CN103127159A - 一种芳基萘型木脂素在治疗丙型病毒性肝炎(hcv)中的应用 - Google Patents
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Abstract
一种芳基萘型木脂素在治疗丙型病毒性肝炎(HCV)中的应用。属医药技术领域,发明公开了一种从广西特色壮药红鱼眼Phyllanthus reticulatus中提取制备的具有抗丙型肝炎病毒(HCV)活性的芳基萘型木脂素(红鱼眼苷B),其特征是在125μg/rnl~15625μg/rnl浓度区间内对HCV复制子RNA有明显抑制效果(p<0.01),无细胞毒性药物浓度区间为0~3125μg/rnl(p<0.01)。本发明制备的芳基萘型木脂素(红鱼眼苷B)在抗丙型肝炎病毒(HCV)新药研发中具有广阔的市场前景。
Description
技术领域
本发明涉及天然药物化学领域。具体的,涉及一种芳基萘型木脂素在治疗丙型病毒性肝炎(HCV)方面的应用。
背景技术
广西特色壮药红鱼眼Phyllanthus retIIculatus系大戟科叶下珠属植物,在壮族医药中,红鱼眼常用于治疗肝炎、风湿关节痛等症。
丙型肝炎(hepatitisC)最初被定义为输血后非甲非乙型肝炎,1989年分离和确认其病原体为丙型肝炎病毒(HCV,hepatitisC virus),全球范围内有17亿人血清呈HCV阳性,其感染约占全球人口的3%,并有6种主要基因型的HCV,其基因组差别达到30%。我国HCV感染以II型为主,II、III混合感染也较多。HCV感染与肝脏病变密切相关,据估计约有75%的血清阳性个体会发展为慢性感染而转变为肝硬化,一些病例还可能发展为肝癌,是造成慢性肝炎、肝硬化及肝脏细胞肿瘤的主要原因之一。目前的标准治疗,包括PEG-IFN/RBV联合用药,只对过半的感染了丙型肝炎病毒(HCV)有效,且有明显的副作用,多数感染了丙型肝炎病毒(HCV)的患者的治疗效果不够理想。因此,从传统中药、植物和真菌资源中寻找新的抗HCV药物或先导化合物的研究具有较大的现实意义。
本发明是发明人在对壮药红鱼眼开展化学分离工作中发现了新型芳基萘型木脂素(I),通过体外抗HCV实验,证明该化合物具有抗HCV活性,可应用于丙型病毒性肝炎(HCV)的治疗,在抗丙型肝炎新药创制中有广阔的发展前景,故提出本发明。
发明内容
本发明化合物(I)可以从壮药红鱼眼及同属植物中提取分离制备。具体步骤如下:红鱼眼药材自然阴干并适当粉碎后,用70%到100%含水低级醇类(甲醇、乙醇),在静态或动态下,室温或加热(包括浸渍、渗漉、回流、微波等)提取,提取溶剂用量为药材的5~15倍,提取次数为1~3次,提取液过滤、减压或常压蒸馏回收醇溶剂到收集液醇含量低于10%后,继续蒸发浓缩到无醇味(相对密度1.05~1.25/80℃)、加水0.2~5倍量,充分混悬,混悬液用石油醚充分萃取,至萃取液浓缩后用香草醛-硫酸乙醇试剂检查无反应,改用乙酸乙酯充分萃取,至萃取液浓缩后用香草醛-硫酸乙醇试剂检查无反应,再改用正丁醇充分萃取,至萃取液浓缩后用香草醛-硫酸乙醇试剂检查无反应。正丁醇萃取部分除去有机溶剂,减压或常压蒸发浓缩至相对密度为1.1~1.50/80℃的浸膏,浸膏用适量甲醇溶解后,用适量硅胶(200~300目)拌样,进行硅胶柱层析,用氯仿-甲醇溶剂系统(100∶1~1∶1)进行梯度洗脱,每1/6~1/8柱体积为一个馏分,用TLC检测合并相同部分,再反复进行硅胶柱层析结合葡聚糖凝胶柱层析纯化制得新型芳基萘型木脂素(I)。
本发明所制备的新的芳基萘型木脂素(I)结构符合下述通式:
其中:R1可以是-H或-CH3或-Glu或-Glu(6→1)Ara(f);R2可以是-H或-CH3或-Ara(p);R3可以是-H或-CH3。(注:-Glu为吡喃葡萄糖基,-Ara(f)为呋喃阿拉伯糖基,-Ara(p)为吡喃阿拉伯糖基)
上述芳基萘型木脂素(I)优选下述化合物1:
经结构鉴定化合物1命名为3′,4′-methylenedioxy-4-methoxy-5-α-L-arabinofuranosyloxy-7-β-D-glucopyranosyloxy-2,7′-cycloligna-7,7′-dien-9′,9-olide,作为一个新的芳基萘型木脂素糖苷命名为红鱼眼苷B。根据本发明人研究,上述化合物1在125μg/rnl~15625μg/rnl浓度区间内对HCV复制子RNA有明显抑制效果(p<0.01),无细胞毒性药物浓度区间为0~3125μg/rnl。
附图说明
图1是化合物1的1H-NMR谱
图2是化合物1的13C-NMR谱
图3是化合物1的HSQC谱
图4是化合物1的HMBC谱
具体实施实例
化合物1的提取分离
红鱼眼药材(12.5kg)自然阴干,粉碎至30目,用75%乙醇,回流提取2次,首次加入乙醇12倍量,回流提取2小时;2次加入乙醇8倍量,回流提取1小时,提取液过滤、减压收醇溶剂到收集液醇含量低于10%后,继续蒸发浓缩到无醇味(相对密度1.20/80℃);加水2倍量,充分混悬,混悬液用石油醚充分萃取至萃取液浓缩后用香草醛-硫酸乙醇试剂检查无反应,改用乙酸乙酯充分萃取至萃取液浓缩后用香草醛-硫酸乙醇试剂检查无反应,再改用正丁醇充分萃取至萃取液浓缩后用香草醛-硫酸乙醇试剂检查无反应。正丁醇萃取部分除去有机溶剂,减压浓缩得到相对密度为1.20/80℃的浸膏(218g),浸膏用适量甲醇溶解后,用等量硅胶(200~300目)拌样,进行硅胶柱层析(硅胶2.0kg,200~300目,i.d.10×90cm),用氯仿-甲醇溶剂系统(100∶1~1∶1)洗脱,每1/8柱体积为一个馏分,共480份。用TLC检测合并相同部分,得到9个主要部分(Fr.A~Fr.I)。其中Fr.H(36g)进行硅胶柱层析(硅胶500g,200~300目),用氯仿-甲醇(50∶1~3∶1)进行洗脱,每1/8柱体积为一个馏分,共60份。用TLC检测合并相同部分,得到5个主要部分(Fr.H1~Fr.H5)。Fr.H3(3.9g)进行硅胶柱层析(硅胶100g,200~300目),用氯仿-甲醇-H2O(5∶1∶0.1)进行洗脱,用TLC检测合并,再用葡聚糖凝胶柱层析(Sephadex LH-20,MeOH)进一步纯化制得化合物1。
化合物1的结构鉴定
化合物1为黄色无定形粉末。通过HR-ESI-MS确定其分子式为C31H32O16;酸水解实验证明其含有一个D-glucose和一个L-arabinose,化合物1核磁数据显示(表1):δ(H)4.77(1H,d,J=7.6Hz),δ(C)107.3(d),78.3(d),78.2(d),75.1(d),71.7(d),62.9(t);δ(H)5.29(1H,d,J=7.2Hz),δ(C)101.5(d),74.5(d),73.0(d),70.0(d),67.9(t),推出其含有一个-glucose和一个-arabinose。
化合物1苷元的氢谱数据显示有δ(H):6.97(1H,d,J=7.79Hz),6.81(1H,br s),6.77(1H,dd,J1=7.9,J2=1.5Hz)信号,为一个三元取代的芳基环;2个孤立的芳基质子:δ(H)8.25(1H,s),7.13(1H,s);一个亚甲二氧基:6.04(2H,s);1个甲氧基:3.75(3H,s);1个环氧亚甲基:δ(H)5.62(1H,d,J=15.0Hz),5.46(1H,d,J=15.0Hz)。碳谱数据显示(表1)有21C,其中12个季碳,5个-CH-,2个-OCH3,1个-OCH2O-,1个-CH2。综合以上核磁数据和参考文献数据,推出化合物1苷元为一个芳基萘型木脂素。通过化合物1的HMBC(图2)谱可确定-D-glucose和-L-arabinose与苷元的连接位置。至此,化合物1鉴定为3′,4′-methylenedioxy-4-methoxy-5--L-arabinofuranosyloxy-7--D-glucopy ranosyloxy-2,7′-cycloligna-7,7′-dien-9′,9-olide。
表1化合物1核磁数据(in CD3OD;in ppm,Jin Hz)
化合物1体外抑制丙型肝炎病毒(HCV)活性实验
1实验材料
1.1实验仪器PE5700自动荧光PCR仪、PE9600扩增仪(美国PerkinElmer公司产品);HCV亚基因复制子细胞系模型(复旦悦达生物技术有限公司);FQ-PCR FICV试剂盒(中山大学达安基因诊断中心);Mrrr细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(上海闪晶生物技术有限公司);IFN-α2b(商品名安达芬,安科生物工程股份有限 公司生产);
1.2样品液的制备取化合物1适量,用DMSO溶解为1.0mg/ml后,4℃保存备用;试验前用相应培养液稀释至所需浓度后使用。
2实验方法
2.1用0.25%胰酶消化单层培养的HCV复制子,用含10%小牛血清的DMEM培养液配制细胞悬液,调整细胞数为105个/ml,接种于96孔培养板,每孔100μl。置5%CO2培养箱内预培养72h后,每孔加人按1∶5倍比稀释的样品液(5μg/ml~78.125mg/ml,pH7.2)100μl。阳性对照IFN-α2b按1∶10稀释(10IU/ml~1×107IU/ml,pH7.2)加入,每孔亦为100μl。每种浓度设6个复孔,并设对照孔6个,不加药液,而加入等量的培养液。将培养板移入CO2培养箱中,在37℃、5%CO2及饱和湿度条件下作用48h后,每孔加入5mg/rnl四甲基偶氮唑盐20μl,37℃继续孵育4h后,每孔加入150μl二甲基亚砜(DMSO)溶液,振荡后于570nm处测定其OD值。每孔测定2次,以均值代表最终测定值,以均数±标准差表示每组测定平均水平。
2.2分别取终浓度为5μg/ml、25μg/ml、125μg/ml、625μg/ml、3125μg/ml、5625μg/ml、78125μg/ml的样品液于含HCV复制子培养液中共同孵育,同时设空白对照组以及不同浓度的IFN-α2b为阳性对照组,其浓度分别为10IU/ml、1×102IU/ml、1×103IU/ml、1×104IU/ml、1×105IU/ml、1×106IU/ml、1×107IU/ml。不同药物浓度的样品液和IFN-α2b干预HCV复制子8d后,用荧光定量法对其进行定量测定。
3实验结果
本发明所得化合物1体外抑制丙型肝炎病毒(HCV)活性实验数据如下表:
表2化合物1样品和IFN-α2b对HCV复制子活性的影响
*PCR对数值的平均值
4结论
本发明所述化合物1样品和IFN-α2b各浓度组均数差异有统计学意义(P<0.05),在125μg/rnl~15625μg/rnl浓度区间内对HCV复制子RNA有明显抑制效果(p<0.01),无细胞毒性药物浓度区间为0~3125μg/rnl。
Claims (5)
1.一种芳基萘型木脂素在治疗丙型病毒性肝炎(HCV)中的应用,其特征在于该化合物在125μg/rnl~3125μg/rnl浓度区间内对HCV复制子RNA有明显抑制效果(p<0.01),且在0~3125μg/rnl浓度区间内无细胞毒性。
4.权利要求3所述化合物1的提取工艺为:
4.1红鱼眼Phyllanthus reticulatus药材粗粉,采用高浓度低级醇类(甲醇、乙醇)提取;
4.2提取液回收醇类溶剂后,残余溶液加水相当于残余液的0.2到5倍体积,充分混悬,混悬液分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等有机溶剂充分萃取,收集正丁醇部分,回收除去有机溶剂制得浸膏,正丁醇提取浸膏经反复硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析等操作制得;
4.3有关上述提取工艺的说明:
1)4.1所述低级醇类的浓度为70%到100%;
2)4.1所述提取方法可为:回流、浸渍、渗漉、超声、微波提取等多种方法;
3)4.2所述正丁醇浸膏相对密度为1.1~1.50/80℃。
5.权利要求1所述的芳基萘型木脂素(I)可制成药物制剂应用在丙型病毒性肝炎(HCV)的治疗。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110538176A (zh) * | 2017-09-13 | 2019-12-06 | 北京理工大学 | 芳基萘类木脂素类化合物在制备抗肝纤维化药物中的应用 |
EP4021438A4 (en) * | 2019-08-26 | 2023-09-13 | Hong Kong Baptist University | PATENTIFFLORIN ANALOGS USED AS ANTIVIRAL AGENTS |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1990445A (zh) * | 2005-12-30 | 2007-07-04 | 周应军 | 芳基二氢萘类木脂素衍生物及其用途 |
CN102349886A (zh) * | 2011-07-05 | 2012-02-15 | 中国人民解放军第二军医大学 | 苯代萘型木脂素类化合物在制备抗辐射药物中的应用 |
-
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1990445A (zh) * | 2005-12-30 | 2007-07-04 | 周应军 | 芳基二氢萘类木脂素衍生物及其用途 |
CN102349886A (zh) * | 2011-07-05 | 2012-02-15 | 中国人民解放军第二军医大学 | 苯代萘型木脂素类化合物在制备抗辐射药物中的应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
蓝鸣生,等: "红鱼眼化学成分研究", 《中草药》 * |
谭昌恒,等: "三种保肝药用植物的化学成分及其抗肝炎病毒活性研究", 《第九届全国天然有机化学学术会议论文集》 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110538176A (zh) * | 2017-09-13 | 2019-12-06 | 北京理工大学 | 芳基萘类木脂素类化合物在制备抗肝纤维化药物中的应用 |
CN110538176B (zh) * | 2017-09-13 | 2022-08-02 | 北京理工大学 | 芳基萘类木脂素类化合物在制备抗肝纤维化药物中的应用 |
EP4021438A4 (en) * | 2019-08-26 | 2023-09-13 | Hong Kong Baptist University | PATENTIFFLORIN ANALOGS USED AS ANTIVIRAL AGENTS |
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