CN101953965B - 一种六味地黄软胶囊制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药领域，具体涉及一种六味地黄软胶囊制剂及其制备方法。本发明提供的制备方法可以较多地提取得到药物的有效成分，去除杂质，更好地发挥药效，减少药物的服用剂量。

Description

一种六味地黄软胶囊制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于中药领域，具体涉及一种六味地黄软胶囊制剂及其制备方法。

技术背景

六味地黄丸，处方来源于宋代医学家钱乙的《小儿药证直诀》，是滋补肾阴的基础方剂，亦是补肾名方。六味地黄丸由熟地黄、山茱萸、山药、泽泻、丹皮、茯苓这六味中药组成。最早是“八味地黄丸”，见于张仲景的《金匮要略》。后来，宋代名医、儿科专家钱乙把八味地黄丸里面的附子和桂枝这种温补的药物去掉了，变成了现在的六味地黄丸。

本发明的申请人在六味地黄丸的基础上，经过潜心研究，研制成较为浓缩，吸收效果较好的六味地黄软胶囊，六味地黄软胶囊由中华人民共和国卫生部药品标准中成药成方制剂第十五册所收载，其功能为滋阴补肾，用于肾阴亏损，头晕耳鸣，腰膝酸软，骨蒸潮热，盗汗遗精，消渴。该产品的相关技术已申请专利，中国专利申请号为CN01823816.5，公开号为CN1558768。

但是，现有技术的六味地黄软胶囊的工艺仅限于水提、醇提工艺，甚至无醇沉等除杂过程，导致干膏率较高，不利于成型，服用量也较大，不能满足各个年龄层患者的需要。同时，该工艺对茯苓、泽泻中低极性的成分，如三萜酸类、环烯醚萜苷类等现代研究发现有药理活性(降糖、降脂)的成分没有充分地提取或保留。

为了实现中药现代化，同时使“六味地黄”这一经典古方更好地实现“三效、三小”以满足不同年龄层患者的需要，发明人在现有六味地黄软胶囊制备工艺的基础上，根据现代药物成分和药理的研究，对现有工艺进行了大幅度地改进，达到纯化和提高有效成分的提取利用率的目的，提高了药物的疗效，大大降低了服用量，符合现代社会的需要。

发明内容

本发明的目的是提供一种中药六味地黄软胶囊及其制备方法。

本发明的目的是通过以下方式实现的：

一种六味地黄软胶囊，该产品由熟地黄、山茱萸(制)、茯苓、泽泻、牡丹皮、山药及辅料制成。

上述的六味地黄软胶囊是由以下重量份的原料及辅料制成：

熟地黄4～12、山茱萸(制)2～6、茯苓1～5、泽泻1～5、

牡丹皮1～5、山药2～6、辅料0.5～2.5。

所述六味地黄软胶囊，该产品的制备方法如下：

取熟地黄、山茱萸(制)加乙醇回流提取，滤过，药渣备用；滤液浓缩至清膏，清膏加水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液浓缩至稠膏，得提取物I；

取茯苓、泽泻加乙醇回流提取，滤过，药渣备用；滤液浓缩至稠膏，得提取物II；

取熟地黄、山茱萸(制)、茯苓、泽泻药渣与山药加水提取，滤过，滤液浓缩至清膏，放冷，加乙醇静置，沉淀加水使溶解，滤过，滤液再次加乙醇，静置，保留沉淀；沉淀加水搅拌，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液浓缩至稠膏，得提取物III；

取牡丹皮提取丹皮酚，得丹皮酚细粉，备用；牡丹皮药渣加乙醇回流提取，滤过，滤液浓缩至清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液浓缩至稠膏，得提取物IV；

另取辅料适量，待温度降低，加入上述提取物I、II、III、IV及丹皮酚细粉，搅匀，制丸、洗丸、干燥，即得。

该制备方法优选的技术方案为：

取熟地黄、山茱萸(制)加4～12倍量乙醇浸泡0.5～2.5小时，加热回流提取1～3小时，滤过，药渣备用；滤液减压浓缩至清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液减压浓缩至稠膏，得提取物I；

取茯苓、泽泻加2～8倍量乙醇浸泡0.5～2.5小时，加热回流提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，滤过，药渣备用；滤液浓缩至稠膏，得提取物II；

取熟地黄、山茱萸(制)、茯苓、泽泻药渣与山药加2～8倍量水提取1～4次，每次1～3小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至清膏，放冷，加乙醇使含醇量达70％～90％，静置，沉淀加水微热使溶解，滤过，滤液再次加乙醇使含醇量达70％～90％，静置，保留沉淀；沉淀加5～15倍量水，搅拌，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液浓缩至稠膏，得提取物III；

取牡丹皮提取丹皮酚，得丹皮酚细粉，备用；牡丹皮药渣加3～10倍量60％～80％乙醇加热回流提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液减压浓缩至稠膏，得提取物IV；

另取大豆油适量，加入上述提取物I、II、III、IV及丹皮酚细粉，搅匀，制丸、洗丸、干燥，即得。

该制备方法更为优选的技术方案为：

取熟地黄、山茱萸(制)加8倍量乙醇浸泡1.5小时，加热回流提取2小时，滤过，药渣备用，滤液减压浓缩至相对密度为1.10的清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏12小时，离心，上清液用分子量截留值为30000的超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液减压浓缩至相对密度为1.30以上的稠膏，得提取物I；

取茯苓、泽泻第一次加5倍量乙醇浸泡1小时，加热回流提取2小时，第二次加4倍量乙醇，加热回流提取2小时，合并提取液，滤过，药渣备用，滤液浓缩至相对密度为1.30以上的稠膏，得提取物II；

取熟地黄、山茱萸(制)、茯苓、泽泻药渣与山药加5倍、4倍和4倍水提取三次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至相对密度约1.10～1.14的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达80％，静置12小时，沉淀加水微热使溶解并使相对密度约1.10～1.14，滤过，滤液再次加乙醇使含醇量达80％，静置12小时，保留沉淀，沉淀加10倍量水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏12小时，离心，上清液依次用分子量截留值为50000、30000的超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液浓缩至相对密度为1.30以上的稠膏，得提取物III；

取牡丹皮提取丹皮酚，得丹皮酚细粉，备用；牡丹皮药渣加7倍和5倍量70％乙醇加热回流提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.10的清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏12小时，离心，上清液用分子量截留值为30000的超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液减压浓缩至相对密度为1.30以上的稠膏，得提取物IV；

另取大豆油或蜂蜡或甘油适量，熔化，待温度降至45℃左右，加入上述提取物I、II、III、IV及丹皮酚细粉，搅匀，制丸、洗丸、干燥，即得。

本发明提供的六味地黄软胶囊制剂与现有技术的六味地黄软胶囊制剂相比，可以提高药物疗效，发明人对此项内容进行了药效学实验研究，用以证明本发明六味地黄软胶囊与临床功能主治有关的治疗作用。下述实验用于进一步说明本发明的效果，但不限制本发明。

一、实验材料

(一)药品及试剂

采用本发明技术方案制备的六味地黄软胶囊，如实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6等，以下简称为“精制六味地黄软胶囊”，0.6g/粒，每克制剂含7.5g生药，成人用量每日服2粒，即9g生药/60kg·日，临用前用0.5％CMC-Na配成所需浓度；

六味地黄软胶囊，1g/粒，成人用量每日服3粒，即9g生药/60kg·日，来源：江苏康缘药业股份有限公司；

钠石灰，来源：上海陆都化学试剂厂；

医药白凡士林，来源：金陵石化公司化工一厂；

氯化钠(分析纯)，来源：南京玖泰化学试剂厂；

碳酸钠，来源：南京化学试剂一厂；

2，4-二硝基氯苯(DNCB)，来源：南京玖泰化学试剂厂；

注射用环磷酰胺，来源：江苏恒瑞医药股份有限公司；

四氧嘧啶，来源：美国Sigma公司；

SOD试剂盒，来源：南京建成生物工程研究所；

MDA试剂盒，来源：南京建成生物工程研究所；

盐酸肾上腺素，来源：由武汉诺佳药业集团股份有限公司生产；

胆固醇，来源：中国惠兴生化试剂有限公司；

胆酸钠，来源：中国医药(集团)上海朝晖药业有限公司；

甲基硫氧嘧啶，来源：上海复星朝晖药业有限公司；

猪油，来源：自制；

总胆固醇(T-CHO)测试药盒，来源：威特曼生物科技有限公司；

甘油三酯(TG)测试药盒，来源：威特曼生物科技有限公司；

高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测试药盒，来源：威特曼生物科技有限公司；

低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测试药盒，来源：威特曼生物科技有限公司。

(二)仪器

FA2104型电子天平，上海精密科学仪器有限公司；

HH-60快速恒温数显水箱，常州国华电器有限公司；

752型紫外光栅分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；

LDZ5-2型离心机，北京医用离心机厂；

SureStep稳步型血糖检测仪，强生(上海)医疗器材有限公司；

7020型日立全自动生化分析仪，日本。

(三)动物

SD大鼠，ICR小鼠，由南京医科大学实验动物中心提供；

(四)饲料

基础饲料，南京安立默科技有限公司提供；

大鼠高脂饲料(自制)：2％胆固醇，10％猪油，0.2％丙硫氧嘧啶，87.8％大鼠基础饲料；

二、实验条件及统计方法

(一)实验条件

给药前后，实验小鼠、大鼠均雌雄分笼用饲料喂养，自由饮水，室温20～24℃，湿度40～70％。

(二)统计方法

量反应采用Excel软件进行t检验。。

三、实验方法与实验例

实验例1：对肾上腺素性高血糖小鼠血糖值的影响

1.造模方法及分组给药

取正常ICR小鼠60只，雄性，体重18～22g。随机分为6组：(1)正常对照组：0.5％CMC-Na 20ml/kg；(2)模型对照组：0.5％CMC-Na 20ml/kg；(3)六味地黄软胶囊组：3.0g生药/kg；(4)精制六味地黄软胶囊I组：1.5g生药/kg；(5)精制六味地黄软胶囊II组：3.0g生药/kg；(6)精制六味地黄软胶囊III组：6.0g生药/kg。各组小鼠均按20ml/kg体重灌胃给药，连续给药7天。第7天给药前禁食(不禁水)10.5h，给药后1h，正常对照组腹腔注射生理盐水，其余各组注射肾上腺素0.18mg/kg，各组小鼠均按0.1ml/10g体重腹腔注射。注射后30min剪尾取血，用血糖仪测定血糖。

2.观测指标

第7天给药前禁食(不禁水)10.5h，给药后1h，正常对照组腹腔注射生理盐水，其余各组注射肾上腺素0.18mg/kg，各组小鼠均按0.1ml/10g体重腹腔注射。注射后30min剪尾取血，用血糖仪测定血糖。采用Excel软件进行t检验。

3.实验结果

实验结果见表1，结果显示，腹腔注射肾上腺素后，模型组小鼠血糖升高，与空白组相比，有显著性差异(p＜0.01)，提示造模成功。各给药组均能降低肾上腺素性高血糖小鼠的血糖值，与模型组相比，有显著性差异(p＜0.01，p＜0.05)，并且精制六味地黄软胶囊组小鼠的血糖值的明显低于六味地黄软胶囊组小鼠的血糖值。表明本发明精制六味地黄软胶囊对肾上腺素性高血糖小鼠血糖值的升高有一定的改善作用，并且效果明显优于现有的六味地黄软胶囊。

表1对肾上腺素性高血糖小鼠血糖的影响(X±S)

注：与空白组相比，^△△p＜0.01；与模型组相比，^*p＜0.05，^**p＜0.01。

实验例2：对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的影响

1.造模方法及分组给药

取ICR小鼠140只，雄性，体重18～22g。随机取10只小鼠作为正常组。其余小鼠禁食18h，按10ml/kg尾静脉注射新鲜配制的四氧嘧啶90mg/kg，60h后禁食12h，剪尾取血，用血糖仪测定小鼠空腹血糖。选择空腹血糖在15.4mmol/L以上并出现多饮、多尿、消瘦等症状者为糖尿病模型小鼠。取糖尿病模型小鼠按空腹血糖值随机分为6组，分组时各组血糖平均值差别不大于0.55mmol/L。同期另设一正常组，分组为：(1)溶媒对照组：给予0.5％CMC-Na 20ml/kg；(2)模型组：给予0.5％CMC-Na 20ml/kg；(3)六味地黄软胶囊组：3.0g生药/kg；(4)精制六味地黄软胶囊I组：1.5g生药/kg；(5)精制六味地黄软胶囊II组：3.0g生药/kg；(6)精制六味地黄软胶囊III组：6.0g生药/kg。各组小鼠均按20ml/kg体重灌胃给药，连续给药7天。

2.观测指标

末次给药前禁食11h，给药1h后剪尾取血测小鼠血糖。比较给药前后小鼠的空腹血糖值以及体重，并计算血糖降低百分率。

3.实验结果

①体重变化情况：

实验结果见表2，结果显示，静脉注射给予四氧嘧啶后，小鼠明显出现多饮、多尿及消瘦等体征变化，体重与正常组小鼠比较，有显著性差异(p＜0.01)。各给药组小鼠糖尿病体征明显好转，体重有一定升高，但六味地黄软胶囊组与模型组比较，无明显差异(p＞0.05)，而精制六味地黄软胶囊组与模型组比较，有明显差异(p＜0.05)。

表2对四氧嘧啶糖尿病小鼠体重的影响(X±S)

注：与正常组相比，^△△p＜0.01与模型组相比，^*p＜0.05

②血糖变化情况：

实验结果见表3，结果显示，静脉注射给予四氧嘧啶后，筛选出造模成功小鼠空腹血糖值＞15.4mmol/L，与正常组小鼠比较，有显著性差异(p＜0.01)，提示造模成功。六味地黄软胶囊组能够降低四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖值，血糖降低百分率增加，与模型组相比有显著性差异(p＜0.05)；精制六味地黄软胶囊能够降低四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖值，血糖降低百分率增加，与模型组相比有极显著性差异(p＜0.01)。表明本发明精制六味地黄软胶囊对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖值有一定的降低作用，并且效果明显优于现有的六味地黄软胶囊。

表3对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的影响(X±S)

注：^△△p＜0.01，与正常组相比；^**p＜0.01，^*p＜0.05，与模型组相比。

实验例3：对四氧嘧啶糖尿病大鼠血糖的影响

1.造模方法及分组给药

取正常大鼠100只，雄性，体重190～220g。随机取10只大鼠作为正常组。其余大鼠禁食18h，按1ml/kg尾静脉注射新鲜配制的四氧嘧啶50mg/kg，4h后腹腔注射2g/kg葡萄糖液，避免大鼠前期低血糖所致死亡。36h后大鼠禁食(不禁水)12h，针刺尾部取血，用血糖仪测定大鼠空腹血糖。选择空腹血糖在16.7mmol/L以上并出现多饮、多尿、消瘦等症状者为糖尿病模型大鼠。取糖尿病模型大鼠按空腹血糖值随机分为6组，分组时各组血糖平均值差别不大于0.55mmol/L。同期另设一正常组，分组为(1)溶媒对照组：给予0.5％CMC-Na 10ml/kg；(2)模型组：给予0.5％CMC-Na 10ml/kg；(3)六味地黄软胶囊组：1.5g生药/kg；(4)精制六味地黄软胶囊I组：0.75g生药/kg；(5)精制六味地黄软胶囊II组：1.5g生药/kg；(6)精制六味地黄软胶囊III组：3.0g生药/kg。各组小鼠均按10ml/kg体重灌胃给药，各组每日给药一次，连续给药7天。

2.观测指标

末次给药前禁食11h，给药1h后针刺尾部取血测大鼠血糖。比较给药前后大鼠的空腹血糖值以及体重，并计算血糖降低百分率。

3.实验结果

(1)体重变化情况：

实验结果见表4，结果显示，静脉注射给予四氧嘧啶后，大鼠明显出现多饮、多尿及消瘦等体征变化，体重与正常组大鼠比较，有显著性差异(p＜0.01)。各给药组小鼠糖尿病体征明显好转，体重有一定升高，但六味地黄软胶囊组与模型组比较，无明显差异(p＞0.05)，而精制六味地黄软胶囊组与模型组比较，有明显差异(p＜0.05)。

表4对四氧嘧啶糖尿病大鼠体重的影响(X±s)

注：与正常组相比，^△△p＜0.01与模型组相比，^*p＜0.05

(2)血糖变化情况：

实验结果见表5，结果显示，静脉注射给予四氧嘧啶后，筛选出造模成功大鼠空腹血糖值＞16.7mmol/L，与正常组大鼠比较，有显著性差异(p＜0.01)，提示造模成功。六味地黄软胶囊组能够降低四氧嘧啶糖尿病大鼠的血糖值，血糖降低百分率增加，与模型组相比有显著性差异(p＜0.05)；精制六味地黄软胶囊能够降低四氧嘧啶糖尿病大鼠的血糖值，血糖降低百分率增加，与模型组相比有极显著性差异(p＜0.01)。表明本发明精制六味地黄软胶囊对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖值有一定的降低作用，并且效果明显优于现有的六味地黄软胶囊。

表5对四氧嘧啶糖尿病大鼠血糖的影响(X±S)

注：^△△p＜0.01，与正常组相比；^**p＜0.01，^*p＜0.05，与模型组相比。

实验例4：对大鼠血清SOD、MDA含量的影响

1.分组给药

SD大鼠50只，体重350～450g，雌雄各半。随机分为5组，每组10只：分别为(1)溶媒对照组：0.5％CMC-Na 10ml/kg；(2)六味地黄软胶囊组：1.5g生药/kg；(3)精制六味地黄软胶囊I组：0.75g生药/kg；(4)精制六味地黄软胶囊II组：1.5生药/kg；(5)精制六味地黄软胶囊III组：3.0g生药/kg；各组按10ml/kg每日灌胃给药1次，连续给10日。

2.观测指标及方法

方法：末次给药后30min，采取眼眶静脉丛法取大鼠血2ml后，于恒温箱中放置30分钟后，3000rpm离心10min后，吸取上层血清。观察指标：血清MDA、SOD活性，采用紫外分光光度法(紫外光栅分光光度计)检测MDA、SOD活性。

SOD：应用SOD测试试剂盒，采用黄嘌呤氧化酶法，于550nm波长比色测定光密度值。MDA：应用MDA测试试剂盒，采用丙二醛-硫代巴比妥酸法，于532nm波长比色测定光密度值。

计算公式：

3.实验结果

实验结果见表6，结果显示，六味地黄软胶囊能够提高大鼠血清SOD活力，降低MDA含量，与溶媒对照组比较有显著性差异(p＜0.05，p＜0.01)；精制六味地黄软胶囊能够提高大鼠血清SOD活力，降低MDA含量，与溶媒对照组比较有极显著性差异(p＜0.01)。表明本发明精制六味地黄软胶囊具有改善大鼠血清SOD活力及MDA含量的作用，并且效果明显优于现有的六味地黄软胶囊。

表6对大鼠血清SOD、MDA含量的影响(X±S)

^*p＜0.05，^**p＜0.01与溶媒对照组比较。

实验例5：对小鼠血清溶血素量的影响

1.造模方法及分组给药

ICR小鼠60只，体重20～24g，雌雄各半。然后随机分为6组，每组10只：分别为(1)溶媒对照组：0.5％CMC-Na 20ml/kg；(2)模型组：0.5％CMC-Na 20ml/kg；(3)六味地黄软胶囊组：3.0g生药/kg；(4)精制六味地黄软胶囊I组：1.5g生药/kg；(5)精制六味地黄软胶囊II组：3.0g生药/kg；(6)精制六味地黄软胶囊III组：6.0g生药/kg。各组分别腹腔注射5％绵羊红细胞生理盐水悬液0.2ml进行免疫。同时按20ml/kg每日灌胃给药1次，连续给7日。免疫后第4、6日，除溶媒对照组其余各组分别腹腔注射30mg/kg环磷酰胺。

2.观测指标及方法

末次灌胃给药后30min，小鼠眼眶取血，分离血清50μl，用生理盐水稀释500倍。取稀释血清1ml，加入5％绵羊红细胞0.5ml以及10％补体(新鲜豚鼠混合血清经SRBC<10:1>于4℃吸收30min后置于-20℃备用)1ml，混匀后置于37℃恒温水浴中30min，然后移至冰浴中终止反应。1500rpm离心5min，取上清液于540nm处测吸光度值。

3.实验结果

结果见表7，结果显示，造模后小鼠血清溶血素量下降，模型组与溶媒对照组比较有显著性差异(p＜0.05)，表明小鼠经造模后血清血溶素水平明显下降，提示造模成功。六味地黄软胶囊组能够升高小鼠血清血溶素量水平，与模型组比较有显著性差异(p＜0.05)。精制六味地黄软胶囊能够明显升高小鼠血清血溶素量水平，与模型组比较有极显著性差异(p＜0.01)。表明本发明精制六味地黄软胶囊具有升高模型小鼠血清血溶素水平的作用，并且效果明显优于现有的六味地黄软胶囊。

表7对小鼠血清血溶素水平的影响(X±S)

^△p＜0.05，与溶媒对照组比较；^*p＜0.05，与模型组比较。

实验例6：对小鼠常压缺氧存活时间的影响

1.分组给药

ICR小鼠50只，体重18～22g，雌雄各半。随机分为5组，每组10只：分别为(1)溶媒对照组：0.5％CMC-Na 20ml/kg；(2)六味地黄软胶囊组：3.0g生药/kg；(3)精制六味地黄软胶囊I组：1.5g生药/kg；(4)精制六味地黄软胶囊II组：3.0g生药/kg；(5)精制六味地黄软胶囊III组：6.0g生药/kg。各组按20ml/kg每日灌胃给药1次，连续给10日。

2.观测指标及方法

末次给药后30min，将各组小鼠单独置于125ml广口瓶中(内装5g钠石灰，瓶口用凡士林密封)，观察记录小鼠在常压缺氧状态下的存活时间，结果进行组间t检验。

3.实验结果

实验结果见表8，结果显示，六味地黄软胶囊组能延长小鼠常压缺氧存活时间，与溶媒对照组比较有显著性差异(p＜0.05)。精制六味地黄软胶囊I、II、III组能明显延长小鼠常压缺氧存活时间，与溶媒对照组比较有极显著性差异(p＜0.01)。表明六味地黄软胶囊及精制六味地黄软胶囊具有延长小鼠常压缺氧存活时间的作用，并且精制六味地黄软胶囊的效果明显优于现有的六味地黄软胶囊。

表8对小鼠常压缺氧存活时间的影响(X±s)

^*p＜0.05，^**p＜0.01，与溶媒对照组比较。

实验例7：对小鼠游泳时间的影响

1.分组给药

ICR小鼠50只，体重18～22g，雌雄各半。随机分为5组，每组10只：分别为(1)溶媒对照组：0.5％CMC-Na 20ml/kg；(2)六味地黄软胶囊组：3.0g生药/kg；(3)精制六味地黄软胶囊I组：1.5g生药/kg；(4)精制六味地黄软胶囊II组：3.0g生药/kg；(5)精制六味地黄软胶囊III组：6.0g生药/kg。各组按20ml/kg每日灌胃给药1次，连续给7日。

2.观测指标及方法

末次给药后30min，将小鼠尾部负重为体重5％的铅丝，置于直径40cm，高度35cm的玻璃水槽中进行常温游泳试验(水深：20cm，水温：26±1℃)，小鼠头部沉入水中10秒钟不能浮出水面的时间，观察各小鼠常温游泳持续时间。结果进行组间t检验。

3.实验结果

实验结果见表9，结果显示，六味地黄软胶囊组能延长小鼠常温游泳时间，与溶媒对照组比较有显著性差异(p＜0.05)。精制六味地黄软胶囊各组能明显延长小鼠常温游泳时间，与溶媒对照组比较有极显著性差异(p＜0.01)。表明六味地黄软胶囊及精制六味地黄软胶囊具有延长小鼠常温游泳时间的作用，并且精制六味地黄软胶囊的效果明显优于现有的六味地黄软胶囊。

表9对小鼠常温游泳时间的影响(X±S)

^*p＜0.05，^**p＜0.01，与溶媒对照组比较。

实验例8：对幼年小鼠免疫器官脏器指数的影响

1.分组给药

ICR小鼠50只，体重11～14g，雌雄各半。随机分为5组，每组10只：分别为(1)溶媒对照组：0.5％CMC-Na 20ml/kg；(2)六味地黄软胶囊组：3.0g生药/kg；(3)精制六味地黄软胶囊I组：1.5g生药/kg；(4)精制六味地黄软胶囊II组：3.0g生药/kg；(5)精制六味地黄软胶囊III组：6.0g生药/kg。各组按20ml/kg每日灌胃给药1次，连续给10日。

2.观测指标及方法

第10日末次给药后30min，用颈椎脱臼法处死小鼠，取各小鼠胸腺及脾脏，称重，计算出小鼠胸腺指数及脾脏指数(脏器指数＝脏器重量mg/体重g).结果进行组间t检验。

3.实验结果与结论

实验结果见表10，结果显示，六味地黄软胶囊能提高幼年小鼠胸腺指数与脾脏指数，与溶媒对照组比较有显著性差异(p＜0.05)。精制六味地黄软胶囊各组均能提高幼年小鼠胸腺指数与脾脏指数，与溶媒对照组比较有极显著性差异(p＜0.05)。表明六味地黄软胶囊及精制六味地黄软胶囊具有提高幼年小鼠胸腺指数与脾脏指数的作用，并且精制六味地黄软胶囊的效果明显优于现有的六味地黄软胶囊。

表10对小鼠免疫器官脏器指数的影响(X±S)

^*p＜0.05，^**p＜0.01，与溶媒对照组比较。

本发明的有益效果：

1、本发明提供的制备方法将水提取、醇提取、醇沉除杂、超滤分离等提取分离方法有机地结合起来，可以得到较多的药物有效成分，并有效去除了杂质。

2、采用本发明提供的技术方案制备成的六味地黄软胶囊(精制)的药物疗效明显优于现有的六味地黄软胶囊。

3、采用本发明提供的技术方案制备成的六味地黄软胶囊(精制)在疗效提高的基础上，服用剂量大大降低，现有的六味地黄软胶囊的服用剂量为一次3粒，一日2次，而采用本发明技术制备的六味地黄软胶囊(精制)服用剂量为一次1粒一日2次，是现有服用剂量的三分之一，符合现代社会的需要。

具体实施方式

下述实施例用于进一步说明本发明，但不限制本发明。

实施例1：

1、处方：

熟地黄1440g    山茱萸(制)720g  牡丹皮540g

山药720g       茯苓540g        泽泻540g

                               制成1000粒

2、制剂处方：

提取物重量(占成型制剂的50％～60％)        300～360g

大豆油与蜂蜡重量(占成型制剂的50％～40％)  300～240g

                       制成精制六味地黄软胶囊1000粒

3、制法：

以上六味，取熟地黄、山茱萸(制)加8倍量乙醇浸泡1.5小时，加热回流提取2小时，滤过，药渣备用，滤液减压浓缩至相对密度为1.10的清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏12小时，离心，上清液用分子量截留值为30000的超滤膜超滤，收集1.25倍于原体积的超滤液，超滤液减压浓缩至相对密度为1.30以上的稠膏，得提取物I；

取茯苓、泽泻第一次加5倍量乙醇浸泡1小时，加热回流提取2小时，第二次加4倍量乙醇，加热回流提取2小时，合并提取液，滤过，药渣备用，滤液浓缩至相对密度为1.30以上的稠膏，得提取物II；

取熟地黄、山茱萸(制)、茯苓、泽泻药渣与山药加5倍、4倍和4倍水提取三次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至相对密度约1.10～1.14的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达80％，静置12小时，沉淀加水微热使溶解并使相对密度约1.10～1.14，滤过，滤液再次加乙醇使含醇量达80％，静置12小时，保留沉淀；沉淀加10倍量水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏12小时，离心，上清液依次用分子量截留值为50000、30000的超滤膜超滤，收集1.25倍于原体积的超滤液，超滤液浓缩至相对密度为1.30以上的稠膏，得提取物III；

取牡丹皮提取丹皮酚，得丹皮酚细粉，备用；牡丹皮药渣加7倍和5倍量70％乙醇加热回流提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.10的清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏12小时，离心，上清液用分子量截留值为30000的超滤膜超滤，收集1.25倍于原体积的超滤液，超滤液减压浓缩至相对密度为1.30以上的稠膏，得提取物IV；

另取大豆油与蜂蜡适量，熔化，待温度降至45℃左右，加入上述提取物I、II、III、IV及丹皮酚细粉，搅匀，制丸、洗丸、干燥，即得。

用法用量：口服，一次1粒一日2次。

实施例2：

1、处方：

熟地黄1440g    山茱萸(制)720g    牡丹皮540g

山药720g       茯苓540g          泽泻540g

                                  制成1000粒

2、制剂处方：

提取物重量(占成型制剂的50％～60％)       300～360g

大豆油或甘油重量(占成型制剂的50％～40％  300～240g

                      制成精制六味地黄软胶囊1000粒

3、制法：

以上六味，取熟地黄、山茱萸(制)加8倍量乙醇浸泡3小时，加热回流提取2小时，滤过，药渣备用；滤液减压浓缩至清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液减压浓缩至稠膏，得提取物I；

取茯苓、泽泻加5倍量乙醇浸泡3小时，加热回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，药渣备用；滤液浓缩至稠膏，得提取物II；

取熟地黄、山茱萸(制)、茯苓、泽泻药渣与山药加5倍量水提取3次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至清膏，放冷，加乙醇使含醇量达80％，静置，沉淀加水微热使溶解，滤过，滤液再次加乙醇使含醇量达80％，静置，保留沉淀；沉淀加10倍量水，搅拌，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液浓缩至稠膏，得提取物III；

取牡丹皮提取丹皮酚，得丹皮酚细粉，备用；牡丹皮药渣加7倍量70％乙醇加热回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液减压浓缩至稠膏，得提取物IV；

另取大豆油或甘油适量，加入上述提取物I、II、III、IV及丹皮酚细粉，搅匀，制丸、洗丸、干燥，即得。

用法用量：口服，一次1粒一日2次。

实施例3：

1、处方：

熟地黄1440g    山茱萸(制)720g    牡丹皮540g

山药720g       茯苓540g          泽泻540g

                                制成1000粒

2、制剂处方：

提取物重量(占成型制剂的50％～60％)    300～360g

大豆油重量(占成型制剂的50％～40％)    300～240g

                   制成精制六味地黄软胶囊1000粒

3、制法：

以上六味，取熟地黄、山茱萸(制)加8倍量乙醇浸泡1.5小时，加热回流提取2小时，滤过，药渣备用，滤液减压浓缩至相对密度为1.10的清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏12小时，离心，上清液用分子量截留值为30000的超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液减压浓缩至相对密度为1.30以上的稠膏，得提取物I；

取茯苓、泽泻第一次加5倍量乙醇浸泡1小时，加热回流提取2小时，第二次加4倍量乙醇，加热回流提取2小时，合并提取液，滤过，药渣备用，滤液浓缩至相对密度为1.30以上的稠膏，得提取物II

取熟地黄、山茱萸(制)、茯苓、泽泻药渣与山药加5倍、4倍和4倍水提取三次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至相对密度约1.10～1.14的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达80％，静置12小时，沉淀加水微热使溶解并使相对密度约1.10～1.14，滤过，滤液再次加乙醇使含醇量达80％，静置12小时，保留沉淀，沉淀加10倍量水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏12小时，离心，上清液依次用分子量截留值为50000、30000的超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液浓缩至相对密度为1.30以上的稠膏，得提取物III；

取牡丹皮提取丹皮酚，得丹皮酚细粉，备用；牡丹皮药渣加7倍和5倍量70％乙醇加热回流提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.10的清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏12小时，离心，上清液用分子量截留值为30000的超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液减压浓缩至相对密度为1.30以上的稠膏，得提取物IV；

另取大豆油适量，加入上述提取物I、II、III、IV及丹皮酚细粉，搅匀，制丸、洗丸、干燥，即得。

用法用量：口服，一次1粒一日2次。

实施例4：

1、处方：

熟地黄1440g    山茱萸(制)720g    牡丹皮540g

山药720g       茯苓540g          泽泻540g

                                制成1000粒

2、制剂处方：

提取物重量(占成型制剂的50％～60％)      300～360g

蜂蜡与甘油重量(占成型制剂的50％～40％)  300～240g

                     制成精制六味地黄软胶囊1000粒

3、制法：

以上六味，取熟地黄、山茱萸(制)加10倍量乙醇浸泡1小时，加热回流提取3小时，滤过，药渣备用；滤液减压浓缩至清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液减压浓缩至稠膏，得提取物I；

取茯苓、泽泻加7倍量乙醇浸泡2.5小时，加热回流提取1次，每次3小时，合并提取液，滤过，药渣备用；滤液浓缩至稠膏，得提取物II；

取熟地黄、山茱萸(制)、茯苓、泽泻药渣与山药加8倍量水提取2次，每次3小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至清膏，放冷，加乙醇使含醇量达75％，静置，沉淀加水微热使溶解，滤过，滤液再次加乙醇使含醇量达75％，静置，保留沉淀；沉淀加6倍量水，搅拌，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液浓缩至稠膏，得提取物III；

取牡丹皮提取丹皮酚，得丹皮酚细粉，备用；牡丹皮药渣加5倍量65％乙醇加热回流提取1次，每次3小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液减压浓缩至稠膏，得提取物IV；

另取蜂蜡与甘油适量，熔化，待温度降至35℃，加入上述提取物I、II、III、IV及丹皮酚细粉，搅匀，制丸、洗丸、干燥，即得。

用法用量：口服，一次1粒一日2次。

实施例5：

1、处方：

熟地黄1440g    山茱萸(制)720g    牡丹皮540g

山药720g       茯苓540g          泽泻540g

                                制成1000粒

2、制剂处方：

提取物重量(占成型制剂的50％～60％)        300～360g

大豆油或蜂蜡重量(占成型制剂的50％～40％)  300～240g

                        制成精制六味地黄软胶囊1000粒

3、制法：

以上六味，取熟地黄、山茱萸(制)加10倍量乙醇浸泡2.5小时，加热回流提取1小时，滤过，药渣备用；滤液减压浓缩至清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液减压浓缩至稠膏，得提取物I；

取茯苓、泽泻加8倍量乙醇浸泡2.5小时，加热回流提取3次，每次1小时，合并提取液，滤过，药渣备用；滤液浓缩至稠膏，得提取物II；

取熟地黄、山茱萸(制)、茯苓、泽泻药渣与山药加8倍量水提取4次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至清膏，放冷，加乙醇使含醇量达85％，静置，沉淀加水微热使溶解，滤过，滤液再次加乙醇使含醇量达85％，静置，保留沉淀；沉淀加12倍量水，搅拌，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液浓缩至稠膏，得提取物III；

取牡丹皮提取丹皮酚，得丹皮酚细粉，备用；牡丹皮药渣加9倍量75％乙醇加热回流提取3次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液减压浓缩至稠膏，得提取物IV；

另取大豆油或蜂蜡适量，熔化，待温度降至50℃，加入上述提取物I、II、III、IV及丹皮酚细粉，搅匀，制丸、洗丸、干燥，即得。

用法用量：口服，一次1粒一日2次。

实施例6：

1、处方：

熟地黄1440g    山茱萸(制)720g    牡丹皮540g

山药720g       茯苓540g          泽泻540g

                                制成1000粒

2、制剂处方：

提取物重量(占成型制剂的50％～60％)        300～360g

大豆油或蜂蜡重量(占成型制剂的50％～40％)  300～240g

                        制成精制六味地黄软胶囊1000粒

3、制法：

取熟地黄、山茱萸(制)加乙醇回流提取，滤过，药渣备用；滤液浓缩至清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液浓缩至稠膏，得提取物I；

取茯苓、泽泻加乙醇回流提取，滤过，药渣备用；滤液浓缩至稠膏，得提取物II；

取熟地黄、山茱萸(制)、茯苓、泽泻药渣与山药加水提取，滤过，滤液浓缩至清膏，放冷，加乙醇静置，沉淀加水微热使溶解，滤过，滤液再次加乙醇，静置，保留沉淀；沉淀加水搅拌，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液浓缩至稠膏，得提取物III；

取牡丹皮提取丹皮酚，得丹皮酚细粉，备用；牡丹皮药渣加乙醇回流提取，滤过，滤液浓缩至清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液浓缩至稠膏，得提取物IV；

另取辅料适量，加入上述提取物I、II、III、IV及丹皮酚细粉，搅匀，制丸、洗丸、干燥，即得。

用法用量：口服，一次1粒一日2次。

Claims (3)

1.一种六味地黄软胶囊，其特征为该产品由熟地黄、制山茱萸、茯苓、泽泻、牡丹皮、山药及辅料制成，其中原料及辅料的重量配比为：

熟地黄4～12、制山茱萸2～6、茯苓1～5、泽泻1～5、牡丹皮1～5、山药2～6、辅料0.5～2.5，

该产品的制备方法如下：

取熟地黄、制山茱萸加乙醇回流提取，滤过，药渣备用；滤液浓缩至清膏，清膏加水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用分子量截留值为30000的超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液浓缩至稠膏，得提取物I；

取茯苓、泽泻加乙醇回流提取，滤过，药渣备用；滤液浓缩至稠膏，得提取物II；

取熟地黄、制山茱萸、茯苓、泽泻药渣与山药加水提取，滤过，滤液浓缩至清膏，放冷，加乙醇使含醇量达70％～90％，静置，沉淀加水使溶解，滤过，滤液再次加乙醇使含醇量达70％～90％，静置，保留沉淀；沉淀加水搅拌，滤过，滤液冷藏，离心，上清液依次用分子量截留值为50000、30000的超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液浓缩至稠膏，得提取物III；

取牡丹皮提取丹皮酚，得丹皮酚细粉，备用；牡丹皮药渣加60％～80％乙醇回流提取，滤过，滤液浓缩至清膏，清膏加水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用分子量截留值为30000的超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液浓缩至稠膏，得提取物IV；

另取辅料，加入上述提取物I、II、III、IV及丹皮酚细粉，搅匀，制丸、洗丸、干燥，即得。

2.如权利要求1所述的六味地黄软胶囊，其特征为该产品的制备方法为：

取熟地黄、制山茱萸加4～12倍量乙醇浸泡0.5～2.5小时，加热回流提取1～3小时，滤过，药渣备用；滤液减压浓缩至清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用分子量截留值为30000的超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液减压浓缩至稠膏，得提取物I；

取茯苓、泽泻加2～8倍量乙醇浸泡0.5～2.5小时，加热回流提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，滤过，药渣备用；滤液浓缩至稠膏，得提取物II；

取熟地黄、制山茱萸、茯苓、泽泻药渣与山药加2～8倍量水提取1～4次，每次1～3小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至清膏，放冷，加乙醇使含醇量达70％～90％，静置，沉淀加水微热使溶解，滤过，滤液再次加乙醇使含醇量达70％～90％，静置，保留沉淀；沉淀加5～15倍量水，搅拌，滤过，滤液冷藏，离心，上清液依次用分子量截留值为50000、30000的超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液浓缩至稠膏，得提取物III；

取牡丹皮提取丹皮酚，得丹皮酚细粉，备用；牡丹皮药渣加3～10倍量60％～80％乙醇加热回流提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏，离心，上清液用分子量截留值为30000的超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液减压浓缩至稠膏，得提取物IV；

另取大豆油适量，加入上述提取物I、II、III、IV及丹皮酚细粉，搅匀，制丸、洗丸、干燥，即得。

3.如权利要求2所述的六味地黄软胶囊，其特征为该产品的制备方法为：

取熟地黄、制山茱萸加8倍量乙醇浸泡1.5小时，加热回流提取2小时，滤过，药渣备用，滤液减压浓缩至相对密度为1.10的清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏12小时，离心，上清液用分子量截留值为30000的超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液减压浓缩至相对密度为1.30以上的稠膏，得提取物I；

取茯苓、泽泻第一次加5倍量乙醇浸泡1小时，加热回流提取2小时，第二次加4倍量乙醇，加热回流提取2小时，合并提取液，滤过，药渣备用，滤液浓缩至相对密度为1.30以上的稠膏，得提取物II；

取熟地黄、制山茱萸、茯苓、泽泻药渣与山药加5倍、4倍和4倍水提取三次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.14的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达80％，静置12小时，沉淀加水微热使溶解并使相对密度1.10～1.14，滤过，滤液再次加乙醇使含醇量达80％，静置12小时，保留沉淀，沉淀加10倍量水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏12小时，离心，上清液依次用分子量截留值为50000、30000的超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液浓缩至相对密度为1.30以上的稠膏，得提取物III；

取牡丹皮提取丹皮酚，得丹皮酚细粉，备用；牡丹皮药渣加7倍和5倍量70％乙醇加热回流提取二次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.10的清膏，清膏加入适量的水，搅拌均匀，滤过，滤液冷藏12小时，离心，上清液用分子量截留值为30000的超滤膜超滤，收集超滤液，超滤液减压浓缩至相对密度为1.30以上的稠膏，得提取物IV；

另取大豆油适量，熔化，待温度降至45℃左右，加入上述提取物I、II、III、IV及丹皮酚细粉，搅匀，制丸、洗丸、干燥，即得。