CN101948920B - 耐药基因pcr检测阳性对照模板、制备方法及试剂盒 - Google Patents

耐药基因pcr检测阳性对照模板、制备方法及试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN101948920B
CN101948920B CN 201010278429 CN201010278429A CN101948920B CN 101948920 B CN101948920 B CN 101948920B CN 201010278429 CN201010278429 CN 201010278429 CN 201010278429 A CN201010278429 A CN 201010278429A CN 101948920 B CN101948920 B CN 101948920B
Authority
CN
China
Prior art keywords
ndm
gene
sequence
seq
positive control
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN 201010278429
Other languages
English (en)
Other versions
CN101948920A (zh
Inventor
杨瑞馥
赵向娜
彭雁忠
覃俊杰
郭兆彪
蔡志明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN 201010278429 priority Critical patent/CN101948920B/zh
Publication of CN101948920A publication Critical patent/CN101948920A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101948920B publication Critical patent/CN101948920B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种耐药基因PCR检测阳性对照模板、制备方法及试剂盒，所述耐药基因为NDM-1，NDM-1基因序列为SEQ ID NO：1所示的序列。一种阳性模板的制备方法包括如下步骤：a)对NDM-1基因序列进行点突变，获取突变基因，所述突变基因序列含有SEQ ID NO：3所示的序列；b)将所述突变基因合成并克隆入质粒；c)将所述质粒线性化，得到所述阳性模板。通过设置阳性模板，可以快速准确的进行NDM-1检测；通过对NDM-1基因进行点突变，可以保证阳性模板不被正确转录和翻译，只能作为阳性对照的序列，从而能够保证生物安全。

Description

耐药基因PCR检测阳性对照模板、制备方法及试剂盒
技术领域
本发明涉及一种耐药基因PCR检测阳性对照模板、制备方法及试剂盒。
背景技术
随着抗生素的普遍应用，细菌耐药问题也日渐严重，随着2010年8月TheLancet Infectious Diseases杂志发表了一篇由印度、英国、瑞典、巴基斯坦和澳大利亚科学家联合研究报告，报道了抗生素抗性的一种新机制及其在印度、英国和巴基斯坦的播散情况，耐药性问题再一次惊醒世人抗生素滥用会终结我们依赖抗生素与细菌感染斗争的威力。
早在青霉素尚未临床应用的1940年，科学家就分离出了水解青霉素的酶，当时称为青霉素酶，在解析了青霉素为一种β-内酰胺结构的抗生素后，此酶也就重新命名为β-内酰胺酶。该酶按照功能和分子结构进行分类。根据功能特征分成群1～4，其中群2又分成亚群2a～2e、2f，2b进一步分成2be和2br两个亚群。根据该酶的核酸与蛋白序列进行分子分型，分为A～D 4个类型，分子型A、C和D是以丝氨酸为基础的作用机制，而B型或金属-β-内酰胺酶以锌指结构为基础的作用机制。群1是头孢菌素酶，分子型C，不被棒酸抑制；群2包括青霉素酶、头孢菌素酶或二者均有，均被棒酸抑制，属于分子型A和D，对应原始的TEM和巯基变异(sulfhydryl variable，SHV)基因；群3是金属酶，分子型B，不被棒酸抑制；群4是青霉素酶，没有分子型与之对应，不被棒酸抑制。新发现的NDM-1是金属蛋白酶，是一类新型具有广谱抗生素水解作用的β-内酰胺酶。
新德里金属-β-内酰胺酶(New Delhi metallo-beta-lactamase，NDM-1)基因介导的抗性是一种新报道的耐药新机制，NDM-1是一种新鉴定的对β-内酰胺抗生素具有广谱水解作用的一种酶，是编码碳青霉烯类酶(Carbapenamase)基因家族成员之一。NDM-1可以水解碳(杂)青霉烯类抗生素，以及头孢菌素和青霉素。携带该基因的细菌对几乎所有一线治疗重症感染的广谱抗生素都具有抗性，因此，被媒体称为“超级细菌”。该酶是质粒上blaNDM-1基因编码的，容易通过基因水平转移在细菌间传播。该抗性细菌虽然发现时间不到1年，但其已经扩散到英国、美国、比利时、巴基斯坦等国家，并且从肺炎克雷伯菌扩散到大肠杆菌和鲍曼不动杆菌。由于从其他国家分离的携带NDM-1的耐药菌株，患者都有到印度就医的历史，因此，推测表达NDM-1菌株是从印度起源的。国际旅行和患者享受多国医疗服务可能会导致NDM-1的快速扩散，且可能导致潜在的严重后果。
鉴于我国目前还没有关于携带NDM-1菌株的报道，所以需要加强监测。因为我国目前对外交往频繁，尤其是在一些印度和巴基斯坦人聚集的地区，更应密切监测；对于往来印度和巴基斯坦的人员也要监测，尤其是在当地有住院或就医历史的人员更要密切监测。
最简便的检测方法就是基于核酸体外扩增的聚合酶链反应(PolymeraseChain Reaction，PCR)，虽然NDM-1基因序列网上已经公布，在没有阳性对照模板的情况，会使得检测结果难以判定，而且，如果直接合成公布的基因，会造成合成基因对无抗性菌株的污染。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种能够保证生物安全的耐药基因PCR检测阳性对照模板、制备方法及试剂盒。
为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：一种耐药基因PCR检测阳性对照模板序列，所述耐药基因为NDM-1，所述序列含有SEQ ID NO：3所示的序列。所述序列可以含有SEQ ID NO：2所示的序列。
一种耐药基因PCR检测阳性对照模板的制备方法，所述耐药基因为NDM-1，NDM-1基因序列为SEQ ID NO：1所示的序列，包括如下步骤：
a)对NDM-1基因序列进行点突变，获取突变基因，所述突变基因序列含有SEQ ID NO：3所示的序列；
b)将所述突变基因合成并克隆入质粒；
c)将所述质粒线性化，得到所述阳性模板。
进一步的，所述突变基因序列含有SEQ ID NO：2所示的序列。
进一步的，所述步骤a)中，插入一段多克隆位点。
进一步的，所述多克隆位点包括多个内切酶酶切位点，所述酶切位点选自：BamHI、EcoRI、HindIII。
进一步的，所述步骤c)中，将所述质粒线性化后，再将所述质粒去磷酸化。
一种由所述制备方法制备的阳性对照模板。
一种阳性对照模板在NDM-1检测上的应用。
一种耐药基因PCR检测试剂盒，包括所述的阳性对照模板。
一种所述的试剂盒在NDM-1检测上的应用。
一种引物，所述引物用于检测一种耐药基因PCR检测阳性对照模板序列，所述引物含有下述至少一组：
A：NDM-P1-L：CGACAACGCATTGGCATAAG  SEQ ID NO：7
   NDM-P1-R：CTGGCAGCACACTTCCTATC  SEQ ID NO：8
B：NDM-P2-L：GGCGGAATGGCTCATCAC    SEQ ID NO：9
   NDM-P2-R：GGCAGCACACTTCCTATCTC  SEQ ID NO：10
C：NDM-P3-L：GATTGCCGAGCGACTTGG    SEQ ID NO：11
   NDM-P3-R：CTGAGCACCGCATTAGCC    SEQ ID NO：12
本发明的有益效果是：通过设置阳性模板，可以快速准确的进行NDM-1检测；通过对NDM-1基因进行点突变，可以保证阳性模板不被正确转录和翻译，只能作为阳性对照的序列，从而能够保证生物安全。
附图说明
图1是电泳图，其中，Lane 1：DL2000 marker；Lane 2：NDM-P1鉴定产物；Lane 3：NDM-P2鉴定产物；Lane 4：NDM-P3鉴定产物；Lane 5：阴性对照。
具体实施方式
下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。
本发明所提供的阳性对照模板制备方法是从网上获得NDM-1基因序列(FN396876)，将其编码密码子进行27处点突变(突变成终止密码子)并插入一段多克隆位点(便于对突变序列进行酶切分析)，然后将突变基因合成并克隆入质粒中，再将重组质粒线性化后作为阳性对照模板。这样，可以保证阳性模板不能被正确转录和翻译，只能作为阳性对照的序列，可以绝对保证生物安全。
本发明所提供的阳性对照模板制备方法，包括以下步骤：
1)从网上获得NDM-1基因序列(FN396876)并根据NDM-1基因序列设计三对PCR鉴定引物：
NDM-1基因序列：
ATGGAATTGCCCAATATTATGCACCCGGTCGCGAAGCTGAGCACCG
CATTAGCCGCTGCATTGATGCTGAGCGGGTGCATGCCCGGTGAAAT
CCGCCCGACGATTGGCCAGCAAATGGAAACTGGCGACCAACGGTT
TGGCGATCTGGTTTTCCGCCAGCTCGCACCGAATGT
Figure BDA0000026069120000042
GACATGCCGGGTTTCGGGGCAGTCGCTTCCAACG
GTTTGATCGTCAGGGATGGCGGCCGCGTGCTGGTGGTCGATACCGC
CTGGACCGATGACCAGACCGCCCAGATCCTCAACTGGATCAAGCAG
GAGATCAACCTGCCGGTCGCGCTGGCGGTGGTGACTCACGCGCATC
AGGACAAGATGGGCGGTATGGACGCGCTGCATGCGGCGGGGATTG
CGA
Figure BDA0000026069120000043
AACCAGCTTGCCCCGCAAGAGGG
GATGGTTGCGGCGCAACACAGCCTGACTTTCGCCGCCAATGGCTGG
GTCGAACCAGCAACCGCGCCCAACTTTGGCCCGCTCAAGGTATTTT
ACCCCGGCCCCGGCCACACCAGTGACAATATCACCGTTGGGATCGA
CGGCACCGACATCGCTTTTGGTGGCTGCCTGATCAAGGACAGCAAG
GCCAAGTCGCTCGGCAATCTCGGTGATGCCGACACTGAGCACTACG
CCGCGTCAGCGCGCGCGTTTGGTGCGGCGTTCCCCAAGGCCAGCAT
GATCCCCGATAGCCGCGCCGCAATCACTC
ATACGGCCCGCATGGCCGACAAGCTGCGCTGA(813bp，与SEQ ID
NO：1所示序列一致，其中下划线和着重号标注序列为鉴定引物)。相应的氨基酸序列为：
MELPNIMHPVAKLSTALAAALMLSGCMPGEIRPTIGQQMETGDQRFG
DLVFRQLAPNVWQHTSYLDMPGFGAVASNGLIVRDGGRVLVVDTAWT
DDQTAQILNWIKQEINLPVALAVVTHAHQDKMGGMDALHAAGIATYA
NALSNQLAPQEGMVAAQHSLTFAANGWVEPATAPNFGPLKVFYPGPG
HTSDNITVGIDGTDIAFGGCLIKDSKAKSLGNLGDADTEHYAASARAF
GAAFPKASMIVMSHSAPDSRAAITHTARMADKLR(270aa，即SEQ ID
NO：5所示序列)。
NDM-1基因PCR鉴定引物序列如表1所示：
表1NDM-1基因PCR鉴定引物
Figure BDA0000026069120000045
Figure BDA0000026069120000051
2)对NDM-1基因序列进行27处点突变(突变成终止密码子)并插入一段多克隆位点：
突变后的NDM-1基因序列：
TAGGAATTGCCCAATATTATGCACCCGGTCGCGTAGCTGAGCACCG
CATTAGCCGCTGCATAGATGCTGAGCGGGTGAATGCCCGGTGAAAT
CCGCCCGACGATTGGCCAGCAAATGTAAACTGGCGACCAACGGTTT
GGCGATCTGGTTTTCCGCCAGCTCGCATAGAATGT
Figure BDA0000026069120000052
GACTAGCCGGGTTTCGGGGCAGTCGCTTCCAACGG
TTAGATCGTCAGGGATGGCGGCCGCGTGCTGGTGGTCGATACCGCC
TAGACCGATGACCAGACCGCCCAGATCCTCAACTGA
Figure BDA0000026069120000054
Figure BDA0000026069120000055
GATCAAGCAGGAGATCAACCTGCCGGTCGCGCTGTAGGTGGTGACT
CACGCGCATCAGGACAAGATGGGCGGTTAGGACGCGCTGCATGCG
GCGGGGATTGCGA
Figure BDA0000026069120000056
AACCAGCTTGCCC
CGCAATAGGGGATGGTTGCGGCGTAACACAGCCTGACTTTCGCCG
CCAATGGCTAGGTCGAACCAGCAACCGCGCCCAACTTTGGCCCGCT
CAAGGTATTTTAACCCGGCCCCGGCCACACCAGTGACAATATCACC
GTTTGAATCGACGGCACCGACATCGCTTTTGGTGGCTGACTGATCA
AGGACAGCAAGGCCAAGTCGCTCGGCAATCTCGGTGATGCCGACA
CTGAGCACTAAGCCGCGTAAGCGCGCGCGTTTGGTGCGGCGTTCCC
CTAGGCCAGCATGATC
Figure BDA0000026069120000057
CCCGATAGCCGC
GCCGCAATCACTCATACGGCCCGCATGGCCGACAAGCTGCGCTGA(8
73bp，与SEQ ID NO：2所示序列一致，其中，斜体是插入的多克隆位点)
插入的多克隆位点中包含BamHI、EcoRI、HindIII等常见内切酶酶切位点，且这些酶切位点在天然NDM-1基因序列中均不存在。
突变后的NDM-1基因编码的氨基酸序列为：
*ELPNIMHPVA*LSTALAAA*MLSG*MPGEIRPTIGQQM*TGDQRFGDL
VFRQLA*NVWQHTSYLD*PGFGAVASNG*IVRDGGRVLVVDTA*TDDQ
TAQILN*PWLISDPNSSSVDKLAAALEIKQEINLPVAL*VVTHAHQDKM
GG*DALHAAGIATYANALSNQLAPQ*GMVAA*HSLTFAANG*VEPATA
PNFGPLKVF*PGPGHTSDNITV*IDGTDIAFGG*LIKDSKAKSLGNLGDA
DTEH*AA*ARAFGAAFP*ASMIVMSHSAPDSRAAITHTARMADKLR(*
表示突变后的密码子导致翻译提前终止，即SEQ ID NO：6所示序列)。可以看出突变后的NDM-1基因序列不能被正确转录和翻译。
当然，突变后的NDM-1基因序列也可以为如下序列：
TAGGAATTGCCCAATATTATGCACCCGGTCGCGTAGCTGAGCACCG
CATTAGCCGCTGCATAGATGCTGAGCGGGTGAATGCCCGGTGAAAT
CCGCCCGACGATTGGCCAGCAAATGTAAACTGGCGACCAACGGTTT
GGCGATCTGGTTTTCCGCCAGCTCGCATAGAATGT
Figure BDA0000026069120000062
GACTAGCCGGGTTTCGGGGCAGTCGCTTCCAACGG
TTAGATCGTCAGGGATGGCGGCCGCGTGCTGGTGGTCGATACCGCC
TAGACCGATGACCAGACCGCCCAGATCCTCAACTGA
Figure BDA0000026069120000063
ATCAAGCAG
GAGATCAACCTGCCGGTCGCGCTGTAGGTGGTGACTCACGCGCATC
AGGACAAGATGGGCGGTTAGGACGCGCTGCATGCGGCGGGGATTG
CGA
Figure BDA0000026069120000064
AACCAGCTTGCCCCGCAATAGGG
GATGGTTGCGGCGTAACACAGCCTGACTTTCGCCGCCAATGGCTAG
GTCGAACCAGCAACCGCGCCCAACTTTGGCCCGCTCAAGGTATTTT
AACCCGGCCCCGGCCACACCAGTGACAATATCACCGTTTGAATCGA
CGGCACCGACATCGCTTTTGGTGGCTGACTGATCAAGGACAGCAAG
GCCAAGTCGCTCGGCAATCTCGGTGATGCCGACACTGAGCACTAAG
CCGCGTAAGCGCGCGCGTTTGGTGCGGCGTTCCCCTAGGCCAGCAT
GATC
Figure BDA0000026069120000065
CCCGATAGCCGCGCCGCAATCACTC
ATACGGCCCGCATGGCCGACAAGCTGCGCTGA(与SEQ ID NO：3所示序列一致)
所述X表示0-100bp的核苷酸序列，所述核苷酸序列含有多克隆位点，所述多克隆位点可以包含BamHI、EcoRI、HindIII等常见内切酶酶切位点，
优选的，所述X表示序列：
CCATGGCTGATATCGGATCCGAATTCGAGCTCCGTCGACAAGCTTGC
GGCCGCACTCGAG(与SEQ ID NO：4所示序列一致)。
3)将步骤2)获得的突变NDM-1基因序列合成并克隆至pGEM-T EasyVector上，测序结果表明突变基因被正确合成并成功克隆至载体。
4)将步骤3)获得的重组质粒用限制性内切酶双酶切使其线性化，再用磷酸酶作用使其去磷酸化以防止自连接，作为PCR模板，用步骤1)获得的三对特异引物进行PCR鉴定。
突变后的NDM-1基因PCR产物大小如表2所示：
表2突变后的NDM-1基因PCR产物大小
  Primer ID   Product size(bp)
  NDM-P1   322
  NDM-P2   641
  NDM-P3   685
NDM-1基因PCR检测阳性对照模板效果评价
1.重组质粒的双酶切：将获得的重组质粒分别用Apa I和Nde I进行双酶切，Apa I酶切体系如表3所示：
表3质粒酶切体系1
  Apa I   1μl
  10×buffer   2μl
  重组质粒   ＜1μg
  无菌去离子水   up to 20μl
37℃反应3小时。用乙醇沉淀法纯化：加2.5倍无水乙醇，充分混匀。冻存(2小时以上)，4℃12000rpm离心20分钟后倒掉上清，晾干，用40μl无菌去离子水溶。然后用Nde I酶切，37℃反应3小时，65℃20分钟热失活。用切胶回收试剂盒回收酶切产物，并用20μL无菌去离子水洗两遍。
Nde I酶切体系如表4所示：
表4质粒酶切体系2
  Nde I   1μl
  10×buffer   2μl
  上步所得产物   ＜1μg
  无菌去离子水   up to 20μl
2.双酶切后的重组质粒的去磷酸化
去磷化体系如表5所示：
表5质粒去磷酸化体系
  热敏磷酸酶   1μl
  10×buffer   2μl
  上步所得产物   ＜1μg
  无菌去离子水   up to 20μl
37℃反应15分钟，65℃5分钟热失活。用产物纯化回收试剂盒回收，并用20μL无菌去离子水洗两遍。作为PCR鉴定用模板。
3.PCR反应体系：
Mix配制如表6所示：
表6Mix配制
  10×buffer(本室配制)   100μl
  上游引物(100uM)   1μl
  下游引物(100uM)   1μl
  dNTP Mix(20mmol/l)   5μl
PCR鉴定：首先95℃变性5分钟，然后按下面循环扩增，循环参数为95℃30秒，58℃退火40秒，72℃延伸40秒，30个循环，最后一步72℃延伸5分钟。反应体系如表7所示：
表7PCR鉴定反应体系
  Mix   3.0μl
  模板   20ng
  Taq(5U/μl)   0.2μl
  无菌去离子水   up to 30μl
取PCR产物7μl，经1.5％琼脂糖凝胶电泳(1×TAE电泳缓冲液)分析扩增片段大小，如图1所示。
以上内容是结合具体的实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
Figure IDA0000026069180000011
Figure IDA0000026069180000021
Figure IDA0000026069180000031
Figure IDA0000026069180000041
Figure IDA0000026069180000061
Figure IDA0000026069180000071
Figure IDA0000026069180000081

Claims (3)

1.一种耐药基因PCR检测阳性对照模板序列，所述耐药基因为NDM-1基因，所述序列含有SEQ ID NO:2所示的序列。
2.一种耐药基因PCR检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的阳性对照模板。
3.一种NDM-1基因PCR鉴定引物，所述引物含有下述至少一组：
A：NDM-P1-L：CGACAACGCATTGGCATAAG    SEQ ID NO:7
   NDM-P1-R：CTGGCAGCACACTTCCTATC    SEQ ID NO:8
B：NDM-P2-L：GGCGGAATGGCTCATCAC      SEQ ID NO:9
   NDM-P2-R：GGCAGCACACTTCCTATCTC    SEQ ID NO:10
C：NDM-P3-L：GATTGCCGAGCGACTTGG      SEQ ID NO:11
   NDM-P3-R：CTGAGCACCGCATTAGCC      SEQ ID NO:12。
CN 201010278429 2010-09-10 2010-09-10 耐药基因pcr检测阳性对照模板、制备方法及试剂盒 Expired - Fee Related CN101948920B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 201010278429 CN101948920B (zh) 2010-09-10 2010-09-10 耐药基因pcr检测阳性对照模板、制备方法及试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 201010278429 CN101948920B (zh) 2010-09-10 2010-09-10 耐药基因pcr检测阳性对照模板、制备方法及试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101948920A CN101948920A (zh) 2011-01-19
CN101948920B true CN101948920B (zh) 2013-05-08

Family

ID=43452545

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN 201010278429 Expired - Fee Related CN101948920B (zh) 2010-09-10 2010-09-10 耐药基因pcr检测阳性对照模板、制备方法及试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101948920B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016094607A3 (en) * 2014-12-12 2016-08-11 Elitechgroup B.V. Methods and compositions for detecting antibiotic resistant bacteria

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102146452B (zh) * 2011-01-24 2013-02-06 中国人民解放军疾病预防控制所 超级细菌ndm-1基因荧光定量pcr检测的引物、探针及其应用
CN102146453B (zh) * 2011-01-24 2013-11-06 北京金豪制药股份有限公司 超级细菌ndm-1基因荧光定量pcr检测试剂盒
CN102181543B (zh) * 2011-04-08 2013-06-05 北京爱普益生物科技有限公司 用于检测blaNDM-1基因的引物、探针、试剂盒及其检测方法
CN102757950A (zh) * 2011-04-25 2012-10-31 天津市国际生物医药联合研究院 超级细菌新德里金属依赖型β-内酰胺酶NDM-1的表达纯化及β-内酰胺酶NDM-1的晶体结构
CN102154506B (zh) * 2011-04-28 2013-04-03 中国科学院微生物研究所 快速检测ndm-1基因的专用引物及其应用
CN102199669B (zh) * 2011-04-28 2013-04-03 中国科学院微生物研究所 辅助检测ndm-1基因的专用引物及其应用
CN102181565B (zh) * 2011-05-12 2012-12-19 吴兴海 超级细菌荧光pcr快速检测引物及试剂盒
CN102242197B (zh) * 2011-05-19 2013-05-22 中国人民解放军疾病预防控制所 用于检测ndm-1基因的lamp试剂盒及其专用引物
CN102220433B (zh) * 2011-05-20 2013-04-24 中国科学院武汉病毒研究所 一种细菌中耐药基因新德里β-内酰胺酶的快速检测方法
CN102242210B (zh) * 2011-07-08 2013-03-13 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 环介导等温扩增超级细菌ndm-1基因的引物及检测超级细菌ndm-1基因的试剂盒及检测方法
JP2021158990A (ja) * 2020-03-31 2021-10-11 東洋紡株式会社 肺炎マイコプラズマ核酸の２３Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の検出において使用するための陽性コントロール試薬

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Characterization of a New Metallo-beta-Lactamase Gene, bla(NDM-1), and a Novel Erythromycin Esterase Gene Carried on a Unique Genetic Structure in Klebsiella pneumoniae Sequence Type 14 from India;Dongeun Yong 等;《ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY》;20091231;第53卷(第12期);5046–5054 *
Deshpande, Payal 等.New Delhi Metallo-beta lactamase (NDM-1) in Enterobacteriaceae: treatment options with carbapenems compromised.《The Journal of the Association of Physicians of India》.2010,第58卷147-149.
Dongeun Yong 等.Characterization of a New Metallo-beta-Lactamase Gene, bla(NDM-1), and a Novel Erythromycin Esterase Gene Carried on a Unique Genetic Structure in Klebsiella pneumoniae Sequence Type 14 from India.《ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY》.2009,第53卷(第12期),5046–5054.
Emergence of a new antibiotic resistance mechanism in India, Pakistan, and the UK: a molecular, biological, and epidemiological study;K K Kumarasamy 等;《Lancet Infect Dis》;20100811;第10卷;597-602 *
K K Kumarasamy 等.Emergence of a new antibiotic resistance mechanism in India, Pakistan, and the UK: a molecular, biological, and epidemiological study.《Lancet Infect Dis》.2010,第10卷597-602.
New Delhi Metallo-beta lactamase (NDM-1) in Enterobacteriaceae: treatment options with carbapenems compromised;Deshpande, Payal 等;《The Journal of the Association of Physicians of India》;20100331;第58卷;147-149 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016094607A3 (en) * 2014-12-12 2016-08-11 Elitechgroup B.V. Methods and compositions for detecting antibiotic resistant bacteria
US9988670B2 (en) 2014-12-12 2018-06-05 Elitechgroup B.V. Methods and compositions for detecting antibiotic resistant bacteria

Also Published As

Publication number Publication date
CN101948920A (zh) 2011-01-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101948920B (zh) 耐药基因pcr检测阳性对照模板、制备方法及试剂盒
Poyart et al. Rapid and accurate species-level identification of coagulase-negative staphylococci by using the sodA gene as a target
Rodríguez-Martínez et al. Molecular epidemiology and mechanisms of carbapenem resistance in Pseudomonas aeruginosa
Vaneechoutte et al. Naturally transformable Acinetobacter sp. strain ADP1 belongs to the newly described species Acinetobacter baylyi
Lemon et al. Comparative analyses of the bacterial microbiota of the human nostril and oropharynx
Senesi et al. Molecular characterization and identification of Bacillus clausii strains marketed for use in oral bacteriotherapy
Marchese et al. Characterization of FOX-3, an AmpC-type plasmid-mediated β-lactamase from an Italian isolate of Klebsiella oxytoca
Jagielski et al. cytb as a new genetic marker for differentiation of Prototheca species
CN108753772A (zh) 基于CRISPR/Cas技术敲除CAPNS1基因的人神经母细胞瘤细胞系的构建方法
Abdelbaqi et al. Development of a real-time fluorescence resonance energy transfer PCR to detect Arcobacter species
Moradi et al. Screening and isolation of powerful amylolytic bacterial strains
Papalia et al. OXA-258 from Achromobacter ruhlandii: a species-specific marker
CN110592049A (zh) 一种黑曲霉酯水解酶AnCu3、编码基因及其在水解DEHP中的应用
CN101363799A (zh) 结核病用药评估试剂盒
CN107227284A (zh) 一种发酵小分子透明质酸的重组兽疫链球菌
Raskine et al. Novel plasmid-encoded class C β-lactamase (MOX-2) in Klebsiella pneumoniae from Greece
US20240076705A1 (en) Lambda-carrageenase mutant ouc-cgla-dpqq and application thereof
Takeuchi et al. Structural gene and strain specificity of a novel cysteine protease produced by Staphylococcus aureus isolated from a diseased chicken
CN104293925B (zh) 用于快速检测β-内酰胺酶耐药基因的多重PCR引物组
Liu et al. Lb2Cas12a and its engineered variants mediate genome editing in human cells
CN115948363B (zh) Tn5转座酶突变体及其制备方法和应用
Iacobino et al. Structure and genetic content of the megaplasmids of neurotoxigenic Clostridium butyricum type E strains from Italy
CN103088146B (zh) 一种检测含有kpc-15基因肺炎克雷伯菌的pcr试剂盒
CN102080093B (zh) 一种突变蛇毒纤溶酶基因及其制备方法
Melkerson-Watson et al. Integrated genomic map from uropathogenic Escherichia coli J96

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20130508

Termination date: 20130910