CN101972267B

CN101972267B - 二氢芳基萘类化合物在制备治疗与预防肿瘤药物中的用途

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Publication number: CN101972267B
Application number: CN2010101813646A
Authority: CN
Inventors: 周应军; 史跃年
Original assignee: DIERETECH INVESTMENT Ltd; Central South University
Current assignee: DIERETECH INVESTMENT Ltd; Central South University
Priority date: 2005-12-30
Filing date: 2006-12-30
Publication date: 2012-09-05
Anticipated expiration: 2026-12-30
Also published as: CN101213164B; WO2007076704A1; CN1990445A; CN101972267A; JP2009522212A; EP1972611A1; CN101213164A

Abstract

本发明涉及二氢芳基萘类化合物在制备治疗与预防肿瘤药物中的用途。

Description

二氢芳基萘类化合物在制备治疗与预防肿瘤药物中的用途

本专利申请是分案申请

原申请日为2006年12月30日

原申请号为200680001483.0

原申请名称为：二氢芳基萘类化合物，制备方法以及作为Akt抑制剂预防与治疗癌症的用途

发明领域

本发明涉及芳基二氢萘类化合物通过抑制Akt活性通路从而治疗与预防肿瘤的用途。

发明背景

木脂素(lignan)又称木脂体，是一类由二分子苯丙素衍生物(C6-C3)聚合而成的化合物。木脂素类分布较广，目前已有200多种化合物，近年来还发现有三聚物和四聚物。

由于新型结构的木脂素相继被发现，因而又将木脂素分为木脂素类(lignans)和新木脂素(neolignans)。凡是由C₆-C₃单元侧链上b-碳原子相互连接生成的木脂素称为木脂素类，而由其它位置连接生成的木脂素称为新木脂素类。近年的分类定义又将由γ-碳原子氧化型苯丙素生成的木脂素称为木脂素类(由桂皮酸或桂皮醛、桂皮醇二种单体组成)；而由γ-碳原子非氧化型苯丙素生成的木脂素称为新木脂素类(由丙烯苯、烯丙苯二种单体组成)。

从分子结构上还可将木脂素分为(一)二芳基丁烷类(dibenzylbutanes)、(二)二芳基丁内酯类(dibenzyltyrolactones)、(三)芳基萘类(arylnaphthalenes)、(四)四氢呋喃类(tetrahydrofurans)(五)双四氢呋喃类(furofurans)、(六)联苯环辛烯类(dibenzocyclooctenes)、(七)苯骈呋喃类(benzofurans)、(八)双环辛烷类(bicyclo[3，2，1]octanes)、(九)苯骈二氧六环类、(十)螺二烯酮类(spirodienones)、(十一)联苯类(biphenylenes)、(十二)倍半木脂素(sesquilignans)和二木脂素(dilignans)。其中二氢芳基萘类具有如下(Ⅱ)结构。

A.S.CHAVLA等人(PHYTOCHEMISTRY Vol.31.No.12.pp4378-4379，1992)从黄荆种子中提取得到一个具有如下(Ⅲ)结构的化合物，其中R是H或Ac。但仅公开了该化合物的提取和结构。

Masateru Ono等人(Journal of Natural Product，2004，67，2073-2075)从黄荆子中分离得到7个木脂素类化合物，其中2个为芳基二氢萘类化合物，其结构如下(IV)式。该文献中公开了化合物的提取和结构，并进行了抗氧化活性的研究。

已知木脂素中鬼臼类(芳基四氢萘内脂木脂素)具有抗肿瘤活性。例如欧洲专利申请EP0711767公开了如下结构的化合物。

其中，Ar是3，4，5-三烷氧基苯基，或4-羟基-3，5-二烷氧基苯基；X是氧，硫或氮原子，或烯基(如＝CH-)或炔基(如≡CH-)；Y是氢原子或烷基、烯基、环烷基、芳基、羟基、烷氧基、氨基、单烷基取代氨基、双烷基取代氨基、环烷基取代的氨基、芳氨基、酰基、羧基、烷氧羰基、芳氧羰基。虚线表示有一双键在7，8位或8，8’位。

鬼臼类木脂素是目前研究最活跃的一类木脂素。其中有一些已经批准进入临床抗肿瘤治疗，例如依托泊甙(Etoposide，VP-16)和替尼泊甙(Teniposide，VM-26)。已有的结构活性关系显示，在保持鬼臼毒素反式内酯环、C2构型不变和4`-去甲基的条件下，C4为有效的修饰位点(IssellBF，et al，Etoposide[Vp-16]Current Status And New Development[M].Academic Press：New York，1984)。

目前了解到肿瘤细胞通过自身的调节而减少细胞凋亡在癌症发病机理和治疗失败两个方面起着重要的作用。的确，在导致细胞生存或凋亡的信号转导通路中，肿瘤细胞往往显示多种改变。在哺乳动物中基于磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/Akt的途径传递极为重要的细胞存活信号，通过应用Akt抑制剂来下调磷酸肌醇3-激酶(PI3K)活性将大大降低了各种类型实体瘤治疗的耐药风险。

Akt是促细胞存活肿瘤蛋白。该肿瘤蛋白引起了研究者的高度关注，是由于它在调节细胞增殖和生存方面的重要作用。在乳腺癌、前列腺癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、卵巢癌和结肠癌等许多人恶性肿瘤中该蛋白被异常的活化。增强的活化作用与他莫西分耐药，药物和放射治疗耐受及细胞凋亡耐受有关。已表明Akt激活和过度表达与癌细胞不断的入侵和发出血管生成信号密切相关，与前列腺癌和乳腺癌治疗中疗效不显著有关。该致癌基因可能是抑制肿瘤药物耐药和肿瘤入侵的最重要的靶点，Akt抑制剂可作为肿瘤治疗的辅药或治疗药物应用。

Akt是在PI3K通路里磷酸化后被激活。PI3K使膜肌醇磷酸脂磷酸化，产生第二信使磷脂酰-肌醇3，4，5-三磷酸盐，该信使与Akt的PH区域结合。Akt活化的现有模型为上游激酶诱导膜磷酸肌醇3′-磷酸化，即Akt调节位点磷酸化使Akt结合到膜而激活。

抑制Akt活化和活性的可通过抑制剂如LY294002和渥曼青霉素抑制PI3K活性来获得。然而，抑制PI3K不仅会影响Akt而且还会影响其他包含PH区域包含的信号分子。这些信号分子依赖于Pdtlns(3，4，5)-P3，如酪氨酸激酶的Tec家族。此外，已发现Akt可被生长信号所激活，该型号不依赖于PI3K。

另外，Akt活性可通过阻断上游激酶PDK1的活性而被抑制。化合物UCN-01时已被报道的PDK1抑制剂。抑制PDK1将会导致多种蛋白激酶的抑制，这些蛋白激酶的活性取决于PDK1，如非典型的PKC异型，SGK和S6激酶。Akt的小分子抑制剂在治疗肿瘤方面是有用的，尤其是那些抑制激活Akt.的小分子化合物。与化学治疗药物的合用，Akt抑制剂也是有用的。

发明内容

本发明提供具有如下结构通式的芳基二氢萘类木脂素衍生物：

其中，X为C＝O、C＝S、C＝N、亚甲基(-CH₂-)或烯基(-C＝CH-)；Y为氢原子、羟基、氨基、烷基或没有Y基团；R₁、R₂分别为氢原子、烷基、烯基、葡萄糖基、葡萄糖醛酸基、酰基或芳基；R₃为氢原子或葡萄糖基；R₄为甲氧基或氢原子；R₅为甲氧基或氢原子；母核中三位和四位的氢为(3R，4S)。

该化合物可以从黄荆(Vitex negundo L.)子中用乙醇提取。用40％乙醇溶液提取，浓缩后用聚酰胺拌样，通过聚酰胺柱层析，乙醇-水混合溶液进行梯度洗脱(依次为乙醇∶水＝10∶90，25∶75，40∶60，60∶40，95∶5)，浓缩25％乙醇洗脱部分后，再次用大孔树脂柱层析，以乙醇或水饱和的乙酸乙酯溶液洗脱。将洗脱液浓缩后，通过葡聚糖凝胶柱，甲醇洗脱。将洗脱溶液合并且浓缩，放置析晶，过滤后结晶得到。

通过上述方法可以从黄荆子中提取6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(VB-1)、6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-5-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(VB-2)和6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-葡萄糖基氧甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(VB-3)。

将上述得到的VB-1给禁食的大鼠灌胃给药，每间隔24小时收集大鼠的尿液和粪便，加甲醇备用。粪便经甲醇提取过滤，浓缩液用AB-8大孔吸附树脂吸附，以乙醇水溶液分别洗脱。30％乙醇部分经葡聚糖凝胶柱水洗，分离得到上述化合物的代谢产物。本发明实施例中公开了6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-羟甲基萘(VB-4)；6-羟基-4-(4-葡萄糖醛酸基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(VB-5)。这些产物与上述从黄荆子中提取得到的化合物均为芳基二氢萘类木脂素衍生物。

另外，从化合物1还可以合成得到其他衍生物。

图1表示了这些化合物之间的关系。

本发明实施例中具体公开了6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(VB-1)；6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-5-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(VB-2)；6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-葡萄糖基氧甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(VB-3)；6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-羟甲基萘(化合物4)；6-羟基-4-(4-葡萄糖醛酸基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(化合物5)；6-甲氧基-4-(4-甲氧基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(化合物6)；6-甲氧基-4-(4-甲氧基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(化合物7)；6-丁酸酯-4-(4-丁酸酯-3-甲氧基苯基)3-丁酸酯-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(化合物8)；6-乙酸酯-4-(4-乙酸酯-3-甲氧基苯基)3-乙酸酯-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(化合物9)。

实验表明，本发明提供的化合物对COC1细胞、SMMC-7721细胞、MCF-7细胞、HT-29细胞均具有抑制作用。

需要特别强调的是虽然该类化合物已是具有明确作用的抑制剂，但是本发明在不考虑作用机制的条件下阐述该类化合物的治疗作用或对其抑制作用的进一步研究。该类化合物具有以下作用：抑制细胞增殖；抗肿瘤；抑制血管生成；抑制血管生成细胞或肿瘤细胞增殖；抑制恶性肿瘤；促细胞凋亡等等。

本发明中用于治疗肿瘤的化合物不涉及其作用机制。该类化合物可以治疗各种实质性器官癌，其中包括结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、骨癌、肝癌、肾癌、肺癌、睾丸癌、皮肤癌、胃癌、卵巢癌、子宫癌、脑癌、血癌、淋巴癌等。同时，本发明所述的化合物可以治疗由于PTEN功能低下或Akt.激活所导致的癌症，其中包括脑癌、乳腺癌、骨癌、支气管癌、宫颈癌、成胶质细胞瘤、血癌、肝癌、霍奇金病、肾瘤、白血病、肌肉瘤、淋巴瘤、神经胶质瘤、黑素瘤、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、肾上腺细胞瘤、软组织瘤。

因此，本发明提出，用本发明提供的化合物可以用于制备抗肿瘤的药物。

附图说明

图1表示了本发明提供化合物之间的转化关系；

图2表示了对CoC1胞Balb/c-nu植瘤生长曲线的影响，其中

为生理盐水组，

为VB-2实验组；

图3人乳腺癌细胞Akt活性的抑制作用，1.对照组；2.VB-1，0.5μM；3，VB-1，4μM；4.VB-1，8μM；5.VB-2，0.5μM；6，VB-2，4μM；7.VB-2，8μM；

图4VB-1抑制人乳腺癌细胞的生长。

具体实施方式

实施例1

6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(VB-1)的制备。

黄荆(Vitex negundo L.)子用40％乙醇溶液提取三次，浓缩后用30～60目的聚酰胺拌样，通过80～100目聚酰胺柱层析，乙醇-水混合溶液进行梯度洗脱(依次为乙醇∶水＝10∶90，25∶75，40∶60，60∶40，95∶5)，浓缩25％乙醇洗脱部分后，再次用大孔树脂柱层析，以40％乙醇洗脱。将洗脱液浓缩后，通过Sephadex LH-20凝胶柱，40％甲醇溶液洗脱。将40％甲醇洗脱溶液合并且浓缩，放置过夜析晶，过滤后结晶经甲醇重结晶得到VB-1。波谱学数据如下：

UV

nm：357，255，209

ESI MS(m/z)：735[2M⁺+Na]，356[M]⁺

VB-1的¹³C NMR(100MHz)和¹H NMR(400MHz)的数据

溶剂：丙酮

实施例2

6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-5-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(VB-2)的制备。

黄荆(Vitex negundo L.)子用40％乙醇溶液提取三次，浓缩后用30～60目的聚酰胺拌样，通过80～100目聚酰胺柱层析，乙醇-水混合溶液(依次为甲醇∶水＝10∶90，20∶80，40∶60，60∶40，95∶5)进行梯度洗脱，浓缩25％乙醇部分后，再次用30～60目的聚酰胺拌样，经80～100目聚酰胺柱层析，水饱和的乙酸乙酯进行洗脱。乙酸乙酯洗脱部分通过Sephadex LH-20凝胶柱，甲醇-水混合溶液(甲醇的比例逐渐增加)梯度洗脱。将40％甲醇溶液合并且浓缩，放置过夜析出固体，过滤后将滤液拌样经聚酰胺柱层析，氯仿-甲醇(60∶1)进行洗脱，将主成分合并且浓缩，放置过夜析晶，过滤后得到VB-2。

UV

nm：341，288，221

VB-2的¹³C NMR(100MHz)和¹H NMR(400MHz)的数据。

溶剂：丙酮

实施例3

6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-葡萄糖基氧甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(VB-3)的制备。

黄荆(Vitex negundo L.)子用40％乙醇溶液提取三次，浓缩后用30～60目的聚酰胺拌样，通过80～100目聚酰胺柱层析，乙醇-水混合溶液进行梯度洗脱(依次为乙醇∶水＝10∶90，25∶75，40∶60，60∶40，95∶5)，浓缩25％乙醇部分后，再次用大孔树脂柱层析，以25％乙醇洗脱。将洗脱液浓缩后，通过Sephadex LH-20凝胶柱，甲醇-水混合溶液梯度洗脱(依次为甲醇∶水＝10∶90，20∶80，40∶60，60∶40，95∶5)，将20％甲醇溶液洗脱合并且浓缩，得到VB-3。

UV

nm：359，256，210

ESI MS(m/z)：1036[2M⁺]，518[M]⁺

VB-3的¹³C NMR(100MHz)和¹H NMR(400MHz)的数据

溶剂：DMSO

实施例4

6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-羟甲基萘(VB-4)的制备。

称取VB-1 0.60g于研钵中，先加2mL甘油研细，再慢慢加水做成混悬剂，最后稀释到40mL，每次取2mL，相当于30mg VB-1。给禁食的大鼠按每只30mg灌胃给药，每天一次，共计5天。每间隔24小时收集大鼠的尿液和粪便，加甲醇备用。粪便经甲醇提取3次，过滤，浓缩液用AB-8大孔吸附树脂吸附，以水，10％，20％，30％乙醇分别洗脱。30％乙醇部分经Sephadex LH-20凝胶柱水洗，分离得到VB-4(约30mg)。

UV

nm：358，283，226

VB-4的¹³C NMR(100MHz)和¹H NMR(400MHz)的数据

溶剂：DMSO

实施例5

6-羟基-4-(4-葡萄糖醛酸基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(VB-5)的制备。

称取化合物1 0.60g于研钵中，先加2mL甘油研细，再慢慢加水做成混悬剂，最后稀释到40mL，每次取2mL，相当于30mg VB-1。给禁食的大鼠按每只30mg灌胃给药，每天一次，共计5天。每间隔24小时收集大鼠的尿液和粪便，加甲醇备用。尿液先醇沉，过滤，浓缩后用AB-8大孔吸附树脂吸附，以水，10％，20％EtOH分别洗脱。10％EtOH部分经Sephadex LH-20凝胶柱，水洗，以VB-5为指标，通过薄层色谱法，将相同流分合并，浓缩后，经反相C-18柱水洗，分离得到化合物5(约19mg)。

UVnm：357，320，255，205

VB-5的¹³C NMR(100MHz)和¹H NMR(400MHz)的数据

溶剂：DMSO

实施例6

6-甲氧基-4-(4-甲氧基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(VB-6)的制备

称取50mg VB-1溶于1.1mlNaOH溶液(12mg/ml)，加入硫酸二甲酯41μl，冰水浴下搅拌10h。反应完毕后，通过HW-C₄₀凝胶柱，甲醇-水混合溶液梯度洗脱(甲醇的比例逐渐增加)，浓缩40％部分，得到VB-6(33mg)。

UV

nm：353，285，252，232，213

VB-6的¹³C NMR(100MHz)和¹H NMR(400MHz)的数据

溶剂：丙酮

实施例7

6-甲氧基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(VB-7)的制备。

将50mg VB-1溶于5ml丙酮中，加入K₂CO₃ 40mg，加热回流，加入硫酸二甲酯26μl，反应2h后蒸出丙酮，用乙酸乙酯溶解，拌样上LH-20凝胶柱，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱(乙酸乙酯的比例逐渐增加)，以VB-7为指标，进行薄层色谱，合并相同的流份，得到VB-7(16mg)。

VB-7的¹³C NMR(100MHz)和¹H NMR(400MHz)的数据

溶剂：丙酮

实施例8

6-丁酸酯-4-(4-丁酸酯-3-甲氧基苯基)3-丁酸酯-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(VB-8)的制备。

将2ml正丁酸放入50ml圆底烧瓶中，随后加入10ml氯化亚砜，加热回流搅拌5h后，将未反应的氯化亚砜由水浴加热蒸出。加反应得到的丁酰氯用已干燥的四氢呋喃稀释。取50mg VB-1投入50ml圆底烧瓶，30分钟内滴加1ml丁酰氯四氢呋喃溶液。搅拌加热反应，6h后停止反应。反应液通过HW-C₄₀凝胶柱，氯仿洗脱，得到VB-8。

实施例9

6-乙酸酯-4-(4-乙酸酯-3-甲氧基苯基)3-乙酸酯-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘(VB-9)的制备。

将50mg VB-1投入50ml圆底烧瓶，加入5ml醋酸酐，加热到135～145摄氏度，回流反应1h。加入10ml水后，用乙酸乙酯萃取，浓缩后用氯仿溶解，HW-C₄₀凝胶柱，氯仿洗脱，得到VB-9。

实施例10

本发明提供的化合物对相关肿瘤细胞生长的抑制作用。

COC1细胞、SMMC-7721细胞、MCF-7细胞和HT-29细胞均购于中国典型培养物保藏中心，用含10％小牛血清RPMI1640培养液常规传代，置于37℃，5％CO₂培养箱培养，取对数生长期细胞进行实验。

细胞抑制率测定用MTT比色法。制备细胞悬液，调节浓度为1.0-1.2×10⁵个/ml；接种于96孔塑料培养板，每孔180μl，培养2小时，分别加入不同样品20μl每孔。培养48小时，加入MTT液(5mg/ml)20μl/孔，继续培养6小时，1000转/分钟离心5分钟后吸除各孔培养液，加入100μl/孔DMSO，立即用490nm波长测定。吸光度(A)用IR(％)＝(1-A药物处理组均值/A溶媒对照组)×100％计算细胞增殖抑制率。IC₅₀用孙氏改良寇氏综合计算法。

本发明提供的化合物，对不同的肿瘤细胞株的半数抑制浓度(IC₅₀值)如下表所示：

表1MTT法测定本发明提供的化合物对COC1细胞增殖抑制率抑制率

表2MTT法测定本发明提供的化合物对SMMC-7721细胞增殖抑制率抑制率

表3MTT法测定具有本发明提供的化合物对MCF-7细胞增殖抑制率抑制率

表4MTT法测定具有本发明提供的化合物对HT-29细胞增殖抑制率抑制率

实施例11

VB-2人卵巢癌(CoC1)细胞Balb/c-nu裸鼠异种移植瘤模型治疗筛选实验

实验方法：人卵巢癌(CoC1)细胞系细胞购买于中国典型培养物保藏中心，用含10％小牛血清(FCS)的RPMI 1640培养基培养，2-3天传代1次，取对数生长期细胞用于实验。

将VB-2用二甲基亚砜(DMSO)完全溶解后再用生理盐水(NS)稀释成0.5mg/ml，腹腔给药，0.1ml/10g(10mg/kg)。突变系SPF级Balb/c-nu雌性裸小鼠24只，5周龄，体重12-14g。背部皮下接种CoC1细胞2×106cells/只，待移植瘤体积达1100-2000mm3左右时(30天时)，按瘤体积和体重均衡原则，分为6组，每组4只。I组，荷瘤Balb/c-nu对照组(NS 0.1ml/10g)；II组VB-2实验组(VB-2 10mg/kg)。以上各组隔日给药1次，共计10次，给药期间每5日用游标卡尺测量移植瘤最长径和最短径，按标准公式计算瘤体积：V＝L×W2×0.52。末次给药48小时后测定移植瘤体积，脱颈臼处死裸小鼠，切除移植瘤，用皿式电子分析天平称量瘤重。肿瘤生长抑制率(％)＝(1-实验组瘤体积均值/对照组瘤体积均值)×100％；瘤重抑制率(％)＝(1-实验组瘤重均值/对照组瘤重均值)×100％。各组瘤体积和瘤重均用表示，采用Spss windows 10.0软件One Way ANOVA方式行方差分析，两两比较应用Student’s t检验，P＜0.05为统计学意义显著标准。

实验结果：

表5 CoC1细胞Balb/c-nu移植瘤模型初始瘤体积

F＝0.12，P＝1.0

表5示：CoC1细胞Balb/c-nu移植瘤模型各组初始瘤体积间无显著差异，均衡性较好，可用于药物治疗作用评价。

表6给药5天对CoC1细胞Balb/c-nu异种移植瘤体积的影响

F＝0.062，P＝0.997

表7给药10天对CoC1细胞Balb/c-nu移植瘤体积的影响

F＝2.035，P＝0.122 ^*p＜0.05vs Control(NS)

表7可示，供试品处理10天后，VB-2实验组移植瘤体积较荷瘤模型对照组明显缩小，肿瘤生长抑制为66.5％(p＜0.05)。

表8给药15天对CoC1细胞Balb/c-nu移植瘤体积的影响

F＝2.889，P＝0.044 ^*p＜0.05vs Control(NS).

表8可见，供试品处理15天，VB-2实验组移植瘤体积均较荷瘤对照组明显缩小，肿瘤生长抑制率分别是64.5％(p＜0.05)。

表9给药20天对CoC1细胞Balb/c-nu移植瘤体积的影响

F＝3.725，P＝0.017 ^*p＜0.05，^**p＜0.01vs Control(NS)

表9可见：供试品处理20天，VB-2实验组移植瘤体积较荷瘤对照组显著缩小，其肿瘤生长抑制率为55.7％(p＜0.01)。

由图2可知，VB-2对人卵巢癌Balb/c-nu裸鼠异种移植瘤生长具有显著抑制作用。

实施例11

化合物VB-1、VB-2抑制乳腺癌细胞中Akt的活性

实验设计：人乳腺癌细胞株MDA-MB-435，给予化合物VB-1、VB-2以下剂量：0，0.5μM，4μM，and 8μM，培养12小时。人乳腺癌细胞株。收集对照细胞和给药细胞，并分离总的细胞蛋白。平均蛋白量(45μg)用于Western blot分析，该分析运用特异性抗体结合磷酸化的Akt和非磷酸化的Akt。

实验方法：MDA-MB-435人乳腺癌细胞在5％FCS的DMEM中培养。当细胞达到约50-60％浓度时，以0.5，4，and 8μM浓度的化合物A、B注入细胞，培养12小时。分离、复性总蛋白。45μg总蛋白用于Western blot分析。磷酸化Akt的表达用抗磷酸化的Akt抗体来定量；并同时和和总的Akt蛋白进行比较。

结果：见图3，化合物VB-1、VB-2通过抑制Akt磷酸化而发挥对Akt活性呈剂量依赖的抑制。然而，两个化合物对总的非磷酸化的Akt的水平没影响。从而表明这些化合物不影响Akt蛋白的稳定性。化合物VB-1、VB-2在剂量为4μM时显著的阻断Akt的磷酸化；在剂量为8μM时，化合物VB-1完全阻断Akt活性。

实施例12

化合物VB-1、VB-2诱导MDA-MB-435人乳腺癌细胞凋亡试验

实验设计：人乳腺癌细胞MDA-MB-435用5％FCS的DMEM培养液培养。对细胞给予VB-1以下剂量培养三天：2μM，4μM和10μM。收集对照组和实验组细胞并用MTT法测定。

结果：如图4所示，VB-1抑制细胞生长成剂量依赖性。当剂量为10μM时抑制率达到了50％以上。在图2中，空白组的细胞增殖率为100％，设定为对照组。其他的抑制率值以与对照组的比例来表达。每条柱状物的误差用平均值±三倍样品量的SD。统计学分析后，VB-1在剂量为4and 8μM时p值小于0.005。

Claims

1.式(I)所示的化合物或其盐在制备治疗与预防肿瘤药物中的用途，

其中，X为C＝O或亚甲基(-CH₂-)；Y为氢原子或羟基；R₁为氢原子、甲基、丁酰基或乙酰基；R₂为氢原子、甲基、丁酰基、乙酰基或葡萄糖醛酸基；R₃为氢原子、甲基、丁酰基、乙酰基或葡萄糖基；R₄为甲氧基或氢原子；R₅为甲氧基或氢原子；母核中三位和四位的氢为(3R，4S)。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的化合物选自6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘；6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-葡萄糖基氧甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘；6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-5-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘；6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-羟甲基萘；6-羟基-4-(4-葡萄糖醛酸基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘；6-甲氧基-4-(4-甲氧基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘；6-甲氧基-4-(4-甲氧基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘；6-丁酸酯-4-(4-丁酸酯-3-甲氧基苯基)3-丁酸酯-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘；6-乙酸酯-4-(4-乙酸酯-3-甲氧基苯基)3-乙酸酯-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘。

3.根据权利要求1所述的制备治疗与预防肿瘤药物的用途，其特征在于所述的肿瘤为结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、骨癌、肝癌、肾癌、肺癌、睾丸癌、皮肤癌、胃癌、卵巢癌、子宫癌、脑癌、血癌、淋巴癌。

4.根据权利要求1所述的制备治疗与预防肿瘤药物的用途，其特征在于该肿瘤是由于PTEN功能低下或Akt.激活所导致的。

5.根据权利要求4所述的制备治疗与预防肿瘤药物的用途，其特征在于该肿瘤是脑癌、乳腺癌、骨癌、支气管癌、宫颈癌、成胶质细胞瘤、血癌、肝癌、霍奇金病、肾瘤、白血病、肌肉瘤、淋巴瘤、神经胶质瘤、黑素瘤、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、肾上腺细胞瘤、软组织瘤。