CN101947206B - 重组促胰岛素分泌肽药物微球的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明为一种重组促胰岛素分泌肽药物微球的制备方法，先将聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于二氯甲烷溶液中，然后将重组促胰岛素分泌肽的微粉加入上述溶有聚乳酸-羟基乙酸共聚物的二氯甲烷有机溶剂中，冰水浴高速搅拌，然后超声混悬，将所得混悬液加入到PVA水溶液中，高速搅拌乳化，并将其立即用蒸馏水稀释，低速搅拌，离心收集微球，蒸馏水洗涤，冷冻干燥，即得重组促胰岛素分泌肽药物微球。本发明制备的缓释药物剂型延长了重组促胰岛素分泌药物在体内的半衰期，同时提高了药物活性。
Description
技术领域
本发明属于制药领域，尤其涉及一种重组促胰岛素分泌肽药物微球的制备方法。
背景技术
促胰岛素分泌肽是一种能够促进胰岛β细胞分泌胰岛素功能的活性多肽，早期是在非洲毒蝎中发现具有生物学活性的多肽，由于这个多肽具有非常特异性的促进胰岛β细胞分泌胰岛素，对治疗由于胰岛素缺乏而引起的糖尿病患者具有非常显著的疗效，但是由于活性多肽稳定性差，体内半衰期短，生物利用度低，对于临床治疗由一定的局限性。采用药物缓释传速系统是目前最有实际意义的方法，应用体内可生物降解的高分子材料制备成微球，通过微球内部的孔道以及高分子材料的融蚀降解来调控在体内外的释放，从而提高生物利用度，达到治疗的目的。国内外有许多以聚乳酸类高分子材料聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为微球形成剂广泛应用于药物给药系统的研究。PLGA具有可生物降解性、无毒、无免疫原性、组织相容性好等优点，经美国FDA批准作为注射用微球、微囊、植入剂等制剂的材料。PLGA通过材料的表面融蚀(surface erosion)和内部蚀解(bulkerosion)两种机制控制药物释放。通过调节PLGA分子中乳酸(LA)和羟基乙酸(GA)的比例和分子量(Mw)的大小，得到不同生物降解速率的载体材料。
发明内容
本发明的目的在于针对现有促胰岛素分泌肽药物剂型存在着体内半衰期短、生物利用度低的问题，提供一种能使促胰岛素分泌肽药物的生物利用度得到提高的重组促胰岛素分泌肽药物微球的制备方法。
本发明的重组促胰岛素分泌肽药物微球的制备方法，是采用水/油/固法即S/O/W法制备重组促胰岛素分泌肽药物微球。
作为较佳方案，本发明的方法包括如下步骤：
(1)先将聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于二氯甲烷溶液中，聚乳酸-羟基乙酸共聚物的浓度为180-200mg/ml二氯甲烷；
(2)然后将聚乳酸-羟基乙酸共聚物重量的1-2％的重组促胰岛素分泌肽的微粉加入上述溶有聚乳酸-羟基乙酸共聚物的二氯甲烷有机溶剂中，冰水浴800-1000rpm高速搅拌8-10分钟，然后超声混悬10-15分钟，获得混悬液；
(3)将所得混悬液加入到聚乙烯醇水溶液中，混悬液与聚乙烯醇水溶液的重量比为1∶(1-5)，800-1000rpm高速搅拌乳化8-10分钟，并将其立即用蒸馏水以(1∶10)-(1∶40)的体积比稀释，400-500rpm低速搅拌3-4h，离心收集微球，蒸馏水洗涤3次，冷冻干燥24小时。
所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物优选平均分子量为14,000。
作为优选方案，所述重组促胰岛素分泌肽的蛋白微粉的用量为聚乳酸-羟基乙酸共聚物重量的1-2％；所述聚乙烯醇水溶液的浓度为2-4％。采用优选方案制得的重组促胰岛素分泌肽药物微球的载药量为1-2％，粒径为43.12±1.86(见附图2)，包封率为46.9％。
本发明是用体内可生物降解的高分子材料聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体制备重组促胰岛素分泌肽微球，发明了以重组促胰岛素分泌肽为药物的S/O/W(水/油/固)法制备重组促胰岛素分泌肽药物微球，制备的载药微球形态均匀，药物包封率可达46.9％。经差示热扫描分析，重组促胰岛素分泌肽载药微球玻璃化温度Tg45.05℃而空白微球的Tg是35.54℃。本发明通过微球内部的孔道以及高分子材料的融蚀降解来调控重组促胰岛素分泌肽在体内的释放速度，同时提高了药物活性，达到治疗糖尿病的目的。
本发明的主要特征为：
(1)本发明采用S/O/W法制备重组促胰岛素分泌肽药物微球，使用干粉药物无水一步乳化的方法，避免了蛋白质类药物在具有两亲性油水界面容易聚集、变性，提高了药物的稳定性，粒径较易控制，包封率高，保持了蛋白质的生物学活性。
(2)本发明制备的微球其突释效应均在10％左右，体外35天的累积释放，因此延长了药物在体内的半衰期(见附图3)。
(3)多肽在无水的情况下，三维结构得不到伸展，而使多肽的结构受外界的影响较小。
附图说明
图1是实施例一和实施例二制备的重组促胰岛素分泌肽药物微球在光学显微镜下观察的微球形态图。
图2是实施例一和实施例二制备的重组促胰岛素分泌肽药物微球经激光粒度分析仪测定的粒径分布曲线。
图3是实施例一和实施例二制备的重组促胰岛素分泌肽药物微球的体外释放曲线。
具体实施方式
以下实施例均是采用S/O/W法制备重组促胰岛素分泌肽药物微球。具体如下所述。
实施例一：
先将1.8gPLGA溶于10ml二氯甲烷溶液12小时中，将聚乳酸-羟基乙酸共聚物重量的2％的重组促胰岛素分泌肽的微粉0.036g加入到溶有PLGA的有机溶剂二氯甲烷中，冰水浴800rpm高速搅拌10分钟，然后超声混悬10分钟，获得混悬液，将混悬液加入到浓度为4％的PVA冰水溶液12ml中，冰水浴800rpm高速搅拌乳化10分钟，并将其立即用500ml蒸馏水稀释，400rpm低速搅拌3小时，离心收集微球，蒸馏水洗涤3次，冷冻干燥24小时，即得重组促胰岛素分泌肽药物微球，也称重组促胰岛素分泌肽载药微球，见附图1。
实施例二：
先将2.0gPLGA溶于10ml二氯甲烷溶液12小时中，将聚乳酸-羟基乙酸共聚物重量的1％的重组促胰岛素分泌肽的微粉0.02g加入溶有PLGA的有机溶剂二氯甲烷中，冰水浴1000rpm高速搅拌8min，超声混悬15分钟，获得混悬液，将混悬液加入到浓度为2％的PVA水溶液24ml中，1000rpm高速搅拌乳化8min，并将其立即用600ml蒸馏水稀释，500rpm低速搅拌4h，离心收集微球，蒸馏水洗涤3次，冷冻干燥24h，即得重组促胰岛素分泌肽载药微球(见附图1)。
上述实施例中：PLGA的GA＝50∶50，粘度为0.19dl/g，Mw＝14,000，购自美国Birmingham公司。重组促胰岛素分泌肽的微粉购自北京启维益成科技有限公司。聚乙烯醇(PVA)购自美国Birmingham公司。
上述实施例制得的重组促胰岛素分泌肽药物微球的载药量为1-2％，粒径为43.12±1.86(见附图2)，包封率为46.9％。
Claims (2)
1.一种重组促胰岛素分泌肽药物微球的制备方法，其特征在于：采用S/O/W法即水包油包固的方法制备重组促胰岛素分泌肽药物微球，包括如下步骤：
(1)先将聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于二氯甲烷溶剂中，聚乳酸-羟基乙酸共聚物的浓度为180-200mg/ml二氯甲烷；
(2)然后将聚乳酸-羟基乙酸共聚物重量的1-2％的重组促胰岛素分泌肽的蛋白微粉加入上述溶有聚乳酸-羟基乙酸共聚物的二氯甲烷有机溶液中，冰水浴800-1000rpm高速搅拌8-10分钟，然后超声混悬10-15分钟，获得混悬液；
(3)将所得混悬液加入到聚乙烯醇水溶液中，混悬液与聚乙烯醇水溶液的重量比为1∶(1-5)，800-1000rpm高速搅拌乳化8-10分钟，并将其立即用蒸馏水以(1∶10)-(1∶40)的体积比稀释，400-500rpm低速搅拌3-4h，离心收集微球，蒸馏水洗涤3次，冷冻干燥24小时；
所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物的平均分子量为14,000；
所述聚乙烯醇水溶液的浓度为2-4％。
2.根据权利要求1所述的重组促胰岛素分泌肽药物微球的制备方法，其特征在于：所述重组促胰岛素分泌肽药物微球的载药量为1-2％，粒径为43.12±1.86μm，包封率为46.9％。
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