CN106008650A

CN106008650A - 一种齐墩果烷衍生物

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Publication number: CN106008650A
Application number: CN201610329985.1A
Authority: CN
Inventors: 张奕华; 黄张建; 徐晓军; 牟伊
Original assignee: China Pharmaceutical University
Current assignee: China Pharmaceutical University
Priority date: 2016-05-13
Filing date: 2016-05-13
Publication date: 2016-10-12
Anticipated expiration: 2036-05-13
Also published as: CN106008650B

Abstract

本发明涉及药物化学和药物治疗学领域，涉及一种齐墩果烷衍生物，具体涉及一种γ‑谷氨酰转肽酶(GGT)选择激活的CDDO‑Me前‑前药I的制备方法以及含有它们的药物组合；该类化合物可用于二型糖尿病引起的慢性肾病。

Description

一种齐墩果烷衍生物

技术领域

本发明涉及药物化学和药物治疗学领域，涉及一种齐墩果烷衍生物，具体涉及一种γ-谷氨酰转肽酶(GGT)选择激活的CDDO-Me前-前药设计、合成及抗糖尿病肾病活性评价。该类化合物可用于二型糖尿病引起的慢性肾病。本发明还涉及这类化合物的制备方法以及含有它们的药物组合。

背景技术

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病常见的并发症之一，发生率高达20-40％。在世界范围内，糖尿病影响着超过3亿人民。糖尿病患者的数量将会继续增加，特别是像中国和印度这样人口老龄化的国家。例如，在中国，年龄超过65岁占总人口比例不到7％。截至2030年，这个比例将会超过20％。年龄的增长和城市化导致了糖尿病和其并发症的产生。

齐墩果酸(oleanolic acid，OA)及其衍生物是一类重要的五环三萜化合物，具有抗炎、抗肿瘤和抗病毒等多种生物活性。通过对OA进行结构改造，合成了A环含α-氰基-α，β-不饱和酮(α-cyano-α，β-unsaturated ketone，CUK)的衍生物CDDO-Me。该化合物显示了极强的生物活性，已对其进行了多种疾病的临床试验。遗憾的是，在治疗糖尿病慢性肾病(diabetic nephropathy，DN)的III期临床试验中，发现CDDO-Me对心脏有严重毒副作用。其后不久，经过方案改进，治疗DN的临床研究重新在日本开展。尽管临床研究还在继续，但CDDO-Me的安全性已受到严重关注。因此，保留或增强CDDO-Me的药效，降低其毒副作用是一个亟需解决的挑战性难题。

α，β-不饱和酮是许多活性天然产物和化学合成小分子中的药效团，可以作为迈克尔受体与体内多种生物大分子亲核性基团(如半胱氨酸残基的巯基)发生加成反应，通过共价结合，调节细胞内众多信号通路，发挥及其广泛的生物学活性及疾病治疗作用。研究表明，CDDO-Me通过激活ARE-Nrf2-Keap1信号通路产生抗炎活性，究其分子机理，主要是CDDO-Me的A环α-氰基-α，β-不饱和酮(α-cyano-α，β-unsaturated ketone，CUK)与Keap1蛋白BTB区域151位CYS的巯基发生迈克尔加成反应所致。

γ-谷氨酰转肽酶(gamma-glutamyl transferase，GGT)是体内谷胱甘肽代谢的相关酶之一，主要分布在肾脏组织。由于GGT具有组织分布特异性及能够选择性地水解谷氨酰胺键的特点，故其常被用于肾靶向的前药设计。然而，一般对α，β-不饱和酮保护的前药策略并不适用于CDDO-Me这样一个具有CUK结构的化合物。有鉴于此，我们采用前-前药(pro-prodrug) 策略，用4-谷氨酰胺苄基保护CUK的1，4加成物即前药1中的烯醇羟基，得到了可以在肾脏部位选择性释放CDDO-Me的前-前药2，并对其进行了较为深入的生物活性评价。

发明内容

本发明公开了一种齐墩果烷衍生物，其特征在于：一种γ-谷氨酰转肽酶(GGT)选择激活的CDDO-Me前-前药设计、合成及抗糖尿病肾病活性评价。药理实验证明，该类化合物具有良好的抗糖尿病活性，因此，它们可用于预防和治疗糖尿病肾病。

本发明公开了一种齐墩果烷衍生物，其特征在于：通式I所示的化合物或其旋光异构体，对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，或其药学上可接受的盐或酯：

其中：

R1代表氢原子，C1-C10直链或直链烷基，或者(C1-C10直链或支链亚烷基)-Q，其中Q代表羟基或卤素；

R2代表氢原子、或C1-C10直链或支链烷基、或者取代芳香基，Y代表氧(O)或硫(S)；

R3代表氢原子或C1-C10直链或支链烷基；

式I中标明的两个手性中心(分别用*1和*2表示)为R构型或S构型。

进一步地，通式1所示的化合物，其特征在于：

R1代表氢原子、甲基、乙基或丙基；

R2代表氢原子、甲基或乙基，Y代表氧原子；

R3代表氢原子或甲基；

式I中手性中心*1为S构型，手性中心*2为R构型；

具体来说，通式I所示化合物优选自下列化合物：

1-羟基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)-双烯-28-羧酸甲酯(化合物编号：I₁，下同)：

1-甲氧基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)-双烯-28-羧酸甲酯(I₂)

1-乙氧基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)-双烯-28-羧酸甲酯(I₃)

下面药理实验中化合物的代号等同于此处代号所对应的化合物。

本发明的另一目的在于提供本发明通式I所述化合物的制备方法，其特征为在于，包括如下步骤：

以Fmoc-Glu-OMe(II)在2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1，2-二氢喹啉(EEDQ)存在下与4-氨基苄醇(III)缩合，生成酰胺化合物(IV)。IV在三溴化磷的作用下，得到溴代物V。与此同时，CDDO-Me经DMF/碱处理，得到烯醇化合物VI。烯醇VI与化合物V经醚化反应，得到烯醇醚(VII)。最后脱去VII的Fmoc保护基，得到目标化合物I；合成路线如下：

这些化合物可按照常规分离技术加以纯化。

本发明的再一目的是提供本发明化合物I在制备预防或治疗糖尿病肾病中的应用。

本文采用前-前药策略，对CDDO-Me药效团CUK进行保护，再在肾脏高表达的GGT作用下释放CDDO-Me，这种策略好比在CDDO-Me的A环药效团按上一个保护面具，在一定程度上掩盖和降低了其对非靶部位的攻击性，但在靶部位则暴露出活性药效团

本发明化合物I抗糖尿病肾病的药理实验方法与结果如下：

实验方法：10周龄的db/db 2型糖尿病小鼠适应性饲养一周，自由饮食饮水，随机分组，分为模型组(Model组)，CDDO-Me(0.6mg/kg)组，I₁(1mg/kg)组，I₁(2mg/kg)，每组6只，6只C57BLKs/Jdb/m作为正常对照组。每日上午腹腔注射给药，正常组和模型组给予等容量的蒸馏水，连续12周。实验开始所有小鼠称重编号，每两天称重记录体重，共12周。小鼠每三只一笼，每两天记录每笼饮水量和进食量。每日观察各组小鼠毛色、神态、尿量和行为活动等。在实验11周，禁食不禁水12小时后，采用欧姆龙血糖仪HEA-232型，欧姆龙血糖试纸HEA-STP30，测定每只小鼠的12小时空腹血糖。在实验进行至11周时，用代谢笼分别收集每只小鼠24小时尿液标本。所有小鼠于前一晚7点开始禁食，饮水不限，24小时后结束尿液收集，准确称量每只鼠的尿液体积，高速离心取上清液用于尿蛋白，尿肌酐等含量测定，并于-78℃保存尿液样本。实验12周，将所有实验动物用10％水合氯醛麻醉，眼球取血处死。剪断静脉，用头皮针插进左心室，用PBS缓慢冲洗，直到流出的液体由红色变为无色，在换成多聚甲醛固定组织。用手术刀片轻轻切下肾脏两端的组织完整薄切片(参照TEM 样品制备方法)，切片迅速保存于3％戊二醛溶液中，以备电镜检查。摘取其它重要脏器如心、肝、肺等，3只保存于4％甲醛溶液中，3只用液氮速冻，于-78℃冰冻保存。

表1中列出了本发明化合物I₁对小鼠体重和饮水体重的影响：

表1.本发明化合物I对小鼠体重和饮水进食的影响(n＝6，)

Data for body weight are mean±SEM.Statistic significance wascalculated with One-way ANOVA，Tukey’s test.*，p＜0.05，**，p＜0.01，***，p＜0.001.

表2中列出了本发明化合物I₁对小鼠血浆尿酸(UA)、尿素氮(BUN)和肌酐(Creatinine)水平的影响：

表2.本发明化合物I₁对小鼠血浆尿酸(UA)、尿素氮(BUN)和肌酐(Creatinine)水平的影响(n＝6，)

表3中列出了本发明化合物I₁对小鼠尿白蛋白对肌酐比值(urine albumin tocreatinine ratios，UACR)的影响：

表3中列出了本发明化合物I₁对小鼠UACR的影响

糖尿病肾病是糖尿病损害肾脏而发生的病理改变，是糖尿病最常见的微血管病变之一。随着糖尿病发病率逐年上升，糖尿病肾病已成为导致终末期肾病的主要原因，严重影响了人类的生命健康及生存质量。在上述体内实验完成后，取动物的肾脏切片后进行不同的组织染色(HE，Masson以及PAS)，并采用电镜检测肾脏组织的微结构，以考察化合物I₁以及CDDO-Me对肾脏组织的保护作用。

HE染色(Figure 1)

与正常组相比，模型组肾小球中重度纤维化，纤维化处细胞数明显减少，弥漫性肾小球系膜区增宽，毛细血管壁增厚明显，结构不清；球囊壁增厚及球囊黏连，并可见肾小管扩张伴上皮细胞空泡样改变，肾间质纤维化并伴明显炎性细胞浸润。CDDO-Me组肾小球纤维化程度，肾小球系膜增厚，毛细血管壁增厚，球囊壁增厚及球囊黏连均有所改善；肾小管中度扩张伴上皮细胞空泡样改变，间质轻中度纤维化伴轻度炎性细胞浸润未见明显改善。I₁的药效与CDDO-Me组基本相近。结论：病理切片数据显示，I₁对糖尿病小鼠的肾脏结构具有与CDDO-Me接近的保护作用。

Masson染色(Figure 1)

在糖尿病肾病发病过程中，随着疾病的发展，肾小球会出现不同程度的纤维化病变，影响肾小球的结构和正常生理功能，我们通过Masson染色评价肾脏组织的纤维化病变的情况。模型组：肾小球中被苯胺蓝所染的纤维化组织重度堆积，表明纤维化程度严重。CDDO-Me组及I₁处理的db/db小鼠肾小球Masson所染的纤维化组织显著减少，表明，CDDO-Me和化合物I₁均能有效改善糖尿病小鼠肾脏的纤维化病变，其中I₁(1mg/kg)与CDDO-Me相当，I₁(2mg/kg)对纤维化病变的改善略优于CDDO-Me组。

PAS染色(Figure 1)

在糖尿病肾病发展过程中，糖蛋白会在肾小管和毛细血管沉积，加剧肾脏的炎症反应，我们通过PAS染色观察肾脏组织系膜基质、基底膜形态改变。模型组：肾小球与肾小管细胞内大量糖原蛋白沉积，可见结节。CDDO-Me与I₁低剂量组均明显改善肾小球与肾小管细胞内糖原蛋白沉积，仍可见少量结节，I₁高剂量组：肾小球与肾小管细胞内只有少量糖原蛋白沉积，不见结节。肾脏组织的PAS染色结果表明，化合物I₁和CDDO-Me均能有效改善糖尿病小鼠肾脏的糖原沉积，其中I₁(1mg/kg)与CDDO-Me相当，I₁(2mg/kg)对糖原沉积的降低优于CDDO-Me组。

电镜下小鼠肾脏变化(Figure 2)

足细胞位于肾小球毛细血管壁最外层，其与基底膜和内皮细胞共同组成肾小球血液滤过屏障。足细胞在维持肾小球正常形态结构和滤过膜选择通透性中起重要作用。在糖尿病肾病发生过程中，足细胞有明显的形态变化，发生融合或者脱落，最终导致球囊粘连和肾小球硬化，影响肾脏的基本功能。为此考察了化合物I₁和CDDO-Me组电镜下小鼠肾脏变化。

与正常组相比，模型组肾小球基底膜明显增厚，足细胞足突广泛融合、脱落明显，基底膜结构不完整。CDDO-Me：肾小球小球基底膜轻度增厚，足细胞足突局部融合，结构较完整。I₁(1mg/kg)组：肾小球基底膜轻度增厚，足细胞足突偶见局部融合，结构尚可。I₁(2mg/kg)组：肾小球基底膜轻度增厚，足细胞足突偶见局部融合，结构基本完整。电镜结果表明，I₁和CDDO-Me均能有效缓解糖尿病肾病基底膜增厚的情况，改善足细胞的融合和脱落，保证使肾脏能够更好的发挥滤过功能。

I₁和CDDO-Me对肾上皮细胞(293T)和心肌细胞(H2C9)的毒性试验

由于GGT表达的差异，I₁在心脏组织和肾脏释放原药CDDO-Me应该存在较大差异。而高浓度的CDDO-Me存在细胞毒作用，因此我们通过MTT试验评价I₁和CDDO-Me对心肌细胞和肾上皮细胞毒性差异。结果表明，I₁对H2C9和293T的毒性均远低于CDDO-Me。因293T细胞有GGT表达，因此在293T细胞中，I₁最终会转化为CDDO-Me，从而产生细胞毒作用，但I₁释放CDDO-Me需要时间，因此I₁对293T细胞的毒性也低于CDDO-Me。I₁对H2C9中的毒性极低，可能心脏细胞中缺乏GGT酶，I₁不易转化为CDDO-Me有关。由此可以推断前-前药I₁具有显著下降的心肌细胞毒性。

表4 Antiproliferative Activity of Compounds

I₁和CDDO-Me对小鼠的急毒试验

我们采用ICR小鼠进行I₁和CDDO-Me的急毒实验，采用雌性小鼠，随机分组，每组10只，采用腹腔注射，单次大剂量给药，其中CDDO-Me剂量为200，400，500，600mg/kg， I₁的剂量为400，600，800，1000mg/kg。给药后观察7天，每天记录小鼠的活动情况和存活率，采用SPSS软件分析数据计算LD₅₀。结果表明，I₁在整体动物水平急性毒性略低于CDDO-Me。

表5.Acute toxicity of I₁ and CDDO-Me in mice

I₁和CDDO-Me对hERG作用的差异。

HERG(humanetherago-gorelatedgene)编码心肌快速激活的延迟整流钾通道(IKr)的α亚基，HERG钾通道在复极化的过程中发挥重要的作用，是抗心律失常药物作用的一个重要靶点。HERG钾通道检测结果表明(图3)，化合物I₁和CDDO-Me对hERG通路的毒性均较小，而在最高浓度200μM时，CDDO-Me的抑制率略高于I₁，提示I₁对hERG的毒性略低于CDDO-Me。

db/db小鼠心脏组织TUNEL原位凋亡检测

为了评价小鼠心肌组织的细胞凋亡情况，我们对心肌组织切片进行了TUNEL原位凋亡检测，用以评价I₁和CDDO-Me对心肌细胞凋亡情况的影响。结果如图4显示，CDDO-Me的凋亡情况与模型组相似，无显著性差异，而I₁(1mg/kg)和I₁(2mg/kg)能改显著降低db/db小鼠心肌凋亡程度。这一结果表明，在整体动物水平，I₁(1mg/kg)和I₁(2mg/kg)对心脏组织的毒性低于CDDO-Me。

以上药理学数据显示，本发明涉及的γ-谷氨酰转肽酶(GGT)选择激活的CDDO-Me前-前药I₁能够发挥显著的肾脏保护作用，其效果与CDDO-Me相当，并且毒性小于CDDO-Me。

附图说明

图1：各组肾组织染色。

图2：各组肾组织电镜超微结构。

图3：HERG钾通道检测结果。

图4：对心肌细胞凋亡情况的影响。

图1-4的具体解释

图1：各组肾组织染色：Control group；Model group(db/db mice)；CDDO-Me(0.65mg/kg)treated db/db mice；I₁(1mg/kg)treated db/db mice；I₁(2mg/kg)treateddb/db mice.

图2：各组肾组织电镜超微结构：(A)Control group；(B)Model group(db/dbmice)；(C)CDDO-Me(0.65mg/kg)treated db/db mice；(D)I₁(1mg/kg)treated db/dbmice；(E)I₁(2mg/kg)treated db/db mice.

图4：对心肌细胞凋亡情况的影响：(A)Control group；(B)Model group(db/dbmice)；(C)CDDO-Me(0.65mg/kg)treated db/db mice；(D)I₁(1mg/kg)treated db/dbmice；(E)I₁(2mg/kg)treated db/db mice.

具体实施方式

为了进一步阐明本发明，下面给出一系列实施例，这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1

N²-(芴甲氧羰基)-N⁵-(4-(甲基)苯基)-L-谷氨酸-甲酯(IV)

将Fmoc-Glu-OMe(II，425mg，1mmol)和4-氨基苄醇(III，123mg，1mmol)溶于20ml二氯甲烷，加入2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1，2-二氢喹啉(2-ethoxy-1-ethoxycarbonyl-12-dihydroquinoline，EEDQ)(296mg，1.2mmol)，氮气保护，室温下反应搅拌12小时。反应液用50ml二氯甲烷稀释，加入1N的稀盐酸终止反应。有机层依次用饱和碳酸氢钠、和饱和食盐水、各洗3次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)得淡黄固体IV(424mg，80％)。

mp：193-194℃；¹H NMR(300MHz，DMSO)：δ9.90(s，1H，NH)，7.90(d，2H，Ar H)，7.85(m，NH Fmoc)，7.74(d，2H，Ar H)，7.54(d，2H，Ar H)，7.42(m，2H，Ar H)，7.34(m，2H，Ar H)，7.23(d，2H，Ar H)，5.10(t，1H，OH)，4.43(d，2H，Fmoc CH₂)，4.33(m，2H，benzyl-CH₂)，4.23(m，1H，Glu-α)，4.12(m，1H，Fmoc CH)，3.65(s，3H，OCH₃)，2.44(m，2H，Glu-γ)，2.10(m，1H，1/2Glu-β)，1.90(m，1H，1/2Glu-β)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ172.7，169.9，156.1，143.7，140.7，137.8，137.1，127.6，127.0，127.9，126.9，125.2，120.1，118.7，65.7，62.6，53.4，46.6，40.3，32.4，26.2； ESI-MS(m/z)：524.2[M+Na]⁺；HRMS(m/z)：[M+Na]⁺calculatedC₂₈H₂₈N₂O₆Na 511.1845，found 511.1855，PPM error 2.0.

N²-(芴甲氧羰基)-N⁵-(4-(溴甲基)苯基)-L-谷氨酸-甲酯(V)

将中间体IV(530mg，1mmol)溶于10mL无水四氢呋喃，冰浴条件下滴加三溴化磷(410mg，1.5mmol)，0℃搅拌反应30分钟，加入饱和碳酸氢钠淬灭反应，加入乙酸乙酯50ml稀释，有机层用饱和食盐水洗三次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)得淡黄色固体V(467mg，85％)。

mp：156-158℃；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ8.25(s，1H，NH)，7.75(d，2H，Ar H)，7.55(m，4H，Ar H)，7.38(m，2H，Ar H)，7.29(m，4H，Ar H)，5.70(d，1H，NH Fmoc)，4.39(m，5H，FmocCH₂，benzyl-CH₂，Glu-αH)，4.17(t，1H，Fmoc CH)，3.72(s，3H，OCH₃)，2.35(m，3H，Glu-γ，Glu-β)，1.97(m，1H，1/2Glu-β)；¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ172.2，170.3，156.7，143.7，143.5，141.3，141.2，138.1，133.4，129.7，127.7，127.0，125.0，124.9，112.0，67.1，53.3，52.6，47.4，33.7，33.3，29.4；IR(neat，cm-1)：1735(s)，1700(s)，1662(s)，1555(s)，1273(m).

1-羟基-2-氰基-3-[4-(N-9-芴甲氧羰酰基-a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-双氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)-双烯-28-羧酸甲酯(VII₁)

将CDDO-Me(298mg，0.59mmol)溶解于10ml的DMF中，加入纯水(106mg，5.9mmol)，K₂CO₃(162.8mg，1.18mmol)室温搅拌过夜，加入化合物V(325mg，0.59mol)继续搅拌0.5h，加入1N的稀盐酸5ml终止反应。反应液加入适量二氯甲烷(50mL)稀释，饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水各洗涤3次。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得淡黄色固体，经快速硅胶柱层析制得白色固体VII(305mg，53％)。

mp：167-169℃；1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.38(s，1H，NH)，7.77(d，2H，Ar H)，7.59(m，4H，Ar H)，7.40(m，2H，Ar H)，7.31(m，4H，Ar H)，5.87(s，1H，CDDO C11H)，5.70(d，1H，NHFmoc)，5.43(m，2H，benzyl-CH2)，4.51(d，2H，Fmoc CH2)，4.43(m，2H，Glu-α，CDDO C1H)，4.20(m，1H，Fmoc CH)，3.75(s，3H，OCH3)，3.69(s，3H，OCH3)，2.38(m，2H，Glu-γ)，2.00(m，3H)，1.88(m，2H)，1.28(s，3H)，1.16(s，6H)，1.06(s，3H)，1.01(s，3H)，0.99(s，3H)，0.89(s，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ199.1，177.8，175.1，172.9，171.8，169.9，156.3，143.2，143.0，137.9，130.7，128.5，127.3，126.6，124.6，124.2，119.7，119.5，119.2，84.1，73.9，73.3，66.7，59.9，52.8，52.3，51.4，49.4，46.8，46.6，45.0，44.0，41.9，40.4，40.2，35.4，33.9，33.2，32.8，32.3，31.0，30.2，29.2，28.9，28.1，27.7，23.4，23.2，22.6，22.2，21.1，20.6，19.9，17.8，13.7；IR(neat，cm-1)：2949(w)，2206(s)，1718(s)，1660(s)，1519(s)，1217(m)，1062(m)；ESI-MS(m/z)：1016.5[M+Na]+；HRMS(m/z)：[M+Na]+calculatedC60H71N3O10Na 1016.5037，found 1016.5062，PPM error 2.5.

1-羟基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)-双烯-28-羧酸甲酯(I₁)

化合物VII(720mg，0.72mmol)溶于10mL无水CH₂Cl₂，加入2ml二乙胺，室温搅拌1小时。反应液0℃下用5％稀盐酸调节至近中性，二氯甲烷(100mL)稀释，有机层用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水各洗涤3次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得淡黄色固体，经快速硅胶柱层析制得白色固体I₁(396mg，71％)。

mp：158-160℃；¹H NMR(300MHz，MeOD)：δ7.59(2H，Ar H)，7.38(2H，Ar H)，5.87(s，1H，CDDO C₁₁H)，5.42(m，2H，benzyl-CH₂)，3.72(s，3H，OCH₃)，3.69(s，3H，OCH₃)，3.01(m，2H)，2.5(m，2H，Glu-γ)，1.96(m，3H)，1.68(m，3H)，1.27(s，3H)，1.17(s，6H)，1.10(s，3H)，1.05(s，3H)，0.97(s，3H)，0.89(s，3H)；¹³C NMR(75MHz，MeOD)：δ202.1，179.9，178.7，176.9，176.2，172.5，140.6，132.9，132.8，130.1，129.4，126.3，121.1，88.5，75.2，75.0，53.8，53.5，52.4，51.0，46.7，45.8，43.8，42.4，41.8，37.2，35.4，34.0，33.7，33.3，33.0，31.9，31.5，30.8，29.4，28.7，24.7，24.3，23.8，23.5，21.6，20.8，19.4；IR(neat，cm-1)：2978(s)，2945(s)，2208(s)，1720(s)，1662(s)，1521(s)，1219(m)，1064(m)；ESI-MS(m/z)：772.5[M+H]⁺；HRMS(m/z)：[M+H]⁺calculated C₄₅H₆₁N₃O₈Na 772.4537， found 772.4551，PPM error1.8.

1-甲氧基-2-氰基-3-[4-(N-9-芴甲氧羰酰基-a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-双氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)-双烯-28-羧酸甲酯(VII₂)

参照VII₁的合成方法，将CDDO-Me(298mg，0.59mmol)溶解于10ml的DMF中，加入无水甲醇(188mg，5.9mmol)，K₂CO₃(162.8mg，1.18mmol)室温搅拌过夜，加入化合物V(325mg，0.59mol)继续搅拌0.5h，加入1N的稀盐酸5ml终止反应。反应液加入适量二氯甲烷(50mL)稀释，饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水各洗涤3次。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得淡黄色固体，经快速硅胶柱层析制得白色固体VII₂(269mg，38％)。¹H-NMR(300MHz，CDCl3)，δ(ppm)：8.36(s，1H)，7.76(d，2H，J＝7.44Hz)，7.58(m，5H)，7.42，7.40，7.37(m，each 1H)，7.33，7.31，7.26，7.19(m，each 1H)，5.78(s，1H)，5.72(d，1H，J＝7.98Hz)，5.44(q，3H)，4.44(d，4H，J＝6.57Hz)，4.19(t，1H)，4.01(s，1H)，3.74(s，3H)，3.69(s，3H)，3.49(s，4H)，3.06(d，1H，J＝13.38Hz)，2.92(d，1H，J＝4.38Hz)，2.39(d，2H，J＝5.49Hz)，2.33(m，2H，J＝11.7Hz)，2.01，1.98，1.91，1.86，1.85，1.82(m，each 1H)，1.23，1.13，1.11，1.04，1.01，0.91，0.88，0.83，0.80(s，each 3H)；¹³C-NMR(75MHz，CDCl3)，δ199.33，177.85，176.29，172.46，171.72，169.85，143.23，143.00，140.86，137.87，130.77，128.47，127.30，126.60，124.49，123.89，120.66，119.56，119.54，119.23，83.053，82.80，76.96，76.54，76.12，73.39，66.68，57.73，52.80，52.21，51.33，49.35，46.87，46.66，44.90，43.72，42.08，41.11，40.15，35.48，34.03，33.29，32.76，32.38，31.42，31.10，30.32，30.19，29.11，28.81，27.89，27.80，23.40，23，20，22.60，22.24，20.51，20.17，17.95，13.61.

将化合物VII₂(720mg，0.72mmol)溶于10mL无水CH₂Cl₂，加入2ml二乙胺，室温搅拌1小时。反应液0℃下用5％稀盐酸调节至近中性，二氯甲烷(100mL)稀释，有机层用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水各洗涤3次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得淡黄色固体，经快速硅胶柱层析制得白色固体I₂(243mg，41％)。mp：156-168℃；¹H-NMR(300MHz，MeOD，)δ7.60(d，2H，J＝7.71Hz)，7.38(d，2H，J＝7.77Hz)，5.87(s，1H)，5.43(m，2H)，4.45(s，1H)，3.72(d，3H，J＝11.7Hz)，3.01(s，2H)，2.52(m，2H)，2.15(m，1H)，1.97(m，1H)，1.63(s，2H)，1.53(d，3H，J＝1.44Hz)，1.41(m，3H)，1.17(s，6H)，1.10(s，3H)，1.05(s，3H)，0.97(s，3H)，0.89(s，6H)； ¹³C-NMR(75MHz，MeOD)：δ199.46，177.87，176.18，172.77，171.76，169.96，156.29，143.23， 143.01，140.82，137.88，130.81，128.45，127.30，126.60，124.54，123.86，120.72，119.56，119.23，83.35，81.40，76.99，76.57，76.15，73.33，66.69，65.12，52.95，52.84，52.22，51.35，49.37，46.87，46.63，44.91，43.67，41.76，41.06，40.13，36.08，35.40，34.04，33.26，32.77，32.38，31.42，31.10，30.93，30.31，30.19，29.94，29.69，29.19，28.86，27.84，26.71，26.58，24.35，23.36，22.97，21.29.

1-乙氧基-2-氰基-3-[4-(N-9-芴甲氧羰酰基-a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-双氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)-双烯-28-羧酸甲酯(VII₃)

参照VII₁的合成方法，将CDDO-Me(298mg，0.59mmol)溶解于10ml的DMF中，加入无水乙醇(271.4mg，5.9mmol)，K₂CO₃(162.8mg，1.18mmol)室温搅拌过夜，加入化合物V(325mg，0.59mol)继续搅拌0.5h，加入1N的稀盐酸5ml终止反应。反应液加入适量二氯甲烷(50mL)稀释，饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水各洗涤3次。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得淡黄色固体，经快速硅胶柱层析制得白色固体VII₃(295mg，39％)。¹H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.31(s，1H)，7.77(d，2H，J＝7.5Hz)，7.59(m，4H)，7.41(t，2H)，7.32(t，3H)，5.76(s，1H)，5.64(d，1H，J＝10.5Hz)，5.44(q，2H)，4.46(m，3H)，4.45(m，3H)，4.20(t，1H)，4.09(s，1H)，3.90(t，1H)，3.76(s，1H，J＝4.56Hz)，2.38(m，3H)，2.05(m，2H)，1.85(m，2H)，1.70(m，2H，)，1.60(s，10H)，1.48(m，2H)，1.25(s，12H)，1.23(s，7H)，1.13(s，5H)，1.09(m，4H)，1.07(s，1H)，1.05(s，3H)，1.01(d，6H，)，0.88(m，6H)；¹³C-NMR(75MHz，CDCl3)：δ199.46，177.87，176.18，172.77，171.76，169.96，156.29，143.23，143.01，140.82，137.88，130.81，128.45，127.30，126.60，124.54，123.86，120.72，119.56，119.23，83.35，81.40，76.99，76.57，76.15，73.33，66.69，65.12，52.95，52.84，52.22，51.35，49.37，46.87，46.63，44.91，43.67，41.76，41.06，40.13，36.08，35.40，34.04，33.26，32.77，32.38，31.42，31.10，30.93，30.31，30.19，29.94，29.69，29.19，28.86，27.84，26.71，26.58，24.35，23.36，22.97，21.29.

化合物VII₃(720mg，0.72mmol)溶于10mL无水CH₂Cl₂，加入2ml二乙胺，室温搅拌1小时。反应液0℃下用5％稀盐酸调节至近中性，二氯甲烷(100mL)稀释，有机层用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水各洗涤3次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得淡黄色固体，

经快速硅胶柱层析制得白色固体I₃(305mg，56％)。mp：153-165℃，¹H-NMR(300MHz，MeOD)，δ7.60(d，2H，J＝8.25Hz)，7.39(d，2H，J＝8.25Hz)，5.82(s，1H)，5.45(m，2H)，4.82(s，3H)，4.17(s，1H)，3.90(m，1H)，3.72(d，6H，J＝13.77Hz)，3.64，3.59(s，each 1H)，3.52(m，2H)， 3.03(s，2H)，2.53(t，2H)，2.16(m，2H)，2.04(m，3H)，1.95(m，2H)，1.81(m，2H)，1.72(s，1H)，1.65(s，5H)，1.53(3H)，1.42(3H)，1.17(m，6 H)，1.12，1.09，1.06，0.97，0.91(s，each 3H)；¹³C-NMR(75MHz，MeOD)：δ199.46，176.97，175.63，173.81，170.29，137.44，129.83，127.89，122.45，119.11，118.19，83.06，80.41，72.37，63.93，51.55，49.93，49.56，48.19，46.98，46.70，46.41，46.13，45.84，45.73，45.56，45.28，43.96，42.79，41.13，40.29，38.94，34.31，32.55，31.12，30.83，30.15，29.19，28.70，27.86，27.64，27.57，27.39，26.63，25.93，21.60，21.24，20.93，20.84，20.63，18.97，18.21，16.57，15.49，13.10，11.56。

Claims

1.一种齐墩果烷衍生物，其特征在于：通式I所示的化合物或其旋光异构体，对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，或其药学上可接受的盐或酯：

其中：

R3代表氢原子或C1-C10直链或支链烷基；

式I中标明的两个手性中心，分别用*1和*2表示，为R构型或S构型。

2.根据权利要求1的一种齐墩果烷衍生物，其特征在于：所述的通式I化合物或其对映体、非对映异构体及其药学上可接受的盐，R1代表氢原子、甲基、乙基或丙基；

R2代表氢原子、甲基或乙基，Y代表氧原子；

R3代表氢原子或甲基；

式I中手性中心*1为S构型，手性中心*2为R构型。

3.根据权利要求1的一种齐墩果烷衍生物，其特征在于：所述化合物选自：

1-羟基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)-双烯-28-羧酸甲酯

1-甲氧基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)-双烯-28-羧酸甲酯

1-乙氧基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)-双烯-28-羧酸甲酯。

4.根据权利要求1的一种齐墩果烷衍生物，其特征在于：其特征在于：

通式I所示化合物的制备方法包括如下步骤：

其中，R的定义如前所述。

5.一种药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述的通式I化合物、或其对映体和非对映异构体或其药学上可接受的盐及载体。

6.权利要求1的通式I化合物或其药学上可接受的盐在制备预防或治疗糖尿病肾病有关的疾病的药物中的用途。