CN101940180A - 一种斑节对虾育苗方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种斑节对虾的育苗方法,具体步骤如下:(1)制备蛭弧菌蛭质体菌液;(2)在育苗池中投放蛭弧菌蛭质体菌液,使海水中蛭弧菌蛭质体含量达到101pfu/mL以上,曝气5-12h;(3)将斑节对虾无节幼体以6~12万尾/m3的密度投入上述育苗池中;(4)育苗过程中,定期投喂饵料,幼体投放后至少每隔5天投放一次蛭弧菌蛭质体菌液,浓度在10pfu/mL以上;待仔虾发育到15天时或仔虾体长全部达到1厘米以上时,即得到斑节对虾虾苗。本发明通过在水质处理及饵料中投放蛭弧菌蛭质体菌液,再配合科学的育苗质量管理可有效减少育苗过程中的换水次数,甚至不换水,来提高虾苗的出产率,并提高虾苗成活率和免疫力。
Description
技术领域
本发明属于对虾养殖育苗技术领域,涉及一种使用蛭弧菌蛭质体菌液进行斑节对虾育苗,以净化水质、改善养殖环境、提高育苗成活率和虾苗免疫力、符合节能减排要求的方法。
背景技术
斑节对虾(Penaeus monodon)俗称鬼虾、草虾、花虾、竹节虾、斑节虾、牛形对虾,联合国粮农组织通称大虎虾。由于其适应性强、生长快、个体大已成为世界重要的养殖对象,在养殖虾产量中居首位。
近十几年来,我国集约化、高密度斑节对虾养殖业得到了迅猛发展,然而随着养殖规模的扩大,各种问题也日趋严重,诸如营养不良、病害增多引起的抗生素滥用以及养殖水体污染等,都成为养虾业可持续发展的限制因子。在斑节对虾育苗过程中,幼体患病时有发生,近年来,由于海区受到环境污染,近岸水质不稳定,斑节对虾育苗常因暴发虾病流行而造成大面积减产。引起斑节对虾虾苗发病的原因很多,有生物因素的,如病毒、细菌、真菌、原生动物、附着性藻类;有非生物因素的,如水质、水温、光照、营养等。
微生态制剂有抗病、促生长的作用,是协调人与自然的关系,促进水产养殖业健康发展的有效途径。蛭弧菌是寄生于其他细菌,并能导致宿主细菌裂解的一类细菌。比一般细菌小,能通过细菌滤器,有类似噬菌体的作用。是一种很有前景的可用来消除养殖水体中的致病菌,提高水产养殖成活率的微生态制剂。
蛭弧菌的生活史可分为脱离宿主细菌、具有鞭毛、自由游泳的游泳体状态和在宿主细菌内生长发育的蛭质体状态。当游泳体蛭弧菌入侵宿主细胞后,宿主细胞的呼吸作用(respiration)很快被停止,但蛭弧菌并不改变宿主细胞的表面结构,使原宿主仍具有抗原作用,因此不影响宿主的免疫原性,可刺激生物体,产生免疫应答反应。已有的研究表明,作为一种有益微生物制剂,无论是在食品工业还是在(海洋)水产养殖等领域,蛭弧菌的应用均是安全的。例如:在国外,Lenz and Hespell(1978)研究发现,蛭弧菌及对动物及人的细胞不具侵染性[Lenz R.W.,Hespell R.B.Attempts to grow bedellovibriosmicurgically-injected into animal cells.Archives of Microbiology,1978,119(3):245-248]。在国内,林茂等(2006)研究了蛭弧菌对鱼类细胞的作用,发现它对鱼类细菌没有侵染作用[林茂,杨先乐,薛晖,曹海鹏,邱军强。蛭弧菌BDH21 02对鱼类细胞及病原菌的作用。微生物学通报,2006,33(1):7-11]。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的不足,通过开发适合于斑节对虾育苗过程中防治斑节对虾种苗病害,提高免疫力的育苗方法,提供一种能培育出健康、优质、存活率高且符合节能减排要求的斑节对虾的育苗方法。
为了解决上述问题,本发明通过以下技术方案实现:
一种斑节对虾的育苗方法,其特征在于,具体步骤如下:
(1)制备蛭弧菌蛭质体菌液,其中,蛭弧菌菌株为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05,由中国典型培养物保藏中心保藏,其简称为CCTCC,保藏编号为:CCTCC NO:M 209172,保藏日期为2009年8月7日;
(2)在育苗池中投放蛭弧菌蛭质体菌液,使海水中蛭弧菌蛭质体含量达到101pfu/mL以上,曝气5-12h;
(3)将斑节对虾无节幼体以6~12万尾/m3的密度投入上述育苗池中;
(4)育苗过程中,定期投喂饵料,幼体投放后至少每隔5天投放一次蛭弧菌蛭质体菌液,使海水中蛭弧菌蛭质体浓度在10pfu/mL以上;待仔虾发育到15天时或仔虾体长全部达到1厘米以上时,即得到斑节对虾虾苗。
优选地,步骤(2)和(4)所述蛭弧菌蛭质体的浓度为101~107pfu/mL。
优选地,步骤(3)中所述斑节对虾无节幼体的培育方法为:
挑选出活力良好,虾体无损伤,性腺成熟度好的亲虾放入产卵槽,每一产卵槽放入亲虾1~2尾,产卵槽水深保持70~90cm,并微量充气;及时清除水槽周围的浅橙红色且带有腥味的产卵粘稠物;将产卵后的亲虾移出,让卵继续在产卵槽中孵化,孵化时增大充气量,水温保持28~30℃,盐度28~33‰,卵孵化后要彻底清洁一次,吸出池底污物及未孵化出的卵子,计算出斑节对虾无节幼体数量,并根据无节幼体数量的多少选取优质健康的无节幼体移入育苗池。所述产卵槽中投放蛭弧菌蛭质体菌液,使产卵槽的海水中蛭弧菌蛭质体含量达到101pfu/mL以上。
优选地,所述海水经砂滤和沉淀处理,且育苗过程中海水全程不换。
优选地,步骤(3)所述蛭弧菌蛭质体菌液的投放间隔为5~15天,使水中的蛭弧菌蛭质体浓度在101~107pfu/mL。
优选地,步骤(4)所投喂的饵料先用浓度101~107pfu/mL蛭弧菌蛭质体菌液浸泡15~45min。
优选地,步骤(4)所述定期投喂饵料是从溞状幼体开始投喂配合饵料,每天投喂8次;在溞状幼体中加投单胞藻和轮虫;在糠虾期幼体中投单胞藻,后期投卤虫无节幼体;仔虾生长期投卤虫无节幼体。
优选地,步骤(4)所述育苗过程中的条件控制:盐度幼体前期为28~33‰,后期逐渐降低到14~25‰;水温在26~31℃,pH值7.8~8.7;连续充气并随幼体发育充气量逐渐增加;溞状幼体期间忌直射、强光,以免使幼体弯曲,应保持光照强度在203.8~305.7lx;在糠虾幼体之后逐渐加强光照强度,到仔虾期后可让太阳光直接照射,以锻炼其对外界环境的适应力。
优选地,步骤(4)所述充气量控制为:无节幼体期间充气使水面呈微波状,溞状幼体期微沸腾状,糠虾幼体期沸腾状;仔虾期后,气量加到最大至强沸腾状;所述光线控制为:在溞状幼体期间弱光照射;在糠虾幼体之后逐渐加强光照强度,到仔虾期后,采用太阳光直接照射。
优选地,所述斑节对虾育苗的蛭弧菌蛭质体菌液采用如下方法制备:
所述的蛭质体通过以下方法得到:在含有宿主菌副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)的DNB(dilute nutrient broth)液体培养基(营养肉汤0.8g,酪蛋白酸水解物0.5g,酵母精提物0.1g,溶于1000ml蒸馏水中,pH值为7.2~7.6)中接入蛭弧菌BDFM05(CCTCC M209172),于20~35℃、150~300rpm培养36~48h,培养经4℃6000~8000rpm离心15~20min后,去除含蛭弧菌游泳体的上清液,沉淀即是蛭质体;所述蛭质体优选用DNB液体培养基(营养肉汤0.8g,酪蛋白酸水解物0.5g,酵母精提物0.1g,溶于1000ml蒸馏水中,pH值为7.2~7.6)、水、生理盐水或0.2mol/L pH值为7.2~7.6的磷酸盐缓冲液悬浮,即得到蛭弧菌蛭质体菌液。
本发明与现有方法相比具有以下优点:
1、本发明所述的蛭弧菌蛭质体菌液在斑节对虾育苗中效果显著
本方案于实际使用,蛭弧菌蛭质体菌液的效果明显好于目前常规工业育苗方式。且使用蛭弧菌蛭质体菌液,与游泳体相比,蛭质体具有制备、保存更为方便,环境耐受力强,杀菌作用时间更久等优点。
2、本发明所述的蛭弧菌蛭质体菌液在斑节对虾育苗中安全性好
蛭弧菌蛭质体可侵染、裂解宿主细菌的特性使之适合作为抑制或清除生物体及其环境中致病菌的生物净化剂,且其在裂解完宿主细菌后,会因饥饿而自动消亡,从而克服了抗生素滥用带来的副作用和常规消毒剂的不利影响。同时,已有研究已证明,蛭弧菌对人等无毒无害。
3、本发明的方法能净化并促进水质,防止常规方法的残留。
用蛭弧菌蛭质体对对虾育苗的水体和饵料进行处理,可有效裂解消除水体中可能产生斑节对虾种苗病害的细菌,同时防止常规使用的NaClO、漂白粉等造成的氯残留,以及使用土霉素造成的抗生素残留。
4、本发明的方法能有效提高育苗成活率
自国内开始斑节对虾养殖以来,育苗成活率一直是一个技术瓶颈限制着斑节对虾养殖的发展,本发明可有效解决这一问题,使育苗存活率从原来的33.7%提高到46.1%以上。
5、本发明的方法可有效提高种苗免疫力
蛭弧菌蛭质体菌液可调节虾苗自身的菌系,维护肠道系统环境,促进免疫系统的发育,激活内源性酶作用,从而增强苗种的体质。蛭弧菌蛭质体潜在灭活疫苗的功能也可刺激虾苗产生免疫应答反应,有效预防斑节对虾虾苗病害的产生,大大提高育苗成活率。
6、本发明方案全程不用换水和添水,有效避免了由于换水带来的病害。且减少了污水的排放,降低对环境的影响,是一种绿色、环保、低碳的新育苗技术。
附图说明
图1为实施例免疫因素:酚氧化酶(Phenoloxidase,PO)检测结果;
图2为实施例免疫因素:超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)检测结果;
图3为实施例免疫保护率(RPS)检测结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步具体详细描述,但本发明的实施方式不限于此,对于未特别注明的工艺参数,可参照常规技术进行。
实施例
一、实验分组
实验分A.B.C.D四大组,每组均设2个平行对照。其中:
A组(对照组):
A1:按现有的工业育苗方法实施。
A2:按本发明方案实施但全程不用蛭弧菌蛭质体菌液浸泡饵料和泼洒于水体
B组(蛭弧菌蛭质体菌液浸泡饲料组)
B1:全程用101pfu/mL蛭弧菌蛭质体菌液浸泡所有饵料;
B2:全程用103pfu/mL蛭弧菌蛭质体菌液浸泡所有饵料;
B3:全程用105pfu/mL蛭弧菌蛭质体菌液浸泡所有饵料;
B4:全程用107pfu/mL蛭弧菌蛭质体菌液浸泡所有饵料。
C组(蛭弧菌蛭质体菌液泼洒于水体组)
C1.1~C1.3:用101pfu/mL蛭弧菌蛭质体菌液均匀泼洒于水体中,幼苗培育期分别间隔5天、10天、15天泼洒菌液一次;
C2.1~C2.3:用103pfu/mL蛭弧菌蛭质体菌液均匀泼洒于水体中,幼苗培育期分别间隔5天、10天、15天泼洒菌液一次;
C3.1~C3.3:用105pfu/mL蛭弧菌蛭质体菌液均匀泼洒于水体中,幼苗培育期分别间隔5天、10天、15天泼洒菌液一次;
C4.1~C4.3:用107pfu/mL蛭弧菌蛭质体菌液均匀泼洒于水体中,幼苗培育期分别间隔5天、10天、15天泼洒菌液一次;
D组(蛭弧菌蛭质体菌液泼洒于水体中和浸泡饵料)
用蛭弧菌蛭质体菌液泼洒于水体和浸泡所有饵料,浓度和换水间隔设置同C组。
二、实验步骤
1.一种用于斑节对虾育苗的蛭弧菌蛭质体菌液的制备
所用蛭弧菌菌株为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05,由中国典型培养物保藏中心保藏,其简称为CCTCC,保藏编号为:CCTCC NO:M 209172,保藏日期为2009年8月7日。
蛭弧菌BDFM05蛭质体菌液的制备方法为:在100mL含有1×106cfu/mL宿主菌副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,购于美国典型物种保藏中心American Type Culture Collection,编号:ATCC 17802)的DNB(dilute nutrientbroth)液体培养基(营养肉汤0.8g,酪蛋白酸水解物0.5g,酵母精提物0.1g,溶于1000ml蒸馏水中,pH值为7.2~7.6)中接入1mL1×103pfu/mL蛭弧菌,于28℃、200rpm培养36h,得到含蛭弧菌蛭质体培养液,培养液经4℃6000rpm离心20min后,去除含蛭弧菌游泳体的上清,得到的沉淀即是蛭弧菌蛭质体;
蛭弧菌蛭质体用1mL DNB液体培养基(营养肉汤0.8g,酪蛋白酸水解物0.5g,酵母精提物0.1g,溶于1000ml蒸馏水中,pH值为7.2~7.6)悬浮,即得到蛭弧菌蛭质体菌液。
2.水质处理
A2及B/C/D组产卵槽和育苗池的海水均为经过砂滤、沉淀的新鲜海水,然后向B/C/D组水体中加入蛭弧菌蛭质体菌液,使水体中蛭弧菌含量达到101~107pfu/mL,曝气6h。A1组用水和目前工业育苗用水处理方法保持一致。
3.亲虾的选择和产卵及受精卵孵化
挑选出活力良好,虾体无损伤,性腺成熟度好的亲虾放入0.5吨产卵槽,每池放入亲虾2尾,产卵槽水深保持80cm,并微量充气。产卵期应及时清除水槽周围的浅橙红色且带有腥味的产卵粘稠物。
产卵后将亲虾移出,让卵继续在产卵槽中孵化,孵化时为使卵能充分滚动应增大充气量,水温保持28℃,盐度28‰,卵孵化后要彻底清洁一次,吸出池底污物及未孵化出的卵子,计算出无节幼体数量,并根据无节幼体数量的多少选取优质健康的无节幼体移入育苗池。
4.幼体培育
育苗池中无节幼体的饲育密度范围控制在6~12万尾/m3。盐度幼体前期为30‰,后期逐渐降低到15‰;水温在28℃,pH值8.0,溶氧8mg/L。无节幼体期间充气使水面呈微波状,溞状幼体期微沸腾状,糠虾幼体期沸腾状;仔虾期后加大充气量至强沸腾状。在溞状幼体期间忌直射、强光,保持光照强度在260lx;在糠虾幼体之后逐渐加强光照强度,到仔虾期后可让太阳光直接照射,以锻炼其对外界环境的适应力。
从溞状幼体开始投喂0号(Z1~M3)或1号(P1~P15)规格的配合饵料,每天投喂8次。另外,在溞状幼体中加投单胞藻和轮虫;糠虾期幼体中投单胞藻,后期投卤虫无节幼体;仔虾期投卤虫无节幼体。所有投喂的饵料需事先使用101~107pfu/mL蛭弧菌蛭质体菌液浸泡30min。
幼体培育期间,每5~15天向育苗池均匀泼洒一次蛭弧菌蛭质体菌液,使池水中泼洒的蛭弧菌浓度在101~107pfu/mL。
待仔虾发育到15天时(P15)或仔虾体长全部达到1厘米以上时即可出苗。
5.免疫因素测定
育苗试验结束后饥饿24小时,每组取样100个,20只/管放于6个分别盛有3mL Hank’s液(pH值7~8)的离心管中,贮于-80℃以备抗免疫指标的测定。测定时取出样品,使其在冰上融化,进行匀浆,然后6000r/min,-4℃离心5min,取上清用于免疫指标的测定。
酚氧化酶(Phenoloxidase,PO):以左旋多巴(L-dopa)为底物,采用改进的Ashida方法,以OD490对反应时间作图,以实验条件下每分钟OD值增加0.001定义为1个酶活力单位。
超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD):采用YI Sun等(A SimpleMethod for Clinical Assay of Superoxide Dismutase[J].Clin.Chem.1988:497-500)的方法。一个酶活力单位定义为:在试验条件下,硝基四氮唑溶液(NBT)被SOD抑制50%所需的酶蛋白量。
(2)免疫保护率的测定:
免疫保护率的测定:
于预先消毒的盛有5L砂滤海水(盐度15‰)的水池中进行。
以A1组为对照组,其他(B-D组)为免疫实验组,每个组随机取100尾仔虾,平均分成两组。向每组的水体中加入副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus,购于美国典型物种保藏中心American Type CultureCollection,编号:ATCC 17802),使终浓度达到107cfu/mL;两组均正常投饵,攻毒5d后实验结束。考虑到仔虾有一定自然死亡率,因此采用相对存活率(Relative Percentage Survival,RPS)计算式:
RPS(%)=(1-免疫组死亡率/对照组死亡率)×100%
6.水质检测项目包括:色臭味,酸碱度pH,氨态氮,亚硝酸盐氮,硫化物。其中pH用数字式pH计测定(分辨率0.01pH);氨态氮用次溴酸纳氧化法法测定(GB12763.4-91);亚硝酸盐氮用重氮-偶氮光度法测定(GB12763.4-91);硫化物用对氨基二甲基苯胺光度法(亚甲蓝法)(GB16489-96)。
三、实施结果
所有结果均为两个平行样的平均值
表1斑节对虾育苗成活率情况
由表1可知实验组成功率最低的C1.3组的育苗成功率46.1%也要远远好于A1组的33.7%和A2组13.5%,可见蛭弧菌蛭质体菌液可有效提高斑节对虾的育苗成功率。
从B、C、D组内的对比可知随着加蛭弧菌BDFM05蛭质体菌液浓度的升高,育苗成功率也显著提升,但随着加入蛭弧菌BDFM05蛭质体菌液间隔时间的延长,斑节对虾的育苗成功率变化趋势却不明显。可见育苗成功率与蛭弧菌蛭质体菌液浓度呈正比,但和加入蛭弧菌蛭质体菌液的时间关系却不大,所以从育苗成本考虑可以在提高蛭弧菌使用浓度的同时适当延长投菌间隔时间。
从A、B、C、D组间对比可知单纯的只用蛭弧菌蛭质体浸泡饵料或只向水体中加入蛭弧菌蛭质体的效果都要好于无任何处理的对照组,其中只向水体中加入蛭弧菌蛭质体菌液的效果要好于只用蛭弧菌处理饵料,但二者效果对比并不显著,且二者的效果都要远远差于同时用蛭弧菌蛭质体菌液处理水体和饵料。因此本方案在实施时建议采用蛭弧菌蛭质体处理饵料和水质相结合的方式。
免疫因素方面:酚氧化酶(PO)的结果如图1所示,对照组A组PO酶活明显低于实验组B、C、D,实验组组内比较可知高浓度蛭弧菌实验组PO酶活要高于低浓度组,加菌间隔时间长的组的PO酶活略低于加菌时间间隔短的组,其中酶活最高的D1组要比对照组A1、A2酶活高出1个数量级。B、C、D三大组中使用蛭弧菌处理水体而不处理饵料的C组酶活明显低于水体、饵料均用蛭弧菌处理的D组,但效果略好于只用蛭弧菌处理饵料而不处理水体的B组。
超氧化物歧化酶(SOD)结果如图2所示,其结果规律同酚氧化酶相似。
免疫保护率测定结果(图3)更显示了蛭弧菌蛭质体菌液效果优于对照,以工业方法育苗的A1组作为对照组,其死亡率高达94%,而加入了蛭弧菌蛭质体菌液的免疫实验组死亡率都要低于50%,故而RPS都要高于50%,RPS最高组D4.1死亡率仅为4.7%,相对存活率可达到95%。
水质检测结果除A2组水体水色浑浊外,其他组水质监测结果均符合《渔业水质标准》(GB 11607-1989)和《海水虾类育苗水质标准》(GB/T21673-2008)标准,但A1组的氨态氮,亚硝酸盐氮,硫化物测定值均高于试验组B、C、D的。其中,A组氨态氮的检测结果为0.512mg/L,B/C/D组均≤0.311mg/L;亚硝酸盐氮A组检测结果为:0.019mg/L,B/C/D组均≤0.013mg/L;硫化物A组检测结果为:0.124mg/L,B/C/D组均≤0.113mg/L。
综合以上结果可以证明,蛭弧菌蛭质体菌液不仅可以净化水质,控制病害,更能有效提高育苗过程中虾苗的免疫力。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种斑节对虾的育苗方法,其特征在于,具体步骤如下:
(1)制备蛭弧菌蛭质体菌液,其中,蛭弧菌菌株为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05,由中国典型培养物保藏中心保藏,其简称为CCTCC,保藏编号为:CCTCC NO:M 209172,保藏日期为2009年8月7日;
(2)在育苗池中投放蛭弧菌蛭质体菌液,使海水中蛭弧菌蛭质体含量达到101pfu/mL以上,曝气5-12h;
(3)将斑节对虾无节幼体以6~12万尾/m3的密度投入上述育苗池中;
(4)育苗过程中,定期投喂饵料,幼体投放后至少每隔5天投放一次蛭弧菌蛭质体菌液,使海水中蛭弧菌蛭质体浓度在10pfu/mL以上;待仔虾发育到15天时或仔虾体长全部达到1厘米以上时,即得到斑节对虾虾苗。
2.根据权利要求1所述的斑节对虾的育苗方法,其特征在于,步骤(2)和(4)所述蛭弧菌蛭质体的浓度为101~107pfu/mL。
3.根据权利要求1或2所述的斑节对虾的育苗方法,其特征在于,步骤(3)中所述斑节对虾无节幼体的培育方法为:
挑选出活力良好,虾体无损伤,性腺成熟度好的亲虾放入产卵槽,每一产卵槽放入亲虾1~2尾,产卵槽水深保持70~90cm,并微量充气;及时清除水槽周围的浅橙红色且带有腥味的产卵粘稠物;将产卵后的亲虾移出,让卵继续在产卵槽中孵化,孵化时增大充气量,水温保持28~30℃,盐度28~33,卵孵化后,即得到斑节对虾无节幼体;所述产卵槽中投放蛭弧菌蛭质体菌液,使产卵槽的海水中蛭弧菌蛭质体含量达到101pfu/mL以上。
4.根据权利要求1或2或3所述的斑节对虾的育苗方法,其特征在于,所述海水经砂滤和沉淀处理,且育苗过程中海水全程不换。
5.根据权利要求1所述的斑节对虾的育苗方法,其特征在于,步骤(3)所述蛭弧菌蛭质体菌液的投放间隔为5~15天,使水中的蛭弧菌蛭质体浓度在101~107pfu/mL。
6.根据权利要求1所述的斑节对虾的育苗方法,其特征在于,步骤(4)所投喂的饵料先用浓度101~107pfu/mL蛭弧菌蛭质体菌液浸泡15~45min。
7.根据权利要求1或6所述的斑节对虾的育苗方法,其特征在于,步骤(4)所述定期投喂饵料是从溞状幼体开始投喂配合饵料,每天投喂8次;在溞状幼体中加投单胞藻和轮虫;在糠虾期幼体中投单胞藻,后期投卤虫无节幼体;仔虾生长期投卤虫无节幼体。
8.根据权利要求1或6所述的斑节对虾的育苗方法,其特征在于,步骤(4)所述育苗过程中的条件控制:盐度幼体前期为28~33‰,后期逐渐降低到14~25‰;水温在26~31℃,pH值7.8~8.7;连续充气并随幼体发育充气量逐渐增加;幼体前期用弱光线照射。
9.根据权利要求8所述的斑节对虾的育苗方法,其特征在于,步骤(4)所述充气量控制为:无节幼体期间充气使水面呈微波状,溞状幼体期微沸腾状,糠虾幼体期沸腾状;仔虾期后,气量加到最大至强沸腾状;所述光线控制为:在溞状幼体期间弱光照射;在糠虾幼体之后逐渐加强光照强度,到仔虾期后,采用太阳光直接照射。
10.根据权利要求1所述的斑节对虾的育苗方法,其特征在于,所述蛭弧菌蛭质体菌液的制备方法如下:
在含有宿主菌副溶血弧菌的DNB液体培养基中接入蛭弧菌BDFM05,于20~35℃、150~300rpm培养36~48h,培养物经4℃6000~8000rpm离心15~20min后,去除含蛭弧菌游泳体的上清,沉淀即是蛭质体;该蛭质体再用DNB液体培养基、水、生理盐水或0.2mol/L pH值为7.2~7.6的磷酸盐缓冲液悬浮,即得到蛭弧菌蛭质体菌液。
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