CN109172692A - 一种抗压力抗氧化防治肌肉萎缩的药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种抗压力抗氧化防治肌萎缩的药物，包括酸枣仁3‑15份、刺五加8‑30份、人参2‑20份、地黄10‑30份、党参5‑30份、女贞子6‑26份、枸杞子8‑20份、昆布5‑20份、硒0.00001‑0.002份、锌0.00005‑0.002份、铬0.00002‑0.001份。本发明所述药物是用醇水双提和微生物发酵技术制备的生物化合物药剂，具有优异的抗压、抗氧化、防治肌肉萎缩的作用。

Description

一种抗压力抗氧化防治肌肉萎缩的药物及其制备方法

技术领域

本发明属于医药领域，主要涉及一种抗压力抗氧化防治肌萎缩的药物及其制备方法，具体的是一种用醇水双提和微生物发酵技术制备的生物化合物药剂。

背景技术

大健康是根据时代发展、社会需求与疾病谱的改变，提出的一种全局的理念。它围绕着人的衣食住行以及人的生老病死，关注各类影响健康的危险因素和误区，提倡自我健康管理，是在对生命全过程全面呵护的理念指导下提出来的。随着经济的发展和广大人民群众生活水平的“提高”，大量的中老年病和青少年的营养失调，而生存环境日益恶化、工作节奏加快、竞争更加激烈、生活情绪失调，常患有焦虑、急躁、易怒、失眠、记忆力减退、耳鸣等工作压力增大病症。研究表明，患者由于在持续较久或强度过大的脑体力劳动过程中，再加外部压力因素，身体分泌激素和体液的能力下降，细胞代谢产生的自由基、乳酸等许多有害物质大量淤积，阻塞了大脑的营养通道，造成血氧含量降低，血液循环不畅，伴随有血液粘稠度增加、红血细胞聚集和变形能力降低，在脑部营养和能量极度消耗的同时又阻碍了营养物质的有效吸收和利用，最终导致平衡关系遭到损害，细胞活力受到抑制，身体处于大健康的对立面亚健康状态，出现信息流的增大和紊乱、大量自由基淤积、植物神经紊乱等造成的综合征，最终可引发肌萎缩侧索硬化症。

肌萎缩侧索硬化症，也叫运动神经元病(MND)，又称葛雷克氏症、夏科(Charcot)病、卢伽雷氏(Lou Gehrig)病，是运动神经元病的一种，是累及上运动神经元(大脑、脑干、脊髓)，又影响到下运动神经元(颅神经核、脊髓前角细胞)及其支配的躯干、四肢和头面部肌肉的一种慢性进行性变性疾病。其发病机制主要为：(一)、铜锌超氧歧化酶基因突变，该基因位于人类染色体21q22.1，其突变可致SODl活性丧失，使超氧化的解毒作用减弱致自由基过量积聚细胞损伤。(二)、兴奋性氨基酸毒性，兴奋性氨基酸包括谷氨酸天冬氨酸及其衍生物红藻氨酸(KA)、使君子氨酸(QA)、鹅膏氨酸(IA)和N-甲基d-天冬氨酸(NMDA)。兴奋性氨基酸的兴奋毒性可能参与LIS的发病谷氨酸与NMDA受体结合可致钙内流激活一系列蛋白酶和蛋白激酶，使蛋白质的分解和自由基的生成增加，脂质过氧化过程加强，神经元自行溶解、此外过量钙还可激活核内切酶，使DNA裂解及核崩解。ALS的病变主要局限在运动神经系统可能与谷氨酸的摄取系统有关。这个摄取系统位于神经胶质细胞及神经细胞的细胞膜能迅速将突触间隙的谷氨酸转运到细胞内终止其作用。(三)、自身免疫，患者脑脊液和血清中抗神经元抗体的增加提示其发病可能与自身免疫有关。如存在于患者血清中的L型电压依赖性钙通道抗体可与该通道蛋白结合，改变其电生理特性，造成神经元损伤。

目前国内外对本病药物治疗，遇到了以下技术难题：力如太是目前唯一通过美国FDA认定可以延缓肌萎缩侧索硬化症病程的药物，但大量临床研究显示，力如太仅能将患者死亡时间拖延2～3个月，且费用昂贵，每月治疗费用高，严重增加了我国医疗保障体系的负担，并且其对并发症无效。

中医药保健理论认为“压力大、肌萎缩”主要由气血虚弱、阴虚所致，属于“浊阴”、“痰湿”、“湿热”、“瘘症”等范畴，两虚所致的血瘀可阻滞气机，津液失于输布，络脉瘀阻(小血管、神经病变)，由于气血亏虚，脏腑不足，筋脉肌肉失养，所以出现压力下的综合症，主要表现为心理紧张、情绪失调、焦虑、记忆力减退、累及上运动神经元(大脑、脑干、脊髓)，又影响到下运动神经元(颅神经核、脊髓前角细胞)及其支配的躯干、四肢和头面部肌肉。中医认为，“心藏神、肝藏魂、肺藏魄、脾藏意、肾藏智”，人的思维活动和五脏均有非常密切的关系。此外，“脑为元神之府”，脑髓盈满，则耳目聪明，精力充沛；脑髓空虚，可出现记忆减退、神经系统功能障碍。因此，中医认为其病的发生主要与脏腑亏虚，气血津液不足以濡养筋脉肌肉，亏损日久，四肢羸弱不用有关。

中国专利文献CN104825525A公开了一种治疗肌肉萎缩侧索硬化症的中药组合物，以淫羊藿、麸炒白术、茯苓三味药材组成，基于脾肾亏虚的痿病病机，本方以补肾健脾为主，然而其对于导致肌萎缩发生的气血虚弱、阴虚没有及时的预防。

基于此，在申请人前期对于抗压力抗氧化的中药物研究的基础上，致力于研究一种具有抗压力抗氧化防治肌肉萎缩的药物及其制备方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种高效安全的抗压力抗氧化防治肌萎缩的生物药物及其制备方法。

本发明实现上述目的所采取的技术方案是，通过如下原料制备药物。

一种抗压力抗氧化防治肌萎缩的生物药物，由下述重量配比的原料制成的：

酸枣仁3-15份、刺五加8-30份、人参2-20份、地黄10-30份、党参5-30份、女贞子6-26份、枸杞子8-20份、昆布5-20份、硒0.00001-0.002份、锌0.00005-0.002份、铬0.00002-0.001份。

进一步优选，本发明药物是由下述重量配比的原料制成的：

酸枣仁3-10份、刺五加15-25份、人参5-10份、地黄15-35份、党参5-15份、女贞子6-15份、枸杞子10-20份、昆布10-15份、硒0.00001-0.002份、锌0.00005-0.002份、铬0.00002-0.001份。

最优选的，本发明药物配方最佳重量配比是：

酸枣仁8份、刺五加20份、人参5份、地黄20份、党参12份、女贞子9份、枸杞子10份、昆布12份、硒0.0006份、锌0.0009份、铬0.0004份。

本发明还提供了一种所述的药物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将人参、党参、女贞子、酸枣仁按上述配方比例混合粉碎，用乙醇回流提取，重复提取一次，滤过醇提液备用，药渣分别保存；

(2)将刺五加、地黄、枸杞子、昆布及醇提后的药渣混合进行水煎，药液过滤；

(3)把醇提药液、水提药液混合浓缩后接入脂肪酶(0.2％)、蛋白酶(0.1％)、纤维素酶(0.1％)、果胶酶(0.1％)，在温度32-50℃、pH5-6、搅拌(80r/min)条件下发酵培养48小时，加热灭酶，离心过滤纯化，取上清液，将药液浓缩到每人每天服用3次、每次20毫升的浓度，冷却；

(4)调pH值4-6，按上述配方比例分别加硒锌铬粉混悬液，强力搅拌1.5小时，及时灌装扎封，105℃流通蒸汽灭菌30分钟，即得。

本发明还提供了一种所述的药物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将人参、党参、女贞子、酸枣仁按上述配方比例混合粉碎，用乙醇回流提取，重复提取一次，滤过醇提液备用，药渣分别保存；

(2)将刺五加、地黄、枸杞子、昆布及醇提后的药渣混合进行水煎，药液过滤；

(3)把醇提药液、水提药液混合浓缩后接入脂肪酶(0.2％)、蛋白酶(0.1％)、纤维素酶(0.1％)、果胶酶(0.1％)，按上述配方比例分别加硒锌铬粉混悬液，强力搅拌1.5小时，在温度32-50℃、pH5-6、搅拌(80r/min)条件下发酵培养48小时，加热灭酶，离心过滤纯化，取上清液，将药液浓缩到每人每天服用3次、每次20毫升的浓度，冷却；

(4)调pH值4-6，及时灌装扎封，105℃流通蒸汽灭菌30分钟，即得。

本发明还提供了一种所述的药物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将人参、党参、女贞子、酸枣仁、刺五加、地黄、枸杞子、昆布按上述配方比例混合粉碎，进行水煎，药液过滤；

(2)把水提药液浓缩后接入脂肪酶(0.2％)、蛋白酶(0.1％)、纤维素酶(0.1％)、果胶酶(0.1％)，在温度32-50℃、pH5-6、搅拌(80r/min)条件下发酵培养48小时，加热灭酶，离心过滤纯化，取上清液，将药液浓缩到每人每天服用3次、每次20毫升的浓度，冷却；

(3)调pH值5-7，及时灌装扎封，105℃流通蒸汽灭菌30分钟，即得。

微量元素是人体生命活力的重要物质。硒、铬、锌等微量元素虽然在人体内含量非常微小，但其都具有重要的生理作用。“硒”是人体和动物必不可少的一种，与保持机体持久健康有关，是一种很强的抗氧化剂，能将有毒的过氧化物还原为无害的物质，能分解过氧化氢，对细胞和组织有保护作用，使之免受过氧化物的损害，对细胞膜和细胞器(线粒体、微粒体、溶酶体)膜具有特殊的保护作用。

“锌”作为超氧化物歧化酶的活性成分，对机体抗氧化系统清除自由基起着至关重要的作用。锌可诱导金属硫蛋白的合成，金属硫蛋白又是自由基清除物中最强的一种。

“铬”在人体细胞内参与形成葡萄糖的耐量因子。这个因子能促使胰岛素发挥最大的生物效应。“压力”使人血糖血脂偏高，常与食品中缺铬有关。补“铬”可以降低血糖血脂，有助于消除头晕、困倦等压力现象，缓解压力。从本世纪40年代起科学家们就开始研究怎样给病人补铬，经过反复实验，人们发现铬被人体吸收后，不能马上被利用，而是在体内还要与体内的氨基酸进行结合形成氨基酸铬-葡萄糖耐量因子后才能被人体利用。本发明产生活性多肽及草酸齐墩果酸柠檬酸等螯合剂，与三价铬螯合反应，形成多肽--铬(Ⅲ)螯合物，及其含硒化合物、含锌化合物等，从而促进微量元素的转运和吸收。

本方以益气养阴滋补、活血通脉、提高脑部血液微循环流量和免疫力为治法，达到抗压力抗氧化防治肌萎缩的目的。配方中党参味甘、性平，具益气健脾、生津润肺镇静之效；人参益气生津以补脾肺，肺气旺则四脏之气则旺，气帅血行，另外，人参皂苷能够通过提高SOD、CAT等与抗自由基相关的酶的活性来增强机体对自由基的防御能力，与党参同为君药，协同配合起到益气养阴、滋补肝肾作用。酸枣仁味甘、性平，补肝、宁心、敛汗、生津，有中枢抑制作用，镇静催眠、镇痛、抗惊、降体温，抗心律失常和抗心肌缺血，抗缺氧、抗血小板凝结，增强免疫；刺五加：性温，味辛、微苦，益气健脾、补肾安神，辅助君药宁心安神，同类相求俱为臣药。地黄：性味甘苦，寒，清热凉血，养阴生津，抗氧化及抗衰老，护肝、诱导肝脏药物代谢酶，镇咳祛痰等作用；女贞子性凉，味甘、苦，滋补肝肾、明目乌发，有升高外周白细胞、增强网状内皮系统吞噬能力、增强细胞免疫和体液免疫的作用，对化疗或放疗所致的白细胞减少有升高作用，有强心、利尿及保肝作用，并有止咳、抗炎、促进免疫功能、抑制变态反应、预防动脉粥样硬化、防治肌萎缩、抗诱变等作用，两味与君臣药相配伍，使补而不滞，又具有养血生津的作用，二味相须配伍辅佐君臣药俱为佐药。枸杞子滋补肝肾、益精养血，含有丰富的胡萝卜素、维生素E、硒及黄酮类等活性物质，其中的枸杞多糖可显著降低实验动物脾匀浆LPO含量；昆布性寒，味咸，软坚散结、消痰、利水，能降低血脂，有明显的抗凝血作用，显著增强机体免疫功能，还有抗肿瘤、降血糖、松弛肠道平滑肌、抗辐射及促进造血等作用，能纠正缺碘引起的甲状腺机能不足，与枸杞子二味相随促进药力吸收，提高滋补效能，并与微量元素硒、铬、锌配伍，有机结合，使整体配方协同高效、补不碍胃，补而不滞，健脾通便，饮服安全，调和诸药共为使药。

本发明是根据中医药学对情绪压力的肌萎缩及其标本兼治机理的认识及治疗原则，参考现代药理研究成果及生物工程技术，从“药食同源”的植物药中筛选出益气养阴滋补、活血通脉、能提高脑部血液微循环流量和免疫力的药材，按中医养生保健理论“君臣佐使”组方，用现代先进微生物技术制取磷脂酰丝氨酸、谷胱甘肽·锌结合物、酸枣仁环肽、皂苷、黄酮，直接提供神经营养因子、激发免疫功能及代谢活动产生能量，阻止钙内流，有效降低自由基和兴奋性氨基酸毒性等有害物，提高脑摄氧能力及血流量、恢复记忆力，达到舒缓压力抗氧化防治肌萎缩的目的。

通过激光散射、透射电镜、X射线衍射光谱、荧光光谱等手段对制备所得的生物药剂进行表征，同时通过拉曼光谱、红外光谱、紫外可见光谱、纳米Zeta电位仪对化合物之间的相互作用进行了研究。结果表明铬(Ⅲ)能与多肽形成螯合物，与锌结合之间偶合稳定，硒氧键、锌氧键粒径分布均匀，药剂化学生物性能稳定。

本发明主要功能成分含量及功效分析：

(1)、磷脂酰丝氨酸：0.15—0.20g/100g；磷脂酰丝氨酸(PS)可影响脑内化学讯息的传递，并帮助脑细胞储存和读取资料，是维持大脑正常记忆力、反应和健康情绪的重要营养元素。

(2)、谷胱甘肽结合物：谷胱甘肽70～80mg/100g，硒0.3mg/100g、锌0.26mg/100g、铬0.35mg/100g；机体代谢产生的过多自由基会损伤生物膜，侵袭生命大分子，促进机体衰老，并诱发脑疲劳，引起肌萎缩。谷胱甘肽的主要生理功能是抗自由基，抗衰老，抗氧化，缓解肌萎缩。

(3)、神经肽：0.1-0.05㎎％；有神经营养因子样作用，降低兴奋性氨基酸毒性，对肌萎缩侧索硬化进行保护性治疗。

(4)、总皂苷：0.8％；人参皂苷是DNA,RNA的合成促进作用、脑中枢调节具有抑制中枢神经，降低细胞内钙，抗氧化，清除体内自由基和改善心肌缺血再灌注损伤等作用；催眠作用，镇痛、安神、解热、促进血清蛋白质合成作用。

(5)、总黄酮：0.9％；所含黄酮类化合物具有很强的抗氧化能力，能软化血管、降低血管脆性，改善微循环，可以降低过高的血脂，防治脑血管硬化。

本发明制备方法中通过向中药提取液中加入无机微量元素(亚硒酸钠和硫酸锌、吡啶甲酸铬)，再经微生物发酵培养修饰，有效地将无机硒、无机锌、无机铬转化成有机硒和有机锌有机铬结合物，并解析出活性多肽。该结合物是一种通过生物转化作用得到的半天然合成富硒富锌富铬皂苷、黄酮、多肽、氨基酸等，其结构中包含了特殊的硒氧键、锌氧键、铬氧键，具有良好的抗活性氧损伤的能力，在发挥抗氧化作用的同时，具有强大的抗压力功能，降低兴奋性氨基酸毒性，可缓解肌萎缩侧索硬化症。

具体实施方式

下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。

在本发明中，若非特指，所有的重量份、体积份的相对单位为千克、升，所有的设备和原料等均可从市场购得或是本行业常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。

实施例1

本发明物品是由下述重量份的原料制成的：

制备方法：⑴将人参、党参、女贞子、酸枣仁按上述配方比例混合粉碎，用75％乙醇(5倍量)回流提取2小时，重复提取一次，滤过醇提液备用，药渣分别保存；(2)将刺五加、生地黄、枸杞子、昆布及醇提后的药渣混合进行水煎2次(7倍水)，每次1.5小时处理，药液过滤；(3)把醇提药液、水提药液混合浓缩到1:4后接入酸性脂肪酶(0.2％)、酸性蛋白酶(0.1％)、酸性纤维素酶(0.1％)、酸性果胶酶(0.1％)，按上述配方比例分别加亚硒酸钠和硫酸锌、吡啶甲酸铬粉混悬液(强力搅拌(1300r/min))，在温度32-50℃、pH4-6、搅拌(80r/min)条件下发酵培养48小时,加热灭酶,离心过滤纯化(16000r/min离心机过两次)，取上清液，将药液浓缩到每人每天服用3次、每次20毫升的浓度，冷却；(4)调pH值4-6，及时灌装扎封，105℃流通蒸汽灭菌30分钟，得生物药剂。外观为褐色液体，有特色甜酸香味。

对比例1

按下述配方比称取原料

(1)将人参、丹参、女贞子、枸杞子、五味子、葛根、决明子、黄精、酸枣仁按上述配方比例混合粉碎，用75％乙醇(5倍量)回流提取1.2小时，重复提取一次，滤过醇提液备用，药渣分别保存；(2)药渣进行水煎2次(8倍水)，每次1.5小时处理，药液过滤；(3)把醇提药液、水提药液混合后接入高产肽菌株，即接入谷胱甘肽菌株，供压缩空气(供养气)，在温度25-28℃、pH6.5—7条件下进行液体深层发酵培养48小时，离心过滤纯化(除去杂质)，加热灭酶，将药液浓缩到每人每天服用3次、每次20毫升的浓度(药材：水为1:1)，冷却；(4)调pH值6-7，按上述配方比例加铬粉混悬液，强力搅拌2小时，再按上述配方比例加硒粉混悬液，强力搅拌2小时，及时灌装扎封，105℃流通蒸汽灭菌30分钟，即得。

对比例2

按下述配比称取原料

制备方法是：⑴将人参、丹参、女贞子、五味子、决明子、酸枣仁按上述配方比例混合粉碎，用75％乙醇(5倍量)回流提取2小时，重复提取一次，滤过醇提液备用，药渣分别保存；(2)将枸杞子、葛根、黄精及醇提后的药渣混合进行水煎2次(7倍水)，每次1.5小时处理，药液过滤；(3)把醇提药液、水提药液混合浓缩到1:4后接入酸性脂肪酶(0.2％)、酸性蛋白酶(0.1％)、酸性纤维素酶(0.1％)、酸性果胶酶(0.1％)，在温度32-50℃、pH4-5、搅拌(80r/min)条件下发酵培养48小时，加热灭酶，离心过滤纯化(16000r/min离心机过两次)，取上清液，将药液浓缩到每人每天服用3次、每次20毫升的浓度(药材：水为1:1)，冷却；(4)调pH值4-6，按上述配方比例加铬粉混悬液，强力搅拌(1300r/min)1.5小时，及时灌装扎封，105℃流通蒸汽灭菌30分钟，即得。

试验例1抗压力功能效果动物试验

为表明本药剂的抗压力功能效果，进行了如下实验：

(一)高架十字迷宫试验方法：

1、实验材料

(1)动物：SD大鼠，雄性，体重160±10g，随机分组，每组10只。

(2)分组：空白对照组、实施例1药物组、对比例1药物组、对比例2药物组、阳性对照药地西泮，灌胃给药，连续给药10天，第10天给药后1h测定。

2、测试方法

将大鼠置于迷宫中央，大鼠的头朝向其中一个开放臂，释放后即开始记录5min内大鼠在迷宫中进入开臂次数(open arm entry，OE)、在开臂停留时间(open arm time，OT)，结果见表1。

表1大鼠高架十字迷宫模型数据

	空白溶剂	阳性对照	实施例1	对比例1	对比例2
						OE	4.1±0.3	16.0±1.2	14.1±2.1	11.9±1.8	10.4±3.2
OT	31.3±2.3	145.4±6.7	123.8±4.3	102.5±5.9	98.6±5.1

从表1结果可以看出，与空白对照组相比，阳性对照组和本发明实施例1、对比例1、对比例2可明显增加大鼠OE和OT(P＜0.05)；同时与对比例1、对比例2组相比，本发明实施例1组可更好的增加大鼠OE和OT。实验结果表明本发明实施例1具有抗压力、抗焦虑作用。

(二)游泳实验方法和步骤：

1、实验材料

(1)动物：小鼠，雄性，体重20.5±0.8g，随机分组，每组10只。

(2)分组：空白对照组、实施例1药物组、对比例1药物组、对比例2药物组，灌胃给药，连续给药10天，第10天给药后1h测定。

2、测试方法

将实验动物置于一个强迫游泳实验系统的环境中(水中)，实验前一天让大鼠自由游泳2min以适应周围环境；测试时将其置于强迫游泳装置中，记录5min内状态，动物即表现出典型的“不动状态”，反映了一种被称之为“行为绝望状态”，这种行为绝望模型与抑郁症类似，记录不动时间(s)，同时测定游泳后血清尿素含量(mmol/L)、肝糖原含量(mg/100g)，结果见表2。

表2小鼠强迫游泳模型数据

	空白溶剂	实施例1	对比例1	对比例2
					不动时间(s)	85.3±2.3	27.5±3.5	56.2±3.6	49.6±6.2
血清尿素含量(mmol/L)	12.3±0.3	8.5±0.5	9.2±0.9	10.6±0.4
					肝糖原含量(mg/100g)	3.3±0.2	4.8±0.1	3.8±0.3	4.0±0.3

从表2结果可以看出，与空白对照组相比，阳性对照组和本发明实施例1、对比例1、对比例2可明显减少小鼠不动时间(P＜0.05)，降低血清尿素含量，增加肝糖原含量；同时与对比例1、对比例2组相比，本发明实施例1组可更好的减少小鼠不动时间，降低血清尿素含量，增加肝糖原含量。实验结果表明本发明实施例1具有抗抑郁作用。

(三)提高脑血流量试验

从脑血流量的角度观察了本发明舒缓压力的作用。我们采用栓线阻断大脑中动脉闭塞法(MCAO)建立大鼠局灶性脑缺血模型。将模型大鼠分为空白对照组、阳性对照复方丹参注射液、实施例1药物组、对比例1药物组、对比例2药物组，灌胃给药，连续给药10天。模型组和大、小剂量本合剂组及复方丹参注射液组，分别给予生理盐水和相应药物注射。分别记录动物颈动脉、椎动脉血流量，血压变化。连续记录3小时。实验结束，处死动物，开颅取出全脑称重，将全脑重量除以2，得一侧脑重，按公式计算脑血流量。，以脑组织含水量和脑梗塞面积百分比测定进行病理学检查，并用激光多普勒血流仪检测MCAO大鼠脑血流量，并将之与未阻断中动脉的假手术大鼠进行比较，脑血流量结果见表3。

脑血流量(mg/100g·min)＝(颈动脉血流量ml/min+椎动脉血流量ml/min)·100g/-侧脑重(g)

表3脑血流量数据

表3结果显示，模型组动物较假手术组动物出现明显的缺血性神经损伤症状，脑血流量明显减少。实施例1、对比例1、对比例2中药物均能改善脑缺血大鼠的行为学症状、减轻脑水肿、降低其脑梗塞面积和减轻缺血所致组织病理改变；相比于对比例1、对比例2，实施例1效果更好，可明显增加MCAO大鼠缺血部位的脑血流量。

试验例2抗氧化作用动物试验

1.材料

1.1动物 大鼠(初成年)50只，雌雄各半；初成年昆明种小鼠50只，雌雄各半。

1.2受试物 本发明产品，20ml/支口服液，按生药材1：1提取。

1.3光解水 紫外光解法VUV，λ＜180nm照射蒸馏水20min，光解水产生自由基H+OH→O₃

2.方法

对大鼠抗氧化作用：将大鼠随机分为7个组，每组10只(雌雄各半)。A组：为阴性对照组(蒸馏水)。B组：阳性对照组，灌光解水(1％)。C组：本发明产品10g/kg体重+光解水。D组：本发明产品5g/kg+光解水。E组：本发明产品2.5g/kg体重+光解水。F组：对比例1 10g/kg+光解水。G组：对比例2 10g/kg+光解水。除阴性对照组外以上4组连续灌胃10d，每只动物以100g体重灌胃1ml。10d后测试大鼠血液和肝组织中的SOD活性及MDA的含量。

3.结果与讨论

本发明产品对大鼠红细胞、肝匀浆夜中的SOD活性的影响，见表4。

表4

(n＝10,)a与A组比较P＜0.05，b与B组比较P＜0.05

由表4可见阳性对照组与阴性对照组进行比较有显著性差异(p＜0.01)，说明试验条件良好，脂质过氧化动物模型制造成功。高剂量组与隐形对照组比较也有显著性差异(P＜0.05)，说明本发明产品不但具有抗氧化作用而且SOD的活性高于阴性对照组。中、低剂量组与阴性对照组比较SOD的活性无显著差异(P＞0.05)，说明中、低试验组SOD的活性已恢复了正常组的水平。高、中、低三个剂量的SOD的活性与阳性对照组比较均有显著性差异。对比例1、2中的SOD的活性与阳性对照组比较均有显著性差异，但其效果明显不如本申请药物的高剂量组。本次试验结果提示本发明产品在2.5～10g/kg体重剂量范围内有增强SOD活性的作用。

以上实验结果证实，本发明具有抗氧化的功能作用。

试验例3抗压力功能效果人体试食试验

在试食前两组试食组(空白对照组和实施例1组)的各分量量和记忆商均衡的前提下，经人体30d的试食试验，试食实施例1组的指向记忆分量表的量表分显著高于空白对照组(P<0.05)；试食实施例1组受试者的指向记忆、无意义图形再认和人像特点回忆分量表的量表分较试食前均有非常显著的升高(P<0.05)；试食实施例1组的指向记忆和无意义图形再认分量表量表分的增加值显著高于对照组(P<0.05)。空白对照组试食组的无意义图形再认和人像特点回忆分量表的量表分较试食前亦有显著升高(P<0.05)。试食实施例1组受试者的试食后总量表分显著高于空白对照组(P<0.05)；幷较试食前有非常显著的升高(P<0.05)；试食实施例1组总量表分的增加值显著高于空白对照组(P<0.05)。试食实施例1组受试者的试食后记忆商显著高于空白对照组(P<0.05)；幷较试食前有非常显著的升高(P<0.05)，试食实施例1组记忆商的增加值显著高于空白对照组(P<0.05)。同时对照组受试者的总量表分和记忆商较试食前亦有显著升高。参考《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)对辅助改善记忆功能保健食品的判定标准可判定本发明实施例1组对抗压力功能人体试验试食结果阳性。

试验例4治疗肌萎缩侧索硬化症药效试验

采用肌萎缩侧索硬化SOD1G93A转基因阳性小鼠，雄性，4周龄，小鼠随机分为4组，每组10只。空白对照灌胃给予生理盐水、实施例1、对比例1、对比例2灌胃给药。各组动物每3日给药一次，连续给药10次。

各组分别记录以下数据：

小鼠生存时间：小鼠从出生到死亡的时间为其生存时间。小鼠生存时间以天为单位，统计各组小鼠生存时间的平均值和标准差进行比较。

小鼠运动能力(抓握力+滚筒爬行能力)：使用测力计(NS-TRM-M；NeuroscienceCorp.)测试小鼠抓握力；使用小鼠专用滚筒跑步机(SN-445，Neuroscience Corp.)检测180s内在转速为10rpm时小鼠从跑步机上跌落之前坚持的最长时间。

小鼠运动能力测定分别于首次给药前和末次给药后24h各测定1次。

小鼠抓握力数值以末次给药后测定值/首次给药前测定值×100％表示；

小鼠滚筒爬行能力数值以末次给药后测定值/首次给药前测定值×100％表示。

记录结果见表5。

表5、生存时间、抓握力、滚筒爬行能力数据

	生存时间d	抓握力％	滚筒爬行能力％
				空白对照组	43±2	35±2	24±4
实施例1组	52±1	56±3	39±1
				对比例1组	48±3	45±5	31±3
对比例2组	46±3	51±3	28±5

由上表5结果可知，对比例1、2的药物对肌萎缩侧索硬化模型小鼠的抓握力和滚筒爬行能力改善效果相近，无显著差异(P＞0.05)，但实验例1的药物与对比例1、2的药物相比可显著延长肌萎缩侧索硬化模型小鼠的生存时间。上述结果说明，本发明的药物可改善肌萎缩侧索硬化模型小鼠的抓握力和滚筒爬行能力，对小鼠生存时间也具有改善作用，具有延长小鼠生存时间的效果。

尽管发明人已经对本发明的技术方案做了较为详细的阐述和列举，应当理解，对于本领域一个熟练的技术人员来说，对上述实施例做出修改或者采用等同的替代方案，这对本领域的技术人员而言是显而易见，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (6)

1.一种抗压力抗氧化防治肌萎缩的生物药物，由下述重量配比的原料制成的：

酸枣仁3-15份、刺五加8-30份、人参2-20份、地黄10-30份、党参5-30份、女贞子6-26份、枸杞子8-20份、昆布5-20份、硒0.00001-0.002份、锌0.00005-0.002份、铬0.00002-0.001份。

2.根据权利要求1所述药物，由下述重量配比的原料制成的：

酸枣仁3-10份、刺五加15-25份、人参5-10份、地黄15-35份、党参5-15份、女贞子6-15份、枸杞子10-20份、昆布10-15份、硒0.00001-0.002份、锌0.00005-0.002份、铬0.00002-0.001份。

3.根据权利要求1-2所述药物，由下述重量配比的原料制成的：

酸枣仁8份、刺五加20份、人参5份、地黄20份、党参12份、女贞子9份、枸杞子10份、昆布12份、硒0.0006份、锌0.0009份、铬0.0004份。

4.根据权利要求1-3任一项所述药物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将人参、党参、女贞子、酸枣仁按上述配方比例混合粉碎，用乙醇回流提取，重复提取一次，滤过醇提液备用，药渣分别保存；

(2)将刺五加、地黄、枸杞子、昆布及醇提后的药渣混合进行水煎，药液过滤；

(3)把醇提药液、水提药液混合浓缩后接入脂肪酶(0.2％)、蛋白酶(0.1％)、纤维素酶(0.1％)、果胶酶(0.1％)，在温度32-50℃、pH5-6、搅拌(80r/min)条件下发酵培养48小时，加热灭酶，离心过滤纯化，取上清液，将药液浓缩到每人每天服用3次、每次20毫升的浓度，冷却；

(4)调pH值4-6，按上述配方比例分别加硒锌铬粉混悬液，强力搅拌1.5小时，及时灌装扎封，105℃流通蒸汽灭菌30分钟，即得。

5.根据权利要求1-3任一项所述药物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将人参、党参、女贞子、酸枣仁按上述配方比例混合粉碎，用乙醇回流提取，重复提取一次，滤过醇提液备用，药渣分别保存；

(2)将刺五加、地黄、枸杞子、昆布及醇提后的药渣混合进行水煎，药液过滤；

(3)把醇提药液、水提药液混合浓缩后接入脂肪酶(0.2％)、蛋白酶(0.1％)、纤维素酶(0.1％)、果胶酶(0.1％)，按上述配方比例分别加硒锌铬粉混悬液，强力搅拌1.5小时，在温度32-50℃、pH5-6、搅拌(80r/min)条件下发酵培养48小时，加热灭酶，离心过滤纯化，取上清液，将药液浓缩到每人每天服用3次、每次20毫升的浓度，冷却；

(4)调pH值4-6，及时灌装扎封，105℃流通蒸汽灭菌30分钟，即得。

6.根据权利要求1-3任一项所述药物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将人参、党参、女贞子、酸枣仁、刺五加、地黄、枸杞子、昆布按上述配方比例混合粉碎，进行水煎，药液过滤；

(2)把水提药液浓缩后接入脂肪酶(0.2％)、蛋白酶(0.1％)、纤维素酶(0.1％)、果胶酶(0.1％)，在温度32-50℃、pH5-6、搅拌(80r/min)条件下发酵培养48小时，加热灭酶，离心过滤纯化，取上清液，将药液浓缩到每人每天服用3次、每次20毫升的浓度，冷却；

(3)调pH值5-7，及时灌装扎封，105℃流通蒸汽灭菌30分钟，即得。