CN114272258B - 环状RNA circUbe2cbp的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了环状RNA circUbe2cbp的应用，属于生物医药技术领域。该环状RNA circUbe2cbp可应用在制备治疗或预防神经退行性疾病的药物方面，它可用于制备抑制β淀粉样蛋白的产生，也可用于治疗神经退行性疾病，特别是阿尔兹海默病。

Description

环状RNA circUbe2cbp的应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，特别是涉及一种新的环状RNA，并提供了它在改善神经系统的神经元损伤和认知损伤方面的应用。

背景技术

衰老是包括各种痴呆症在内的神经退行性疾病的主要危险因素。β淀粉样蛋白(Aβ)作为老年斑(SP)的主要成分，在包括阿尔茨海默病(AD)等神经退行性疾病的发病机制中发挥着重要作用。环状RNA(Circular RNAs,circRNAs)是一种新型的非编码RNA(ncRNAs)分子，由特殊的环状结构组成。环状RNA具有高度保守和组织特异性。研究发现，环状RNA在大脑中大量表达，并与AD等神经退行性疾病有关。例如，circRNA ciRS-7可以海绵吸附miR-7，从而降低泛素羧基末端水解酶L1(UCHL1)基因的表达，导致APP和β分泌酶的降解，提示ciRS-7可能参与了AD的病理生理过程。此外，Zhang等利用SAMP8小鼠模型发现，circRNA相关的ceRNA网络与Aβ清除(Hmgb2)和髓鞘功能(Dio2)有关。这些研究表明环状RNA可能参与了AD等神经退行性发病。然而，circRNA在该类疾病中的作用仍然不清楚。

SAMP8是一种快速老化相关小鼠模型，表现出与年龄相关的自发性神经退行性改变，包括大脑区域Aβ生成和清除异常、tau蛋白过度磷酸化、突触可塑性受损和神经元凋亡。因此该小鼠被认为是研究AD在内神经退行性疾病重要模型。研究发现，2月龄和6月龄SAMP8小鼠海马区均存在Aβ蛋白样免疫反应颗粒样结构(β-LIGS)，且随着月龄增加小鼠海马区Aβ沉积的数量和程度亦增加。

发明内容

本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种新的环状RNA circUbe2cbp，它可用于制备改善神经系统的神经元损伤和认知损伤的药物。

本发明的技术方案如下：

环状RNA circUbe2cbp在制备治疗或预防神经退行性疾病的药物方面的应用，它对应的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

环状RNA circUbe2cbp在制备治疗或预防痴呆症、特别是阿尔茨海默病的药物方面的应用。

环状RNA circUbe2cbp可应用在制备治疗或预防神经系统的神经元损伤或认知损伤的药物、抑制神经元凋亡的药物、制备抑制β淀粉样蛋白产生的药物、或者提高神经元突触结构可塑性的药物方面。

本发明包括一种含有环状RNA circUbe2cbp的药物组合物，它包括有环状RNAcircUbe2cbp的核苷酸序列组以及药学上可接受的载体或辅料。

药物组合物中的载体包括但不限于pHBAAV-CMV-MCS-T2A-ZsGreen载体或EF-1aF/GFP&Puro慢病毒载体等。

本发明包括一种含有circUbe2cbp的核苷酸序列组的病毒或质粒。

本发明的药物组合物可以制成液体或固体制剂，也可以制成注射或口服制剂。

本发明的环状RNA circUbe2cbp可用于制备抑制β淀粉样蛋白的产生，也可用于治疗神经退行性疾病，特别是阿尔兹海默病。

在本申请中，我们发现环状RNA circUbe2cbp在快速老化小鼠(aging-accelerated mouse prone 8,SAMP8)海马表达水平显著下调。Morris水迷宫(MWM)和跳台试验结果表明，过表达circUbe2cbp可延长平台象限时间和跳下平台的潜伏期，减少下跳的错误次数。新物体识别实验结果表明，过表达circUbe2cbp可增加探索新物体的时间，提示过表达circUbe2cbp可改善SAMP8小鼠认知功能。TUNEL检测结果显示，过表达circUbe2cbp组神经元凋亡较对照组明显减少。高尔基实验结果显示，与对照组相比，过表达circUbe2cbpp组海马的分支数量、突触棘密度和分支长度均明显改善，提示过表达circUbe2cbp可减轻神经元损伤，增强突触形态可塑性。这表明circUbe2cbp可能是包括AD在内神经退行性疾病的新靶点。

附图说明

图1是环状RNA circUbe2cbp在SAMP8小鼠中的表达情况；

图中，A：circUbe2cbp在小鼠各组织器官中的表达情况。B和C：circUbe2cbp在3和6月龄小鼠海马中的表达情况。D：RNase酶消化实验检测circUbe2cbp的环形结构。

图2是环状RNA circUbe2cbp对SAMP8小鼠行为学及Aβ含量的影响；

图中，A：实验时间表；B：circUbe2cbp过表达腺相关病毒(AAV)注射后的表达情况；C：Morris水迷宫检测小鼠的学习记忆能力。D和E:跳台实验检测小鼠记忆能力；F：新物体实验检测小鼠记忆能力；G：circUbe2cbp过表达慢病毒(LV)感染N2a细胞情况；H：Elisa试剂盒检测circUbe2cbp过表达对N2a细胞Aβ含量的影响；I：Western blot实验检测circUbe2cbp过表达对SAMP8小鼠海马Aβ表达的影响。

图3是过表达circUbe2cbp抑制SAMP8小鼠海马神经元凋亡、提高神经元突触结构可塑性；

图中，A和B：TUNEL实验检测circUbe2cbp过表达对SAMP8小鼠海马神经元凋亡的影响。C～E：高尔基染色实验检测circUbe2cbp过表达对SAMP8小鼠海马神经元突触长度和分枝数的影响；F和G：高尔基染色实验检测circUbe2cbp过表达对SAMP8小鼠海马神经元突触棘密度的影响。

具体实施方式

通过以下实施例对本发明的检测方法作进一步的说明，但这些实施例不对本发明构成任何限制。

实施例1：circUbe2cbp在SAMP8小鼠中表达降低

实验方法：

1、RT-PCR实验：

(1)组织样本的总RNA抽提：

1)实验准备：将玻璃手持匀浆器洗净，放入酸缸中泡酸后清水洗15遍，和手术剪及镊子一同放入灭菌锅高压灭菌。将氯仿、异丙醇和75％乙醇放入冰箱4℃预冷。准备无核酶耗材。

2)称量小鼠体重，准备1.5mL离心管并做好标记，将小鼠摘眼球取血备用。直至小鼠血液流尽致死，用手术剪将其头部剪下，冰上剥离，取出海马，放入1.5mL离心管中，冰上暂存，实验结束后，将组织移至-80℃保存。取出部分海马放入小号的手持匀浆器中，加入800μL Triozl裂解液，并将匀浆器置入冰上，往上下方向和旋转匀浆器，直至组织完全破碎。将Triozl裂解液倒入2mL无核酶离心管中。

3)按200μL氯仿/1mL Trizol比例往上述EP管中逐一加入氯仿，关上盖子，用力上下摇晃EP管15s，室温静止10min。准备1套1.5mL的无核酶EP管并做好标记。

4)将EP管放入低温离心机中离心，12000rpm 4℃离心15min，离心结束后将样品轻轻取出，此时液体分为三层，RNA为最上层水相，大概400μL。用200μL移液枪分3次吸取上层水相至另一个标记好的离心管中，切勿吸到下层成分。

5)往上述EP管中加入等体积的异丙醇，关好盖子后上下颠倒轻轻混匀，室温静置10min，使RNA充分沉淀。

6)放入低温离心机中离心，12000rpm 4℃离心10min。离心后，缓慢倒掉上清，底部白色沉淀即为RNA沉淀。

7)往EP管中加入1mL预冷的75％乙醇，使用涡旋仪振荡至沉淀飘起，洗涤沉淀中的有机相；放入离心机中，4℃，12000rpm离心10min，轻轻倒掉上清。

8)将EP管倒扣在桌面上，室温干燥大约10min，至75％乙醇几乎完全挥发。

9)加入适量(20-50μL)无核酶水溶解RNA沉淀，移液枪吹打混匀或者轻轻震摇使沉淀完全溶解。

10)用Nano Drop 1000核酸测定仪测定RNA浓度。正式测定前取无核酶水清洗进样孔。测量时，每个样本测两次取平均值，注意N260/N280的数值，在1.8-2.0之间。记录样本RNA浓度。总RNA样本放入-80℃保存备用。

(2)mRNA反转录：准备200μL的无核酶EP管，并做好标记。根据RNA浓度，计算1μgRNA的体积，取出RNA置于EP管中，加入无核酶水使总体积达8μL，每个样本加入2μL反转录试剂，三者共10μL体系，轻轻涡旋混合后离心，置于PCR机中，设置程序25℃、5min，42℃、15min，85℃、5s，12℃、10min变性，变性完成后立即放于冰上。将得到的cDNA放入-20℃保存。

(3)q RT-PCR：引物由上海生工生物公司设计合成上、下游引物序列。将引物从冰箱拿出来，离心后，按照说明书加入适量的无核酶水。将浓度稀释到10mM后分装，-20℃保存备用。PCR反应体系及引物序列见下表，每个样本设两个复孔，β-actin作为内参。

表1PCR反应体系

表2RT-PCR引物序列

(4)使用LC480Ⅱ实时荧光定量PCR仪进行PCR扩增。加完样品后，将PCR-96孔板用封膜封好，2000rpm离心5min后将板放置于LC480 PCR仪中，设置计算机PCR程序如下：程序1：Activation:95℃，10min；程序2：PCR:95℃，15s；60℃，30s，50cycles；程序3：Meltingcurves:95℃，15s；60℃，60s；95℃，continuous；程序4：Cooling:40℃，30s。反应结束后，保存实验，计算样本CP值，用PDF导出数据。

(5)采用2^-△△ct法分析各个样本中mRNA的表达情况。

2、RNase酶消化实验：具体参考试剂盒说明书进行(广州吉赛生物科技有限公司)。具体如下：将培养的N2a细胞收集消化后提取总RNA，按表3体系进行RNase酶37℃消化30min。消化后采用RT-PCR实验检测circUbe2cbp表达。

表3RNase酶消化体系

实验结果：我们首先采用RT-PCR检测了circUbe2cbp在小鼠不同组织器官中的表达，结果发现，circUbe2cbp在海马中表达较高，在心肝脾肺肾等器官中的表达较低(图1A)。随后我们检测了circUbe2cbp在不同月龄SAMP8海马中的表达情况，发现同月龄对照小鼠SAMR1相比，circUbe2cbp在3和6月龄SAMP8小鼠海马中表达显著降低(图1B和C)。接下来，我们采用RNase酶消化实验检测了circUbe2cbp的环形结构，结果发现circUbe2cbp要比线性的GAPDH更耐RNase酶(图1D)，提示circUbe2cbp耐RNA酶消化。

实施例2、过表达circUbe2cbp可提高SAMP8小鼠的认知功能

实验方法：1、circUbe2cbp AAV9病毒构建：含circUbe2cbp的pHBAAV-CMV-MCS-T2A-ZsGreen质粒载体购于汉恒生物科技有限公司。将该质粒转染给293T细胞。72h后收集细胞上清，采用heparin-agarose柱子纯化病毒。病毒颗粒纯化浓缩后，分装于病毒管中，液氮保存备用。

2、海马定位注射circUbe2cbp AAV9病毒：小鼠水合氯醛麻醉后，固定于脑立体定位仪上，注射坐标为：前囟后1.7mm，旁开2.5mm，深度2.25mm。按照0.1μL/min的速度缓慢注射AAV颗粒，留针20min使溶液充分弥散。海马定位注射后，连续5d按0.2百万单位/d腹腔注射青霉素钠盐，防止术后感染。

3、Morris水迷宫：

(1)适应性训练：水迷宫加水并设置水温21℃，设置ANYmaze行为分析系统，把水迷宫分成四个象限，以顺时针方向命名SW、SE、NE、NW，设置动物颜色，实验总时间60s；软件记录参数包括小鼠游泳的平均速度，游泳的距离，每个象限的停留时间，距离平台的平均距离，首次登上平台需要的时间(逃避潜伏期，escape latency)，游泳的轨迹等；放置平台，并使水面略高于平台一个指节高度。在实验过程中尽量保持房间的安静和黑暗，避免外界因素干扰到小鼠。实验前一天，对所有小鼠进行适应性训练，筛除溺水小鼠或游泳速度过慢的虚弱小鼠。

(2)定位航行实验：所有实验小鼠依次按顺序从四个象限，逐个象限将小鼠头朝水迷宫壁放入水中，同时启动ANYmaze软件开始记录并跟踪小鼠的游泳轨迹；对60s内未能爬上平台的小鼠，使用木棍进行引导，慢慢引导小鼠爬上平台，并停留10s；对于60s内找到的平台的小鼠记录，让它在平台上停留10s；结束后用干布擦干小鼠。所有小鼠均按照统一的象限顺序和位置入水，连续训练5天。

(3)空间探索实验：实验第6天，撤去平台，并把小鼠从平台象限的对角象限放入水中，检测小鼠通过平台象限寻找平台的时间，到达平台的平均距离等参数，检测小鼠对平台位置的记忆能力，评价不同处理组对小鼠记忆与学习认知能力的影响。

4、跳台实验：实验第1d，第一天，将小鼠放在安全区中，若小鼠跳下平台，立马接通电源给予小鼠电击5s，随后协助小鼠回到安全区。观察5min，记录小鼠跳下平台所需时间为起始潜伏期和跳下平台的次数为错误次数。第2d，将小鼠放在安全区中，观察5min，记录小鼠跳下平台的潜伏期和跳下平台的错误次数，若小鼠没有跳下平台则记录潜伏期为300s，根据潜伏期和错误次数检测小鼠的记忆能力。

5、新物体识别实验：

适应性训练：正式实验开始前三天，在安静的实验室放置一个50cm的正四方体不透明黑色玻璃敞箱，称为旷场，每天将小鼠放入旷场中自由活动20min，使其适应环境。准备多个大小均匀、形状不等，颜色相同的物体。

正式实验：第一天，将两个形状大小颜色均相同的物体放入旷场中，标记为旧物体，再将每只小鼠依次单独放入旷场中活动10min，观察并记录小鼠探索两个物体的时间。每只小鼠结束试验后，将旷场和物体用75％乙醇擦拭，防止气味对实验造成的影响。第二天，将其中一个旧物体换成另一个颜色大小相同但形状不同的物体，标记为新物体。将新、旧两个物体放入旷场中，同时放入小鼠，每只小鼠观察10min，记录小鼠分别探索新、旧两个物体使用的时间。结果以分辨指数(distinguish index，DI)来表示，分辨指数计算公式为：DI＝N/(N+F)100％，式中N为探索新物体所用的时间，F为探索旧物体所用的时间。

2.1Morris水迷宫实验结果

为了明确circUbe2cbp对SAMP8小鼠学习记忆能力的影响，我们首先采用pHBAAV-CMV-MCS-T2A-ZsGreen载体构建了circUbe2cbp AAV9病毒，并将该病毒注射入SAMP8小鼠海马中，6周后，采用RT-PCR检测了circUbe2cbp的表达情况，结果发现，与空白病毒组相比，过表达circUbe2cbp组小鼠海马circUbe2cbp的表达显著升高。此外，我们通过设计针对circUbe2cbp跨环接口(back splice site)的探针，采用Northern blot检测了circUbe2cbp的表达情况。

结果发现，与空白病毒组相比，过表达circUbe2cbp组小鼠海马circUbe2cbp显著上调。这些结果提示，circUbe2cbp-GFP AAV9病毒可有效提高小鼠海马circUbe2cbp。

随后，我们采用Morris水迷宫检测了小鼠的学习记忆能力，结果发现，与空白病毒组相比，circUbe2cbp过表达组小鼠可显著提高平台象限时间，提示circUbe2cbp过表达可提高SAMP8小鼠的学习记忆能力。

2.2跳台试验结果

跳台实验可检测小鼠短期记忆保留能力。由图2D和E所示，与空白病毒组相比，circUbe2cbp过表达组小鼠的下跳的潜伏期显著延长，下跳次数显著减少，提示circUbe2cbp可显著提高SAMP8小鼠记忆保留能力。

2.3新旧物体实验结果

随后，我们采用新旧物体实验检测了小鼠认知能力。由图2F所示，与空白病毒组相比，circUbe2cbp组小鼠探究新物体的时间显著延长，而探究旧物体的时间显著缩短。提示circUbe2cbp可提高小鼠认知能力。

综上，上述实验表明，circUbe2cbp可显著提高SAMP8小鼠的认知功能。

实施例3、过表达circUbe2cbp可抑制N2a细胞和SAMP8小鼠海马Aβ含量

实验方法：

1、过表达circUbe2cbp慢病毒构建及转染：含有circUbe2cbp的EF-1aF/GFP&Puro质粒购于上海吉马制药有限公司。病毒颗粒纯化浓缩后，分装于病毒管中，液氮保存备用。使用时，将冻存的病毒颗粒放于冰块中溶解，加入N2a细胞中，24h后更换培养基，3～5d后收集细胞进行实验。

2、Western blot实验：

1)检漏：将制胶板充分洗净后组装至制胶架上，用喷壶在制胶板中加满双蒸水，10min后观察制胶板是否漏水，确认不漏水后将水倒掉将制胶架倒扣晾干。

2)制胶：按表3的配比在干净的小烧杯中配制下层胶，加完试剂后迅速搅拌混匀，用移液枪将混合液缓慢加入到制胶板中，避免加入气泡，注意不要加满，液面应在小板下方4cm处。为了压平下层胶，轻轻加入双蒸水至满。洗梳子并晾干，35min后下层胶凝固，弃去上层双蒸水。配制上层胶并加入制胶板中，插入梳子。静置30min待其凝固。

3)上样：拔出梳子，将配胶板装入电泳槽中，往槽内加满1×电泳液，使用10μL移液枪按蛋白定量的上样体积加入蛋白样本。

4)电泳：上样结束后，在外槽加电泳液，按正负极插好电源。设置电泳程序：程序1:60V，30min；程序2:110V，100min。

5)半干转转膜：提前准备NC膜、厚滤纸泡在半干转液中活化5min。在半干转仪器中央，铺上湿润的厚滤纸，厚滤纸上铺上NC膜。电泳结束后，根据蛋白分子量按照Marker的位置裁下目的蛋白的胶，平行转移至NC膜上。在过程中，加入半干转液防止NC膜晾干，并小心赶走NC膜和凝胶之间的气泡。将另一个厚滤纸压在凝胶上，盖上半干转仪的盖子。接通电源，设置恒压15V，35min。

6)封闭：转膜结束后，用镊子夹出NC膜，用TBST在摇床上洗3遍后放入封闭液中，摇床上封闭1h。

7)一抗孵育：按一抗说明书比例用一抗稀释液稀释，混匀后放入孵育盒中，再放入NC膜4℃孵育过夜。注意避免膜上有气泡。

8)二抗孵育：4℃过夜后，将NC膜取出，复温30min。摇床上用TBST快速摇晃洗3次，每次5min。按1:10000的比例稀释二抗，将二抗和NC膜放入二抗孵育盒中，摇床上孵育1h。随后用TBST快速摇晃洗3次，每次5min。注意，使用二抗时和使用二抗后，全程避光。

9)显色：将NC膜夹在滤纸中吸干，用EPSON扫描仪扫描，保存图像，用Image J软件对蛋白条带进行灰度分析，以GAPDH作为内参对照。

表4聚丙烯酰胺分离胶及浓缩胶配方

实验结果：如图2G和H所示，与空白病毒组相比，过表达circUbe2cbp可显著抑制N2a细胞Aβ表达。为了进一步明确circUbe2cbp对Aβ含量的影响，我们采用EF-1aF/GFP&Puro慢病毒载体构建了circUbe2cbp过表达慢病毒，采用western blot检测了过表达circUbe2cbp后SAMP8海马Aβ含量。

结果表明，circUbe2cbp过表达可显著抑制SAMP8海马Aβ水平。

实施例4、过表达circUbe2cbp抑制SAMP8小鼠海马神经元凋亡、提高神经元突触结构可塑性

实验方法：

1、高尔基实验：

(1)组织制备：动物取材前深度麻醉，从颅骨中迅速取出动物的脑，操作时必须非常小心避免损伤或压迫组织。用双蒸水快速清洗脑组织表面的血迹，将脑组织放入提前24小时混合好的A溶液、B溶液混合的染色液中，每个脑组织至少需要5倍体积的AB混合溶液，浸泡24小时后更换一个AB混合液，并连续浸泡14天，避光保存，AB液体不能与金属接触。14天后，更换5倍体积C溶液；24小时后再次更换C溶液，并连续浸泡3天到1周后可用于切片。

(2)切片和染色：

1)切片：避光条件下，将脑组织固定于震动切片机上，调节合适的振幅和切片速度防止，振幅过大速度过快组织碎裂，或速度过大振幅过小压坏组织，在PBS溶液中把脑组织连续切成100μm的脑片；将脑片收集与载玻片上，滴加少量C溶液浸泡5min后，吸干C溶液，并用纸巾吸尽脑组织上的C溶液；最后，脑片避光自然风干后可用于染色，切好的脑片可在常温下最多保存3天。

2)染色：脑片先用双蒸水洗两次，每次4min；染色液的配制，将D溶液、E溶液、双蒸水按1：1：2的比例混合，轻轻滴在脑片上，染色10min；用双蒸水冲洗切片两次，每次4分钟，每次更换新的双蒸水；

3)脱水透明：在50％，75％和95％的乙醇中对切片进行脱水，每个浓度梯度脱水4分钟；然后在无水乙醇中对切片进行脱水，4次，每次4分钟；在二甲苯中透明，3次，每次4分钟，最后迅速用中性树脂封片剂进行封片，吸取中性树脂封片时注意避免气泡。

4)数据统计，使用image J软件，Neuron J插件进行高尔基图像神经元处理，识别神经元形态并测量长度，对脑片图像CA1区海马神经元进行神经元二级分支数量、分支长度进行统计，比较各组的神经元的差异；使用image J计数功能，数树突棘数量，以及长度，统计树突棘密度。

2、TUNEL实验：TUNEL试剂盒购于美伦生物科技有限公司。具体方法按照说明书进行。具体如下：组织石蜡切片制作并脱蜡至水后(具体方法按实施例3中方法进行)用Proteinase K工作液在37℃孵育组织20min。PBS漂洗2次。制备TUNEL反应混合液,处理组用50μl TdT+450μl荧光素标记的dUTP液混匀；而阴性对照组仅加50μl荧光素标记的dUTP液,阳性对照组先加入100μl DNase 1,反应在25℃×10min。玻片干后,加50μl TUNEL反应混合液于标本上,加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃×1h。8.PBS漂洗3次；可以加1滴PBS在荧光显微镜下计数凋亡细胞(激发光波长为500nm,检测波长为565nm)；玻片干后加50μlconverter-POD于标本上,加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃×30min。11.PBS漂洗3次；在组织处加50～100μlDAB底物，反应15～25℃×10min；13.PBS漂洗3次；拍照后再用苏木素或甲基绿复染,几秒后立即用自来水冲洗。梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。加一滴PBS或甘油在视野下,用光学显微镜观察凋亡细胞(共计200～500个细胞)并拍照。

实验结果：

TUNEL实验结果表明，与空白病毒组相比，circUbe2cbp组小鼠海马神经元的凋亡率显著降低。

此外，高尔基实验结果表明，circUbe2cbp了显著提高小鼠突触分枝数和长度以及突触棘密度，这些结果提示过表达circUbe2cbp抑制SAMP8小鼠海马神经元凋亡，提高神经元突触结构可塑性。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明保护范围之内。

序列表

<110>徐州医科大学

<120> 环状RNA circUbe2cbp的应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1009

<212> RNA

<213> 人工序列

<400> 1

TGGGCCAGAT GAAGGAGGGA TGCACCTGGA CATTTCCATA ACGCCCACCT CTCTTTTGGT 60

GAGAACCCCT GACGGCTGCA CCGAGATCCG ACTTCCAGCA GGGGTCAGAC TTGTACCTTC 120

CTCGTGTGGC GGGCTGCAGT ATATCAGTGG CGATGGTTTA CATCTGCGCT TGCGGGTCCA 180

GGCTGAATCC AGCCCACAGC CGATTTCAGT GTTTAATCAA AGCTTGCAAG CCCAAGAATG 240

TTGCACCTTT TATTGCCAGT CCTGTGGTGA AGTCACGATA AAGGACAGGA AACTCCTCAG 300

GGTGCTCCCC CTGCCCAGTG AGAACTGGAG CGCTCTGGTC GGAGAGTGGT GCTGCCATCC 360

CGACCCCTTT GCTAATAGGC CTCTTCATCC GAGAGAAAAT GACTGTTTTA TTGGGGACTC 420

TTTCTTCTTA GTGAATTTGA AAAGTGATTT GGAGCAGGAA CCAAAAGCAA ATACCAAAGT 480

CATTTGTAAG CGTTGCAAGG TAACGTTGGG AGAGACCATG TCATCAGAAA CAACCAAATT 540

TTACATGACA GAGGTAATTA TCCGGCCATC TGAGGGAAGT TTTCCTAACA TACCAAGGTC 600

TCAGTTCCTT CAGAGCATTA TTGCCCAGTG CCTGGTGGAG CTCTCCTCTG CTAGAAGTAC 660

TTTCAGATTC ACGATTCAAG GTCAGGATGG CAAAGTGTAC ATCTTGCTCT GGGTTTTGAA 720

CTCAGACAGT TTGGTGATCG AACCTCTGAG AAGTTCCAGT TGTAGCAGGA AGTTCCCGCT 780

GTTGGAAAGT TCCTTGGAAG CTGGCTCTGG CTCTGCCTGG AATGCCATCA AAGTCCTCTA 840

CCAGCCCTGT ATCAAAAGCA GGAATAAAGA GCTTGCTAGC TCCTGGGAAG GTGACATCAG 900

CGTCCACCCT TTAACCCTGC CCTCTGCAAC CTGTTTGGAG CTGCTGCTAA TACTATCCAG 960

GAACAATGCC TCCCTGCCTC TGTCCCTTCG CCAAATGAAT TCCTTCCAG 1009

Claims (3)

1.环状RNA circUbe2cbp在制备治疗或预防老年痴呆中神经系统的神经元损伤或认知损伤的药物方面的应用，它对应的DNA序列如 SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述环状RNA circUbe2cbp可以抑制神经元凋亡。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述环状RNA circUbe2cbp可以提高神经元突触结构可塑性。