなくなってから（一般的に１〜１２時間）、溶媒を蒸発させた。揮発性アミンの場合、生成物はさらなる精製せずに使用可能であった。非揮発性アミンの場合、粗生成物をｔＢｕＯＭｅに溶解し、１規定のＨＣｌ（２回）および塩水（１回）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。残渣をＨＰＬＣ（Ｃ１８逆相、４０％アセトニトリル、水、０．０５％ＴＦＡ）で精製した。
本明細書のいくつかの実施形態では、化学式ＶＩＩＩおよびＩＸで示される一般構造を持つＴＨＩＡＡ誘導体を生成するためのオキシムプロトコルならびにこのプロトコルにより生成された化合物が提供される。
Figure 0006556621
Figure 0006556621
 本明細書で提供されるオキシムプロトコルは、元となるＴＨＩＡＡ化合物（各種Ｒ１基をもつ３級アルコール）と様々なＯ−アルキル化ヒドロキシルアミンを反応させることを含む。このプロトコルにより、異なるＲ５基を持つＴＨＩＡＡ誘導体の合成が可能になる。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、イソプロピル、イソブチルおよびｓｅｃ−ブチルから選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ５は、任意のアルキルまたはアリール基から選択され、置換または分岐されたアルキルおよびアリールを含む。
以下の実施例１２および１３に示されるように、化合物ＫＤＴ０００１／２およびＫＤＴ０００５は、本明細書で提供されるようにオキシムプロトコルによって合成された。テトラヒドロイソフムロン（ｎ−またはｃｏ−）を適切な溶媒（メタノールまたはエタノール）に溶解し、少し過剰のＯ−アルキルヒドロキシルアミン塩酸塩を加えたのち１当量のＮａＯＨ（１Ｍ水溶液）を加えた。反応は室温下に維持したのちＨＰＬＣを行った。開始物質がなくなってから（一般的に１時間）、溶媒を蒸発させ、残差を水とおよびｔＢｕＯＭｅに分割した。有機相を１規定のＨＣｌ（２回）および塩水（１回）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。必要に応じて、この残渣をＨＰＬＣ（Ｃ１８逆相、４０％アセトニトリル、水、０．０５％ＴＦＡ）で精製した。
本明細書のいくつかの実施形態では、ＴＨＩＡＡ誘導体を生成するための酸化セレンプロトコルならびにこのプロトコルにより生成された化合物が提供される。本明細書で提供される酸化セレンプロトコルは、元となるＴＨＩＡＡ化合物と二酸化セレンを反応させることを含む。
実施例１５に示されるように、化合物ＫＤＴ００４０は、本明細書で提供されるように酸化セレンプロトコルによって合成された。メタノールに溶解したシスイソフムロンを、マグネシウム塩に変換したのち、二酸化セレンを加え加熱した。反応完了後、混合物をろ過し、ろ液を蒸発させ、その後残った油分を単純な分割によって取り除いた。水相を次いで蒸発させ最終生成物を得た。
実施例２５および２６に示されるように、上記のＴＨＩＡＡ誘導体の炎症およびＰＰＡＲγ活性に対する効果を評価し、いくつかの誘導体で抗炎症性および抗糖尿病性を示すことが分かった。実施例２５に示されるように、いくつかの誘導体でＰＧＥ２、ＮＯ、ＭＭＰ−９、ＩＬ−１β、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳおよびＭＩＰ−１αを含む様々な炎症性メディエーターの産生を抑制することが分かった。これらの結果をもとに、本明細書では、炎症を抑制し、炎症マーカーのレベルを低減させ、および糖尿病など炎症に関連した状態を治療するための方法が提供される。施例２６に示されるように、いくつかの誘導体はＰＰＡＲγ活性を高めることが分かり、いくつかの化合物は選択的にＰＰＡＲγ活性を高め、その他もＰＰＡＲα活性を高める可能性が示された。これらの結果をもとに、本明細書では、選択的にまたはＰＰＡＲα活性と組み合わせてＰＰＡＲγ活性を高めるための方法およびＩＩ型糖尿病、肥満、高インスリン血症、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪肝疾患，非アルコール性脂肪性肝炎、自己免疫疾患または増殖性疾患などのＰＰＡＲγ調節反応性の状態を治療するための方法が提供される。
本明細書で使用される用語「塩」は、任意の薬学的に許容される塩を指すことができ、例えば、カリウム、アルミニウム、カルシウム、銅、グアニジン、鉄、リチウム、マグネシウム、ナトリウム、亜鉛塩などの無機を基本にした塩、およびシンコニジン、シンコニンおよびジエタノールアミン塩などの有機を基本にした塩を含む。本発明による、薬学的に許容される塩および前処理の追加の例は、例えばBerge J Pharm Sci 66:1 (1977)に見出すことができる。
本明細書のいくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＴＨＩＡＡ誘導体のうち１つ以上を含む組成物が提供される。これらの実施形態のうちいくつかでは、その組成物は実質的に鏡像異性的に純粋である。本明細書で使用される用語「実質的に鏡像異性的に純粋」は、組成物中のある化合物の９０％以上が第一の鏡像異性形、１０％以下が第二の鏡像異性形である組成物を指す。いくつかの実施形態において、化合物の「第一の鏡像異性形」はその鏡像異性形の塩および結晶を含む。いくつかの実施形態において、実質的に鏡像異性的な組成物は、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％、９９．９５％もしくは９９．９９％またはそれ以上が第一の鏡像異性形である化合物を含む。
本明細書のいくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＴＨＩＡＡ誘導体のうち１つ以上および薬学的に許容される担体のうち１つ以上を含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態において、これら医薬組成物は実質的に鏡像異性的に純粋である。本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」は、目的の化合物を体内のある組織、器官または部分から体内の別の組織、器官または部分へ届けるまたは運ぶことに関わる、薬学的に許容される物質、組成物またはビヒクルを指す。そのような担体は、例えば液体または個体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、カプセル化物質、安定化剤またはその組み合わせを含みうる。担体の各成分は、組成物の他の成分との適合性があり、接触する可能性のあるあらゆる体内の組織、器官または部分との接触に適切でなければならないという点で「薬学的に許容され」なければならず、毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、またはその他治療上の利益を大きく上回るあらゆる合併症のリスクをもたらしてはならないことを意味する。
本明細書で提供される組成物中で用いられる薬学的に許容される担体の例としては、限定するものではないが、（１）ラクトース、グルコース、スクロースまたはマンニトールなどの糖類、（２）コーンスターチ、片栗粉などのでんぷん類、（３）カルボキシメチル・セルロース・ナトリウム、エチルセルロースおよびセルロース・アセテートなどのセルロース類およびその誘導体、（４）粉末トラガカント、（５）モルト、（６）ゼラチン、（７）タルク、（８）ココアバターおよび座薬ワックスなどの賦形剤、（９）ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油および大豆油などの油、（１０）プロピレングリコールなどのグリコール類、（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなどの多価アルコール類、（１２）オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル類、（１３）寒天またはカルシウムカーボネートなどの崩壊剤、（１４）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤、（１５）アルギン酸、（１６）パイロジェンフリー水、（１７）等張食塩水、（１８）リンガー溶液、（１９）エチルアルコールおよびプロパノールなどのアルコール、（２０）リン酸緩衝液、（２１）パラフィン、（２２）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形ポリエチレングリコールまたはラウリル硫酸ナトリウムなどの潤滑剤、（２３）着色剤、（２４）コロイド状二酸化ケイ素、タルクおよびでんぷん、または三塩基性リン酸カルシウムなどの流動促進剤、ならびに（２４）アセトンなど、医薬組成物中に用いられるその他非毒性で適合性のある物質、を含む。ある実施形態において、本明細書で用いられる薬学的に許容される担体は水性担体、例えば緩衝食塩水など、である。別の実施形態では、薬学的に許容される担体は極性溶媒、例えばアセトンおよびアルコール、である。
本明細書で提供される医薬組成物は、さらに１つ以上の薬学的に許容される、生理的状態に近づけるために必要な補助物質を含みうる。例えば、組成物は、例えば酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどを含む１つ以上のｐＨ調整剤、緩衝剤、または毒性調整剤を含みうる。
本明細書で提供される医薬組成物は、例えばカプセル、カシェー、ピル、タブレット、ドロップ（風味付けされた基剤、通常はスクロースならびにアカシアまたはトラガカント、を使用する）、粉末、顆粒、水性または非水性液体の溶液または懸濁液、水中油または油中水乳濁液、エリキシル剤またはシロップ、もしくはトローチ（ゼラチンおよびグリセリンなどの不活性基剤もしくはスクロースおよびアカシアを使用する）、ならびに／または洗口液などを含む適切な投薬形態に処方されえて、それぞれ所定量のＴＨＩＡＡ誘導体を活性成分として含む。いくつかの実施形態において、組成物は例えば徐放性カプセルなど徐放性デリバリービヒクルとして処方されうる。本明細書で使用される「徐放性ビヒクル」は、活性薬剤を投与後すぐではなく時間をかけて放出する任意のデリバリービヒクルを指す。別の実施形態において、組成物は即効性ビヒクルとして処方されうる。
任意に１つ以上の修飾成分を伴って、圧縮また成型によってタブレットが作成されてもよい。圧縮タブレットは、接着剤（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチル・セルロース）、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウムまたは架橋カルボキシメチル・セルロース・ナトリウム）、界面活性または分散剤などを用いて調製されうる。成型タブレットは、適切な機械中で粉末ＴＨＩＡＡ誘導体の実質的に鏡像異性的に純粋な混合物またはさらに不活性希釈剤で湿潤させたものを成型することによって作成されうる。タブレットおよび糖衣錠、カプセル、ピルおよび顆粒などのその他固体投与形式は、任意に分割または腸溶性コーティングおよびその他製薬処方技術分野で既知のコーティングなどのコーティングおよびシェルとともに調製されうる。これらは、例えばヒドロキシプロピルメチル・セルロースを所望の放出プロファイル、その他ポリマーマトリックス、リポソームおよび／またはミクロスフェアを得るために様々な割合で使用して、その中のＴＨＩＡＡ誘導体を持続または制御放出するように処方されてもよい。これらは、例えばバクテリア保持フィルタによるろ過によって、または滅菌水またはその他いくつかの滅菌注射可能物質に可溶な、滅菌固体組成物形状の組み込み滅菌剤によって、使用の直前に滅菌されうる。これらの組成物は、任意に安定化剤を含んでもよく、およびＴＨＩＡＡ誘導体（複数を含む）を唯一または優先的に、消化管のある部分に、任意に遅延型で、放出する組成物でありうる。使用できる埋め込み組成物の例は、高分子物質およびワックスを含む。ＴＨＩＡＡ誘導体はマイクロカプセル形状でもよく、適切な場合、１つ以上の上記の賦形剤を共に用いてもよい。
本明細書で提供される組成物中のＴＨＩＡＡ誘導体濃度は変化しうる。濃度は、選択された個別の投与モードおよび生体システムの要求にしたがって、流体の体積、粘度、重量などをもとに選択されうる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される組成物中のＴＨＩＡＡ誘導体濃度は約０．０００１％〜１００％、約０．００１％〜約５０％、約０．０１％〜約３０％、約０．１％〜約２０％、または約１％〜約１０％重量／体積でありうる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される合成方法により、ＴＨＩＡＡ誘導体の１鏡像異性体が生成される。別の実施形態において、この合成方法により、ＴＨＩＡＡ誘導体の鏡像異性形の混在がもたらされる。これらの実施形態において、１鏡像異性形を単離するため、または本明細書に提供されるように実質的に鏡像異性的に純粋な組成物を生成するために、１つ以上の分離および／または精製ステップが順次実施される。
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態において、対象は哺乳類であり、これらの実施形態のいくつかにおいては、対象はヒトである。「その必要のある対象」は、炎症に関連する状態もしくはＰＰＡＲγ調節反応性の状態と診断された対象、炎症に関連する状態もしくはＰＰＡＲγ調節反応性の状態の１つ以上の症状を呈している対象、または１つ以上の遺伝的もしくは環境的要因に基づいて炎症に関連する状態もしくはＰＰＡＲγ調節反応性の状態を発症するリスクがあるとされた対象を指す。
状態について本明細書で使用される用語「治療する」「治療すること」または「治療」は、状態を防ぐこと、状態の発現または発症速度を遅らせること、状態の発症リスクを減少させること、状態に関連する症状の発症を防ぐもしくは遅延させること、状態に関連する症状を減少させるもしくは終わらせること、状態の完全にもしくは部分的に軽減させること、またはそのいくつかの組み合わせを指す。
本明細書で使用される「治療上有効な量」のＴＨＩＡＡ誘導体または医薬組成物とは、対象において所望の治療上の効果を生み出す組成物の量である。正確な治療上有効な量とは、その対象における治療効果の観点から最も効果的な結果を生むであろう化合物または組成物の量である。この量は、限定するものではないが、その治療効果のある化合物の特徴（例えば、活性、薬物動態、薬理学およびバイオアベイラビリティを含む）を含む様々な要因、対象の生理的状態（例えば、年齢、性別、疾患の種類および段階、一般的な健康状態、所与の投与に対する反応性ならびに薬物の種類を含む）、組成物中の薬学的に許容される担体（複数を含む）の性質ならびに投薬経路によって変化するであろう。臨床的または薬理学的技術分野の当業者は、日常的な実験を通じて、すなわち化合物投与への対象の応答を監視し、それに従って投与を調整することによって、治療上有効な量を決定可能であろう。さらなる指針として、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 21st Edition, Univ. of Sciences in Philadelphia (USIP), Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA, 2005を参照されたい。その開示内容全体は、参照により本願に組み込まれる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される化合物または組成物は、１日あたり１回以上投与されうる。別の実施形態において、化合物または組成物は、１日１回より少なく投与されうる。例えば、化合物または組成物は、１週間に１回、１月に１回または数か月に１回投与されうる。本明細書で提供される化合物または組成物の投与は、事前に決められた特定の治療期間にわたり、実施されてよく、または特定の治療上のベンチマークに到達するまで無期限で実施されてもよい。いくつかの実施形態において、投与頻度は、治療の途中で変更しうる。例えば、ある対象は、ある治療上のベンチマークを満足したため、治療の途中でより少ない投与を受けることができる。
本明細書で開示の化合物および組成物は、対象に対して当業者に既知の任意の投与経路で投与されてよく、限定するものではないがを含む。経口、エアロゾル、腸溶性、経鼻吸収、点眼、非経口、または経皮（例えば塗り薬もしくは軟膏、パッチ）。「非経口」とは一般的に注射に関連する投薬経路を指し、眼窩下、点滴、動脈内、関節包内、心腔内、皮内、筋肉内、腹腔内、肺内、胸骨内（intrasternal）、髄腔内、子宮内、静脈内、くも膜下、被膜下、および皮下または経気管を含む。非経口で投与可能な組成物の調整方法は、当業者には既知であり明らかであり、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 21st ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa. (2005)などにより詳細に記述されている。組成物は、ボーラス投与、舐剤またはペーストとして投与されてもよい。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される１つ以上のＴＨＩＡＡ誘導体、医薬製剤または実質的に鏡像異性的に純粋な組成物を含むキットが提供される。いくつかの実施形態において、そのキットは服用量や投与方法などの使用に関する説明書を備える。いくつかの実施形態において、炎症に関連した状態またはＰＰＡＲγ調節反応性の状態を治療するためにそのキットを使用してもよい。
以下の実施例は、特許請求する発明をより良く説明するために提供されるものであり、本発明の範囲を限定することを意図したものではない。特定の材料が言及される範囲において、それは単に説明のためであって本発明を限定するためではない。当業者は、発明的能力なしで、また本発明の範囲から逸脱することなく、等価な方法または反応物を開発しうる。多くのバリエーションが、本明細書に記載にされる方法作成可能であり、それでもなお本発明の範囲ないにとどまっていることが理解されるであろう。そのような変更が本発明の範囲に含まれることが発明者の意図である。
（１Ｓ，５Ｒ）−２−ヒドロキシ−５−（３−メチルブチル）−１−（４−メチルペンタノイル）−３−（２−メチルプロパノイル）−４−オキソシクロペント−２−エン−１−イルデカノエート（ＫＤＴ００３６）の合成
システトラヒドロイソコフムロン（３８ｍｇ）をクロロホルム（１ｍＬ）に溶解し、ピリジン（７５μＬ、１１当量）、直後に無水酢酸（１２０μＬ、９当量）を加えた。混合物を室温で一晩維持し、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）でクエンチし、室温で一晩放置した。次いで反応混合物を蒸発させ、残渣をｔＢｕＯＭｅに溶解し、１規定のＨＣｌ（２回）および塩水（１回）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、油状にまで蒸発させた。粗生成物をＨＰＬＣで精製した。少量の生成物を集めて蒸発させ、無色の油として純粋な生成物を得た（１１．６ｍｇ、収率約２１％）。分子量５０５．５［Ｍ−Ｈ］−、ＵＶｍａｘ（ＭｅＯＨ水溶液、５０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ＝９．５）２５９ｎｍ。
Figure 0006556621
（１Ｓ，５Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−１−（４−メチルペンタノイル）−４−オキソシクロペント−２−エン−１−イル３，３−ジメチルブタノエート（ＫＤＴ００３４）の合成
システトラヒドロイソフムロン（５１ｍｇ）をクロロホルム（１ｍＬ）に溶解し、ピリジン（６０μＬ、５．３当量）、直後にジメチルプロピオン酸クロリド（６０μＬ、３．１当量）を加えた。混合物を室温で３時間維持し、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）でクエンチし、一晩おいた。次いで反応混合物を蒸発させ、残渣をｔＢｕＯＭｅに溶解し、１規定のＨＣｌ（２回）および塩水（１回）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させ５８ｍｇの油を得た。粗生成物をＨＰＬＣで精製した。少量の生成物を集めて蒸発させ、無色の油として純粋な生成物を得た（２２．０ｍｇ、収率約３４％）。分子量４６３．７［Ｍ−Ｈ］−、ＵＶｍａｘ（ＭｅＯＨ水溶液、５０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ＝９．５）２５９ｎｍ。
Figure 0006556621
（１Ｓ，５Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−１−（４−メチルペンタノイル）−４−オキソシクロペント−２−エン−１−イル２，２−ジメチルプロパノエート（ＫＤＴ００３３）の合成
システトラヒドロイソフムロン（５１．５ｍｇ）をクロロホルム（１ｍＬ）に溶解し、ピリジン（６０μＬ、５．３当量）、直後に塩化ピバロイル（６０μＬ、３．５当量）を加えた。混合物を室温で９０分維持し、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）でクエンチし、室温で一晩放置した。次いで反応混合物を蒸発させ、残渣をｔＢｕＯＭｅに溶解し、１規定のＨＣｌ（２回）および塩水（１回）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させ５８ｍｇの油を得た。粗生成物をＨＰＬＣで精製した。少量の生成物を集めて蒸発させ、無色の油として純粋な生成物を得た（２３．０ｍｇ、収率約３６％）。分子量４４９．５［Ｍ−Ｈ］−、ＵＶｍａｘ（ＭｅＯＨ水溶液、５０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ＝９．５）２５９ｎｍ。
Figure 0006556621
３−ブチン−１イル（１Ｓ，５Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−１−（４−メチルペンタノイル）−４−オキソシクロペント−２−エン−１−イルカーボネート（ＫＤＴ００３５）の合成
システトラヒドロイソフムロン（６０．４ｍｇ）をクロロホルム（１ｍＬ）に溶解し、ピリジン（５０μＬ、３．７当量）、直後にクロロギ酸ブチニル（５５μＬ、２．９当量）を加えた。混合物を室温で３時間維持し、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）でクエンチし、室温で１時間放置した。次いで反応混合物を蒸発させ、粗生成物をＨＰＬＣで精製した。少量の生成物を集めて蒸発させ、無色の油として純粋な生成物を得た（２９．７ｍｇ、収率約３９％）。分子量４６１［Ｍ−Ｈ］−、ＵＶｍａｘ（ＭｅＯＨ水溶液、５０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ＝９．５）２５９ｎｍ。
Figure 0006556621
（１Ｓ，５Ｒ）−２−ヒドロキシ−５−（３−メチルブチル）−１−（４−メチルペンタノイル）−３−（２−メチルプロパノイル）−４−オキソシクロペント−２−エン−１−イル２−メチルプロピルカーボネート（ＫＤＴ００３７）の合成
システトラヒドロイソコフムロン（５５．２ｍｇ）をクロロホルム（１ｍＬ）に溶解し、ピリジン（５０μＬ、４．０当量）、直後にクロロギ酸ブチニル（６０μＬ、２．９当量）を加えた。混合物を室温で１時間維持し、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）でクエンチし、室温で１時間放置した。次いで反応混合物を蒸発させ、粗生成物をＨＰＬＣで精製した。少量の生成物を集めて蒸発させ、無色の油として純粋な生成物を得た（１０．３ｍｇ、収率約１５％）。分子量４５１［Ｍ−Ｈ］−、ＵＶｍａｘ（ＭｅＯＨ水溶液、５０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ＝９．５）２５９ｎｍ
Figure 0006556621
（１Ｓ，５Ｒ）−２−ヒドロキシ−５−（３−メチルブチル）−１−（４−メチルペンタノイル）−３−（２−メチルプロパノイル）−４−オキソシクロペント−２−エン−１−イル３，３−ジメチルブタノエート（ＫＤＴ００４１）の合成
システトラヒドロイソコフムロン（５５．１ｍｇ）をクロロホルム（１ｍＬ）に溶解し、ピリジン（６０μＬ、４．８当量）、直後にジメチルプロピオン酸クロリド（６０μＬ、２．８当量）を加えた。混合物を室温で１時間維持し、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）でクエンチし、室温で一晩放置した。次いで反応混合物を油状にまで蒸発させ、粗生成物をＨＰＬＣで精製した。少量の生成物を集めて蒸発させ、無色の油として純粋な生成物を得た（３０．５ｍｇ、収率約４３％）。分子量４４９．４［Ｍ−Ｈ］−、ＵＶｍａｘ（ＭｅＯＨ水溶液、５０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ＝９．５）２５８ｎｍ、１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４） δ ｐｐｍ ０．８２〜０．９０（ｄｄ、１２Ｈ） １．０５（ｓ、３Ｈ） １．１０（ｓ、９Ｈ） １．１２（ｓ、３Ｈ） １．２６〜１．４４（ｍ、５Ｈ） １．４４〜１．５０（ｍ、４Ｈ） ２．５７（ｄｔ、Ｊ＝１８．４１、７．３３Ｈｚ、１Ｈ） ２．８２（ｄｔ、Ｊ＝７．５０，１８．０８Ｈｚ、１Ｈ） ３．５４（ｔ、Ｊ＝６．６２Ｈｚ、１Ｈ）。
Figure 0006556621
（１Ｓ，５Ｒ）−２−ヒドロキシ−５−（３−メチルブチル）−１−（４−メチルペンタノイル）−３−（２−メチルプロパノイル）−４−オキソシクロペント−２−エン−１−イルベンゾエート（ＫＤＴ００４２）の合成
システトラヒドロイソコフムロン（５６．２ｍｇ）をクロロホルム（１ｍＬ）に溶解し、ピリジン（６０μＬ、４．７当量）、直後に塩化ベンゾイル（３０μＬ、１．６当量）を加えた。混合物を室温で１時間維持し、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）でクエンチし、室温で一晩放置した。次いで反応混合物を油状にまで蒸発させ、粗生成物をＨＰＬＣで精製した。少量の生成物を集めて蒸発させ、無色の油として純粋な生成物を得た（１４．９ｍｇ、収率約２０％）。分子量４５５．４［Ｍ−Ｈ］−、ＵＶｍａｘ（ＭｅＯＨ水溶液、５０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ＝９．５）２３４ｎｍ、１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４） δ ｐｐｍ ０．６２（ｄｄ、Ｊ＝９．２６、６．６２Ｈｚ、６Ｈ） ０．７４〜０．７８（ｍ、６Ｈ） １．０２（ｄ、Ｊ＝７．０６Ｈｚ、３Ｈ） １．０８〜１．１２（ｍ、３Ｈ） １．１３〜１．３０（ｍ、３Ｈ） １．３０〜１．４２（ｍ、３Ｈ） １．４３〜１．５８（ｍ、２Ｈ） ２．４７〜２．５６（ｍ、１Ｈ） ２．７９（ｄｄｄ、Ｊ＝１８．０８、８．１６、６．３９Ｈｚ、１Ｈ） ３．４３（ｄｔ、Ｊ＝１３．６７、６．８４Ｈｚ、１Ｈ） ３．６４（ｔ、Ｊ＝６．１７Ｈｚ、１Ｈ） ７．４６〜７．５５（ｍ、２Ｈ） ７．６２〜７．６８（ｍ、１Ｈ） ８．０１〜８．１１（ｍ、２Ｈ）。
Figure 0006556621
（１Ｒ，２Ｓ）−３−ヒドロキシ−４−（３−メチルブタノイル）−２−（３−メチルブチル）−１−（４−メチルペンタノイル）−５−オキソシクロペント−３−エン−１−イル２−［４−（２−メチルプロピル）フェニル］プロパノエート（ＫＤＴ００４３）の合成
システトラヒドロイソフムロン（５２ｍｇ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、イブプロフェンクロリド（６９ｍｇ、２．２当量）、直後にピリジン（６０μＬ、５当量）を加えた。混合物を室温で３時間維持し、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）でクエンチし、一晩放置した。次いで反応混合物を蒸発させ、残渣をｔＢｕＯＭｅに溶解し、１規定のＨＣｌ（２回）および塩水（１回）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させ、１２４ｍｇの油を得た。この粗生成物をヘキサン／ＤＭＦ中のＣＣＣの下降モード（descending mode）で精製し、少量の生成物を集めて蒸発させ、無色の油として純粋な生成物を得た（３０ｍｇ、収率約３８％）。分子量５５３．４［Ｍ−Ｈ］−。
ある代替手段においては、システトラヒドロイソフムロン（５２ｍｇ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、イブプロフェンクロリド（３６ｍｇ、１．１当量）、直後にピリジン（３０μＬ、２．６当量）を加えた。混合物を室温で７５分維持し、水（１００μＬ）でクエンチし、１時間撹拌した。次いで反応混合物を蒸発させ、残渣をｔＢｕＯＭｅに溶解し、水（１回）、重炭酸ナトリウム飽和水溶液（１回）、１規定ＨＣｌ（３ｘ）、および塩水（１回）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させ、７３．１ｍｇの生成物を得た（収率９３％）。
Figure 0006556621
（４Ｒ，５Ｒ）−４−ヒドロキシ−５−（３−メチルブチル）−２−［３−メチル−１−（メチルアミノ）ブチリデン］−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペンタン−１，３−ジオン（ＫＤＴ００２０）の合成
システトラヒドロイソフムロン（８．１ｍｇ）をメタノール（１００μＬ）に溶解し、エチルアミン（５０μＬ、３３％エタノール溶液、１８当量）を加えた。混合物を室温で１時間維持し、蒸発させ、白色個体を得た（８．０ｍｇ、収率約９５％）。分子量３７８．３［Ｍ−Ｈ］−、ＵＶｍａｘ（ＭｅＯＨ水溶液、５０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ＝９．５）２４８、３０３ｎｍ。
Figure 0006556621
（４Ｒ，５Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−｛１−［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−３−メチルブチリデン｝−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペンタン−１，３−ジオン（ＫＤＴ００１７）の合成
システトラヒドロイソフムロン（４８．０ｍｇ）をメタノール（２００μＬ）に溶解し、エタノールアミン（１００μＬ、１２．７当量）を加えた。混合物を４０℃で１５時間撹拌し、蒸発させ、ＨＰＬＣで精製し、白色個体を得た（３１．３ｍｇ、収率約５８％）。分子量４０８．５［Ｍ−Ｈ］−、ＵＶｍａｘ（ＭｅＯＨ水溶液、５０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ＝９．５）２４７、３０３ｎｍ。
Figure 0006556621
（４Ｒ，５Ｒ）−２−［１−（ベンジルアミノ）−３−メチルブチリデン］−４−ヒドロキシ−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペンタン−１，３−ジオン（ＫＤＴ００２４）の合成
システトラヒドロイソフムロン（２５．９ｍｇ）をメタノール（７５μＬ）に溶解し、ベンジルアミン（３５μＬ、４．５当量）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌し、蒸発させ、ＨＰＬＣで精製し、白色個体を得た（２０．３ｍｇ、収率約６３％）。分子量４５４．５［Ｍ−Ｈ］−、ＵＶｍａｘ（ＭｅＯＨ水溶液、５０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ＝９．５）２４７、３０７ｎｍ。
Figure 0006556621
（４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−２−（Ｎ−メトキシ−３−メチルブタニミドイル）−４−（Ｎ−メトキシ−４−メチルペンタニミドイル）−５−（３−メチルブチル）シクロペント−２−エン−１−オン（ＫＤＴ０００１／２）の合成
システトラヒドロイソフムロンカリウム塩（９６．８ｍｇ）をメタノール（３ｍＬ）およびＯ−Ｍｅ−ヒドロキシルアミンに溶解した。ＨＣｌ（５０．５ｍｇ、２．３当量）の後にＮａＯＨ（２８０μＬの１Ｍ水溶液、１．０６当量）を加えた。混合物を室温で１６時間維持し、メタノールを蒸発させ、残差を水とおよびｔＢｕＯＭｅに分割した。有機相を１規定のＨＣｌ（２回）および塩水（１回）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させ白色個体を得た（１０７．２ｍｇ、収率約９６％）。分子量４２３．５［Ｍ−Ｈ］−、ＵＶｍａｘ（ＭｅＯＨ水溶液、５０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ＝９．５）２７１ｎｍ。
Figure 0006556621
（４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−４−（１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル）−２−（Ｎ−メトキシ−３−メチルブタニミドイル）−５−（３−メチルブチル）シクロペント−２−エン−１−オン（ＫＤＴ０００５）の合成
シスヘキサヒドロイソフムロン（２３．０ｍｇ）をメタノール（２ｍＬ）およびＯ−Ｍｅ−ヒドロキシルアミンに溶解した。ＨＣｌ（１１ｍｇ、２．１当量）の後にＮａＯＨ（８０μＬの１Ｍ水溶液、１．３当量）を加えた。混合物を室温で２時間維持し、メタノールを蒸発させ、残差を水とおよびｔＢｕＯＭｅに分割した。有機相を１規定のＨＣｌ（２回）および塩水（１回）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させ白色個体を得た（２１．２ｍｇ、収率約８５％）。分子量３９６．１［Ｍ−Ｈ］−、ＵＶｍａｘ（ＭｅＯＨ水溶液、５０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ＝９．５）２６９ｎｍ。
Figure 0006556621
５−［（１Ｓ，５Ｒ）−１，２−ジヒドロキシ−３−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−オキソシクロペント−２−エン−１−イル］−２−メチル−５−オキソペンタン酸（ＫＤＴ００３８）
１日あたり１．２ｇのＴＨＩＡＡを投与した被験者の尿（７５０ｍＬ、２４時間回収量の１／２）を５０ｍＬの１規定ＨＣｌで酸性化し、ジクロロメタン（１００ｍＬ）と混合し、沈殿物をろ過により除去した。残差を分割し、水相をさらに２回１００ｍＬのジクロロメタンで抽出した。集めたジクロロメタン抽出物をセライトでろ過し、ろ液を塩水（１回１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させ、１６８ｍｇの黄色油を得た。油をセミ分取ＨＰＬＣで精製し（１００ｍＭ酢酸アンモニウム ｐＨ９．５、４０％ＭｅＯＨ、４．６ｘ２５０のＧｅｍｉｎｉＮＸカラム）、白色個体を得た。分子量３９５．４［Ｍ−Ｈ］−、ＵＶｍａｘ（ＭｅＯＨ水溶液、５０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ９．５） ２５５ｎｍ。１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４） δ ｐｐｍ ０．８６〜０．９４（ｍ、４Ｈ） ０．９４〜１．０４（ｍ、６Ｈ） １．０９〜１．１５（ｍ、１Ｈ） １．１５〜１．２３（ｍ、３Ｈ） １．２４〜１．３６（ｍ、３Ｈ） １．４８〜１．６０（ｍ、１Ｈ） １．６０〜１．７８（ｍ、３Ｈ） １．８０〜１．９２（ｍ、１Ｈ） ２．０８〜２．２１（ｍ、１Ｈ） ２．４３（ｄｑ、Ｊ＝１４．１２、７．２１Ｈｚ、１Ｈ） ２．６８〜２．８１（ｍ、２Ｈ） ２．８１〜２．９０（ｍ、２Ｈ） ３．０８（ｔ、Ｊ＝６．５１Ｈｚ、１Ｈ）。
Figure 0006556621
（４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−４−［（２Ｅ）−４−ヒドロキシ−４−メチルペント−２−エノイル］−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブタ−２−エン−１−イル）シクロペント−２−エン−１−オン（ＫＤＴ００４０）
マグネシウムオキシド（１１ｍｇ、１．１当量）をシスイソフムロン（９５．０ｍｇ）のメタノール溶液に加え、簡単に混合し、塩を形成させた。二酸化セレン（７６ｍｇ、２．９当量）を次いで加え、反応混合物を６５℃で８０分間加熱し、その時点で反応は完了していた。反応混合物をセライトでろ過し。ろ液を蒸発させた。残った油分をＨＥＭＷ＝１１１１（ヘキサン−酢酸エチル−メタノール−水を体積比で１：１：１：１）中での単純な分割によって精製し、水相中に生成物、ならびに有機相に残留開始物質および不純物とした。水相を蒸発させ、白色個体を得た。分子量３７７．１［Ｍ−Ｈ］−、ＵＶｍａｘ（ＭｅＯＨ水溶液、５０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ＝９．５）２４５ｎｍ。１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４） δ ｐｐｍ ０．９８（ｍ、６Ｈ） １．３５（ｓ、６Ｈ） １．６２（ｓ、３Ｈ） １．６６（ｓ、３Ｈ） ２．１５（ｍ、１Ｈ） ２．３５〜２．５７（ｍ、２Ｈ） ２．６６〜２．８４（ｍ、２Ｈ） ３．１９（ｔ、Ｊ＝５．７、１Ｈ） ３．８９（ｓ、１Ｈ） ５．１４（ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、１Ｈ） ６．８９（ｄ、Ｊ＝１５．６Ｈｚ、１Ｈ） ７．０５（ｄ、Ｊ＝１５．６Ｈｚ、１Ｈ）。
Figure 0006556621
（４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）−２−（２−メチルプロパノイル）シクロペント−２−エン−１−オン（（＋）−ＫＤＴ１００、（＋）−システトラヒドロイソコフムロン）
トランスイソ−a−酸を、β−シクロデキストリン錯体形成（Khatib 2010）によって４５ｇのホップ異性化樹脂抽出物から除去した。シスイソフムロンを単離するために、シス体をさらにＣＣＣ（Dahlberg 2012）によって精製した。接触水素化によってシスイソフムロンを還元し、ＣＣＣ（Dahlberg 2010）によって均一性が９５％以上になるまで再精製した。
分析結果は、Ｃ、６８．０９、Ｈ、９．１１であった。Ｃ２０Ｈ３２Ｏ５は、Ｃ、６８．１５、Ｈ、９．１５である。融点４９〜５０°Ｃ（５０〜５２℃）、旋光度＋３５．３，ｃ＝１．０、ＭｅＯＨ（３５．６）（Ting 1996）。
Figure 0006556621
（＋）−ＫＤＴ１００のシンコニジン塩
各１当量の（＋）−ＫＤＴ１００（７７．０ｍｇ）および（−）−シンコニジン（５１．９ｍｇ、１．００当量）をｉＰｒ−ＯＨ（２００μＬ）中で混合し、簡単に加熱し溶液を形成した。ｔＢｕＯＭｅ（２００μＬ）を加えた溶液を室温でそのままおいて結晶化させた。３日後、この溶液内で結晶のｉｎ ｓｉｔｕ形成が観察された。Ｘ線解析に適切な結晶を１つずつ特定し、慎重に除去し、Ｘ線回折解析用に取り付け、提出した。
分析（２Ｍ＋ｔＢｕＯＭｅで計算、結晶構造に一致する化学式）結果は、Ｃ、７２．１４、Ｈ、８．４２、Ｎ、４．０９であった。Ｃ８３Ｈ１２０Ｎ４Ｏ１３は、Ｃ、７１．９０、Ｈ８．７５、Ｎ、４．０５である。融点１１８℃。
（４Ｓ，５Ｓ）−３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペント−２−エン−１−オン（（＋）−ＫＤＴ７００、（−）−トランステトラヒドロイソフムロン）
微分ｐＨ抽出により、市販のホップのＣＯ２抽出物からアルファ酸を単離した。４５０ｍｍの被覆されたボロシリケートガラス浸漬型ウェルに約１７メートル、内径２．７ｍｍのＦＥＰチューブを巻きつけ、４５０Ｗ中圧水銀浸漬型ランプを用いて流量光反応器を制作した。単離したアルファ酸（２．１ｇ）を１００ｍＬのメタノールに溶解し、５ｍＬ／分で２時間、反応が完了するまで廃液を再生利用しながら、流量反応器に通した。得られたトランスイソ−アルファ酸の遊離酸混合物を接触水素化によって還元し、ＣＣＣによって精製し、均一性が９５％以上のトランステトラヒドロイソフムロン（Dahlberg 2010）を得た。
分析結果は、Ｃ、６８．０５、Ｈ、９．５６、Ｎ、５．７７であった。Ｃ２７Ｈ４４Ｎ２Ｏ５は、Ｃ、６８．０４、Ｈ、９．３０、Ｎ、５．８８である。融点７６°Ｃ（７８〜８１℃）（Ting 1996）、旋光度−１１．２、ｃ＝１．０、ＭｅＯＨ（−１２．４）（Ting 1996）。１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４） d ｐｐｍ ０．８８〜０．９５（ｍ、１２Ｈ） ０．９８（ｄｄ、Ｊ＝１６．３０、６．６８， Ｈｚ、６Ｈ） １．１８〜１．２６（ｍ、１Ｈ） １．３７〜１．４９（ｍ、４Ｈ） １．５０〜１．６０（ｍ、２Ｈ） １．８７〜１．９７（ｍ、１Ｈ） ２．０９〜２．１９（ｍ、１Ｈ） ２．６８〜２．７５（ｍ、１Ｈ） ２．７５〜２．８６（ｍ、４Ｈ）、１３ＣＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、メタノール−ｄ４） d ｐｐｍ ２１．２６、２１．３１、２１．３６、２１．３７、２１．４９、２１．５８、２２．１９、２６．２８、２７．２５、２７．９３、３１．３５、３６．７０、３７．０４、４４．１４、４７．１０、４７．２７、４７．４４、４７．６１、４７．７９、４７．９５、４８．１２、１９１．４５、１９６．４４、２０７．６７、２１０．２３。
Figure 0006556621
（−）−ＫＤＴ７００のシンコニジン塩
（−）−ＫＤＴ７００（５４．３ｍｇ）をシンコニン（４３．０ｍｇ、１当量）とＭｅＯＨ中で混合し、得られた溶液を蒸発させた。得られた固形の塩をヘキサンに分散させ、完全に溶解するまでクロロホルムを加えた。溶液を開放しておき、数日かけて溶媒がゆっくり蒸発できるようにし、その際結晶が形成された。Ｘ線解析に適切な結晶を１つずつ特定し、慎重に除去し、Ｘ線回折解析用に取り付け、提出した。残りの結晶は、ろ過し、高真空下で乾燥させ、元素分析用に提出した。
分析（Ｍ＋０．１５ＣＨＣｌ３として計算）結果は、Ｃ７１．２６、Ｈ、８．３５、Ｎ、４．１５であった。Ｃ４０．１５Ｈ５６．１Ｃｌ０．４５Ｎ２Ｏ６は、Ｃ、７１．０４、８．３４、Ｎ、４．１３である。融点１３７〜１３９℃。
（４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−２−［（２Ｓ）−２−メチルブタノイル］−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペント−２−エン−１−オン（（＋）−ＫＤＴ４００、（＋）−システトラヒドロイソアドフムロン）
トランスイソ−a−酸を、β−シクロデキストリン錯体形成（Khatib 2010）によって４５ｇのホップ異性化樹脂抽出物から除去した。シスイソアドフムロンを単離するために、シス体をさらにＣＣＣ（Dahlberg 2012）によって精製し、接触水素化によってシスイソアドフムロンを還元し、ＣＣＣ（Dahlberg 2010）によって均一性が９５％以上になるまで再精製した。
Figure 0006556621
（＋）−ＫＤＴ４００のシンコニジン塩
４ｍＬの琥珀色のバイアルで、各１当量の（＋）−ＫＤＴ４００（５０．０ｍｇ）および（−）−シンコニジン（３９．９ｍｇ、０．９９当量）をｉＰｒ−ＯＨ（２００μＬ）中で混合し、６０〜７０℃に簡単に加熱し溶液を形成した。エーテル（２００μＬ）を加えた溶液を室温でそのままおいて結晶化させた。溶液を隔膜の下で密封し、次いで１６ゲージの針で穴をあけて溶媒が徐々に蒸発できるようにした。３日後、この溶液内で結晶のｉｎ ｓｉｔｕ形成が観察された。Ｘ線解析に適切な結晶を１つずつ特定し、慎重に除去し、Ｘ線回折解析用に取り付け、提出した。
分析（２Ｍ＋０．６ｉＰｒＯＨ＋０．４Ｅｔ２Ｏとして計算、結晶構造に一致する化学式）結果は、Ｃ、７０．６８、Ｈ、８．３５、Ｎ、３．９８であった。Ｃ８３．４Ｈ１２０．８Ｎ４Ｏ１３は、Ｃ７０．５７、Ｈ、８．５８、Ｎ、３．９５である。融点１４９℃。
（４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブタ−２−エン−１−イル）−４−（４−メチルペント−３−エノイル）シクロペント−２−エン−１−オン（（＋）−ＫＤＴ５５０、（＋）−シスイソフムロン）
トランスイソ−アルファ酸を、β−シクロデキストリン錯体形成（Khatib 2010）によって４５ｇのホップ異性化樹脂抽出物から除去した。シスイソフムロンを単離するために、シス体をさらにＣＣＣ（Dahlberg 2012）によって精製した。シスイソフムロンは、以下の精製によって９５％以上均一であることが確認された。
Figure 0006556621
（＋）−ＫＤＴ５００のシンコニジン塩
各１当量の（＋）−ＫＤＴ５００（９９．４ｍｇ）および（−）−シンコニジン（８０．０ｍｇ、０．９９当量）をｉＰｒ−ＯＨ（１００μＬ）中で混合し、簡単に加熱し溶液を形成した。ｔＢｕＯＭｅ（５００μＬ）を加えた溶液を室温でそのままおいて結晶化させた。３日後、この溶液内で結晶のｉｎ ｓｉｔｕ形成が観察された。Ｘ線解析に適切な結晶を１つずつ特定し、慎重に除去し、Ｘ線回折解析用に取り付け、提出した。
分析（Ｍ＋０．３Ｈ２Ｏで計算）結果は、Ｃ、７２．６５、Ｈ、７．８０、Ｎ、４．２８であった。Ｃ４０Ｈ５２．６Ｏ６．３は、Ｃ ７２．５３、Ｈ、８．０２、Ｎ、４．２３である。融点１４９℃。
（６Ｓ）−３，５，６−トリヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−４，６−ビス（３−メチルブタ−２−エン−１−イル）シクロヘキサ−２，４−ジエン−１−オン（（＋）−ＫＤＴ５０５、（−）フムロン）
微分ｐＨ抽出により、市販のホップのＣＯ２抽出物から（−）フムロンを単離し、次いで得られたアルファ酸をＣＣＣ精製し、９５％均一であった。融点６６℃（６６℃（Ting 1996））、旋光度−１９７．７、ｃ＝１．０、ＭｅＯＨ（−２１２（Ting 1996））。１，２−ジアミンシクロヘキサン塩の分析結果は、Ｃ ６８．０５、Ｈ ９．５６、Ｎ、５．７７であった。Ｃ２７Ｈ４４Ｎ２Ｏ５は、Ｃ、６８．０５、Ｈ、９．３０、Ｎ、５．８８である。融点１４４℃。
ＬＰＳ媒介炎症メディエーター産生におけるＴＨＩＡＡ誘導体の効果
実施例１〜１９で合成されたＴＨＩＡＡ誘導体をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、−２０℃で保管した。ＬＰＳは、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社（ミズーリ州セントルイス）から購入した。
ＬＰＳ媒介プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）および一酸化窒素（ＮＯ）産生におけるＴＨＩＡＡ誘導体の効果を、ＲＡＷ２６４．７マウスマクロファージモデルにおいて評価した。ＲＡＷ２６４．７細胞株は、ＡＴＣＣ社（バージニア州マナサス）から購入し、その指示に従ってメンテナンスした。９６ウェルプレートにて、１ウェルあたり８ｘ１０４セルの密度で細胞を成長させ、継代培養し、翌日８０〜９０％コンフルエンスに到達した。無血清培地中のそのセルに、最終濃度０．１％ＤＭＳＯでＴＨＩＡＡ誘導体を加えた。ＴＨＩＡＡ誘導体とともに１時間培養したのち、ＬＰＳ（１μｇ／ｍｌ）またはＤＭＥＭ培地のみを細胞に加え、培養を６時間続けた。ＲＡＷ２６４．７細胞への６時間のＬＰＳ刺激（１μｇ／ｍｌ）により、ＰＧＥ２およびＮＯの産生が活性化された。ＰＧＥ２レベルの測定のため、上澄み液を回収した。ＮＯについては、培養は一晩続いた。刺激の１６時間後に、ＮＯレベルの測定のため、上澄み液を回収した。ＰＧＥ２レベルは、Ａｓｓａｙ Ｄｅｓｉｇｎｓ社（ミシガン州アナーバー）のアッセイキットを用いて測定し、ＮＯレベルは、Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社（ミシガン州アナーバー）のアッセイキットを用いて測定した。
ＬＰＳ媒介ＭＭＰ−９、ＩＬ−１β、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳおよびＭＩＰ−１αにおけるＴＨＩＡＡ誘導体の効果をＴＨＰ−１細胞で評価した。ＴＨＰ−１細胞へのＬＰＳ刺激（１μｇ／ｍｌ）により、ＭＭＰ−９、ＩＬ−１β、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳおよびＭＩＰ−１αの産生が活性化された。
表２に結果をまとめる。データは、炎症メディエーター産生抑制％で表される。
Figure 0006556621
ＲＡＷ２６４．７細胞において、試験化合物の多くがＬＰＳ媒介ＰＧＥ２およびＮＯ産生をかなりの程度（２０％より大きいと定義される）で抑制した。抑制効率は、試験化合物間で異なる。例えば、ＫＤＴ００３３、ＫＤＴ００３４およびＫＤＴ００３７は、ＰＧＥ２およびＮＯ産生の両方を５０％より高く抑制し、一方でＫＤＴ１００、ＫＤＴ７００、ＫＤＴ０００５、ＫＤＴ００１７、ＫＤＴ００３８およびＫＤＴ００３９は、両方の炎症メディエーターについて弱い抑制（＜２０％）または抑制なしだった。ロシグリタゾンは、正のＰＰＡＲγ制御アゴニストであるが、ＰＧＥ２産生は抑制せず、ＮＯ産生の抑制は非常に弱く（６％）、したがってＴＨＩＡＡ誘導体の抗炎症効果は、ＲＡＷ２５６４．７細胞モデルにおいてＰＰＡＲγ活性化とは独立であることが示唆される。
ＴＨＰ−１細胞においては、ＫＤＴ試験化合物のすべてが、濃度１２．５μＭにおける、ＬＰＳ起因のＭＭＰ−９、ＩＬ−１β、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳおよびＭＩＰ−１αのうち１つ以上の発現を抑制した。再び、ロシグリタゾンは、炎症メディエーター産生に対して抑制を示さないまたは弱い抑制しか示さず、したがってＫＤＴ試験分子の抗炎症効果は、ＴＨＰ−１細胞モデルにおいてＰＰＡＲγ活性化とは独立であることが示唆される。
各ＴＨＩＡＡ誘導体について、６つの炎症メディエーターすべての平均抑制を計算した。試験化合物の多くがかなり高い平均抑制レベルを示し、ＫＤＴ００３３およびＫＤＴ００３４は９０％近い平均抑制レベルを示した。興味深いことに、Ｒ２位置が修飾されたＴＨＩＡＡ誘導体（すなわちＫＤＴ００３３、ＫＤＴ００３４、ＫＤＴ００３５、ＫＤＴ００３６およびＫＤＴ００３７）が、両細胞モデルにおいて、抗炎症効果が強化されたようである。
ＰＰＡＲαおよびＰＰＡＲγ活性に対するＴＨＩＡＡ誘導体の効果
ＰＰＡＲαおよびＰＰＡＲγ活性に対するＴＨＩＡＡ誘導体の機能的効果は、ＰＰＡＲレポートアッセイ（ＩＮＤＩＧＯ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、ペンシルベニア州）を用いて評価した。このアッセイは、ＰＰＡＲαまたはＰＰＡＲγの構成的高レベル発現を提供するために設計された非ヒト哺乳類細胞を使用し、妥当なＰＰＡＲに特有のルシファラーゼレポート遺伝子を含む。アゴニスト結合による活性化に続き、ＰＰＡＲは、ルシファラーゼレポート遺伝子の発現を誘導する。したがってルシファラーゼ活性は、アゴニスト処理細胞においてＰＰＡＲ活性測定の代替物となる。
１ウェルあたり１００μＬのレポーター細胞を９６−ウェルプレートに置き、ＫＤＴ試験化合物（５０、２５、１２．５、６．２５、３．１３、１．５６μＭ）１００μＬを各ウェルに２回ずつ加えた。ＰＰＡＲγアッセイでは、ロシグリタゾン（１０００、５００、２５０、１２５、６２．５、および３１．２５ｎｍ）を正のコントロールとして使用した。ＰＰＡＲαアッセイでは、ＧＷ５９０７３５（５０００、１６７０、５６０、１８５、６２および２１ｎｍ）を正のコントロールとして使用した。各アッセイで、０．１％ＤＭＳＯをコントロール溶媒として使用した。プレートを３７℃および５％ＣＯ２の加湿インキュベーター内で２０時間培養した。培養の後、細胞培地を処分し、細胞を１００μＬのルシファラーゼ検知リガンドで１５分間処理した。照度計（Ｖｉｃｔｏｒ２、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社製）を用いてプレートを分析した。平均相対光量単位（ＲＬＵ）および標準偏差を測定した。
結果を表３にまとめる。データは、ロシグリタゾン（５００ｎｍ）に対するＰＰＡＲγ活性の％レベル、またはＧＷ５９０７３５（２１ｎｍ）に対するＰＰＡＲα活性の％レベルで示される。
Figure 0006556621
予想通り、ロシグリタゾンおよびＧＷ５９０７３５は、それぞれＰＰＡＲγおよびＰＰＡＲα活性を高めた。ＴＨＩＡＡ誘導体のうち４つ（ＫＤＴ１００、ＫＤＴ００３３、ＫＤＴ０３６、およびＫＤＴ００３７）は、部分的ＰＰＡＲγアゴニストとしての挙動と一致してＰＰＡＲγ活性を５％以上高める一方、ＰＰＡＲα活性には効果を示さず、これらの化合物はＰＰＡＲγに特異なアゴニストであることが示唆される。予想外なことに、ＫＤＴ００３４およびＫＤＴ００３５は、ＰＰＡＲαおよびＰＰＡＲγ両方のアゴニストとして作用することが分かった。
上述の通り、前述のものは単に本発明の様々な実施形態を説明することを意図するものである。議論される特定の修正は、本発明の範囲の限定と解釈されるべきではない。様々な同等物、変更および修正が本発明の範囲から外れずに行われうることは当業者にとって明らかであり、そのような等価な実施形態は本明細書に含まれることが理解される。本明細書で引用されるすべての参照文献は、本明細書で完全に説明されたかのように組み入れられる。
参照文献
１．Berge J Pharm Sci 66:1 (1977)
２ Dahlberg J Sep Sci 33:2828 (2010)
３．Dahlberg J Sep Sci 35:1183 (2012)
４．Desai Inflamm Res 58:229 (2009)
５．Everard PLoS One 7:e33858 (2012)
６．Hall Phytochem 69:1534 (2009)
７．Khatib Food Chem 119:354 (2010)
８．Konda Arthritis Rheum 62:1683 (201０）
９．Ting J Am Soc Brew Chem 54:103 (1996)
１０．Tripp Acta Hort (ISHS) 848:221 (2009)

Claims (10)

  1. （１Ｓ，５Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−１−（４−メチルペンタノイル）−４−オキソシクロペント−２−エン−１−イル ３，３−ジメチルブタノアート （ＫＤＴ００３４）、および
    ３−ブチン−１−イル （１Ｓ，５Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−１−（４−メチルペンタノイル）−４−オキソシクロペント−２−エン−１−イル カルボナート（ＫＤＴ００３５）、
    からなるグループから選択されるテトラヒドロ−イソ−アルファ酸（ＴＨＩＡＡ）誘導体。
  2. ＴＨＩＡＡ誘導体を含む、ＰＰＡＲαとＰＰＡＲγ活性を両方とも高めるための組成物であって、
    前記ＴＨＩＡＡ誘導体は、（１Ｓ，５Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−１−（４−メチルペンタノイル）−４−オキソシクロペント−２−エン−１−イル ３，３−ジメチルブタノアート（ＫＤＴ００３４）、または３−ブチン−１−イル （１Ｓ，５Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−１−（４−メチルペンタノイル）−４−オキソシクロペント−２−エン−１−イル カルボナート（ＫＤＴ００３５）から選択される、組成物。
  3. 炎症を抑制する必要のある対象において炎症を抑制するための組成物であって、治療上有効な量の請求項１に記載のＴＨＩＡＡ誘導体を含む、組成物。
  4. 炎症を抑制する必要のある対象において炎症を抑制するための組成物であって、治療上有効な量の請求項２に記載の組成物を含む、組成物。
  5. その必要のある対象において糖尿病を治療するための組成物であって、治療上有効な量の請求項１に記載のＴＨＩＡＡ誘導体を含む、組成物。
  6. その必要のある対象において糖尿病を治療するための組成物であって、治療上有効な量の請求項２に記載の組成物を含む、組成物。
  7. ＰＰＡＲγ活性を高める必要のある対象においてＰＰＡＲγ活性を高めるための組成物であって、治療上有効な量の請求項１に記載のＴＨＩＡＡ誘導体を含む、組成物。
  8. ＰＰＡＲγ活性を高める必要のある対象においてＰＰＡＲγ活性を高めるための組成物であって、治療上有効な量の請求項２に記載の組成物を含む、組成物。
  9. ＰＰＡＲγ調節反応性の状態を治療する必要のある対象においてＰＰＡＲγ調節反応性の状態を治療するための組成物であって、治療上有効な量の請求項１に記載のＴＨＩＡＡ誘導体を含む、組成物。
  10. ＰＰＡＲγ調節反応性の状態を治療する必要のある対象においてＰＰＡＲγ調節反応性の状態を治療するための組成物であって、治療上有効な量の請求項２に記載の組成物を含む、組成物。
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US20110257074A1 (en) * 2008-12-10 2011-10-20 Metaproteomics, Llc Method for the purification of substituted cyclopent-2-en-1-one congeners and substituted 1,3-cyclopentadione congeners from a complex mixture using countercurrent separation
US20110117252A1 (en) * 2009-11-13 2011-05-19 Kalamazoo Holdings, Inc. Process for the preparation of tetrahydroisohumulone compositions
US20110117752A1 (en) 2009-11-18 2011-05-19 Kwon Taek Lim Method and system for etching a silicon dioxide film using densified carbon dioxide
EP2632448B1 (en) * 2010-10-30 2020-10-21 KinDex Pharmaceuticals, Inc. Cis 3,4-dihydroxy-2-(3-methylbutanoyl)-5-(-3-methylbutyl)-4-(4-methylpentanoyl)cyclopent-2-en-1-one derivatives, substantially enantiomerically pure compositions and methods

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